ES2398660T3 - Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas - Google Patents
Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas Download PDFInfo
- Publication number
- ES2398660T3 ES2398660T3 ES05729938T ES05729938T ES2398660T3 ES 2398660 T3 ES2398660 T3 ES 2398660T3 ES 05729938 T ES05729938 T ES 05729938T ES 05729938 T ES05729938 T ES 05729938T ES 2398660 T3 ES2398660 T3 ES 2398660T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- ions
- ferrous ions
- increase
- treated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims abstract description 49
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 6
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 12
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010022971 Iron Deficiencies Diseases 0.000 description 3
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical class [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003172 anti-dna Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N lucigenin Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.C12=CC=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C2)C2=C1C1=C(C=CC=C2)C2=[N+](C)C2=CC=CC=C12 KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037903 inflammatory enteropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- -1 superoxide anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 150000003567 thiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/26—Iron; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Utilización de iones ferrosos para incrementar in vitro la inmunorreactividad de las preparaciones deinmunoglobulinas.
Description
Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas
Campo de la invención
La invención se refiere al uso de iones ferrosos (Fe(II)) para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en particular para incrementar su actividad de fijación a autoantígenos y a antígenos foráneos, su actividad antiidiotípica y sus propiedades antiinflamatorias.
Los anticuerpos naturales de IgG contra autoantígenos y contra antígenos foráneos se sabe que son una parte del repertorio de anticuerpos normales (1, 2). Estos anticuerpos naturales acaban formando parte de preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas (IgIV) para la administración intravenosa que se producen en las mezclas de plasma de donantes sanos. Las preparaciones de IgIV se utilizan para el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias localizadas tanto en un órgano como sistémicas (3). Se ha sugerido que los autoanticuerpos de IgG naturales presentes en la IgIV son responsables de al menos una parte del efecto terapéutico beneficioso observado en los pacientes tratados (4-6).
Las preparaciones de inmunoglobulinas contienen anticuerpos antiidiotípicos contra idiotipos de autoanticuerpos asociados a la enfermedad y neutralizan a estos últimos (7-9).
La solicitud de patente internacional PCT/US95/14869 describe un método para enriquecer las preparaciones de inmunoglobulinas con anticuerpos contra los receptores de antígeno de los linfocitos T. Este método se basa en el uso de una fracción de una preparación de inmunoglobulinas obtenida mediante la elución de una columna de inmunoafinidad en la que se ha inmovilizado un péptido sintético del receptor de antígeno mencionado.
Se ha publicado un método para el tratamiento del lupus eritematoso diseminado en los animales que utiliza una fracción de una preparación con mezcla de inmunoglobulinas enriquecida en anticuerpos contra determinantes idiotípicos de los anticuerpos anti-ADN de los pacientes con lupus. Estos anticuerpos antiidiotípicos se obtuvieron mediante cromatografía de inmunoafinidad de Mg sobre una mezcla inmovilizada de anticuerpos anti-ADN de 55 pacientes con lupus (10).
Se publicó un método para aumentar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas (11) que se basa en el procedimiento siguiente. La solución de inmunoglobulinas se pasa a través de una columna de filtración en gel. Esto da lugar a la elución posterior de las fracciones monoméricas y diméricas. La fracción dimérica obtenida está enriquecida en los autoanticuerpos naturales.
Dietrich et al. 1992 han publicado un método para enriquecer las preparaciones de inmunoglobulinas con autoanticuerpos naturales y con anticuerpos antiidiotípicos que se basa en el aislamiento de la fracción de inmunoglobulinas que se fija a los fragmentos F(ab')2 inmovilizados de las IgIV (12).
La solicitud de patente BG108223 describe un método para incrementar la autorreactividad de las soluciones de inmunoglobulinas terapéuticas mediante el tratamiento en un campo magnético estático.
Sin embargo, el efecto que todos los métodos descritos más arriba tienen sobre la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas es débil.
La patente europea EP1237928 describe un método para realzar la actividad de una preparación de inmunoglobulinas mediante su tratamiento a pH bajo, a pH alto o con agentes caotrópicos (urea, sales o tiocianatos de guanidina y guanidinio). Sin embargo, todavía no está claro si este tratamiento da lugar a la aparición de nuevas características beneficiosas para la preparación tratada que sean relevantes desde el punto de vista biológico.
