ES2445792T3 - Anticuerpos antiesclerostina - Google Patents

Abstract

un anticuerpo antiesclerostina para uso en un método para inhibir la reabsorción del hueso en un ser humano,comprendiendo el método administrar al ser humano un anticuerpo antiesclerostina en una cantidad de 1 mg/kg a5 mg/kg, donde el anticuerpo antiesclerostina es un anticuerpo o fragmento del mismo que: (a) demuestra una afinidadde unión por esclerostina de SEC ID Nº: 1 de menos de o igual a 1 x 10-7 M; y (b) comprende una CDR-H1 de SECID Nº: 245, una CDR-H2 de SEC ID Nº: 246, una CDR-H3 de SEC ID Nº: 247, una CDR-L1 de SEC ID Nº: 78, unaCDR-L2 de SEC ID Nº: 79 y una CDR-L3 de SEC ID Nº: 80, donde:**Fórmula**

Description

Anticuerpos antiesclerostina

5 Campo técnico de la invención

La invención se refiere en general al uso de anticuerpos antiesclerostina para modular la densidad ósea.

Antecedentes de la invención

10 La pérdida de contenido mineral del hueso puede estar provocada por una amplia diversidad de afecciones y puede dar como resultado problemas médicos significativos. Por ejemplo, la osteoporosis es una enfermedad debilitante en seres humanos y se caracteriza por reducciones notables de la masa ósea esquelética y la densidad mineral, deterioro estructural del hueso, incluyendo degradación de la microarquitectura del hueso y aumentos

15 correspondientes de la fragilidad ósea (es decir, reducciones de la fuerza ósea), y susceptibilidad a fractura en individuos aquejados. La osteoporosis en seres humanos generalmente está precedida por osteopenia clínica, una afección hallada en aproximadamente 25 millones de personas en los Estados Unidos. Se ha diagnosticado a otros 7-8 millones de pacientes en los Estados Unidos con osteoporosis clínica. La frecuencia de la osteoporosis en la población humana aumenta con la edad. Entre los caucásicos, la osteoporosis es predominante en mujeres que, en

20 los Estados Unidos, comprenden el 80% del grupo de pacientes con osteoporosis. La mayor fragilidad y susceptibilidad a fractura del hueso esquelético en las personas mayores se agrava por el mayor riesgo de caídas accidentales en esta población. Las caderas, muñecas y vértebras fracturadas están entre las lesiones más comunes asociadas con la osteoporosis. Las fracturas de cadera en particular son extremadamente incómodas y caras para el paciente, y para mujeres se correlacionan con altas tasas de mortalidad y morbilidad.

25 Se reconocen los siguientes documentos:

• Lowik et al (2006) J Musculoskelet Neurobnal Interact, volumen 6: 357, que se refiere a señalización de wnt que

está implicada en la acción inhibidora de esclerostina en formación de hueso estimulada por BMP; 30

•

el documento WO 2006/119107 que se refiere a anticuerpos contra esclerostina; este documento corresponde al documento US 2007/0110747, al que se hace referencia posteriormente.

•

un comunicado de prensa de Amgen del 19 de septiembre de 2006 que se refiere a la presentación de

35 Denosumab y Datos de Anticuerpos de Esclerostina en la Reunión Anual de la Sociedad Americana para la Investigación Mineral y del Hueso; sugiriendo los datos el Potencial para Dirigir las Proteínas Clave, Ligando de RANK y Esclerostina, para Afecciones de Pérdida de Hueso; y

• Li et al (2007) J Bone Mineral Research, 22, Suplemento 1: S65, que se refiere al tratamiento con un anticuerpo

40 antiesclerostina que estimula directamente la formación del hueso de una manera dependiente de dosis en ratas ovariectomizadas con osteopenia establecida.

Sumario de la invención

45 La presente invención proporciona un anticuerpo antiesclerostina para su uso en un método de para inhibir la reabsorción del hueso en un ser humano, comprendiendo el método administrar al ser humano un anticuerpo antiesclerostina en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, donde el anticuerpo antiesclerostina es un anticuerpo o fragmento del mismo que: (a) demuestra una afinidad de unión por esclerostina de SEC ID Nº: 1 de menos de o igual a 1 x 10-9 M; y (b) comprende una CDR-H1 de SEC ID Nº: 245, una CDR-H2 de SEC ID Nº: 246, una CDR-H3

50 de SEC ID Nº: 247, una CDR-L1 de SEC ID Nº: 78, una CDR-L2 de SEC ID Nº: 79 y una CDR-L3 de SEC ID Nº: 80. El método puede comprender administrar a un ser humano una cantidad del anticuerpo que es eficaz para reducir el nivel de un marcador de reabsorción del hueso y opcionalmente aumentar el nivel de un marcador de formación del hueso. En algunas realizaciones, la reabsorción del hueso se inhibe y la formación del hueso se aumenta durante al menos aproximadamente 7 días, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 1 mes, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8

55 semanas, 2 meses, 3 meses o más. En realizaciones relacionadas, la invención puede emplearse en el aumento de la densidad mineral del hueso o el tratamiento de un trastorno relacionado con el hueso. La invención puede aliviar los efectos de un trastorno relacionado con osteoclastos. El anticuerpo puede usarse en un método que comprende administrar a un ser humano el anticuerpo, donde el anticuerpo reduce el nivel de un marcador de la reabsorción del hueso en comparación con los niveles del marcador del hueso sin tratamiento. El anticuerpo también puede

60 aumentar el nivel de un marcador de la formación del hueso en al menos aproximadamente 10% en comparación con niveles del marcador del hueso sin tratamiento. El anticuerpo puede administrarse mediante una única dosis o en dosis múltiples. Por ejemplo, el inhibidor de esclerostina puede administrarse en un régimen de terapia a corto plazo, por ejemplo, para aumentar la formación del hueso y/o puede administrarse a largo plazo para prevenir la pérdida de densidad mineral ósea en un régimen terapéutico de mantenimiento.

En cualquiera de los aspectos desvelados en el presente documento, el nivel de uno o más marcadores de la reabsorción del hueso se reducen al menos aproximadamente 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% o más durante al menos 2 semanas, 3 semanas, 30 días, 1 mes, 6 semanas, 2 meses o más, en comparación con los niveles pretratamiento o niveles normales para esa población de pacientes. Como ejemplo no limitante, el nivel del marcador 5 de reabsorción del hueso a las 3 semanas después del tratamiento se reduce en, por ejemplo, al menos aproximadamente 20% en comparación con los niveles pretratamiento o niveles normales para esa población de pacientes. En cualquiera de los casos precedentes, el nivel del marcador de formación del hueso aumenta en al menos aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70%, aproximadamente 80%, aproximadamente 90%, aproximadamente 100% o más durante al menos aproximadamente 2 semanas, 3 semanas, 30 días, 1 mes, 6 semanas, 2 meses o más, en comparación con los niveles pretratamiento o los niveles normales para esa población de pacientes. Como ejemplo no limitante, el nivel del marcador de formación del hueso a las 3 semanas después del tratamiento aumenta, por ejemplo, en al menos aproximadamente 20% en comparación con los niveles pretratamiento o los niveles normales para esa población de pacientes. En una realización ejemplar, el marcador de

15 la reabsorción del hueso es el nivel en suero del telopéptido C de colágeno de tipo I (CTX). En otras realizaciones ejemplares, el marcador de la formación de hueso es fosfatasa alcalina específica de hueso (BSAP), osteocalcina (OstCa) y/o extensión N terminal de procolágeno de tipo 1 (P1NP).

La invención también proporciona el anticuerpo para su uso en un método para tratar un trastorno relacionado con el hueso, donde el método comprende administrar a un ser humano una o más cantidades del anticuerpo eficaz para aumentar la densidad mineral del hueso para el cuerpo total (por ejemplo, cabeza, tronco, brazos y piernas) o en la cadera (por ejemplo, cadera total y/o cuello femoral), columna (por ejemplo, columna lumbar), muñeca, dedo, tibia y/o talón en aproximadamente 1%, aproximadamente 2%, aproximadamente 3%, aproximadamente 4%, aproximadamente 5%, aproximadamente 6%, aproximadamente 8%, aproximadamente 10%, aproximadamente 25 12%, aproximadamente 15%, aproximadamente 18%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25% o 30% o más. En algunas realizaciones, la densidad mineral del hueso del ser humano antes del tratamiento es característica de la osteoporosis u osteopenia, y una o más dosis del anticuerpo se administran en una cantidad y durante un tiempo eficaz para mejorar la densidad mineral del hueso de modo que la densidad mineral del hueso ya no sea característica de la osteoporosis y/u osteopenia. Por ejemplo, puede administrarse una o más dosis durante un periodo de tiempo inicial para aumentar la densidad mineral del hueso en 2,5, o una, desviaciones típicas de la densidad normal para un adulto joven (es decir, una puntuación T ! -2,5 o una puntuación T ! -1, como se definen posteriormente). En realizaciones ejemplares, el periodo de tiempo inicial es de aproximadamente 3 meses o menos, 6 meses o menos, 9 meses o menos, 1 año o menos, 18 meses o menos, o más. El método puede comprender además administrar posteriormente una o más cantidades de un inhibidor de esclerostina eficaz para mantener la

35 densidad mineral del hueso, opcionalmente durante un periodo de tiempo de mantenimiento de al menos aproximadamente 6 meses, 1 año, 2 años o más (por ejemplo, durante el tiempo de vida del sujeto).

La invención proporciona además el anticuerpo para su uso en un método para tratar un trastorno relacionado con hueso en un ser humano administrando una o más dosis entre 1 mg/kg y 5 mg/kg, por ejemplo de aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 2 mg/kg o aproximadamente 3 mg/kg. En algunas realizaciones, pueden administrarse dosis a un intervalo de aproximadamente una vez cada 2 semanas o más, una vez cada mes o más, una vez cada 2 meses o más, una vez cada 3 meses o más, una vez cada 4 meses o más, una vez cada 5 meses o más, una vez cada 6 meses o más, una vez cada 9 meses o más o una vez cada año o más. El anticuerpo puede usarse en la preparación de un medicamento para administración usando cualquiera de los regímenes de dosificación y

45 temporización descritos en el presente documento. Opcionalmente, el anticuerpo antiesclerostina se presenta en un recipiente, tal como un frasco de dosis única o multidosis, que contiene una dosis del anticuerpo para administración (por ejemplo, de aproximadamente 70 a aproximadamente 450 mg de inhibidor de esclerostina). En una realización ejemplar, un frasco puede contener aproximadamente 70 mg o 75 mg del anticuerpo antiesclerostina, y sería adecuado para administrar una única dosis de aproximadamente 1 mg/kg. En otras realizaciones, un frasco puede contener aproximadamente 140 mg o 150 mg; aproximadamente 210 mg, 220 mg o 250 mg; aproximadamente 280 mg, 290 mg o 300 mg; aproximadamente 350 mg o 360 mg; o aproximadamente 420 mg, 430 mg, 440 mg o 450 mg del anticuerpo antiesclerostina.

Adicionalmente, la invención puede usarse para tratar un trastorno relacionado con el hueso en un ser humano que

55 padece o está en riesgo de hipocalcemia o hipercalcemia, un ser humano en el que el tratamiento con una hormona paratiroidea o análogo de la misma está contraindicado, o un ser humano en el que el tratamiento con un bifosfonato está contraindicado. La invención puede comprender administrar al ser humano una cantidad del anticuerpo eficaz para aumentar el nivel de un marcador de la formación del hueso y/o reducir el nivel de un marcador de la reabsorción del hueso, sin dar como resultado hipocalcemia o hipercalcemia (por ejemplo, hipocalcemia o hipercalcemia clínicamente significativa).

También se hace referencia a un método para controlar la terapia antiesclerostina, es decir, la respuesta fisiológica a un inhibidor de esclerostina. El método comprende las etapas de administrar una o más dosis de un inhibidor de esclerostina, y detectar el nivel de uno o más marcadores de la reabsorción del hueso, donde una reducción de al 65 menos aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50% o más en el nivel de un marcador de la

reabsorción del hueso, en comparación con niveles pretratamiento o niveles normales para esa población de pacientes, es indicativa de tratamiento eficaz. El método comprende además opcionalmente la etapa de detectar el nivel de uno o más marcadores de la formación del hueso, donde un aumento de al menos aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente

5 60%, aproximadamente 70%, aproximadamente 80%, aproximadamente 90% o aproximadamente 100% en el nivel de un marcador de la formación del hueso, en comparación con niveles pretratamiento o niveles normales para esa población de pacientes, es indicativo de tratamiento eficaz. En ciertos casos, el aumento en los niveles de marcador de formación del hueso es de aproximadamente 20%. El método puede comprender además la etapa de ajustar la dosis de un inhibidor de esclerostina a una cantidad diferente, por ejemplo, mayor si el cambio en la reabsorción del hueso y/o formación del hueso es menor que el deseado, o menor si el cambio en la reabsorción del hueso y/o formación del hueso es mayor que el deseado.

En un aspecto diferente, el anticuerpo pude reducir el nivel de un marcador de la reabsorción del hueso en al menos aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 15 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50% o más y aumentar el nivel de un marcador de la formación del hueso en al menos aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70%, aproximadamente 80%, aproximadamente 90%, aproximadamente 100%, o más, durante al menos aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 1 mes, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 10 semanas

o aproximadamente 3 meses. También se hace referencia a un método para seleccionar dichos inhibidores de esclerostina administrando un inhibidor de esclerostina candidato a un animal y seleccionando un inhibidor de esclerostina candidato que cambie el nivel de un marcador de la reabsorción del hueso y/o formación en el grado deseado.

25 También se hace referencia a los agentes de unión de esclerostina desvelados en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747, por ejemplo, en cualquiera de los métodos desvelados en el presente documento

o para la preparación de medicamentos para su administración de acuerdo con cualquiera de los métodos desvelados en el presente documento. A este respecto, la invención incluye el anticuerpo para su uso en un método para inhibir la reabsorción del hueso en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, donde la cantidad es eficaz para producir el nivel en suero de telopéptido C de colágeno de tipo I (CTX) en al menos 20%, en comparación con los niveles pretratamiento o normales, en 3 semanas después de comenzar el tratamiento. La invención también incluye el anticuerpo para su uso en un método para aumentar la densidad mineral del hueso en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, donde la cantidad es eficaz para (a) reducir el nivel en suero de CTX en al menos 20% en comparación con niveles pretratamiento o normales, en 3 semanas después de comenzar el tratamiento, y (b) aumentar el nivel en

35 suero de un marcador de la formación del hueso seleccionado del grupo que consiste en el nivel en suero de la fosfatasa alcalina específica del hueso (BSAP), nivel en suero de la extensión amino terminal del péptido de procolágeno de tipo 1 (PINP) y el nivel en suero de osteocalcina (OstCa), en al menos 20%, en comparación con los niveles pretratamiento o normales, en 3 semanas después de comenzar el tratamiento.

