ES2440780T3 - Procedimiento para la purificación de mogrósidos de alta pureza - Google Patents

Procedimiento para la purificación de mogrósidos de alta pureza Download PDF

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Abstract

Procedimiento para la preparación de una mezcla de mogrósidos muy purificados a partir de la mezcla demogrósidos de baja pureza, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes: a. proporcionar una mezcla de mogrósidos de baja pureza; b. disolver la mezcla de mogrósidos de baja pureza en agua o en una solución acuosa de alcohol para formaruna solución inicial de mogrósidos; c. pasar la solución inicial a través de un sistema de columnas, en el que el sistema de columnas comprende unapluralidad de columnas, y cada columna está rellena con un adsorbente que presenta diferentes afinidades a lasimpurezas y los mogrósidos de manera que una o más columnas retienen más mogrósidos que las otrascolumnas; d. lavar las columnas para eliminar las impurezas con una solución acuosa ácida, una solución acuosa básica yuna solución acuosa alcohólica sucesivamente; e. eluir las columnas con una solución acuosa alcohólica que contiene un contenido de alcohol mayor que lasolución acuosa alcohólica utilizada en la etapa de lavado, en el que el eluido de las columnas con alto contenidode mogrósidos se combinan; y f. secar el eluido combinado para obtener mogrósidos de alta pureza siendo el contenido de los mogrósidos totalsuperior a 70% (p/p).

Description

Procedimiento para la purificación de mogrósidos de alta pureza
Campo de la invención
La invención se refiere a un procedimiento para la purificación de mogrósidos de alta pureza a partir del extracto de la fruta Siraitia grosvenorii, especialmente de mezclas de mogrósidos de alta pureza mogrósidos con alto contenido en mogrósido V.
Descripción de la técnica relacionada
Luo han guo generalmente hace referencia a una fruta de Siraitia grosvenorii, un miembro de la familia de las cucurbitáceas, es una planta originaria de algunas regiones del sur de Asia y China. El sabor dulce de luo han guo proviene principalmente de glucósidos de triterpenos conocidos generalmente como mogrósidos o glucósidos de mogrol. Los mogrósidos comprenden sólo aproximadamente 1% de la fruta luo han guo. Existen numerosos mogrósidos identificados en luo han guo, pero en general el mogrósido V (CAS nº: 88901-36-4) presenta la concentración más alta en comparación con los demás (Tabla 1). Los glucósidos de mogrol tienen la misma molécula principal - mogrol u oxo-mogrol y se diferencian entre sí por el número y tipo de restos glucosídicos unidos a moléculas de mogrol u oxo-mogrol.
TABLA 1. Mogrósidos presentes en frutas Luo han guo Sustancia Fórmula mol. Peso mol.
Mogrósido IIE
C42H72O14 801,01
Mogrósido III
C48H82O19 963,15
Mogrósido IV
C54H92O24 1125,29
Mogrósido V
C60H102O29 1287,43
Mogrósido VI
C66H112O34 1449,58
11-oxo-Mogrósido V
C60H100O29 1285,42
Siamenósido I
C54H92O24 1125,29
Grosmomósido I C54H92O24 1125,29
Para aislar los mogrósidos de la frutas luo han guo se utilizan diversas técnicas de extracción. Como resultado se están preparando extractos en polvo de luo han guo que normalmente contienen 30-65% p/p de mogrósidos totales, y el contenido en mogrósido V de esos materiales puede oscilar tanto como entre 18 y 55%. Dichos extractos generalmente no se pueden utilizar como edulcorantes en alimentos y bebidas, ya que contienen cantidad sustancial de impurezas; algunas de las impurezas poseen propiedades organolépticas indeseables, afectando por lo tanto las características de color, aroma, olor y sabor del extracto de luo han guo.
