ES2372296T3

ES2372296T3 - Formulación de monómero de cianoacrilato que contiene diyodometil-p-tolisulfona e hidroxidifenil éter.

Info

Publication number: ES2372296T3
Application number: ES05818777T
Authority: ES
Inventors: Binoy K. Bordoloi; Shubhangi R. Bhende
Original assignee: Ethicon Inc
Current assignee: Ethicon Inc
Priority date: 2004-11-03
Filing date: 2005-11-01
Publication date: 2012-01-18
Anticipated expiration: 2025-11-01
Also published as: JP2008519142A; CN101111238A; WO2006052515A1; EP1807064A1; KR20070087554A; US20090297469A1; AU2005305115A1; EP1807064B1; US20060093572A1; ATE527994T1; BRPI0517979A

Abstract

Una formulación antimicrobiana polimerizable para formar un adhesivo de cierre de herida, que comprende: monómero de cianoacrilato, diyodometil-p-tolilsulfona y un hidroxi difenil éter halogenado.

Description

Formulacion de monomero de cianoacrilato que contiene diyodometil-p-tolisulfona e hidroxidifenil eter

Antecedentes

Las formulaciones polimerizables de monomero de cianoacrilato han sido divulgadas para una variedad de aplicaciones topicas. Especificamente, dichas formulaciones han sido usadas como una alternativa o un complemento a las suturas y/o grapas quirurgicas en cierres de heridas, formando una pelicula polimerica sobre los bordes aproximados de una herida o una incision. Los agentes antimicrobianos pueden ser incorporados a las formulaciones de monomero de cianoacrilato en un esfuerzo para mejorar las propiedades de barrera microbiana de la pelicula polimerica resultante. Sin embargo, es fundamental que el agente antimicrobiano no cause una polimerizacion prematura de la formulacion de monomero de cianoacrilato cuando es deseable que la formulacion sea estable durante periodos de tiempo prolongados, para su uso en una fecha posterior, es decir, una polimerizacion en una fecha posterior. Ademas, el agente antimicrobiano no debe interferir con la polimerizacion cuando la formulacion de monomero de cianoacrilato es aplicada, por ejemplo, a los bordes aproximados de una herida. Ademas, el agente antimicrobiano no debe tener ningun efecto perjudicial sobre la resistencia mecanica de la formulacion de monomero de cianoacrilato. Finalmente, el agente antimicrobiano debe ser capaz de ser liberado de la pelicula polimerica en cantidades suficientes para que el agente sea efectivo.

En este sentido, el documento US 6.214.332 describe la compatibilidad de los monomeros de cianoacrilato con varios agentes antimicrobianos, tales como polivinilpirrolidona-yodo, nitrato de plata, hexaclorofeno, merbromina, tetraciclina-HCl, hidrato de tetraciclina y eritromicina. Esta referencia indica que la polivinilpirrolidona-yodo, en forma solida, produce una formulacion de monomero de cianoacrilato que es estable durante 8 semanas, cuando es almacenada a temperatura ambiente, se polimeriza para formar una pelicula polimerica en 30 segundos y exhibe un efecto antimicrobiano.

El documento US-A-20030007948 describe una composicion adhesiva para el tratamiento de infecciones de piel por hongos. La composicion comprende un monomero de cianoacrilato y un agente anti-fungico, que puede ser 2,4,4'tricloro-2'-hidroxidifenil eter.

Sin embargo, muchos agentes antimicrobianos convencionales no son adecuados para su uso en formulaciones de monomero de cianoacrilato, debido a su incapacidad para satisfacer uno o mas de los criterios descritos anteriormente. Por ejemplo, aunque las sales de amonio cuaternario son agentes antimicrobianos usados normalmente, tambien son conocidas por iniciar la polimerizacion de monomeros de cianoacrilato, tal como se describe en el documento US-A20030007948 A, asi como en los documentos US-A-5.928.611 y US-A-6.767.552. Por lo tanto, es deseable el uso de una sal de amonio cuaternario, como agente antimicrobiano, en una formulacion de monomero de cianoacrilato cuando se requiere que la formulacion sea estable durante periodos de tiempo prolongados.

El uso de diyodometil-p-tolilsulfona como un agente antimicrobiano es deseable, ya que es un agente antimicrobiano de amplio espectro. Por ejemplo, las mezclas de diyodometil-p-tolilsulfona, tales como Amical-48 (disponible en el mercado en Dow), y los polimeros adhesivos, acrilicos, de fusion en caliente, han sido indicados en el documento US 6.216.699, para su uso en panos para incisiones quirurgicas que tienen propiedades antimicrobianas. Se ha informado que dichas mezclas indican zonas de inhibicion contra diversos organismos, incluyendo S. aureus, E.coli, Pseudomonas aeruginosa, K. pneumoniae, P. cepacia, E. cloacae, S. marcescens, S. pyogenes, E. faecalis resistente a vancomicina, C. albicans y B. subtilis. Sin embargo, el uso de diyodometil-p-tolilsulfona en un polimero formado o por mezcla directa en el polimero fundido no asegura que la diyodometil-p-tolilsulfona sea adecuada para su uso con composiciones prepolimericas, tales como las formulaciones de monomero de cianoacrilato descritas en la presente memoria.

El uso de mas de un agente antimicrobiano, por ejemplo, una mezcla de agentes antimicrobianos, es deseable, frecuentemente, para conseguir un espectro de actividad antimicrobiana mas amplio contra diversos organismos. Por ejemplo, un hidroxi difenil eter halogenado, tal como 2,4,4 '-tricloro-2'-hidroxidifenil eter, y conocido comunmente como triclosan (fabricado por Ciba Specialty Chemical Corporation, bajo el nombre comercial Irgasan® DP300 o Irgacare® MP), es un agente antimicrobiano de amplio espectro y tiene un efecto antimicrobiano frente a diversos organismos, incluyendo, pero sin limitarse a, el genero Staphylococcus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis resistente a meticilina y Staphylococcus aureus resistente a meticilina .

El documento WO-A-03043421 describe composiciones acuosas para injertar compuestos antimicrobianos en superficies inanimadas. La superficie es tratada con una solucion acuosa de un monomero de acrilato, uno o mas agentes antimicrobianos y un iniciador de injerto, para unir quimicamente los agentes antimicrobianos a la superficie. Los agentes antimicrobianos pueden comprender una mezcla de diyodometil-p-tolilsulfona y Triclosan.

Por lo tanto, es deseable tener una formulacion estable de monomero de cianoacrilato, diyodometil-p-tolilsulfona y un 2

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hidroxi difenil eter halogenado, en la que los agentes antimicrobianos no causen una polimerizacion prematura de la formulacion de monomero de cianoacrilato cuando es conveniente que la formulacion sea estable durante periodos de tiempo prolongados, para su uso en una fecha posterior, es decir, una polimerizacion en una fecha posterior, que no interfiera con la polimerizacion cuando la formulacion de monomero de cianoacrilato es aplicada, por ejemplo, a los bordes aproximados de una herida; y que tenga propiedades antimicrobianas eficaces durante hasta 72 horas.

Resumen de la invención

En la presente memoria se describe una formulacion antimicrobiana polimerizable que comprende cianoacrilato monomerico, diyodometil-p-tolilsulfona y un 2-hidroxi difenil eter halogenado, que puede ser usada para formar un adhesivo de cierre de herida. Tambien se describe una formulacion segun la invencion, en la que el 2-hidroxi difenil eter halogenado es 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter, para su uso en un procedimiento para cerrar los bordes aproximados de una herida con una pelicula polimerica que inhibe sustancialmente el crecimiento de microorganismos, que comprende: aplicar dicha formulacion a los bordes aproximados de la herida; y permitir que la formulacion polimerice para formar una pelicula polimerica.

Descripción detallada

La presente invencion se refiere a una formulacion antimicrobiana polimerizable que comprende un monomero de cianoacrilato, diyodometil-p-tolilsulfona y un hidroxi bifenil eter halogenado, que forma una pelicula polimerica que es capaz de funcionar como un adhesivo de cierre de herida, en el que las propiedades de barrera microbiana de la pelicula polimerica son mejoradas mediante la incorporacion de diyodometil-p-tolilsulfona y un hidroxi bifenil eter halogenado a la misma.