La invención incluye además el anticuerpo para su uso en un método para tratar un trastorno relacionado con el hueso en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg durante un primer periodo de tiempo, donde la cantidad es eficaz para aumentar la densidad mineral del hueso en la cadera, columna, muñeca, dedo, tibia y/o talón en al menos aproximadamente 3%, seguido de una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg durante un segundo periodo de tiempo eficaz para mantener la densidad mineral del hueso. También se contempla el anticuerpo para su uso en un método para

45 tratar un trastorno relacionado con el hueso en un ser humano que padece o está en riesgo de hipocalcemia o hipercalcemia en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, así como el anticuerpo para uso en un método para tratar un trastorno relacionado con el hueso en (a) un ser humano en el que el tratamiento con una hormona paratiroidea o análogo de la misma está contraindicado o (b) un ser humano en el que el tratamiento con bifosfonato está contraindicado, donde el anticuerpo se administra en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg.

También se hace referencia a recipientes que comprenden anticuerpo antiesclerostina o fragmento del mismo. En un caso, el recipiente comprende anticuerpo antiesclerostina o fragmento del mismo e instrucciones para administrar el anticuerpo o fragmento del mismo en una cantidad eficaz para (a) reducir el nivel en suero del telopéptido C de colágeno de tipo I (CTX) en al menos 20%, en comparación con los niveles pretratamiento o normales, a las 3 55 semanas después de comenzar el tratamiento, y (b) aumentar el nivel en suero de fosfatasa alcalina específica del hueso (BSAP), el nivel en suero de la extensión amino terminal del péptido de procolágeno de tipo 1 (PINP), o el nivel en suero de osteocalcina (OstCa), en al menos 20%, en comparación con los niveles pretratamiento o normales, a las 3 semanas después de comenzar el tratamiento. Como alternativa o además, el recipiente comprende una cantidad de anticuerpo antiesclerostina de aproximadamente 70 mg a aproximadamente 450 mg. También se hace referencia a un recipiente que comprende anticuerpo antiesclerostina o fragmento del mismo e instrucciones para administrar el anticuerpo o fragmento del mismo para tratar un trastorno relacionado con el hueso en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg cada dos o cuatro semanas. También se hace referencia a un recipiente que comprende anticuerpo antiesclerostina o fragmento del mismo e instrucciones para administrar el anticuerpo o fragmento del mismo para tratar un trastorno relacionado con el hueso en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg

65 durante un periodo de aproximadamente 3 meses.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es una gráfica del porcentaje de cambio de los niveles de la extensión N terminal de procolágeno de tipo 1 (P1NP) en comparación con los niveles de P1NP de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la 5 administración de diversas dosis individuales de un agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas, sanas.

La Figura 2 es una gráfica del porcentaje de cambio de los niveles de fosfatasa alcalina específica del hueso (BSAP) en comparación con los niveles de BSAP de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración en diversas dosis individuales de un agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas, sanas.

La Figura 3 es una gráfica del porcentaje de cambio de los niveles de osteocalcina en comparación con los niveles de osteocalcina de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración de diversas dosis

15 individuales de un agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas.

La Figura 4 es una gráfica del porcentaje de cambio de los niveles del telopéptido C terminal de colágeno de tipo 1 (CTX) en suero en comparación con los niveles de CTX en suero de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración de diversas dosis individuales de un agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas.

La Figura 5 son gráficas del porcentaje de cambio de los niveles de osteocalcina, BSAP, P1NP y CTX en comparación con los niveles de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración de una única dosis de 5 mg/kg o 10 mg/kg del agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas, sanas.

25 La Figura 6 es una gráfica del porcentaje de cambio de los niveles de calcio en suero en comparación con los niveles de calcio en suero de línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración de diversas dosis individuales de un agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas.

La Figura 7 son gráficas del porcentaje de cambio de la densidad mineral ósea en comparación con línea basal y placebo frente al tiempo (día) después de la administración de diversas dosis individuales de agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas, sanas.

Descripción detallada de la invención

35 La invención está basada, al menos en parte, en el sorprendente descubrimiento de que el bloqueo o la inhibición de la actividad biológica de la esclerostina humana desencadena múltiples respuestas fisiológicas ligadas al aumento de la densidad mineral del hueso (BMD), incluyendo inhibición significativa de la reabsorción del hueso. La mayoría de las terapias disponibles actualmente inhiben solamente la reabsorción del hueso sin aumentar la formación del hueso. Algunas terapias disponibles en la actualidad para trastornos asociados con BMD reducida solamente aumentan la formación del hueso sin reducir significativamente la reabsorción del hueso. Por ejemplo, cuando se desencadena formación del hueso por algunos fármacos actuales, también puede aumentar la reabsorción del hueso (aunque potencialmente a una tasa menor que antes de la terapia). Por el contrario, los agentes que interfieren con la actividad de esclerostina potencian la formación del hueso y reducen la reabsorción del hueso. En

45 otras palabras, los inhibidores de esclerostina “desacoplan” la formación del hueso y la reabsorción del hueso para construir hueso más eficazmente. Los materiales y métodos de la invención son superiores a las terapias existentes cuya eficacia terapéutica es limitada y que van acompañadas por efectos secundarios adversos potencialmente graves.

A este respecto, la invención posibilita inhibir la reabsorción del hueso, por ejemplo, reabsorción del hueso mediada por osteoclastos, células óseas que disuelven matrices minerales óseas. La invención posibilita además aliviar los efectos de un trastorno relacionado con osteoclastos, es decir, un trastorno provocado por actividad de osteoclastos aumentada de forma anómala que, en algunas realizaciones, se manifiesta como reabsorción del hueso anormalmente alta. En particular, la invención proporciona un anticuerpo antiesclerostina para su uso en un método

55 para inhibir la reabsorción del hueso en un ser humano, comprendiendo el método administrar al ser humano un anticuerpo antiesclerostina en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, donde el anticuerpo antiesclerostina es un anticuerpo o fragmento del mismo que: (a) demuestra una afinidad de unión por esclerostina de SEC ID Nº: 1 de menos de o igual a 1 x 10-9 M; y (b) comprende una CDR-H 1 de SEC ID Nº: 245, una CDR-H2 de SEC ID Nº: 246, una CDR-H3 de SEC ID Nº: 247, una CDR-L1 de SEC ID Nº: 78, una CDR-L2 de SEC ID Nº: 79 y una CDR-L3 de SEC ID Nº: 80.

La actividad de un inhibidor de esclerostina, por ejemplo, un agente de unión a esclerostina (descrito adicionalmente posteriormente) puede medirse de diversas maneras. Los aumentos del contenido mineral del hueso o la densidad ósea mediados por agente de unión a esclerostina pueden medirse usando absorciometría de rayos X de energía

65 individual y doble, ultrasonidos, tomografía computarizada, radiografía y formación de imágenes por resonancia magnética. La cantidad de masa ósea también puede calcularse a partir de los pesos corporales o usando otros métodos (véase Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res., 5: 177-181 (1984)). Se usan animales y modelos animales particulares en la técnica para ensayar el efecto de las composiciones y métodos farmacéuticos en, por ejemplo, parámetros de pérdida de hueso, reabsorción del hueso, formación del hueso, fuerza ósea o mineralización del hueso que imitan condiciones de enfermedad humana tales como osteoporosis y osteopenia. Los ejemplos de

5 dichos modelos incluyen el modelo de rata ovariectomizada (Kalu, Bone and Mineral, 15:175-192 (1991); Frost y Jee, Bone and Mineral, 18: 227-236 (1992); y Jee y Yao, J. Musculoskel. Neuron. Interact., 1: 193-207 (2001)). Los métodos para medir la actividad del agente de unión a esclerostina descritos en el presente documento también pueden usarse para determinar la eficacia de otros inhibidores de esclerostina.

En seres humanos, la densidad mineral ósea puede determinarse clínicamente usando absorciometría de rayos x doble (DXA) de, por ejemplo, la cadera y la columna. Otras técnicas incluyen tomografía computarizada cuantitativa (QCT), ultrasonografía, absorciometría de rayos X de energía individual (SXA) y absorciometría radiográfica. Los sitios esqueléticos centrales comunes para medición incluyen la columna y la cadera; los sitios periféricos incluyen el antebrazo, el dedo, la muñeca y el talón. Excepto para ultrasonografía, la Asociación Médica Americana indica que

15 las técnicas de BMD típicamente implican el uso de rayos x y se basan en el principio de que la atenuación de la radiación depende del grosor y composición de los tejidos en la ruta de la radiación. Todas las técnicas implican la comparación de los resultados con una base de datos normativa.

Como alternativa, puede calibrarse una respuesta fisiológica a uno o más agentes de unión a esclerostina controlando los niveles de marcador de hueso. Los marcadores de hueso son productos creados durante el proceso de remodelación del hueso y se liberan por el hueso, osteoblastos y/u osteoclastos. Las fluctuaciones en los niveles de “marcadores” de reabsorción del hueso y/o formación del hueso implican cambios en la remodelación/modelación del hueso. La Fundación de la Osteoporosis Internacional (IOF) recomienda usar marcadores del hueso para controlar las terapias de densidad del hueso (véase, por ejemplo, Delmas et al., Osteoporos Int., Supl. 6: S2-17

25 (2000), incorporado en el presente documento por referencia). Los marcadores indicativos de la reabsorción del hueso (o actividad de osteoclastos) incluyen, por ejemplo, telopéptido C (por ejemplo, telopéptido C terminal de colágeno de tipo 1 (CTX) o telopéptido C reticulado en suero), telopéptido N (telopéptido N terminal de colágeno de tipo 1 (NTX)), desoxipiridinolina (DPD), piridinolina, hidroxiprolina urinaria, galactosil hidroxilisina y fosfatasa ácida resistente a tartrato (por ejemplo isoforma 5b de fosfatasa ácida resistente a tartrato en suero). Los marcadores de formación/mineralización del hueso incluyen, pero sin limitación, fosfatasa alcalina específica del hueso (BSAP), péptidos liberados de la extensión N y C terminal del procolágeno de tipo I (P1NP, PICP) y osteocalcina (OstCa). Están disponibles en el mercado varios kits para detectar y cuantificar marcadores en muestras clínicas, tales como orina y sangre.

35 Tras su administración, el anticuerpo antiesclerostina reduce preferentemente el nivel de uno o más marcadores de la reabsorción del hueso, tales como el nivel en suero del telopéptido C de colágeno de tipo I (CTX). También se hace referencia a un método para controlar la terapia antiesclerostina, es decir, la respuesta fisiológica a un agente de unión a esclerostina u otro inhibidor de esclerostina. El método comprende administrar un agente de unión a esclerostina, después medir el nivel de uno o más marcadores de la reabsorción del hueso. Además, el método puede comprender medir el nivel de uno o más marcadores de la formación del hueso antes de la administración de un agente de unión a esclerostina. El nivel del marcador de reabsorción del hueso durante y/o después del tratamiento con el agente de unión a esclerostina puede compararse con un nivel pretratamiento, o como alternativa puede compararse con un intervalo convencional típico de esa población de pacientes. Un experto habitual en la materia puede determinar fácilmente un intervalo convencional adecuado ensayando un número representativo de

45 pacientes de edad, sexo, nivel de enfermedad y/u otras características de la población de pacientes similares. El nivel del marcador de reabsorción del hueso puede reducirse en al menos aproximadamente 5% (por ejemplo, aproximadamente 10%, aproximadamente 20% o aproximadamente 30%) por una única dosis de agente de unión a esclerostina. En algunos casos, la dosis del agente de unión a esclerostina reduce el nivel del marcador de reabsorción del hueso al menos aproximadamente 40% (por ejemplo, aproximadamente 50%, aproximadamente 60% o aproximadamente 70%) en comparación con el nivel del marcador de reabsorción del hueso antes de administrar el agente de unión a esclerostina. Además, el nivel del marcador de reabsorción del hueso puede reducirse durante al menos aproximadamente 3 días (por ejemplo, aproximadamente 7 días, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 1 mes, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 9 semanas,

55 aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas o aproximadamente 3 meses) después de la administración de una única dosis del agente de unión a esclerostina.

Además de reducir el nivel de marcadores de reabsorción del hueso, la cantidad de anticuerpo antiesclerostina administrada a un paciente también puede aumentar el nivel de uno o más marcadores de la formación del hueso, tales como el nivel en suero de BSAP, el nivel en suero de P1NP, y/o el nivel en suero de OstCa. Una dosis individual de anticuerpo puede aumentar el nivel de un marcador de formación del hueso, por ejemplo, en al menos aproximadamente 5% (por ejemplo, aproximadamente 10%, aproximadamente 20% o aproximadamente 30%). En algunas realizaciones, la dosis de anticuerpo eleva el nivel de un marcador de formación del hueso al menos aproximadamente 40% (por ejemplo, aproximadamente 50%, aproximadamente 60% o aproximadamente 70%). En 65 otras realizaciones, la dosis de anticuerpo aumenta el nivel de uno o más marcadores de formación del hueso en al menos aproximadamente 75% (por ejemplo, aproximadamente 80%, aproximadamente 90%, aproximadamente

100% o aproximadamente 110%). En otras realizaciones más, la dosis de anticuerpo aumenta el nivel de un marcador de formación del hueso en al menos aproximadamente 120% (por ejemplo, aproximadamente 130%, aproximadamente 140%, aproximadamente 150%, aproximadamente 160% o aproximadamente 170%). En realizaciones alternativas, el anticuerpo aumenta el nivel de un marcador de formación del hueso en al menos

5 aproximadamente 180% (por ejemplo, aproximadamente 190% o aproximadamente 200%). Los niveles de marcadores de formación del hueso idealmente permanecen elevados (en comparación con los niveles de marcadores de formación del hueso pretratamiento o con un intervalo convencional típica de esa población de pacientes) durante al menos aproximadamente 3 días (por ejemplo, aproximadamente 7 días, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 1 mes, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas o aproximadamente 3 meses) después de la administración de una dosis individual del anticuerpo.