El efecto biológico de los iones ferrosos (Fe(II)) sobre los linfocitos de rata se estudia con experimentos in vitro (13). No se encontraron efectos tóxicos, pero la aplicación de este tratamiento a la vez que un campo magnético constante que dio lugar a la muerte de las células. Se sabe que los iones ferrosos pueden potenciar la generación de radicales libres en determinados sistemas biológicos, lo que da lugar a la supresión del crecimiento bacteriano (14).
La patente de los Estados Unidos US-A-6465511 describe el tratamiento del choque septicémico con un complejo de metal de transición, que incluye metales de transición tales como hierro, cobre, cinc, manganeso, níquel y los atrapadores adecuados. Este complejo de metales de transición puede administrarse solo o con un inhibidor de NO sintetasa y actúa depurando el NO (óxido nítrico) del cuerpo. La invención citada se basa únicamente en el efecto supresor de la concentración del NO y se centra en el tratamiento de la hipotensión en el choque septicémico en el cual un exceso de NO contribuye a la fisiopatología de la afección.
Gracias a Nordström, D et al. (1997) Rheumatol. Int. 17: 67-73 se sabe que la complementación de hierro por vía oral se utiliza durante la investigación de la respuesta a la eritropoyetina humana recombinante (r-HuEPO) cuando se está tratando la anemia por enfermedad crónica en los pacientes con artritis reumatoide (AR). El protocolo original para el estudio de la pauta terapéutica incluía monitorizar la respuesta a la r-HuEPO administrada como inyección subcutánea y sólo para los pacientes que eran ferropénicos en combinación con la complementación de hierro por vía oral. Esto último se administra con el objetivo de elevar la concentración de hemoglobina en la sangre del paciente. Los autores no investigan el comportamiento de las citocinas en la respuesta a la EPO, asociada a la AR.
El asunto central de la publicación de de Silva, A. D. et al. (2003) Inflammatory Bowel Diseases (IBD) 9: 316-320 es la comparación retrospectiva del uso, de la tolerancia y de la eficacia del tratamiento con hierro por vía oral en los pacientes con enteropatía inflamatoria y causas no inflamatorias de ferropenia. Se explica que el tratamiento con hierro a menudo se utiliza sin que se haya hecho un diagnóstico formal de ferropenia; en la publicación no se sugiere que se traten las afecciones ocasionadas por la producción incontrolada de citocinas inflamatorias.
Hasta la fecha no se han descrito resultados sobre la capacidad que tienen los iones ferrosos para afectar a la inmunorreactividad y a la actividad antiinflamatoria de las preparaciones de inmunoglobulinas.
Descripción
La presente invención se refiere al uso de iones ferrosos que con el objetivo de incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en particular para incrementar su actividad de fijación a antígenos foráneos y a autoantígenos, su actividad antiidiotípica y sus propiedades antiinflamatorias. En concreto, la invención se refiere al uso de un agente para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en donde el agente representa iones ferrosos (Fe(II)) en forma de una sal ferrosa, y se añade a una dosis única de una preparación de inmunoglobulinas a una concentración final de 0,5 a 2 mM.
La nueva propiedad inesperada de los iones ferrosos de acuerdo con la invención, que aumenta la actividad antiinflamatoria de las preparaciones de inmunoglobulinas, se confirma mediante los resultados de experimentos in vitro así como de experimentos in vivo (figuras 1-11). Todos los datos obtenidos demuestran que el tratamiento con Fe(II) altera la inmunorreactividad, la actividad antiidiotípica y las propiedades antiinflamatorias de las preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas. Se mostró que el contacto de la preparación con iones de Fe(II) da lugar a un incremento de la fijación a la citocina proinflamatoria hIFN-y y a un incremento de la supervivencia de los animales con choque septicémico.
Para conocer mejor los mecanismos de acción de los iones ferrosos sobre las preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas se realizaron análisis con quimioluminiscencia. La señal fue débil (0,5 mV) en el control de la solución con Mg. Sin embargo, la adición de los iones ferrosos a 0,5 mM incrementó drásticamente la fuerza de la señal (a 20 mV) (figura 11). Esta señal se suprimía en presencia de la superóxido dismutasa, pero no de la catalasa, una observación que indicó que en el sistema se estaban generando aniones superóxido. A través de una serie de reacciones, este radical se convertiría en especies reactivas de oxígeno aún más agresivas (oxígeno singulete y radical hidroxilo) que tienen la capacidad de introducir cambios en las macromoléculas.