Los monomeros preferentes de formula (I), para su uso en la presente invencion, son alfa-cianoacrilatos. Estos monomeros son conocidos en la tecnica y tienen la formula

en la que R2 es hidrogeno y R3 es un grupo hidrocarbilo o hidrocarbilo sustituido; un grupo que tiene la formula --R4--O--R5--O--R6, en la que R4 es un grupo 1,2-alquileno que tiene 2-4 atomos de carbono, R5 es un grupo alquileno que tiene 2-4 atomos de carbono, y R6 es un grupo alquilo que tiene 1-6 atomos de carbono, o un grupo que tiene la formula

en la que R7 es

y R8 es un radical organico.

Los ejemplos de grupos hidrocarbilo e hidrocarbilo sustituido adecuados incluyen grupos alquilo, de cadena lineal o ramificada, que tienen 1-16 atomos de carbono; grupos alquilo C1-C16, de cadena lineal o cadena ramificada, sustituidos con un grupo aciloxi, un grupo haloalquilo, un grupo alcoxi, un atomo halogeno, un grupo ciano o un grupo

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haloalquilo; grupos alquenilo, de cadena lineal o cadena ramificada, que tienen de 2 a 16 atomos de carbono; grupos alquinilo, de cadena lineal o cadena ramificada, que tienen de 2 a 12 atomos de carbono; grupos cicloalquilo; grupos aralquilo; grupos alquilarilo y grupos arilo.

El radical organico R8 puede ser sustituido o no sustituido y puede ser de cadena lineal, ramificada o ciclico, saturado, insaturado o aromatico. Los ejemplos de dichos radicales organicos incluyen radicales alquilo C1-C8, radicales alquenilo C2-C8, radicales alquinilo C2-C8, radicales cicloalifaticos C3-C12, radicales arilo, tales como fenilo y fenilo sustituido y radicales aralquilo, tales como bencilo, metilbencilo y feniletilo. Otros radicales organicos incluyen radicales de hidrocarburos sustituidos, tales como halo (por ejemplo, hidrocarburos sustituidos con cloro, fluor y bromo) y radicales de hidrocarburos sustituidos con oxi (por ejemplo, hidrocarburos sustituidos con alcoxi). Los radicales organicos preferentes son radicales alquilo, alquenilo y alquinilo, que tienen de 1 a 8 atomos de carbono, y sus derivados sustituidos con halo. Particularmente preferentes son los radicales alquilo de 4 a 6 atomos de carbono.

En el monomero de cianoacrilato de formula (I), R3 es, preferentemente, un grupo alquilo, que tiene 1-10 atomos de carbono, o un grupo que tiene la formula --AOR9, en la que A es un alquileno divalente, de cadena lineal o ramificada, o un radical oxialquileno, que tiene 2-8 atomos de carbono, y R9 es un radical alquilo, de cadena lineal o ramificada, que tiene 1-8 atomos de carbono. Los ejemplos de los grupos representados por la formula --AOR9 incluyen 1-metoxi-2propilo, 2-butoxi etilo, isopropoxi etilo, 2-metoxi etilo y 2-etoxi etilo.

Los monomeros alfa-cianoacrilato preferentes usados en la presente invencion son cianoacrilato de 2-octilo, cianoacrilato de dodecilo, cianoacrilato de 2-etilhexilo, cianoacrilato de butilo cianoacrilato de metilo, cianoacrilato de 3metoxibutilo, cianoacrilato de 2-butoxietilo, cianoacrilato de 2-isopropoxietilo o cianoacrilato de 1-metoxi-2-propilo.

Los alfa-cianoacrilatos de formula (I) pueden ser preparados segun los procedimientos conocidos en la tecnica. Se hace referencia, por ejemplo, a los documentos US .2.721.858 y 3.254.111. Por ejemplo, los alfa cianoacrilatos pueden ser preparados haciendo reaccionar un cianoacetato de alquilo con formaldehido, en un solvente organico no acuoso, y en presencia de un catalizador basico, seguido de pirolisis del polimero intermedio anhidro, en presencia de un inhibidor de polimerizacion. Los monomeros de alfa-cianoacrilato, preparados con bajo contenido de humedad y esencialmente libres de impurezas, son preferentes para uso biomedico.

Los alfa-cianoacrilatos de formula (I) en la que R3 es un grupo que tiene la formula --R4--O---R5--O--R6, pueden ser preparados segun el procedimiento descrito en el documento US 4.364.876 de Kimura et al. En el procedimiento de Kimura et al., los alfa-cianoacrilatos son preparados mediante la produccion de un cianoacetato mediante esterificacion de acido cianoacetico con un alcohol o mediante transesterificacion de un cianoacetato de alquilo y un alcohol, condensando el cianoacetato y formaldehido o paraformaldehido, en presencia de un catalizador, en una proporcion molar de 0,5 a 1,5:1, preferentemente de 0,8 a 1,2:1, para obtener un condensado; despolimerizando la mezcla de reaccion de condensacion, directamente o despues de la retirada del catalizador de condensacion, para producir un cianoacrilato crudo; y destilando el cianoacrilato crudo para formar un cianoacrilato de una gran pureza.

Los alfa-cianoacrilatos de formula (I), en la que R3 es un grupo que tiene la formula

pueden ser preparados segun el procedimiento descrito en el documento US 3.995.641 de Kronenthal et al. En el procedimiento de Kronenthal et al., dichos monomeros de alfa-cianoacrilato son preparados haciendo reaccionar un ester de alquilo de un acido alfa-cianoacrilico con un 1,3-dieno ciclico, para formar un aducto Diels-Alder, el cual es sometido, a continuacion, a hidrolisis alcalina, seguida de acidificacion, para formar el correspondiente aducto de acido alfa-cianoacrilico. El aducto de acido alfa-cianoacrilico es esterificado, preferentemente, por un bromoacetato de alquilo para producir el correspondiente aducto carbalkoximetil alfa-cianoacrilato. Como alternativa, el aducto acido alfacianoacrilico puede ser convertido en el aducto haluro de alfa-cianoacrililo mediante una reaccion con cloruro de tionilo. A continuacion, el aducto de haluro de alfa-cianoacrililo se hace reaccionar con un hidroxiacetato de alquilo o un hidroxiacetato de alquilo sustituido con metilo, para proporcionar el correspondiente aducto carbalkoximetil alfacianoacrilato o aducto carbalkoxi alquil alfa-cianoacrilato, respectivamente. El grupo de bloqueo 1,3-dieno ciclico es eliminado finalmente y el aducto carbalkoxi metil alfa-cianoacrilato o el aducto carbalkoxi alquil alfa-cianoacrilato es convertido en el aducto carbalkoxi alquil alfa-cianoacrilato, calentando el aducto en presencia de un ligero deficit de anhidrido maleico.

Los ejemplos de monomeros de formula (I) incluyen cianopentadienoatos y alfa-cianoacrilatos de la formula:

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en la que Z es --CH-CH2 o -C(CH3)-CH2, y R3 es tal como se ha definido anteriormente. Los monomeros de formula (II), en la que R3 es un grupo alquilo de 1-10 atomos de carbono, es decir, los esteres de acido 2-cianopenta-2,4-dienoico, pueden ser preparados haciendo reaccionar un 2-cianoacetato apropiado con acroleina, en presencia de un catalizador, tal como cloruro de zinc.

Segun la presente invencion, los componentes de la formulacion de monomero de cianoacrilato incluyen estabilizadores de radicales libres, estabilizadores anionicos, plastificantes, espesantes, etc. Los detalles se describen en los documentos US 5.981.621 y US 6.433.096.

La formulacion de monomero de cianoacrilato puede incluir tambien, opcionalmente, al menos un agente plastificante que imparte flexibilidad a la pelicula polimerica formada a partir del monomero. El agente plastificante contiene, preferentemente, poco o nada de humedad y no deberia afectar considerable a la estabilidad de la polimerizacion del monomero. Dichos plastificantes son utiles para cerrar o cubrir heridas, incisiones, abrasiones, llagas u otras aplicaciones en las que la flexibilidad del adhesivo es deseable.