La invención puede aumentar la densidad mineral del hueso (BMD), administrando una cantidad del anticuerpo

15 antiesclerostina que (a) reduce el nivel de un marcador de la reabsorción del hueso y (b) aumenta el nivel de un marcador de la formación del hueso para un ser humano. La BMD generalmente se correlaciona con fragilidad esquelética y osteoporosis. Típicamente, la BMD puede medirse en “cuerpo total” (por ejemplo, cabeza, tronco, brazos y piernas) o en la cadera (por ejemplo, cadera total y/o cuello femoral), columna (por ejemplo, columna lumbar), muñeca, dedo, tibia y/o talón. En el diagnóstico de osteoporosis, se compara la BMD de un paciente con la densidad pico de un adulto sano de 30 años de edad (es decir, un “adulto joven”), creando la llamada “puntuación T”. La BMD de un paciente también puede compararse con una densidad del hueso “de edad coincidente” (véase, por ejemplo, el Grupo Científico de la Organización Mundial de la Salud para la Prevención y el Tratamiento de Osteoporosis, “Prevention and management of osteoporosis: report of a WHO scientific Group”. WHO Technical Report Series; 921, Ginebra, Suiza (2000)). La diferencia entre la BMD de un paciente y la de un adulto joven, sano

25 se indica convencionalmente en términos del múltiplo de una “desviación típica”, que típicamente equivale de aproximadamente 10% a aproximadamente 12% de reducción de la densidad ósea. La Organización Mundial de la Salud ha propuesto cuatro categorías de diagnóstico basándose en las puntuaciones T de BMD. Un valor de BMD dentro de una desviación típica de la media de referencia de adulto joven (puntuación T ! -1) es “normal”. La masa ósea baja (osteopenia) se indica por un valor de BMD de más de una desviación típica por debajo de la media de adulto joven, pero menos de 2 desviaciones típicas (puntuación T < -1 y > -2,5). Una puntuación T de más de 2,5 desviaciones típicas por debajo de la norma apoya un diagnóstico de osteoporosis. Sin un paciente padece adicionalmente una o más fracturas de fragilidad, el paciente se clasifica como con osteoporosis grave.

El anticuerpo antiesclerostina puede administrarse a un paciente para mejorar la densidad mineral del hueso

35 independientemente de la puntuación T del paciente. El anticuerpo puede administrarse a una dosis y durante un periodo de tiempo eficaz para aumentar la BMD en el paciente en al menos aproximadamente 1% (aproximadamente 2%, aproximadamente 3%, aproximadamente 4%, aproximadamente 5% o aproximadamente 6%). En algunas realizaciones, la BMD aumenta en al menos aproximadamente 8% (por ejemplo, al menos aproximadamente 10%, aproximadamente 12%, aproximadamente 15% o aproximadamente 18%). En otras realizaciones, la BMD se aumenta por el anticuerpo al menos aproximadamente 20% (por ejemplo, al menos aproximadamente 22%, aproximadamente 25% o aproximadamente 28%) en la cadera, columna, muñeca, dedo, tibia y/o talón. En otras realizaciones más, la BMD aumenta al menos aproximadamente 30% (por ejemplo, al menos aproximadamente 32%, aproximadamente 35%, aproximadamente 38% o aproximadamente 40%). En otras palabras, la BMD puede aumentarse al intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 2,5 desviaciones típicas

45 (preferentemente un intervalo de aproximadamente 0 a aproximadamente 1 desviación típica) por debajo de la BMD normal de un adulto joven sano.

Las alteraciones en la remodelación del hueso pueden conducir a fluctuaciones en las concentraciones minerales en todo el cuerpo. El hueso es uno de los principales reguladores de los niveles de calcio en el torrente sanguíneo. La reabsorción de hueso mediada por osteoblastos libera calcio almacenado a la circulación sistémica, mientras que la formación de hueso mediada por osteoblastos retira calcio de la circulación para incorporarlo en el tejido óseo. En la remodelación de hueso normal, estos procesos ciclan para mantener el hueso sano, fuerte y mantener niveles de calcio libre de aproximadamente 8,5 mg/dl a aproximadamente 10,5 mg/dl (por ejemplo, de aproximadamente 2,2 mmol/l a aproximadamente 2,6 mmol/l). Los trastornos del hueso, otras enfermedades, e incluso ciertas terapias

55 pueden alterar los niveles de calcio sistémico con consecuencias negativas. La hipercalcemia se asocia con altos niveles de calcio en la sangre (por ejemplo, mayores de 12 mg/dl o 3 mmol/l). Niveles de calcio extraordinariamente altos conducen a, por ejemplo, fatiga, confusión, estreñimiento, apetito reducido, frecuencia urinaria, problemas cardiacos y dolor óseo. La hipocalcemia es un desequilibrio de electrolitos indicado por un nivel de calcio anormalmente bajo en la sangre (por ejemplo, menos de aproximadamente 9 mg/dl o 2,2 mmol/l). Los niveles de calcio de < 7,5 mg/dl (< 1,87 mmol/l) o menos se consideran hipocalcemia grave y pueden estar acompañados de síntomas clínicos.

Los síntomas habituales de hipocalcemia incluyen espasmos nerviosos y musculares y calambres, entumecimiento, hormigueo en las extremidades, confusión e irregularidades cardiacas. Las variaciones extremas en el calcio

65 sistémico pueden conducir al coma y la muerte.

Varias enfermedades y terapias farmacéuticas alteran los niveles de calcio sistémicos. La hipercalcemia e hipocalcemia pueden resultar de, por ejemplo, enfermedad renal crónica, insuficiencia renal, hiperparatiroidismo primario o secundario, seudohiperparatiroidismo, hipoparatiroidismo, seudohipoparatiroidismo, agotamiento de magnesio, alcoholismo, terapia de bisfosfonato, hipermagnesemia grave, deficiencia de vitamina D, hiperfosfatemia,

5 pancreatitis aguda, síndrome del hueso hambriento, quelación, metástasis osteoblástica, septicemia, cirugía, quimioterapia, síndrome de neoplasia, hipercalcemia hipocalciúrica familiar, sarcoidosis, tuberculosis, beriliosis, histoplasmosis, Candidiasis, Coccidioidomicosis, histiocitosis X, linfoma de Hodgkin o No de Hodgkin, enfermedad de Crohn, granulomatosis de Wegener, leucemia, neumonía, granulomas inducidos por silicona, inmovilización o terapia farmacológica, tal como la administración de diuréticos de tiazida, litio, estrógenos, fluoruros, glucosa e insulina. Además, las fluctuaciones de calcio en suero son un efecto secundario de muchas terapias relacionadas con el hueso existentes, tales como terapia de bisfosfonato y hormona paratiroidea. Debido a las consecuencias potencialmente con peligro para la vida del desequilibrio de calcio, los pacientes susceptibles a hipocalcemia o hipercalcemia pueden necesitar renunciar a ciertas opciones de terapia.

15 Notablemente, se ha mostrado que los anticuerpos antiesclerostina promueven la formación de hueso e inhiben (o ralentizan) la reabsorción del hueso con fluctuaciones mínimas en niveles de calcio sistémico (por ejemplo, los niveles de calcio fluctúan 10% o menos desde los niveles de calcio en suero de línea basal). En consecuencia, los materiales de la invención son particularmente ventajosos para tratar pacientes que son susceptibles o sensibles a niveles de calcio inestables. La cantidad de anticuerpo administrado a un ser humano en el contexto de este aspecto de la invención es una cantidad que no da como resultado hipocalcemia o hipercalcemia (por ejemplo, hipocalcemia

o hipercalcemia clínicamente significativa). Además, la invención proporciona un anticuerpo para su uso en un método para tratar un trastorno relacionado con hueso en un ser humano que padece o está en riesgo de hipocalcemia o hipercalcemia o un ser humano en el que el tratamiento con bisfosfonato, una hormona paratiroidea

o análogo de hormona paratiroidea está contraindicado. El método comprende administrar al ser humano una

25 cantidad de un agente de unión a esclerostina eficaz para aumentar el nivel de un marcador de la formación del hueso, tal como niveles en suero de BSAP, P1NP y/u OstCa y/o reducir el nivel de un marcador de reabsorción del hueso, tal como CTX.

La invención es útil para tratar o prevenir trastornos relacionados con el hueso, tales como trastornos relacionados con hueso asociados con actividad de osteoblastos u osteoclastos anómala. De hecho, el anticuerpo antiesclerostina puede administrarse a un ser humano que padezca un trastorno relacionado con el hueso seleccionado del grupo que consiste en acondroplasia, disostosis cleidocraneal, encondromatosis, displasia fibrosa, Enfermedad de Gaucher, raquitismo hipofosfatémico, síndrome de Marfan, exostosis múltiples hereditarias, neurofibromatosis, osteogénesis imperfecta, osteopetrosis, osteopoiquilosis, lesiones escleróticas, seudoartrosis, osteomielitis piógena, 35 enfermedad periodontal, pérdida de hueso inducida por fármaco antiepiléptico, hiperparatiroidismo primario y secundario, síndromes de hiperparatiroidismo familiar, pérdida de hueso inducida por ingravidez, osteoporosis en hombres, pérdida de hueso postmenopáusica, osteoartritis, osteodistrofia renal, trastornos infiltrantes del hueso, pérdida de hueso oral, osteonecrosis de la mandíbula, enfermedad de Paget juvenil, melorreostosis, enfermedades óseas metabólicas, mastocitosis, enfermedad/anemia falciforme, pérdida de hueso relacionada con el trasplante de órganos, pérdida de hueso relacionada con el trasplante de riñón, lupus eritematoso sistémico, espondilitis anquilosante, epilepsia, artritis juvenil, talasemia, mucopolisacaridosis, Enfermedad de Fabry, Síndrome de Turner, Síndrome de Down, Síndrome de Klinefelter, lepra, Enfermedad de Perthe, escoliosis idiopática adolescente, enfermedad inflamatoria multisistémica de aparición infantil, Síndrome de Winchester, Enfermedad de Menkes, Enfermedad de Wilson, enfermedad de hueso isquémico (tal como enfermedad de Legg-Calve-Perthes y 45 osteoporosis migratoria regional), estados anémicos, afecciones provocadas por esteroides, pérdida de hueso inducida por glucocorticoides, pérdida de hueso inducida por heparina, trastornos de la médula ósea, escorbuto, malnutrición, deficiencia de calcio, osteoporosis, osteopenia, alcoholismo, enfermedad hepática crónica, estado posmenopáusico, afecciones inflamatorias crónicas, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, colitis inflamatoria, enfermedad de Crohn, oligomenorrea, amenorrea, embarazo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, trastornos tiroideos, trastornos paratiroideos, enfermedad de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, inmovilización o desuso, síndrome de distrofia simpática refleja, osteoporosis regional, osteomalacia, pérdida de hueso asociada con el reemplazo de articulaciones, pérdida de hueso asociada con VIH, pérdida de hueso asociada con pérdida de hormona del crecimiento, pérdida de hueso asociada con fibrosis quística, pérdida de hueso asociada con quimioterapia, pérdida de hueso inducida por tumor, pérdida de hueso relacionada con cáncer, pérdida

55 de hueso ablativa hormonal, mieloma múltiple, pérdida de hueso inducida por fármaco, anorexia nerviosa, pérdida de hueso facial asociada con enfermedad, pérdida de hueso craneal asociada con enfermedad, pérdida de hueso de la mandíbula asociada con enfermedad, pérdida de hueso del cráneo asociada con enfermedad, pérdida de hueso asociada con el envejecimiento, pérdida de hueso facial asociada con el envejecimiento, pérdida de hueso craneal asociada con el envejecimiento, pérdida de hueso de la mandíbula asociada con el envejecimiento, pérdida de hueso del cráneo asociada con el envejecimiento y pérdida de hueso asociada con viaje espacial.

No es necesario que la invención cure al paciente del trastorno o proteja completamente contra la aparición de un trastorno relacionado con el hueso para conseguir una respuesta biológica beneficiosa. La invención puede usarse de forma profiláctica, lo que significa proteger, en parte o de forma completa, contra un trastorno relacionado con el 65 hueso o síntoma del mismo. La invención también puede usarse de forma terapéutica para aliviar, en parte o completamente, un trastorno relacionado con el hueso o síntoma del mismo, o para proteger, en parte o completamente, contra la progresión posterior de un trastorno relacionado con el hueso o síntoma del mismo. De hecho, los materiales de la invención son particularmente útiles para aumentar la densidad mineral del hueso y mantener la BMD aumentada durante un periodo de tiempo. A este respecto, la invención proporciona el anticuerpo antiesclerostina para su uso en un método para tratar un trastorno relacionado con el hueso, comprendiendo dicho 5 método (a) administrar una o más cantidades del anticuerpo eficaz para aumentar la BMD medida para el cuerpo total (por ejemplo, cabeza, tronco, brazos y piernas) o en la cadera (por ejemplo, cadera total y/o cuello femoral), columna (columna lumbar), muñeca, dedo, tibia y/o talón en aproximadamente 1%, aproximadamente 2%, aproximadamente 3%, aproximadamente 6%, aproximadamente 8%, aproximadamente 10%, aproximadamente 12%, aproximadamente 15%, aproximadamente 18%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25%, o 30% o más, donde se administra de 1 mg/kg a 5 mg/kg del anticuerpo. Una o más administraciones de una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo pueden llevarse a cabo durante un periodo terapéutico de, por ejemplo, aproximadamente 1 mes a aproximadamente 12 meses (por ejemplo, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 3 meses, aproximadamente 4 meses, aproximadamente 5 meses, aproximadamente 6 meses, aproximadamente 7 meses, aproximadamente 8 meses, aproximadamente 9 meses, aproximadamente 10 meses o aproximadamente 11

15 meses). El método incluye además (b) administrar posteriormente una o más cantidades del anticuerpo eficaz para mantener la densidad mineral del hueso. Por “mantener la densidad mineral del hueso” se entiende que la BMD aumentada resultante de la etapa (a) no cae más de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 5% durante el transcurso de la etapa (b) (por ejemplo, aproximadamente 6 meses, aproximadamente 9 meses, aproximadamente 1 año, aproximadamente 18 meses, aproximadamente 2 años, o durante el transcurso de la vida del paciente). Se apreciará que un paciente puede requerir fases de tratamiento alternativas para aumentar la densidad del hueso y mantener la densidad del hueso.