El documento WO-A-2007/062087 da a conocer un procedimiento de preparación de extracto de frutas integral de los frutos de la familia de las cucurbitáceas. El documento WO-A-2008/030121 se refiere a composiciones edulcorantes del fruto Luo Han Guo. El documento WO-A-2009/023975 da a conocer el edulcorante y potenciador de dulzor iso-migrósido V. El documento CN-A-101 407 535 da a conocer el preparado de mogrósido V de alta pureza Momordica grosvenorii. El documento CN-A-101 029 071 da a conocer un procedimiento de preparación de un mogrósido V de alta pureza. El documento CN-A-101 050 230 da a conocer un procedimiento para la preparación de un extracto de Siraitia grosvenorii.
Los ejemplos no limitativos de dichas impurezas comprenden proteínas, pigmentos, polisacáridos, aldehídos, aldehídos insaturados, cetonas de metilo, crotonato de butilo y compuestos fenólicos.
Por lo tanto existe una necesidad de un proceso comercialmente viable para mejorar el contenido de mogrósidos, particularmente el contenido de mogrósido V de los preparados de luo han guo de baja pureza y eliminar las impurezas no deseadas a fin de mejorar significativamente las características organolépticas de los preparados de luo han guo y así permitir su utilización en los alimentos.
No se dispone actualmente de técnicas para la purificación del extracto de luo han guo de baja pureza en mogrósidos de alta pureza. Por lo tanto, existe una necesidad de un proceso para la purificación de mogrósidos de alta pureza a partir de extracto del fruto de Siraitia grosvenorii.
Sumario de la invención
La invención se refiere a un procedimiento para la preparación de mezclas de alta pureza de mogrósidos de extracto de la fruta Siraitia grosvenorii.
En una forma de realización, el procedimiento para la preparación de la mezcla de mogrósidos muy purificada a partir de una mezcla de mogrósidos de baja pureza comprende:
a.
proporcionar una mezcla de mogrósidos de baja pureza;
b.
disolver la mezcla de mogrósidos de baja pureza en agua o en una solución acuosa de alcohol para formar una solución inicial de mogrósidos;
c.
pasar la solución inicial a través de un sistema de columna, en el que el sistema de la columna comprende un gran número de columnas, y cada columna está rellena de un adsorbente que tiene diferentes afinidades a las impurezas y mogrósidos de manera que una o más columnas retienen más mogrósidos que otras columnas;
d.
lavar las columnas para eliminar las impurezas con una solución acuosa ácida, una solución acuosa básica y una solución acuosa alcohólica sucesivamente;
e.
eluir las columnas con una solución acuosa alcohólica que contiene mayor contenido de alcohol que la solución acuosa alcohólica utilizada en la etapa de lavado, en la que se combinan los eluidos de las columnas con alto contenido de mogrósidos; y
f.
secar el eluido combinado para obtener mogrósidos de alta pureza siendo el contenido de los mogrósidos totales más del 70% (p/p).
En otra forma de realización del procedimiento, en la etapa de lavado (d), la proporción de agua a alcohol (vol/vol) en la solución acuosa alcohólica es 99,9:0,1 a 60:40, y en la que en la etapa de elución (e), la proporción de agua a alcohol (vol/vol) de la solución acuosa alcohólica es de 60:40 a 0,1:99,9.
En otra forma de realización del procedimiento, en la etapa de lavado (d), la solución acuosa ácida comprende HCl y la solución acuosa básica comprende NaOH.
En otra forma de realización del procedimiento, la solución acuosa alcohólica comprende alcohol que se selecciona de entre el grupo que consiste en metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, 1-butanol y 2-butanol.
En otra forma de realización del procedimiento, el adsorbente es una resina de adsorción polimérica macroporosa capaz de adsorber mogrósidos.
En otra forma de realización del procedimiento, la pluralidad de columnas están conectadas consecutivamente.
En otra forma de realización del procedimiento, la pluralidad de columnas están conectadas en paralelo.