Los ejemplos de plastificantes adecuados incluyen citrato de tributilo, citrato de acetil tributilo, sebacato de dimetilo, fosfato de trietilo, fosfato de tri(2-etilhexilo), fosfato de tri(p-cresilo), triacetato de glicerilo, tributirato de glicerilo, sebacato de dietilo, adipato de dioctilo, miristato de isopropilo, estearato de butilo, acido laurico, trimelitato de trioctilo, glutarato de dioctilo y sus mezclas. Los plastificantes preferentes son citrato de tributilo y citrato de acetil tributilo.

La adicion de agentes plastificantes en cantidades en el intervalo de aproximadamente el 0,5% en peso a aproximadamente el 25% en peso, o de aproximadamente el 1% en peso a aproximadamente el 20% en peso. %, o de aproximadamente el 3% en peso a aproximadamente el 15% en peso, o de aproximadamente el 5% en peso a aproximadamente el 7% en peso, proporciona una elongacion y una resistencia incrementadas de la pelicula polimerica con relacion a una pelicula polimerica que no tiene agentes plastificantes.

Los agentes espesantes pueden ser seleccionados de entre espesantes conocidos, incluyendo poli(metacrilato de 2etilhexilo), poli (acrilato de 2-etilhexilo) y acetato butirato de celulosa. Los agentes espesantes adecuados incluyen, por ejemplo, policianoacrilatos, polioxalatos, copolimeros de acido lactico y glicolico, policaprolactona, copolimeros de acido lactico-caprolactona, poli(caporolactona+DL-lactico+glicolico), poliortoesteres polialquil acrilatos, copolimeros de acetato de vinilo y alquilacrilato, metacrilatos polialquilo y copolimeros de metacrilatos de alquilo y butadieno. Los ejemplos de metacrilatos y acrilatos de alquilo son poli(metacrilato de butilo) y poli (acrilato de butilo), tambien copolimeros de varios monomeros de acrilato y metacrilato, tales como poli(metacrilato de butilo-co-metacrilato de metilo). Los espesantes polimericos biodegradables son preferentes para algunos usos, tales como algunos usos quirurgicos. Preferentemente, el agente espesante es soluble en una formulacion de monomero de cianoacrilato a temperatura ambiente (es decir, 20-25DC.), de manera que pueda ser anadido a la formulacion de monomero de cianoacrilato sin un calentamiento excesivo de la formulacion de monomero de cianoacrilato, y permanece combinado, de manera uniforme, en la formulacion de monomero de cianoacrilato.

La cantidad de agente espesante que se anade a la formulacion de monomero de cianoacrilato depende del peso molecular del agente espesante. El agente espesante comprende, preferentemente, aproximadamente 0,5-25,0% en peso de la formulacion de monomero de cianoacrilato. En realizaciones preferentes, el agente espesante comprende aproximadamente del 1,0 al 10,0%, mas preferentemente, del 1,0 al 5,0% de la formulacion de monomero de cianoacrilato. En realizaciones, el agente espesante tiene un peso molecular alto, preferentemente, de al menos

100.000 o al menos 500.000 o al menos 1.000.000. El agente espesante es seleccionado de manera que sea compatible con el monomero (es decir, no afecte negativamente a la polimerizacion, resistencia de union o estabilidad). La cantidad de agente espesante a usar puede ser determinada por una persona con conocimientos ordinarios en la tecnica, usando tecnicas conocidas, sin excesiva experimentacion.

En realizaciones, la formulacion de monomero de cianoacrilato tiene una viscosidad de 5-500 mPas, preferentemente, 30-400 mPas, medida con un viscosimetro Brookfield a 25DC.

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La formulacion de monomero de cianoacrilato puede incluir tambien, opcionalmente, al menos un estabilizador anionico de fase de vapor y al menos un estabilizador anionico de fase liquida. Estos agentes estabilizadores inhiben una polimerizacion prematura. Dichos agentes estabilizadores pueden incluir tambien mezclas de agentes estabilizadores anionicos y agentes estabilizadores de radicales. Cualquier mezcla de estabilizadores esta incluida, con la condicion de que la mezcla no inhiba la polimerizacion del monomero tras entrar en contacto con un iniciador y sea compatible con el espesante seleccionado.

Los ejemplos de agentes estabilizadores de radicales incluyen hidroquinona, eter monometilico de la hidroquinona, catecol, pirogalol, benzoquinona, 2-hidroxibenzoquinona, p-metoxi fenol, t-butil catecol, hidroxi-anisol butilado, hidroxi tolueno butilado y t-butil hidroquinona.

Los estabilizadores anionicos de fase de vapor pueden ser seleccionados de entre estabilizadores conocidos, incluyendo dioxido de azufre, trifluoruro de boro y fluoruro de hidrogeno. La cantidad de estabilizador anionico de fase de vapor que es anadida a la formulacion de monomero de cianoacrilato depende de la identidad del estabilizador o estabilizadores de fase liquida elegidos en combinacion con el mismo, el monomero a estabilizar, asi como el material de envasado a usar para la formulacion de monomero de cianoacrilato. Preferentemente, cada estabilizador anionico de fase de vapor es anadido para proporcionar una concentracion de menos de 200 partes por millon (ppm). En realizaciones preferentes, cada estabilizador anionico de fase de vapor esta presente aproximadamente de 1 a 200 ppm, mas preferentemente, aproximadamente de 10 a 75 ppm, incluso mas preferentemente, aproximadamente de 10 a 50 ppm, y mas preferentemente, de 10 a 20 ppm. La cantidad a usar puede ser determinada por una persona con conocimientos en la tecnica, usando tecnicas conocidas, sin excesiva experimentacion.

En realizaciones, la fase de vapor comprende, entre otras cosas, un estabilizador anionico, que es dioxido de azufre. En realizaciones, la fase de vapor comprende, entre otras cosas, un estabilizador, que es el trifluoruro de boro o fluoruro de hidrogeno. Una combinacion de dioxido de azufre y trifluoruro de boro o fluoruro de hidrogeno es preferente en algunas realizaciones.

En realizaciones, el estabilizador anionico de fase liquida es un acido muy fuerte. Tal como se usa en la presente memoria, un acido muy fuerte es un acido que tiene un pKa acuoso inferior a 1,0. Los agentes estabilizadores acidos muy fuertes, adecuados, incluyen acidos minerales y/u oxigenados muy fuertes. Los ejemplos de dichos acidos muy fuertes incluyen acido sulfurico (pKa -3,0 a -5,2) y acido perclorico (pKa -5,0). En realizaciones, el estabilizador anionico de fase liquida, acido muy fuerte, es anadido para proporcionar una concentracion final de 1 a 200 ppm. Preferentemente, el estabilizador anionico de fase liquida, acido muy fuerte, esta presente en una concentracion de aproximadamente 5 a 80 ppm, mas preferentemente, de 10 a 40 ppm. La cantidad de estabilizador anionico de fase liquida, acido muy fuerte, a usar puede ser determinada por una persona con conocimientos en la materia, sin excesiva experimentacion. Preferentemente, el estabilizador anionico de fase liquida, acido muy fuerte, es acido sulfurico, acido perclorico o acido clorosulfonico. Mas preferentemente, el estabilizador anionico de fase liquida, acido muy fuerte, es acido sulfurico.

En realizaciones, se usa dioxido de azufre como estabilizador anionico de fase de vapor y se usa acido sulfurico como estabilizador anionico de fase liquida. Las combinaciones de al menos un estabilizador de fase de vapor y al menos un estabilizador anionico de fase liquida son preferentes. Por ejemplo, pueden usarse combinaciones de dioxido de azufre y acido sulfurico, dioxido de azufre y acido perclorico, dioxido de azufre y acido clorosulfonico, trifluoruro de boro y acido sulfurico, trifluoruro de boro y acido perclorico, trifluoruro de boro y acido clorosulfonico, trifluoruro de boro y acido metanosulfonico, fluoruro de hidrogeno y acido sulfurico, fluoruro de hidrogeno y acido perclorico, fluoruro de hidrogeno y acido clorosulfonico y fluoruro de hidrogeno y acido metanosulfonico. Puede usarse, entre otras combinaciones, una combinacion de trifluoruro de boro, dioxido de azufre y acido sulfurico. Los dos tipos de estabilizadores anionicos son elegidos en conjuncion, de manera que los estabilizadores son compatibles con la formulacion de monomero de cianoacrilato adhesivo elegido y cada estabilizador, asi como con el material de envasado y el equipo usado para fabricar y envasar la formulacion de monomero de cianoacrilato. En otras palabras, la combinacion de estabilizador o estabilizadores de fase de vapor, estabilizador o estabilizadores de fase liquida y monomero deberia ser tal que una formulacion de monomero de cianoacrilato adhesivo, estabilizada, sustancialmente no polimerizada, este presente despues del envasado.

