ES2374507T3 - Colorante de cianina a base de pirazol. - Google Patents
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Abstract
Compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] y una sal del mismo: en la que R 1' a R 6' representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R 7' a R 10' representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; un grupo representado por la fórmula general [2]: -COOR 12 [2] (en la que R 12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); un grupo representado por la fórmula general [3]: -SO3R 13 [3] (en la que R 13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R 11' representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R 1' y R 2' , R 4' y R 5' , R 1' y R 6' , y R 2' y R 4' pueda formar un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]: (en las que R 50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y en el caso en el que dicho grupo bivalente se forme, al menos uno de R 1' a R 11' , junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R 1' y R 2' , R 4' y R 5' , R 1' y R 6' , y R 2' y R 4' , tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; y en el caso en el que dicho grupo bivalente no se forme, al menos uno de R 1' a R 11' tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo.
Description
Colorante de cianina a base de pirazol
La presente invención se refiere a un colorante de cianina a base de pirazol novedoso.
Recientemente, en un campo de prueba bioquímica o prueba genética, se ha requerido alta sensibilidad de detección para un objeto de medición, y se ha convertido en un factor importante la colocación de un colorante fluorescente como agente de marcaje (una sustancia de marcaje).
Como el colorante fluorescente, se han usado, por ejemplo, un derivado de colorante de cianina, un derivado de colorante de cumarina, un derivado de colorante de fluoresceína, un derivado de colorante de rodamina y similares, dependiendo de diversos objetivos, y entre éstos, se ha usado ampliamente el derivado de colorante de cianina como colorante que tiene características de fluorescencia en una región del infrarrojo cercano de igual o superior a 600 nm.
Como el derivado de colorante de cianina, por ejemplo, Cy3, Cy5 [fabricados por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd. (nombre anterior: Amasham Bioscience Co., Ltd.)] o similares se conocen como reactivo fluorescente principal, y es una situación actual que también como especificación fotométrica de un aparato de detección, se usan las características de fluorescencia de Cy5 como base.
En estas circunstancias, se ha continuado el desarrollo del derivado de colorante de cianina, usando dos longitudes de onda de Cy3 y Cy5 como bases de la longitud de onda de excitación. Cy3 y Cy5 tienen una estructura (un colorante de cianina a base de indolenina) en la que se unen dos esqueletos de indolenina a una cadena de polimetino, y usando esta estructura como estructura básica, se han desarrollado diversos derivados de colorante de cianina que se dirigen a, por ejemplo, la mejora de la solubilidad en agua, mayor sensibilidad evitando un estado de agregación o similares (véanse el documento de patente 1, documento de patente 2, documento de patente 3 o similares).
Además, como otros derivados de colorante de cianina, se han desarrollado los que tienen una estructura en la que un esqueleto de azaindolenina y un esqueleto de pirazol se unen a una cadena de polimetino (véanse el documento de patente 4, documento de patente 5 o similares).
Aún más, se han desarrollado los que tienen una estructura en la que dos esqueletos de indolenina unidos a, por ejemplo, una cadena de polimetino o similares se reticulan adicionalmente con un espaciador o similares (véanse el documento de patente 6, documento de patente 7, documento de patente 8 o similares).
Por otra parte, se ha preparado una fuente de luz láser usada en un sistema óptico para tener una longitud de onda cada vez más corta y una salida superior, con el fin de alcanzar mayor capacidad de un disco óptico magnético. Además, también está disponible un láser semiconductor o similares, que tiene una anchura de variación de temperatura muy pequeña y estable.
En estas circunstancias, se desea el desarrollo de un derivado de colorante de cianina novedoso que tenga características fluorescentes con mayor sensibilidad que un colorante convencional, en una región de longitud de onda corta energéticamente más eficiente que las características ópticas convencionales.
Documento de patente 1: USP. n.º 5.268.486
Documento de patente 2: USP. n.º 5.486.616
Documento de patente 3: USP. n.º 5.569.766
Documento de patente 4: JP-A-2003-034696
Documento de patente 5: JP-A-2003-034697
Documento de patente 6: USP. n.º 5.571.388
Documento de patente 7: USP. n.º 5.800.995
Documento de patente 8: WO01/02374
La presente invención se ha preparado en estas circunstancias, y es un objeto de la presente invención, proporcionar un derivado de colorante de cianina novedoso con un esqueleto de pirazol y un esqueleto de indol, que tiene alto rendimiento de sensibilidad en una región de longitud de onda más corta en comparación con un sistema óptico convencional, y que muestra alta solubilidad en agua.
La presente invención incluye los siguientes aspectos (1) a (3):
(1) Un compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] y una sal del mismo:
[en la que R1’ a R6’ representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’ a R10’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; un grupo representado por la fórmula general [2]:
- -
- COOR12 [2]
25 (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); un grupo representado por la fórmula general [3]:
- -
- SO3R13 [3]
(en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo
o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ pueda formar un grupo bivalente con un grupo
35 seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:
grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y en el caso en el que el grupo bivalente se forme, al menos uno de R1’ a R11’, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; y en el caso en el que el grupo bivalente no se forme, al menos uno de R1’ a R11’ tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general
45 [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo],
- (2)
- un compuesto marcado obtenido sometiendo el compuesto anterior (1) y una sustancia que va a marcarse a unión directa o indirecta, y
- (3)
- un método de marcaje para una sustancia que va a marcarse, que comprende someter el compuesto [1] anterior a unión directa o indirecta a la sustancia que va a marcarse.
55 Debido a que un colorante de cianina a base de pirazol de la presente invención tiene una estructura en la que un esqueleto de pirazol y un esqueleto de indol se unen a una cadena de polimetino y ejerce características de fluorescencia en una región de longitud de onda corta en comparación con una fuente de luz convencional, se vuelve posible usar una fuente de luz de una región de longitud de onda corta con alta eficiencia energética. Además, en el caso en el que se detecte un objeto de medición usando esto como agente de marcaje (una sustancia de marcaje), es posible detectar el objeto de medición con alta sensibilidad de detección sin tener problemas, por
5 ejemplo, baja solubilidad en agua, sensibilidad de detección reducida mediante extinción óptica provocada por la agregación de los propios colorantes y similares, que tiene un derivado de colorante de cianina convencional.
Mejor modo de llevar a cabo la invención
10 Entre los compuestos representados por la fórmula general [50], un compuesto, en el que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ no forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo – COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido incluye, por ejemplo, uno representado por la siguiente formula general [1]:
[en la que R1 a R6 representan cada uno independientemente grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7 a R10 representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo
20 arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:
- -
- COOR12 [2]
25 (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); el grupo representado por la fórmula general [3]:
- -
- SO3R13 [3]
30 (en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo
o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3,
siempre que al menos uno de R1 a R11 tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado 35 por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo].
Entre los compuestos representados por la fórmula general [50], un compuesto, en el que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido incluye,
40 por ejemplo, uno representado por la siguiente fórmula general [51]:
[en la que R1” a R6” representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede
45 tener un enlace amida; R7’’ a R10’’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:
50 -COOR12 [2]
(en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); el grupo representado por la fórmula general [3]:
(en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo
o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:
(en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos
15 grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido. Además, al menos uno de R1” a R11”, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo].
A continuación se proporcionará explicación en detalle de los compuestos representados por la fórmula general [1] y [5], que son compuestos más específicos de los compuestos representados por la fórmula general [50].
Por consiguiente, las definiciones y similares de R1’ a R11’ en la fórmula general [50] son sustancialmente las mismas que las definiciones y similares de R1 a R11 en la siguiente fórmula general [1], y R1’’ a R11’’ en compuestos
25 representados por la fórmula general [51].
1. El compuesto [1] de la presente invención
1-1. El compuesto [1] de la presente invención
Entre los compuestos representados por la fórmula general [50], un compuesto, en el que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ no forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo – COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido incluye, por ejemplo, uno representado por la siguiente fórmula general [1]:
[en la que R1 a R6 representan cada uno independientemente grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7 a R10 representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:
45 (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); el grupo representado por la fórmula general [3]:
- -
- SO3R13 [3]
(en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo
o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, 55 siempre que al menos uno de R1 a R11 tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo].
En la fórmula general [1], el grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1 a R6, incluye uno que tiene habitualmente desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 1 hasta 3, y más preferiblemente un enlace amida en la cadena alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido.
El grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1 a R6, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo secpentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo noctilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo secnonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares: entre éstos es preferible, por ejemplo, un grupo alquilo de cadena lineal tal como grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo n-pentilo.
El sustituyente del grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1 a R6, incluye uno en el que una parte de átomos de hidrógeno en el grupo alquilo, que puede tener el enlace amida, se sustituye con un sustituyente, y el dicho sustituyente incluye, por ejemplo, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3] o similares.
En la fórmula general [2] y [3], el átomo de metal alcalino representado por R12 y R13, incluye, por ejemplo, átomo de litio, átomo de sodio, átomo de potasio, átomo de rubidio o similares, y entre éstos es preferible átomo de sodio o átomo de potasio, y en particular, es más preferible átomo de sodio.
El ion amonio orgánico representado por R12 y R13 incluye, por ejemplo, un ion trialilamonio o similares. Dicho ion trialilamonio puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, ion trimetilamonio, ion trietilamonio, ion tri-npropilamonio, ion triisopropilamonio, ion tributilamonio, ion tripentilamonio, ion trihexilamonio, ion triheptilamonio, ion trioctilamonio, ion trinonilamonio, ion tridecilamonio, ion triciclopropilamonio, ion triciclobutilamonio, ion triciclopentilamonio, ion triciclohexilamonio, ion tricicloheptilamonio, ion triciclooctilamonio, ion triciclononilamonio, ion triciclodecilamonio o similares, y entre éstos, es preferible ion trimetilamonio o ion trietilamonio, y en particular, es preferible ion trietilamonio.
En la fórmula general [2], el grupo alquilo C1 a C10 representado por R12 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, más preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo tercpentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo isononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo representado por la fórmula general [2], incluye, por ejemplo, un grupo carboxilo (-COOH), un anión del mismo [carboxilato (-COO-)], sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, sal de rubidio o similares), sal de amonio del mismo, sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio, sal de tripropilamonio o similares) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo representado por la fórmula general [3], incluye, por ejemplo, grupo sulfo (-SO3H), anión del mismo [un sulfonato (-SO3-)], sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, sal de rubidio o similares), sal de amonio del mismo, sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio, sal de tripropilamonio o similares) o similares.
En cuanto al sustituyente del grupo alquilo sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1 a R6 (es decir, el grupo representado por la fórmula general [2] o el grupo representado por la fórmula general [3]), es preferiblemente uno sustituido en el átomo de hidrógeno terminal del grupo alquilo.
Un ejemplo específico preferible de R1 y R2, incluye, un grupo alquilo C1 a C5 que tiene, como sustituyente, un grupo representado por la fórmula general [2], tal como grupo carboxietilo, grupo carboxipropilo, grupo carboxibutilo, grupo carboxipentilo, anión del mismo (carboxilato), grupo de sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio o similares), grupo de sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio o similares) y sal de amonio; un grupo alquilo C1 a C5 que tiene, como sustituyente, un grupo representado por la fórmula general [3], tal como grupo sulfoetilo, grupo sulfopropilo, grupo sulfobutilo, grupo sulfopentilo, anión del mismo (sulfonato), grupo de sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio o similares) y grupo de sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio o similares), sal de amonio del mismo; o similares.
Además, una combinación preferible de R3 y R4, y una combinación preferible de R5 y R6, incluye preferiblemente una en la que cualquiera de estos (es decir, cualquiera de R3 y R4 y cualquiera de R5 y R6) es un grupo alquilo C1 a C6 (por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neopentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo o similares), y el otro es un grupo alquilo C1 a C5 que tiene, como sustituyente, un grupo representado por la fórmula general [2], incluyendo por ejemplo, grupo carboxietilo, grupo carboxipropilo, grupo carboxibutilo, grupo carboxipentilo, anión del mismo (carboxilato), grupo de sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio o similares), grupo de sal de amonio del mismo o grupo de sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio o similares); un grupo alquilo C1 a C5 que tiene, como sustituyente, un grupo representado por la fórmula general [3], incluyendo por ejemplo, grupo sulfoetilo, grupo sulfopropilo, grupo sulfobutilo, grupo sulfopentilo, anión del mismo (sulfonato), grupo de sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio o similares), sal de amonio, grupo de sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio o similares).
En la fórmula general [1], el grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo secpentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo o similares.
El grupo alquenilo del grupo alquenilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo isopropenilo, grupo 3-butenilo, grupo 2-butenilo, grupo 1-butenilo, grupo 1,3-butadienilo, grupo 4-pentenilo, grupo 3-pentenilo, grupo 2-pentenilo, grupo 1-pentenilo, grupo 1,3-pentadienilo, grupo 2,4-pentadienilo, grupo 1,1-dimetil-2-propenilo, grupo 1-etil-2propenilo, grupo 1,2-dimetil-1-propenilo, grupo 1-metil-1-butenilo, grupo 5-hexenilo, grupo 4-hexenilo, grupo 3hexenilo, grupo 2-hexenilo, grupo 1-hexenilo, grupo 1-ciclopropenilo, grupo 2-ciclopentenilo, grupo 2,4ciclopentadienilo, grupo 1-ciclohexenilo, grupo 2-ciclohexenilo, grupo 3-ciclohexenilo o similares.
El grupo alquinilo del grupo alquinilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo etinilo, grupo 2-propinilo, grupo 3-butinilo, grupo 1-metil-2-propinilo, grupo 4-pentinilo, grupo 2-metil-4-pentinilo, grupo 5-hexinilo o similares.
El grupo arilo del grupo arilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
El grupo alcoxilo del grupo alcoxilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metoxilo, grupo etoxilo, grupo n-propoxilo, grupo isopropoxilo, grupo n-butoxilo, grupo isobutoxilo, grupo sec-butoxilo, grupo terc-butoxilo, grupo n-pentiloxilo, grupo isopentiloxilo, grupo secpentiloxilo, grupo terc-pentiloxilo, grupo neopentiloxilo, grupo n-hexiloxilo, grupo isohexiloxilo, grupo sec-hexiloxilo, grupo terc-hexiloxilo, grupo neohexiloxilo, grupo ciclopropoxilo, grupo ciclopentiloxilo, grupo ciclohexiloxilo o similares.
El grupo ariloxilo del grupo ariloxilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo feniloxilo, grupo naftoxilo y similares.
El grupo alquiltio del grupo alquiltio sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno en el que un átomo de oxígeno del grupo alcoxilo está sustituido con un átomo de azufre, y puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metiltio, grupo etiltio, grupo n-propiltio, grupo isopropiltio, grupo n-butiltio, grupo isobutiltio, grupo sec-butiltio, grupo terc-butiltio, grupo n-pentiltio, grupo isopentiltio, grupo sec-pentiltio, grupo tercpentiltio, grupo neopentiltio, grupo n-hexiltio, grupo isohexiltio, grupo sec-hexiltio, grupo terc-hexiltio, grupo neohexiltio, grupo ciclopropiltio, grupo ciclobutiltio, grupo ciclopentiltio, grupo ciclohexiltio o similares.
El grupo ariltio del grupo ariltio sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno en el que un átomo de oxígeno del grupo ariloxilo está sustituido con un átomo de azufre, e incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo feniltio, grupo naftiltio o similares.
El grupo alquilsulfonilo del grupo alquilsulfonilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno en el que un grupo -OH de un grupo sulfo (-SO2OH) está sustituido con un grupo alquilo, y puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilsulfonilo, grupo etilsulfonilo, grupo n-propilsulfonilo, grupo isopropilsulfonilo, grupo n-butilsulfonilo, grupo
5 isobutilsulfonilo, grupo sec-butilsulfonilo, grupo terc-butilsulfonilo, grupo n-pentilsulfonilo, grupo isopentilsulfonilo, grupo sec-pentilsulfonilo, grupo terc-pentilsulfonilo, grupo neopentilsulfonilo, grupo n-hexilsulfonilo, grupo isohexilsulfonilo, grupo sec-hexilsulfonilo, grupo terc-hexilsulfonilo, grupo neohexilsulfonilo, grupo ciclopropilsulfonilo, grupo ciclobutilsulfonilo, grupo ciclopentilsulfonilo, grupo ciclohexilsulfonilo o similares.
El grupo arilsulfonilo del grupo arilsulfonilo sustituido o no sustituido representado por R7 a R10, incluye uno en el que un grupo -OH de un grupo sulfo (-SO2OH) está sustituido con un grupo arilo, y puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilsulfonilo, grupo naftilsulfonilo o similares.
15 El átomo de halógeno representado por R7 a R10, incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
El grupo tio heterocíclico aromático representado por R7 a R10, incluye uno en el que un átomo de hidrógeno del grupo tiol (-SH) está sustituido con el grupo heterocíclico aromático. El grupo heterocíclico aromático incluye, por ejemplo, un anillo de cinco miembros o un anillo de seis miembros, e incluye preferiblemente uno que contiene, como el heteroátomo, por ejemplo, de 1 a 3 átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno, átomos de azufre o similares, y específicamente, por ejemplo, grupo furilo, grupo pirrolilo, grupo indolilo, grupo purinilo, grupo quinolilo, grupo piridilo, grupo pirazilo, grupo pirimidilo, grupo oxazolilo, grupo imidazolilo, grupo tiazolilo, grupo piranilo o similares.
25 El grupo carbamoílo sustituido representado por R7 a R10, incluye, por ejemplo, uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo (-CONH2) carbamoílo está sustituido con un grupo alquilo C1 a C6 o un grupo arilo C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo N-alquilcarbamoílo tal como grupo N-metilcarbamoílo, grupo N-etilcarbamoílo, grupo N-n-propilcarbamoílo, grupo N-isopropilcarbamoílo, grupo N-n-butilcarbamoílo, grupo N-terc-butilcarbamoílo, grupo N-n-hexilcarbamoílo, grupo N-ciclohexilcarbamoílo, grupo N-metiletilcarbamoílo, grupo Ndiciclohexilcarbamoílo; por ejemplo, grupo N-arilcarbamoílo tal como grupo N-fenilcarbamoílo, grupo Ndifenilcarbamoílo; o similares.
El grupo sulfamoílo sustituido representado por R7 a R10, incluye, por ejemplo, uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo (-SO2NH2) sulfamoílo está sustituido con un grupo alquilo C1 a C6 o un grupo arilo C6 a C10, y
35 específicamente, por ejemplo, grupo N-alquilsulfamoílo tal como grupo N-metilsulfamoílo, grupo N-etilsulfamoílo, grupo N-n-propilsulfamoílo, grupo N-isopropilsulfamoílo, grupo N-n-butilsulfamoílo, grupo N-terc-butilsulfamoílo, grupo N-n-hexil-sulfamoílo, grupo N-ciclohexilsulfamoílo, grupo N-metiletilsulfamoílo, grupo N-dicilohexilsulfamoílo; grupo N-arilsulfamoílo tal como grupo N-fenilsulfamoílo; o similares.
El grupo ureido sustituido representado por R7 a R10, incluye uno en el que 1 a 3 átomos de hidrógeno del grupo ureido (-NHCONH2) están sustituidos y, por ejemplo, incluye grupos representados por las siguientes fórmulas generales [4] a [7]:
45 (en las que R14 a R16 representan cada uno independientemente átomo de halógeno, grupo alquilo, grupo sulfoamida, grupo carboamida, grupo sulfo, grupo carboxilo, grupo fosfo, grupo hidroxilo o grupo amino).
En la fórmula general [4] a [7], el grupo halógeno representado por R14 a R16, incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
El grupo alquilo representado por R14 a R16, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo 55 n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo tercheptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo nnonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo
ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo sulfoamida (-NHSO2R) representado por R14 a R16, incluye uno en el que un átomo de hidrógeno del grupo amino está sustituido con un grupo alquilsulfonilo (grupo alquilsulfoamida), o con un grupo arilsulfonilo (grupo arilsulfoamida).
El grupo alquilsulfoamida, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilsulfoamida, grupo etilsulfoamida, grupo n-propilsulfoamida, grupo isopropilsulfoamida, grupo n-butilsulfoamida, grupo isobutilsulfoamida, grupo sec-butilsulfoamida, grupo terc-butilsulfoamida, grupo n-pentilsulfoamida, grupo isopentilsulfoamida, grupo sec-pentilsulfoamida, grupo terc-pentilsulfoamida, grupo neopentilsulfoamida, grupo nhexilsulfoamida, grupo isohexilsulfoamida, grupo sec-hexilsulfoamida, grupo terc-hexilsulfoamida, grupo neohexilsulfoamida, grupo ciclopropilsulfoamida, grupo ciclobutilsulfoamida, grupo ciclopentilsulfoamida, grupo ciclohexilsulfoamida, grupo n-heptilsulfoamida, grupo isoheptilsulfoamida, grupo sec-heptilsulfoamida, grupo tercheptilsulfoamida, grupo neoheptilsulfoamida, grupo n-octilsulfoamida, grupo isooctilsulfoamida, grupo secoctilsulfoamida, grupo terc-octilsulfoamida, grupo neooctilsulfoamida, grupo n-nonilsulfoamida, grupo isononilsulfoamida, grupo sec-nonilsulfoamida, grupo terc-nonilsulfoamida, grupo isononilsulfoamida, grupo ndecilsulfoamida, grupo isodecilsulfoamida, grupo sec-decilsulfoamida, grupo terc-decilsulfoamida, grupo neodecilsulfoamida, grupo cicloheptilsulfoamida, grupo ciclooctilsulfoamida, grupo ciclononilsulfoamida, grupo ciclodecilsulfoamida o similares.
El grupo arilsulfoamida incluye uno que tiene C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilsulfoamida, o grupo naftilsulfoamida o similares.
El grupo carboamida (-NHCOR) representado por R14 a R16 incluye uno en el que un átomo de hidrógeno del grupo amino está sustituido con un grupo acilo. El grupo acilo incluye, por ejemplo, uno derivado de un ácido carboxílico alifático, uno derivado de un ácido carboxílico aromático o similares.
El grupo carboamida derivado de un ácido carboxílico alifático, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y puede aún contener más de un doble enlace en la cadena, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C20, preferiblemente C2 a C15, más preferiblemente C2 a C10, aún más preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo acetilamida, grupo propionilamida, grupo butirilamida, grupo isobutirilamida, grupo valerilamida, grupo isovalerilamida, grupo pivaloilamida, grupo hexanoilamida, grupo heptanoilamida, grupo octanoilamida, grupo decanoilamida, grupo lauroilamida, grupo miristoilamida, grupo palmitoilamida, grupo estearoilamida, grupo icosanoilamida, grupo acriloilamida, grupo metacriloilamida, grupo crotonoilamida, grupo oleoilamida o similares.
El grupo carboamida derivado de un ácido carboxílico aromático, incluye uno que tiene habitualmente C7 a C15, preferiblemente C7 a C11, y específicamente, por ejemplo, grupo benzoilamida, grupo naftoilamida, grupo antoilamida
o similares.
El grupo amino sustituido representado por R7 a R10 incluye uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo amino están sustituidos con sustituyentes, estos sustituyentes incluyen, por ejemplo, grupo alquilo, grupo alcoxicarbonilo, grupo acilo, grupo sulfo y similares.
El grupo alquilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo nhexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo ndecilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo alcoxicarbonilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metoxicarbonilo, grupo etoxicarbonilo, grupo n-propoxicarbonilo, grupo isopropoxicarbonilo, grupo n-butoxicarbonilo, grupo isobutoxicarbonilo, grupo sec-butoxicarbonilo, grupo tercbutoxicarbonilo, grupo n-pentiloxicarbonilo, grupo isopentiloxicarbonilo, grupo sec-pentiloxicarbonilo, grupo tercpentiloxicarbonilo, grupo neopentiloxicarbonilo, grupo n-hexiloxicarbonilo, grupo isohexiloxicarbonilo, grupo sechexiloxicarbonilo, grupo terc-hexiloxicarbonilo, grupo neohexiloxicarbonilo, grupo n-heptiloxicarbonilo, grupo isoheptiloxicarbonilo, grupo sec-heptiloxicarbonilo, grupo terc-heptiloxicarbonilo, grupo neoheptiloxicarbonilo, grupo n-octiloxicarbonilo, grupo isooctiloxicarbonilo, grupo sec-octiloxicarbonilo, grupo terc-octiloxicarbonilo, grupo neooctiloxicarbonilo, grupo n-noniloxicarbonilo, grupo isononiloxicarbonilo, grupo sec-noniloxicarbonilo, grupo tercnoniloxicarbonilo, grupo neononiloxicarbonilo, grupo n-deciloxicarbonilo, grupo isodeciloxicarbonilo, grupo secdeciloxicarbonilo, grupo terc-deciloxicarbonilo, grupo neodeciloxicarbonilo, grupo ciclopropoxicarbonilo, grupo ciclobutoxicarbonilo, grupo ciclopentiloxicarbonilo, grupo ciclohexiloxicarbonilo, grupo cicloheptiloxicarbonilo, grupo ciclooctiloxicarbonilo, grupo ciclononiloxicarbonilo, grupo ciclodeciloxicarbonilo o similares.
El grupo acilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido, incluye uno derivado de un ácido carboxílico alifático, uno derivado de un ácido carboxílico aromático o similares.
El grupo acilo derivado del ácido carboxílico alifático, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y aún puede contener más un doble enlace en la cadena, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C20, preferiblemente C2 a C15, más preferiblemente C2 a C10, aún más preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo acetilo, grupo propionilo, grupo butirilo, grupo isobutirilo, grupo valerilo, grupo isovalerilo, grupo pivaloílo, grupo hexanoílo, grupo heptanoílo, grupo octanoílo, grupo decanoílo, grupo lauroílo, grupo miristoílo, grupo palmitoílo, grupo estearoílo, grupo icosanoílo, grupo acriloílo, grupo metacriloílo, grupo crotonoílo, grupo oleoílo o similares.
El grupo acilo derivado del ácido carboxílico aromático, incluye uno que tiene habitualmente C7 a C15, preferiblemente C7 a C11, y específicamente, por ejemplo, grupo benzoílo, grupo naftoílo, grupo antoílo o similares.
En la fórmula general [1], el sustituyente del grupo alquilo sustituido, grupo alquenilo sustituido, grupo alquinilo sustituido, grupo arilo sustituido, grupo alcoxilo sustituido, grupo ariloxilo sustituido, grupo alquiltio sustituido, grupo ariltio sustituido, grupo alquilsulfonilo sustituido o grupo arilsulfonilo sustituido, representado por R7 a R10, incluye, por ejemplo, átomo de halógeno, grupo sulfonamida, grupo carboamida, grupo sulfo, grupo carboxilo, grupo fosfo (grupo fosfato), grupo hidroxilo, grupo amino o similares. Un ejemplo específico del átomo de halógeno, grupo sulfonamida y grupo carboamida, incluidos como el sustituyente, incluye uno similar como ejemplo del átomo de halógeno, grupo sulfonamida y grupo carboamida, representado por R14 a R16 en las fórmulas generales [4] a [7].
Un ejemplo preferible de R7 a R10 incluye uno en el que tres de R7 a R10 son átomos de hidrógeno, y uno del resto es un grupo derivado de un ácido sulfónico representado por la fórmula general [3], y en el grupo derivado de un ácido sulfónico es preferible, por ejemplo, grupo sulfo, anión del mismo (sulfonato), sal de metal alcalino o sal de amonio orgánico del mismo o similares, y entre éstos es más preferible, por ejemplo, grupo sulfo, sulfonato, sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio o similares) o similares, y en particular, es preferible uno en el que R8 es el grupo representado por la fórmula general [3].
En la fórmula general [1], el grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido representado por R11 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo nheptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo alquenilo del grupo alquenilo sustituido o no sustituido representado por R11, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo isopropenilo, grupo 3-butenilo, grupo 2-butenilo, grupo 1-butenilo, grupo 1,3-butadienilo, grupo 4-pentenilo, grupo 3-pentenilo, grupo 2-pentenilo, grupo 1-pentenilo, grupo 1,3-pentadienilo, grupo 2,4-pentadienilo, grupo 1,1-dimetil-2-propenilo, grupo 1-etil-2propenilo, grupo 1,2-dimetil-1-propenilo, grupo 1-metil-1-butenilo, grupo 5-hexenilo, grupo 4-hexenilo, grupo 3hexenilo, grupo 2-hexenilo, grupo 1-hexenilo, grupo 1-ciclopropenilo, grupo 2-ciclopentenilo, grupo 2,4ciclopentadienilo, grupo 1-ciclohexenilo, grupo 2-ciclohexenilo, grupo 3-ciclohexenilo o similares.
El grupo alquinilo del grupo alquinilo sustituido o no sustituido representado por R11, incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo etinilo, grupo 2-propinilo, grupo 3-butinilo, grupo 1-metil-2-propinilo, grupo 4-pentinilo, grupo 2-metil-4-pentinilo, grupo 5-hexinilo o similares.
El grupo arilo del grupo arilo sustituido o no sustituido representado por R11, incluye habitualmente uno que tiene C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
El sustituyente del grupo alquilo sustituido, grupo alquenilo sustituido, grupo alquinilo sustituido o grupo arilo sustituido, representado por R11, incluye, por ejemplo, átomo de halógeno, grupo sulfoamida, grupo carboamida, grupo sulfo, grupo carboxilo, grupo fosfo, grupo hidroxilo o grupo amino o similares, y un ejemplo específico de estos átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, incluye uno similar como ejemplo del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, representado por R14 a R16 en las fórmulas generales [4] a [7].
En R11, son preferibles grupos alquilo no sustituidos, y entre éstos, son más preferibles grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo n-pentilo, grupo n-hexilo y similares.
5 En la fórmula general [1], n es un número entero de habitualmente desde 0 hasta 3, y preferiblemente 1 ó 2.
Entre el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, que contienen al menos uno en R1 a R11 en la fórmula general [1], es preferible el grupo representado por la fórmula general [2], o el grupo representado por la fórmula general [3].
10 Se introduce preferiblemente mucho más el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo un grupo sulfo o similares) contenido en un compuesto de la presente invención, para mejorar la solubilidad en agua, inhibir la extinción de fluorescencia provocada por la agregación entre las moléculas del colorante, y mejorar la intensidad de fluorescencia, y están contenidos en el compuesto de la presente invención habitualmente de 1 a 4, preferiblemente
15 de 2 a 4 grupos.
El grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo a grupo carboxilo o similares) contenido en un compuesto de la presente invención, está contenido preferiblemente de manera habitual de 1 a 3, preferible de 1 a 2 en el compuesto de la presente invención, de modo que se introduce fácilmente un grupo que puede unirse a una
20 sustancia que va a marcarse (por ejemplo, un grupo de activación de reacción tal como un grupo succinimida, un grupo norborneno).
El grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, contenido, al menos en R1 a R11 (denominado a continuación en el
25 presente documento como “un grupo reactivo de la presente invención”) puede ser uno cualquiera en el que el propio grupo reactivo de la presente invención está presente como R1 a R11 (es decir, uno en el que el grupo reactivo está unido directamente a un esqueleto de pirazol o un esqueleto de indol), o un contenido en R1 a R11 como sustituyente, sin embargo, en el caso en el que el grupo reactivo esté contenido en R11, es preferible que esté contenido como sustituyente.