En otra forma de realización del procedimiento, éste comprende además:
g.
disolver los mogrósidos de alta pureza en agua o en una solución acuosa alcohólica para producir una solución de mogrósidos;
h.
pasar las soluciones de mogrósidos a través de una secuencia de membranas de ultrafiltración y/o nanofiltración con un tamaño de MWCO de 1.000 a 2.500 para aumentar la pureza de la mezcla de mogrósidos (contenido de mogrósidos totales, % en seco); e
i.
secar la solución de la mezcla de mogrósidos obtenida para obtener la mezcla mogrósidos muy purificada.
Un objetivo de la invención es para desarrollar un procedimiento eficiente de preparación de mezcla de mogrósidos muy purificados.
Descripción detallada de la invención
Las ventajas de la presente invención resultarán más evidentes a partir de la descripción detallada proporcionada a continuación. Sin embargo, debe apreciarse que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aunque indican formas de realización preferidas de la invención, son proporcionados únicamente a título ilustrativo, ya que diversos cambios y modificaciones comprendidos en el espíritu y el alcance de la invención resultarán evidentes para los expertos en la materia a partir de esta descripción detallada.
La presente invención proporciona un procedimiento para la purificación de mogrósidos de alta pureza con alto contenido en mogrósido V a partir del extracto de la fruta Siraitia grosvenorii.
En adelante, el término "mogrósidos" se refiere a mogrol y glucósidos de oxo-mogrol , entre ellos mogrósido IIE, mogrósido IIB, mogrósido III, mogrósido IV, mogrósido V, 11-oxo-mogrósido V, mogrósido VI, siamenósido I y grosmomósido I.
En adelante, la expresión "contenido de TM" se refiere al contenido total de mogrósidos, y se calcula como la suma de 4 mogrósidos entre ellos mogrósido V, 11-oxo-mogrósido V, Siamenósido I y Grosmomósido I.
En adelante, la expresión "muy purificado" o "alta pureza" se refiera al contenido de TM de por lo menos 70% (p/p) en seco.
En adelante, la expresión "contenido alto en mogrósido V" se refiere al contenido en mogrósido V de por lo menos el 60% (p/p) en seco.
En adelante, la expresión "baja pureza" se refiere al contenido de TM inferior al 70% (p/p) en seco.
En adelante, la expresión "bajo contenido de mogrósido V" se refiere al contenido de mogrósido V inferior al 60% (p/p) en seco.
En adelante las concentraciones de pureza indicadas se determinan por el método de HPLC con los parámetros siguientes. Sistema HPLC - "serie Agilent 1200" (EE.UU.) equipado con desgasificador, bomba cuaternaria, muestreador automático, compartimento termostatizado de la columna y detector DAD UV. Columna - "YMC Polyamine II" 4,6 × 150 mm 5 !m (Japón) a 30°C; fase móvil acetonitrilo/agua 70: 30 (vol/vol) a 1 ml/min, detector -UV a 204 nm. Los patrones de referencia de mogrósido V, 11-oxo-mogrósido V, siamenósido I y grosmomósido I se obtuvieron de "Chromadex Inc" (EE.UU.).
En adelante, el término "impureza" se refiere a cualquier compuesto que no sea mogrósidos que están presentes en la mezcla a más de 0,0001% (p/p) en seco. Los ejemplos no restrictivos de impurezas comprenden proteínas, pigmentos, polisacáridos, aldehídos, aldehídos insaturados, metilcetonas, crotonato de butilo, compuestos fenólicos, así como otros compuestos no mogrósidos que pueden afectar a las características organolépticas del edulcorante luo han guo.
El procedimiento de purificación de mogrósidos de la presente invención es aplicable a cualquier mezcla de mogrósidos de baja de pureza con el contenido de TM inferior al 70% p/p en seco.