La formulacion de monomero de cianoacrilato puede incluir tambien, opcionalmente, al menos otro agente estabilizador anionico que inhibe la polimerizacion prematura. Estos agentes se denominan, en la presente memoria, agentes anionicos activos secundarios para diferenciarlos de los estabilizadores anionicos, de fase liquida, fuertes o muy fuertes, denominados, en la presente memoria, estabilizadores anionicos "principales". Los agentes anionicos activos secundarios pueden ser incluidos en la formulacion de monomero de cianoacrilato para ajustar su velocidad de curado.

El agente anionico activo secundario seria, normalmente, un acido con un pKa mas alto que el agente estabilizador anionico principal y puede ser proporcionado para controlar, de manera mas precisa, la velocidad de curado y la estabilidad del adhesivo, asi como el peso molecular del adhesivo curado. Cualquier mezcla de estabilizadores anionicos principales y agentes activos secundarios esta incluida, con la condicion de que la quimica de la formulacion 6 5

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de monomero de cianoacrilato no se vea comprometida y que la mezcla no inhiba considerablemente la polimerizacion deseada de la formulacion de monomero de cianoacrilato. Ademas, la mezcla no deberia mostrar, en una formulacion medica de monomero de cianoacrilato, niveles inaceptables de toxicidad.

Los agentes anionicos secundarios adecuados incluyen aquellos que tienen constantes de ionizacion pKa acuosa en el intervalo de 2 a 8, preferentemente de 2 a 6 y, mas preferentemente, de 2 a 5. Los ejemplos de dichos agentes estabilizadores anionicos secundarios adecuados incluyen acido fosforico (pKa 2,2), acidos organicos, tales como acido acetico (pKa 4,8), acido benzoico (pKa 4,2), acido cloroacetico (pKa 2,9), acido cianoacetico y sus mezclas. Preferentemente, estos agentes estabilizadores anionicos secundarios son acidos organicos, tales como acido acetico

o acido benzoico. En realizaciones, la cantidad de acido acetico y/o acido benzoico es aproximadamente de 25-500 ppm. La concentracion de acido acetico es, tipicamente, de 50-400 ppm, preferentemente, de 75-300 y, mas preferentemente, de 100-200 ppm. Cuando se usa un acido mas fuerte, tal como acido fosforico, puede usarse una concentracion de 20-100 ppm, preferentemente, de 30 a 80 y, mas preferentemente, de 40 a 60 ppm.

Tal como se ha indicado anteriormente, se ha informado que la diyodometil-p-tolilsulfona indica zonas de inhibicion contra diversos organismos, incluyendo S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, P. cepacia, E. cloacae, S. marcescens, S. pyogenes, E. faecalis resistente a vancomicina, C. albicans y B.subtilis, mientras que el 2,4,4'-tricloro2'-hidroxidifenil eter tiene un efecto antimicrobiano contra el genero Staphylococcus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis resistente a meticilina y Staphylococcus aureus resistente a meticilina. Por lo tanto, la mezcla de estos dos agentes antimicrobianos produce un espectro mas amplio de actividad antimicrobiana que cualquiera de los agentes antimicrobianos por separado.

Ademas, se ha demostrado que el uso de diyodometil-ptolilsulfona y un hidroxi difenil eter halogenado en una formulacion de monomero de cianoacrilato produce una actividad antimicrobiana inesperadamente superior en comparacion con la actividad antimicrobiana de cada agente por separado, sin un efecto negativo considerable sobre la propiedad fisica de la formulacion de monomero de cianoacrilato

La diyodometil-p-tolilsulfona (DIMPTS) es soluble en el monomero de cianoacrilato, al menos hasta 15.000 ppm (1,5%), mientras que un hidroxi difenil eter halogenado, tal como 2,4,4 '-tricloro-2'-hidroxidifenil eter es soluble al menos hasta

15.000 ppm (1,5%). Consiguientemente, las formulaciones en la presente memoria pueden tener una concentracion de diyodometil-p-tolilsulfona en el intervalo aproximadamente de 500 (0,05%) a 10.000 ppm (1,00%), preferentemente de 700 (0.07%) a 7.000 ppm (0,70%), y un concentracion de un hidroxi difenil eter halogenado en el intervalo de 500 (0,05%) a 10.000 ppm (1%), preferentemente de 700 (0.07%) a 7.000 ppm (0,70%), mas preferentemente, la concentracion de diyodometil-p-tolilsulfona es de aproximadamente 2.800 ppm (0,28%) y la concentracion de un hidroxil difenil eter halogenado es aproximadamente de 2.800 ppm (0,28%).

La formulacion de monomero de cianoacrilato puede ser envasada en cualquier tipo de recipiente adecuado fabricado de materiales, incluyendo envases de vidrio, plastico, envases de metal y envases formados con pelicula. Los recipientes adecuados son aquellos en cuyo interior la formulacion de monomero de cianoacrilato puede ser dispensada y esterilizada sin danos inaceptables a, o degradacion del recipiente o de los componentes de la formulacion de monomero de cianoacrilato. El vidrio es especialmente preferente cuando la esterilizacion se consigue con calor seco, debido a la falta de estabilidad de muchos plasticos a las temperaturas usadas para la esterilizacion por calor seco (tipicamente, al menos 160DC). Los ejemplos de los tipos de envases incluyen ampollas, viales, jeringas, pipetas, etc. En una realizacion preferente, el recipiente comprende un recipiente sellable.

Para aplicaciones biomedicas, la formulacion de monomero de cianoacrilato segun la invencion puede estar esterilizada. La esterilizacion se puede realizar mediante tecnicas conocidas por las personas con conocimientos en la materia, y se realiza, preferentemente, mediante procedimientos que incluyen procedimientos quimicos, fisicos y de irradiacion. Los ejemplos de procedimientos quimicos incluyen la exposicion a vapor de peroxido de hidrogeno u oxido de etileno. Los ejemplos de procedimientos fisicos incluyen la esterilizacion por calor (seco o humedo). Los ejemplos de procedimientos de irradiacion incluyen radiacion gamma, radiacion con haz de electrones e irradiacion de microondas. Los procedimientos preferentes son la esterilizacion por calor seco y humedo y la esterilizacion por haz de electrones. En realizaciones en las que se usara una formulacion de monomero de cianoacrilato para aplicaciones medicas, la formulacion de monomero de cianoacrilato esterilizada debe exhibir bajos niveles de toxicidad para los tejidos vivos durante su vida util.

Durante el uso, la formulacion de monomero de cianoacrilato que contiene diyodometil-p-tolilsulfona e hidroxil difenil eter halogenado puede formar una pelicula biocompatible a traves de superficies de tejido colindantes en las etapas siguientes: (a) manteniendo juntas al menos dos superficies de tejido para formar superficies de tejidos colindantes , (b) aplicando a traves de las superficies de tejido colindantes una formulacion de monomero de cianoacrilato biocompatible adhesiva, y (c) dejar que la formulacion de monomero de cianoacrilato polimerice y forme una pelicula biocompatible sobre las superficies de tejido colindantes.

Cuando la formulacion de monomero de cianoacrilato es curada en una pelicula sobre una incision sobre un sustrato 7

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de latex, la resistencia mecanica de la construccion formada con la pelicula y el sustrato de latex puede ser ensayada mediante un procedimiento de ensayo de reventamiento, tal como se describe a continuacion. La pelicula polimerica tiene, preferentemente, una resistencia a reventamiento en el intervalo desde al menos 34,47 a 137,88 kPa y, mas preferentemente, al menos de 68,94 a 137,88 kPa.