Se utilizó la espectrofluorimetría para estudiar las modificaciones estructurales de las moléculas de inmunoglobulinas de resultas del tratamiento con Fe(II). Se observó una disminución en la fuerza de la señal de la fluorescencia y un desplazamiento de los máximos de emisión. Estas observaciones sugieren que se han producido cambios irreversibles que afectan a restos de triptófano que dan lugar a una alteración de la estructura primaria y terciaria de la proteína.
La nueva aplicación para los iones ferrosos, de acuerdo con la invención, tiene la ventaja de que no induce cambios enormes en las moléculas de inmunoglobulina. La capacidad del Mg nativo y del tratado con Fe(II) para fijar el complemento se comparó mediante el método requerido por la Farmacopea Europea (15). No se detectaron diferencias en la actividad anticomplementaria. También se compararon las curvas de la HPLC del Mg nativo y del tratado con iones ferrosos a 0,01, 0,1 y 1 mM. El contenido de moléculas de inmunoglobulina monoméricas, diméricas y poliméricas era parecido (figura 9). Esto muestra que las preparaciones de inmunoglobulinas tratadas de acuerdo con esta invención satisfacen los requisitos para las soluciones de inmunoglobulinas terapéuticas y se podrían administrar por la vía intravenosa.
Breve descripción de las figuras
En la figura 1 se representa el incremento de la fijación a antígenos de E. coli que presenta una preparación de inmunoglobulinas tratada con iones de Fe(II) para la administración intravenosa.
En la figura 2 se muestra el incremento de la fijación a antígenos del hígado humano que presenta una preparación de inmunoglobulinas tratada con iones de Fe(II) para la administración intravenosa.
En la figura 3, la IgIV tratada como se menciona en el texto para la figura 1 incrementa su actividad de fijación a la miosina pura.
En la figura 4 se representa el incremento de la fijación a autoantígenos (de un extracto de hígado de ratón) que presenta un anticuerpo monoclonal de ratón tratado con iones de Fe(II).
En la figura 5 se representan los datos que muestran que el tratamiento con iones de Fe(II) da lugar a la potenciación de las interacciones entre el idiotipo y el antiidiotipo entre las moléculas de inmunoglobulinas.
En la figura 6 se muestra que el tratamiento con iones ferrosos de preparaciones de una IgIV terapéutica incrementa la fijación de ésta última a la citocina inflamatoria hIFN-y.
En la figura 7 se representa el incremento de supervivencia de los ratones infectados con 5 x 108 E. coli de la cepa WF+ y tratados con IgIV tratada con iones de Fe(II).
Figura 8. Efecto de la IgIV tratada con iones ferrosos sobre la proliferación, inducida por PHA, de las células mononucleadas de la sangre periférica humana.
En la figura 9 se muestra la ausencia de agregación de las moléculas de inmunoglobulina después del tratamiento con iones de Fe(II).
En la figura 10 se representan los indicios de que los cambios estructurales en las moléculas de IgG son resultado de su contacto con los iones ferrosos.
En la figura 11 se muestra que el anión superóxido se genera en una solución de inmunoglobulinas mediante la adición de iones ferrosos.
Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención sin limitar el alcance ni el espíritu de la misma.
Ejemplo 1: Incremento de la actividad de fijación de las preparaciones de inmunoglobulinas tratadas con iones ferrosos contra antígenos de E. coli.
Se añade sulfato ferroso a una concentración final de 0,01 mM, 0,1 mM o 1 mM a una preparación comercial de inmunoglobulinas para la administración intravenosa (Intraglobin F de Biotest, Alemania) y la mezcla se incuba 12 horas a pH neutro (7,4) a 4 ºC.
Un extracto de antígenos de superficie y periplásmicos de E. coli se somete a electroforesis en SDS-PAGE en condiciones no reductoras y las moléculas separadas se transfieren a una membrana de nitrocelulosa. Distintas tiras de la misma membrana se incuban por separado con la preparación de inmunoglobulinas nativa y con la tratada con iones de Fe(II), se lavan, se incuban con un anticuerpo contra la IgG(y) humana conjugado a la fosfatasa alcalina y se revelan. En la figura 1 se muestra el incremento de la fijación a los antígenos de E. coli que presenta la IgIV terapéutica tratada con iones de Fe(II).
Ejemplo 2: Estudio comparativo de la autorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas nativas y tratadas con iones ferrosos.
Se añadió sulfato ferroso (concentración final a 0,01 mM, 0,1 mM o 1 mM) a lntraglobin F como se describe más arriba en el ejemplo 1.