30 El compuesto representado por la fórmula general [1] incluye, por ejemplo, el compuesto representado por la fórmula general [1-1]:
(en la que R1 a R11 son los mismos que anteriormente), (corresponde a uno en el que n=1 en la fórmula general [1]); el compuesto representado por la fórmula general [1-2]:
(en la que R1 a R11 son los mismos que anteriormente), (corresponde a uno en el que n=2 en la fórmula general [1]); el compuesto representado por la fórmula general [1-3]:
(en la que R1 a R11 son los mismos que anteriormente), (corresponde a uno en el que n=0 en la fórmula general [1]);
y el compuesto representado por la fórmula general [1-4]:
5 (en la que R1 a R11 son los mismos que anteriormente), (corresponde a uno en el que n=3 en la fórmula general [1]), y entre éstos, es preferible un representado por la fórmula general [1-1] o [1-2].
Además, en el compuesto [1] de la presente invención es preferible, por ejemplo, un representado por la siguiente fórmula general [1’]: 10
(en la que R1a a R6a representan cada uno independientemente el grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3]; R8a representa el grupo representado por la fórmula general
15 [3]; R11a representa un grupo alquilo; y n es el mismo que anteriormente).
En la fórmula general [1’], el grupo alquilo del grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3] representado por R1a a R6a, incluye uno similar como ejemplo del grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1 a R6 en la
20 fórmula general [1].
R3a
y R4a cada uno independientemente incluye un grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y entre éstos, es preferible que uno de estos sea un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y el otro sea un grupo alquilo.
R5a
y R6a cada uno independientemente incluye un grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y entre éstos, es preferible que uno de estos sea un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y el otro sea un grupo alquilo.
30 El grupo alquilo representado por R11a incluye uno similar como ejemplo del grupo alquilo representado por R11 en la general formula anterior [1].
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-1], incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 1 o similares. 35 [Tabla 1]
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-2], incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 2 o similares.
[Tabla 2]
- 5
- Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-3], incluye por ejemplo, uno
- mostrado en la siguiente tabla 3 o similares.
- [Tabla 3]
- 10
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-4], incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 4 o similares.
[Tabla 4]
20 Además, en el caso en el que, un grupo reactivo de la presente invención, contenido en un compuesto de la presente invención, se somete a unión, por ejemplo, a una sustancia que va a marcarse o similares, puede introducirse adicionalmente al grupo reactivo, un grupo de este tipo (puede abreviarse más adelante en el presente documento como “un grupo de activación de reacción de la presente invención”) que mejora (en otras palabras activa) la capacidad de unión a un grupo funcional que va estar contenido en la sustancia que va a marcarse (por
25 ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares) (puede abreviarse más adelante en el presente documento como “un grupo funcional de la sustancia que va a marcarse”).
Debe observarse que un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención, es decir, uno en el que un grupo, que mejora la capacidad de unión a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, se
30 introduce a un grupo reactivo de la presente invención, también está incluido en “el grupo reactivo de la presente invención”.
Como grupo de activación de reacción de este tipo, no está limitado especialmente siempre que éste pueda unirse a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y, están incluidos todos los usados habitualmente en este campo.
Como el grupo de activación de reacción de la presente invención, no está limitado especialmente siempre que éste pueda unirse a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y se incluyen todos los usados habitualmente en este campo, tal como uno que activa la reactividad con un grupo amino (denominado más adelante en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo amino”), uno que activa la reactividad con un grupo tiol (denominado más adelante en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo tio”), uno que activa la reactividad con un grupo hidroxilo (denominado más adelante en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo”), uno que activa la reactividad con un grupo formilo (denominado más adelante como “un grupo de activación de reacción para un grupo formilo”) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo amino, incluye, por ejemplo, grupo succinimida, grupo sulfosuccinimida, grupo norborneno, grupo 4-nitrofenoxilo, un grupo derivado de anhídrido carboxílico (por ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares), grupo halosulfonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorosulfonilmetilo, grupo fluorosulfoniletilo, grupo fluorosulfonilpropilo, grupo clorosulfonilmetilo, grupo clorosulfoniletilo, grupo clorosulfonilpropilo, grupo bromosulfonilmetilo, grupo bromosulfoniletilo, grupo bromosulfonilpropilo, grupo yodosulfonilmetilo, grupo yodosulfoniletilo, grupo yodosulfonilpropilo o similares), grupo halosulfonilarilo (por ejemplo, grupo fluorosulfonilfenilo, grupo clorosulfonilfenilo, grupo bromosulfonilfenilo, grupo yodosulfonilfenilo o similares), grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares), grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares), grupo fosfoamidita, grupo isotiocianato, grupo isocianato, monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo triazino sustituido, grupo triazino sustituido con dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo pirimidina sustituido con monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo pirimidina sustituido con dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo piridina sustituido con monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo piridina sustituido con dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), haluro de fosforilo (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo tiol, incluye, por ejemplo, un grupo derivado de un anhídrido carboxílico (por ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares), grupo maleimida, grupo sulfomaleimida, grupo sulfonilhaluro (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo acetamida con a-halógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares), grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares), grupo isotiocianato, grupo isocianato, grupo 2-piridiltio o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo, incluye, por ejemplo, un grupo derivado de un anhídrido carboxílico (por ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares), grupo halosulfonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorosulfonilmetilo, grupo fluorosulfoniletilo, grupo fluorosulfonilpropilo, grupo clorosulfonilmetilo, grupo clorosulfoniletilo, grupo clorosulfonilpropilo, grupo bromosulfonilmetilo, grupo bromosulfoniletilo, grupo bromosulfonilpropilo, grupo yodosulfonilmetilo, grupo yodosulfoniletilo, grupo yodosulfonilpropilo o similares), grupo halosulfonilarilo (por ejemplo, grupo fluorosulfonilfenilo, grupo clorosulfonilfenilo, grupo bromosulfonilfenilo, grupo yodosulfonilfenilo o similares), grupo fosfoamidita, grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares), grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares), grupo isotiocianato, grupo isocianato, grupo haluro de fosforilo (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo formilo, incluye, por ejemplo, grupo hidrazida o similares.
Además, también es posible marcar una sustancia que va a marcarse, tras introducir el grupo de activación de reacción anterior en un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, sometiéndolo a una reacción con el grupo reactivo de la presente invención, y un grupo de activación de reacción de un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse en este caso, incluye también uno similar al grupo de activación de reacción anterior de la presente invención.
En el grupo de activación de reacción de la presente invención es preferible, por ejemplo, un grupo succinimida (Su), 5 un grupo maleimida (Ma) o similares.
Un ejemplo específico preferible de un grupo en el que se introduce el grupo de activación de reacción para el grupo reactivo de la presente invención, incluye, por ejemplo, grupo -COOSu, grupo -CONH(CH2)4Ma o similares. Un compuesto de este tipo que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención también se incluye
10 en el compuesto de la presente invención representado por la fórmula general [1].
Un ejemplo específico de un compuesto de la presente invención que contiene un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención incluye todos los compuestos en los que el grupo de activación de reacción anterior de la presente invención se introduce adicionalmente al grupo reactivo de la presente invención en el
15 compuesto de la presente invención, por ejemplo, uno en el que el grupo de activación de reacción anterior está contenido en R1, R2 y R6 en las fórmulas generales [1-1] a [1-4].
A continuación se muestra un ejemplo del compuesto de la presente invención introducido con un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención.
20 Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-1], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención incluye, por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 5.
[Tabla 5] 25
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-2], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 6.
[Tabla 6]
35 Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-3], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 7 o similares.
[Tabla 7]
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [1-4], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 8 o similares.
45 [Tabla 8]
Un compuesto en el que se introduce el grupo de activación de reacción de la presente invención al grupo reactivo 50 de la presente invención de esta manera se incluye también en el compuesto de la presente invención.
1-2. Un método de síntesis para el compuesto [1] de la presente invención
1-2-1. Síntesis de un complejo de compuesto de indolenina-compuesto de pirazol (corresponde al compuesto
representado por la fórmula general [1])
El compuesto representado por la fórmula general [1] puede sintetizarse, por ejemplo, mediante el siguiente método.
10 (en el que R17 representa grupo alquilo o grupo arilo; y R1 a R11 y n son los mismos que anteriormente).
En las fórmulas generales [10] y [11], el grupo alquilo representado por R17 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo 15 isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo nheptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo
20 ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo arilo representado por R17, incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo o grupo naftilo y similares.
25 Es decir, en primer lugar, se disuelven el compuesto de indolenina representado por la fórmula general [8] (una parte de esqueleto de indolenina), el compuesto representado por la fórmula general [9] [desde 1 hasta 2 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [8] y el anhídrido ácido representado por la fórmula general [10] [desde 1 hasta 20 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [8]]
30 (por ejemplo, anhídrido acético, anhídrido propiónico, anhídrido butírico, anhídrido benzoico o similares), si es necesario, en un disolvente (ácidos carboxílicos tales como ácido acético, ácido propiónico y ácido butírico; nitrilos tales como acetonitrilo, propionitrilo y n-butironitrilo; o similares), y se someten a una reacción a de 0 a 150ºC (preferiblemente a de 40 a 120ºC) durante de 0,1 a 24 horas (preferiblemente durante de 0,5 a 12 horas, y más preferiblemente durante de 1 a 8 horas) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [11].
35 Entonces, se someten el compuesto representado por la fórmula general [11] y el compuesto representado por la fórmula general [12] (una parte de esqueleto de pirazol) [desde 0,5 hasta 10 veces en moles, preferiblemente desde 1 hasta 5 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [11]] a una reacción a de 0 a 150ºC (preferiblemente a de 40 a 120ºC) durante de 0,1 a 24 horas (preferiblemente durante de 0,5 a 12 horas, y
40 más preferiblemente durante de 1 a 8 horas), en presencia de un catalizador básico (aminas orgánicas tales como piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno y tri-n-butilamina; hidruros metálicos tales como hidruro de sodio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio; o similares), usando agente de condensación de deshidratación (agentes de deshidratación inorgánicos tales como ácido sulfúrico concentrado, pentóxido de difósforo y cloruro de
45 zinc anhidro; carbodiimidas tales como diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida y clorhidrato de 1-etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida; anhídrido acético, ácido polifosfórico, carbonildiimidazol, cloruro de ptoluenosulfonilo; o similares), y, si es necesario, en un disolvente (amidas tales como N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida (DMA), acetamida y N-metilpirrolidona; nitrilos tales como acetonitrilo, propionitrilo y nbutironitrilo; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, etilenglicol y 1,4-butanodiol; éteres
50 tales como tetrahidrofurano, dioxano, anisol y etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido y similares) para obtener el compuesto objeto representado por la fórmula general [1].
1-2-2. Síntesis de un compuesto de la presente invención que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención (un grupo que activa el grupo reactivo de la presente invención)
55 Se proporcionará la explicación sobre un método para introducir el grupo de activación de reacción de la presente invención en el grupo reactivo de la presente invención, con referencia a un ejemplo del caso que usa el compuesto representado por la fórmula general [22] (es decir, corresponde a un compuesto en el que R1 en la fórmula general
[1] es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2]).
(en la que T12 representa un grupo alquileno; A representa tetrafluoroborato o hexafluorofosfato; q representa un número entero de desde 2 hasta 10; y de R3 a R11, R12, A y n son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que el compuesto representado por la fórmula general [22] corresponde a un compuesto, entre los compuestos representados por la fórmula general [1], en la que R1 es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2], (es decir, corresponde a un grupo -T12-COOR12).
En las fórmulas generales [22] a [24], como el grupo alquileno representado por T12 puede ser uno cualquiera de cadena lineal o ramificado, preferiblemente uno de cadena lineal, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C4, y específicamente, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo tetrametileno y grupo hexametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo etiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo 1,2dietiletileno, grupo 1,2-di-n-propiletileno, 1,2-di-n-butiletileno; o similares: entre éstos, es preferible un grupo alquileno de cadena lineal, y en particular, es más preferible grupo etileno o grupo pentametileno o similares.
Es decir, se somete el compuesto representado por la fórmula general [22] (un compuesto que tiene el grupo reactivo de la presente invención) a una reacción a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un reactivo de succinimidación tal como el compuesto representado por la fórmula general [62] (desde 1 hasta 10 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [22]), y un catalizador básico (aminas orgánicas tales como N-etildiisopropilamina, piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno y tri-n-butilamina) en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [23] (un compuesto que tiene un grupo succinimida como el grupo de activación de reacción de la presente invención).
El compuesto representado por la fórmula general [23] se somete a una reacción con un reactivo de maleimidación tal como el compuesto representado por la fórmula general [68] (desde 1 hasta 10 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [23]), a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un catalizador básico (aminas orgánicas tales como trietilamina, N-etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno y tri-nbutilamina), en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [24] (un compuesto que tiene un grupo maleimida como el grupo de activación de reacción de la presente invención).
El reactivo de succinimidación relevante en la presente invención, sin limitarse al compuesto representado por la fórmula general [62], incluye todos los usados en este campo, sin embargo, específicamente, por ejemplo, carbonato de di(N-succinimidilo) (DSC), tetrafluoroborato de 2-succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU), tetrafluoroborato de 2-(5-norborneno-2,3-dicarboxiimida)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TNTU) o similares.
Un método para introducir el grupo que activa la reacción de la presente invención distinto del grupo que activa la reacción tal como anteriormente, puede usar los materiales partida correspondientes, y someterlos a síntesis según sea apropiado según el método anterior para obtener un compuesto objetivo.
1-2-3. Síntesis de un compuesto de indolenina
A continuación se proporcionará explicación sobre un método de síntesis para el compuesto representado por la fórmula general [8] (una parte de esqueleto de indolenina).
(en la que X representa un átomo de halógeno; y R1, R3, R4 y R7 a R10 son los mismos que anteriormente).
10 En la fórmula general [16], el átomo de halógeno representado por X, incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
Es decir, se someten el compuesto de cetona representado por la fórmula general [13] y el compuesto representado
15 por la fórmula general [14] a una reacción a de 40 a 250ºC durante de 0,1 a 24 horas, en un disolvente adecuado (ácidos carboxílicos tales como ácido acético y ácido propiónico; alcoholes tales como etilenglicol y 1,4-butanodiol; o similares) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [21] (véase por ejemplo, Journal of Organic Chemistry, 42 (14), 2474-80, 1977 o similares).
20 Entonces, se disuelven el compuesto representado por la fórmula general [15] y el haluro representado por la fórmula general [16] o el compuesto de tosilato representado por la fórmula general [17] en un disolvente adecuado (hidrocarburos aromáticos halogenados tales como clorobenceno y 1,2-diclorobenceno; hidrocarburos halogenados tales como 1,2-dicloroetano; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno, xileno y benceno; amidas tales como DMA, DMF, acetamida y N-metilpirrolidona; o similares), y se someten a una reacción a de 40 a 200ºC durante de 1
25 a 24 horas para obtener el compuesto representado por la fórmula general [8] (véase por ejemplo, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 947-952, 1984 o similares).
El compuesto de cetona representado por la fórmula general [13], puede usar un producto comercial (por ejemplo, 3metil-2-butanona, 3-metil-2-pentanona, 3-metil-2-hexanona, 1-ciclopropiletanona, 1-ciclobutiletanona o similares), o 30 uno sintetizado según sea apropiado mediante un método habitual. Específicamente, se incluye, por ejemplo, un método en el que se someten 2-metilacetoacetato de etilo y un compuesto que tiene un grupo saliente (por ejemplo, átomo de halógeno, grupo tosilato o similares) a una reacción a de -80 a 100ºC durante de 0,1 a 24 horas, en presencia de un catalizador básico (hidruros metálicos tales como hidruro de sodio e hidruro de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio y carbonato de potasio; alcóxidos de metales 35 alcalinos tales como metóxido de sodio, etóxido de sodio y terc-butóxido de potasio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio; amidas de metal alcalino tales como diisopropilamida de litio; o similares), en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y etilenglicol; éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano y etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido; o similares), y luego se somete la disolución
40 resultante a descarbonatación usando un catalizador ácido (referido a, por ejemplo, Modern Synthetic Reactions, California, 2a ed., p. 492, 510 y 756 (1972) o similares); o similares.
El compuesto representado por la fórmula general [14] puede usar un producto comercial, o uno sintetizado según sea apropiado mediante un método habitual. 45 1-2-4. Síntesis de un compuesto de pirazol
A continuación se proporcionará explicación sobre un método de síntesis para el compuesto representado por la fórmula general [12] (una parte de esqueleto de pirazol). 50
(en la que R2, R5 a R6, R11 y X son los mismos que anteriormente).
Es decir, se someten el compuesto de dicetona representado por la fórmula general [18] e hidrazina a una reacción de deshidratación a de 60ºC a 100ºC durante de 1 a 4 horas en un disolvente adecuado (alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y etilenglicol; o similares), para obtener un compuesto de 4H-pirazol representado por la fórmula general [26] (véase por ejemplo, Adv. Heterocycle Chem., Vol. 34, 53-78, 1983 o similares).
Entonces, se somete el compuesto de 4H-pirazol representado por la fórmula general [19] a una reacción de Nalquilación con un compuesto de haluro representado por la fórmula general [20] o un compuesto de tosilato representado por la fórmula general [21], a de 80ºC a 140ºC durante de 1 a 12 horas en un disolvente adecuado (hidrocarburos aromáticos halogenados tales como clorobenceno y 1,2-diclorobenceno; hidrocarburos halogenados tales como 1,2-dicloroetano; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno, xileno y benceno; amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona; o similares), para obtener un compuesto representado por la fórmula general [12] (véase por ejemplo, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 947-952, 1984 o similares).
El compuesto de dicetona representado por la fórmula general [18] puede usar un producto comercial (por ejemplo, 3,3-dimetil-2,4-pentanodiona o similares), o uno sintetizado según sea apropiado por un método habitual: Específicamente, incluye, por ejemplo, un método en el que se someten 3-metil-2,4-pentanodiona o éster etílico del ácido 4-acetil-5-oxohexanoico, y un compuesto que tiene un grupo saliente (por ejemplo, átomo de halógeno, grupo tosilato o similares) a una reacción a de -80 a 100ºC durante de 0,1 a 24 horas, en presencia de un catalizador básico (hidruros metálicos tales como hidruro de sodio e hidruro de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio y carbonato de potasio; alcóxidos de metales alcalinos tales como metóxido de sodio, etóxido de sodio y terc-butóxido de potasio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio; amidas de metales alcalinos tales como diisopropilamida de litio; o similares), en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y etilenglicol; éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano y etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido; o similares) (por ejemplo, Modern Synthetic Reactions, California, 2ª ed., páginas 492, 510 y 756 (1972) o similares); o similares.
1-3. Propiedad del compuesto [1] de la presente invención
El compuesto [1] de la presente invención obtenido de esta manera se espera que se use como sustancia de marcaje fluorescente de, por ejemplo, un método de extracción de ácido nucleico, un método de inmunoensayo o similares.
2. Un compuesto marcado y a método de marcaje de la presente invención
2-1. Un compuesto marcado de la presente invención (un compuesto marcado con el compuesto [1] de la presente invención)
Un compuesto marcado de la presente invención, incluye, uno en el que el compuesto de la presente invención (sustancia de marcaje) y la sustancia que va a marcarse están unidos directa o indirectamente, y específicamente incluye uno en el que el grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol, o grupo formilo, se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.
El grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo (puede abreviarse más adelante en el presente documento como “un grupo reactivo de la presente invención”), en el compuesto de la presente invención que va a unirse a una sustancia que va a marcarse son preferiblemente los contenidos en habitualmente R1 a R11, preferiblemente en R1 a R6, más preferiblemente en R1 o R6 en la fórmula general [1].
Una sustancia que va a marcarse, que está marcada con un compuesto de la presente invención, incluye, por ejemplo, todos los usados habitualmente como sustancia que va a marcarse en este campo, y específicamente, por ejemplo, biotina, avidina, estreptavidina, anticuerpo o productos de degradación del mismo (por ejemplo, Fab, Fab’, F(ab’)2 y similares), aminoácido, proteína, péptido, sustrato enzimático, hormona, linfocina, metabolito, receptor, ligando, agonista, antagonista, antígeno, hapteno, dendrímero, lectina, toxina, hidrato de carbono, sacáridos tales como fructosa y polisacáridos; nucleósido (por ejemplo, ribonucleósido, desoxirribonucleósido o similares), nucleótido (por ejemplo, ribonucleótido, desoxirribonucleótido o similares), ácido nucleico (oligonucleótido, polinucleótido) [por ejemplo, ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN) o similares], derivados de ácido nucleico (por ejemplo, fragmento de ADN, fragmento de ARN o similares), fármacos naturales, virus, componentes de virus, componentes de levaduras, hematocito, componentes de hematocitos, células biológicas, componentes de hematocitos no celulares, bacterias, componentes bacterianos, quistes de lípidos naturales o sintéticos, fármacos naturales o sintéticos, venenos, agentes contaminantes medioambientales, polímeros, partículas de polímero, partículas de vidrio, materiales de superficie de vidrio, partículas de plástico, materiales de superficie de plástico, películas de polímero, conductores y semiconductores o similares, y entre éstos es preferible, por ejemplo, nucleótido, anticuerpo o productos de degradación del mismo o similares.
El nucleósido está compuesto por una base de purina o una base de pirimidina, y pentosa como resto de sacárido, y específicamente incluye, ribonucleósido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-ribosa; desoxirribonucleósido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2-desoxirribosa o similares.
El nucleótido está compuesto por una base de purina o una base de pirimidina, y pentosa como resto de sacárido, y ácido fosfórico, y específicamente incluye, ribonucleótido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-ribosa; desoxirribonucleótido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2-desoxirribosa o similares.
Además, el nucleósido y el nucleótido incluyen también, por ejemplo, como antibióticos nucleósidos, uno en el que un resto de sal como una parte fundamental del mismo no es una estructura de purina o una estructura de pirimidina, uno en el que estas estructuras están modificadas, uno en el que el resto de sacárido no es D-ribosa o Ddesoxirribosa, uno en el que estos están modificados, uno en el que un resto de ácido fosfórico (-OPO3-) está sustituido con otro elemento [por ejemplo, un átomo de azufre (-OPO2S-) o similares), uno en el que el resto de ácido fosfórico está modificado; o similares.
El ácido nucleico tiene el nucleótido como unidad fundamental, y es un oligo o polinucleótido similar a una cadena, en el que este ácido fosfórico está unido mediante un enlace diéster entre los carbonos de los sitios 3’ y 5’ del sacárido en cada uno de los nucleótidos, y específicamente incluye, ácido ribonucleico (ARN) en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es ribosa; ácido desoxirribonucleico (ADN) en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2desoxirribosa o similares.
Este nucleótido, ácido nucleico y ácido nucleico derivado pueden ser los compuestos por cadenas de ácido nucleico de cualquiera de uno monocatenario, uno bicatenario y de más de dos cadenas. Además, pueden modificarse según sea apropiado con uno adecuado, siempre que esté dentro del intervalo en el que pueda conseguirse un objeto de la presente invención.
“Un compuesto de la presente invención y una sustancia que va a marcarse están unidos directamente” significa que, por ejemplo, el compuesto de la presente invención (concretamente, un grupo reactivo de la presente invención) se une a un grupo funcional en la sustancia que va a marcarse (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares) mediante, por ejemplo, un enlace iónico, un enlace covalente o similares. Además, “un compuesto de la presente invención y una sustancia que va a marcarse están unidos indirectamente” significa que, por ejemplo, un grupo reactivo de la presente invención se une al grupo funcional en la sustancia que va a marcarse, a través de un conector o similares (por ejemplo, un enlace iónico, un enlace covalente o similares). El conector usado en la unión indirecta incluye todos los usados habitualmente en este campo.
2-2. Un método de marcaje de la presente invención
En cuanto a un método para marcar una sustancia que va a marcarse usando el compuesto [1] de la presente invención, el marcaje puede llevarse a cabo seleccionando, según sea apropiado, un método conocido por sí mismo, y el marcaje puede llevarse a cabo fácilmente, por ejemplo, sometiendo el grupo reactivo de la presente invención (es decir, el grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol, o grupo formilo), contenidos en al menos uno de R1 a R11 en la fórmula general [1]], y un grupo funcional de la sustancia que va a marcarse (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares), (a continuación en el presente documento “un grupo funcional de la sustancia que va a marcarse”), para unirse directamente mediante, por ejemplo, un enlace iónico, un enlace covalente o similares; o unirse por medio de un conector introducido a una parte de la sustancia que va a marcarse.
Además, en cuanto a un método para marcar nucleótido (una sustancia que va a marcarse), el marcaje puede llevarse a cabo fácilmente mediante un método para usar una enzima, distinto de un método para marcar usando la reacción química anterior, y la enzima usada en el presente documento incluye todas las usadas habitualmente en este campo.
El grupo reactivo de la presente invención puede introducirse adicionalmente con un grupo que potencia la reactividad con un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse (a continuación en el presente documento puede abreviarse como “un grupo de activación de reacción”).
Debe observarse que, un grupo de activación de reacción de este tipo también se incluye en un grupo reactivo de la presente invención, y un compuesto que contiene un grupo de activación de reacción de este tipo también se incluye en un compuesto de la presente invención.
Un ejemplo específico de un método para marcar una sustancia que va a marcarse usando un compuesto de la presente invención, incluye, por ejemplo, (1) un método de marcaje introduciendo adicionalmente un grupo de activación de reacción de la presente invención a un grupo reactivo de la presente invención, y luego, unir al mismo un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse (a continuación en el presente documento puede abreviarse como simplemente “un grupo funcional”), (2) un método de marcaje introduciendo un grupo de activación de reacción de la presente invención a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y luego unir al mismo un grupo reactivo de la presente invención, (3) un método de marcaje uniendo un reactivo de conector reactivo multivalente, habitualmente usado en este campo, a un grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y (4) un método de marcaje introduciendo el grupo de activación de reacción igual o diferente a un grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y luego unir al mismo un conector usado habitualmente en este campo o similares.
Como el grupo de activación de reacción de la presente invención, no se limita especialmente siempre que pueda unirse a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y se incluyen todos los usados habitualmente en este campo, por ejemplo, uno que activa la reactividad con un grupo amino (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo amino”), uno que activa la reactividad con un grupo tiol (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo tiol”), uno que activa la reactividad con un grupo hidroxilo (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo”), uno que activa la reactividad con un grupo formilo (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo formilo”) o similares.
Además, también es posible marcar una sustancia que va a marcarse, tras introducir el grupo de activación de reacción anterior a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, sometiéndolo a una reacción con el grupo reactivo de la presente invención, y también un grupo de activación de reacción de un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse en este caso, incluye uno similar al grupo de activación de reacción anterior de la presente invención.
En el grupo de activación de reacción de la presente invención es preferible, por ejemplo, un grupo succinimida (Su), un grupo maleimida (Ma) o similares.
Un ejemplo específico preferible de un grupo en el que se introduce el grupo de activación de reacción para el grupo reactivo de la presente invención, incluye, por ejemplo, grupo -COOSu, grupo -CONH(CH2)4Ma o similares. Un compuesto de este tipo que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención también se incluye en el compuesto de la presente invención representado por la fórmula general [1].
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es el grupo representado por la fórmula general [2] (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo carboxilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se une al mismo, es preferible que se una a grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, o de un conector introducido al mismo (abreviado a continuación simplemente como “una sustancia que va a marcarse”), y un método para el mismo, incluye (i) un método para someter a una reacción usando, por ejemplo, un reactivo de condensación tal como Nhidroxisuccinimida y carbodiimida, (ii) un método para formar un cloruro de carboxilo sometiendo cloruro de tionilo a la acción en un grupo carboxilo de la presente invención, y luego sometiéndolo a una reacción con un grupo amino de una sustancia que va a marcarse, (iii) un método para someter a una reacción mediante la adición de ácido clorhídrico y metanol a un grupo carboxilo de la presente invención, y luego someter a una reacción mediante la adición de hidrazina para formar hidrazida, y someter a activación mediante la adición adicional de nitrito de sodio y ácido clorhídrico al mismo para preparar acilazida, y luego sometiéndolo a una reacción con grupo amino, grupo tiol
o grupo hidroxilo de una sustancia que va a marcarse, (iv) un método para formar un anhídrido a partir de un grupo carboxilo de la presente invención, y luego someterlo a una reacción (condensación por deshidratación) con un grupo amino de una sustancia que va a marcarse; o similares.
Además, en el caso en el que un grupo reactivo de la presente invención es el grupo representado por la fórmula general [3] (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo sulfo de la presente invención”), y éste se una a una sustancia que va a marcarse, es preferible unir a grupo amino, grupo imidazol, grupo tiol o grupo fenol de la sustancia que va a marcarse, y está incluido, como método incluye por tanto, por ejemplo, (i) un método para someter ácido clorosulfónico a una reacción con el grupo sulfo de la presente invención para formar sulfocloruro, y luego someterlo a una reacción con grupo amino, grupo imidazol, grupo tiol o grupo fenol de una sustancia que va a marcarse.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo amino (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo amino de la presente invención”), y éste se une a una sustancia que va a marcarse, es preferible unir a grupo carboxilo, grupo amino, grupo fenol o grupo tiol, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y está incluido, como método por tanto incluye, por ejemplo, (i) un método para someter que el grupo amino de la presente invención se una al grupo amino de una sustancia que va a marcarse o a un conector del mismo, usando un reactivo de condensación tal como Nhidroxisuccinimida y carboxidiimida, (ii) un método para hacer que fosgeno actúe en el grupo amino de la presente invención para convertir a un isocianato, y luego someterlo a unión al grupo amino de la sustancia que va a marcarse o al conector del mismo, (iii) un método para someter glutaraldehído a una reacción al grupo amino de la presente invención, y luego someterlo a una reacción con grupo amino o grupo fenol de la sustancia que va a marcarse o al conector del mismo, (iv) en el caso en el que la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo es uno derivado de sacárido o sacárido-proteína, un método para someterlo a una reacción con ácido peryódico por adelantado, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino de la presente invención, y someterlo adicionalmente a reducción usando borohidruro de sodio o similares y (v) un método para someter el grupo amino de la presente invención a maleimidación o piridilditiosulfuración con un espaciador bivalente que tiene un grupo maleimida (por ejemplo, éster de m-maleimidabenzoil-N-hidroxisuccinmida), o un espaciador bivalente que tiene un grupo piridilditiosulfuro (por ejemplo, 4-succinimidiloxicarbonil-a-(2-piridilditio)tolueno o similares), y entonces someterlo a una reacción con el grupo tiol de la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo hidroxilo (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo hidroxilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a una reacción con la misma, es preferible que se someta a unión con grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método por tanto incluye, por ejemplo, (i) un método para formar un derivado de triazinilo sometiendo un grupo cloruro cianúrico a la acción en el grupo hidroxilo de la presente invención, y sometiéndolo a una reacción con el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, (ii) un método para someter el grupo hidroxilo de la presente invención a acetilación, luego a bromación, intercambio bromo-yodo usando yoduro de sodio, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo de la sustancia que va a marcarse o un conector de la mismo, (iii) un método para someter bromuro de cianógeno a la acción en el grupo hidroxilo de la presente invención para la activación del mismo, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo tiol de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a reacción con la misma, es preferible que se someta a unión al grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método por tanto incluye, por ejemplo, (i) un método para someter el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo a maleimidación o piridilditiosulfuración con un espaciador bivalente que tiene un grupo maleimida (por ejemplo, méster de m-maleimidabenzoil-N-hidroxisuccinmida) o un espaciador bivalente que tiene un grupo piridilditiosulfuro (por ejemplo, 4-succinimidiloxicarbonil-a-(2-piridilditio)-tolueno o similares), y luego someter el grupo tiol de la presente invención a una reacción con el mismo, y (ii) un método para someter el grupo tiol de la presente invención a una reacción con el grupo tiol de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, usando un espaciador bivalente tal como bismaleimidahexano y 1,4-di-[3’-2’-piridilditio(propionamida)]butano.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo formilo (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo formilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a una reacción con el mismo, es preferible que se someta a unión al grupo amino o similares, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y está incluido, como método por tanto incluye, por ejemplo, (i) un método para someter el grupo amino de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo a una reacción directa con el grupo formilo de la presente invención, y luego someterlo a reducción usando borohidruro de sodio o similares.