Ejemplos

La invencion se ilustra adicionalmente mediante los ejemplos siguientes. Los ejemplos siguientes demuestran que una formulacion estabilizada de cianoacrilato de 2-octilo, disponible comercialmente (comercializada como adhesivo topico para la piel Dermabond® por Ethicon, Inc., Somerville, NJ), que incluye una cantidad suficiente de diyodometil-ptolilsulfona o 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter o una formulacion mezclada de diyodometil-p-tolilsulfona y 2,4,4'-tricloro2'-hidroxidifenil eter, es estable despues de una esterilizacion por calor y/o un envejecimiento por calor durante periodos de tiempo prolongados. Las formulaciones de monomero esterilizadas o envejecidas por calor pueden ser polimerizadas bajo condiciones apropiadas, produciendo una pelicula polimerica que exhibe actividad antimicrobiana, en un desafio antimicrobiano estandar.

Ejemplo 1

Nueve ampollas de silicato de boro, lavadas con acido y secadas en horno (USP-1) fueron cargadas con diferentes concentraciones de diyodometil-p-tolilsulfona (DIMPTS) en 2-octilcianoacrilato.

Se colocaron 1,5028 g de adhesivo topico para la piel Dermabond® y 0,0012 g de diyodometil-p-tolilsulfona solida en una ampolla. La ampolla fue agitada suficientemente para disolver la diyodometil-p-tolilsulfona en el 2-octilcianoacrilato. Se colocaron 0,4966 g de la solucion resultante en la ampolla nD 1; se colocaron 0,4760 g de la solucion en la ampolla nD 2, y la ampolla original, ampolla nD 3, se dejo con 0,5302 g.

Se colocaron 1,5090 g de adhesivo topico para la piel Dermabond® y 0,0025 g de diyodometil-p-tolilsulfona solida en una ampolla. La ampolla fue agitada suficientemente para disolver la diyodometil-p-tolilsulfona en el 2-octilcianoacrilato. Se colocaron 0,5103 g de la solucion resultante en la ampolla nD 4; se colocaron 0,4991 g de la solucion en la ampolla nD 5; y la ampolla original, ampolla nD 6, se dejo con 0,4996 g.

Se colocaron 1,5134 g de adhesivo topico para la piel Dermabond® y 0,0046 g de diyodometil-p-tolilsulfona solida en una ampolla. La ampolla fue agitada suficientemente para disolver la diyodometil-p-tolilsulfona en el 2-octilcianoacrilato. Se colocaron 0,5100 g de la solucion resultante en la ampolla nD 7; se colocaron 0,4978 g de la solucion en la ampolla nD 8; y la ampolla original, ampolla nD 9, se dejo con 0,5056 g.

Las ampollas nD 1, nD 4 y nD 7 fueron expuestas a calor seco durante 65 minutos, a 160DC. Las ampollas nD 2, nD 5 y nD 8 fueron expuestas a irradiacion gamma a 15 kGy. Las ampollas nD 3, nD 6 y nD 9 fueron expuestas a irradiacion gamma a 20 kGy.

Tabla I 5

ND de muestra: Conc. DIMPTC (ppm) en 2-OCA Procedimiento de esterilizacion Observaciones

1: 700 Calor @ 160DC/65 min Ampolla incolora

2: 700 Gamma @ 15 kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

3: 700 Gamma @ 29 kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

4: 1.400 Calor @ 160DC/65 min Ampolla incolora

5: 1.400 Gamma @ 15 kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

6: 1.400 Gamma @ 20 kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

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(Cont.)

7: 2.800 Calor @ 160DC/min Ampolla incolora

8: 2.800 Gamma @ 15kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

9: 2.800 Gamma @ 20 kGy Ampolla de vidrio ligeramente marron

Despues de una exposicion al calor @ 160DC durante 65 min, la ampolla nD 1 estaba notablemente turbia. Tras una inspeccion 18 horas despues, el contenido de la ampolla nD 1 era todavia una solucion turbia, algo mas viscosa que anteriormente, pero todavia podia fluir. Tras una inspeccion 84 horas despues, el contenido de la ampolla nD 1 era turbio, y bastante viscoso, posiblemente solidificado.

La ampolla nD 4 era sustancialmente transparente despues de la exposicion al calor, pero se volvio de un color gris en lugar del color purpura original del adhesivo topico para la piel Dermabond®. La ampolla nD 7 no tenia ningun cambio aparente despues de la exposicion al calor.

Las ampollas nD 2, nD 3, nD 5, nD 6, nD 8 y nD 9 exhibieron un cambio de color de vidrio tipico de los cambios inducidos en vidrio de boro silicato por la irradiacion gamma. A pesar de esta alteracion del color de la ampolla de vidrio, no habia una decoloracion aparente de las formulaciones de estas ampollas al dia siguiente de la esterilizacion. Los resultados de los ensayos de las muestras indicadas en el Ejemplo 1 y en la Tabla I, se muestran en el Ejemplo 2 y la Tabla II(B).

Ejemplo 2

La eficacia antimicrobiana de las formulaciones (que contienen diyodometil-p-tolilsulfona), descritas en la presente memoria fue ensayada contra Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 51625 (resistente a meticilina), Enterococcus faecium ATCC 700 221 (resistente a vancomicina), Escherichia coli ATCC 8739 , Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 y Candida albicans ATCC 10231. Los cultivos de los organismos de desafio fueron cultivados en 20 ml de caldo tripticasa de soja esteril (TSB) durante 16-24 horas a 35-37DC.

Se usaron placas de agar de tripticasa de soja (TSA) para el ensayo. Una solucion salina al 0,85% fue utilizada para las diluciones. Todos los medios fueron esterilizados con vapor previamente a su uso. Las placas de agar fueron preparadas vertiendo aproximadamente 20 ml de medio fundido en placas de petri esteriles desechables (100 x 15 mm). Las placas de agar se dejaron solidificar bajo una campana de flujo laminar.

Los cultivos de una noche fueron sometidos a agitacion vorticial y se preparo una dilucion 1:100 para obtener un minimo de 104 unidades formadoras de colonias (UFC)/ml. El inoculo diluido fue extendido sobre la superficie de la placa de agar usando hisopos de algodon esteriles. Se tuvo cuidado de cubrir uniformemente toda la superficie del agar. Las placas se dejaron secar al aire durante 30 minutos.

�einte microlitros de una muestra de ensayo fueron anadidos al centro de una placa inoculada. Dos gotas de muestra de control fueron expresadas en placas TSA separadas. Las gotas de muestra de ensayo no fueron extendidas manualmente y se dejaron polimerizar sobre las placas para formar una pelicula fina. Las placas fueron incubadas a 35-37DC durante 24 horas. Las placas fueron examinadas para las zonas de inhibicion resultantes de la difusion de los agentes activos fuera del producto y al interior del medio de agar. La zona de inhibicion fue medida en milimetros (mm) desde el borde de la pelicula hasta el borde donde termina la zona libre. La eficacia antimicrobiana de la composicion se describe en terminos de zona de inhibicion en la Tabla II (B).

La efectividad de la propiedad antimicrobiana de DIMPTS pura se describe en terminos de concentracion minima inhibitoria (CMI) y la concentracion minima bactericida (CMB) en la Tabla II (A). Una concentracion minima inhibitoria es la menor concentracion que previene el desarrollo de crecimiento visible despues de un periodo de incubacion. La concentracion minima bactericida es la menor concentracion que alcanza una reduccion de 1.000 veces o mas en el inoculo bacteriano original. La concentracion minima inhibitoria y la concentracion minima bactericida son evaluadas usando un procedimiento de tubo de dilucion.