El extracto del antígenos del hígado humano se somete a electroforesis en SDS-PAGE en condiciones no reductoras y las moléculas separadas se transfieren a una membrana de nitrocelulosa. Distintas tiras de la misma membrana se incuban por separado con la preparación de inmunoglobulinas nativa y con la tratada con iones de Fe(II) como se describe en el ejemplo 1. En la figura 2 se muestra el incremento de la fijación a los antígenos del hígado humano que presenta la IgIV tratada con los iones de Fe(II), lo que es un signo del incremento de la autorreactividad de la preparación de inmunoglobulinas.
Ejemplo 3: Estudio del efecto del tratamiento de IgIV con iones de Fe(II) sobre su fijación a un autoantígeno puro.
Este análisis se realiza por ELISA. Las placas de poliestireno para ELISA se recubren con la miosina obtenida de una casa comercial (a 5 !g/ml en PBS, pH 7,4). Las placas se bloquean y se les añade concentraciones crecientes (de 0,1 a 50 !g/ml) de las preparaciones nativas y de las tratadas. El incremento de la fijación al autoantígeno puro que presenta la IgIV después de su contacto con los iones de Fe(II) se presenta en la figura 3.
Ejemplo 4: Estudio de los efectos de los iones de Fe(II) sobre un anticuerpo monoclonal.
Se utiliza la estrategia descrita en el ejemplo 3. Se comprueba la reactividad del anticuerpo monoclonal Z2 de ratón (específico de la IgG2a de ratón) frente a los antígenos de hígado de ratón. Los datos muestran un incremento de la autorreactividad (figura 4).
Ejemplo 5: Estudio de los efectos del tratamiento con iones ferrosos sobre las interacciones del idiotipo con el antiidiotipo entre las moléculas de inmunoglobulinas.
Las placas de ELISA se revisten solo con fragmentos de F(ab')2 de IgIV o solo con fragmentos de Fc de IgIV. La fijación a estos fragmentos inmovilizados que presenta la preparación de inmunoglobulinas sin tratar y tratada con Fe(II) se estudia con el uso de anticuerpos contra la IgG humana (específicos de Fc) o los correspondientes anticuerpos contra la IgG humana (específicos de F(ab')2) conjugados a la fosfatasa alcalina. Los datos muestran (figura 5) que el tratamiento de la preparación de inmunoglobulinas terapéuticas con los iones ferrosos incrementa la fijación al F(ab')2 (panel izquierdo), pero no a los fragmentos de inmunoglobulina Fcy (panel derecho). Por consiguiente, se produce un incremento de las interacciones entre el idiotipo y el antiidiotipo.
Ejemplo 6: Efecto del tratamiento con iones de Fe(II) sobre la fijación al IFN-y humano que presentan los autoanticuerpos naturales de IgG humana.
Se realiza el ELISA con las placas revestidas del IFN-y humano recombinante como se describe en el texto de la figura 2. El tratamiento con iones ferrosos da lugar a que se incremente la fijación a la citocina proinflamatoria hIFN-y (figura 6).
Ejemplo 7: Efecto de las IgIV tratadas con Fe(II) sobre la supervivencia de los ratones en choque septicémico.
El incremento de la capacidad de fijación a las citocinas proinflamatorias que presenta la preparación de IgIV tratadas con Fe(II) se confirma mediante los resultados de los experimentos in vivo con ratones en choque septicémico. A los ratones ICR de 8 a 12 semanas de edad se les inyecta por vía intraperitoneal 5 x 108 E. coli (cepa WF+, proporcionada por el Instituto Central de Investigaciones en Medicina Experimental, Jena, Alemania). Se forman tres grupos con 30 animales cada uno. A los ratones del primero se les inyecta PBS (controles), a los del segundo las IgIV nativas, y a los del tercero las IgIV tratadas con iones de Fe(II). Los grupos 2 y 3 se subdividen en grupos con 10 animales cada uno que reciben una única dosis de 5 mg, 1 mg o 0,2 mg de IgIV. Los resultados del estudio muestran que, 24 horas después de la infección, el 60-65% de los animales que recibieron PBS y las IgIV nativas están muertos, mientras que sobreviven todos los ratones tratados con las IgIV tratadas con los iones de Fe(II) (figura 7).
Ejemplo 8: Estudio de la capacidad de supresión de la proliferación celular que tiene la preparación de inmunoglobulinas tratada con Fe(II).