Un reactivo de conector reactivo polivalente incluye todos los usados habitualmente en este campo, sin embargo, específicamente, por ejemplo, un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse es un grupo amino, y el otro es un grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo tiol”); un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo y el grupo funcional es un grupo amino, y el otro es el grupo representado por la fórmula general [2] (grupo carboxilo o similares) (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo carboxilo”); un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo y el grupo funcional es un grupo tiol, y el otro es un grupo hidroxilo (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo tiol y grupo hidroxilo”); un reactivo bivalente en el caso en el que tanto el grupo reactivo como el grupo funcional son grupos amino (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo amino”); un reactivo bivalente en el caso en el que tanto el grupo reactivo como el grupo funcional son grupos tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo tiol y grupo tiol”); o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo tiol, incluye, por ejemplo, N-(amaleimidaacetoxi)succinimida, N-[y-maleimidabutiriloxi]succinimida, N-(6-maleimidacaproiloxi)succinimida, N-(8maleimidacapriloxi)succinimida, N-(11-maleimidaundecanoiloxi)succinimida, m-maleimidabenzoil-Nhidroxisuccinimida, 4-[p-maleimidafenil]butirato de succinimidilo, 4-[N-maleimidametil]ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo, 6-[1-maleimidapropionamida]hexanoato de succinimidilo, 3-(2-piridilditio)propionato de N-succinimidilo
o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo carboxilo, incluye, por ejemplo, clorhidrato del ácido 3-[(2-aminoetil)ditio]propiónico, clorhidrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo tiol y grupo hidroxilo, incluye, por ejemplo, isocianato de N-[pmaleimidafenilo] o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo amino, incluye, por ejemplo, N-succinimidiladipato de metilo, glutarato de disuccinimidilo, suberato de disuccinimidilo, etilenglicol-bis[succinato de succinimidilo], ditiobis[propionato de succinimidilo], tartrato de disuccinimidilo, bis[2(succinimidasoxicarboniloxi)etil]sulfona, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenceno o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo tiol y grupo tiol, incluye, por ejemplo, bis-maleimidaetano, 1,4bis-maleimidabutano, bis-maleimidahexano, 1,4-bis-maleimidil-2,3-dihidroxibutano, ditio-bis-maleimidaetano, 1,6hexano-bis-vinilsulfona, 1,8-bis-maleimida-dietilenglicol, 1,11-bis-maleimidatrietilenglicol, 1,4-di-[3’-(2’-piridilditio)propionamida]butano o similares.
2-3. Preparación de nucleótido marcado usando un compuesto de la presente invención
Como ejemplo específico de un método para marcar una sustancia que va a marcarse usando el compuesto [1] de la presente invención, se proporcionará explicación con referencia a un ejemplo del caso de marcar el nucleótido (una sustancia que va a marcarse).
Es decir, en el caso de marcar el nucleótido que tiene un grupo amino en una base del mismo (por ejemplo, citidina, adenina, guanina o similares), el grupo reactivo en el compuesto de la presente invención puede unirse directamente, o el grupo activado de un grupo reactivo del compuesto de la presente invención (grupo de activación de reacción) puede unirse directamente, y entre éstos, es preferible que se someta a unión a un grupo éster activado
o un grupo carboxilo, y es particularmente preferible que se someta a unión al grupo éster activado.
Además, en el caso en el que el compuesto de la presente invención se somete a unión indirecta a nucleótido, en primer lugar, en una base o un grupo hidroxilo del nucleótido, se sintetiza un derivado introducido con un conector que tiene un grupo funcional tal como grupo amino, grupo carboxilo y grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un derivado de nucleótido”), y luego, en el caso de someter, por ejemplo, a unión al grupo amino en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo éster activado o grupo carboxilo en el compuesto de la presente invención; en el caso de someter a unión, por ejemplo, al grupo carboxilo en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo amino en el compuesto de la presente invención; y en el caso de someter a unión, por ejemplo, al grupo tiol en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo maleimida (grupo de activación de reacción) en el compuesto de la presente invención. El conector que va a usarse puede ser uno cualquiera usado habitualmente en este campo, y un enlace éster, un enlace éter y/o un enlace amida puede estar contenido en el conector.
Se proporcionará explicación sobre un método de marcaje usando el compuesto [1] de la presente invención, con referencia a un ejemplo de uno, entre los compuestos de la presente invención, en el que un grupo carboxialquilo contenido en R1 (es decir, corresponde al caso en el que R1 es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2]) está unido indirectamente a un residuo de nucleótido, por medio de un conector o similares.
En el caso anterior, como conector, puede usarse todos los que se usan en este campo, y específicamente, se incluye un conector con una estructura representada por la siguiente fórmula general (A):
-E- X- T10- Y- NH-(A)
(en la que E representa -CH=CH- o -C:C-; X e Y representan cada uno independientemente grupo alquileno; y T10 representa -O- o -NH-CO-).
En la fórmula general (A), el grupo alquileno representado por X puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y preferiblemente uno de cadena lineal, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, más preferiblemente C1 a C3, y específicamente, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno, grupo hexametileno, grupo heptametileno, grupo octametileno, grupo nonametileno y grupo decametileno; grupo alquileno ramificado tal
5 como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo 1-metiltrimetileno, grupo 2-metiltrimetileno, grupo 1,1-dimetiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo etiletileno, grupo 1-metiltetrametileno, grupo 1,1-dimetiltrimetileno, grupo 2,2-dimetiltrimetileno, grupo 2-etiltrimetileno, grupo 1-metilpentametileno, grupo 1-metilhexametileno, grupo 1metilheptametileno, grupo 1,4-dietiltetrametileno, grupo 2,4-dimetilheptametileno, grupo 1-metiloctametileno y grupo 1-metilnonametileno; grupo alquileno cíclico tal como grupo ciclopropileno, grupo 1,3-ciclobutileno, grupo 1,3ciclopentileno, grupo 1,4-ciclohexileno, grupo 1,5-cicloheptileno, grupo 1,5-ciclooctileno, grupo 1,5-ciclononileno y grupo 1,6-ciclodecaleno; o similares.
El grupo alquileno representado por Y puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y preferiblemente uno de cadena lineal, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C2 a C8, más
15 preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno, grupo hexametileno, grupo heptametileno, grupo octametileno, grupo nonametileno y grupo decametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo 1-metiltrimetileno, grupo 2-metiltrimetileno, grupo 1,1-dimetiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo etiletileno, grupo 1-metiltetrametileno, grupo 1,1-dimetiltrimetileno, grupo 2,2dimetiltrimetileno, grupo 2-etiltrimetileno, grupo 1-metilpentametileno, grupo 1-metilhexametileno, grupo 1metilheptametileno, grupo 1,4-dietiltetrametileno, grupo 2,4-dimetilheptametileno, grupo 1-metiloctametileno y grupo 1-metilnonametileno; grupo alquileno cíclico tal como grupo ciclopropileno, grupo 1,3-ciclobutileno, grupo 1,3ciclopentileno, grupo 1,4-ciclohexileno, grupo 1,5-cicloheptileno, grupo 1,5-ciclooctileno, grupo 1,5-ciclononileno y grupo 1,6-ciclodecaleno o similares.
25 El nucleótido marcado relevante a la presente invención, incluye un residuo de nucleótido marcado con el compuesto [1] de la presente invención, directa o indirectamente por medio de un conector o similares, y específicamente, por ejemplo, un residuo de nucleótido representado por la siguiente fórmula general [22]:
[en la que Q1 representa un residuo de nucleótido; V1 representa un conector y W1 representa la siguiente fórmula general [1’]]
(en la que Z1 representa un resto de unión para la unión a V1; y R2 a R11, T12 y n son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que el compuesto representado por la fórmula general [1’] corresponde un derivado de compuesto en el caso en el que, entre los compuestos representados por la fórmula general [1], R1 es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] (es decir, corresponde a un grupo -T12-COOR12).
El residuo de nucleótido representado por Q1 en la fórmula general [22], incluye, por ejemplo, residuo de ribonucleótido, residuo de 2’-desoxirribonucleótido, residuo de 3’-desoxirribonucleótido, residuo de 5’
45 desoxirribonucleótido, residuo de 2’,3’-didesoxirribonucleótido o similares.
Específicamente, un residuo de nucleótido de este tipo incluye, por ejemplo, residuo de nucleótido de purina representado por la fórmula general (i), (ii), (v), (vi), (vii), (viii), (xii) y (viii), o residuo de nucleótido de pirimidina representado por la fórmula general (iii), (iv), (x) y (xi).
En la fórmula general anterior, Z3 representa un conector para la unión a V1; R25 y R26 representan cada uno independientemente H, OH u O-; R27 representa -PO2H-, PO3H2-, -P2O6H3, -P3O9H4, o una sal del mismo. Debe observarse que un ejemplo específico de la sal incluye, una sal de metal alcalino tal como sal de sodio, sal de potasio y sal de litio; una sal de metal alcalinotérreo tal como sal de bario; sal de amonio; una sal de amina orgánica tal como sal de trietilamonio y sal de piridina.
El conector representado por V1 en la fórmula general [22] es un conector para unir el residuo de nucleótido representado por Q1 y el derivado de compuesto (marcaje fluorescente) de la presente invención representado por W1 [la fórmula general [1’]].
Es decir, en cuanto a un residuo de nucleótido de pirimidina, entre residuos de nucleótidos representados por el Q1 anterior, un extremo terminal del conector está unido a la posición 5 de un anillo de pirimidina del mismo [en el caso de las fórmulas generales (iii) y (iv)], o a un átomo de fósforo en un residuo fosfato del mismo [en el caso de las fórmulas generales (x) y (xi)]; y en cuanto a un residuo de nucleótido de purina, está unido a la posición 7 de un anillo de 7-deaza(7-deaza) purina del mismo [en el caso de las fórmulas generales (i), (ii), (v) y (vi)], o a un átomo de fósforo del residuo de fosfato de un anillo de purina del mismo (o un anillo 7-deazapurina) [en el caso de las fórmulas generales (vii), (viii), (ix), (xii) y (xiii)].
Aún más, el otro extremo terminal del conector está unido a un grupo carbonilo [un grupo carbonilo que se une a T12 en la fórmula general [1’]] del derivado de compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención, representado por W1 [la fórmula general [1’]].
Como conector de este tipo, puede usarse todo lo que pueden unirse a un grupo carbonilo [un grupo carbonilo que se une a T12 en la fórmula general [1’]] del derivado de compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención representado por W1 [la fórmula general [1’]], y el residuo de nucleótido representado por Q1, y específicamente incluye un conector con una estructura representada por la siguiente fórmula general (A):
(en la que E, X, T10 e Y son los mismos que anteriormente, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares también son como se describen anteriormente).
Por tanto, como el residuo de nucleótido representado por la fórmula general [22], es preferible cada uno representado por la siguiente fórmula general [22’], y es más preferible uno representado por la siguiente fórmula general:
(en la que E1 representa -CH=CH- o -C:C-; X1 y Y1 representan cada uno independientemente grupo alquileno; T11 representa -O- o -NH-CO-; y además, Q1 y W1 son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que, en la descripción anterior, el grupo alquileno representado por X1 es el mismo que el grupo alquileno representado por el X anterior, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares son también similares. Además, el grupo alquileno representado por Y1 es el mismo que el grupo alquileno representado por el Y anterior, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares son también similares.
(en la que r representa un número entero de desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 1 hasta 6, más preferiblemente desde 1 hasta 4; s representa un número entero de desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 2 hasta 8, más preferiblemente desde 2 hasta 4; y además, Q1, W1, E1 y T11 son los mismos que anteriormente).
Además, R1 a R11 son los mismos que anteriormente, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares también son tal como se describieron anteriormente.
Un derivado de compuesto de este tipo (sustancia de marcaje) de la presente invención representado por W1 [la fórmula general [1’]] es uno derivado del compuesto [1] de la presente invención tal como se describió anteriormente, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares son también similares al compuesto [1] de la presente invención tal como se describió anteriormente.
Como método para marcar el nucleótido descrito anteriormente con el compuesto [1] (sustancia de marcaje) relevante para la presente invención, incluye un método de marcaje directo o un método de marcaje indirecto, conocido por si mismo, [por ejemplo, un método descrito en el publicación de patente W096/17628 (JP-A-200212782), documento USP. n.º 6974873, documento JP-A-2002-193991, publicación de patente W099/12544, documento JP-A-11-80189 o similares]
Además, en el marcaje del nucleótido con el compuesto [1] (sustancia de marcaje) relevante a la presente invención, es más simple y más conveniente usar un kit de marcaje convencional comercialmente disponible con respecto al método de marcaje tal como se describió anteriormente, excepto para usar el compuesto [1] relevante a la presente invención.
Debe observarse que en la utilización de estos método en la presente invención, se requiere un nucleótido marcado unido al compuesto [1] (sustancia de marcaje) relevante a la presente invención, y, el nucleótido marcado puede prepararse mediante un método conocido por si mismo (por ejemplo, el método de marcaje anterior o similares).
Específicamente, puede prepararse según un método descrito en, por ejemplo, el documento JP-A-2002-193991 (párrafos desde [0102] hasta [0121]), y también puede preparare tal como sigue:
Es decir, puede obtenerse fácilmente, por ejemplo, sometiendo un derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (a) a una reacción con el compuesto [1] representado por la siguiente fórmula general (b) (sustancia de marcaje) [una sustancia de éster de succinimidilo] relevante a la presente invención
Q-E-X-T10-Y1-NH2 (a)
(en la que Q representa Q1; y Q1, E, X, T10 e Y son los mismos que anteriormente).
(en la que W representa W1; Su representa un grupo succinimida; y W1 es el mismo que anteriormente).
Además, en el caso en el que T10 de la parte de conector representado por la fórmula general (a), tal como se describió anteriormente, es -NH-CO-, puede preparare, por ejemplo, tal como sigue:
Es decir, por ejemplo, en primer lugar se introduce una parte de un conector (un conector parcial A) representado por la siguiente fórmula general (c), y se somete adicionalmente a una reacción con la sustancia de éster de succimidilo de la parte de conector restante (un conector parcial B) para preparar un derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (d), que se introduce con el conector. Aún más, puede obtenerse
5 fácilmente sometiendo el derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (d) a una reacción con el compuesto [1] (sustancia de marcaje) [la sustancia de éster de succimidilo] de la presente invención representado por la siguiente fórmula general (b).
(en la que E y X son los mismos que anteriormente).
15 (en la que Q, E, X e Y son los mismos que anteriormente).
(en la que W y Su son los mismos que anteriormente).
Más específicamente, entre los mononucleótidos marcados unidos al compuesto [1] (sustancia de marcaje) de la presente invención tal como anteriormente, puede sintetizarse un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente y un derivado de 2’-desoxiuridina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente, por ejemplo, según la siguiente ruta de síntesis.
25 Debe observarse que los nombres formales abreviados usados en la siguiente ruta de síntesis son tal como siguen;
- •
- MeOTfa: trifluoroacetato de metilo • -Tfa: grupo trifluoroacetilo
- •
- BU3SnH: hidruro de tri(n-butil)estaño
- •
- AIBN: azobisisobutironitrilo 35 • Et3N: trietilamina
- •
- HO-Su: N-hidroxisuccinimida
- •
- DMF: N,N-dimetilformamida
- •
- TMS-Acetamida: N,O-bis(trimetilsilil)acetamida
- •
- PdCI2(CH3CN)2: bis(acetonitrilo)dicloropaladio (II) 45 • tris(TBAPP): pirofosfato de tris(tri-n-butilamonio)
- •
- (EtO)3PO: fosfato de trietilo
- •
- TFP: tri-2-furilfosfina
- •
- Pd2(dba)3: tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0)
(1) Síntesis del conector parcial (A)
55 Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a -E-X-NH- en el caso en el que T10 es -NHCO-, en el conector (-E-X-T10-Y-NH-) representado por la fórmula general anterior (A), y un compuesto en el que E es -CH=CH y X es un grupo metileno.
- (2)
- Síntesis del conector parcial (B)
Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a -CO-Y-NH- en el caso en el que T10 es -NH-CO-, en el conector (-E-X-T10-Y-NH-) representado por la fórmula general anterior (A), y un compuesto en el que Y es un grupo pentametileno.
- (3)
- Síntesis de un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato [un compuesto de la fórmula general (d)]
Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a Q1-E1-X1-T11-Y1-NH- de la fórmula general [22’] (Q1-E1-X1-T11-Y1-NH-W1), y un compuesto en el que Q1 es 2’-desoxicitidina, E1 es -CH=CH-, X1 es un grupo metileno, T11 es -NH-CO-, y Y1 es un grupo pentametileno.
- (4)
- Síntesis de un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente (mononucleótido marcado con el compuesto [1] (una sustancia de marcaje) de la presente invención)
20 Debe observarse que este compuesto es un compuesto, en la fórmula general [22’] (Q1-E1-X1-T11-Y1-NH-W1), en la que Q1 es 2’-desoxicitidina, E1 es -CH=CH-, X1 es un grupo metileno, T11 es -NH-CO-, Y1 es un grupo pentametileno y W1 es el siguiente compuesto (14) o (25):
Debe observarse que de manera simular en un nucleótido marcado distinto al anterior también, puede sintetizarse 5 según sea apropiado según lo anterior, usando los materiales de partida correspondientes.
Debido a que un colorante de cianina a base de pirazol de la presente invención tiene una estructura en la que un esqueleto de pirazol y un esqueleto de indol se unen a una cadena de polimetino, y ejerce características fluorescentes en una región de longitud de onda más corta en comparación con una fuente de luz convencional, se
10 vuelve posible usar una fuente de luz de una región de longitud onda corta con alta eficiencia energética. Además, en el caso en el que se detecta un objeto de medición usando esto como agente de marcaje (una sustancia de marcaje), se torna posible detectar el objeto de medición con alta sensibilidad de detección, sin tener problemas tales como baja solubilidad en agua y sensibilidad de detección reducida mediante extinción óptica provocada por agregación de los propios colorantes y similares, que tiene un derivado de colorante de cianina convencional.
15 3-1. El compuesto [51] de la presente invención
Entre los compuestos representados por la fórmula general [50], un compuesto, en el que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-
20 y grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido incluye, por ejemplo, uno representado por la siguiente fórmula general [51]:
[en la que R1“ a R6“ representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7” a R10” representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo
5 alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:
10 (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio); el grupo representado por la fórmula general [3]:
15 (en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11” representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo
o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3,
20 siempre que cualquiera de R1” y R2”, R4” y R5”, R1” y R6”y R2” y R4” forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-, y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:
25 (en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido: además, al menos uno de R1“ a R11“, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o
30 grupo formilo].
En la fórmula general [51], cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-, y los grupos representados por las fórmulas generales
[52] a [54]: 35
(en las que R50 representa átomo de hidrógeno o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido, y un compuesto de este tipo representado por la 40 fórmula general [51], incluye, por ejemplo, compuestos representados por las fórmulas generales [55] a [58]:
(en la que T forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-y los grupos 45 representados por las fórmulas generales [4] a [6], y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y R3“ a R11” y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R3’’ a R11’’ junto con el grupo bivalente, representado por T tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo).
(en la que R1“ a R3“, R6“ a R11“, T y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R1“ a R3”, R6” a R11”, junto con el grupo bivalente, representado por T, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo).
(en la que R2” a R5”, R7“ a R11“, T y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R2” a R5”, R7” a R11”, junto con el grupo bivalente representado por T, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo 15 representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo).
(en la que R1”, R3”, R5” a R11”, T y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R1”, R3”, R5” a
20 R11”, junto con el grupo bivalente representado por T tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo).
Entre estos compuestos es preferible, por ejemplo, el compuesto representado por la fórmula general [55], el compuesto representado por la fórmula general [57] o similares.
25 En las fórmulas generales [51] y [55] a [58], n representa un número entero de habitualmente desde 0 hasta 3, preferiblemente 1 ó 2 y más preferiblemente 2.
El grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1” a
30 R6”, en las fórmulas generales [51] y [55] a [58], puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C5, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc
35 heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo nnonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares: entre éstos es preferible, por ejemplo, uno de cadena lineal, en particular es preferible, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo
40 n-propilo, grupo n-butilo, grupo n-pentilo o similares.
El grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1” a R6”, puede incluir un grupo alquilo sustituido o no sustituido que no tiene un enlace amida, o uno que tiene enlaces amida en una cantidad de habitualmente desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 1 hasta 3, y más preferiblemente 1, en una cadena de alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido.
Un ejemplo específico preferible del grupo alquilo no sustituido que puede tener un enlace amida, incluye, por ejemplo, un grupo representado por la siguiente fórmula general [59]:
- -
- T1-(CONH-T2)m-R21 [59]
(en la que R21 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo; T1 y m fragmentos de T2 representan grupos alquileno; y m representa un número entero de desde 0 hasta 10).
El grupo alquilo representado por R21, en la fórmula general [51], puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo nhexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo ndecilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
Los grupos alquileno representados por T1 y m fragmentos de T2, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C10, preferiblemente C2 a C8, y específicamente, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno, grupo hexametileno, grupo heptametileno, grupo octametileno, grupo nonametileno y grupo decametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo 1metiltrimetileno, grupo 2-metiltrimetileno, grupo 1,1-dimetiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo etiletileno, grupo 1metiltetrametileno, grupo 1,1-dimetiltrimetileno, grupo 2,2-dimetiltrimetileno, grupo 2-etiltrimetileno, grupo 1metilpentametileno, grupo 2-metilpentametileno, grupo 1,3-dimetiltetrametileno, grupo 3-etiltetrametileno, grupo 1metilhexametileno, grupo 1-metilheptametileno, grupo 1,4-dietiltetrametileno, grupo 2,4-dimetilheptametileno, grupo 1-metiloctametileno y grupo 1-metilnonametileno; grupo alquileno cíclico tal como grupo ciclopropileno, grupo 1,3ciclobutileno, grupo 1,3-ciclopentileno, grupo 1,4-ciclohexileno, grupo 1,5-cicloheptileno, grupo 1,5-ciclooctileno, grupo 1,5-ciclononileno y grupo 1,6-ciclodecaleno; o similares.
“m” representa un número entero de habitualmente desde 0 hasta 10, preferiblemente un número entero desde 0 hasta 3, más preferiblemente 0 ó 1.
En las fórmulas generales [51] y [55] a [58], el sustituyente del grupo alquilo sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1” a R6”, incluye uno en el que una parte de átomos de hidrógeno en el grupo alquilo que puede tener el enlace amida, está sustituido con un sustituyente, y el sustituyente, incluye, por ejemplo, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o similares, y entre éstos, es preferible el grupo representado por la fórmula general [2], o el grupo representado por la fórmula general [3].
El grupo alquilo sustituido que tiene el enlace amida, representado por R1” a R6”, incluye preferiblemente uno en el que una parte de átomos de hidrógeno, en un grupo alquilo no sustituido que tiene un enlace amida, representado por la fórmula general anterior [59], está sustituido con el grupo representando por la fórmula general anterior [2], o el grupo representado por la fórmula general [3].
En la fórmula general [2] y [3], el átomo de metal alcalino representado por R12 y R13, incluye, por ejemplo, átomo de litio, átomo de sodio, átomo de potasio, átomo de rubidio o similares, y entre éstos es preferible, átomo de sodio o átomo de potasio, y en particular es más preferible, átomo de sodio.
El ion amonio orgánico representado por R12 y R13, incluye por ejemplo, un ion trietilamonio o similares. El ion trietilamonio puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, ion trimetilamonio, ion trietilamonio, ion tri-npropilamonio, ion triisopropilamonio, ion tributilamonio, ion tripentilamonio, ion trihexilamonio, ion triheptilamonio, ion trioctilamonio, ion trinonilamonio, ion tridecilamonio, ion triciclopropilamonio, ion triciclobutilamonio, ion triciclopentilamonio, ion triciclohexilamonio, ion tricicloheptilamonio, ion triciclooctilamonio, ion triciclononilamonio, ion triciclodecilamonio o similares, y entre éstos, es preferible ion trimetilamonio o ion trietilamonio, y en particular, es más preferible ion trietilamonio.
En la fórmula general [2], el grupo alquilo C1 a C10 representado por R12, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, más preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo tercpentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo representado por la fórmula general [2], incluye, por ejemplo, un grupo carboxilo (-COOH), un anión del mismo [un carboxilato (-COO-)], una sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, sal de rubidio o similares), una sal de amonio del mismo, una sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio, sal de tripropilamonio) o similares, y entre éstos, son preferibles, por ejemplo, el grupo carboxilo, el grupo carboxilato y la sal de sodio del mismo o similares. A continuación en el presente documento, pueden abreviarse como “un grupo carboxilo o similares” como nombre general.
Un ejemplo específico preferible del grupo representado por la fórmula general [3], incluye, por ejemplo, un grupo sulfo (-SO3H), un anión del mismo [un sulfonato (-SO3-)], una sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, sal de rubidio o similares), una sal de amonio del mismo, una sal de amonio orgánico del mismo (por ejemplo, sal de trimetilamonio, sal de trietilamonio, sal de tripropilamonio) o similares, y entre éstos, son preferibles el grupo sulfo, el grupo sulfonato y la sal de sodio del mismo. A continuación en el presente documento pueden abreviarse “un grupo sulfo o similares” como nombre general.
Debe observarse que el sustituyente del grupo alquilo sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1” a R6” en las fórmulas generales [51] y [55] a [58], (es decir, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, o grupo tiol), está sustituido preferiblemente con un átomo de hidrógeno terminal del grupo alquilo.
Un ejemplo específico preferible de R1” y R2” en las fórmulas generales [51] y [56] a [58], incluye, por ejemplo, uno en el que un átomo de hidrógeno terminal de un grupo alquilo C1 a C6 de cadena lineal tal como por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo n-butilo, grupo n-pentilo y grupo n-hexilo, está sustituido con el sustituyente anterior (es decir, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo o grupo tiol), y entre éstos, es preferible uno sustituido con el grupo representado por la fórmula general [2] o el grupo representado por la fórmula general [3].
Además, en cuanto a una combinación preferible de R3” y R4” y/o una combinación preferible de R5” y R6”, en las fórmulas generales [51], [55], [57] y [58], es preferible que cualquiera de ellos (es decir, cualquiera de R3” y R4”, y cualquiera de R5” y R6”) es un grupo alquilo C1 a C6 (por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-butilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo o similares), y el otro es un grupo alquilo C1 a C6 que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, o grupo tiol, (entre éstos, es preferible uno que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2], o el grupo representado por la fórmula general [3]).
Aún más, en el caso en el que cualquiera de R3” y R4 ”, o R5” y R6” en las fórmulas generales [51], [56] a [58] forma un grupo bivalente representado por T, es preferible que el otro (es decir, R3” y R6” en la fórmula general [56], R5 en la fórmula general [57], R3” en la fórmula general [58]) es un grupo alquilo C1 a C6 (por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo npentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo o similares).
El grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10” en las fórmulas generales [51], [55] a [58], puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo npropilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo o similares.
El grupo alquenilo del grupo alquenilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10 ”, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo isopropenilo, grupo 3-butenilo, grupo 2-butenilo, grupo 1-butenilo, grupo 1,3-butadienilo, grupo 4-pentenilo, grupo 3-pentenilo, grupo 2-pentenilo, grupo 1-pentenilo, grupo 1,3-pentadienilo, grupo 2,4-pentadienilo, grupo 1,1-dimetil-2-propenilo, grupo 1-etil-2propenilo, grupo 1,2-dimetil-1-propenilo, grupo 1-metil-1-butenilo, grupo 5-hexenilo, grupo 4-hexenilo, grupo 3hexenilo, grupo 2-hexenilo, grupo 1-hexenilo, grupo 1-ciclopropenilo, grupo 2-ciclopentenilo, grupo 2,4ciclopentadienilo, grupo 1-ciclohexenilo, grupo 2-ciclohexenilo, grupo 3-ciclohexenilo o similares.
El grupo alquinilo del grupo alquinilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo etinilo, grupo 2-propinilo, grupo 3-butinilo, grupo 1-metil-2-propinilo, grupo 4-pentinilo, grupo 2-metil-4-pentinilo, grupo 5-hexinilo o similares.
R10”
El grupo arilo del grupo arilo sustituido o no sustituido representado por R7” a , incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
El grupo alcoxilo del grupo alcoxilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10” puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metoxilo, grupo etoxilo, grupo n-propoxilo, grupo isopropoxilo, grupo n-butoxilo, grupo isobutoxilo, grupo sec-butoxilo, grupo terc-butoxilo, grupo n-pentoxilo, grupo isopentoxilo, grupo sec-pentoxilo, grupo terc-pentoxilo, grupo neopentoxilo, grupo n-hexiloxilo, grupo isohexiloxilo, grupo sec-hexiloxilo, grupo terchexiloxilo, grupo neohexiloxilo, grupo ciclopropoxilo, grupo ciclopentoxilo, grupo ciclohexiloxilo o similares.
El grupo ariloxilo del grupo ariloxilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo feniloxilo, grupo naftiloxilo o similares.
El grupo alquiltio del grupo alquiltio sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que el átomo de oxígeno del grupo alcoxilo está sustituido con un átomo de azufre, y puede adoptarse cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metiltio, grupo etiltio, grupo n-propiltio, grupo isopropiltio, grupo n-butiltio, grupo isobutiltio, grupo sec-butiltio, grupo terc-butiltio, grupo n-pentiltio, grupo isopentiltio, grupo sec-pentiltio, grupo tercpentiltio, grupo neopentiltio, grupo n-hexiltio, grupo isohexiltio, grupo sec-hexiltio, grupo terc-hexiltio, grupo neohexiltio, grupo ciclopropiltio, grupo ciclobutiltio, grupo ciclopentiltio, grupo ciclohexiltio o similares.
El grupo ariltio del grupo ariltio sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que el átomo de oxígeno del grupo ariloxilo está sustituido con un átomo de azufre, e incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo feniltio, grupo naftiltio o similares.
El grupo alquilsulfonilo del grupo alquilsulfonilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que el grupo -OH de un grupo sulfo (-SO2OH) está sustituido con un grupo alquilo, y puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y se incluye uno con habitualmente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilsulfonilo, grupo etilsulfonilo, grupo n-propilsulfonilo, grupo isopropilsulfonilo, grupo n-butilsulfonilo, grupo isobutilsulfonilo, grupo sec-butilsulfonilo, grupo terc-butilsulfonilo, grupo n-pentilsulfonilo, grupo isopentilsulfonilo, grupo sec-pentilsulfonilo, grupo terc-pentilsulfonilo, grupo neopentilsulfonilo, grupo n-hexilsulfonilo, grupo isohexilsulfonilo, grupo sec-hexilsulfonilo, grupo terc-hexilsulfonilo, grupo neohexilsulfonilo, grupo ciclopropilsulfonilo, grupo ciclobutilsulfonilo, grupo ciclopentilsulfonilo, grupo ciclohexilsulfonilo o similares.
El grupo arilsulfonilo del grupo arilsulfonilo sustituido o no sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que el grupo –OH de un grupo sulfo (-SO2OH) está sustituido con un grupo arilo, y puede adoptarse cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilsulfonilo, grupo naftilsulfonilo o similares.