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Tabla II (A) Evaluacion preliminar de DIMPTS para concentraciones minimas inhibitorias y concentraciones minimas bactericidas (CMI/CMB)

Organismo: DIMPTS (ppm)

CMI: CMB

Staphylococcus aureus 6538: 100 �250

Escherichia coli 8739: 100 �250

Pseudomonas aeruginosa 9027: �100 NA

Enterococcus faecium 700221: 50 NA

Staphylococcus aureus 33591: 12,5 �250

Staphylococcus epidermidis 51625: 25 �100

Streptococcus agalactiae 624: 50 125-250

Bacillus subtilis 902173: 50 50-100

Candida albicans 10231: 5 10-100

La Tabla II (B) muestra datos de estabilidad (%mol de monomero) de la formulacion de monomero de cianoacrilato,

5 determinados mediante RMN, y de eficacia antimicrobiana, determinada por los datos de las zonas de inhibicion, para las muestras indicadas en la Tabla I. La zona de ensayo de inhibicion es un ensayo microbiologico usado normalmente para evaluar el efecto antimicrobiano de un agente difusible contra las cepas microbianas de interes. Conforme el agente se difunde fuera del disco, la concentracion se reduce logaritmicamente. La sensibilidad del organismo al agente se juzga por la apariencia y el tamano de una zona en la que no se produce crecimiento, la zona de inhibicion.

10 Las zonas sin crecimiento alrededor del material representan la zona de inhibicion, es decir, la concentracion de agente antimicrobiano es mayor que la concentracion minima inhibitoria (CMI) para el organismo de desafio particular. El area libre alrededor de la materia indica que los organismos de desafio fueron eliminados o inhibidos por el agente difusible.

Tabla II (B)

Organismo de desafío: Estabilidad (calor y gamma) y diámetro promedio de zona (mm) sobre placa TSADescripción de muestra

Tipo de organismo: DERMABON control 700 ppm,calor 1.400 ppm,calor 2.800 ppm,calor 700 ppm,15 kGy 1.400 ppm,15 kGy 2.800 ppm,15 kGy 700 ppm,20kGy 1.400ppm, 20kGy 2.800 ppm,20 kGy

Observacion; estabilidad (%demonomero): viscosidad normal,purpura;claro;95,3% viscosidad normal,purpura;claro;85,3% viscosidad normal,purpura;claro;90,9% viscosidad normal,purpura;claro;93,1% viscosidad normal,purpura;claro;�� viscosidad normal,purpura;claro;76% viscosidad normal,purpura;claro;82,3% viscosidad normal,purpura;claro;48,3% viscosidad normal,purpura;claro;76,6% viscosidad normal,purpura;claro;80,4%

S. aureus: Gram+ 2 4 5 4 7 6 5 7 7 6

S. epidermis MRSE: Gram+ 7 5 5 5� 9� 7 8 8 8� 9�

E. faecium�RE: Gram+ �� 4� 4� 4� 5 6 6� 6 7 4�

E. coli: Gram- 0 0 0 0 1 1 1 1,5 1 1,5

P. aeruginosa: Gram- 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

C. albicans: Levadura 0 2 1 5 2 4 5 2 4 9

Nota:� 1 o 2 colonias observadas dentro de la zona clara �� Bajo crecimiento aproximadamente 2 mm alrededor de la muestra �� Muestra filtrada, el ensayo no se realizo

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La formulacion que contiene diyodometil-p-tolilsulfona mostro una actividad sustancialmente incrementada contra Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecium y Candida albicans, en comparacion con el control. La actividad contra Candida albicans incrementa considerablemente con un incremento de la concentracion de diyodometil-p-tolilsulfona. Las muestras esterilizadas por radiacion de la formulacion que contiene diyodometil-p

5 tolilsulfona mostraron una actividad incrementada contra E. coli, en comparacion con el control. Las formulaciones esterilizadas mediante calor que contenian diyodometil-p-tolilsulfona a una mayor concentracion no mostraron actividad contra E. coli. Las formulaciones que contenian diyodometil-p-tolilsulfona no mostraron una zona de inhibicion alrededor de las muestras de pelicula de ensayo cuando fueron desafiadas con Pseudomonas aeruginosa. Sin embargo, no se observo crecimiento de Pseudomonas aeruginosa bajo la zona de muestra de la pelicula de ensayo.

10 Ejemplo 3

La tabla III expone muestras adicionales (10 a 15) preparadas y expuestas a diversas condiciones, de manera similar a las del Ejemplo 1 y la Tabla I. Las viscosidades indicadas fueron determinadas en un viscosimetro Brookfield (Modelo nD D�2 Plus; husillo nD 40, 100 RPM de velocidad, a 25DC.). El porcentaje de monomero fue determinado mediante RMN (400 MHz) en solucion CDCl3.

15 Tabla III E05818777 21-11-2011

Nº de muestra: Concentración de DIMPTS (ppm) en adhesivo tópico para la piel DERMABOND® Procedimiento de esterilización (Calor o Gamma) Observaciones visuales %mol de monómero (mediante RMN) (n=1) Viscosidad (CPS) (n=1)

Control A: adhesivo topico para la piel DERMABOND® Ninguno Liquido purpura/baja viscosidad 95,5 6,8

en vial original

Control B: adhesivo topico para la piel DERMABOND® en vial Calor @ 160DC durante 65 min �idrio inalterado, liquido amarillo, baja viscosidad 78,1%

original+no DIMPTS

Control C: adhesivo topico para la piel DERMABOND® en vial original+no DIMPTS Gamma @ 20 kGy �idrio ligeramente marron, liquido purpura, baja viscosidad 91,0%

10: DIMPTS (870 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Calor @ 160DC durante 65 min �idrio inalterado, liquido purpura, baja viscosidad 88,4%

11: DIMPTS (870 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Gamma @ 20 kGy �idrio ligeramente marron, liquido purpura, baja viscosidad 85,2%

12: DIMPTS (1350 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Calor @ 160DC durante 65 min �idrio inalterado, liquido amarilo, baja viscosidad 80,2%

(Cont.)

13: DIMPTS (1350 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Gamma @ 20 kGy �idrio ligeramente marron, liquido purpura, baja viscosidad 83,4% 20,4

14: DIMPTS (2832 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Calor @ 160DC durante 65 min �idrio inalterado, liquido purpura, baja viscosidad 90.8% 9,6

15: DIMPTS (5477 ppm) en adhesivo topico para la piel DERMABOND® Calor @ 160DC durante 65 min �idrio inalterado, liquido purpura, baja viscosidad 86,0%

La Tabla III indica que el porcentaje de monomero y la viscosidad de las formulaciones de monomero incorporadas con diyodometil-p-tolilsulfona (DIMPTS) eran consistentes con el material de control.

5 Ejemplo 4

Se evaluaron muestras de la formulacion de monomero de cianoacrilato fabricadas mediante la incorporacion de 2.793 ppm de DIMPTS en adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente. Se evaluo el porcentaje de monomero, medido mediante RMN, bajo diversas condiciones. Las evaluaciones se realizaron despues de que la muestra fue preparada a 80DC; despues de que la muestra fue preparada y sometida a un ciclo de esterilizacion

10 mediante calor (sin envejecimiento) a 160DC durante 65 minutos; despues de la muestra fue preparada y sometida a envejecimiento durante 6 dias a 80DC (sin un ciclo de esterilizacion mediante calor); y despues de que la muestra fue preparada y sometida a envejecimiento durante 12 dias a 80DC (sin un ciclo de esterilizacion mediante calor). El control era adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente. La Tabla I� muestra los resultados de las muestras 16 a 19.

15 Tabla I�

Nº de muestra A: Control B: Composiciones: Condiciones de envejecimiento Procedimiento de esterilización % de monómero (n=3)

Control (0 ppm): Composiciones (2.793 ppm)

16A-B: 0 dias a 80DC Ninguno 97,7 98,0

17A-B: 6 dias a 80DC Ninguno 92,3 (n�2) 91,5

18A-B: 12 dias a 80DC Ninguno 76,1 75,9

19A-B: Ninguna Calor @ 160DC/65 min 96,6 95,7

La Tabla I� indica que una formulacion de monomero que contiene 2.793 ppm de diyodometil-p-tolilsulfona demostro una estabilidad comparable a la de la muestra de control despues de la esterilizacion y bajo condiciones variadas.

Ejemplo 5

Se evaluaron muestras de una formulacion de monomero de cianoacrilato fabricadas incorporando 2.834 ppm de DIMPTS en adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, expuestas a varias condiciones seguido de un tratamiento de estabilizacion con hidroquinona y dioxido de azufre. El tratamiento de estabilizacion fue

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realizado con el fin de mantener la viscosidad del adhesivo topico para la piel Dermabond® que contiene 2.834 ppm de DIMPTS despues del ciclo de esterilizacion por calor descrito mas adelante.