Se obtuvieron células mononucleadas de la sangre periférica a partir de la sangre venosa donada por un voluntario sano. Las células se cultivan in vitro en presencia del mitógeno PHA (16). Seis horas después se añaden cantidades crecientes de una preparación de IgIV nativas y otra tratada con Fe(II) (a unas concentraciones finales de 20 !g, 200 !g, 400 !g, 1000 !g o 2000 !g por mililitro). Los resultados apuntan a que la preparación de la mezcla de IgG terapéuticas tratadas con iones ferrosos tiene una mayor capacidad inhibidora de la proliferación celular inducida por mitógenos (figura 8).
Ejemplo 9: Estudio de la formación de agregados moleculares después del tratamiento de una preparación de IgIV terapéuticas con iones ferrosos.
Se añaden iones ferrosos a 0,01, 0,1 y 1 mM a una preparación de inmunoglobulinas y ésta última se somete al análisis por HPLC con una columna de gel TSK G3000 SW (7,5 mm x 60,0 cm) y una columna de gel TSK SW Guard protectora (7,5 mm x 7,5 cm). Se presenta el porcentaje de los agregados/dímeros/monómeros de inmunoglobulina. El análisis comparativo de las curvas cromatográficas no muestra ninguna formación de agregados adicional significativa después del tratamiento de la preparación con iones ferrosos (figura 9).
Ejemplo 10: Análisis de los cambios estructurales de las moléculas de inmunoglobulina tras el tratamiento con los iones ferrosos.
Se observa un cambio de la fluorescencia del triptófano después de la incubación de un anticuerpo monoclonal con iones de Fe(II) a 1 mM. El análisis se realiza a temperatura ambiente en un espectrofluorímetro de Perkin-Elmer a una longitud de onda de excitación de 280 nm. Se recoge el espectro de emisión de 300 a 400 nm. Se detecta una disminución en la intensidad de la señal de fluorescencia y un desplazamiento en la emisión máxima. Son signos de los cambios estructurales en la molécula.
El desplazamiento del máximo de emisión puede ser el resultado de la oxidación del triptófano a kinurenina. Esta hipótesis está apoyada por el análisis de quimioluminiscencia con lucigenina. Se añade IgIV (10 mg/ml) a un tampón que contiene lucigenina a 0,5 mg/ml. Se detecta una señal quimioluminiscente débil. La adición de iones ferrosos a 0,5 mM al mismo sistema da lugar a la generación de una señal fuerte. Está señal no está influida por la adición de 10 U de catalasa, pero desaparece en presencia de 1 U de superóxido dismutasa. Por lo tanto, los iones ferrosos son responsables de la generación de los radicales de los aniones superóxido que afectan a la molécula de la proteína (figuras 10 y 11).
Referencias REIVINDICACIONES
Claims (3)
- REIVINDICACIONES1. Utilización de iones ferrosos para incrementar in vitro la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas.
- 2. Utilización de iones ferrosos de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que se añade una única 5 dosis de iones ferrosos a una preparación de inmunoglobulinas a una concentración final de 0,5 a 2,0 mM.
- 3. Utilización de una preparación de inmunoglobulinas con la inmunorreactividad incrementada, que se puede obtener de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 para la fabricación de un medicamento para tratar el choque septicémico.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG10894504 | 2004-11-23 | ||
| BG108945A BG65787B1 (bg) | 2004-11-23 | 2004-11-23 | Средство за повишаване на антиген-свързващата активност на имуноглобулинови препарати |
| PCT/BG2005/000003 WO2006056031A1 (en) | 2004-11-23 | 2005-03-23 | Use of ferrous ions for increasing the immunoreactivity of immunoglobulin preparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2398660T3 true ES2398660T3 (es) | 2013-03-20 |
Family
ID=34964299
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05729938T Expired - Lifetime ES2398660T3 (es) | 2004-11-23 | 2005-03-23 | Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1838731B1 (es) |
| BG (1) | BG65787B1 (es) |
| DK (1) | DK1838731T3 (es) |
| ES (1) | ES2398660T3 (es) |
| PL (1) | PL1838731T3 (es) |
| PT (1) | PT1838731E (es) |
| SI (1) | SI1838731T1 (es) |
| WO (1) | WO2006056031A1 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020053122A1 (en) * | 2018-09-10 | 2020-03-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Combination of her2/neu antibody with heme for treating cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9309387D0 (en) | 1993-05-06 | 1993-06-16 | Wellcome Found | Nitric oxide scavengers |