La presente invención proporciona asimismo un sistema de columna que puede utilizarse para el procedimiento de purificación de mogrósidos de la presente invención. El sistema de columna es con los siguientes parámetros. El sistema de columna comprende un gran número de columnas que están conectadas, bien de manera consecutiva (en serie) o en paralelo, donde el gran número de columnas son del mismo o diferentes volúmenes rellenos de un adsorbente con diferente afinidad a las impurezas y a los glucósidos de esteviol. Cuando se utiliza el sistema de columnas en el modo de conexión en paralelo, la entrada de cada columna puede conectar a una fuente de alimentación independiente mientras que la salida a un receptor separado. La siguiente descripción pondrá de manifiesto el modo de conexión de la columna específico para cada etapa en particular. Dentro de la misma etapa, el sistema puede funcionar como una entidad de varios grupos de columnas conectadas en paralelo y en serie y columnas separadas. El número de columnas es de 3 a 15. La relación de los volúmenes de la primera columna al volumen de la segunda columna es de 1:1 a 1:10. La relación de los volúmenes de la última columna al volumen de la columna anterior es de 3:1 a 1:10. Las columnas están rellenas de adsorbente hasta el 75-100% de su volumen total. Las columnas se mantienen a temperaturas entre 5 y 80ºC.
El alcohol se selecciona de entre el grupo que consiste en alcanoles, más particularmente metanol, etanol, npropanol, 2-propanol, 1-butanol y 2-butanol.
El adsorbente es cualquier resina de adsorción polimérica macroporosa capaz de adsorber mogrósidos, tales como Amberlite® serie XAD (Rohm and Haas), Diaion® serie HP (Mitsubishi Chemical Corp), Sepabeads® serie SP (Mitsubishi Chemical Corp), Cangzhou Yuanwei serie YWD (Cangzhou Yuanwei Chemical Co. Ltd., China) o equivalente.
El procedimiento de la presente invención comprende varias etapas. En una forma de realización, la primera etapa comprende hacer pasar una solución acuosa o acuosa alcohólica de mezcla de mogrósidos de baja pureza a través de un sistema de columna conectado de manera consecutiva. La relación de agua a alcohol (vol/vol) en la solución acuosa alcohólica es 99,9:0,1 a 60:40. Como resultado, las impurezas y diferentes mogrósidos se retienen en diferentes secciones del sistema de columna. Las impurezas con alta afinidad se retienen en su mayor parte en la primera columna, y las impurezas de baja afinidad se retienen en su mayoría en la última columna, mientras que los mogrósidos son retenidos en su mayor parte en las columnas centrales del sistema de columnas. Los mogrósidos de
menor peso molecular, en particular siamenósido y grosmomósido I, separados parcialmente de los mogrósidos de mayor peso molecular, son retenidos en mayores cantidades en las pocas columnas primeras de las columnas centrales del sistema de columnas, mientras que los mogrósidos de mayor peso molecular, especialmente el mogrósido V, se retienen en las pocas columnas últimas de las columnas centrales del sistema de columnas.
En una forma de realización, el sistema de columna se compone de 6 columnas que están conectadas de manera consecutiva. En la primera etapa, una solución acuosa alcohólica que comprende una mezcla de mogrósidos de baja pureza con 34,73% (p/p en seco) que comprende 19,47% de mogrósido V, 5,60% de 11-oxo-mogrósido V, 5,20% de Siamenósido I y 4,46 %de Grosmomósido I se pasó a través del sistema de columna; a continuación cada columna se eluyó con alcohol puro para la elución total a fin de comprobar las retenciones de mogrósidos por cada columna. Los resultados de la elución total de la primera etapa se resumen en la Tabla 2.