El anticuerpo antiesclerostina se administra preferentemente a un paciente en una composición fisiológicamente aceptable (por ejemplo, farmacéutica), que puede incluir vehículos, excipientes o diluyentes. Se apreciará que los 25 anticuerpos antiesclerostina descritos en el presente documento pueden usarse en la preparación de un medicamento para administración usando cualquiera de los regímenes de dosificación y temporización desvelados en el presente documento. Se desvelan composiciones y métodos farmacéuticos de tratamiento en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050106683. “Fisiológicamente aceptable” se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen una reacción alérgica o desafortunada similar cuando se administran a un ser humano. Además, la composición administrada a un sujeto puede contener más de un inhibidor de esclerostina, (por ejemplo, un anticuerpo antiesclerostina y un inhibidor de esclerostina químico sintético) o un anticuerpo antiesclerostina en combinación con uno o más productos terapéuticos que tienen diferentes mecanismos de acción.

Se conoce bien en la técnica el desarrollo de regímenes de dosificación y tratamiento adecuados para usar las

35 composiciones particulares descritas en el presente documento en una diversidad de regímenes de tratamiento, incluyendo, por ejemplo, administración subcutánea, oral, parenteral, intravenosa, intranasal e intramuscular y su formulación, y se analiza en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747. Por ejemplo, en ciertas circunstancias, será deseable suministrar una composición farmacéutica que comprenda anticuerpos antiesclerostina por vía subcutánea, por vía parenteral, por vía intravenosa, por vía intramuscular o incluso por vía intraperitoneal. Dichos enfoques se conocen bien por el experto en la materia, algunos de los cuales se describen adicionalmente, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos Nº 5.543.158; 5.641.515; y 5.399.363. Las formas farmacéuticas ilustrativas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles (por ejemplo, véase Patente de Estados Unidos Nº 5.466.468). En todos los casos la forma debe ser estéril y debe ser fluida hasta

45 el grado en que exista fácil inyectabilidad.

En una realización, para administración parenteral en una solución acuosa, la solución debería estar tamponada de forma adecuada si es necesario y el diluyente líquido hacerse en primer lugar isotónico con suficiente solución salina

o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para administración intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Por ejemplo, una dosis puede disolverse en 1 ml de solución de NaCl isotónica y añadirse a 1000 ml de líquido de hipodermolisis o inyectarse en el sitio propuesto de infusión (véase, por ejemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15ª ed., Mack Pub. Co., Easton, PA, pp. 1035-1038 y 1570-1580). Puede producirse cierta variación en la dosificación y frecuencia de administración dependido de la afección del sujeto que se trate; edad, altura, peso y salud global del paciente; y la existencia de cualquier efecto secundario.

55 Además, puede colocarse una composición farmacéutica que comprenda un agente de unión a esclerostina dentro de recipientes (por ejemplo, frascos), junto con material de envasado que proporciona instrucciones con respecto al uso de dichas composiciones farmacéuticas. Generalmente, dichas instrucciones incluirán una expresión tangible que describa la concentración del reactivo, así como dentro de ciertas realizaciones, las cantidades relativas de los ingredientes excipientes o diluyentes (por ejemplo, agua, solución salina o PBS) que pueden ser necesarios para reconstituir la composición farmacéutica.

El anticuerpo antiesclerostina se administra en una cantidad que reduce el nivel de un marcador de reabsorción del hueso y/o aumenta el nivel de un marcador de formación del hueso y/o aumenta la densidad ósea. La dosis de anticuerpo administrada puede variar de 1 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal. Por ejemplo, la dosis de anticuerpo

65 puede variar de 1 mg/kg a 3 mg/kg (por ejemplo, aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 4 mg/kg o 5 mg/kg).

Además, puede ser ventajoso administrar múltiples dosis del anticuerpo antiesclerostina o espaciar la administración de la dosis, dependiendo del régimen terapéutico seleccionado para un paciente particular. El anticuerpo puede administrarse periódicamente durante un periodo de tiempo de un año o menos (por ejemplo, 9 meses o menos, 6 meses o menos o 3 meses o menos). A este respecto, el anticuerpo puede administrarse al ser humano una vez

5 cada aproximadamente 7 días, 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 2 meses, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 3 meses, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 4 meses, 17 semanas, 18 semanas, 19 semanas, 5 meses, 21 semanas, 22 semanas, 23 semanas, 6 meses, o 12 meses.

Como se usa en el presente documento, la expresión “inhibidor de esclerostina” significa cualquier molécula que inhiba la actividad biológica de esclerostina en el hueso, como se mide por cambios en la mineralización del hueso, densidad ósea, efecto en osteoblastos y/u osteoclastos, marcadores de la formación del hueso, marcadores de la reabsorción del hueso, marcadores de la actividad de osteoblastos y/o marcadores de la actividad de osteoclastos. Dichos inhibidores pueden actuar uniéndose con esclerostina o su receptor o compañero de unión. Los inhibidores de esta categoría incluyen: “agentes de unión a esclerostina”, tales como, por ejemplo, anticuerpos o moléculas

15 basadas en péptidos. “Inhibidores de esclerostina” también se refiere a compuestos químicos orgánicos pequeños, opcionalmente de menos de aproximadamente 1000 Dalton de peso molecular que se unen con esclerostina e inhiben su actividad. Los inhibidores pueden actuar como alternativa inhibiendo la expresión de esclerostina. Los inhibidores de esta categoría incluyen polinucleótidos u oligonucleótidos que se unen con ADN o ARNm de esclerostina e inhiben la expresión de esclerostina, incluyendo un oligonucleótido antisentido, ARN inhibidor, enzima de ADN, ribozima, un aptámero o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que inhiben la expresión de esclerostina.

Un “agente de unión a esclerostina” se une específicamente con esclerostina o partes de la misma para bloquear o alterar la unión de esclerostina humana con uno o más ligandos. La esclerostina, el producto del gen SOST, está 25 ausente en esclerosteosis, una enfermedad esquelética caracterizada por crecimiento excesivo del hueso y huesos densos fuertes (Brunkow et al., Am. J. Hum. Genet., 68: 577-589 (2001); Balemans et al., Hum. Mol. Genet., 10: 537-543 (2001)). La secuencia de aminoácidos de la esclerostina humana se presenta en Brunkow et al. y se desvela en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747 como SEC ID Nº: 1. La esclerostina humana recombinante/SOST está disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, Minn., Estados Unidos.; 2006 Catalogo Nº 1406-ST-025). Adicionalmente, la esclerostina/SOST de ratón recombinante está disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, Minn., Estados Unidos; 2006 Catalogo Nº 1589-ST-025). Los anticuerpos monoclonales de unión a esclerostina de uso en investigación están disponibles en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, Minn., Estados Unidos; monoclonal de ratón: 2006 Catalogo Nº MAB1406; monoclonal de rata: 2006 Catalogo Nº MAB1589). Las Patentes de Estados Unidos Nº 6.395.511 y 6.803.453 y las Publicaciones de Patente

35 de Estados Unidos Nº 20040009535 y 20050106683 se refieren a anticuerpos antiesclerostina en general. Se describen ejemplos de agentes de unión a esclerostina en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747 y 20070072797. Puede encontrarse información adicional con respecto a materiales y métodos para generar agentes de unión a esclerostina en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040158045.

Un anticuerpo antiesclerostina como se define en la Reivindicación 1 se emplea en la invención. El término “anticuerpo” se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento de unión del mismo. Un anticuerpo puede comprender una molécula de anticuerpo completa (incluyendo versiones policlonales, monoclonales, quiméricas, humanizadas o humanas que tengan cadenas pesadas y/o ligeras de longitud completa), o comprende un fragmento de unión a antígeno del mismo. Los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos F(ab’)2, Fab, Fab’, Fv, Fc y Fd, y pueden 45 incorporarse en anticuerpos de dominio sencillo, anticuerpos de cadena sencilla, maxicuerpos, minicuerpos, intracuerpos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, v-NAR y bis-scFv (véase, por ejemplo, Hollinger y Hudson, Nature Biotechnology, 23(9): 1126-1136 (2005)). También se desvelan polipéptidos de anticuerpo, incluyendo monocuerpos polipeptídicos de fibronectina en la Patente de Estados Unidos Nº 6.703.199. Se desvelan otros polipéptido de anticuerpo en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050238646. Los anticuerpos antiesclerostina se unen a esclerostina de SEC ID Nº: 1, o una variante de origen natural de la misma, con una afinidad de menor de o igual a 1 x 10-7 M, menor de o igual a 1 x 10-8 M, menor de o igual a 1 x 10-9 M, menor de o igual a 1 x 10-10 M, menor de o igual a 1 x 10-11 M, o menor de o igual a 1 x 10-12 M. La afinidad puede determinarse por un ensayo de ELISA de afinidad. En ciertas realizaciones, la afinidad puede determinarse por un ensayo de BIAcore. En ciertas realizaciones, la afinidad puede determinarse por un método cinético. En ciertas realizaciones, la

55 afinidad puede determinarse por un método de solución/equilibrio.

Un fragmento de anticuerpo puede ser cualquier proteína sintética u obtenida por ingeniería genética. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos aislados que consisten en la región variable de cadena ligera, fragmentos “Fv” que consisten en las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras, moléculas polipeptídicas de cadena sencilla recombinantes en las que las regiones variables ligeras y pesadas están conectadas por un enlazador peptídico (proteínas scFv).

Otra forma de un fragmento de anticuerpo es un péptido que comprende una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) de un anticuerpo. Pueden obtenerse CDR (también denominadas “unidades de 65 reconocimiento mínimas” o “región hipervariable”) construyendo polinucleótidos que codifiquen la CDR de interés. Dichos polinucleótidos se preparan, por ejemplo usando la reacción en cadena de la polimerasa para sintetizar la

región variable usando ARNm de células productoras de anticuerpo como un molde (véase, por ejemplo, Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2: 106 (1991); Courtenay-Luck, “Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,” en Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), página 166, Cambridge University Press (1995); y Ward et al., “Genetic Manipulation and Expression of

5 Antibodies,” en Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), página 137, WileyLiss, Inc. (1995)).

El anticuerpo antiesclerostina empleado en la invención demuestra una afinidad de unión por esclerostina de SEC ID Nº: 1 de menos de o igual a 1 x 10-7 M y comprende una CDR-H1 de SEC ID Nº: 245, una CDR-H2 de SEC ID Nº: 246, una CDR-H3 de SEC ID Nº: 247, una CDR-L1 de SEC ID Nº: 78, una CDR-L2 de SEC ID Nº: 79 y una CDR-L3 de SEC ID Nº: 80.

También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que bloquea de forma cruzada la unión de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, 15 Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, y Ab-24 (todos los cuales se describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747) para esclerostina. Como alternativa o además, el agente de unión a esclerostina se bloquea de forma cruzada de la unión con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, y Ab-24 (todos los cuales se describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747). Las expresiones “bloqueo cruzado”, “bloqueado de forma cruzada” y “bloquear de forma cruzada” se usan de forma intercambiable en el presente documento para indicar la capacidad de un anticuerpo u otro agente de unión para interferir con la unión de otros anticuerpos o agentes de unión con esclerostina. El grado en que un anticuerpo u otro agente de unión es capaz de interferir con la unión de otro con esclerostina, y por lo tanto si puede decirse que bloquea de forma cruzada, puede

25 determinarse usando ensayos de unión competitiva. En algunos casos, un anticuerpo de bloqueo cruzado o fragmento del mismo reduce la unión de esclerostina de un anticuerpo de referencia entre aproximadamente 40% y aproximadamente 100%, tal como aproximadamente 60% y aproximadamente 100%, específicamente entre 70% y 100%, y más específicamente entre 80% y 100%. Un ensayo cuantitativo particularmente adecuado para detectar el bloqueo cruzado usa una máquina Biacore que mide el alcance de las interacciones usando la tecnología de resonancia de plasmón superficial. Otro ensayo de bloqueo cruzado cuantitativo adecuado usa un enfoque basado en ELISA para medir la competición entre anticuerpos u otros agentes de unión con respecto a su unión con esclerostina.

También se hace referencia a agentes de unión a esclerostina que incluyen anticuerpos y partes de los mismos

35 descritos en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747, tales como uno o más de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 como se desvela específicamente en la misma. Al menos una de las regiones de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, y CDR-L3 puede tener al menos una sustitución de aminoácido, siempre que el agente de unión conserve la especificidad de unión de la CDR no sustituida. La parte no CDR del agente de unión puede ser una molécula no proteica, donde el agente de unión bloquea de forma cruzada la unión de un anticuerpo desvelado en el presente documento con esclerostina y/o neutraliza la esclerostina. La parte no CDR del agente de unión puede ser una molécula no proteica en la que el agente de unión muestre un patrón de unión similar con péptidos de esclerostina humana en un ensayo de unión competitiva de epítopos peptídicos de esclerostina humana como el mostrado por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab

45 18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24 (todos los cuales se describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747), y/o neutraliza esclerostina. La parte no CDR del agente de unión puede estar compuesta de aminoácidos, donde el agente de unión es una proteína de unión recombinante o un péptido sintético, y la proteína de unión recombinante bloquea de forma cruzada la unión de un anticuerpo con esclerostina y/o neutraliza la esclerostina. La parte no CDR del agente de unión puede estar compuesta de aminoácidos, donde el agente de unión es una proteína de unión recombinante, y la proteína de unión recombinante muestra un patrón de unión similar con péptidos de esclerostina humana en el ensayo de unión competitiva de epítopos peptídicos de esclerostina humana (descrito en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747) como el mostrado por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, y Ab-24

55 (descrito en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747) y/o neutraliza la esclerostina. Preferentemente, el agente de unión a esclerostina es Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab23 o Ab-24 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747.