| EP1237928A1 (en) | 1999-12-13 | 2002-09-11 | ZLB Bioplasma AG | Improvement of therapeutic potential of immunoglobulin preparations |
| BG65588B1 (bg) | 2003-10-03 | 2009-01-30 | Йордан ДИМИТРОВ | Метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати |
| CN104137198B (zh) | 2012-02-13 | 2016-05-04 | Tdk株式会社 | R-t-b系烧结磁体 |
-
2004
- 2004-11-23 BG BG108945A patent/BG65787B1/bg unknown
-
2005
- 2005-03-23 WO PCT/BG2005/000003 patent/WO2006056031A1/en not_active Ceased
- 2005-03-23 SI SI200531653T patent/SI1838731T1/sl unknown
- 2005-03-23 ES ES05729938T patent/ES2398660T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-03-23 EP EP05729938A patent/EP1838731B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-03-23 DK DK05729938.0T patent/DK1838731T3/da active
- 2005-03-23 PT PT57299380T patent/PT1838731E/pt unknown
- 2005-03-23 PL PL05729938T patent/PL1838731T3/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2006056031A1 (en) | 2006-06-01 |
| PT1838731E (pt) | 2013-02-05 |
| SI1838731T1 (sl) | 2013-03-29 |
| EP1838731A1 (en) | 2007-10-03 |
| EP1838731B1 (en) | 2012-11-07 |
| BG108945A (en) | 2009-01-30 |
| BG65787B1 (bg) | 2009-11-30 |
| WO2006056031A8 (en) | 2006-08-17 |
| PL1838731T3 (pl) | 2013-04-30 |
| DK1838731T3 (da) | 2013-02-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2099211T5 (es) | Conjugados citomoduladores de miembros de parejas de union especifica. | |
| US5879679A (en) | Antigen-based heteropolymers and method for treating autoimmune diseases using the same | |
| ES2623653T3 (es) | Anticuerpos anti-MIF | |
| Ji et al. | Erythrocytes as carriers of immunoglobulin-based therapeutics | |
| ES3036522T3 (en) | Single chain variable fragment cd3 binding proteins | |
| AU2005270336B2 (en) | Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent | |
| Hirose et al. | Enzymatic autoantibody glycan hydrolysis alleviates autoimmunity against type VII collagen | |
| AR047717A1 (es) | Anticuerpos dirigidos a c-met | |
| Yi et al. | Pluronic modified leptin with increased systemic circulation, brain uptake and efficacy for treatment of obesity | |
| KR102420552B1 (ko) | 동물 모델에서의 미엘로퍼옥시다제 산화 활성의 pic1 억제 | |
| ES2913073T3 (es) | Direccionamiento del sistema inmunitario innato para inducir tolerancia a largo plazo y resolver la acumulación de macrófagos en aterosclerosis | |
| EA029436B1 (ru) | Комбинированная фармацевтическая композиция для лечения рассеянного склероза и инфекционных заболеваний, сопровождающихся нейротоксическими нарушениями, и способы лечения указанных заболеваний | |
| Josephs et al. | An immunologically relevant rodent model demonstrates safety of therapy using a tumour‐specific IgE | |
| Tan et al. | Genetically Engineered Macrophages Co‐Loaded with CD47 Inhibitors Synergistically Reconstruct Efferocytosis and Improve Cardiac Remodeling Post Myocardial Ischemia Reperfusion Injury | |
| Kamala et al. | Homodimeric minimal factor H: in vivo tracking and extended dosing studies in factor H deficient mice | |
| Dimitrov et al. | Antibody polyspecificity: what does it matter | |
| ES2398660T3 (es) | Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas | |
| JP2023552664A (ja) | 抗ｆｓｈｒ抗体及びその抗体－薬物複合体の製造並びに使用 | |
| Koyama et al. | Effect of chemical cationization of antigen on glomerular localization of immune complexes in active models of serum sickness nephritis in rabbits | |
| Heuer et al. | Higher order receptor clustering due to the IgG3 subclass is necessary for TLR4 signaling and tolerance induction by novel human anti-TLR4 antibodies | |
| Ren et al. | Site-oriented conjugation of poly (2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine) for enhanced brain delivery of antibody | |
| Nie et al. | Single coadministration of erythrocyte-uricase conjugate and immunosuppressant induces durable immune tolerance for gout therapy | |
| Vassilev et al. | Pooled human immunoglobulin preparations as immunomodulating drugs | |
| RU2385164C1 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ Fc-ФРАГМЕНТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНА КЛАССА G В КАЧЕСТВЕ АНТИГЕНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА, СРЕДСТВО И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ | |
| ES2234038T3 (es) | Utilizacion de sustancias con efecto inmunomodulador para el tratamiento de la esclerosis lateral amiotrofica. |