Especificamente, un adhesivo topico para la piel Dermabond® con 2.834 ppm de DIMPTS y 438 ppm de hidroquinona fue colocado en un matraz que fue lavado con acido sulfurico 1N durante 3 horas, fue aclarado 3 veces con agua desionizada y fue sacado durante la noche a 110DC. A continuacion, las ampollas fueron rellenadas con adhesivo topico para la piel Dermabond®/DIMPTS/hidroquinona y se cubrieron durante 10 segundos con la mezcla de 250 ppm de dioxido de azufre en nitrogeno y se sellaron inmediatamente. A continuacion, todas las ampollas fueron esterilizadas mediante calor a 160DC durante 65 min.

A continuacion, se realizaron ensayos de reventamiento, usando un procedimiento similar al usado para el ensayo Mullen de reventamiento. Una pelicula de latex que tiene una longitud de incision de 1,3 cm en el centro de cada cuadrado fue cortada en piezas de 10,9 cm2. Un molde de acero de bajo contenido de carbono recubierto de Teflon que tiene un cuadrado recortado fue colocado en un cuadrado de latex con la incision en el centro del recorte. Se aplicaron 50 microlitros de la formulacion de monomero de cianoacrilato al cuadrado de latex, usando una micropipeta. La formulacion de monomero de cianoacrilato se dejo curar durante un dia con humedad. Las muestras fueron colocadas en el aparato de ensayo y la presion de reventamiento fue registrada en la tabla �.

(1): Control-A: Un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, (sin DIMPTS, sin hidroquinona, sin dioxido de azufre, sin esterilizacion adicional por calor) fue recubierto en 5 peliculas de latex con un espesor de aproximadamente 0,2 mm. Estas peliculas fueron curadas por humedad, sin ningun iniciador.

(2): Control-B: Un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, (sin DIMPTS, sin hidroquinona, sin dioxido de azufre, sin esterilizacion por calor adicional) fue recubierto en 5 peliculas de latex con un espesor de aproximadamente 0,2 mm. El sustrato fue recubierto primero con un iniciador (solucion de tri-etil amina en acetil tri-butil citrato al 5%) aplicado desde una toallita.

(3): Composicion-C: Un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, (con 2.834 ppm de DIMPTS, 438 ppm de hidroquinona, 250 ppm de dioxido de azufre y con esterilizacion por calor adicional) fue recubierto en 5 peliculas de latex con un espesor de aproximadamente 0,2 mm . Estas peliculas fueron curadas por humedad sin ningun iniciador.

(4): Composicion-D: Un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, (con 2.834 ppm de DIMPTS, 438 ppm de hidroquinona, 250 ppm de dioxido de azufre y con esterilizacion por calor adicional) fue recubierto en 5 peliculas de latex con un espesor de aproximadamente 0,2 mm . El sustrato fue recubierto primero con un iniciador (solucion de tri-etil amina en acetil tri-butil citrato al 5%) aplicado desde una toallita.

El resultado del ensayo de reventamiento y la observacion de la velocidad de curado en todas las muestras (control y composicion) se resumen en las Tablas � (A) y � (B), respectivamente.

Tabla V (A) Resistencia al reventamiento (kPa) y observación visual del curado activado por humedad

Muestra 20 A y C: Resistencia a reventamiento (kPa) (activado por humedad) (n=5)

Control A: 93,07 kPa

Composicion C: 95,14 kPa

Tabla V (B) Resistencia a reventamiento (pKa) y observación visual del curado activado por amina

Muestra 20 B y D: Observación visual de curado (activado por amina)

Control B: 30-45 segundos

Composicion D: 30-45 segundos

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se polimerizo para formar una pelicula polimerica que demostro una resistencia mecanica comparable a una pelicula polimerica formada a partir de la muestra de control, bajo condiciones de curado por humedad o iniciador.

Ejemplo 6A

Este ejemplo demuestra la inesperadamente superior actividad antimicrobiana de una mezcla de diyodometil-ptolilsulfona y 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter en una formulacion de monomero de cianoacrilato, en comparacion con la actividad de cada agente por separado

Se prepararon muestras comparativas E-H, usando solo uno de los agentes antimicrobianos, usando los mismos procedimientos descritos del Ejemplo 5. Las muestras se indican a continuacion en la Tabla �I (A1):

Tabla VI (A1)

Id de muestra: E F G H I

Adhesivo topico para la piel DERMABOND®: 1,96 g 2,16 g 5,03 g 5,00 g 5,00 g

Hidroquinona: 438 ppm 438 ppm 0,019 g 376 ppm 0,0016 g 318 ppm 0,0018 g 358 ppm

1Dioxido de azufre/N2: 250 ppm 250 ppm 250 ppm 250 ppm 250 ppm

Diyodometil-p-tolilsulfona: na 0,061 g 2,816 ppm na 0,0295 g 5.863 ppm 0,0137 g 2.725 ppm

2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter: 0,0053 g 2.697 ppm na 0,0275 g 5.435 ppm na 0,0131 g 2.737 ppm

Nota: 1: Las ampollas rellenas de adhesivo topico para la piel Dermabond®/DIMPTS/2,4,4'-tricloro-2'hidroxidifenil eter/hidroquinona fueron cubiertas durante 10 segundos con una mezcla de 250 ppm de dioxido de azufre en nitrogeno y fueron selladas inmediatamente.

La Muestra E correspondia a una muestra fabricada usando un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, que contenia 2.697 ppm de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter;

La Muestra F correspondia a una muestra fabricada con un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, que contenia 2.816 ppm de diyodometil-p-tolilsulfona;

15 La Muestra G correspondia a una muestra fabricada con un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, que contenia 5.435 ppm de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter;

La Muestra H correspondia a una muestra fabricada con un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, y que contenia 5.863 ppm de diyodometil-p-tolilsulfona.

La Muestra Inventiva I correspondia a una muestra fabricada con un adhesivo topico para la piel Dermabond®,

20 disponible comercialmente, que contenia 2.737 ppm de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter y 2.725 ppm de diyodometil-p tolilsulfona.

Cada una de las Muestras Comparativas E-H y la Muestra Inventiva I fue esterilizada mediante esterilizacion por calor a 160DC durante 65 minutos.

Un ensayo de reduccion Log10 es un ensayo de microbiologia estandar para evaluar la eficacia de un agente

25 antimicrobiano. Los resultados de un ensayo antimicrobiano cuantitativo pueden ser resumidos por medio del valor de reduccion log. Los ensayos cuantitativos son usados para evaluar la eficacia de los agentes antimicrobianos, donde la diferencia en la escala logaritmica entre el promedio de los microbios supervivientes para los portadores del control y

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los ensayos es una medida de la eficacia del agente antimicrobiano. El porcentaje eliminado corresponde a: Reduccion 1-log � 90% eliminado Reduccion 2-log � 99% eliminado Reduccion 3-log � 99,9% eliminado Reduccion 4-log � 99,99% eliminado Reduccion 5-log � 99.999% eliminado Reduccion 6-log � 99,9999% eliminado Preparacion de Inoculo: Los cultivos de una noche en medios de cultivo apropiados fueron sometidos a agitacion vorticial y se prepararon

diluciones para obtener un minimo de 105 unidades formadoras de colonias (UFC)/ml. El inoculo diluido fue usado para

la inoculacion de cada pocillo individual en una placa de cultivo de tejido. Un medio de nutrientes esteril, asi como un inoculo estandar (0,1 ml) fueron anadidos a cada pocillo individual. Inoculos de control, que contenian un medio de cultivo apropiado y solo inoculo, fueron mantenidos como control positivo para cada conjunto.

0,5 ml de cada una de las Muestras Comparativas E-H y la Muestra Inventiva I fueron expresados en una placa TSA esteril. El material expresado fue extendido usando un lazo esteril en un area de 4 cm x 2 cm. Se tuvo cuidado de extender los contenidos para conseguir un espesor de pelicula uniforme. La pelicula se dejo polimerizar en la placa. Una vez polimerizada, fue cortada en articulos de ensayo con un peso de 80 � 2 mg. Los articulos de ensayo fueron anadidos a pocillos que contenian medio de cultivo e inoculo. Se realizo un conteo de placa estandar a 0, 24, 48 y 72 las horas, retirando alicuotas de los pocillos. El ensayo se realizo por duplicado.