Además, también se hace referencia a agentes de unión a esclerostina que comprenden al menos una secuencia de CDR que tiene al menos 75% de identidad (por ejemplo, 100% de identidad) con una CDR seleccionada de SEC ID Nº: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80, 81, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 65 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358, 359, y 360 desveladas en la Publicación de Patente

de Estados Unidos Nº 20070110747. Preferentemente, el agente de unión a esclerostina comprende al menos una secuencia de CDR que tiene al menos 75% de identidad con una CDR seleccionada de SEC ID Nº: 245, 246, 247, 78, 79, 80, 269, 270, 271, 239, 240, y 24, todas las cuales se describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747. Como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747, el 5 agente de unión a esclerostina puede comprender: a) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 54, 55, y 56 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 51, 52, y 53; b) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 60, 61, y 62 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 57, 58, y 59; c) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 48, 49, y 50 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 45, 46, y 47; d) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 42, 43, y 44 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 39, 40, y 41; e) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 275, 276, y 277 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 287, 288, y 289; f) 10 secuencias de CDR de SEC ID Nº: 278, 279, y 280 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 290, 291, y 292; g) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 78, 79, y 80 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 245, 246, y 247; h) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 81, 99, y 100 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 248, 249, y 250; i) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 101, 102, y 103 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 251, 252, y 253; j) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 104, 105, y 106 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 254, 255, y 256; k) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 107, 15 108, y 109 y secuencias de CDR de SEC ID Nº:257, 258, y 259; l) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 110, 111, y 112 y secuencias de CDR de SEC ID Nº:260, 261, y 262; m) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 281, 282, y 283 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 293, 294, y 295; n) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 113, 114, y 115 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 263, 264, y 265; o) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 284, 285, y 286 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 296, 297, y 298; p) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 116, 237, y 238 y

20 secuencias de CDR de SEC ID Nº: 266, 267, y 268; q) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 239, 240, y 241 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 269, 270, y 271; r) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 242, 243, y 244 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 272, 273, y 274; o s) secuencias de CDR de SEC ID Nº: 351, 352, y 353 y secuencias de CDR de SEC ID Nº: 358, 359, y 360.

25 También se hace referencia a agentes de unión a esclerostina que pueden comprender al menos una secuencia de CDR que tiene al menos 75% de identidad con una CDR seleccionada de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, y CDR-L3 en la que CDR-H1 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 245 o SEC ID Nº: 269, CDR-H2 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 246 o SEC ID Nº: 270, CDR-H3 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 247 o SEC ID Nº: 271, CDR-L1 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 78 o

30 SEC ID Nº: 239, CDR-L2 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 79 o SEC ID Nº: 240 y CDR-L3 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 80 o SEC ID Nº 241, todas las cuales se describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747.

También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que puede tener una cadena pesada que

35 comprende las CDR H1, H2 y H3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 137 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 245, 246 y 247, respectivamente, y una cadena ligera que comprende las CDR L1, L2 y L3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 133 o una variante de la misma en la que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 78, 79 y 80, respectivamente (como se describe en la Publicación de Patente de

40 Estados Unidos Nº 20070110747).

También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que puede tener una cadena pesada que comprende las CDR H1, H2 y H3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 145 o 392 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 245, 246 y

45 247, respectivamente, y una cadena ligera que comprende las CDR L1, L2 y L3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 141 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 78, 79 y 80, respectivamente (como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747).

50 También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que puede tener una cadena pesada que comprende las CDR H1, H2 y H3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 335 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 269, 270 y 271, respectivamente, y una cadena ligera que comprende las CDR L1, L2 y L3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 334 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos

55 75% idénticas a SEC ID Nº: 239, 240 y 241, respectivamente (como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747).

También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que tiene una cadena pesada que comprende las CDR H1, H2 y H3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 331 o una

60 variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 269, 270 y 271, respectivamente, y una cadena ligera que comprende las CDR L1, L2 y L3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 330 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 239, 240 y 241, respectivamente (como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747).

65 También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que puede tener una cadena pesada que comprende las CDR H1, H2 y H3 y que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 345 o 396 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 269, 270 y 271, respectivamente, y una cadena ligera que comprende las CDR L1, L2 y L3 y que comprende un polipéptido que

5 tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 341 o una variante del mismo en el que dichas CDR son al menos 75% idénticas a SEC ID Nº: 239, 240 y 241, respectivamente (como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747).

También se hace referencia a un agente de unión a esclerostina que tiene una cadena pesada que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 137, y una cadena ligera que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 133; o una cadena pesada que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 145 o 392, y una cadena ligera que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 141; o una cadena pesada que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 335, y una cadena ligera que comprende un

15 polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 334; o una cadena pesada que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 331 y una cadena ligera que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 330; o una cadena pesada que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 345 o 396, y una cadena ligera que comprende un polipéptido que tiene la secuencia proporcionada en SEC ID Nº: 341 (como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747).

Los anticuerpos antiesclerostina para su uso en el método de la invención preferentemente modulan la función de esclerostina en el ensayo basado en células descrito en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747 y/o el ensayo in vivo descrito en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747, se

25 unen con uno o más de los epítopos descritos en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747, bloquean de forma cruzada la unión de uno de los anticuerpos descritos en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747 y/o está bloqueada de forma cruzada su unión con esclerostina por uno de los anticuerpos descritos en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20070110747.

Como alternativa, el método de la invención puede comprender administrar un inhibidor de esclerostina distinto de un agente de unión a esclerostina descrito en el presente documento además del anticuerpo antiesclerostina. Dichos agentes pueden actuar directa o indirectamente en SOST o esclerostina. Los inhibidores de esclerostina contemplados para su uso en el método de la invención incluyen los descritos en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030229041. Por ejemplo, los agentes útiles para modular la expresión de SOST y actividad de

35 esclerostina incluyen, pero sin limitación, esteroides (tales como los correspondientes a la Fórmula 1 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030229041), alcaloides, terpenoides, peptoides y productos químicos sintéticos. En algunas realizaciones, el antagonista o agonista de SOST puede unirse con un receptor de glucocorticoides. Por ejemplo, la dexametasona tiende a anular el efecto estimulador de BMP-4 y BMP-6 en la expresión de SOST. Otras entidades químicas incluyendo análogos de glucocorticoides, sales biliares (tales como las correspondientes a Fórmula 3 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030229041) y prostaglandinas (tales como las correspondientes a Fórmula 2 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030229041) también modulan los efectos de las proteínas morfogenéticas del hueso en la expresión de SOST, y se contemplan para su uso en el método de la invención.

45 El inhibidor de esclerostina administrado además del anticuerpo puede ser otros productos terapéuticos de moléculas pequeñas que actúan directa o indirectamente en SOST o esclerostina para reducir el nivel de al menos un marcador de la reabsorción del hueso y/o aumentar el nivel de al menos un marcador de la formación del hueso in vivo. La expresión “molécula pequeña” incluye un compuesto o complejo molecular, sintético, derivado de forma natural o parcialmente sintético, y que preferentemente tiene un peso molecular de menos de 5.000 Dalton (por ejemplo, entre aproximadamente 100 y 1.500 Dalton). Pueden obtenerse agentes usando cualquiera de los numerosos enfoques en métodos de biblioteca combinatoria conocidos en la técnica, incluyendo bibliotecas de fase sólida o fase en solución paralelos espacialmente direccionables, métodos de biblioteca sintética que requieren desconvolución, el método de biblioteca de “una perla un compuesto”, y métodos de biblioteca sintética usando selección de cromatografía de afinidad (véase, por ejemplo, Lam, Anticancer Drug Des., 12: 145 (1997) y Patentes

55 de Estados Unidos Nº 5.738.996; 5.807.683; y 7.261.892). Se describen adicionalmente métodos para desarrollar y explorar inhibidores de esclerostina en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030229041.

Los inhibidores de expresión de esclerostina que pueden usarse con el anticuerpo antiesclerostina incluyen oligonucleótidos o polinucleótidos inhibidores, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, por ejemplo, sales sódicas. Los ejemplos no limitantes incluyen: oligonucleótidos antisentido (Eckstein, Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 10: 117-121 (2000); Crooke, Methods Enzymol., 313: 3-45 (2000); Guvakova et al., J. Biol. Chem., 270: 2620-2627 (1995); Manoharan, Biochim. Biophys. Acta, 1489: 117-130 (1999); Baker et al., J. Biol. Chem., 272: 11994-12000 (1997); Kurreck, Eur. J. Biochem., 270: 1628-1644 (2003); Sierakowska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 12840-12844 (1996); Marwick, J. Am. Med. Assoc., 280: 871 (1998); Tomita y Morishita, Curr. 65 Pharm. Des., 10: 797-803 (2004); Gleave and Monia, Nat. Rev. Cancer, 5: 468-479 (2005) y Patil, AAPS J., 7: E61-E77 (2005)), oligonucleótidos triples (Francois et al., Nucleic Acids Res., 16: 11431-11440 (1988) y Moser y Dervan, Science, 238: 645-650 (1987)), ribozimas/desoxirribozimas (ADNzimas) (Kruger et al., Tetrahymena. Cell, 31: 147157 (1982); Uhlenbeck, Nature, 328: 596-600 (1987); Sigurdsson y Eckstein, Trends Biotechnol., 13: 286-289 (1995); Kumar et al., Gene Ther., 12: 1486-1493 (2005); Breaker y Joyce, Chem. Biol., 1: 223-229 (1994); Khachigian, Curr. Pharm. Biotechnol., 5: 337-339 (2004); Khachigian, Biochem. Pharmacol., 68: 1023-1025 (2004) y Trulzsch y Wood, 5 J. Neurochem., 88: 257-265 (2004)), ARN de interferencia pequeños/ARNi (Fire et al., Nature, 391: 806-811 (1998); Montgomery et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 95: 15502-15507 (1998); Cullen, Nat. Immunol., 3: 597-599 (2002); Hannon, Nature, 418: 244-251 (2002); Bernstein et al., Nature, 409: 363-366 (2001); Nykanen et al., Cell, 107: 309321 (2001); Gilmore et al., J. Drug Target., 12: 315-340 (2004); Reynolds et al., Nat. Biotechnol., 22: 326-330 (2004); Soutschek et al., Nature, 432173-178 (2004); Ralph et al., Nat. Med., 11: 429-433 (2005); Xia et al., Nat. Med., 10816-820 (2004) y Miller et al., Nucleic Acids Res., 32: 661-668 (2004)), aptámeros (Ellington y Szostak, Nature,

346: 818-822 (1990); Doudna et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 92: 2355-2359 (1995); Tuerk y Gold, Science, 249: 505-510 (1990); White et al., Mol. Ther., 4: 567-573 (2001); Rusconi et al., Nature, 419: 90-94 (2002); Nimjee et al., Mol. Ther., 14: 408-415 (2006); Gragoudas et al., N. Engl. J. Med., 351: 3805-2816 (2004); Vinores, Curr. Opin. Mol. Ther., 5673-679 (2003) y Kourlas y Schiller et al., Clin. Ther., 28: 36-44 (2006)) u oligonucleótidos señuelo (Morishita

15 et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 92: 5855-5859 (1995); Alexander et al., J. Am. Med. Assoc., 294: 2446-2454 (2005); Mann y Dzau, J. Clin. Invest., 106: 1071-1075 (2000) y Nimjee et al., Annu. Rev. Med., 56: 555-583 (2005)), con énfasis particular en las secciones de los documentos que se refieren a métodos de diseño, marcaje y uso de oligonucleótidos inhibidores. Proveedores comerciales tales como Ambion Inc. (Austin, TX), Darmacon Inc. (Lafayette, CO), InvivoGen (San Diego, CA), y Molecular Research Laboratories, LLC (Herndon, VA) generan moléculas de ARNip a petición. Además, están disponibles kits comerciales para producir moléculas de ARNip adaptadas, tales como el Kit de Construcción de ARNip SILENCER™ (Ambion Inc., Austin, TX) o Sistema psiRNA (InvivoGen, San Diego, CA).

Se contemplan oligonucleótidos inhibidores que son estables, tienen una alta resistencia a nucleasas, poseen

25 farmacocinética adecuada para permitirles desplazarse al sitio de tejido diana a dosis no tóxicas, y tienen la capacidad para cruzar a través de membranas plasmáticas para su uso como un producto terapéutico en combinación con el anticuerpo antiesclerostina. Los oligonucleótidos inhibidores pueden ser complementarios de la parte codificante de un gen diana, regiones no traducidas 3’ o 5’ o secuencias intrónicas en un gen, o como alternativa secuencias codificantes o intrónicas en el ARNm diana. Las secuencias intrónicas están generalmente menos conservadas y por lo tanto pueden proporcionar mayor especificidad. En un caso, el oligonucleótido inhibidor inhibe la expresión de un producto génico de una especie pero no su homólogo en otra especie; en otras realizaciones, el oligonucleótido inhibidor inhibe la expresión de un gen en dos especies, por ejemplo humana y primate, o humana y murina.

35 Se ha mostrado que la expresión constitutiva de oligonucleótidos antisentido en células inhibe la expresión génica, posiblemente mediante el bloqueo de la traducción o prevención de corte y empalme. En ciertas realizaciones, el oligonucleótido inhibidor es capaz de hibridar con al menos 8, 9, 10, 11 o 12 constitutivas del gen de esclerostina o ARNm (o la cadena inversa del mismo) en condiciones de rigurosidad moderada o alta. Los oligonucleótidos inhibidores adecuados pueden ser monocatenarios y contener un segmento, por ejemplo de al menos 12, 15 o 18 bases de longitud, que es suficientemente complementario de, y específico para una molécula de ADN o ARNm de modo que hibrida con la molécula de ARNm o ADN e inhibe la transcripción, corte y empalme o traducción. Generalmente la complementariedad sobre una longitud de menos de 30 bases es más que suficiente.

Típicamente, las condiciones rigurosas serán en las que la concentración salina es menor de aproximadamente 1,5

45 M de ión Na, típicamente concentración de ión Na de aproximadamente 0,01 a 1,0 M (u otras sales) a pH 7,0 a 8,3 y la temperatura es al menos aproximadamente 30 ºC para ácidos nucleicos cortos (por ejemplo, de 10 a 50 nucleótidos) y al menos aproximadamente 60 ºC para ácidos nucleicos más largos (por ejemplo, mayores de 50 nucleótidos). También pueden conseguirse condiciones rigurosas con la adición de agentes desestabilizadores tales como formamida. Las condiciones de baja rigurosidad ejemplares incluyen hibridación con una solución de tampón de formamida 30% a 35%, NaCl 1 M, SDS (dodecil sulfato sódico) 1% a 37 ºC, y un lavado en SSC 1X a 2X (SSC 20X = NaCl 3,0 M/citrato trisódico 0,3 M) de 50 ºC a 55 ºC. Las condiciones de rigurosidad moderada ejemplares incluyen hibridación en formamida 40% a 45%, NaCl 1,0 M, SDS 1% a 37 ºC, y un lavado en SSC de 0,5X a 1X de 55 ºC a 60 ºC. Las condiciones de alta rigurosidad ejemplares incluyen hibridación en formamida al 50%, NaCl 1 M, SDS 1% a 37 ºC, y un lavado en SSC 0,1X de 60 ºC a 65 ºC. La duración de la hibridación es generalmente menor

55 de aproximadamente 24 horas, habitualmente de aproximadamente 4 horas a aproximadamente 12 horas.