El grupo carbamoílo sustituido representado por R7” a R10”, incluye, por ejemplo, uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo carbamoílo (-CONH2) está sustituido con un grupo alquilo C1 a C6 o un grupo arilo C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo N-alquilcarbamoílo tal como grupo N-metilcarbamoílo, grupo N-etilcarbamoílo, grupo N-n-propilcarbamoílo, grupo N-isopropilcarbamoílo, grupo N-n-butilcarbamoílo, grupo N-terc-butilcarbamoílo, grupo N-n-hexilcarbamoílo, grupo N-ciclohexilcarbamoílo, grupo N-metiletilcarbamoílo y grupo Ndiciclohexilcarbamoílo; grupo N-arilcarbamoílo tal como grupo N-fenilcarbamoílo y grupo N-difenilcarbamoílo; o similares.
El grupo sulfamoílo sustituido representado por R7” a R10”, incluye, por ejemplo, uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo sulfamoílo (-SO2NH2) está sustituido con un grupo alquilo C1 a C6 o un grupo arilo C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo N-alquilsulfamoílo tal como grupo N-metilsulfamoílo, grupo N-etilsulfamoílo, grupo N-n-propilsulfamoílo, grupo N-isopropilsulfamoílo, grupo N-n-butilsulfamoílo, grupo N-terc-butilsulfamoílo, grupo N-n-hexil-sulfamoílo, grupo N-ciclohexilsulfamoílo, grupo N-metiletilsulfamoílo y grupo N-dicilohexilsulfamoílo; grupo N-arilsulfamoílo tal como grupo N-fenilsulfamoílo y grupo N-difenilsulfamoílo; o similares.
El grupo ureido sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que 1 a 3 átomos de hidrógeno del grupo ureido (-NHCONH2) está sustituido, por ejemplo, grupos representados por las siguientes fórmulas generales [4] a [7]:
(en las que R14 a R16 representan cada uno independientemente átomo de halógeno, grupo alquilo, átomo de sulfoamida, grupo carboamida, grupo sulfo, grupo carboxilo, grupo fosfo, grupo hidroxilo o grupo amino).
En las fórmulas generales [4] a [7], el átomo de halógeno representado por R14 a R16, incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
El grupo alquilo representado por R14 a R16 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluirse uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo tercbutilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo secheptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo sulfoamida (-NHSO2R) representado por R14 a R16, incluye uno en el que el átomo de hidrógeno del grupo amino está sustituido con un grupo alquilsulfonilo (grupo alquilsulfoamida), o con un grupo arilsulfonilo (grupo arilsulfoamida).
El grupo alquilsulfoamida puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilsulfoamida, grupo etilsulfoamida, grupo n-propilsulfoamida, grupo isopropilsulfoamida, grupo n-butilsulfoamida, grupo isobutilsulfoamida, grupo sec-butilsulfoamida, grupo terc-butilsulfoamida, grupo n-pentilsulfoamida, grupo isopentilsulfoamida, grupo sec-pentilsulfoamida, grupo terc-pentilsulfoamida, grupo neopentilsulfoamida, grupo nhexilsulfoamida, grupo isohexilsulfoamida, grupo sec-hexilsulfoamida, grupo terc-hexilsulfoamida, grupo neohexilsulfoamida, grupo ciclopropilsulfoamida, grupo ciclobutilsulfoamida, grupo ciclopentilsulfoamida, grupo ciclohexilsulfoamida, grupo n-heptilsulfoamida, grupo isoheptilsulfoamida, grupo sec-heptilsulfoamida, grupo tercheptilsulfoamida, grupo neoheptilsulfoamida, grupo n-octilsulfoamida, grupo isooctilsulfoamida, grupo secoctilsulfoamida, grupo terc-octilsulfoamida, grupo neooctilsulfoamida, grupo n-nonilsulfoamida, grupo isononilsulfoamida, grupo sec-nonilsulfoamida, grupo terc-nonilsulfoamida, grupo isononilsulfoamida, grupo ndecilsulfoamida, grupo isodecilsulfoamida, grupo sec-decilsulfoamida, grupo terc-decilsulfoamida, grupo neodecilsulfoamida, grupo cicloheptilsulfoamida, grupo ciclooctilsulfoamida, grupo ciclononilsulfoamida, grupo ciclodecilsulfoamida o similares.
El grupo arilsulfoamida incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilsulfoamida, o grupo naftilsulfoamida o similares.
El grupo carboamida (-NHCOR) representado por R14 a R16, incluye uno en el que el átomo de hidrógeno del grupo amino está sustituido con un grupo acilo. El grupo acilo incluye, por ejemplo, uno derivado de un ácido carboxílico alifático, uno derivado de un ácido carboxílico aromático o similares.
El grupo carboamida derivado de un ácido carboxílico alifático, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y puede aún contener más un doble enlace en la cadena, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C20, preferiblemente C2 a C15, más preferiblemente C2 a C10, aún más preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo acetilamida, grupo propionilamida, grupo butirilamida, grupo isobutirilamida, grupo valerilamida, grupo isovalerilamida, grupo pivaloilamida, grupo hexanoilamida, grupo heptanoilamida, grupo octanoilamida, grupo decanoilamida, grupo lauroilamida, grupo miristoilamida, grupo palmitoilamida, grupo estearoilamida, grupo icosanoilamida, grupo acriloilamida, grupo metacriloilamida, grupo crotonoilamida, grupo oleoilamida o similares.
El grupo carboamida derivado de un ácido carboxílico aromático, incluye uno que tiene habitualmente C7 a C15, preferiblemente C7 a C11, y específicamente, por ejemplo, grupo benzoilamida, grupo naftoilamida, grupo antoilamida
o similares.
El grupo amino sustituido representado por R7” a R10”, incluye uno en el que 1 a 2 átomos de hidrógeno del grupo amino están sustituido con sustituyentes, y estos sustituyentes incluyen por ejemplo, grupo alquilo, grupo alcoxicarbonilo, grupo carbonilo, grupo acilo, grupo sulfo y similares.
El grupo alquilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo nhexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo ndecilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo alcoxicarbonilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metoxicarbonilo, grupo etoxicarbonilo, grupo n-propoxicarbonilo, grupo isopropoxicarbonilo, grupo n-butoxicarbonilo, grupo isobutoxicarbonilo, grupo sec-butoxicarbonilo, grupo tercbutoxicarbonilo, grupo n-pentiloxicarbonilo, grupo isopentiloxicarbonilo, grupo sec-pentiloxicarbonilo, grupo tercpentiloxicarbonilo, grupo neopentiloxicarbonilo, grupo n-hexiloxicarbonilo, grupo isohexiloxicarbonilo, grupo sechexiloxicarbonilo, grupo terc-hexiloxicarbonilo, grupo neohexiloxicarbonilo, grupo n-heptiloxicarbonilo, grupo isoheptiloxicarbonilo, grupo sec-heptiloxicarbonilo, grupo terc-heptiloxicarbonilo, grupo neoheptiloxicarbonilo, grupo n-octiloxicarbonilo, grupo isooctiloxicarbonilo, grupo sec-octiloxicarbonilo, grupo terc-octiloxicarbonilo, grupo neooctiloxicarbonilo, grupo n-noniloxicarbonilo, grupo isononiloxicarbonilo, grupo sec-noniloxicarbonilo, grupo tercnoniloxicarbonilo, grupo neononiloxicarbonilo, grupo n-deciloxicarbonilo, grupo isodeciloxicarbonilo, grupo secdeciloxicarbonilo, grupo terc-deciloxicarbonilo, grupo neodeciloxicarbonilo, grupo ciclopropoxicarbonilo, grupo ciclobutoxicarbonilo, grupo ciclopentiloxicarbonilo, grupo ciclohexiloxicarbonilo, grupo cicloheptiloxicarbonilo, grupo ciclooctiloxicarbonilo, grupo ciclononiloxicarbonilo, grupo ciclodeciloxicarbonilo o similares.
El grupo acilo incluido como sustituyente del grupo amino sustituido, incluye uno derivado de un ácido carboxílico alifático, uno derivado de un ácido carboxílico aromático o similares.
El grupo acilo derivado de un ácido carboxílico alifático puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y puede aún contener más un doble enlace en la cadena, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C20, preferiblemente C2 a C15, más preferiblemente C2 a C10, aún más preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo acetilo, grupo propionilo, grupo butirilo, grupo isobutirilo, grupo valerilo, grupo isovalerilo, grupo pivaloílo, grupo hexanoílo, grupo heptanoílo, grupo octanoílo, grupo decanoílo, grupo lauroílo, grupo miristoílo, grupo palmitoílo, grupo estearoílo, grupo icosanoílo, grupo acriloílo, grupo metacriloílo, grupo crotonoílo, grupo oleoílo o similares.
El grupo acilo derivado de un ácido carboxílico aromático, incluye uno que tiene habitualmente C7 a C15, preferiblemente C7 a C11, y específicamente, por ejemplo, grupo benzoílo, grupo naftoílo, grupo antoílo o similares.
El átomo de halógeno representado por R7” a R10” incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
El grupo tio heterocíclico aromático representado por R7” a R10”, incluye uno en el que el átomo de hidrógeno del grupo tiol (-SH) está sustituido con grupo heterocíclico aromático. El grupo heterocíclico aromático incluye, por ejemplo, un anillo de cinco miembros o un anillo de seis miembros, y preferiblemente uno que contiene, como heteroátomo, por ejemplo, 1 a 3 átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno, átomos de azufre o similares, y específicamente, por ejemplo, grupo furilo, grupo pirrolilo, grupo indolilo, grupo purinilo, grupo quinolilo, grupo piridilo, grupo pirazilo, grupo pirimidilo, grupo oxazolilo, grupo imidazolilo, grupo tiazolilo, grupo piranilo o similares.
En las fórmulas generales [51] y [55] a [58], un sustituyente del grupo alquilo sustituido, grupo alquenilo sustituido, grupo alquinilo sustituido, grupo arilo sustituido, grupo alcoxilo sustituido, grupo ariloxilo sustituido, grupo alquiltio sustituido, grupo ariltio sustituido, grupo alquilsulfonilo sustituido, o grupo arilsulfonilo sustituido, representado por R7” a R10”, incluye, por ejemplo, átomo de halógeno, grupo sulfoamida, grupo carboamida, grupo fosfo (grupo fosfato), el grupo representado por la fórmula general anterior [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol, grupo formilo o similares.
Un ejemplo específico del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, incluido como sustituyente, incluye, por ejemplo, uno similar como ejemplo del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, representado por R14 a R16 en las fórmulas generales [4] a [7].
Un ejemplo preferible de R7” a R10” en las fórmulas generales [51] y [55] a [58], incluye uno en el que tres de R7” a R10” son átomos de hidrógeno, y el restante es un grupo derivado de un ácido sulfónico representado por la fórmula general [3], y entre los grupos derivados del ácido sulfónico es preferible, por ejemplo, grupo sulfo, anión del mismo (sulfonato), sal de metal alcalino del mismo o sal de amonio orgánico del mismo o similares, y entre ellos es más preferible, por ejemplo, grupo sulfo, sulfonato, sal de metal alcalino del mismo (por ejemplo, sal de sodio o similares)
o similares, y en particular, es preferible uno en el que R8” es el grupo representado por la fórmula general [3].
5 En las fórmulas generales [51] y [55] a [58], el grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, representado por R11”, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, [preferiblemente C1 a C10] y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-butilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo noctilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo secnonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
15 El grupo alquenilo del grupo alquenilo sustituido o no sustituido representado por R11” puede adoptarse cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo isopropenilo, grupo 3-butenilo, grupo 2-butenilo, grupo 1-butenilo, grupo 1,3-butadienilo, grupo 4-pentenilo, grupo 3-pentenilo, grupo 2-pentenilo, grupo 1-pentenilo, grupo 1,3-pentadienilo, grupo 2,4-pentadienilo, grupo 1,1-dimetil-2-propenilo, grupo 1-etil-2propenilo, grupo 1,2-dimetil-1-propenilo, grupo 1-metil-1-butenilo, grupo 5-hexenilo, grupo 4-hexenilo, grupo 3hexenilo, grupo 2-hexenilo, grupo 1-hexenilo, grupo 1-ciclopropenilo, grupo 2-ciclopentenilo, grupo 2,4ciclopentadienilo, grupo 1-ciclohexenilo, grupo 2-ciclohexenilo, grupo 3-ciclohexenilo o similares.
25 El grupo alquinilo del grupo alquinilo sustituido o no sustituido, representado por R11”, incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C4, y específicamente, por ejemplo, grupo etinilo, grupo 2-propinilo, grupo 3-butinilo, grupo 1-metil-2-propinilo, grupo 4-pentinilo, grupo 2-metil-4-pentinilo, grupo 5-hexinilo o similares.
El grupo arilo del grupo arilo sustituido o no sustituido, representado por R11”, incluye específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
Un sustituyente del grupo alquilo sustituido, grupo alquenilo sustituido, grupo alquinilo sustituido o grupo arilo sustituido, representado por R11”, incluye, por ejemplo, átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, grupo sulfo, grupo carboxilo, grupo fosfo, grupo hidroxilo, grupo amino o similares, y un ejemplo específico del átomo
35 de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida incluye uno similar como ejemplo del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida representado por R14 a R16 en las fórmulas generales [14] a [17].
Entre R11”, un grupo alquilo no sustituido es preferible, y en particular, es más preferible por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo n-pentilo, grupo n-hexilo o similares.
En la fórmula general [51], un grupo bivalente formado por cualquiera de R1” y R2”, R4” y R5”, R1” y R6” y R2” y R4”, es decir, un grupo bivalente formado por un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-, y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:
(en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido, y en detalle, un grupo bivalente representado por T en las fórmulas generales [55] a [58], incluye, por ejemplo, un grupo representado por la fórmula general [60]:
[en la que R18 y R19 representan cada uno independientemente grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO-, o los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]; y R20 representa grupos representados por las siguientes 55 fórmulas generales [70] a [72]:
(en las que R51 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; R50 es el mismo que anteriormente), átomo de hidrógeno, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; T3 y T5 representan cada uno independientemente grupo alquileno; y p representa un número entero de desde 1 hasta 20].
En las fórmulas generales [52] a [54] y [70] a [72], el grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, representado por R51, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo grupo metilo, grupo etilo, grupo npropilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-butilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
El grupo alquenilo sustituido o no sustituido representado por R51, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C2 a C6, preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo isopropenilo, grupo 3-butenilo, grupo 2-butenilo, grupo 1butenilo, grupo 1,3-butadienilo, grupo 4-pentenilo, grupo 3-pentenilo, grupo 2-pentenilo, grupo 1-pentenilo, grupo 1,3pentadienilo, grupo 2,4-pentadienilo, grupo 1,1-dimetil-2-propenilo, grupo 1-etil-2-propenilo, grupo 1,2-dimetil-1propenilo, grupo 1-metil-1-butenilo, grupo 5-hexenilo, grupo 4-hexenilo, grupo 3-hexenilo, grupo 2-hexenilo, grupo 1hexenilo, grupo 1-ciclopropenilo, grupo 2-ciclopentenilo, grupo 2,4-ciclopentadienilo, grupo 1-ciclohexenilo, grupo 2ciclohexenilo, grupo 3-ciclohexenilo, grupo cicloheptenilo, grupo ciclooctenilo, grupo ciclononenilo, grupo ciclodecenilo o similares.
El grupo arilo sustituido o no sustituido representado por R51, incluye uno que tiene habitualmente C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
Un sustituyente del grupo alquilo sustituido, grupo alquenilo sustituido o grupo arilo sustituido, representado por R51, incluye, por ejemplo, grupo alquilo C1 a C10, átomo de halógeno, grupo sulfoamida, grupo carboamida, grupo fosfo (grupo fosfato), el grupo representado por la fórmula general anterior [2], el grupo representado por la fórmula general anterior [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol, grupo formilo o similares.
El grupo alquilo C1 a C10 incluido como sustituyente, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo tercbutilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n-heptilo, grupo isoheptilo, grupo secheptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
Un ejemplo específico del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida, incluido como sustituyente, incluye uno similar como ejemplo del átomo de halógeno, grupo sulfoamida y grupo carboamida representado por R14 a R16 en las fórmulas generales [4] a [7].
En la fórmula general [60], como el grupo alquileno representado por T3 y T4 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C6, y específicamente, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno y grupo hexametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo etiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo 1,2-dietiletileno, grupo 1,2-di-n-propiletileno y grupo1,2-di-nbutiletileno; o similares, y entre éstos, es preferible un grupo alquileno de cadena lineal, y en particular, es más preferible grupo etileno, grupo pentametileno o similares.
“p” es un número entero de habitualmente desde 1 hasta 20, preferiblemente desde 1 hasta 10, y más preferiblemente desde 1 hasta 6.
Es preferible uno en el que al menos uno de fragmentos de p de R20 es el grupo representado por las fórmulas generales [70] a [72], la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, y en particular, uno en el que es más preferible el grupo representado por la
5 fórmula general [2], o el grupo representado por la fórmula general [71].
Entre los grupos representados por la fórmula general [71], un grupo representado por la siguiente fórmula general
[73] es particularmente preferible:
10 -CONH- T4-COOR12 [73]
(en la que T4 representa un grupo alquileno; y R12 es el mismo que anteriormente).
En la fórmula general [73], el grupo alquileno representado por T4 incluye uno similar como el grupo alquileno 15 representado por T3 y T5 en la fórmula general [60].
Entre el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, contenido al menos uno en R1” a R11” en las fórmulas generales
[51] y [55] a [58], es preferible el grupo representado por la fórmula general [2] o el grupo representado por la 20 fórmula general [3].
El grupo representado por la fórmula general [3] (un grupo sulfo o similares), contenido en un compuesto de la presente invención, está contenido más preferiblemente, habitualmente de 1 a 4, preferible de 2 a 4 en el compuesto de la presente invención, de modo que mejore la solubilidad en agua, suprima la extinción de fluorescencia
25 provocada por agregación de los propios colorantes, y mejore la intensidad de fluorescencia.
Además, el grupo (un grupo carboxilo o similares) representado por la fórmula general [2], contenido en el compuesto de la presente invención, está contenido en el compuesto de la presente invención en una cantidad habitualmente de 1 a 3, preferiblemente 1 a 2, de modo que se hace posible la fácil introducción de un grupo (por
30 ejemplo, un grupo de activación de reacción tal como un grupo succinimida, un grupo norborneno o similares) que puede unirse a una sustancia que va a marcarse.
En el caso en el que el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo (puede abreviarse a continuación en el presente 35 documento como “un grupo reactivo de la presente invención”), contenido al menos uno en el enlace bivalente formado por cualquiera de R1” a R11“, o R1” y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ (es decir, el grupo bivalente representado por T en las fórmulas generales [55] a [58]), está contenido en R1” a R11”, puede ser uno cualquiera en el que estos grupos reactivos de la presente invención están presentes como R1” a R11” (es decir, uno en el que el grupo reactivo está unido directamente a un esqueleto de pirazol o un esqueleto de indol), o uno en el que están
40 contenidos como sustituyentes en R1” a R11”, sin embargo, en el caso en el que el grupo reactivo está contenido en R11”, es preferible que esté contenido como sustituyente.
Además, en el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención está contenido en el grupo bivalente formado por cualquiera de R1” y R2”, R4” y R5”, R1” y R6” y R2” y R4” (es decir, el grupo bivalente representado por T en 45 las fórmulas generales [55] a [58]), es preferible que esté contenido, por ejemplo, en R20 en la fórmula general anterior [60].
En los compuestos representados por las fórmulas generales anteriores [55] a [58], es preferible uno en el que n es 1 ó 2, y en particular es más preferible uno en el que n es 2.
50 Además, entre el compuesto [51] de la presente invención, es preferible uno representado por la siguiente fórmula general [51’]:
[en la que R1”b a R6”b representan cada uno independientemente un grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3]; R8”b representa el grupo representado por la fórmula general [3]; R11”b representa un grupo alquilo; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1”b y R2”b, R4”b y R5”b, R1”b y R6”b y R2”b y R4”b forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido. Además, al menos uno de R1”b a R11”b, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1”b y R2”b, R4”b y R5”b, R1”b y R6”b y R2”b y R4”b, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], o el grupo representado por la fórmula general [3]].
En la fórmula general [51’], el grupo alquilo del grupo alquilo que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3] representado por R1”b a R6”b, incluye uno similar como ejemplo de un grupo alquilo del grupo alquilo sustituido o no sustituido, que puede tener el enlace amida, representado por R1” a R6” en la fórmula general anterior [51].
R3a
y R4a cada uno independientemente incluye un grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y en particular, es preferible que uno de ellos es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y el otro es un grupo alquilo.
R5a
y R6a cada uno independientemente incluye un grupo alquilo, que puede tener como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y en particular, es preferible que uno de ellos es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] o [3], y el otro es un grupo alquilo.
Un grupo alquilo representado por R11”b incluye uno similar como ejemplo del grupo alquilo representado por R11 en la fórmula general anterior [51].
Ejemplos específicos preferibles de los compuestos representados por la fórmula general [55], incluye por ejemplo, los representados por las siguientes tablas 9 a 12. Debe observarse que, en las tablas 9 a 12, R3”, R5” y R11” representado por la fórmula general [55] son grupos -CH3; R7”, R9” y R10” son átomos de hidrógeno; y R8” es un grupo -SO3Na.
Tabla 9 Tabla 10
Tabla 11
Tabla 12
Ejemplos específicos preferibles de los compuestos representados por la fórmula general [56], incluyen por ejemplo, los representados por las siguientes tablas 13 a 16. Debe observarse que, en las tablas 13 a 16, R3”, R6” y R11” en la fórmula general [56] son grupos -CH3; R7”, R9” y R10” son átomos de hidrógeno; y R8” es grupo un -SO3Na.
Tabla 13
Tabla 14
Tabla 15
Tabla 16
Ejemplos específicos preferibles de los compuestos representados por la fórmula general [57], incluyen por ejemplo, los representados por las siguientes tablas 17 a 20. Debe observarse que, en las tablas 17 a 20, R3”, R5” y R11” en la fórmula general [57] son grupos -CH3; R7”, R9” y R10” son átomos de hidrógeno; y R8” es un grupo -SO3Na.
Tabla 17
Tabla 18
Tabla 19
Tabla 20
Ejemplos específicos preferibles de los compuestos representados por la fórmula general [58], incluyen por ejemplo, los representados por las siguientes tablas 21 a 24. Debe observarse que, en las tablas 21 a 24, R3”, R5” y R11” en la fórmula general [58] son grupos -CH3; R7”, R9” y R10” son átomos de hidrógeno; y R8” es un grupo -SO3Na.
Tabla 21
Tabla 22
Tabla 23
Tabla 24
Además, en el caso en el que un grupo reactivo de la presente invención, contenido en un compuesto de la presente invención, se somete a unión, por ejemplo, a una sustancia que va a marcarse o similares, un grupo de este tipo que mejora (activa) la capacidad de unión a un grupo funcional que va estar contenido en una sustancia que va a marcarse (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares) (puede abreviarse a continuación en el presente documento como “un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse”) puede introducirse adicionalmente al grupo reactivo.
Debe observarse que lo introducido con un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención, es decir, uno en el que está introducido un grupo reactivo de este tipo que mejora la capacidad de unión a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse a un grupo reactivo de la presente invención, también está incluido en el grupo reactivo de la presente invención.
Un grupo de activación de reacción de este tipo, no se limita especialmente, siempre que pueda permitir la unión a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y se incluyen todos los usados habitualmente en este campo.
Como el grupo de activación de reacción de la presente invención, no se limita especialmente siempre que pueda unirse a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y se incluyen todos los usados habitualmente en este campo, por ejemplo, uno que activa la reactividad con un grupo amino (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo amino”), uno que activa la reactividad con un grupo tiol (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo tiol” uno que activa la reactividad con un grupo hidroxilo (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo”), uno que activa la reactividad con un grupo formilo (denominado a continuación en el presente documento “un grupo de activación de reacción para un grupo formilo”) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo amino, incluye, por ejemplo, grupo succinimida, grupo sulfosuccinimida, grupo norborneno, grupo 4-nitrofenoxilo, un grupo derivado de un anhídrido carboxílico (por ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares), grupo halosulfonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorosulfonilmetilo, grupo fluorosulfoniletilo, grupo fluorosulfonilpropilo, grupo clorosulfonilmetilo, grupo clorosulfoniletilo, grupo clorosulfonilpropilo, grupo bromosulfonilmetilo, grupo bromosulfoniletilo, grupo bromosulfonilpropilo, grupo yodosulfonilmetilo, grupo yodosulfoniletilo, grupo yodosulfonilpropilo o similares), grupo halosulfonilarilo (por ejemplo, grupo fluorosulfonilfenilo, grupo clorosulfonilfenilo, grupo bromosulfonilfenilo, grupo yodosulfonilfenilo o similares); grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares); grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares); grupo fosfoamidita, grupo isotiocianato, grupo isocianato, monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) grupo triazino sustituido, dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) grupo triazino sustituido, grupo pirimidina sustituido con monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo pirimidina sustituido con dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo piridina sustituido con monohalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), grupo piridina sustituido con dihalógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares), haluro de fosforilo (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo tiol, incluye, por ejemplo, grupo derivado de anhídrido carboxílico (ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares); grupo maleimida, grupo sulfomaleimida, grupo sulfonilhaluro (por ejemplo, F, Cl, Br, I
o similares); a-halógeno (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares) grupo acetamida; grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares); grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares); grupo isotiocianato, grupo isocianato, grupo 2-piridiltio; o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo, incluye, por ejemplo, grupo derivado de anhídrido carboxílico (por ejemplo, grupo acetoxicarbonilmetilo, grupo propioniloxicarboniletilo, grupo benzoiloxibencilo o similares); grupo halosulfonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorosulfonilmetilo, grupo fluorosulfoniletilo, grupo fluorosulfonilpropilo, grupo clorosulfonilmetilo, grupo clorosulfoniletilo, grupo clorosulfonilpropilo, grupo bromosulfonilmetilo, grupo bromosulfoniletilo, grupo bromosulfonilpropilo, grupo yodosulfonilmetilo, grupo yodosulfoniletilo, grupo yodosulfonilpropilo o similares); grupo halosulfonilarilo (por ejemplo, grupo fluorosulfonilfenilo, grupo clorosulfonilfenilo, grupo bromosulfonilfenilo, grupo yodosulfonilfenilo o similares); grupo fosfoamidita; grupo halocarbonilalquilo C1 a C3 (por ejemplo, grupo fluorocarbonilmetilo, grupo fluorocarboniletilo, grupo fluorocarbonilpropilo, grupo clorocarbonilmetilo, grupo clorocarboniletilo, grupo clorocarbonilpropilo, grupo bromocarbonilmetilo, grupo bromocarboniletilo, grupo bromocarbonilpropilo, grupo yodocarbonilmetilo, grupo yodocarboniletilo, grupo yodocarbonilpropilo o similares); grupo halocarbonilarilo (por ejemplo, grupo fluorocarbonilfenilo, grupo clorocarbonilfenilo, grupo bromocarbonilfenilo, grupo yodocarbonilfenilo o similares); grupo isotiocianato, grupo isocianato; grupo haluro de fosforilo (por ejemplo, F, Cl, Br, I o similares); o similares.
Un ejemplo específico preferible del grupo de activación de reacción para un grupo formilo, incluye, por ejemplo, grupo hidrazida o similares.
Además, también es posible marcar una sustancia que va a marcarse, tras introducir el grupo de activación de reacción anterior para un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, sometiéndolo a una reacción con el grupo reactivo de la presente invención, y un grupo de activación de reacción de un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse en este caso, incluye también uno similar como el grupo de activación de reacción anterior de la presente invención.
En el grupo de activación de reacción de la presente invención es preferible, por ejemplo, un grupo succinimida (Su), un grupo maleimida (Ma) o similares.
Un ejemplo específico preferible de un grupo en el que se introduce el grupo de activación de reacción al grupo reactivo de la presente invención, incluye, por ejemplo, grupo -COOSu, grupo -CONH(CH2)4Ma o similares. Un compuesto de este tipo que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención también se incluye en el compuesto de la presente invención representado por la fórmula general [51].
Un ejemplo específico de un compuesto de la presente invención que contiene un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención incluye todos los compuestos en los que se introduce adicionalmente el grupo de activación de reacción anterior de la presente invención al grupo reactivo de la presente invención en el compuesto de la presente invención, por ejemplo, uno en el que el grupo de activación de reacción anterior está contenido en el grupo bivalente representado por T en las fórmulas generales [55] a [58], y en particular, es preferible uno en el que se introduce el grupo de activación de reacción anterior en el grupo reactivo de la presente invención representado por R20 en la fórmula general [60].
A continuación se mostrará un ejemplo del compuesto de la presente invención introducido con un grupo de activación de reacción de este tipo de la presente invención.
5 Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [55], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención, incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 25. Debe observarse que, en la tabla 25, R3”, R5” y R11” representado por la fórmula general [55] representan grupos -CH3; R7”, R9” y R10” representan átomos de hidrógeno; y R8” representa un grupo -SO3Na.
10 [Tabla 25]
15 Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [56], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención, incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 26. Debe observarse que, en la tabla 26, R3” R6” y R11” representados por la fórmula general [56] representan grupos -CH3; R7”, R9” y R10” representan átomos de hidrógeno; y R8” representa un grupo -SO3Na.
20 [Tabla 26]
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [57], que contiene el grupo de
25 activación de reacción de la presente invención, incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 27. Debe observarse que, en la tabla 27, R3”, R5” y R11” representado por la fórmula general [57] representan grupos -CH3; R7”, R9” y R10” representan átomos de hidrógeno; y R8” representa un grupo -SO3Na.
[Tabla 27] 30
Un ejemplo específico preferible del compuesto representado por la fórmula general [58], que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención, incluye por ejemplo, uno mostrado en la siguiente tabla 28. Debe 35 observarse que, en la tabla 28, R3”, R5” y R11” representado por la fórmula general [58] representan grupos -CH3; R7”, R9” y R10” representan átomos de hidrógeno; y R8” representa un grupo -SO3Na.
[Tabla 28]
De esta manera, un compuesto en el que el grupo de activación de reacción se introduce con un grupo reactivo de la presente invención también se incluye en el grupo del compuesto de la presente invención.
45 3-2. Un método de síntesis para el compuesto [51] de la presente invención 3-2-1. Síntesis de un complejo de compuesto de indolenina – compuesto de pirazol (corresponde al compuesto representado por la fórmula general [51] de la presente invención)
5 El compuesto representado por la fórmula general [51] puede sintetizarse, por ejemplo, mediante el siguiente método.
Se proporcionará explicación sobre un método para sintetizar el compuesto representado por la fórmula general [51] (en detalle, el compuesto representado por las fórmulas generales [55] a [58]), con referencia a un ejemplo del caso 10 que usa el compuesto representado por la fórmula general [55] (es decir, corresponde a uno en el que R1” y R2” en la fórmula general [51] forman el grupo bivalente representado por T).
15 (en la que A representa tetrafluoroborato o hexafluorofosfato; y R3” a R6”, R7” a R11”, R12”, R20” T3, T5, n y p son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que el compuesto representado por la fórmula general [61] corresponde a un compuesto, entre los compuestos representados por la fórmula general [51], en la que R1” es un grupo alquilo que tiene como sustituyente 20 el grupo representado por la fórmula general [2] (es decir, un grupo -T3-COOR12), y R2” es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2] (es decir, es un grupo -T5COOR12).
Además, el compuesto representado por la fórmula general [65] corresponde al caso, entre los compuestos representados por la fórmula general [55], en la que T es el grupo representado por la fórmula general [63] (en la 25 que R18 y R19 son grupos -CONH-).