TABLA 2. Distribución de mogrósidos después de la primera etapa
Mogrósidos, % p/p en seco
Inicial Columnas
I
II III IV V VI
Siamenósido I
5,20 2,90 11,30 8,60 4,10 2,81 1,52
Grosmomósido I
4,46 2,80 9,66 7,50 3,13 2,19 1,48
11-oxo-mogrósido V
5,60 1,50 2,30 3,30 9,37 11,30 5,80
Mogrósido V
19,47 2,73 2,33 17,94 40,32 44,54 8,96
Contenido en TM
34,73 9,93 25,59 37,34 56,92 60,84 17,76
En otra forma de realización de la presente invención, la segunda etapa del proceso de purificación comprende lavar las columnas con mogrósidos retenidos de la primera etapa para eliminar las impurezas residuales restantes aún después de la primera etapa de separación con el fin de aumentar aún más el nivel de pureza de los productos finales. En una forma de realización, las columnas se lavan sucesivamente con una solución acuosa ácida o acuosa alcohólica, una solución acuosa básica o acuosa alcohólica, y una solución acuosa alcohólica. La relación de agua a alcohol (vol/vol) en la solución alcohólica acuosa es 99,9:0,1 a 60:40. La eliminación de impurezas se lleva a cabo ya sea en cada columna por separado (conexión en paralelo) o en grupos de más de una columna conectada consecutivamente (en serie). Similar a la primera etapa, cada columna se eluyó con alcohol puro para la elución total a fin de comprobar las retenciones de mogrósidos por cada columna. Los resultados de la elución total de la segunda etapa con el uso de la misma mezcla de mogrósidos de baja pureza y el mismo sistema de la columna 6 como en la primera etapa se presentan en la Tabla 2.
TABLA 3. Distribución de mogrósidos después de la segunda etapa
Mogrósidos, % p/p en seco
Inicial Columnas
I
II III IV V VI
Siamenósido I
5,20 5,28 20,41 14,77 6,26 4,03 2,56
Grosmomósido I
4,46 5,09 17,45 12,88 4,73 3,16 2,54
11-oxo-mogrósido V
5,60 2,73 4,15 5,67 14,34 16,25 9,85
Mogrósido V
19,47 4,96 4,21 30,81 61,52 64,05 15,22
Contenido en TM
34,73 18,06 46,23 64,13 86,85 87,49 30,16
En una forma de realización de la presente invención, la tercera etapa del procedimiento de purificación comprende eluir las columnas de la sección central (por ejemplo, columnas IV y V) con una solución acuosa alcohólica, en el que la proporción de agua a alcohol (vol/vol) de la solución acuosa alcohólica está comprendida entre 60:40 y 0,1:99,9. La elución se lleva a cabo ya sea en cada columna por separado (conexión en paralelo) o más de un grupo de columnas conectadas consecutivamente (en serie). La elución da como resultado mogrósidos de alta pureza.
En una forma de realización, la cuarta etapa del proceso de purificación comprende eliminar el alcohol del eluido de mogrósidos obtenido después de la tercera etapa y concentrar más y secar el eluido de mogrósidos para obtener una mezcla seca de mogrósidos muy purificada. Para la eliminación de etanol, concentración y secado puede utilizarse cualquier procedimiento conocido en la técnica.
En una forma de realización, las fracciones de baja pureza se combinan y se someten a purificación repetida desde la primera etapa a la cuarta etapa descritas anteriormente.
En una forma de realización, las fracciones de alta pureza se combinan y se secan para producir una mezcla muy purificada de mogrósidos de alto contenido en Mogrósido V que tienen un contenido de TM de 87,18% (p/p en seco) que comprende 62,82% de Mogrósido V , 15,32% de 11-oxo-mogrósido V, 5,11% de Siamenósido y 3,92% de Grosmomósido I.