En algunos casos, dependiendo de la longitud de la región complementaria, pueden tolerarse una, dos o más coincidencias erróneas sin afectar a la función inhibidora. En ciertas realizaciones, el oligonucleótido inhibidor es un oligonucleótido antisentido, un ARN inhibidor (incluyendo ARNip o ARNi, o ARNhp), una enzima de ADN, una ribozima (opcionalmente una ribozima de cabeza de martillo), un aptámero o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una realización, el oligonucleótido es complementario de al menos 10 bases de la secuencia de nucleótidos que codifica SEC ID Nº: 1 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040158045. En una realización, el oligonucleótido se dirige a los nucleótidos localizados cerca de la región no traducida 3’ del ARNm de esclerostina.

65 La secuencia específica utilizada en el diseño de los oligonucleótidos puede ser cualquier secuencia contigua de nucleótidos contenidos dentro del mensaje génico expresado de la diana. Los factores que gobiernan un sitio diana para la secuencia oligonucleotídica inhibidora incluyen la longitud del oligonucleótido, afinidad de unión y accesibilidad de la secuencia diana. Las secuencias pueden explorarse in vitro con respecto a la potencia de su actividad inhibidora midiendo la inhibición de la traducción de la proteína diana y fenotipo relacionado diana, por

5 ejemplo, inhibición de la proliferación celular en células en cultivo. En general se sabe que la mayoría de las regiones del ARN (regiones no traducidas 5’ y 3’, inicio AUG, codificantes, puntos de unión de corte y empalme e intrones) pueden ser dianas usando oligonucleótidos antisentido. Pueden usarse programas y algoritmos, conocidos en la técnica, para seleccionar secuencias diana apropiadas. Además, pueden seleccionarse secuencias óptimas utilizando programas diseñados para predecir la estructura secundaria de una secuencia de ácido nucleico monocatenaria específica y permitiendo la selección de las secuencias que probablemente aparezcan en regiones monocatenarias expuestas de un ARNm plegado. Pueden encontrarse métodos y composiciones para diseñar oligonucleótidos apropiados, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos Nº 6.251.588.

Pueden usarse oligonucleótidos antisentido de fosforotioato en combinación con el anticuerpo antiesclerostina. Las

15 modificaciones del enlace de fosfodiéster así como del heterociclo o el azúcar pueden proporcionar un aumento de la eficacia. Se usa fosforotioato para modificar el enlace de fosfodiéster. Se ha descrito un enlace de fosforamidato N3’-P5’ como estabilizador de oligonucleótidos para nucleasas y que aumenta la unión con ARN. El enlace de ácido péptido nucleico (PNA) es un reemplazo completo de la cadena principal de ribosa y fosfodiéster y es estable para nucleasas, aumenta la afinidad de unión con ARN, y no permite escisión por RNasa H. Su estructura básica también es susceptible de modificaciones que pueden permitir su optimización como un componente antisentido. Con respecto a modificaciones del heterociclo, se ha demostrado que ciertas modificaciones de heterociclo aumentan los efectos antisentido sin interferir con la actividad RNasa H. Un ejemplo de dicha modificación es una modificación de tiazol C5. Finalmente, también puede considerarse la modificación del azúcar. Las modificaciones de 2’-O-propilo y 2’-metoxietoxi ribosa estabilizan los oligonucleótidos para nucleasas en cultivo celular e in vivo.

25 Se ha mostrado que la mayoría de los ARNm contienen varias estructuras secundarias y terciarias. Los elementos estructurales secundarios en ARN están formados principalmente por interacciones de tipo Watson-Crick entre diferentes regiones de la misma molécula de ARN. Los elementos estructurales secundarios importantes incluyen regiones bicatenarias intramoleculares, bucles en horquilla, abultamientos en ARN bicatenario y bucles internos. Se forman elementos estructurales terciarios cuando los elementos estructurales secundarios entran en contacto entre sí o con regiones monocatenarias para producir una estructura tridimensional más compleja. Varios investigadores han medido las energías de unión de un gran número de estructuras bicatenarias de ARN y han derivado un conjunto de normas que pueden usarse para predecir la estructura secundaria del ARN (véase, por ejemplo, Jaeger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 7706 (1989); y Turner et al., Annu. Rev. Biophys. Biophys. Chem. 17: 167

35 (1988)). Las normas son útiles en la identificación de elementos estructurales de ARN y, en particular, para identificar regiones de ARN monocatenarias que pueden representar segmentos del ARNm a los que dirigir los ARNip, ribozimas o tecnologías antisentido.

La tecnología de ARN de interferencia corto (ip) (también conocido como ARNi) generalmente implica la degradación de un ARNm de una secuencia particular inducida por ARN bicatenario (ARNbc) que es homólogo de esa secuencia, “interfiriendo” de este modo con la expresión del gen correspondiente. Cualquier gen seleccionado puede reprimirse introduciendo un ARNbc que corresponda a toda o una parte sustancial del ARNm de ese gen. Parece que cuando se expresa un ARNbc largo, se procesa inicialmente por una ribonucleasa III en oligonucleótidos de ARNbc más cortos de tan poco como 21 a 22 pares de bases de longitud. En consecuencia, el ARNip puede verse afectado por

45 la introducción o expresión de ARNbc homólogos relativamente cortos. Los ARNip ejemplares tienen cadenas con sentido y antisentido de aproximadamente 21 nucleótidos que forman aproximadamente 19 nucleótidos de ARN bicatenario con salientes de dos nucleótidos en cada extremo 3’. De hecho el uso de ARNbc homólogos relativamente cortos puede tener ciertas ventajas.

Las células de mamífero tienen al menos dos rutas que están afectadas por el ARN bicatenario (ARNbc). En la ruta de ADNip específica de secuencia, el ARNbc de inicio se divide en primer lugar en ARN de interferencia cortos, como se ha descrito anteriormente. Se cree que los ARN de interferencia cortos proporcionan la información de secuencia que permite que un ARN mensajero específico se dirija a degradación. Por el contrario, la ruta no específica se desencadena por ARNbc de cualquier secuencia, siempre que sea de al menos aproximadamente 30

55 pares de bases de longitud.

Los efectos no específicos suceden debido a que al ARNbc activa dos enzimas: PKR, que en su forma activa fosforila el factor de inicio de la traducción eIF2 para detener toda la síntesis proteica, y 2’, 5’ oligoadenilato sintetasa (2’, 5’-AS), que sintetiza una molécula que activa RNasa L, una enzima no específica que se dirige a todo el ARNm. La ruta no específica puede representar una respuesta de hospedador a tensión o infección viral y, en general, los efectos de la ruta no específica preferentemente se minimizan. Significativamente, parece que se requieren ARNbc más largos para inducir la ruta no específica y, en consecuencia, se contemplan ARNbc más cortos de aproximadamente 30 pares de bases para efectuar la represión génica por ARNi (véase Hunter et al., J. Biol. Chem.,

250: 409-17 (1975); Manche et al., Mol. Cell. Biol. 12: 5239-48 (1992); Minks et al., J. Biol. Chem., 254: 10180-3 65 (1979); y Elbashir et al., Nature, 411: 494-8 (2001)).

Se ha demostrado que el ARNip es un medio eficaz para reducir la expresión génica en una diversidad de tipos celulares. El ARNip típicamente reduce la expresión de un gen a niveles menores que los conseguidos usando técnicas antisentido, y con frecuencia elimina la expresión completamente (véase Bass, Nature, 411: 428-9 (2001)). En células de mamífero, los ARNip son eficaces a concentraciones que están varios órdenes de magnitud por

5 debajo de las concentraciones típicamente usadas en experimentos antisentido (Elbashir et al., Nature, 411: 494-8 (2001)).

Los oligonucleótidos bicatenarios usados para efectuar el ARNi son preferentemente de menos de 30 pares de bases de longitud, por ejemplo, de aproximadamente 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18 o 17 pares de bases o menos de longitud y contienen un segmento suficientemente complementario del ARNm diana para permitir la hibridación con el ARNm diana. Opcionalmente los oligonucleótidos de ARNbc pueden incluir extremos salientes 3’. Los salientes 3’ de dos nucleótidos ejemplares pueden estar compuestos de restos de ribonucleótidos de cualquier tipo y pueden incluso estar compuestos de restos de 2’-desoxitimidina, lo que reduce el coste de la síntesis de ARN y puede potenciar la resistencia a nucleasa de los ARNip en el medio de cultivo celular y dentro de células transfectadas

15 (véase Elbashi et al., mencionado anteriormente). Los ARNbc ejemplares pueden sintetizarse químicamente o producirse in vitro o in vivo usando vectores de expresión apropiados (véase, por ejemplo, Elbashir et al., Genes Dev., 15: 188-200 (2001)). Pueden transcribirse ARN más largos a partir de promotores, tales como promotores de ARN polimerasa T7, conocidos en la técnica.

Pueden utilizarse ARNbc más largos de 50, 75, 100 o incluso 500 pares de bases en ciertas realizaciones de la invención. Son concentraciones ejemplares de ARNbc para efectuar ARNi de aproximadamente 0,05 nM, 0,1 nM, 0,5 nM, 1,0 nM, 1,5 nM, 25 nM o 100 nM, aunque pueden utilizarse otras concentraciones dependiendo de la naturaleza de las células tratadas, la diana génica y otros factores fácilmente discernibles por el experto en la materia.

25 Se proporcionan composiciones, métodos y aplicaciones adicionales de tecnología de ARNip en las Patentes de Estados Unidos Nº 6.278.039; 5.723.750; y 5.244.805.

En comparación con ARNip, el ARNhp ofrece ventajas en la longevidad del silenciamiento y las opciones de suministro. Véase, por ejemplo, Hannon et al., Nature, 431: 371-378 (2004) para una revisión. Se han indicado vectores que producen ARNhp, que se procesan de forma intracelular en ARN bicatenarios cortos que tienen propiedades de tipo ARNip (Brummelkamp et al., Science, 296: 550-553 (2000); Paddison et al., Genes Dev., 16: 948-958 (2002)). Dichos vectores proporcionan una fuente renovable de un reactivo de silenciamiento génico que puede mediar en el silenciamiento génico persistente después de integración estable del vector en el genoma de la

35 célula hospedadora. Además, el casete en “horquilla” de silenciamiento central puede insertarse fácilmente en vectores retrovirales, lentivirales y adenovirales, facilitando el suministro de ARNhp en una amplia serie de tipos celulares (Brummelkamp et al., Cancer Cell, 2: 243-247 (2002); Dirac et al., J. Biol. Chem., 278: 11731-11734 (2003); Michiels et al., Nat. Biotechnol., 20: 1154-1157 (2002); Stegmeie et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102: 13212-13217 (2005); Khvorova et al., Cell, 115: 209-216 (2003)) en cualquiera de los innumerables modos que se han ideado para el suministro de construcciones de ADN que permiten la expresión de ARNm ectópica.

Una horquilla puede organizarse en una horquilla levógira (es decir, 5’-antisentido-bucle-sentido-3’) o una horquilla dextrógira (es decir, 5’-sentido-bucle-antisentido-3’). El ARNip también puede contener salientes en el extremo 5’ o 3’ de la cadena con sentido o la cadena antisentido, dependiendo de la organización de la horquilla.

45 Preferentemente, si hay salientes, están en el extremo 3’ de la horquilla y comprenden entre 1 y 6 bases. Los salientes pueden estar no modificados, o pueden contener una o más modificaciones estabilizadoras o de especificidad, tales como una modificación de halógeno u O-alquilo de la posición 2’, o modificaciones internucleotídicas tales como modificaciones de fosforotioato, fosforoditioato o metilfosfonato. Los salientes pueden ser ácido ribonucleico, ácido desoxirribonucleico o una combinación de ácido ribonucleico y ácido desoxirribonucleico.

Adicionalmente, una horquilla puede comprender además un grupo fosfato en el nucleótido más 5’. La fosforilación del nucleótido más 5’ se refiere a la presencia de uno o más grupos fosfato unidos con el carbono 5’ del resto de azúcar del nucleótido 5’ terminal. Preferentemente, hay solamente un grupo fosfato en el extremo 5’ de la región que

55 formará la cadena antisentido después de procesamiento de Dicer. En una realización ejemplar, una horquilla dextrógira puede incluir un extremo 5’, (es decir, el extremo 5’ libre de la región con sentido) que no tiene un grupo fosfato 5’, o puede tener el carbono 5’ del nucleótido más 5’ libre de la región con sentido que se modifica de tal modo que evita la fosforilación. Esto puede conseguirse por una diversidad de métodos incluyendo, pero sin limitación, adición de un grupo de bloqueo de fosforilación (por ejemplo, un grupo de 5’-O-alquilo), o eliminación del grupo funcional 5’-OH (por ejemplo, el nucleótido más 5’ es un desoxinucleótido 5’. En casos en los que la horquilla es una horquilla levógira, preferentemente la posición de carbono 5’ del nucleótido más 5’ está fosforilada.

Las horquillas que tienen longitudes de tallos mayores de 26 pares de bases pueden procesarse por Dicer de modo que algunas partes no sean parte del ARNip resultante que facilita la degradación de ARNm. En consecuencia la 65 primera región, que puede comprender nucleótidos con sentido, y la segunda región, que puede comprender nucleótidos antisentido, también puede contener un tramo de nucleótidos que son complementarios (o al menos

sustancialmente complementarios entre sí) pero son o no son iguales que o complementarios del ARNm diana. Aunque el tallo de ARNhp puede estar compuesto de cadenas antisentido y con sentido complementarias o parcialmente complementarias exclusivas de los salientes, el ARNhp también puede incluir lo siguiente: (1) la parte de la molécula que está distante del eventual sitio de corte de Dicer contiene una región que es sustancialmente

5 complementaria/homóloga del ARNm diana; y (2) la región del tallo que está próxima al sitio de corte de Dicer (es decir, la región adyacente al bucle) no está relacionada o está solamente parcialmente relacionada (por ejemplo, complementaria/homóloga) con el ARNm diana. El contenido de nucleótidos de esta segunda región puede seleccionarse basándose en varios parámetros incluyendo pero sin limitación los rasgos o perfiles termodinámicos.