Es decir, el compuesto representado por la fórmula general [61] (un compuesto que tiene el grupo reactivo de la presente invención) se somete a una reacción con el compuesto representado por la fórmula general [62] o carbonato de disuccinimidilo (DSC) (desde 2 hasta 20 veces en moles con respecto al compuesto representado por
30 la fórmula general [61]), a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un catalizador básico (aminas orgánicas tales como N-etildiisopropilamina, piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0] undec-7-eno y tri-n-butilamina) en un disolvente adecuado (amidas tales como N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida (DMA), acetamida y Nmetilpirrolidona) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [63].
35 Luego, el compuesto representado por la fórmula general [63] y el compuesto representado por la fórmula general
[64] se someten a una reacción a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un catalizador básico (por ejemplo hidrogenocarbonatos de metales alcalinos tales como hidrogenocarbonato de sodio y hidrogenocarbonato de potasio; aminas orgánicas tales como N-etildiisopropilamina, piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4
40 dimetilaminopiridina, 1,5- diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno y tri-n-butilamina; o similares) en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona; agua; o similares) para obtener el compuesto objetivo representado por la fórmula general [65].
Otros compuestos representados por la fórmula general [51] pueden obtenerse también usando materiales de 45 partida correspondientes, y sometiéndolos a síntesis según sea apropiado según el método anterior.
3-2-2. Síntesis de un compuesto de la presente invención que contiene un grupo de activación de reacción (un grupo obtenido mediante activación de un grupo reactivo de la presente invención)
50 Se proporcionará explicación sobre un método para introducir el grupo de activación de reacción de la presente invención al grupo reactivo de la presente invención, con referencia a un ejemplo del caso, entre los compuestos representados por la fórmula general [51], de uso del compuesto representado por la fórmula general [55] (es decir, corresponde a uno en el que R1” y R2” en la fórmula general [51] forman el grupo bivalente representado por T); y aún más, entre los compuestos representados por la fórmula general [65], el caso de uso del compuesto en el que p es 5, uno de los 5 R20 es el grupo representado por la fórmula general [2] (es decir, corresponde al compuesto representado por la siguiente fórmula general [66]).
(en la que q representa un número entero de desde 2 hasta 10; y R3” a R11”, R12, T3, T5, A y n son los mismos que 10 anteriormente).
Debe observarse que el compuesto representado por la fórmula general [66] corresponde a un compuesto, entre los compuestos representados por la fórmula general [65], en la que p es 5, uno de los 5 R20 es el grupo representado por la fórmula general [2], y los otros R20 son átomos de hidrógeno.
15 En las fórmulas generales [68] y [69], q representa un número entero de desde 2 hasta 10.
Es decir, el compuesto representado por la fórmula general [66] (un compuesto que tiene el grupo reactivo de la presente invención) se somete a una reacción con un reactivo de succinimidación, por ejemplo, el compuesto 20 representado por la fórmula general [62] o similares (desde 1 hasta 10 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [66]), a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un catalizador básico (por ejemplo aminas orgánicas tales como N-etildiisopropilamina, piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undeca-7-eno y tri-nbutilamina, etc.) en un disolvente adecuado (por ejemplo amidas tales como DMF, DMA, acetamida, N
25 metilpirrolidona, etc.) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [67] (un compuesto que tiene el grupo succinimida, que es un grupo de activación de reacción de la presente invención).
El compuesto representado por la fórmula general [67] se somete a una reacción con un reactivo de maleimidación, por ejemplo, el compuesto representado por la fórmula general [68] o similares (desde 1 hasta 10 veces en moles 30 con respecto al compuesto representado por la fórmula general [67]), a de 0 a 40ºC durante de 0,1 a 12 horas, en presencia de un catalizador básico (por ejemplo aminas orgánicas tales como trietilamina, N-etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, piperidina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undeca-7-eno y tri-n-butilamina, etc.) en un disolvente adecuado (por ejemplo amidas tales como DMF, DMA, acetamida, N-metilpirrolidona, etc.) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [69] (un
35 compuesto que tiene el grupo maleimida, que es un grupo de activación de reacción de la presente invención).
El reactivo de succinimidación relevante a la presente invención, incluye todos los usados en este campo sin limitarse a los compuestos representados por la fórmula general [62], y por ejemplo, carbonato de di(N-succinimidilo) (DSC), tetrafluoroborato de 2-succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio(TSTU), tetrafluoroborato de 2-(5-norborneno-2,3
40 dicarboxiimida)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TNTU) o similares.
Como método para introducir un grupo de activación de reacción de la presente invención, distinto a los grupos de activación de reacción anteriores, pueden obtenerse usando materiales de partida correspondientes, y sometiéndolos a síntesis según sea apropiado según el método anterior.
3-2-3. Síntesis de un complejo de compuesto de indolenina – compuesto de pirazol (un compuesto representado por la fórmula general [75])
A continuación se proporcionará explicación sobre un método de síntesis para el compuesto representado por la fórmula general [75] (un complejo de compuesto de indolenina – compuesto de pirazol).
10 (en la que R17 representa grupo alquilo o grupo arilo; y definiciones de R1” a R6”, R11”, n y otros son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R1”, R3” y R4” tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2], y al menos uno de R2”, R5” y R6” tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2]).
15 En las fórmulas generales [72] y [73], el grupo alquilo representado por R17 puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C3, y específicamente, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo sec-pentilo, grupo terc-pentilo, grupo neo-pentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, grupo sec-hexilo, grupo terc-hexilo, grupo neohexilo, grupo n
20 heptilo, grupo isoheptilo, grupo sec-heptilo, grupo terc-heptilo, grupo neoheptilo, grupo n-octilo, grupo isooctilo, grupo sec-octilo, grupo terc-octilo, grupo neooctilo, grupo n-nonilo, grupo isononilo, grupo sec-nonilo, grupo terc-nonilo, grupo neononilo, grupo n-decilo, grupo isodecilo, grupo sec-decilo, grupo terc-decilo, grupo neodecilo, grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo, grupo cicloheptilo, grupo ciclooctilo, grupo ciclononilo, grupo ciclodecilo o similares.
25 El grupo arilo representado por R17 incluye habitualmente uno que tiene C6 a C10, y específicamente, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo o similares.
Es decir, en primer lugar, se disuelven el compuesto de indolenina representado por la fórmula general [70] (una
30 parte de esqueleto de indolenina), el compuesto representado por la fórmula general [71] [desde 1 hasta 2 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [70]], y un anhídrido ácido representado por la fórmula general [72] [desde 1 hasta 20 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [70]] (por ejemplo, anhídrido acético, anhídrido propiónico, anhídrido butírico, anhídrido benzoico o similares), si es necesario, en un disolvente (ácidos carboxílicos tales como ácido acético, ácido propiónico y ácido
35 butírico; nitrilos tales como acetonitrilo, propionitrilo y n-butironitrilo; o similares), y se someten a una reacción a de 0 a 150ºC (preferiblemente a de 40 a 120ºC) durante de 0,1 a 24 horas (preferiblemente durante de 0,5 a 12 horas, y más preferiblemente durante de 1 a 8 horas) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [73].
Luego, el compuesto representado por la fórmula general [73] y el compuesto representado por la fórmula general
40 [74] (una parte de esqueleto de pirazol) [desde 0,5 hasta 10 veces en moles, preferiblemente desde 1 hasta 5 veces en moles con respecto al compuesto representado por la fórmula general [73]] se someten a una reacción a de 0 a 150ºC (preferiblemente a de 40 a 120ºC) durante de 0,1 a 24 horas (preferiblemente durante de 0,5 a 12 horas, y más preferiblemente durante de 1 a 8 horas) en presencia de un catalizador básico (por ejemplo aminas orgánicas tales como piridina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piperidina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5
45 diazabiciclo[4.3.0]nona-5-eno, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undeca-7-eno y tri-n-butilamina; hidruros metálicos tales como hidruro de sodio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio, etc.), usando agente de condensación de deshidratación (por ejemplo agentes de deshidratación inorgánicos tales como ácido sulfúrico concentrado, pentóxido de difósforo y cloruro de zinc anhidro; carbodiimidas tales como diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida, clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; anhídrido acético, ácido
50 polifosfórico, carbonildiimidazol, cloruro de p-toluenosulfonilo, etc.), y, si es necesario, en un disolvente (por ejemplo amidas tales como N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida(DMA), acetamida y N-metilpirrolidona; nitrilos tales como acetonitrilo, propionitrilo y n-butironitrilo y similares; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, etilenglicol y 1,4-butanodiol; éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano, anisol y etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido, etc.) para obtener el compuesto representado por la fórmula
55 general [75].
3-2-4 Síntesis de una parte de esqueleto de indolenina (el compuesto representado por la fórmula general [70])
A continuación se proporcionará explicación sobre un método de síntesis para los compuestos representados por la
fórmula general [70] (una parte de esqueleto de indolenina).
5 (en la que X representa un átomo de halógeno; y R1”, R3”, R4” y R7” a R10” son los mismos que anteriormente).
En la fórmula general [79], el átomo de halógeno representado por X, incluye, por ejemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de yodo o similares.
10 Es decir, el compuesto de cetona representado por la fórmula general [76] y el compuesto representado por la fórmula general [77] se someten a una reacción a de 40 a 250ºC durante de 0,1 a 24 horas, en un disolvente adecuado (por ejemplo ácidos carboxílicos tales como ácido acético y ácido propiónico; alcoholes tales como etilenglicol y 1,4-butanodiol, etc.) para obtener el compuesto representado por la fórmula general [78] (véase por ejemplo, Journal of Organic Chemistry, 42 (14), 2474-80, 1977 o similares).
15 Luego, el compuesto representado por la fórmula general [78] y el compuesto de haluro representado por la fórmula general [79] o el compuesto de tosilato representado por la fórmula general [80] se disuelven en un disolvente adecuado (por ejemplo hidrocarburos aromáticos halogenados tales como clorobenceno y 1,2-diclorobenceno; hidrocarburos halogenados tales como 1,2-dicloroetano; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno, xileno y
20 benceno; amidas tales como DMA, DMF, acetamida y N-metilpirrolidona, etc.), y se someten a una reacción a de 40 a 200ºC durante de 1 hasta 24 horas para obtener el compuesto representado por la fórmula general [70] (véase por ejemplo, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 947-952, 1984 o similares).
El compuesto de cetona representado por la fórmula general [76] puede usar un producto comercial (por ejemplo, 3
25 metil-2-butanona, 3-metil-2-pentanona, 3-metil-2-hexanona, 1-ciclopropiletanona, 1-ciclobutiletanona o similares), o uno sintetizado según sea apropiado por un método habitual: Específicamente, incluye, por ejemplo, un método en el que 2-metilacetoacetato de etilo y un compuesto que tiene un grupo saliente (por ejemplo, átomo de halógeno, grupo tosilato o similares) se someten a una reacción a de -80 a 100ºC durante de 0,1 a 24 horas, en presencia de un catalizador básico (por ejemplo hidruros metálicos tales como hidruro de sodio e hidruro de potasio; carbonatos
30 de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio y carbonato de potasio; alcóxidos de metales alcalinos tales como metóxido de sodio, etóxido de sodio y terc-butóxido de potasio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio; amidas de metales alcalinos tales como diisopropilamida de litio, etc.), en un disolvente adecuado (por ejemplo amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y etilenglicol; éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano y
35 etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido, etc.), y luego la disolución resultante se somete a una descarbonatación usando un catalizador ácido (referido en, por ejemplo, Modern Synthetic Reactions, California, 2ª ed., páginas 492, 510 y 756 (1972) o similares) o similares.
El compuesto representado por la fórmula general [77], puede usar un producto comercial, o uno sintetizado según 40 sea apropiado por un método habitual.
3-2-5. Síntesis de una parte de esqueleto de pirazol (un compuesto representado por la fórmula general [74])
A continuación se proporcionará explicación sobre un método de síntesis para el compuesto representado por la 45 fórmula general [74] (una parte de esqueleto de pirazol).
(en la que R2”, R5” a R6”, R11” y X son los mismos que anteriormente).
Es decir, el compuesto de dicetona representado por la fórmula general [81] e hidrazina se someten a una reacción de deshidratación a de 60ºC a 100ºC durante de 1 a 4 horas en un disolvente adecuado (por ejemplo alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y etilenglicol, etc.), para obtener un compuesto de 4H-pirazol representado por la fórmula general [82] (véase por ejemplo, Adv. Heterocycle Chem., Vol. 34, 53-78, 1983 o similares).
Luego, el 4H-pirazol representado por la fórmula general [82] se somete a una reacción de N-alquilación con un compuesto de haluro representado por la fórmula general [83] o el compuesto de tosilato representado por la fórmula general [84], a de 80ºC a 140ºC durante de 1 a 12 horas en un disolvente adecuado (por ejemplo hidrocarburos aromáticos halogenados tales como clorobenceno y 1,2-diclorobenceno; hidrocarburos halogenados tales como 1,2dicloroetano; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno, xileno y benceno; amidas tales como DMF, DMA, acetamida y N-metilpirrolidona, etc.), para obtener el compuesto representado por la fórmula general [74] (véase por ejemplo, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 947-952, 1984 o similares).
El compuesto de dicetona representado por la fórmula general [81], puede usar un producto comercial (por ejemplo, 3,3-dimetil-2,4-pentanodiona o similares), o uno sintetizado según sea apropiado por un método habitual: Específicamente, incluye, por ejemplo, un método en el que 3-metil-2,4-pentanodiona o éster etílico del ácido 4acetil-5-oxohexanoico y un compuesto que tiene un grupo saliente (por ejemplo, átomo de halógeno, grupo tosilato o similares) se someten a una reacción a de -80 a 100ºC durante de 0,1 a 24 horas, en presencia de un catalizador básico (hidruros metálicos tales como hidruro de sodio, hidruro de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio; alcóxidos de metales alcalinos tales como metóxido de sodio, etóxido de sodio, terc-butóxido de potasio; compuestos de metales alcalinos básicos tales como n-butil-litio; amidas de metales alcalinos tales como diisopropilamida de litio; o similares), en un disolvente adecuado (amidas tales como DMF, DMA, acetamida, N-metilpirrolidona; alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, etilenglicol; éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano, etilenglicol monoetill éter; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido; o similares), (referido en, por ejemplo, Modern Synthetic Reactions, California, 2ª ed., páginas 492, 510 y 756 (1972) o similares) o similares.
3-3. Propiedad del compuesto [51] de la presente invención
El compuesto [51] resultante de la presente invención se espera que va usarse como sustancia de marcaje fluorescente de, por ejemplo, un método de extracción de ácido nucleico, un método de inmunoensayo o similares.
4. Un compuesto marcado de la presente invención y un método de marcaje
4-1. Un compuesto marcado de la presente invención (un compuesto marcado con el compuesto [51] de la presente invención)
El compuesto marcado de la presente invención incluye uno en el que el compuesto de la presente invención (sustancia de marcaje) y la sustancia que va a marcarse están unidos directa o indirectamente, y específicamente incluye uno en el que el grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, está unido directa o indirectamente con una sustancia que va a marcarse.
En cuanto al grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo (puede abreviarse más adelante en el presente documento como “grupo reactivo de la presente invención”), en el compuesto de la presente invención que va a unirse a una sustancia que va a marcarse, es preferible que estén contenidos habitualmente en R1” a R11” en la fórmula general [1], o en un grupo bivalente formado por cualquiera de R1” y R2”, R4” y R5”, R1” y R6” y R2” y R4”, (es decir, un grupo bivalente representado por T en las fórmulas generales [7] a [10]), preferiblemente en un grupo bivalente representado por T en las fórmulas generales [7] a [10], que es un grupo bivalente representado por la fórmula general [36], y más preferiblemente en R20 en la fórmula general [36].
Una sustancia que va a marcarse mediante un compuesto de la presente invención, incluye, por ejemplo, todos los usados habitualmente como sustancia que va a marcarse en este campo, sin embargo, específicamente incluye, por ejemplo, biotina, avidina, estreptavidina, aminoácido, proteína, péptido, sustrato enzimático, hormona, linfocina, metabolito, receptor, ligando, agonista, antagonista, antígeno, hapteno, dendrímero, lectina, toxina, hidratos de carbono, sacáridos tales como fructosa, polisacáridos y similares; nucleósido (por ejemplo, ribonucleósido, desoxirribonucleósido o similares), nucleótido (por ejemplo, ribonucleótido, desoxirribonucleótido o similares), ácido nucleico (oligonucleótido, polinucleótido) [por ejemplo, ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN), o similares], derivados de ácido nucleico (por ejemplo, fragmento de ADN, fragmento de ARN o similares), fármacos naturales, virus, componentes de virus, componentes de levaduras, hematocitos, componentes de hematocitos, células biológicas, componentes de hematocitos no celulares, bacterias, componentes bacterianos, quistes de lípidos naturales o sintéticos, fármacos naturales y sintéticos, venenos, agentes contaminantes medioambientales, polímeros, partículas de polímero, partículas de vidrio, materiales de superficie de vidrio, partículas de plástico, materiales de superficie de plástico, películas de polímero, conductores y semiconductores; junto con anticuerpo para el mismo y productos de degradación del mismo (por ejemplo, Fab, Fab’, F(ab’)2 y similares) o similares, y entre éstos, es preferible por ejemplo, nucleótido, anticuerpo o productos de degradación del mismo o similares.
El nucleósido está compuesto por una base de purina o una base de pirimidina, y pentosa como resto de sacárido, y específicamente incluye, ribonucleósido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-ribosa; desoxirribonucleósido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2-desoxirribosa o similares.
El nucleótido está compuesto por una base de purina o una base de pirimidina, y pentosa como resto de sacárido, y ácido fosfórico, y específicamente incluye, ribonucleótido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-ribosa; desoxirribonucleótido en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2-desoxirribosa o similares.
Además, el nucleósido y nucleótido, incluyen también, por ejemplo, como antibióticos de nucleósidos, uno en el que un resto de sal como una parte fundamental del mismo no es una estructura de purina o una estructura de pirimidina, uno en el que estas estructuras están modificadas, uno en el que el resto de sacárido no es D-ribosa o Ddesoxirribosa, uno en el que estos están modificados, uno en el que un resto de ácido fosfórico (-OPO3-) está sustituido con otro elemento [por ejemplo, un átomo de azufre (-OPO2S-) o similares), uno en el que el resto de ácido fosfórico está modificado o similares.
El ácido nucleico tiene el nucleótido como unidad fundamental, y es un oligo o polinucleótido similar a una cadena, en el que este ácido fosfórico está unido mediante un enlace diéster entre los carbonos de los sitios 3’ y 5’ del sacárido, en cada uno de los nucleótidos, y específicamente incluye, ácido ribonucleico (ARN) en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es ribosa; ácido desoxirribonucleico (ADN) en el que, por ejemplo, el resto de sacárido es D-2-desoxirribosa o similares.
Estos nucleótidos, ácido nucleicos y ácidos nucleicos derivados pueden ser los compuestos por cadenas de ácido nucleico de cualquiera de uno monocatenario, bicatenario o de más de dos cadenas. Además, pueden modificarse según sea apropiado con uno adecuado, siempre que está dentro de un intervalo en el que pueda conseguirse un objeto de la presente invención.
“Un compuesto de la presente invención y una sustancia que va a marcarse están unidos directamente” significa que, por ejemplo, el compuesto de la presente invención (concretamente, un grupo reactivo de la presente invención en el compuesto) se une a un grupo funcional en la sustancia que va a marcarse (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares) mediante, por ejemplo, un enlace iónico, un enlace covalente o similares. Además, “un compuesto de la presente invención y una sustancia que va a marcarse están unidos indirectamente” significa que, por ejemplo, un grupo reactivo de la presente invención se une al grupo funcional en la sustancia que va a marcarse, por medio de un conector o similares (por ejemplo, mediante un enlace iónico, un enlace covalente o similares). El conector usado en la unión indirecta, incluye todos los usados habitualmente en este campo.
4-2. Un método de marcaje de la presente invención
En cuanto a un método para marcar una sustancia que va a marcarse usando el compuesto [1] de la presente invención, el marcaje puede llevarse a cabo seleccionando, según sea apropiado, un método conocido por si mismo, y el marcaje puede llevarse a cabo fácilmente, por ejemplo, sometiendo el grupo reactivo de la presente invención [es decir, el grupo representado por la fórmula general [2] (por ejemplo, un grupo carboxilo o similares), el grupo representado por la fórmula general [3] (por ejemplo, un grupo sulfo o similares), grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol, o grupo formilo), contenidos en al menos uno de R1 a R11 en la fórmula general [51], o un grupo bivalente formado por cualquiera de R1” y R2”, R4” y R5”, R1” y R6”, y R2” y R4”, y un grupo funcional de la sustancia que va a marcarse (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo tiol, grupo hidroxilo, grupo formilo o similares), (puede abreviarse más adelante en el presente documento como “un grupo funcional de la sustancia que va a marcarse”), para la unión directa mediante, por ejemplo, un enlace iónico, un enlace covalente o similares; o la unión a través de un conector introducido a una parte de la sustancia que va a marcarse.
Además, en cuanto a un método para marcar nucleótido (una sustancia que va a marcarse), el marcaje puede llevarse a cabo fácilmente mediante un método usando una enzima, distinto de un método para marcar usando la reacción química anterior, y la enzima usada en este caso, incluye todas las usadas habitualmente en este campo.
El grupo reactivo de la presente invención puede introducirse adicionalmente con un grupo que mejora la reactividad con un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse (un grupo de activación de reacción de la presente invención).
Debe observarse que, un grupo de activación de reacción de este tipo está incluido en un grupo reactivo de la presente invención, y un compuesto que contiene un grupo de activación de reacción de este tipo también está incluido en un compuesto de la presente invención.
Un ejemplo específico de un método para marcar una sustancia que va a marcarse, usando un compuesto de la presente invención, incluye, por ejemplo, (1) un método de marcaje introduciendo adicionalmente un grupo de activación de reacción de la presente invención a un grupo reactivo de la presente invención, y luego unir al mismo un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse (puede abreviarse más adelante en el presente documento simplemente como “un grupo funcional”), (2) un método de marcaje introduciendo un grupo de activación de reacción de la presente invención a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y luego unir al mismo un grupo reactivo de la presente invención, (3) un método de marcaje formando enlace con un reactivo de conector reactivo multivalente, habitualmente usado en este campo, a un grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y (4) un método de marcaje introduciendo el grupo de activación de reacción igual o diferente para un grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y luego unir al mismo un conector, habitualmente usado en este campo o similares.
Como el grupo de activación de reacción de la presente invención, no se limita especialmente siempre que pueda unirse a un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, y se incluyen todos los usados habitualmente en este campo, por ejemplo, uno que activa la reactividad con un grupo amino (denominado más adelante en el presente documento como “un grupo de activación de reacción para un grupo amino”), uno que activa la reactividad con un grupo tiol (denominado más adelante en el presente documento como “un grupo de activación de reacción para un grupo tiol“), uno que activa la reactividad con un grupo hidroxilo (denominado más adelante en el presente documento como “un grupo de activación de reacción para un grupo hidroxilo”), uno que activa la reactividad con un grupo formilo (denominado más adelante en el presente documento como “un grupo de activación de reacción para un grupo formilo”) o similares. Un ejemplo específico preferible de estos es un grupo de activación de reacción tal como se describió anteriormente.
Además, también es posible marcar una sustancia que va a marcarse, tras introducir el grupo de activación de reacción anterior para un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, sometiéndolo a una reacción con el grupo reactivo de la presente invención, y un grupo de activación de reacción de un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse en este caso, incluye también uno similar al grupo de activación de reacción anterior de la presente invención.
En el grupo de activación de reacción de la presente invención es preferible, por ejemplo, un grupo succinimida (Su), un grupo maleimida (Ma) o similares.
Un ejemplo específico preferible de un grupo en el que se introduce el grupo de activación de reacción al grupo reactivo de la presente invención, incluye, por ejemplo, grupo -COOSu, grupo -CONH(CH2)4Ma o similares. Un compuesto de este tipo que contiene el grupo de activación de reacción de la presente invención también está incluido en el compuesto de la presente invención representado por la fórmula general [1].
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es el grupo representado por la fórmula general [2] (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo carboxilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se une al mismo, es preferible que se una al grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse, o de un conector introducido al mismo (abreviado a continuación en el presente documento simplemente como “una sustancia que va a marcarse”), y está incluido, como método para el mismo, (i) un método para someter a una reacción usando, por ejemplo, un reactivo de condensación tal como N-hidroxisuccinimida y carbodiimida, (ii) un método para formar un cloruro de carboxilo sometiendo el cloruro de tionilo a la acción con un grupo carboxilo de la presente invención, y luego someterlo a una reacción con un grupo amino de una sustancia que va a marcarse, (iii) un método para someter a una reacción mediante la adición de ácido clorhídrico y metanol a un grupo carboxilo de la presente invención, y luego someterlo a una reacción mediante la adición de hidrazina para formar hidrazida, y someter a activación mediante la adición adicional de nitrito de sodio y ácido clorhídrico al mismo para preparar acilazida, y luego someterlo a una reacción con grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo de una sustancia que va a marcarse, (iv) un método para formar un anhídrido a partir de un grupo carboxilo de la presente invención, y luego someterlo a una reacción con un grupo amino de una sustancia que va a marcarse (condensación por deshidratación); o similares.
Además, en el caso en el que un grupo reactivo de la presente invención es el grupo representado por la fórmula general [3] (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo sulfo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a enlace con el mismo, es preferible que se someta a unión a grupo amino, grupo imidazol, grupo tiol o grupo fenol de la sustancia que va a marcarse, y un método para el mismo, incluye por ejemplo, (i) un método para someter ácido clorosulfónico a una reacción con el grupo sulfo de la presente invención formando sulfocloruro, y luego someterlo a una reacción con grupo amino, grupo imidazol, grupo tiol o grupo fenol de una sustancia que va a marcarse.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo amino (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo amino de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a enlace con el mismo, es preferible someterlo a unión al grupo carboxilo, grupo amino, grupo fenol o grupo tiol, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método para el mismo, incluye por ejemplo, (i) un método para someter el grupo amino de la presente invención a unión al grupo amino de una sustancia que va a marcarse o a un conector del mismo, usando un reactivo de condensación tal como N-hidroxisuccinimida y carboxidiimida, (ii) un método para preparar fosgeno para actuar con el grupo amino de la presente invención para convertir a un isocianato, y luego someterlo a unión al grupo amino de la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo, (iii) un método para someter glutaraldehído a una reacción al grupo amino de la presente invención, y luego someterlo a una reacción con grupo amino, o grupo fenol de la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo, (iv) en el caso en el que la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo es uno derivado de sacárido o sacárido-proteína, un método para someterlo a una reacción con ácido peryódico por adelantado, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino de la presente invención, y someterlo adicionalmente a reducción usando borohidruro de sodio o similares y (v) un método para someter el grupo amino de la presente invención a maleimidación o piridilditiosulfuración con un espaciador bivalente que tiene un grupo maleimida (por ejemplo, éster de N-hidroxisuccinmida de m-maleimidabenzoílo), o un espaciador bivalente que tiene un grupo piridilditiosulfuro (por ejemplo, 4-succinimidiloxicarbonil-a-(2-piridilditio)tolueno o similares), y luego someterlo a una reacción con el grupo tiol de la sustancia que va a marcarse o el conector del mismo.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo hidroxilo (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo hidroxilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a una reacción con el mismo, es preferible que se someta a unión a grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método para el mismo, incluye por ejemplo, (i) un método para formar un derivado de triazinilo sometiendo un grupo de cloruro cianúrico a la acción con el grupo hidroxilo de la presente invención, y sometiéndolo a una reacción con el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, (ii) un método para someter el grupo hidroxilo de la presente invención a acetilación, luego bromación, intercambio de bromo-yodo usando yoduro de sodio, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, (iii) un método para someter bromuro de cianógeno a la acción con el grupo hidroxilo de la presente invención para activación del mismo, y luego someterlo a una reacción con el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un grupo tiol de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a una reacción con el mismo, es preferible que se someta a unión al grupo amino, grupo tiol o grupo hidroxilo, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método para el mismo, incluye por ejemplo, (i) un método para someter el grupo amino de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo a maleimidación o piridilditiosulfuración con un espaciador bivalente que tiene un grupo maleimida (por ejemplo, éster de N-hidroxisuccinmida de m-maleimidabenzoílo) o un espaciador bivalente que tiene un grupo piridilditiosulfuro (por ejemplo, 4-succinimidiloxicarbonil-a-(2-piridilditio)tolueno o similares), y luego someter el grupo tiol de la presente invención a una reacción con el mismo, y (ii) un método para someter el grupo tiol de la presente invención a una reacción con el grupo tiol de la sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, usando un espaciador bivalente tal como bismaleimidahexano, 1,4-di-[3’-2’-piridilditio(propionamida)]butano o similares.
En el caso en el que el grupo reactivo de la presente invención es un grupo formilo (abreviado a continuación como “un grupo formilo de la presente invención”), y una sustancia que va a marcarse se somete a una reacción con el mismo, es preferible que se someta a unión al grupo amino o similares, que es un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo, y un método para el mismo, incluye por ejemplo, (i) un método para someter el grupo amino de una sustancia que va a marcarse o un conector del mismo a una reacción directa con el grupo formilo de la presente invención, y luego someterlo a reducción usando borohidruro de sodio o similares.
Un reactivo de conector reactivo polivalente, incluye todos los usados habitualmente en este campo, sin embargo, específicamente, por ejemplo, un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo de la presente invención y un grupo funcional de una sustancia que va a marcarse es un grupo amino, y el otro es un grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo tiol”); un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo y el grupo funcional es un grupo amino, y el otro es el grupo representado por la fórmula general [2] (grupo carboxilo o similares) (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo carboxilo”); un reactivo bivalente en el caso en el que uno del grupo reactivo y el grupo funcional es un grupo tiol, y el otro es un grupo hidroxilo (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo tiol y grupo hidroxilo”); un reactivo bivalente en el caso en el que tanto el grupo reactivo como el grupo funcional son grupos amino (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo amino y grupo amino”); un reactivo bivalente en el caso en el que tanto el grupo reactivo como el grupo funcional son grupos tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un reactivo bivalente de grupo tiol y grupo tiol”); o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo tiol incluye, por ejemplo, N-(amaleimidaacetoxi)succinimida, N-[y-maleimidabutiriloxi]succinimida, N-(6-maleimidacaproiloxi)succinimida, N-(8maleimidacapriloxi)succinimida, N-(11-maleimidaundecanoiloxi)succinimida, m-maleimidabenzoil-Nhidroxisuccinimida, 4-[p-maleimidafenil]butirato de succinimidilo, 4-[N-maleimidametil]ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo, 6-[1-maleimidapropionamida]hexanoato de succinimidilo, 3-(2-piridilditio)propionato de N-succinimidilo
o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo carboxilo incluye, por ejemplo, clorhidrato del ácido 3-[(2-aminoetil)ditio]propiónico, clorhidrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo tiol y grupo hidroxilo incluye, por ejemplo, isocianato de N-[pmaleimidafenilo] o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo amino y grupo amino, incluye, por ejemplo, N-succinimidiladipato de metilo, glutarato de disuccinimidilo, suberato de disuccinimidilo, etilenglicol-bis[succinato de succinimidilo], ditiobis[propionato de succinimidilo], tartrato de disuccinimidilo, bis[2(succinimidaoxicarboniloxi)etil]sulfona, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenceno o similares.
Un ejemplo específico del reactivo bivalente de grupo tiol y grupo tiol, incluye, por ejemplo, bis-maleimidaetano, 1,4bis-maleimidabutano, bis-maleimidahexano, 1,4-bis-maleimidil-2,3-dihidroxibutano, ditio-bis-maleimidaetano, 1,6hexano-bis-vinilsulfona, 1,8-bis-maleimida-dietilenglicol, 1,1,1-bis-maleimida-trietilenglicol, 1,4-di-[3’-(2’-piridilditio)propionamida]butano o similares.