En una forma de realización, el proceso de purificación de la presente invención comprende además la filtración con la utilización de membranas de ultrafiltración y/o nanofiltración. Se utilizan membranas con tamaño límite de peso molecular (MWCO) de 1000, 1500 y 2000. La mezcla de mogrósidos muy purificada que comprende 62,82% de Mogrósido V, V 15,32% de 11-oxo-Mogrósido V, 5,11% de Siamenósido I y 3,92% de Grosmomósido I se disolvió en solución acuosa de alcohol con contenido de alcohol de 0 a 100% (vol/vol) preferentemente de 0 a 50%, para hacer una solución con un contenido total de sólidos de 0,1 a 50% (peso/volumen), preferentemente 0,5 a 10%. La solución resultante se pasó consecutivamente a través de membranas de ultrafiltración y/o nanofiltración con MWCO 1000, 1500, 2000 y 2500. Se utilizó con esta finalidad un sistema agitado de membranas celulares de Sterlitech Corp. (EE.UU.). De todos modos con esta finalidad puede utilizarse cualquier sistema de filtración adecuado conocido en la técnica. Los ejemplos no limitativas de fabricantes de membranas son Koch Membrane Systems, Inc. (EE.UU.), GE-Osmonics (EE.UU.), Alfa Laval (Suecia). Pueden utilizarse membranas de lámina plana, de fibra hueca, en espiral y otras. Se utilizó diafiltración para aumentar la eficiencia del proceso de filtración por membrana. Dependiendo del tamaño de la membrana lo retenido o permeado contenía la cantidad principal de mogrósidos. Después de cada tratamiento a través de la membrana la fracción que contiene el mogrósido (retenido
o permeado) se concentró o se diluyó de nuevo hasta el contenido de sólidos totales de 0,1 a 50% (peso/volumen), preferentemente de 0,5 a 10% y se pasa a través de la siguiente membrana. La solución se pasó a través aumentando los tamaños de las membranas (desde MWCO 1000 a 2500). De todos modos también es posible otra orden de membrana. Después se obtuvo el tratamiento en membrana de la mezcla de mogrósidos muy purificada que comprende 67,13% de mogrósido V, 16,31% de 11-oxo-mogrósido V, 5,51% de Siamenósido I, y 4,10% de Grosmomósido I (en seco).
Los mogrósidos de alta pureza pueden ser utilizados ya sea solos o en combinación con otros edulcorantes de alta intensidad en alimentos, bebidas, composiciones farmacéuticas, tabaco, nutracéuticos, composiciones orales higiénicas, o cosméticos. Los demás edulcorantes de alta intensidad comprenden glucósidos de esteviol, entre ellos una mezcla dulce purificada de glucósidos de esteviol, esteviósido, rebaudiósido A, rebaudiósido B, rebaudiósido C, rebaudiósido D, rebaudiósido E, rebaudiósido F, dulcósido A, dulcósido B, rubusósido y estevia; siamenósido; mogrósido IV; mogrósido V; edulcorante Luo Han Guo; monatina y sus sales (monatina SS, RR, RS, SR), ácido glicirrícico y sus sales; curculina; taumatina; monelina; mabinlina; brazzeína; hernandulcina; filodulcina; glucifilina; floridzina; trilobatina; baiyunósido; osladin; polipodósido A; pterocariósido A; pterocariósido B; mukuroziósido; flomisósido I; periandrina I; abrusósido A; ciclocariósido I y combinaciones de los mismos.
Se proporcionan los siguientes ejemplos para ilustrar el procedimiento y el sistema de columnas de la presente invención.
Ejemplo 1
Purificación de mogrósidos de alta pureza
Se disolvieron 100 g de extracto de luo han guo (p/p en seco) que comprende 19,47% de Mogrósido V, 5,60% de 11-oxo-Mogrósido V, 5,20% de Siamenósido I y 4,46% de Grosmomósido I (34,73% de contenido en TM) en 2,4 litros de agua desionizada. La solución se pasó a través de 6 columnas de 200 ml conectadas consecutivamente rellenas con adsorbente macroporoso Diaion® HP (Mitsubishi Chemical Corp). Se pasaron posteriormente 2,4 l de agua desionizada a través del sistema. Además, las columnas se lavaron por separado con 2 volúmenes de HCl al 0,5%, a continuación con agua hasta pH neutro, a continuación con NaOH al 0,5%y de nuevo con agua hasta que se consigue un pH neutro de las aguas de lavado. A continuación, las columnas se lavaron por separado con etanol al 10%. A continuación, las columnas se eluyeron con etanol al 50%. Las columnas 4 y 5 estaban conectados consecutivamente. El eluido de las columna 4 y 5 se evaporó a vacío para la eliminación de etanol. La solución acuosa obtenida se secó por pulverización para producir 31 g de mezcla de mogrósido muy purificado que comprende 62,82% de Mogrósido V, 15,32% de 11-oxo-Mogrósido V, 5,11% de siamenósido y 3,92% de grosmomósido (en seco).