10 Los ARNhp modificados pueden conservar las modificaciones en la doble cadena después del procesamiento con Dicer. En realizaciones ejemplares, en casos en los que la horquilla es una horquilla dextrógira (por ejemplo, 5’-Sbucle-AS-3’) que contiene salientes de 2-6 nucleótidos en el extremo 3’ de la molécula, pueden añadirse modificaciones de 2’-O-metilo a nucleótidos en la posición 2, posiciones 1 y 2, o posiciones 1, 2 y 3 en el extremo 5’ de la horquilla. Además, el procesamiento con Dicer de horquillas con esta configuración puede conservar el

15 extremo 5’ de la cadena con sentido intacta, conservando de este modo el patrón de modificación química en la doble cadena después del procesamiento con Dicer. La presencia de un saliente 3’ en esta configuración puede ser particularmente ventajosa ya que las moléculas de extremos romos que contienen el patrón de modificación prescrito pueden procesarse adicionalmente por Dicer de tal modo que los nucleótidos que portan las modificaciones 2’ se retiran. En casos en los que el saliente 3’ está presente/conservado, la doble cadena resultante que porta los

20 nucleótidos modificados con sentido puede tener rasgos altamente favorables con respecto a la especificidad y funcionalidad de silenciamiento. Se describen ejemplos de patrones de modificación ejemplares en detalle en la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050223427 y las Publicaciones de Patente Internacional Nº WO 2004/090105 y WO 2005/078094.

25 Los ARNhp pueden comprender secuencias que se seleccionaron de forma aleatoria, o de acuerdo con cualquier procedimiento de selección de diseño racional. Por ejemplo, se describen algoritmos de diseño racional en la Publicación de Patente Internacional Nº WO 2004/045543 y la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050255487. Adicionalmente, puede ser deseable seleccionar secuencias completamente o en parte basándose en perfiles de estabilidad interna promedios (“AISP”) o perfiles de estabilidad interna regional (“RISP”) que pueden

30 facilitar el acceso o el procesamiento por maquinaria celular.

Las ribozimas son moléculas de ARN enzimáticas capaces de catalizar la escisión específica de ARNm, evitando de este modo la traducción (Para una revisión, véase Rossi, Current Biology, 4: 469-471 (1994)). El mecanismo de la acción de ribozimas implica hibridación específica de secuencia de la molécula de ribozima con ARN diana

35 complementario, seguido de un acontecimiento de escisión endonucleolítica. Las moléculas de ribozimas preferentemente incluyen (1) una o más secuencias complementarias de un ARNm diana, y (2) la secuencia catalítica bien conocida responsable de la escisión de ARNm o una secuencia funcionalmente equivalente (véase, por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5.093.246).

40 Aunque las ribozimas que escinden ARNm en secuencias de reconocimiento específicas de sitio pueden usarse para destruir ARNm diana, pueden usarse como alternativa ribozimas de cabeza de martillo. Las ribozimas de cabeza de martillo escinden ARNm en localizaciones dictadas por regiones flanqueantes que forman pares de bases complementarios con el ARNm diana. Preferentemente, el ARNm diana tiene la siguiente secuencia de dos bases: 5’-UG-3’. La construcción y producción de ribozimas de cabeza de martillo se conoce bien en la técnica y se

45 describe más completamente en Haseloff y Gerlach, Nature, 334: 585-591 (1988); y la Publicación de Patente Internacional Nº WO 89/05852.

Las ribozimas que se dirigen a genes pueden contener una región hibridante complementaria de dos regiones de un ARNm diana, cada una de las cuales es de al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20

50 nucleótidos contiguos (pero que no es necesario que sean ambas de la misma longitud).

Las secuencias de ribozimas de cabeza de martillo pueden incluirse en un ARN estable tal como un ARN de transferencia (ARNt) para aumentar la eficacia de escisión in vivo (Perriman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 6175-79 (1995); de Feyter y Gaudron, Methods in Molecular Biology, Vol. 74, Capítulo 43, “Expressing Ribozymes in 55 Plants,” Turner, P. C. (ed.), Humana Press Inc., Totowa, N. J.). En particular, se conoce bien en la técnica la expresión mediada por ARN polimerasa III de ribozimas de fusión de ARNt (véase Kawasaki et al., Nature, 393: 2849 (1998); Kuwabara et al., Nature Biotechnol., 16: 961-5 (1998); y Kuwabara et al., Mol. Cell, 2: 617-27 (1998); Koseki et al., J. Virol., 73: 1868-77 (1999); Kuwabara et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 1886-91 (1999); Tanabe et al., Nature, 406: 473-4 (2000)). Hay típicamente varios sitios de escisión de ribozimas de cabeza de martillo

60 potenciales dentro de una secuencia de ADNc diana dada. Preferentemente la ribozima se modifica por ingeniería genética de modo que el sitio de reconocimiento de escisión se localice cerca del extremo 5’ del ARNm diana para aumentar la eficacia y minimizar la acumulación intracelular de transcritos de ARNm no funcionales. Además, el uso de cualquier sitio de reconocimiento de escisión localizado en la secuencia diana que codifica diferentes partes del ARNm diana permitiría la dirección selectiva de uno o el otro gen diana.

65 Las ribozimas para su uso en el método de la invención también incluyen endorribonucleasas de ARN (“ribozimas de tipo Cech”) tales como la que aparece de forma natural en Tetrahymena thermophila (conocida como la IVS, o ARN IVS L-19) y que se ha descrito exhaustivamente en Zaug et al., Science, 224: 574-578 (1984); Zaug, et al., Science,

231: 470-475 (1986); Zaug et al., Nature, 324: 429-433 (1986); Publicación de Patente Internacional Nº WO

5 88/04300; y Been et al., Cell, 47: 207-216 (1986)). Las ribozimas de tipo Cech tienen un sitio activo de ocho pares de bases que hibrida con una secuencia de ARN diana después de lo cual tiene lugar la escisión del ARN diana. En una realización, el método de la invención emplea esas ribozimas de tipo Cech que se dirigen a secuencias de sitios activos de ocho pares de bases que están presentes en un gen diana o secuencia de ácido nucleico.

Las ribozimas pueden estar compuestas de oligonucleótidos modificados (por ejemplo, para mejor estabilidad, dirección, etc.) y pueden sintetizarse químicamente o producirse mediante un vector de expresión. Debido a que las ribozimas, a diferencia de las moléculas antisentido, son catalíticas, se requiere una menor concentración intracelular para su eficacia. Adicionalmente, en ciertas realizaciones, una ribozima puede diseñarse identificando en primer lugar una parte de secuencia suficiente para provocar la inactivación eficaz por ARNi. Después pueden

15 incorporarse partes de la misma secuencia en una ribozima.

Como alternativa, la expresión génica diana puede reducirse dirigiendo secuencias desoxirribonucleotídicas complementarias de la región reguladora del gen (es decir, el promotor y/o los potenciadores) para formar estructuras de triple hélice que evitan la transcripción del gen en células diana en el cuerpo (véase en general Helene, C., Anticancer Drug Des., 6: 569-84 (1991); Helene et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 660: 27-36 (1992); y Maher,

L. J., Bioassays, 14: 807-15 (1992)).

Las moléculas de ácido nucleico para usar en la formación de triple hélice para la inhibición de la transcripción son preferentemente monocatenarias y están compuestas de desoxirribonucleótidos. La composición básica de estos

25 oligonucleótidos debería promover la formación de triple hélice mediante las reglas de formación de pares de bases de Hoogsteen, que generalmente requieren que estén presentes tramos considerables de purinas o pirimidinas en una cadena de una doble cadena. Las secuencias de nucleótidos pueden estar basadas en pirimidina, lo que dará como resultado tripletes de TAT y CGC entre las tres cadenas asociadas de la triple hélice resultante. Las moléculas ricas en pirimidina proporcionan complementariedad de bases con una región rica en purina de una única cadena de la doble cadena en una orientación paralela a esa cadena. Además, pueden seleccionarse moléculas de ácido nucleico que son ricas en purina, por ejemplo, que contienen un tramo de restos G. Estas moléculas formarán una triple hélice con una doble cadena de ADN que sea rica en pares de GC, en la que la mayoría de los restos de purina se localizan en una única cadena de la doble cadena dirigida, dando como resultado tripletes de CGC entre las tres cadenas en la triple cadena.

35 Como alternativa, las secuencias diana a las que puede dirigirse la formación de triple hélice pueden aumentarse creando una molécula de ácido nucleico denominada “en zigzag”. Las moléculas en zigzag se sintetizan de una manera 5’-3’, 3’-5’ alternante, de modo que forman pares de bases primero con una cadena de una doble cadena y después con la otra, eliminando la necesidad de que esté presente un tramo considerable de purinas o pirimidinas en una cadena de una doble cadena.

Como alternativa, pueden usarse enzimas de ADN para inhibir la expresión del gen diana, tal como el gen de esclerostina. Las enzimas de ADN incorporan algunas de las características mecánicas de las tecnologías tanto antisentido como de ribozimas. Las enzimas de ADN se diseñan de modo que reconozcan una secuencia de ácido

45 nucleico diana particular, de forma muy similar a un oligonucleótido antisentido. Son, sin embargo, también catalíticas y específicamente escinden el ácido nucleico diana.

Las enzimas de ADN incluyen dos tipos básicos identificadas por Santoro y Joyce (véase, por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 6.110.462). La enzima de ADN 10-23 comprende una estructura en bucle que conecta dos ramas. Las dos ramas proporcionan especificidad reconociendo la secuencia de ácido nucleico diana particular mientras que la estructura en bucle proporciona función catalítica en condiciones fisiológicas.

Preferentemente, la secuencia única o sustancialmente única es un segmento rico en G/C de aproximadamente 18 a 22 nucleótidos. El contenido alto en G/C ayuda a asegurar una interacción más fuerte entre la enzima de ADN y la

55 secuencia diana. La secuencia de reconocimiento antisentido específica que dirigirá la enzima al mensaje puede dividirse entre las dos ramas de la enzima de ADN.

Pueden encontrarse métodos para preparar y administrar enzimas de ADN, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos Nº 6.110.462. Adicionalmente, un experto en la materia reconocerá que, como el oligonucleótido antisentido, las enzimas de ADN pueden modificarse opcionalmente para mejorar la estabilidad y mejorar la resistencia a la degradación.

Pueden administrarse oligonucleótidos inhibidores directamente o suministrarse a células por transformación o transfección mediante un vector, incluyendo vectores o plásmidos virales, en los que se ha colocado ADN que 65 codifica el oligonucleótido inhibidor con las secuencias reguladoras apropiadas, incluyendo un promotor, para dar como resultado la expresión del oligonucleótido inhibidor en la célula deseada. Los métodos conocidos incluyen

transfección transitoria convencional, transfección estable y suministro usando virus que varían de retrovirus a adenovirus. Se contempla el suministro de inhibidores de ácido nucleico por replicación o vectores deficientes en replicación. La expresión también puede conducirse por sistemas promotores constitutivos o inducibles (Paddison et al., Methods Mol. Biol., 265: 85-100 (2004)). En otras realizaciones, la expresión puede estar bajo el control de

5 promotores específicos de tejido o desarrollo.

Por ejemplo, pueden introducirse vectores por transfección usando composiciones vehículo tales como Lipofectamine 2000 (Life Technologies) u Oligofectamine (Life Technologies). La eficacia de transfección puede comprobarse usando microscopía de fluorescencia para líneas celulares de mamífero después de cotransfección de pAD3 que codifica hGFP (Kehlenback et al., J. Cell Biol., 141: 863-74 (1998)).

La vía de suministro será la que proporcione el mejor efecto inhibidor como se mide de acuerdo con los criterios descritos anteriormente. Son eficaces el suministro mediado por liposomas catiónicos, suministro por vectores retrovirales y suministro directo.

15 La eficacia del oligonucleótido inhibidor puede evaluarse por cualquiera de varios ensayos, incluyendo reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa inversa o análisis de transferencia de Northern para determinar el nivel de ARNm de esclerostina humana existente, o análisis de transferencia de Western usando anticuerpos que reconocen la proteína de esclerostina humana, después de un tiempo suficiente para la renovación del grupo endógeno después de reprimirse la síntesis de nueva proteína.

Ejemplo

Este ejemplo describe estudios in vivo donde un agente de unión a esclerostina redujo el nivel de un marcador de 25 reabsorción del hueso y aumentó el nivel de uno o más marcadores de la formación del hueso.

Se analizó un estudio en único centro, aleatorio, de doble ciego, controlado por placebo, de dosis individual ascendente en hombres sanos y mujeres posmenopáusicas. Se admitieron aproximadamente 72 sujetos en una de seis cohortes de dosis. Para las cohortes 1, 2, 3a, 4, 5 y 6a, se seleccionaron aleatoriamente ocho mujeres postmenopáusicas sanas para recibir un agente de unión a esclerostina o placebo mediante inyección subcutánea en una relación 3:1 a niveles de dosis de 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg o 10 mg/kg, respectivamente. En las cohortes 3b y 6b, 8 hombres sanos recibieron el agente de unión a esclerostina o un placebo por vía intravenosa y por vía subcutánea en una relación 3:3:1:1 (agente de unión a esclerostina por vía intravenosa: agente de unión a esclerostina por vía subcutánea: placebo por vía intravenosa: placebo por vía

35 subcutánea) a un nivel de dosis de 1 mg/kg o 10 mg/kg (reducido a 5 mg/kg), respectivamente. Para las cohortes 3c y 6c, se seleccionaron aleatoriamente cuatro mujeres postmenopáusicas sanas para recibir el agente de unión a esclerostina o placebo por vía intravenosa en una relación 3:1 a un nivel de dosis de 1 mg/kg o 10 mg/kg (reducido a 5 mg/kg), respectivamente.