4-3. Preparación de un nucleótido marcado usando un compuesto de la presente invención
Como ejemplo específico de un método para marcar una sustancia que va a marcarse usando el compuesto [1] de la presente invención, se proporcionará explicación con referencia a un ejemplo del caso del marcaje del nucleótido (una sustancia que va a marcarse).
Es decir, en el caso de marcaje del nucleótido que tiene un grupo amino en una base del mismo (por ejemplo, citidina, adenina, guanina o similares), el grupo reactivo en el compuesto la presente invención puede unirse directamente, o el grupo obtenido activando un grupo reactivo del compuesto puede unirse la presente invención (grupo de activación de reacción), y entre ellos, es preferible que se someta a unión a un grupo representado por la fórmula general [2], o un grupo introducido con el grupo de activación de reacción (grupo éster activado), y en particular, es más preferible que se someta a unión al grupo éster activado.
Además, en el caso en el que el compuesto de la presente invención se somete a unión indirecta al nucleótido, en primer lugar, en una base o un grupo hidroxilo del nucleótido, se sintetiza un derivado introducido con un conector que tiene un grupo funcional tal como, por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo y grupo tiol (abreviado a continuación en el presente documento como “un derivado de nucleótido”), y luego, en el caso de someter, por ejemplo, a unión al grupo amino en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo reactivo o al grupo de activación de reacción en el compuesto de la presente invención (en particular, es preferible grupo carboxilo o el grupo éster activado); en el caso de someter a unión, por ejemplo, al grupo carboxilo en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo amino, que es grupo reactivo, en el compuesto de la presente invención; y en el caso de someter a unión, por ejemplo, al grupo tiol en el derivado de nucleótido, puede someterse a unión al grupo maleimida (grupo de activación de reacción) en el compuesto de la presente invención. Como el conector que va usarse, puede adoptarse uno cualquiera usado habitualmente en este campo, y un enlace éster, un enlace éter y/o un enlace amida también puede estar contenido en el conector.
Se proporcionará explicación sobre un método de marcaje usando el compuesto [51] de la presente invención, con referencia a un ejemplo de uno, entre los compuestos de la presente invención, en el que un grupo carboxialquilo contenido en R1” (es decir, corresponde al caso en el que R1” es un grupo alquilo que tiene como sustituyente el grupo representado por la fórmula general [2]) está unido indirectamente a un residuo de nucleótido, por medio de un conector o similares.
En el caso anterior, como conector, puede usarse todos los que se usan en este campo, y específicamente, se incluye un conector con una estructura representada por la siguiente fórmula general (A):
(en la que E representa -CH=CH- o -C:C-; X e Y representan cada uno independientemente grupo alquileno; y T10 representa -O- o -NH-CO-).
En la fórmula general (A), el grupo alquileno representado por X, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y preferiblemente uno de cadena lineal, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C1 a C6, más preferiblemente C1 a C3, y específicamente, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno, grupo hexametileno, grupo heptametileno, grupo octametileno, grupo nonametileno, grupo decametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo 1-metiltrimetileno, grupo 2-metiltrimetileno, grupo 1,1-dimetiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo etiletileno, grupo 1-metiltetrametileno, grupo 1,1-dimetiltrimetileno, grupo 2,2-dimetiltrimetileno, grupo 2-etiltrimetileno, grupo 1-metilpentametileno, grupo 1-metilhexametileno, grupo 1metilheptametileno, grupo 1,4-dietiltetrametileno, grupo 2,4-dimetilheptametileno, grupo 1-metiloctametileno y grupo 1-metilnonametileno; grupo alquileno cíclico tal como grupo ciclopropileno, grupo 1,3-ciclobutileno, grupo 1,3ciclopentileno, grupo 1,4-ciclohexileno, grupo 1,5-cicloheptileno, grupo 1,5-ciclooctileno, grupo 1,5-ciclononileno y
5 grupo 1,6-ciclodecaleno; o similares.
El grupo alquileno representado por Y, puede ser uno cualquiera de cadena lineal, ramificado y cíclico, y preferiblemente uno de cadena lineal, e incluye uno que tiene habitualmente C1 a C10, preferiblemente C2 a C8, más preferiblemente C2 a C6, y específicamente, por ejemplo, grupo alquileno de cadena lineal tal como grupo metileno, 10 grupo etileno, grupo trimetileno, grupo tetrametileno, grupo pentametileno, grupo hexametileno, grupo heptametileno, grupo octametileno, grupo nonametileno, grupo decametileno; grupo alquileno ramificado tal como grupo etilideno, grupo propileno, grupo isopropilideno, grupo 1-metiltrimetileno, grupo 2-metiltrimetileno, grupo 1,1-dimetiletileno, grupo 1,2-dimetiletileno, grupo etiletileno, grupo 1-metiltetrametileno, grupo 1,1-dimetiltrimetileno, grupo 2,2dimetiltrimetileno, grupo 2-etiltrimetileno, grupo 1-metilpentametileno, grupo 1-metilhexametileno, grupo 1
15 metilheptametileno, grupo 1,4-dietiltetrametileno, grupo 2,4-dimetilheptametileno, grupo 1-metiloctametileno, grupo 1-metilnonametileno; grupo alquileno cíclico tal como grupo ciclopropileno, grupo 1,3-ciclobutileno, grupo 1,3ciclopentileno, grupo 1,4-ciclohexileno, grupo 1,5-cicloheptileno, grupo 1,5-ciclooctileno, grupo 1,5-ciclononileno, grupo 1,6-ciclodecaleno; o similares.
20 El nucleótido marcado relevante a la presente invención, incluye un residuo de nucleótido marcado con el compuesto [51] de la presente invención, directa o indirectamente por medio de un conector o similares, específicamente, por ejemplo, un residuo de nucleótido representado por la siguiente fórmula general [74]:
25 [en la que Q1 representa un residuo de nucleótido; V1 representa un conector; y W2 representa la siguiente fórmula general [51’]:]
30 (en la que Z1 representa un conector para la unión a V1; p’ representa un número entero desde 1 hasta 19; y R3” a R11”, R18 a R19, y T3 a T5 son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que el compuesto representado por la fórmula general [51’] corresponde a un derivado de
35 compuesto en el caso en el que, entre los compuestos representados por la fórmula general [51], un grupo bivalente formado por R1” y R2” es el grupo representado por la fórmula general [60], (en la que R20 es un grupo representado por la fórmula general [73]).
El residuo de nucleótido representado por Q1 en la fórmula general [74], incluye, por ejemplo, residuo de 40 ribonucleótido, residuo de 2’-desoxirribonucleótido, residuo de 3’-desoxirribonucleótido, residuo de 5’desoxirribonucleótido, residuo de 2’,3’-didesoxirribonucleótido o similares.
Específicamente, un residuo de nucleótido de este tipo, incluye, por ejemplo, residuo de nucleótido de purina representado por la fórmula general (i), (ii), (v), (vi), (vii), (viii), (xii) y (viii), o residuo de nucleótido de pirimidina 45 representado por la fórmula general (iii), (iv), (x) y (xi).
En la fórmula general anterior, Z3 representa un conector para la unión a V1; R25 y R26 representan cada uno independientemente H, OH u O-; R27 representa -PO2H-, PO3H2-, P2O6H3, -P3O9H4, o una sal del mismo. Debe observarse que, un ejemplo específico de la sal, incluye, una sal de metal alcalino tal como, por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio y sal de litio; una sal de metal alcalinotérreo tal como, por ejemplo, sal de bario; sal de amonio; sal de trietilamonio; una sal de amina orgánica tal como, por ejemplo, sal de piridina.
El conector representado por V1 en la fórmula general [74] es un conector para formar enlace con el residuo de nucleótido representado por Q1 y el derivado de compuesto (marcaje fluorescente) de la presente invención representado por W2 [la fórmula general [51’]].
Es decir, en cuanto a un residuo de nucleótido de pirimidina, entre residuos de nucleótidos representados por el Q1 anterior, un extremo terminal del conector está unido a la posición 5 de un anillo de pirimidina del mismo [en el caso de las fórmulas generales (iii) y (iv)], o a un átomo de fósforo en un residuo de fosfato del mismo [en el caso de las fórmulas generales (x) e (xi)]; y en cuanto a un residuo de nucleótido de purina, se une en la posición 7 de un anillo de 7-deazapurina del mismo [en el caso de las fórmulas generales (i), (ii), (v) y (vi)], o a un átomo de fósforo del residuo fosfato en anillo de purina del mismo (o un anillo de 7-dezapurina) [en el caso de las fórmulas generales (vii), (viii), (ix), (xii) y (xiii)].
Aún más, el otro extremo terminal del conector está unido a un grupo carbonilo [un grupo carbonilo que se une a T4 en la fórmula general [51’]] del derivado de compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención representado por W2 [la fórmula general [51’]].
Como conector de este tipo, puede usarse todos los que pueden unirse a grupo carbonilo [un grupo carbonilo que se une a T4 en la fórmula general [51’]] del derivado de compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención representado por W2 [la fórmula general [51’]], y el residuo de nucleótido representado por Q1, y específicamente incluye un conector con una estructura representada por la siguiente fórmula general (A):
-E- X- T10- Y- NH- (A)
(en la que E, X, T10 e Y son los mismos que anteriormente, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares también son tal como se describieron anteriormente).
Por tanto, como el residuo de nucleótido representado por la fórmula general [74], es preferible cada uno representado por la siguiente fórmula general [74’], y es más preferible uno representado por la siguiente fórmula general [74”]:
(en la que E1 representa -CH=CH- o -C:C-; X1 e Y1 representan cada uno independientemente grupo alquileno; y T11 representa -O- o -NH-CO-; además, Q1 y W2 son los mismos que anteriormente).
Debe observarse que, en la descripción anterior, el grupo alquileno representado por X1 es el mismo que el grupo alquileno anterior representado por X, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares son tal como se describieron anteriormente. Además, el grupo alquileno representado por Y1 es el mismo que el grupo alquileno anterior representado por Y, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares también son tal como se describieron anteriormente.
(en la que r representa un número entero desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 1 hasta 6, más preferiblemente desde 1 hasta 4; s representa un número entero desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 2 hasta 8, más preferiblemente desde 2 hasta 4; además, Q1, W2, E1 y T11 son los mismos que anteriormente).
En la fórmula general [51’], R3” a R11”, R18 a R19 y T3 a T5 son los mismos que anteriormente, y ejemplos específicos y ejemplos preferibles de los mismos y similares también son tal como se describieron anteriormente
Los derivados del compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención representado por W2 [la fórmula general [51’] son los derivados del compuesto [51] de la presente invención tal como se describió anteriormente, y ejemplos específicos preferibles de los mismos son también similares al compuesto [51] de la presente invención tal como se describió anteriormente.
Un método para marcar el nucleótido descrito anteriormente con el compuesto [51] (sustancia de marcaje) relevante a la presente invención, incluye un método de marcaje directo o un método de marcaje indirecto, conocido por sí mismo, [por ejemplo, un método descrito en los documentos W096/17628 (JP-A-2002-12782), USP. n.º 6974873, JP-A-2002-193991, W099/12544, JP-A-11-80189 o similares]
Además, en el nucleótido de marcaje con el compuesto [51] (sustancia de marcaje) relevante a la presente invención, es más simple y más conveniente para usar un kit de marcaje convencional comercialmente disponible basado en el método de marcaje tal como se describió anteriormente, excepto para usar el compuesto [51] relevante a la presente invención.
Debe observarse que utilizar estos métodos en la presente invención, se requiere un nucleótido marcado unido al compuesto [51] (sustancia de marcaje) relevante a la presente invención, sin embargo, el nucleótido marcado puede prepararse mediante un método conocido por sí mismo (por ejemplo, el método de marcaje anterior o similares).
Específicamente, puede prepararse según un método descrito en, por ejemplo, el documento JP-A-2002-193991 (párrafos desde [0102] hasta [0121]), y también puede prepararse tal como sigue:
Es decir, puede obtenerse fácilmente, por ejemplo, sometiendo un derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (a) a una reacción con el compuesto [51] (sustancia de marcaje) [sustancia de éster de succinimidilo] relevante a la presente invención representado por la siguiente fórmula general (b’):
Q-E-X-T10-Y1-NH2 (a)
(en la que Q representa Q1; y Q1, E, X, T10 e Y son los mismos que anteriormente).
(en la que W’ representa W2; Su representa un grupo succinimida; y W2 es el mismo que anteriormente).
Además, en el caso en el que T10 de la parte de conector representado por la fórmula general (a), tal como se describió anteriormente, es -NHCO-, puede prepararse, por ejemplo, tal como sigue:
Es decir, por ejemplo, en primer lugar se introduce una parte de un conector (un conector parcial A) representado por la siguiente fórmula general (c), que va someterse adicionalmente a una reacción con la sustancia de éster de succimidilo de la parte de conector restante (un conector parcial B) para preparar un derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (d), que se introduce con el conector. Aún más, puede obtenerse fácilmente sometiendo el derivado de nucleótido representado por la siguiente fórmula general (d) a una reacción con el compuesto [51] (sustancia de marcaje) [la sustancia de éster de succimidilo] de la presente invención representado por la siguiente fórmula general (b’).
5
(en la que E y X son los mismos que anteriormente).
10 (en la que Q, E, X e Y son los mismos que anteriormente).
(en la que W’ y Su son los mismos que anteriormente).
15 Más específicamente, entre los mononucleótidos marcados unidos al compuesto [51] (sustancia de marcaje) de la presente invención como antes, pueden sintetizarse un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente y un derivado de 2’-desoxiuridina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente, por ejemplo, según la siguiente ruta de síntesis.
20 Debe observarse que los nombres formales abreviados usados en la siguiente ruta de síntesis son tal como sigue:
- •
- MeOTfa: trifluoreacetato de metilo 25 • -Tfa: grupo trifluoroacetilo
• BU3SnH: hidruro de tri(n-butil)estaño
- •
- AIBN: azobisisobutironitrilo 30
• Et3N: trietilamina
- •
- HO-Su: N-hidroxisuccinimida 35 • DMF: N,N-dimetilformamida
• TMS-Acetamida: N, O-bis(trimetilsilil)acetamida
- •
- PdCI2(CH3CN)2: bis(acetonitrilo)dicloropaladio (II) 40
• tris(TBAPP): pirofosfato de tris(tri-n-butilamonio)
- •
- (EtO)3PO: fosfato de trietilo 45 • TFP: tri-2-furilfosfina
• Pd2(dba)3: tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0)
(1) Síntesis del conector parcial (A)
50 Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a -E-X-NH- en el caso en el que T10 es – NH-CO-, en el conector (-E-X-T10-Y-NH-) representado por la fórmula general anterior (A), y un compuesto en el que E es -CH=CH y X es un grupo metileno.
- (2)
- Síntesis de un conector parcial (B) Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a -CO-Y-NH- en el caso en el que T10 es
- (3)
- Síntesis de un derivado de 2’ -desoxicitidina-5’-trifosfato [un compuesto de la fórmula general (d)]
NH-CO-, en el conector (-E-X-T10-Y-NH-) representado por la fórmula general anterior (A), y un compuesto en el que Y es un grupo pentametileno.
Debe observarse que este compuesto es un compuesto correspondiente a Q1-E1-X1-T11-Y1-NH- de la fórmula general [74’] (Q1-E1-X1-T11-Y1-NH-W2), y un compuesto en el que Q1 es 2’-desoxicitidina, E1 es -CH=CH-, X1 es 10 un grupo metileno, T11 es -NH-CO-, y Y1 es un grupo pentametileno.
(4) Síntesis del derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente [mononucleótido marcado con el 15 compuesto [51] (una sustancia de marcaje) de la presente invención]
Debe observarse que este compuesto es un compuesto, en la fórmula general [74’] (Q1-E1-X1-T11-Y1-NH-W2), en la que Q1 es 2’- desoxicitidina, E1 es -CH=CH-, X1 es un grupo metileno, T11 es -NH-CO-, Y1 es un grupo pentametileno y W2 es el siguiente compuesto (14) ó (25):
20 Debe observarse que el nucleótido marcado distinto del anterior también puede prepararse según sea apropiado usando los materiales correspondientes de la misma manera que anteriormente.
5 Dado que un colorante de cianina a base de pirazol de la presente invención (en particular, el compuesto [51] de la presente invención) tiene una estructura en la que un esqueleto de pirazol y un esqueleto de indol se unen a una cadena de polimetino, y se reticula aún más, y ejerce características de fluorescencia en una región de longitud de onda más corta en comparación con una fuente de luz convencional, y se vuelve posible usar una fuente de luz de una región de longitud de onda corta con alta eficiencia energética. Además, en el caso en el que se detecte un
10 objeto de medición usando esto como agente de marcaje (una sustancia de marcaje), se vuelve posible detectar el objeto de medición con alta sensibilidad de detección, sin tener problemas, por ejemplo, baja solubilidad en agua, sensibilidad de detección reducida por extinción óptica provocada por agregación de los propios colorantes y similares, que tenía un derivado de colorante de cianina convencional.
15 A continuación se proporcionará una explicación adicional sobre la presente invención específicamente con referencia a los ejemplos y ejemplos comparativos, sin embargo, la presente invención no debe limitarse a los mismos.
20 Ejemplo 1. Síntesis de los compuestos (13) a (15) de la presente invención.
25 * Su= un grupo succinimida, Ma= un grupo maleimida
(1) Síntesis de un compuesto de indolenina (8)
30 [Síntesis del compuesto (2)]
En N,N-dimetilformamida (DMF, 80 ml), 2-metilacetoacetato de etilo (1) (25,0 g, 0,173 mol), 1,3-propanosultona (23,3 g, 0,190 mol) e hidruro de sodio (8,5 g, 0,208 mol) se añadieron a una reacción con agitación a 90ºC durante la
35 noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a lavado dos veces mediante la adición de agua (200 ml) y dietil éter (200 ml). Después de eso, se eliminó la parte de fase acuosa a presión reducida dando el compuesto (2) (42,1 g, rendimiento del 91%).
[Síntesis del compuesto (3)]
40 En ácido clorhídrico concentrado (60 ml), se sometió el compuesto (2) (40,5 g, 0,152 mol) a una reacción con agitación a 100ºC durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (3) (16,6 g, rendimiento del 56%).
5 [Síntesis del compuesto (5)]
En ácido acético (50 ml), se sometieron el compuesto (3) (10,0 g, 0,051 mol) y el compuesto (4) (12,9 g, 0,066 mol) a reflujo con calentamiento a 120ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) dando el compuesto (5) (11,5 g, rendimiento del 65%).
Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3450, 1196
[Síntesis del compuesto (6)]
15 Se disolvió el compuesto (5) (11,5 g, 0,033 mol) en agua (50 ml) y etanol (50 ml) para someterse a una reacción con agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) dando el compuesto (6) (10,3 g, rendimiento del 80%).
Datos de propiedades: Masa (nega=346)
IR (KBr) (cm-1): 3444, 1193
25 [Síntesis del compuesto (7)]
Se disolvieron el compuesto (6) (10,0 g, 0,026 mol) y ácido 6-bromohexanoico (9,97 g, 0,052 mol) en 1,2diclorobenceno (100 ml) y sometió a una reacción con agitación a 120ºC durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a lavado tres veces usando acetato de etilo dando el compuesto (7) (11,5 g, rendimiento del 89%).
Datos de propiedades: Masa (nega=460)
IR (KBr) (cm-1): 3446, 1723, 1194 35 [Síntesis del compuesto (8)]
Se disolvieron el compuesto (7) (1,5 g, 2,967 mmol) y clorhidrato de anilida de aldehído de ácido malónico (0,77 g, 2,967 mmol) en anhídrido acético (20 ml) y sometieron a una reacción con agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de acetonitrilo) dando un compuesto de indolenina (8) (0,18 g, rendimiento del 10%).
Datos de propiedades: Masa (nega: posi=631:633) 45 IR (KBr) (cm-1): 3443, 1716, 1574, 1465, 1189
(2) Síntesis del compuesto de pirazol (12)
[Síntesis del compuesto (10)]
En DMF (100 ml), se usaron 3-metil-2,4-pentanodiona (compuesto (9)) (15,0 g, 0,13 mol), 1,3-propanosultona (16,1
55 g, 0,13 mol), e hidruro de sodio (5,0 g, 0,208 mol) para una reacción con agitación a 50ºC durante 16 horas. Tras completarse la reacción, se llevó a cabo la neutralización usando hidróxido de sodio 1 N, y se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a lavado dos veces mediante la adición de agua (200 ml) y dietil éter (200 ml). Después de eso, se eliminó la parte de fase acuosa a presión reducida dando el compuesto de pirazol (10) (32,2 g, rendimiento del 96%).
Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3474, 1695, 1665, 1191 [Síntesis del compuesto (11)] 5 Se disolvieron el compuesto (10) (10,0 g, 0,042 mol) e hidrazina monohidratada (2,1 g, 0,042 mol) en etanol (EtOH, 150 ml), y se sometieron a una reacción con agitación a 80ºC durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol/cloroformo = 1/1) dando el compuesto (11) (9,0 g, rendimiento del 92%).
10 Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3421, 1195 [Síntesis del compuesto (12)] Se disolvieron el compuesto (11) (4,8 g, 0,019 mol) y 1,3-propanosultona (2,5 g, 0,02 mol) en dimetilacetoamida (30
15 ml), y se sometieron a agitación a 140ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml) para depositar un cristal, que se filtró dando el compuesto de pirazol (12) (5,3 g, rendimiento del 76%). Datos de propiedades: Masa (nega=352) 20 IR (KBr) (cm-1): 3446, 1194
(3) Síntesis de complejos de compuesto de indolenina – compuesto de pirazol (compuestos de la presente invención) (13) a (15)
[Síntesis del compuesto (13)] (una sustancia de maleimida de la presente invención).
Se disolvieron el compuesto de indolenina (8) resultante en el ejemplo 1, (1) (0,1 g, 0,158 mmol) y el compuesto de
30 pirazol (12) resultante en el ejemplo 1, (2) (0,17 g, 0,474 mol) en DMF (2 ml), y se añadieron piridina (1 ml) y anhídrido acético (0,5 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución de metanol acuosa al 10%) y Sephadex LH-20 [fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd., (nombre anterior: Amasham Bioscience Co., Ltd.)] (líquido de elución: metanol) dando un
35 compuesto (13) (15 mg, rendimiento del 12%).
Datos de propiedades: Masa (nega=850)
A continuación se muestran las características de fluorescencia. 40
- Longitud de onda de absorción máxima (A máx.)
- 634 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 230.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 635 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 655 nm
[Síntesis del compuesto (14)]
5 Se disolvió el compuesto (13) (13 mg, 0,015 mmol) en DMF (0,6 ml), y se añadieron tetrafluoroborato de 2succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU) (46 mg), y N-etildiisopropilamina ((i-Pr)2NEt) (600 !l) con agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (15 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (14) (13 mg, rendimiento del 90%).
10 Datos de propiedades: Masa (nega=947)
[Síntesis del compuesto (15)]
15 Al reactivo de maleimidación (clorhidrato de N-(4-aminobutil)maleimida) (6 mg), trietilamina (Et3N) (10 !l)), se le añadió DMF (1 ml) y se agitó durante 10 minutos. Después de eso, se añadió lentamente una disolución disuelta con el compuesto (14) (7 mg, 0,007 mmol) en DMF (1 ml) con agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando HPLC de fase inversa fraccionada dando el compuesto (15) (1,1 mg, rendimiento del 15%).
20 Datos de propiedades: Masa (nega=1000)
Ejemplo 2. Síntesis de los compuestos (20) a (22) de la presente invención
(1) Síntesis del compuesto de pirazol (19)
30 [Síntesis del compuesto (17)]
En tetrahidrofurano (THF) (100 ml), se añadieron éster etílico del ácido 4-acetil-5-oxohexanoico (compuesto (16)) (10,0 g, 49,94 mmol), yoduro de metilo (10,6 g, 74,91 mmol), y carbonato de potasio (17,3 g, 0,125 mol) con 35 agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se neutralizó la disolución usando ácido clorhídrico 1 N, y se sometió a lavado dos veces mediante la adición de agua (100 ml) y acetato de etilo (100 ml). Después de esto, se lavó dos veces la fase de acetato de etilo con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 ml) y una disolución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml). Luego, se eliminó la fase de acetato de etilo resultante a presión reducida, para someterse a purificación usando cromatografía en
40 columna de gel de sílice (líquido de elución: acetato de etilo/hexano=1/3) dando el compuesto (17) (10,0 g, rendimiento del 93%).
[Síntesis del compuesto (18)]
45 Se disolvieron el compuesto (17) (10,0 g, 46,7 mmol) e hidrazina monohidratada (2,6 g, 51,4 mmol) en etanol (150 ml), y se sometieron a agitación a 80ºC durante 2 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol/cloroformo=1/1) dando el compuesto (18) (9,3 g, rendimiento del 95%).
[Síntesis del compuesto de pirazol (19)]
5 Se disolvieron el compuesto (18) (9,3 g, 44,2 mmol) y 1,3-propanosultona (5,9 g, 44,9 mmol) en tolueno (150 ml), y se sometieron a agitación a 120ºC durante 5 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml) para depositar un cristal, que se filtró dando el compuesto (19) (10,6 g, rendimiento del 72%).
Datos de propiedades: Masa (nega=331) 10 IR (KBr) (cm-1): 3436, 1726, 1211
(2) Síntesis de complejos de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (compuestos de la presente invención)
(20) a (22) 15
[Síntesis del compuesto (20)]
20 Se disolvieron el compuesto de indolenina (8) resultante en el ejemplo 1, (1) (0,15 g, 0,237 mmol) y el compuesto de pirazol (19) resultante en el ejemplo 2, (1) (0,24 g, 0,711 mmol) en DMF (2 ml), y se añadieron piridina (1 ml) y anhídrido acético (0,5 ml) con agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de metanol) y Sephadex LH-20 [fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.]
25 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (20) (52 mg, rendimiento del 26%).
Datos de propiedades: Masa (nega=828)
[Síntesis del compuesto (21)]
30 Se disolvió el compuesto (20) (53 mg, 0,064 mmol) en metanol (MeOH, 3 ml), y se añadió una disolución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (1 ml) con agitación a 40ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se sometió la disolución a purificación usando Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (21) (15 mg, rendimiento del 29%).
35 Datos de propiedades: Masa (nega=800)
A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de absorción máxima (Amáx.)
- 635 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 219.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 636 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 657 nm
[Síntesis del compuesto (22)]
Se disolvió el compuesto (21) (15 mg, 0,019 mmol) en DMF (1 ml), y se añadieron tetrafluoroborato de 2
5 succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU) (113 mg, 0,337 mmol) y N-etil-diisopropilamina (120 !l) con agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (15 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (22) (15 mg, rendimiento del 81%).
10 Datos de propiedades: Masa (nega=995)
Ejemplo 3. Síntesis de los compuestos (24) a (25) de la presente invención
(1) Síntesis del compuesto de indolenina (23)
20 [Síntesis del compuesto (23)]
Se disolvieron el compuesto (7) resultante en el ejemplo 1, (1) (5,0 g, 9,89 mmol) y N,N’-difenil-formamidina (2,1 g, 9,89 mmol) en anhídrido acético (50 ml), y se sometió a agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml) a la disolución de reacción para depositar un cristal, que se filtró dando
25 el compuesto de indolenina (23) (4,8 g, rendimiento del 74%).
- (2)
- Síntesis de complejos de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (compuestos de la presente invención)
- (24)
- a (25)
[Síntesis del compuesto (24)]
Se disolvieron el compuesto de indolenina (23) resultante obtenido mediante (1) en el ejemplo 3 (60 mg, 0,092 35 mmol), y el compuesto de pirazol (12) resultante en el ejemplo 1, (2) (87 mg, 0,231 mmol) en DMF (2 ml), y se añadieron piridina (0,5 ml) y anhídrido acético (0,2 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) y Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (24) (8 mg, rendimiento del 10%).
5
Datos de propiedades: Masa (nega/posi=824/826)
[Síntesis del compuesto (25)]
10 Se disolvió el compuesto (24) (6 mg, 0,007 mmol) en DMF (300 !l), y se añadieron tetrafluoroborato de 2succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU) (20 mg, 0,07 mmol) y N-etil-diisopropilamina (30 !l) con agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (20 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (25) (5 mg, rendimiento del 81%).
15 Datos de propiedades: Masa (nega=922)
Ejemplo 4. Síntesis de los compuestos (32) y (42) de la presente invención
(1) Síntesis del compuesto de indolenina (30)
25 [Síntesis del compuesto (27)]
Como materiales de partida, se usaron ácido 4-hidrazinobencenosulfónico hidratado 0,5 [compuesto (26)] (50,0 g, 0,253 mol), y 3-metil-2-butanona (65,5 g, 0,759 mol), que se sometieron a agitación en ácido acético (200 ml) a
30 120ºC durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se enfrió el disolvente, y se sometió a lavado dos veces mediante la adición de dietil éter (300 ml) dando el compuesto (27) (52,0 g, rendimiento del 86%).
Datos de propiedades: Masa (nega=238)
35 [Síntesis del compuesto (28)]
Se sometieron el compuesto (27) (10,0 g, 0,042 mol) e hidróxido de sodio (1,67 g, 0,042 mol) a agitación en un disolvente mezclado de etanol (30 ml)/2-propanol (10 ml) a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, y se añadió 2-propanol (100 ml) para lavar dos veces dando
40 el compuesto (28) (4,2 g, rendimiento del 39%).
Datos de propiedades: IR (cm-1): 3206, 1205
[Síntesis del compuesto (29)]
5 Se sometieron el compuesto (28) (3,5 g, 0,013 mol) y ácido 3-bromopropiónico (2,5 g, 0,016 mol) a reflujo con calentamiento en tolueno (50 ml) a 110ºC durante la noche. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (100 ml) para lavar tres veces dando el compuesto (29) (1,7 g, rendimiento del 41%).
10 Datos de propiedades: Masa (nega=310)
[Síntesis del compuesto (30)]
Se disolvieron el compuesto (29) (1,5 g, 4,50 mmol) y clorhidrato de dianilida de malonaldehído (1,16 g, 4,50 mmol)
15 en anhídrido acético (20 ml) para someterse a agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (50 ml) para lavar dos veces dando el compuesto de indolenina (30) (1,59 g, rendimiento del 70%).
Datos de propiedades: Masa (nega=481) 20
(2) Síntesis del compuesto de pirazol (31)
25 [Síntesis del compuesto (31)]
Se sometieron el compuesto (10) resultante en el ejemplo 1, (2) (0,59 g, 2,32 mmol) y ácido 3-bromopropiónico (0,39 g, 2,55 mmol) a agitación a 140ºC durante la noche en un no disolvente. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (30 ml) para lavar dos veces dando el compuesto (31) (0,73 g, rendimiento del 96%).
30 Datos de propiedades: Masa (nega=303)
- (3)
- Síntesis de complejo de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol
- (32)
- [Síntesis del compuesto (32)]
5 Se disolvieron el compuesto de indolenina (30) resultante en el ejemplo 4, (1) (70 mg, 0,139 mmol) y el compuesto de pirazol (31) resultante en el ejemplo 4, (2) (45 mg, 0,139 mmol) en DMF (5 ml), y se añadieron además piridina (1 ml) y anhídrido acético (0,5 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de metanol) y Sephadex LH-20 (líquido de
10 elución: metanol) dando el compuesto (32) (11 mg, rendimiento del 12%).