Ejemplo 2
Purificación a través de membrana
Se disolvieron 100 g de mogrósidos de alta pureza preparadas según el ejemplo 1 que comprende 62,82% de Mogrósido V, 15,32% de 11-oxo-mogrósido V, 5,11% de siamenósido I y 3,92% de grosmomósido (en seco) en 2,4 litros de agua desionizada. La solución obtenida se hizo pasar a través del sistema agitado de membrana celular (Sterlitech Corp., EE.UU.). La solución se pasó a través de la membrana GE Osmonics 2500 MWCO. El permeado que contenía los mogrósidos se concentró hasta 5% de sólidos y se pasó además a través de la membrana 1000MWCO. El producto retenido que contenía los mogrósidos se concentró y se secó para producir 90 g de polvo
que contiene 67,13% de Mogrósido V, 16,31% de 11-oxo-mogrósido V, 5,51% de Siamenósido I y 4,10% de Grosmomósido I (en seco).

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Procedimiento para la preparación de una mezcla de mogrósidos muy purificados a partir de la mezcla de
    mogrósidos de baja pureza, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes: 5
    a.
    proporcionar una mezcla de mogrósidos de baja pureza;
    b.
    disolver la mezcla de mogrósidos de baja pureza en agua o en una solución acuosa de alcohol para formar
    una solución inicial de mogrósidos; 10
    c. pasar la solución inicial a través de un sistema de columnas, en el que el sistema de columnas comprende una pluralidad de columnas, y cada columna está rellena con un adsorbente que presenta diferentes afinidades a las impurezas y los mogrósidos de manera que una o más columnas retienen más mogrósidos que las otras columnas;
    d.
    lavar las columnas para eliminar las impurezas con una solución acuosa ácida, una solución acuosa básica y una solución acuosa alcohólica sucesivamente;
    e.
    eluir las columnas con una solución acuosa alcohólica que contiene un contenido de alcohol mayor que la
    20 solución acuosa alcohólica utilizada en la etapa de lavado, en el que el eluido de las columnas con alto contenido de mogrósidos se combinan; y
    f. secar el eluido combinado para obtener mogrósidos de alta pureza siendo el contenido de los mogrósidos total
    superior a 70% (p/p). 25
  2. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la etapa de lavado (d), la proporción de agua a alcohol (vol/vol) en la solución acuosa alcohólica es 99,9:0,1 a 60:40, y en el que en la etapa de elución (e), la proporción de agua a alcohol (vol/vol) de la solución acuosa alcohólica es de 60:40 a 0,1:99,9.
    30 3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que en la etapa de lavado (d), la solución acuosa ácida comprende HCl, y la solución acuosa básica comprende NaOH.
  3. 4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la solución acuosa alcohólica
    comprende alcohol que se selecciona de entre el grupo que consiste en metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, 135 butanol y 2-butanol.
  4. 5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el adsorbente es una resina de adsorción polimérica macroporosa que puede adsorber mogrósidos.
    40 6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la pluralidad de columnas están conectadas consecutivamente.
  5. 7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la pluralidad de columnas están
    conectadas en paralelo. 45
  6. 8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además las etapas siguientes:
    g. disolver los mogrósidos de alta pureza en agua o en una solución acuosa alcohólica para producir una 50 solución de mogrósidos;
    h. pasar las soluciones de mogrósidos a través de una secuencia de membranas de ultrafiltración y/o nanofiltración con un tamaño de MWCO de 1.000 a 2.500 para aumentar la pureza de la mezcla de mogrósidos (contenido de mogrósidos total, % en seco); e
    i. secar la solución de la mezcla de mogrósidos obtenida para obtener la mezcla de mogrósidos muy purificada.
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