El porcentaje de organismo eliminado despues del tratamiento con la formulacion antimicrobiana fue evaluado despues de 24, 48 y 72 horas, tal como se muestra en la Tabla �I (A2)

Tabla VI (A2)

Id de muestra: Porcentaje eliminado de Staphylococcus aureus @

24 horas: 48 horas 72 horas

Muestra Comparativa E: 99,632 99,9999 99,9999

Muestra Comparativa F: 99,787 99,786 99,9999

Muestra Comparativa G: 99,9985 99,9985 99,9985

Muestra Comparativa H: 99,9985 99,9985 99,9985

Muestra Inventiva I: 99,9999 99,9999 99,9999

Tal como se muestra en la Tabla �I (A2), la Muestra Comparativa G, que contenia un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, y 5.435 ppm de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter, mostro una reduccion 4-5 log en Staphylococcus aureus en 24 horas. De manera similar, la Muestra Comparativa H, que contenia un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, y 5.863 ppm de diyodometil-p-tolilsulfona exhibio una reduccion 4-5 log en Staphylococcus aureus en 24 horas. Por el contrario, la Muestra Inventiva I, que contenia un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, y una mezcla de 2.725 ppm de diyodometil-ptolilsulfona y 2.737 ppm de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter, exhibio una reduccion 6 log de Staphylococcus aureus en 24 horas, demostrando la inesperada actividad antimicrobiana superior de la mezcla en comparacion con la actividad de cualquiera de los agentes por separado, a una concentracion constante de un agente antimicrobiano. La efectividad

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antimicrobiana fue observada tambien a las 48 y 72 horas.

Ejemplo 6B

La eficacia antimicrobiana de las formulaciones (que contienen una formulacion mezclada de diyodometil-p-tolilsulfona y 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil), descritas en la presente memoria, fue ensayada contra Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus agalactiae ATCC 624 y Candida albicans ATCC 10231. Los cultivos de organismos de desafio fueron cultivados en 20 ml de caldo tripticasa de soja esteril (TSB) durante 16-24 horas a 35-37DC.

0,5 ml de la formulacion fueron expresados en una placa TSA esteril. El material expresado fue extendido usando un lazo esteril en un area de 4 cm x 2 cm. Se tuvo cuidado de extender los contenidos para conseguir un espesor de pelicula uniforme. La pelicula se dejo polimerizar en la placa. Una vez polimerizada, discos de 5 mm fueron perforados asepticamente y fueron usados para el ensayo.

Los discos fueron transferidos diariamente a placas recien inoculadas durante un maximo de 72 horas. En cada punto temporal (es decir, 24, 48 y 72 horas), las placas fueron incubadas a 35-37DC durante 24 horas y, posteriormente, fueron examinadas para zonas de inhibicion resultantes de la difusion de los agentes activos fuera del producto y al interior del medio de agar. La zona de inhibicion fue medida en milimetros (mm) a traves de la pelicula e incluye el diametro del disco.

La Tabla �I (B) informa acerca de la eficacia antimicrobiana, determinada por los datos de las zonas de inhibicion, para las muestras (que contenian la formulacion mezclada de diyodometil-p-tolilsulfona y 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil), descrita en la Tabla �I (A1).

Tabla VI (B)

Datos de la zona de inhibicion (diametro de la zona medido en milimetros)

Formulacion: S. aureus ATCC 6538 S. agalactiae ATCC 624 C. albicans ATCC 10231

24 hrs: 48 hrs 72 hrs 24 hrs 48 hrs 72 hrs 24 hrs 48 hrs 72 hrs

Muestra Comparativa E: 18 19,5 19 7,25 6 5,5 0 0 0

Muestra Comparativa F: 7 3 2,75 7 5,75 5,5 14,5 12,5 12

Muestra Comparativa H: 8,25 6 5,5 7,25 5,75 5,5 16,75 15 15

Muestra Comparativa I: 18 19 19 7,5 5,5 5,5 16,5 14 13,5

Ejemplo 6C

Se evaluaron las muestras de la formulacion de monomero de cianoacrilato descritas en el Ejemplo 6A. El porcentaje de monomero, medido mediante RMN, fue evaluado en varias condiciones. Las evaluaciones se realizaron despues de que la muestra fue preparada; despues de que la muestra fue preparada y sometida a un ciclo de esterilizacion por calor (sin envejecimiento) a 160DC durante 65 minutos; despues de que la muestra fue preparada y sometida a envejecimiento durante 6 dias a 80DC (sin un ciclo de esterilizacion por calor); y despues de que la muestra fue preparada y sometida a envejecimiento durante 13 dias a 80DC (sin un ciclo de esterilizacion por calor). La muestra de control (J) era un adhesivo topico para la piel Dermabond®, disponible comercialmente, La Tabla �I (C) muestra los resultados de la muestra de control J, las Muestras Comparativas G y H y la Muestra Inventiva I.

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1Tabla �I (C)

Condicion de envejecimiento: Procedimiento de esterilizacion Muestra Comparativa J Control Muestra Comparativa G Muestra Comparativa H Muestra Inventiva I

0 dias @ 80DC: Ninguno 97,2% +/- 0,2 97,2% +/- 0,2 96,8% +/- 0,2 96,9% +/- 0,2

6 dias @ 80DC: Ninguno 92,3% +/- 0,7 85,6% +/- 3,3 93,1% +/- 0,4 92,0% +/- 0,3

13 dias @ 80DC: Ninguno 74,5% +/- 1,9 56,0% +/- 7,1 81,8% +/- 13,4 69,4% +/- 5,8

Ninguna: Calor @ 160DC/65 min 95,1% +/- 0,7 95,3% +/- 0,3 95,6% +/- 0,2 95,6% +/- 0,1

Nota: 1 % de monomero mediante RMN (@ N � 5)

La Tabla �I (C) indica los datos comparables para todas las muestras despues de un ciclo de esterilizacion E05818777 21-11-2011

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulacion antimicrobiana polimerizable para formar un adhesivo de cierre de herida, que comprende: monomero de cianoacrilato, diyodometil-p-tolilsulfona y un hidroxi difenil eter halogenado.
2. Formulacion segun la reivindicacion 1, en la que el hidroxi difenil eter halogenado es 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil 5 eter.
3. Formulacion segun la reivindicacion 1 o 2, en la que la concentracion de dicho diyodometil-p-tolilsulfona esta entre 500 ppm y 15.000 ppm, y la concentracion de dicho hidroxi difenil eter halogenado esta entre 500 ppm y
15.000 ppm.
4. Formulacion segun la reivindicacion 2, en la que dicha concentracion de dicha diyodometil-p-tolilsulfona esta 10 entre 2.500 ppm y 3.000 ppm, y la concentracion de dicho 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenil eter esta entre 1.500 ppm y
3.000 ppm.
5. Formulacion segun la reivindicacion 1, que comprende al menos el 80% de monomero de cianoacrilato despues de que la formulacion es sometida a una temperatura de esterilizacion por calor de 160DC durante 65 minutos o una esterilizacion gamma, a una dosis de 15 a 20 kGy

15 6. Formulacion segun la reivindicacion 1, que comprende al menos un 60% de monomero de cianoacrilato despues de que la formulacion es sometida a una temperatura de envejecimiento por calor de 80DC, durante aproximadamente 13 dias.
7. Formulacion segun la reivindicacion 1, en la que dicho monomero de cianoacrilato es seleccionado de entre el

grupo que consiste en cianoacrilato de 2-octilo, cianoacrilato de n-octilo, cianoacrilato de 2-etil hexilo, cianoacrilato 20 de butilo y sus isomeros.
8. Formulacion segun la reivindicacion 2, para su uso en un procedimiento para cerrar los bordes aproximados de una herida con una pelicula polimerica, que inhibe sustancialmente el crecimiento de microorganismos, que comprende:

aplicar dicha formulacion a los bordes aproximados de la herida; y

25 permitir que la formulacion polimerice para formar una pelicula polimerica.