Datos de propiedades: Masa (nega =649)
A continuación se muestran las características de fluorescencia. 15
- Longitud de onda de absorción máxima (Amáx.)
- 628 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 211.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 629 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 653 nm
[Síntesis del compuesto (42)]
Se disolvió el compuesto (32) (10 mg, 0,019 mmol) en DMF (1 ml), y se añadieron carbonato de disuccinimidilo
20 (DSC) (113 mg, 0,37 mmol) y piridina (120 !l) con agitación a 40ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (15 ml) para depositar un cristal, que se sometió a lavado dando el compuesto (42) (10 mg, rendimiento del 79%).
Datos de propiedades: Masa (nega=846)
25 Ejemplo 5. Síntesis de los compuestos (33) a (34) de la presente invención
30 (1) Síntesis de complejos de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (compuestos de la presente invención)
[Síntesis del compuesto (33)]
5 Se disolvieron el compuesto de indolenina (19) resultante en el ejemplo 2, (1) (47 mg, 0,139 mmol) y el compuesto de pirazol (30) resultante en el ejemplo 4, (1) (72 mg, 0,143 mmol) en DMF (5 ml), y se añadieron además piridina (1 ml) y anhídrido acético (0,5 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en
10 columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de metanol) dando el compuesto (33) (15 mg, rendimiento del 15%).
Datos de propiedades: Masa (nega =677)
15 [Síntesis del compuesto (34)]
Se disolvió el compuesto (33) (10 mg, 0,014 mmol) en metanol (1 ml), y se añadió una disolución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (0,5 ml) con agitación a 40ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se sometió la disolución a purificación usando Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (34) (3,5 mg,
20 rendimiento del 37%).
Datos de propiedades: Masa (nega=649)
A continuación se muestran las características de fluorescencia. 25
- Longitud de onda de absorción máxima (Amáx.)
- 630 nm
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 632 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 658 nm
Ejemplo 6. Síntesis de los compuestos (37) a (39) de la presente invención
(1) Síntesis del compuesto de indolenina (36)
[Síntesis del compuesto (35)]
5 Se disolvió el compuesto (28) resultante en el ejemplo 4, (1) (4,9 g, 18,7 mmol) en sulfolano (25 ml) y luego se añadió ácido etiltoluenosulfónico (11,3 g, 56,1 mmol) a una reacción a 140ºC durante 18 horas. Tras completarse la reacción, se añadió la disolución de reacción en acetato de etilo (100 ml) y se eliminó por filtración una sustancia depositada. Se lavó el cristal resultante con acetato de etilo y se sometió a secado a presión reducida dando el compuesto (35) (4,04 g, rendimiento del 74,4%).
10 Datos de propiedades: Masa (nega=267)
[Síntesis del compuesto (36)]
15 Se disolvieron el compuesto (35) (3 g, 10 mmol) y clorhidrato de dianilida de malonaldehído (2,67 g, 10 mmol) en anhídrido acético (30 ml) para someterse a agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (100 ml) y se eliminó por filtración una sustancia depositada. Se lavó el cristal resultante con acetato de etilo (100 ml) dos veces y se sometió a secado a presión reducida dando el compuesto de indolenina (36) (2,4 g, rendimiento del 52,1%).
20 Datos de propiedades: Masa (nega=436)
(2) Síntesis de complejos de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (compuestos de la presente invención)
(37) a (39) 25
[Síntesis del compuesto (37)]
30 Se disolvieron el compuesto de indolenina (36) resultante en el ejemplo 6, (1) (1 g, 2,17 mmol) y el compuesto de pirazol (19) resultante en el ejemplo 2, (1) (1,8 g, 5,41 mmol) en DMF (20 ml), y se añadieron además piridina (8 ml) y anhídrido acético (4 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 20% de metanol) y Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol)
35 dando el compuesto (37) (130 mg, rendimiento del 9,5%).
Datos de propiedades: Masa (nega =634)
[Síntesis del compuesto (38)] 40
Se añadieron metanol (15 ml) y una disolución acuosa de hidróxido de litio al 5% (5 ml) al compuesto (37) (130 mg, 0,21 mmol) para someterse a una reacción a 20ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) dando el compuesto (38) (12 mg, rendimiento del 9,7%).
Datos de propiedades: Masa (nega=606)
A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de absorción máxima (Amáx.)
- 631 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 198.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 631 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 652 nm
[Síntesis del compuesto (39)]
Se disolvió el compuesto (38) (12 mg, 0,019 mmol) en DMF (600 !l), y se añadieron TSTU (57 mg, 0,19 mmol) y Netil-diisopropilamina (74 !l) a una reacción con agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras completarse
15 la reacción, se añadió acetato de etilo (40 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (39) (10,7 mg, rendimiento del 80%).
Datos de propiedades: Masa (nega=703)
Ejemplo 7. Síntesis de un compuesto marcado de la presente invención [un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente]
Se sintetizó mononucleótido (2’-desoxicitidina-5’-trifosfato) marcado con el compuesto [1] de la presente invención tal como sigue según la ruta de síntesis descrita anteriormente.
- (1)
- Síntesis del conector parcial (A)
- (i)
- Trifluoroacetilación (Tfa) (la primera etapa)
A 21 g de propagilamina, [el compuesto (51) en la ruta de síntesis anterior], (fabricado por Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), se le añadieron trifluoroacetato de metilo (MeOTfa) (54 g) y trietilamina (Et3N) (25 ml), con enfriamiento con hielo, para someterse a agitación a temperatura ambiente durante 2 días. Tras completarse la reacción, se llevó a cabo la purificación a presión reducida dando el compuesto (52), [el compuesto (52) en la ruta de síntesis anterior], (56 g, rendimiento del 98,1%).
(ii) Para preparar tri(n-butil)estaño (Bu3Sn) (la segunda etapa)
En benceno (300 ml), se disolvieron 15 g del compuesto (52) [el compuesto (52) en la ruta de síntesis anterior], y tras la adición de hidruro de tri(n-butil)estaño (Bu3SnH) (35 ml) y azobisisobutironitrilo (AIBN) (2,1 g), se sometió la disolución a agitación en reflujo durante 1,5 horas. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: acetato de etilo/hexano=1/20) dando 11,4 g del compuesto (53) (el conector parcial A), [el compuesto (53) en la ruta de síntesis anterior], (rendimiento del 25,8%).
45 (2) Síntesis del conector parcial B
(i) Trifluoroacetilación (Tfa) (la tercera etapa)
A una suspensión de 10 g de ácido 6-aminohexanoico [el compuesto (54) en la ruta de síntesis anterior], (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), se añadieron trifluoroacetato de metilo (25 g) y trietilamina (Et3N) (25 ml) con agitación a temperatura ambiente durante 2 días. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente dando 8,4 g del compuesto (55) [el compuesto (55) en la ruta de síntesis anterior] mediante cristalización del agua (rendimiento del 48,6%).
55 (ii) Esterificación activa (la cuarta etapa)
En N,N-dimetilformamida (DMF) (50 ml), se disolvieron 2,3 g del compuesto (55) [el compuesto (55) en la ruta de síntesis anterior], y se añadieron ácido N-hidroxisuccínico (HO-Su) (1,4 g) y WSC (2,3 g) a ello y luego se sometió a agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, y se fraccionó y se lavó con acetato de etilo. Sometiendo la fase orgánica a concentración a presión reducida, se dieron 3,6 g del compuesto (56) (el conector parcial B), [el compuesto (56) en la ruta de síntesis anterior] (rendimiento; cuantitativo).
- (3)
- Introducción del conector parcial
- (i)
- Introducción del conector parcial A (la quinta etapa)
En acetonitrilo (30 ml), se suspendió 1,0 g de 5-yodo-2’-desoxicitidina [el compuesto (57) en la ruta de síntesis anterior], (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), y tras la adición de O-bis(trimetilsilil)acetamida (TMSacetamida) (3 ml) purgando con Ar, se sometió la disolución a agitación a reflujo durante 2 horas. Tras enfriar la disolución de reacción hasta temperatura ambiente, se añadieron bis(acetonitrilo)dicloropaladio (II) [PdCl2(CH3CN)2] (40 mg) y 2 g del conector parcial A [el compuesto (53) en la ruta de síntesis anterior] para agitar adicionalmente a de 50 a 60ºC durante 20 horas. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a purificación usando columna de gel de sílice (líquido de elución: triclorometano/metanol=9/1) dando 720 mg de un derivado de 2’-desoxicitidina [el compuesto (58) en la ruta de síntesis anterior] mediante cristalización en dietil éter (rendimiento del 67,3%).
(ii) Destrifluoroacetilación (Tfa) (la sexta etapa)
En etanol (EtOH, 10 ml), se disolvieron 500 mg del derivado de 2’-desoxicitidina, [el compuesto (58) en la ruta de síntesis anterior], y tras la adición de agua de amoníaco al 25% (25 ml), se sometió la disolución a agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a purificación usando cromatografía en columna ODS (líquido de elución: metanol al 5%) dando 190 mg del derivado de 2’-desoxicitidina, [el compuesto (59) en la ruta de síntesis anterior], (rendimiento del 50,9%).
(iii) Introducción del conector parcial B (la séptima etapa)
En N,N-dimetilformamida (DMF, 4 ml), se disolvieron 190 mg del derivado de 2’-desoxicitidina, [el compuesto (59) en la ruta de síntesis anterior], y tras la adición de 330 mg del conector parcial B, [el compuesto (56) en la ruta de síntesis anterior], se sometió la disolución de reacción a agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, y se sometió el residuo a purificación usando columna de gel de sílice (líquido de elución: triclorometano/metanol/ácido acético=80/20/5) y además mediante cromatografía en columna ODS (líquido de elución: metanol al 20%) dando 169 mg del derivado de 2’-desoxicitidina, [el compuesto (60) en la ruta de síntesis anterior], (rendimiento del 51,2%).
- (4)
- Trifosforilación y destrifluoroacetilación de mononucleósido (la octava etapa)
- (i)
- Preparación de un agente de trifosforilación, tris (TBAPP) 0,5 M
Una columna con un diámetro de 2,5 cm, 100 cm3 de Dowex 50W x 8 (forma H+), regenerada de antemano, se cargó y se lavó con agua de intercambio iónico. Se cargó una disolución acuosa de pirofosfato de sodio decahidratado (6,7 g/100 ml), y se añadió gota a gota directamente un líquido de elución (una disolución de ácido pirofosfórico) en una disolución de etanol (50 ml) que contenía 10,6 ml de tributilamina. Tras la adición gota a gota hasta que el pH del líquido de elución se convirtió en neutro, se sometió a agitación durante 10 minutos. Tras la agitación, se concentró la disolución a presión reducida, y se añadieron secuencialmente etanol (30 ml x dos veces), tolueno (30 ml x 3 veces) y DMF (20 ml x dos veces) al residuo, y se repitió la concentración a presión reducida. Tras la dilución a 30 ml con DMF, se añadió MS4A hasta la deshidratación durante la noche dando la disolución tris(TBAPP) 0,5 M.
- (ii)
- Trifosforilación
En fosfato de trietilo [(EtO)3PO] (1,4 ml), se disolvieron 147 mg (0,3 mmol) de un derivado de 2’-desoxicitidina, [el compuesto (60) en la ruta de síntesis anterior], y tras la adición de oxicloruro de fósforo (27 !l + 24 !l), se sometió a agitación en una cámara de baja temperatura durante 4 horas para convertirse en ácido monofosfórico. En esta disolución, se cargaron 4 ml de tris (TBAPP) 0,5 M para someterse a agitación en una cámara de baja temperatura durante 2 horas para convertirse en ácido trifosfórico (inspección de procedimiento de HPLC; rendimiento del 37,8%). Tras la reacción, se neutralizó la disolución de reacción con una disolución acuosa al 7% de trietilamina (7 ml), y se sometió a agitación adicional durante la noche. Tras la reacción, se lavó la disolución de reacción con dietil éter, y se sometió la fase acuosa a purificación usando una columna de DEAE-TOYOPEARL (líquido de elución; gradiente de agua a TEAB 0,2 M). Se concentró la fracción eluida a presión reducida dando una sustancia intermedia. Luego, se disolvió la sustancia intermedia en agua de amoníaco al 25% (30 ml) y se sometió a agitación en una cámara de baja temperatura durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el amoníaco a presión reducida, y se sometió el residuo a liofilización dando 130 mg del derivado de conector 2’-dCTP-amino, [el compuesto (61) en la ruta de síntesis anterior].
Como resultado de la inspección del procedimiento en el presente producto, se encontró que la pureza mediante HPLC era del 95,8% y que el contenido era del 77,3%.
(5) Marcaje del mononucleótido (la novena etapa)
En el agua de intercambio iónico (150 !l), se disolvieron 6,5 mg del derivado de conector 2’-dCTP-amino, [el
5 compuesto (61) en la ruta de síntesis anterior], y tras 7 veces de la adición de una disolución de DMF del compuesto de la presente invención (compuesto de marcaje), [el compuesto (25) en la ruta de síntesis anterior] (1 mg/100 !l), se sometió a agitación a temperatura ambiente durante la noche (inspección de procedimiento de HPLC; rendimiento del 60,0%). Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, y se sometió a purificación usando una columna Wakosil50C18 (disolución de elución; metanol al 5%), y luego una
10 columna DEAE-TOYOPEARL 650 M (inspección Fr; HPLC). Se sometió el residuo a liofilización dando 3,4 mg del derivado 2’-dCTP marcado con fluorescencia, [el compuesto (25a) en la ruta de síntesis anterior: Mononucleótido marcado con el compuesto (sustancia de marcaje) de la presente invención].
Ejemplo 8. Medición de intensidad de fluorescencia novedosa de un compuesto de la presente invención
15 Se calculó en líneas generales la intensidad de fluorescencia relativa de un compuesto de la presente invención en relación con la intensidad de fluorescencia de Cy5, que es un colorante de cianina convencional.
En primer lugar, se midió la intensidad de fluorescencia de Cy5 por 1 !M a partir de la intensidad de fluorescencia de
20 Cy5, y se calculó en líneas generales la intensidad de fluorescencia relativa del compuesto de la presente invención en relación con este valor de intensidad de fluorescencia como 100. Se muestra el resultado en la tabla 29.
(1) Medición de intensidad de fluorescencia de Cy5
25 En 1 ml de agua purificada, se disolvió Cy5 para marcar 1 mg de proteína (fabricado por GE Healthcare Bioscience Biohealth Co., Ltd.). Se diluyó esta disolución 200 veces con una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (pH 7,5) para medir el valor de DO (0,1020).
Se determinó la concentración de una disolución de Cy5 a partir de este valor de DO y el coeficiente de absorción
30 molar (s=250,000), [descrito en un catalogo de producto general 2006 “7-4” de GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.]), (0,408 !M). Entonces, se midió la fluorescencia usando la presente disolución.
A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de excitación máxima [Ex(máx.)]
- 649 nm
- Longitud de onda de fluorescencia máxima [Em(máx.)]
- 670 nm
- Intensidad de fluorescencia
- 3.161
- Intensidad de fluorescencia de Cy5/1!M
- 7.747
(2) Cálculo en líneas generales de la intensidad de fluorescencia relativa de un compuesto de la presente invención
Se estimaron en líneas generales las intensidades de fluorescencia relativa de los compuestos (13), (21), (32) y (38) de la presente invención en relación con la intensidad de fluorescencia de Cy5 por 1 !M, obtenido en el ejemplo 8, 40 (1), como 100. Se mostraron los resultados en la tabla 29.
[Tabla 29]
- Compuesto (colorante fluorescente)
- Intensidad de fluorescencia relativa [en relación con intensidad de fluorescencia de Cy5 (1!M) como 100]
- Ejemplo 1
- Compuesto (13) 145
- Ejemplo 2
- Compuesto (21) 120
- Ejemplo 4
- Compuesto (32) 106
- Ejemplo 6
- Compuesto (38) 135
- Ej. Comp. 1
- Cy5 100
45 Tal como queda claro a partir del resultado de la tabla 29, al comparar los compuestos de la presente invención y Cy5 (colorante de cianina convencional), se encontró que los compuestos de la presente invención mostraban intensidades de fluorescencia equivalentes o superiores a la del Cy5.
Ejemplo 9. Evaluación práctica de un colorante fluorescente novedoso 50
(1) Preparación de un anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso (un compuesto marcado de la presente invención)
Tras la digestión con pepsina de anticuerpo anti a-fetoproteína (AFP) (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), se redujo esto con 2-aminoetanotiol, y se sometió a purificación usando una columna de permeación de gel (Superdex200, fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.), dando un anti-AFP-Fab’.
5 En una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (PBS, pH 6,0, 0,892 ml) que contenía el anti-AFP-Fab’ (2 mg como masa de proteína calculado usando absorción de 280 nm), se añadió una disolución de DMF del compuesto
(15) obtenido en el ejemplo 1 anterior, [el compuesto de la presente invención (una sustancia de maleimida)], (4 mg/ml, 0,1 ml) en una reacción durante la noche en una cámara de baja temperatura. Se sometió la disolución de reacción resultante a purificación usando una columna de intercambio iónico (DEAE-5PW, fabricado por Tosoh
10 Corp.) y una columna de permeación de gel dando una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (pH 6,0, 0,2 mg como masa de proteína calculado usando absorción de 280 nm) de un anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso, un compuesto marcado de la presente invención.
(2) Medición de intensidad de fluorescencia de un anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso (un 15 compuesto marcado de la presente invención) con un método de análisis de fluorescencia HPLC
En 0,05 ml de la disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (PBS, pH 6,0), [que contenía 1 mM de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)], que contenía 150 nM del anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia, obtenido en el ejemplo 9 anterior, (1), se añadieron 0,05 mM de disoluciones de ácido trisclorhídrico 50 mM (pH 8,0) que 20 contenía cada concentración de AFP (0, 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10 y 20 nM) en una reacción durante 2 horas. Se analizó la disolución de reacción resultante con HPLC (LC-10A, fabricado por Shimadzu Corp.) y una columna de permeación de gel (Diol-200, fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), y se calculó área pico de un complejo entre un anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso y AFP (un compuesto marcado de la presente invención) como intensidad de fluorescencia (abreviado a continuación como “un complejo marcado de la presente
25 invención”). Se muestran los resultados en la siguiente tabla 30.
Ejemplo comparativo 2. Medición de intensidad de fluorescencia anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia de Cy5
Se obtuvo una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (pH 6,0) de anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia de
30 Cy5 ejecutando la operación de manera similar a como en el ejemplo 9, (1) excepto que se usó un reactivo de maleimidación de Cy5 (Cy5-maleimida, fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.), como sustancia de marcaje, en lugar del compuesto (15) de la presente invención usado en el ejemplo 9, (1).
Aún más, se calculó la intensidad de fluorescencia de un complejo entre el anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia 35 de Cy5 resultante y AFP (abreviado a continuación como “complejo marcado con Cy5”), ejecutando la operación de manera similar a como en el ejemplo 9, (2). Se muestran todos los resultados anteriores en la siguiente tabla 30.
[Tabla 30]
- Conc. AFP
- Intensidad de fluorescencia del complejo marcado
- (!M)
- Complejo marcado (B1) de la invención Complejo marcado con Cy5 (B2) (B1/B2)
- (Ex: 636 nm, Em: 651 nm)
- (Ex: 647 nm, Em: 671 nm)
- 20
- 8713 6393 1,36
- 10
- 7878 5530 1,42
- 5
- 6194 4152 1,49
- 2,5
- 2920 1523 1,92
- 1,25
- 832 359 2,32
- 0,625
- 244 188 1,30
- 0
- 0
- 0
- ----
40 Tal como queda claro a partir de la tabla 30, al comparar los casos en los que se usa un reactivo de fluorescencia de la presente invención y un reactivo de fluorescencia convencional, se encontró que el complejo marcado de la presente invención mostró intensidades de fluorescencia aproximadamente de 1,2 a 2,0 veces superior.
Ejemplo 10. Evaluación práctica de un colorante fluorescente novedoso (incorporación de nucleótido marcado) 45
(1) Incorporación de nucleótido marcado con fluorescencia con un método de PCR
Se prepararon disoluciones de reacción mediante las siguientes composiciones.
- Disol. 1
- Disol. 2 Disol. 3 Disol. 4 Disol. 5
- Concentración final de WY-535 durante la reacción
- WY-535 0 mM WY-535 0 mM Adición de WY-535 tras la WY-535 0,100 mM WY-535 0,125 mM WY-535 0,150 mM
- reacción (WY-535 0,15 mM)
- Tampón 10 x ExTaq
- 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l
- Cebador directo 10 pmol/!l
- 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l
- Cebador inverso 10 pmol/!l
- 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l 1,25 !l
- dATP, dGTP, dTTP 2 mM
- 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l
- dCTP 1 mM
- 10 !l 10 !l 5 !l 3,75 !l 2,5 !l
- EX Taq
- 0,5 !l 0,5 !l 0,5 !l 0,5 !l 0,5 !l
- WY535-dCTP 1 mM
- 0 !l 0 !l 5 !l 6,25 !l 7,5 !l
- Molde 0,01 mg/ml
- 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l 5 !l
- Agua destilada esterilizada
- 22 !l 22 !l 22 !l 22 !l 22 !l
En la tabla anterior, “WY-535” es el compuesto (25) de la presente invención obtenida en el ejemplo 3.
“WY-535-dCTP” es el mononucleótido marcado con el compuesto (25) de la presente invención obtenido en el 5 ejemplo 3, [un derivado de 2’-desoxicitidina-5’-trifosfato de marcaje fluorescente].
Un “molde” era uno purificado mediante un método de fenol-cloroformo, tras la bacteriólisis con lisozima de Escherichia coli JCM 1649T.
10 Como “cebador”, se usó una secuencia que aplica una parte del gen de ribosoma 16S.
“Cebador directo”: (AGAGTTTGATCMTGGCTCAG)
“Cebador inverso”: (CCCACTGCTGCCTCCCGTAG)
15 Como “Taq”, se usó ExTaq HS fabricado por TaKaRa Co., Ltd.
Condición de reacción de PCR: Tras una reacción a 95ºC durante 5 minutos, una reacción a 95ºC durante 30 segundos, a 55ºC durante 20 segundos, y a 70ºC durante 30 segundos, se repitió 30 veces, y entonces se llevó a
20 cabo una reacción a 72ºC durante 5 minutos.
(2) Purificación de un fragmento de ADN genómico marcado usando una columna de centrifugación
Mediante el uso de un kit de purificación de PCR (fabricado por Qiagen Co., Ltd.), se retiraron el nucleótido marcado
25 sin reaccionar (WY535- dCTP) y cebador, dNTP, presente en la disolución de reacción de lo anterior (1). A cada tubo tras completarse la reacción, se añadieron 275 !l de tampón de unión (tampón incluido en el kit de purificación de PCR, fabricado por Qiagen Co., Ltd.), y se mezcló mediante el pipeteo. Se aplicó la cantidad completa de la disolución mezclada a una columna de centrifugación (la columna está incluida en el kit de purificación de PCR, fabricado por Qiagen Co., Ltd.) y se sometió a tratamiento de separación por centrifugación a 6.000 rpm (3.500 x g)
30 durante 2 minutos. Se descartó la parte no retenida, y se añadieron 750 !l del tampón de lavado de la columna de centrifugación (el tampón está incluido en el kit de purificación de PCR, fabricado por Qiagen Co., Ltd.) al tratamiento de separación por centrifugación a 6,000 rpm (3.500 x g) durante 2 minutos. Se descartó una parte no retenida que va a someterse al tratamiento de separación por centrifugación a 12.000 rpm (14.000 x g) durante 3 minutos. Se ajustó un nuevo microtubo de 1,5 ml en la columna de centrifugación para añadir 50 !l de tampón de elución (el
35 tampón está incluido en el kit de purificación de PCR, fabricado por Qiagen Co., Ltd.) en el centro de la columna, se mantuvo sin movimiento a temperatura ambiente durante 5 minutos, en condición con protección de la luz, para someterse al tratamiento de separación por centrifugación a 12.000 rpm (14.000 x g) durante 3 minutos. Tras la adición de 30 !l de tampón de elución (el tampón está incluido en el kit de purificación de PCR, fabricado por Qiagen Co., Ltd.) en el centro de la columna, aún se mantuvo la disolución a temperatura ambiente durante 5 minutos, en
40 condición de protección de la luz, y se sometió a tratamiento de separación por centrifugación a 12.000 rpm (14.000 x g) durante 3 minutos dando 80 !l de ADN purificado marcado con WY-535. Se midieron la cantidad sintetizada de ácido nucleico y la cantidad de incorporación del colorante fluorescente con un espectrómetro. Se muestran los resultados en la tabla 31.
[Tabla 31]
- Conc. de WY535
- Coeficiente de absorción molar de 260 nm (s) [M-1cm-1] Coeficiente de absorción molar de 635 nm (s) [M-1cm-1] Cantidad de síntesis de ácido nucleico (!g) Incorp. cantidad de sustancia de fluorescencia (pmol)
- Disolución 1
- 0 mM 0,615 0,0017 2,46 Blanco
- Disolución 2
- 0 mM Adición de 0,15 mM tras la reacción 0,6174 0,0035 2,47 0,96
- Disolución 3
- 0,1 mm 0,6041 0,0083 2,42 3,52
- Disolución 4
- 0,125 mM 0,5781 0,0122 2,31 5,60
- Disolución 5
- 0,15 mM 0,5718 0,0167 2,29 8,00
Tal como queda claro a partir de la tabla 31, se encontró que el nivel de contaminación de una sustancia de marcaje
5 sin reaccionar con el kit de purificación de PCR era aproximadamente 1 pmol. A partir de este hecho, se encontró que la eliminación casi completa de la sustancia de marcaje sin reaccionar con el kit de purificación de PCR era posible.
Además, a partir de los resultados de las disoluciones 3 a 5, se encontró que la cantidad de incorporación de la
10 sustancia de fluorescencia se aumentó dependiendo de la concentración de nucleótido marcado con fluorescencia. A partir de este hecho, se encontró que la incorporación enzimática de una cadena de ADN era posible usando el nucleótido marcado de la presente invención.
Tal como queda claro a partir de los resultados anteriores, también usando el nucleótido marcado con el compuesto
15 de la presente invención, es posible la detección de una diana de medición (por ejemplo, ácido nucleico o similares), de manera similar en el caso de usar un colorante de fluorescencia conocido.
Ejemplo 11. Síntesis del compuesto (40) de la presente invención
(1) Síntesis del compuesto de indolenina (8)
[Síntesis del compuesto (2)]
En N,N-dimetilformamida (DMF, 80 ml), se añadieron 2-metilacetoacetato de etilo (1) (25,0 g, 0,173 mol), 1,3propanosultona (23,3 g, 0,190 mol) e hidruro de sodio (8,5 g, 0,208 mol) a una reacción con agitación a 90ºC durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a lavado dos veces mediante la adición de agua (200 ml) y dietil éter (200 ml). Después de esto, se eliminó la parte de la fase acuosa a presión reducida dando el compuesto (2) (42,1 g, rendimiento del 91%).
[Síntesis del compuesto (3)]
En ácido clorhídrico concentrado (60 ml), se sometió el compuesto (2) (40,5 g, 0,152 mol) a una reacción con agitación a 100ºC durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (3) (16,6 g, rendimiento del 56%).
[Síntesis del compuesto (5)]
En ácido acético (50 ml), se sometieron el compuesto (3) (10,0 g, 0,051 mol) y el compuesto (4) (12,9 g, 0,066 mol) a reflujo con calentamiento a 120ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) dando el compuesto (5) (11,5 g, rendimiento del 65%).
Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3450, 1196
[Síntesis del compuesto (6)]
Se disolvió el compuesto (5) (11,5 g, 0,033 mol) en agua (50 ml) y etanol (50 ml) para someterse a una reacción con agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: agua) dando el compuesto (6) (10,3 g, rendimiento del 80%).
Datos de propiedades: Masa (nega=346)
IR (KBr) (cm-1): 3444, 1193
[Síntesis del compuesto (7)]
Se disolvieron el compuesto (6) (10,0 g, 0,026 mol) y ácido 6-bromohexanoico (9,97 g, 0,052 mol) en 1,2diclorobenceno (100 ml) y se sometieron a una reacción con agitación a 120ºC durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a lavado tres veces usando acetato de etilo dando el compuesto (7) (11,5 g, rendimiento del 89%).
Datos de propiedades: Masa (nega=460) IR (KBr) (cm-1): 3446, 1723, 1194
[Síntesis del compuesto (8)]
5 Se disolvieron el compuesto (7) (1,5 g, 2,967 mmol) y clorhidrato de malonaldehídodianilida (0,77 g, 2,967 mmol) en anhídrido acético (20 ml) y se sometieron a una reacción con agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de acetonitrilo) dando el compuesto de
10 indolenina (8) (0,18 g, rendimiento del 10%).
Datos de propiedades: Masa (nega: posi=631:633)
IR (KBr) (cm-1): 3443, 1716, 1574, 1465, 1189 15
(2) Síntesis del compuesto de pirazol (19)
20 [Síntesis del compuesto (17)]
En tetrahidrofurano (THF, 100 ml), se añadieron éster etílico del ácido 4-acetil-5-oxohexanoico (16) (10,0 g, 49,94 mmol), yoduro de metilo (10,6 g, 74,91 mmol) y carbonato de potasio (17,3 g, 0,125 mol) con agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se llevó a cabo la neutralización usando ácido
25 clorhídrico 1 N, y se sometió a lavado dos veces mediante la adición de agua (100 ml) y acetato de etilo (100 ml). Después de esto, se lavó dos veces la fase de acetato de etilo con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 ml) y una disolución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml). Luego, se eliminó la fase de acetato de etilo resultante a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: acetato de etilo/hexano=1/3) dando el compuesto (17) (10,0 g, rendimiento del 93%).
30 [Síntesis del compuesto (18)]
Se disolvieron el compuesto (17) (10,0 g, 46,7 mmol) e hidrazina monohidratada (2,6 g, 51,4 mmol) en etanol (EtOH, 150 ml), y se sometieron a agitación a 80ºC durante 2 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a
35 presión reducida para someter a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol/cloroformo=1/1) dando el compuesto (18) (9,3 g, rendimiento del 95%).
[Síntesis del compuesto (19)]
40 Se disolvieron el compuesto (18) (9,3 g, 44,2 mmol) y 1,3-propanosultona (5,9 g, 44,9 mmol) en tolueno (150 ml), y se sometieron a agitación a 120ºC durante 5 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml) para depositar un cristal, que se filtró dando el compuesto de pirazol (19) (10,6 g, rendimiento del 72%).
Datos de propiedades: Masa (nega=331)
45 IR (KBr) (cm-1): 3436, 1726, 1211
(3) Síntesis de complejo de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (un compuesto de la presente
invención) (40) 50
[Síntesis del compuesto (20)]
Se disolvieron el compuesto de indolenina (8) resultante en el ejemplo 11, (1) (0,15 g, 0,237 mmol) y el compuesto de pirazol (19) resultante en el ejemplo 11, (2) (0,24 g, 0,711 mmol) en DMF (2 ml), y se añadieron piridina (1 ml) y anhídrido acético (0,5 ml) con agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: disolución acuosa al 10% de metanol) y Sephadex LH-20 [fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.] (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (20) (52 mg, rendimiento del 26%).
Datos de propiedades: Masa (nega=828)
[Síntesis del compuesto (21)]
Se disolvió el compuesto (20) (53 mg, 0,064 mmol) en metanol (3 ml), y se añadió una disolución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (1 ml) con agitación a 40ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se sometió la disolución a purificación usando Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto (21) (15 mg, rendimiento del 29%).
Datos de propiedades: Masa (nega=800)
[Síntesis del compuesto (22)]
Se disolvió el compuesto (21) (15 mg, 0,019 mmol) en DMF (1 ml), se añadieron tetrafluoroborato 2-succinimida1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU) (113 mg, 0,337 mmol) y N-etildiisopropilamina ((i-Pr)2NEt) (120 !l) con agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (15 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (22) (15 mg, rendimiento del 81%).
Datos de propiedades: Masa (nega=995)
[Síntesis del compuesto (40)]
Se disolvió el compuesto (22) (6 mg, 0,006 mmol) en agua (12 ml) para someterse a agitación durante 10 minutos. Luego, a la disolución de reacción resultante, se añadió lentamente una disolución disuelta con lisina monohidratada (2,1 mg, 0,011 mmol) y carbonato de sodio (0,6 mg, 0,006 mmol) en agua (6 ml) con agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a purificación usando HPLC de fase inversa fraccionada [líquido de elución; disolución A (acetonitrilo al 5%-ácido trifluoroacético 0,1%, disolución acuosa): disolución B (acetonitrilo al 95%-ácido trifluoroacético al 0,1%, disolución acuosa) =90:10] (nombre comercial [Wakosil-II 5C18 RS Pres (20,0 mm 250 mm)], fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dando el compuesto (40) (1 mg, rendimiento del 18%).
Datos de propiedades: Masa (nega=955)
A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de absorción máxima [A(máx.)]
- 634 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 235.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de máxima excitación
- 635 nm
- Longitud de onda de máxima fluorescencia
- 659 nm
Ejemplo 12. Síntesis del compuesto (43) de la presente invención
(1) Síntesis de compuesto de indolenina (30)
10 [Síntesis del compuesto (27)]
Como materiales de partida, se usaron ácido 4-hidrazinobencenosulfónico hidratado 0,5 (26) (50,0 g, 0,253 mol) y 3metil-2-butanona (65,5 g, 0,759 mol), que se sometieron a agitación en ácido acético (200 ml) a 120ºC durante 3 15 horas. Tras completarse la reacción, se enfrió el disolvente para someterse a lavado dos veces mediante la adición de dietil éter (300 ml) dando el compuesto (27) (52,0 g, rendimiento del 86%).
Datos de propiedades: Masa (nega=238)
20 [Síntesis del compuesto (28)]
Se sometieron el compuesto (27) (10,0 g, 0,042 mol) e hidróxido de sodio (1,67 g, 0,042 mol) a agitación en un disolvente mezclado de etanol (30 ml)/2-propanol (100 ml) a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, y se añadió 2-propanol (100 ml) para lavar dos
25 veces dando el compuesto (28) (4,2 g, rendimiento del 39%).
Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3206, 1205
[Síntesis del compuesto (29)]
30 Se sometieron el compuesto (28) (3,5 g, 0,013 mol) y ácido 3-bromopropiónico (2,5 g, 0,016 mol) a reflujo con calentamiento en tolueno (50 ml) a 110ºC durante la noche. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (100 ml) para lavar tres veces dando el compuesto (29) (1,7 g, rendimiento del 41%).
35 Datos de propiedades: Masa (nega=310)
[Síntesis del compuesto (30)] Se disolvieron el compuesto (29) (1,5 g, 4,5 mmol) y clorhidrato de malonaldehídodianilida (1,16 g, 4,50 mmol) en anhídrido acético (20 ml) para someterse a agitación a 120ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (50 ml) para lavar dos veces dando el compuesto de indolenina (30) (1,59 g, rendimiento del 70%).
Datos de propiedades: Masa (nega=481)
(2) Síntesis de compuesto de pirazol (31)
[Síntesis del compuesto (10)]
En DMF (100 ml), se usaron 3-metil-2,4-pentanodiona (9) (15,0 g, 0,13 mol), 1,3-propanosultona (16,1 g, 0,13 mol) e
15 hidruro de sodio (5,0 g, 0,208 mol) en una reacción con agitación a 50ºC durante 16 horas. Tras completarse la reacción, se llevó a cabo la neutralización usando hidróxido de sodio 1 N, y se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a lavado dos veces mediante la adición de agua (200 ml) y dietil éter (200 ml). Después de esto, se eliminó la parte de la fase acuosa a presión reducida dando el compuesto de pirazol (10) (32,2 g, rendimiento del 96%).
20 Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1): 3474, 1695, 1665, 1191
[Síntesis del compuesto (11)]
25 Se disolvieron el compuesto (10) (10,0 g, 0,042 mol) e hidrazina monohidratada (2,1 g, 0,042 mol) en etanol (150 ml), y se sometieron a una reacción con agitación a 80ºC durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de gel de sílice (líquido de elución: metanol/cloroformo=1/1) dando el compuesto (11) (9,0 g, rendimiento del 92%).
30 Datos de propiedades: IR (KBr) (cm-1) 3421, 1195
[Síntesis del compuesto (12)]
Se disolvieron el compuesto (11) (4,8 g, 0,019 mol) y 1,3-propanosultona (2,5 g, 0,02 mol) en dimetilacetoamida
35 (DMA, 30 ml), y se sometieron a agitación a 140ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml) para depositar un cristal, que se filtró dando el compuesto (12) (5,3 g, rendimiento del 76%).
Datos de propiedades: Masa (nega=352)
40 IR (KBr) (cm-1): 3446, 1194
[Síntesis del compuesto (31)]
Se sometieron el compuesto (12) (0,59 g, 2,32 mmol) y ácido 3-bromopropiónico (0,39 g, 2,55 mmol) a agitación
45 durante la noche en un no disolvente. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (30 ml) para lavar dos veces dando el compuesto (31) (0,73 g, rendimiento del 96%).
Datos de propiedades: Masa (nega=303)
50 (3) Síntesis de complejo de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (un compuesto de la presente invención) (43)
[Síntesis del compuesto (41)]
5 Se disolvieron el compuesto de indolenina (30) resultante en el ejemplo 12, (1) (70 mg, 0,139 mmol) y el compuesto de pirazol (31) resultante en el ejemplo 12, (2) (91 mg, 0,278 mmol) en DMF (1 ml), y se añadieron piridina (0,1 ml) y anhídrido acético (0,1 ml) a ello para someterse a agitación a 80ºC durante 1 hora. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para someterse a purificación usando cromatografía en columna de fase inversa (líquido de elución: metanol al 10%) y Sephadex LH-20 (líquido de elución: metanol) dando el compuesto
10 (41) (11 mg, rendimiento del 12%).
Datos de propiedades: Masa (nega =649)
[Síntesis del compuesto (42)]
15 Se disolvió el compuesto (41) (10 mg, 0,019 mmol) en DMF (1 ml), se añadieron carbonato de disuccinimidilo (DSC) (113 mg, 0,37 mmol) y piridina (120 !l) con agitación a 40ºC durante 4 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (15 ml) para depositar un cristal, que se sometió a lavado dando el compuesto (42) (10 mg, rendimiento del 79%).
20 Datos de propiedades: Masa (nega=846)
[Síntesis del compuesto (43)]
25 Se disolvió el compuesto (42) (10 mg, 0,011 mmol) en agua (12 ml) para someterse a agitación durante 10 minutos. Luego, a la disolución resultante, se añadió lentamente una disolución disuelta con monoclorhidrato de lisina (4 mg, 0,022 mmol) y carbonato de sodio (1,1 mg, 0,011 mmol) en agua (6 ml) con agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a purificación usando HPLC de fase inversa fraccionada [líquido de elución; A disolución (acetonitrilo al 5%-ácido
30 trifluoroacético al 0,1%, disolución acuosa): disolución B (acetonitrilo al 95%-ácido trifluoroacético al 0,1%, disolución acuosa) =90:10] (nombre comercial [Wakosil-II 5C18 RS Prep (20,0 mm x 250 mm)]), fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dando el compuesto (43) de la presente invención (1,5 mg, rendimiento del 17%).
Datos de propiedades: Masa (nega=761)
35 A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de absorción máxima [A(máx.)]
- 632 nm
- Coeficiente de absorción molar (s)
- 220.000 M-1cm -1
- Longitud de onda de máxima excitación [Ex(máx.)]
- 632 nm
- Longitud de onda de máxima fluorescencia [Ex(máx.)]
- 657 nm
Ejemplo 13. Síntesis de los compuestos (47) a (48) de la presente invención
[Síntesis del compuesto (46)]
(1) Síntesis del compuesto conector (46)
* Boc=grupo terc-butoxicarbonilo
[Síntesis del compuesto (45)]
15 En tetrahidrofurano (THF, 100 ml), se añadieron diciclohexilcarbodiimida (DCC) (2,6 g, 12,6 mmol), (Z-Cl)-Lys-Boc (compuesto (44)) (5,0 g, 12,1 mmol) y N-hidroxisuccinimida (1,4 g, 12,1 mmol) con agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se filtró la urea en exceso y se añadió ácido 6-aminohexanoico (3,2 g 12,1 mmol) con agitación de nuevo a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se llevó a cabo la neutralización con ácido clorhídrico 1 N, y sometió a lavado dos veces mediante la adición de agua
20 (200 ml) y acetato de etilo (200 ml). Después de esto, se lavó dos veces la fase de acetato de etilo con una disolución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml). Luego, se lavó dos veces la fase de acetato de etilo resultante con una disolución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml), y se eliminó la fase de acetato de etilo resultante a presión reducida dando el compuesto (45) (6,6 g, rendimiento del 52%).
25 Datos de propiedades: Masa (nega:posi=526:528)
[Síntesis del compuesto (46)]
Se disolvió el compuesto (45) (1,0 g, 1,9 mmol) en bromuro de hidrógeno al 25%-ácido acético (52 ml) para
30 someterse a agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se concentró la disolución de reacción y se lavó tres veces con acetato de etilo dando el compuesto (46) (0,61 g, rendimiento del 94%).
Datos de propiedades: Masa (posi=260) 35
(2) Síntesis de complejo de compuesto de indolenina - compuesto de pirazol (un compuesto de la presente invención) (48)
[Síntesis del compuesto (47)]
Se disolvió el compuesto (22) resultante (22 mg, 0,02 mmol) en el ejemplo 11 en agua (25 ml) para someterse a agitación durante 10 minutos. Luego, a la disolución de reacción resultante, se añadió lentamente una disolución disuelta con el derivado de lisina (el compuesto (46), 11 mg, 0,04 mmol) y carbonato de sodio (Na2CO3) (2,2 mg, 0,02 mmol), en agua (10 ml), con agitación a temperatura ambiente durante la noche. Tras completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, para someterse a purificación usando HPLC de fase inversa fraccionada [líquido de elución; disolución A (acetonitrilo al 5%-ácido trifluoroacético al 0,1%, disolución acuosa): disolución B (acetonitrilo al 95%-ácido trifluoroacético al 0,1%, disolución acuosa) =90:10] (nombre comercial [Wakosil-II 5C18 RS Prep (20,0 mm x 250 mm)], fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dando el compuesto (47) (5 mg, rendimiento del 23%).
Datos de propiedades: Masa (nega=1068, 2Na+)
[Síntesis del compuesto (48)]
Se disolvió el compuesto (47) (5 mg, 0,005 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (300 !l), y se añadieron tetrafluoroborato de 2-succinimida-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU) (14 mg, 0,046 mmol) y N-etildiisopropilamina (15 !l) con agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras completarse la reacción, se añadió acetato de etilo (10 ml) para depositar un cristal, que se sometió a separación mediante centrifugación dando el compuesto (48) (4 mg, rendimiento del 75%).
Ejemplo 14. Medición de intensidad de fluorescencia novedosa de un compuesto de la presente invención
Se calculó en líneas generales la intensidad de fluorescencia relativa de un compuesto de la presente invención basándose en la intensidad de fluorescencia de Cy5, que es un derivado de colorante de cianina convencional.
En primer lugar, se midió la intensidad de fluorescencia de Cy5 por 1 !M a partir de la intensidad de fluorescencia de Cy5, y se calculó en líneas generales la intensidad de fluorescencia relativa del compuesto de la presente invención basándose en este valor de intensidad de fluorescencia como 100.
(1) Medición de intensidad de fluorescencia de Cy5
En 1 ml de agua purificada, se disolvió Cy5 (fabricado por GE Healthcare Bioscience Biohealth Co., Ltd.) para marcar 1 mg de proteína. Se diluyó esta disolución 200 veces con una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (pH 7,5) para medir el valor de DO (0,1020).
Se determinó la concentración de una disolución de Cy5 a partir de este valor de DO y coeficiente de absorción molar (s=250,000, [descrito en un catalogo de producto general 2006 “7-4” de GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.]), (0,408 PM).
Entonces se midió la fluorescencia de Cy5 usando la presente disolución. A continuación se muestran las características de fluorescencia.
- Longitud de onda de máxima excitación [Ex(máx.)]
- 649 nm
- Longitud de onda de máxima fluorescencia [Ex(máx.)]
- 670 nm
- Intensidad de fluorescencia
- 3.161
- Intensidad de fluorescencia de Cy5/1!M
- 7.747
(2) Cálculo en líneas generales de la intensidad de fluorescencia relativa de un compuesto de la presente invención
Se calcularon en líneas generales la intensidad de fluorescencia relativa del compuesto (40) de la presente invención, obtenido en el ejemplo 11 y el compuesto (43) de la presente invención, obtenido en el ejemplo 12, en relación con la intensidad de fluorescencia por 1 !M de Cy5, obtenido en el ejemplo 14, (1), como 100. Se muestran los resultados en la tabla 32.
[Tabla 32]
- Compuesto (colorante fluorescente)
- Intensidad de fluorescencia relativa [en relación con la intensidad de fluorescencia de Cy5 (1!M) como 100.
- Ejemplo 1
- Compuesto (16) 155
- Ejemplo 2
- Compuesto (28) 124
- Ej. Comp. 1
- Cy5 100
Tal como queda claro a partir de la tabla 32, al comparar los compuestos de la presente invención y Cy5 (colorante de cianina convencional), se encontró que los compuestos de la presente invención mostraban intensidades superiores de fluorescencia que la de Cy5.
Ejemplo 15. Evaluación práctica de un reactivo de fluorescencia novedoso
(1) Preparación de un anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso (un compuesto marcado de la presente invención)
25 Tras la digestión con pepsina de anticuerpo anti a-fetoproteína (AFP) (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), se redujo esto con 2-aminoetanotiol, y se enmascaró el grupo SH con N-etilmaleimida para someterse a purificación usando una columna de permeación de gel (Superdex200, fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.), se obtuvo un anti-AFP-Fab’.
En 0,43 ml de una disolución tampón de carbonato de sodio 0,1 M (pH 8,5) que contenía el anti-AFP-Fab’ (1,0 mg como masa de proteína calculado usando absorción de 280 nm), se añadió una disolución de dimetilsulfóxido (DMSO) del compuesto (22) (1,0 mg/ml), obtenido en el ejemplo 11 anterior [un compuesto de la presente invención (una sustancia de éster activo)], a una reacción durante la noche en una cámara de baja temperatura. Se sometió la
35 disolución de reacción resultante a purificación usando una columna de permeación de gel dando una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (PBS, pH 6,0) del anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso, un compuesto marcado de la presente invención (0,23 mg como masa de proteína calculado usando absorción de 280 nm).
(2) Medición de intensidad de fluorescencia del anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso (un compuesto marcado de la presente invención) con un método de análisis de fluorescencia HPLC
En 0,05 ml de una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (PBS, pH 6,0), [que contenía 1 mM de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)], que contenía 150 nM del anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia obtenido en el
45 ejemplo 15 anterior, (1), se añadieron 0,05 mM de disoluciones de ácido tris-clorhídrico 50 mM (pH 8,0) que contiene diversas concentraciones de AFP (0, 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10 y 20 nM) a una reacción durante 2 horas. Las disoluciones de reacción resultantes se analizaron con HPLC (LC-10A, fabricado por Shimadzu Corp.) y una columna de permeación de gel (Diol-200, fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), y área pico de un complejo entre el anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia novedoso y se calculó el AFP como intensidad de fluorescencia. Se muestran las intensidades de fluorescencia resultantes de diversos complejos marcados con fluorescencia en la siguiente tabla 33.
Ejemplo comparativo 1. Síntesis de anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia de Cy5
55 Se obtuvo una disolución tampón de ácido fosfórico 50 mM (PBS, pH 6,0) de anti-AFP-Fab’ marcado con fluorescencia de Cy5 ejecutando la operación de manera similar a como en el ejemplo 15, excepto que se usó un reactivo de éster activo de Cy5 (éster activo de Cy5, fabricado por GE Healthcare Bioscience Co., Ltd.), como sustancia de marcaje, en lugar del compuesto (22) de la presente invención usado en el ejemplo 15. Se muestran todos los resultados en la tabla 2.
[Tabla 33]
- Conc. AFP
- Intensidad de fluorescencia del complejo marcado
- (uM)
- Complejo marcado (B1) de la invención Complejo marcado con Cy5 (B2) B1/B2
- (Ex:636 nm, Em:651 nm)
- (Ex:647 nm, Em: 671 nm)
- 20
- 8366 6234 1,34
- 10
- 7457 5337 1,40
- 5
- 5814 3958 1,47
- 2,5
- 2727 1527 1,79
- 1,25
- 803 344 2,33
- 0,625
- 209 177 1,18
- 0
- 0
- 0
- ----
Tal como queda claro a partir de la tabla 33, al comparar los casos en los que se usan un reactivo de fluorescencia
10 de la presente invención y un reactivo de fluorescencia convencional, se encontró que el complejo marcado de la presente invención presentó aproximadamente de 1,1 a 2,0 veces una intensidad de fluorescencia superior.
15 Puesto que un colorante de cianina a base de pirazol de la presente invención tiene una estructura en la que un esqueleto de pirazol y un esqueleto de indol se unen a una cadena de polimetino, y tiene las características de fluorescencia en la región de la longitud de onda más corta tal como se comparó con una fuente de luz convencional, es posible usar una fuente de luz de una región de longitud de onda corta con alta eficacia de energía. Además, en el caso en el que se detecta un objeto de medición usando este como agente de marcaje (una sustancia
20 de marcaje), es posible detectar el objeto de medición con alta sensibilidad de detección, sin tener los problemas, por ejemplo, baja solubilidad en agua, sensibilidad de detección reducida mediante extinción óptica provocada por la agregación de los propios colorantes y similares, que tenía un derivado de colorante de cianina convencional.
Claims (28)
- REIVINDICACIONES1. Compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] y una sal del mismo:
- 5
- en la que R1’ a R6’ representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’ a R10’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo
- alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo
- alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino,
- 10
- pudiendo tener esos grupos sustituyentes; un grupo representado por la fórmula general [2]:
- -COOR12
- [2]
- (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio
- 15
- orgánico, anión o ion amonio); un grupo representado por la fórmula general [3]:
- -SO3R13
- [3]
- (en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion
- 20
- amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo
- alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’, y R2’ y R4’ pueda formar
- un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y grupos
- 25
- representados por las fórmulas generales [52] a [54]:
- (en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo
- 30
- tener esos grupos sustituyentes), y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y en el caso en el que dicho grupo bivalente se forme, al menos uno de R1’ a R11’, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’, y R2’ y R4’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo
- representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; y en el caso en el que dicho grupo bivalente no se forme, al menos uno de R1’ a R11’ tiene el grupo representado por la
- 35
- fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol
- o grupo formilo.
-
- 2.
- Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto representado por la fórmula general [50]
- según la reivindicación 1 es uno representado por la siguiente fórmula general [1]:
- 40
en la que R1 a R6 representan cada uno independientemente grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7 a R10 representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:-COOR12 [2]- (en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio
- orgánico, anión o ion amonio); el grupo representado por la fórmula general [3]:
- 5
- -SO3R13 [3]
- (en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion
- amonio), átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo
- 10
- alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que al menos uno de R1 a R11 tiene el grupo representado por la
- fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol
- o grupo formilo.
- 15
- 3. Compuesto según la reivindicación 2, en el que el compuesto representado por la fórmula general [1] según
- la reivindicación 2 es un compuesto representado por la siguiente fórmula general [1-1]:
- 20
- en la que las definiciones de R1 a R11 y otras son las mismas que anteriormente.
-
- 4.
- Compuesto según la reivindicación 2, en el que el compuesto representado por la fórmula general [1] según
- la reivindicación 2 es un compuesto representado por la siguiente fórmula general [1-2]:
- 25
en la que las definiciones de R1 a R11 y otras son las mismas que anteriormente.30 5. Compuesto según la reivindicación 2, en el que el compuesto representado por la fórmula general [1] según la reivindicación 2 es uno representado por la siguiente fórmula general [1’]:- 35
- en la que R1a a R6a representan cada uno independientemente el grupo alquilo que puede tener el grupo representado por la fórmula general [2] o [3] como sustituyente; R8a representa el grupo representado por la fórmula general [3]; R11a representa un grupo alquilo; y n es el mismo que anteriormente.
-
- 6.
- Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto representado por la fórmula general [50]
- 40
- según la reivindicación 1 es uno representado por la siguiente fórmula general [51]:
en la que R1” a R6” representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7” a R10” representan cada uno independientemente grupo alquilo,5 grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:-COOR12 [2],10 en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:-SO3R13 [3],15 en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11” representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número20 entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’’ y R2”, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ formen un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:25 en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes y grupo alquileno sustituido o no sustituido, y al menos uno de R1’’ a R11’’ , junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo30 amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo. - 7. Compuesto según la reivindicación 6, en el que el compuesto representado por la fórmula general [51] según la reivindicación 6 es uno representado por la siguiente fórmula general [51 ’]:35 en la que R1’’b a R6”b representan cada uno independientemente un grupo alquilo que puede tener el grupo representado por la fórmula general [2] o [3] como sustituyente; R8’’b representa el grupo representado por la fórmula general [3]; R11’’b representa un grupo alquilo; y n representa un número entero de desde 0 hasta40 3, siempre que cualquiera de R1’’b y R2’’b, R4’’b y R5”b, R1’’b y R6’’b y R2’’b y R4’’b forman un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido, y al menos uno de R1’’b a R11’’b, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’b y R2’’b, R4’’b y R5’’b, R1’’b y R6’’b y R2’’b y R4’’b, tiene el grupo representado por la fórmula general [2] o el grupo representado por la fórmula general [3].
- 8. Compuesto según la reivindicación 6, en el que el compuesto representado por la fórmula general [51] según la reivindicación 6 es uno representado por la siguiente fórmula general [55]:
- en la que T forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los
- 5
- grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y R3” a R11” y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R3’’ a R11’’ junto con el grupo
- bivalente representado por T tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado
- por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo.
-
- 9.
- Compuesto según la reivindicación 6, en el que el compuesto representado por la fórmula general [51]
- 10
- según la reivindicación 6 es uno representado por la siguiente fórmula general [56]:
- en la que T forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los
- 15
- grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y R1” a R3”, R6” a R11” y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R1” a R3”, R6” a R11”
- junto con el grupo bivalente representado por T, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el
- grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo.
- 20
- 10. Compuesto según la reivindicación 6, en el que el compuesto representado por la fórmula general [51]
- según la reivindicación 6 es uno representado por la siguiente fórmula general [57]:
- 25
- en la que T forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los
- grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y R2” a R5”, R7” a R11” y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R2” a R5”, R7” a R11”
- junto con el grupo bivalente representado por T, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el
- grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo.
- 30
-
- 11.
- Compuesto según la reivindicación 6, en el que el compuesto representado por la fórmula general [51]
- según la reivindicación 6 es uno representado por la siguiente fórmula general [58]:
en la que T forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y losgrupos representados por las fórmulas generales [52] a [54], y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y R1”, R3”, R5” a R11” y n son los mismos que anteriormente, siempre que al menos uno de R1”, R3”, R5” a R11” junto con el grupo bivalente representado por T tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo. - 12. Compuesto según la reivindicación 6 ó 7, en el que el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’ , R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ es un grupo representado por la siguiente fórmula general [60]:en la que R18 y R19 representan cada uno independientemente grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- o los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]; y R20 representa grupos representados por las siguientes fórmulas generales [70] a [72]:en las que R51 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; R50 es el mismo que anteriormente, átomo de hidrógeno, el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; T3 y T5 representan cada uno independientemente grupo alquileno; y p representa un número entero de desde 1 hasta 20.
- 13. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que el grupo bivalente representado por T es un grupo representado por la siguiente fórmula general [60]:en la que R18 y R19 representan cada uno independientemente grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- o los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]; y R20 representa los grupos representados por las siguiente fórmulas generales [70] a [72]:en las que R51 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; R50 es el mismo que anteriormente, átomo de hidrógeno, el grupo35 representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; T3 y T5 representan cada uno independientemente grupo alquileno; y p representa un número entero de desde 1 hasta 20.
- 14. Compuesto según la reivindicación 13, en el que R20 representa el grupo representado por la fórmula general [2] o un grupo representado por la fórmula general [73]:-CONH- T4-COOR12 [73],en la que T4 representa un grupo alquileno; y R12 es el mismo que anteriormente. 45
-
- 15.
- Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en el que n es 2.
-
- 16.
- Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el número de grupos representados por la fórmula general [3] contenido en el compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] o una sal del mismo es de 2 a 4.
-
- 17.
- Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4, 5 y 16, en el que el compuesto representado por la fórmula general [50] es un compuesto representado por las siguientes fórmulas [13] o [38]:
-
- 18.
- Compuesto marcado obtenido sometiendo el compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] y una sustancia que va a marcarse a unión directa o indirecta:
en la que R1’ a R6’ representan cada uno independientemente grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’ a R10’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo15 alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:- -
- COOR12 [2],
20 en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:- -
- SO3R13 [3],
25 en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ pueda formar30 un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:35 en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes, y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y en el caso en el que dicho grupo bivalente se forme, al menos uno de R1’ y R11’, junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; y en el caso40 en el que dicho grupo bivalente no se forme, al menos uno de R1’ a R11’ tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiolo grupo formilo. - 19. Compuesto marcado según la reivindicación 18, en el que la sustancia que va a marcarse es un nucleótidoo un anticuerpo.
- 20. Compuesto marcado según la reivindicación 18, en el que el compuesto representado por la fórmula general [50] según la reivindicación 18 es uno representado por la siguiente fórmula general [1]:10 en la que R1 a R6 representan cada uno independientemente grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7 a R10 representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:-COOR12 [2],en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:20 -SO3R13 [3],en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo 25 ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que al menos uno de R1 a R11 tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiolo grupo formilo. 30
- 21. Compuesto marcado según la reivindicación 20, en el que el grupo carboxilo, grupo sulfo, grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, en el compuesto representado por la fórmula general [1], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.35 22. Compuesto marcado según la reivindicación 20, en el que el grupo carboxilo, grupo sulfo, grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo incluidos en R1 a R6 en la fórmula general [1], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.
- 23. Compuesto marcado según la reivindicación 20, en el que el grupo carboxilo, grupo sulfo, grupo amino,40 grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo incluidos en R1 o R6 en la fórmula general [1], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.
- 24. Compuesto según la reivindicación 18, en el que el compuesto representado por la fórmula general [50]según la reivindicación 18 es uno representado por la siguiente fórmula general [51]: 45en la que R1’’ a R6’’ representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’’ a R10’’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:-COOR12 [2],5 en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:
- -
- SO3R13 [3],
en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número15 entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ forma un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes, y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y al menos uno de R1” a R11” junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo25 amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo. -
- 25.
- Compuesto marcado según la reivindicación 24, en el que el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo en el compuesto representado por la fórmula general [51], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.
-
- 26.
- Compuesto marcado según la reivindicación 24, en el que el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, contenido en R1’’ a R6’’, o el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y
35 R4’’, en la fórmula general [51], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse. -
- 27.
- Compuesto marcado según la reivindicación 24, en el que el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo, contenido en el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, en la fórmula general [51], se une directa o indirectamente a una sustancia que va a marcarse.
-
- 28.
- Compuesto marcado según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 23, en la que el compuesto representado por la fórmula general [50] es un compuesto representado por las siguientes fórmulas [13] o [38]:
-
- 29.
- Compuesto marcado según la reivindicación 18, en el que el compuesto marcado es un nucleótido marcado representado por las siguientes fórmulas (14a) o (25a):
-
- 30.
- Método de marcaje para una sustancia que va a marcarse, que comprende someter el compuesto representado por la siguiente fórmula general [50] o una sal del mismo a la unión directa o indirecta a la sustancia que va a marcarse:
10 en la que R1’ a R6’ representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’ a R10’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:-COOR12 [2],en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:20 -SO3R13 [3],en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo25 ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’ pueda formar un grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y grupos representados por las fórmulas generales [52] a [54]:30 en la que R1” a R6” representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7’’ a R10’’ representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino,- en las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo
- 5
- tener esos grupos sustituyentes, y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y en el caso en el que dicho grupo bivalente se forme, al menos uno de R1’ y R11’ junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’ y R2’, R4’ y R5’, R1’ y R6’ y R2’ y R4’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo
- representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo; y en el caso en el que dicho grupo bivalente no se forme, al menos uno de R1’ a R11’ tiene el grupo representado por la
- fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol
- 10
- o grupo formilo.
-
- 31.
- Método de marcaje según la reivindicación 30, en el que el compuesto representado por la fórmula general
- [50] según la reivindicación 30 es el compuesto representado por la siguiente fórmula general [1]:
- 15
- en la que R1 a R6 representan cada uno independientemente un grupo alquilo sustituido o no sustituido que puede tener un enlace amida; R7 a R10 representan cada uno independientemente grupo alquilo, grupo
- alquenilo, grupo alquinilo, grupo arilo, grupo alcoxilo, grupo ariloxilo, grupo alquiltio, grupo ariltio, grupo
- 20
- alquilsulfonilo, grupo arilsulfonilo, grupo carbamoílo, grupo sulfamoílo, grupo ureido o grupo amino,
- pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:
- -COOR12
- [2],
- 25
- en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio
- orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:
- -SO3R13
- [3],
- 30
- en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion
- amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo
- alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que al menos uno de R1 a R11 tiene el grupo representado por la
- 35
- fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol
- o grupo formilo.
-
- 32.
- Método de marcaje según la reivindicación 30, en el que el compuesto representado por la fórmula general
- [50] según la reivindicación 30 es el compuesto representado por la siguiente fórmula general [51]:
- 40
pudiendo tener esos grupos sustituyentes; el grupo representado por la fórmula general [2]:- -
- COOR12 [2],
5 en la que R12 representa átomo de hidrógeno, grupo alquilo C1 a C10, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio; el grupo representado por la fórmula general [3]:- -
- SO3R13 [3],
10 en la que R13 representa átomo de hidrógeno, átomo de metal alcalino, ion amonio orgánico, anión o ion amonio, átomo de halógeno, grupo tio heterocíclico aromático, átomo de hidrógeno, grupo hidroxilo, grupo ciano, grupo formilo, grupo tiol o grupo nitro; R11’’ representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo alquinilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes; y n representa un número entero de desde 0 hasta 3, siempre que cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’ forma un15 grupo bivalente con un grupo seleccionado de grupo -O-, grupo -S-, grupo -COO- y los gruposen las que R50 representa átomo de hidrógeno, o grupo alquilo, grupo alquenilo o grupo arilo, pudiendo tener esos grupos sustituyentes, y grupo alquileno sustituido o no sustituido; y al menos uno de R1’’ a R11’’ , junto con el grupo bivalente formado por cualquiera de R1’’ y R2’’, R4’’ y R5’’, R1’’ y R6’’ y R2’’ y R4’’, tiene el grupo representado por la fórmula general [2], el grupo representado por la fórmula general [3], grupo amino, grupo hidroxilo, grupo tiol o grupo formilo.
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