La terapia antiesclerostina se controló midiendo los niveles de marcadores de reabsorción del hueso y marcadores de formación del hueso antes de la administración, después al menos cada semana durante 12 semanas después de la administración. Se controlaron los niveles de P1NP y BSAP después de una administración subcutánea de una única dosis de agente de unión de esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas (véase Figuras 1 y 2). Los sujetos a los que se administró dosis a 0,1 mg/kg y 0,3 mg/kg disfrutaron de la mayor elevación de los niveles de

45 P1NP o BSAP (por ejemplo, niveles aumentados menos del 20%).

Los niveles de P1NP en sujetos a los que se administró 1 mg/kg aumentaron aproximadamente el 20% el Día 10 y gradualmente disminuyeron hasta la línea basal aproximadamente el Día 56, mientras que los niveles de BSAP alcanzaron el máximo el Día 14 a aproximadamente 30% por encima de la línea basal. Los niveles de P1NP y BSAP en sujetos a los que se administraron 3 mg/kg alcanzaron un máximo del Día 21 a aproximadamente 100% (P1NP) y 60% (BSAP) de aumento desde la línea basal, y volvieron a la línea basal aproximadamente el Día 56. En sujetos a los que se administraron 5 mg/kg, el nivel de P1NP se elevó a aproximadamente 140% por encima de la línea basal el Día 14 después de la administración, y permaneció elevado el Día 77. En otras palabras, el nivel de P1NP aumentó aproximadamente 140% en dos semanas después del tratamiento. El BSAP aumentó a aproximadamente

55 115% por encima de la línea basal y permaneció elevado el Día 84. De forma similar, la administración de 10 mg/kg desencadenó un aumento de 180% en los niveles de P1NP aproximadamente el Día 28. Los niveles de P1NP permanecieron elevados durante todo el periodo de control. Los sujetos a los que se administraron 10 mg/kg demostraron un aumento máximo de los niveles de BSAP el Día 21 (125% de la línea basal durante 3 semanas después de la administración), que también permanecieron elevados el Día 84. Los resultados del estudio se ilustran en las Figuras 1 y 2.

También se controló la osteocalcina después de una administración subcutánea, de una única dosis de agente de unión a esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas (véase Figura 3). Los sujetos a los que se proporcionaron menos de 1 mg/kg experimentaron poca elevación de osteocalcina. Los niveles de osteocalcina fluctuaron en 65 pacientes a los que se administró 1 mg/kg, alcanzando un máximo a aproximadamente 30% por encima de la línea basal los Días 21 y 35. Los niveles de osteocalcina alcanzaron un máximo a aproximadamente el 100% por encima

de la línea basal el Día 21 en sujetos a los que se administraron 3 mg/kg, y los niveles permanecieron elevados hasta aproximadamente el Día 56. De forma similar, la administración de 5 mg/kg de agente de unión a esclerostina dio como resultado un aumento del 140% en niveles de osteocalcina el día 28, cuyos niveles permanecieron el Día

84. Los sujetos a los que se administró una dosis de 10 mg/kg demostraron un nivel de osteocalcina máximo de

5 aproximadamente 180% por encima de la línea basal el Día 35. Los niveles de osteocalcina permanecieron elevados por encima de la línea basal hasta al menos aproximadamente el Día 77.

Los niveles del marcador de reabsorción del hueso sCTx también se controlaron (véase Figura 4). Los sujetos a los que se administró placebo y 0,1 mg/kg demostraron reducciones modestas de los niveles de sCTx (por ejemplo, 10 menos del 20%). La administración de 0,3 mg/kg de agente de unión a esclerostina redujo los niveles de sCTx en aproximadamente el 20% el Día 21 (es decir, los niveles de sCTX se redujeron aproximadamente el 20% a las dos semanas después del tratamiento). Los niveles fluctuaron en sujetos a los que se administró una dosis de 1 mg/kg pero alcanzaron aproximadamente el 30% por debajo de la línea basal los Días 10, 28 y 49. Los niveles en los sujetos a los que se administraron 3 mg/kg, 5 mg/kg y 10 mg/kg cayeron al mínimo el Día 14 a aproximadamente

15 35%, 55% y 55% por debajo de la línea basal, respectivamente, y los niveles permanecieron por debajo de la línea basal cuando se controlaron a continuación. Se proporciona una comparación de los niveles de todos los biomarcadores controlados en la Figura 5.

Los niveles de calcio ionizado en suero se controlaron después de una única dosis subcutánea de agente de unión a

20 esclerostina en mujeres postmenopáusicas sanas (véase Figura 6). Notablemente, los niveles de calcio ionizado no fluctuaron drásticamente a ninguna dosificación. De hecho, todos los sujetos (incluyendo los que recibieron placebo) experimentaron una reducción transitoria modesta en el calcio ionizado en suero de aproximadamente el 5% durante el periodo de control.

25 Finalmente, se midió la densidad mineral del hueso en la columna y cadera de mujeres postmenopáusicas sanas, que recibieron 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, o 10 mg/kg de agente de unión a esclerostina (véase Figura 7). Se observaron aumentos significativos de BMD en la columna, por ejemplo, los Días 28, 56 y 84, particularmente en pacientes que recibieron 5 mg/kg y 10 mg/kg. La BMD en la cadera aumentó menos que la de la columna, pero la BMD se elevó el Día 56 en pacientes a los que se administraron 3 mg/kg, 5 mg/kg y 10 mg/kg. La BMD se elevó más

30 el Día 84 en pacientes a los que se administró una dosis de 5 mg/kg y 10 mg/kg.

Este ejemplo ilustra la capacidad del método de la invención para reducir los niveles de un marcador de reabsorción del hueso, elevar los niveles de marcadores de la formación del hueso y aumentar la densidad mineral ósea sin alteraciones drásticas en el calcio en suero. El efecto terapéutico de una única dosis de agente de unión a

35 esclerostina es de larga duración, continuando observándose niveles de marcadores de la formación del hueso aumentados y niveles de marcadores de reabsorción del hueso reducidos a los 84 días (12 semanas) después del tratamiento. Además, los datos descritos en el presente documento sugieren que la eficacia terapéutica de la invención tiene ventajas significativas en comparación con otros tratamientos por “desacoplamiento” de la formación del hueso y la reabsorción del hueso para maximizar la formación y mineralización del hueso in vivo.

40 LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Amgen Inc. Padhi, et al.

45 <120> Métodos de inhibición de la reabsorción del hueso

<130> 31173/43242A

<150> 60/973.024 50 <151>

<160> 396

<170> PatentIn versión 3.5 55

<210> 1

<211> 190

<212> PRT

<213>

Homo sapiens 60

<400> 1

<210> 2

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

<210> 3

<211> 16

<212> PRT

<213>

Homo sapiens 15

<400> 3

20 <210> 4 <211> 16

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

<210> 5 10 <211> 12

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5 15

<210> 6

<211> 26

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

<210> 7

<211> 214

<212>

PRT 30 <213> Mus musculus

<400> 7

<210> 8

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 8

<210> 9

<211> 236

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 9

<210> 10

<211> 711

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 10

<210> 11

<211> 443

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 11

<210> 12

<211> 1332

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 12

<210> 13

<211> 462

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 13

<210> 14

<211> 1389

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 14

<210> 15

<211> 218

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 15

<210> 16

<211> 657

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 16

<210> 17

<211> 238

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 17

<210> 18

<211> 717

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 18 <210> 19

<211> 449

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 19

<210> 20

<211> 1350

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 20 <210> 21

<211> 468

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 21

<210> 22

<211> 1407

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 22

<210> 23

<211> 217

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 23

<210> 24

<211> 654

<212> ADN

<213> Quimera de conejo-ratón 15

<400> 24

5 <210> 25

<211> 239

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

10 <400> 25

<210> 26

<211> 720

<212> ADN

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 26

<210> 27

<211> 433 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Anticuerpo humanizado

15 <400> 27

<210> 28

<211> 1302 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Anticuerpo humanizado

15 <400> 28

20 <210> 29

<211> 452

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 5

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Anticuerpo humanizado

10 <400> 29

<210> 30

<211> 1359 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Anticuerpo humanizado

15 <400> 30

20 <210> 31

<211> 213

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 31

<210> 32 10 <211> 642

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 32 15

<210> 33

<211> 235

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 33 <210> 34

<211> 708

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 34 <210> 35

<211> 449

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 35

<210> 36

<211> 1350

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 36

<210> 37

<211> 468

<212> PRT 10 <213> Mus musculus

<400> 37

<210> 38

<211> 1407

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 38 20 <210> 41

5

<210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 39

10 15

<210> 40 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 41

<210> 42

<211> 11

<212> PRT 10 <213> Mus musculus

<400>

42

<400>

47

15 20

<210> 43 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 43

25

<210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus

30

<400> 44

35

<210> 45 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus

40

<400> 45

45

<210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 46

50

<210> 47

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

55

5 <210> 48

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus musculus

10 <400> 48

<210> 49 15 <211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 49 20

<210> 50

<211> 9 25 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 50

<210> 51

<211> 5

<212> PRT 35 <213> Quimera de conejo-ratón

<400> 51

40 <210> 52

<211> 16

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

45 <400> 52

<210> 53 50 <211> 4

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 53 55

<210> 54

<211> 13

<212> PRI

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 54

<210> 55 10 <211> 7

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 55 15

<210> 56

<211> 10

<212> PRT

<213> Quimera de conejo-ratón

<400> 56

25

30

<210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 57

35

40

<210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 58

45

<210> 59

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

50

<400> 59

55 <210> 60

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 60

5

10

<210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 61

15 20

<210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 62

25

<210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

30

<400> 63

<210> 64 35 <211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 64 40

<210> 65

<211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 65

<210> 66

<211> 20

5

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 66

10

<210> 67

<211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

15

<400> 67

20 <210> 68

<211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

25 <400> 68

<210> 69 30 <211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 69 35

<210> 70

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 70

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> Homo sapiens 10

<400> 71

15 <210> 72

<211> 8

<212> PRT

<213> Homo sapiens

20 <400> 72

<210> 73 25 <211> 7

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 73 30

<210> 74

<211> 399 35 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 40

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

45 <400> 74

<210> 75

<211> 133

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 5 <223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 10

<400> 75

15 <210> 76

<211> 393

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

20 <220>

<223> Polinucleótido sintético

<220>

<221> misc_feature 25 <223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 76 <210> 77

<211> 131 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 77

<210> 78 20 <211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 78

5 <210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 79

<210> 80 15 <211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 80

<210> 81

<211> 11 25 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 81

<210> 82

<211> 24

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 82

<210> 83

<211> 20

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 83

<210> 84

<211> 20

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 84

<210> 85

<211> 20

<212> PRT 10 <213> Rattus norvegicus

<400> 85

<210> 86

<211> 14

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus 20

<400> 86

25 <210> 87

<211> 25

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

30 <400> 87

<210> 88 35 <211> 23

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 88 40

<210> 89

<211> 25 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 89

<210> 90

<211> 20

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 90

<210> 91

<211> 16

<212> PRT 20 <213> Rattus norvegicus

<400> 91

<210> 92

<211> 23

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus 30

<400> 92

35 <210> 93

<211> 16

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

40 <400> 93

<210> 94 45 <211> 24

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 94 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 95 10

<210> 96

<211> 18

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 96

<210> 97

<211> 22

<212> PRT 25 <213> Rattus norvegicus

<400> 97

<210> 98

<211> 213

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus 35

<400> 98

<210> 99

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 99

<210> 100

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 100

<210> 101

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 101

<210> 102

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 102

<210> 103

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 103

<210> 104

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 104

<210> 105

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 105

<210> 106

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 106 <210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 107

<210> 108

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 108

<210> 109

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 109

<210> 110

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 110

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 111

<210> 112

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 112 <210> 113

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 113

<210> 114

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 114

<210> 115

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 115

<210> 116

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 116

<210> 117

<211> 213

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 117

<210> 118

<211> 642

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 118 <210> 119

<211> 235

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 119 <210> 120

<211> 708

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 120 <210> 121

<211> 445

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 121

<210> 122

<211> 1338

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 122

<210> 123

<211> 464

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 123

<210> 124

<211> 1395

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 124

<210> 125

<211> 215

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 125

<210> 126

<211> 648

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 126

<210> 127

<211> 237

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 127

<210> 128

<211> 714

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 128

<210> 129

<211> 449

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 129

<210> 130

<211> 1350

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 130

<210> 131

<211> 468

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 131

<210> 132

<211> 1407

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 132

<210> 133

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 133

<210> 134

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 134

<210> 135

<211> 234

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 135

<210> 136

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 136 <210> 137

<211> 447

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 137

<210> 138

<211> 1344

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 138 <210> 139

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 139

<210> 140

<211> 1401

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 140

10 <210> 141

<211> 214

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

15 <220>

<223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE 20 <223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 141 <210> 142

<211> 642 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 142 <210> 143

<211> 236 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 143 <210> 144

<211> 708 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 144 <210> 145

<211> 449 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 145

<210> 146

<211> 1347 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 146 <210> 147

<211> 468 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 147

<210> 148

<211> 1404

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 148 <210> 149

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 149 <210> 150

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 150

<210> 151

<211> 234

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 151

<210> 152

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 152

<210> 153

<211> 447

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 153

<210> 154

<211> 1344

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 154

<210> 155

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 155

<210> 156

<211> 1401

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 156

<210> 157

<211> 214

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 157

5 <210> 158

<211> 642

<212> ADN

<213> Mus musculus

10 <400> 158

<210> 159

<211> 234

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 159 <210> 160

<211> 702

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 160

<210> 161

<211> 447

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 161

<210> 162

<211> 1341

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 162 <210> 163

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 163

<210> 164

<211> 1398

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 164 <210> 165

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 165 <210> 166

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 166

<210> 167

<211> 234

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 167

<210> 168

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 168

<210> 169

<211> 447

<212>

PRT 10 <213> Mus musculus

<400> 169

<210> 170

<211> 1344

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 170

<210> 171

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 171

<210> 172

<211> 1401

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 172

<210> 173

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 173

<210> 174

<211> 642

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 174

<210> 175

<211> 234

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 175

<210> 176

<211> 702

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 176 <210> 177

<211> 450

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 177

<210> 178

<211> 1350

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 178

10 <210> 179

<211> 469

<212> PRT

<213> Mus musculus

15 <400> 179

<210> 180

<211> 1407

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 180 <210> 181

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 181 <210> 182

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 182

<210> 183

<211> 234

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 183 <210> 184

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 184

<210> 185

<211> 447

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 185

<210> 186

<211> 1344

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 186

<210> 187

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 187

<210> 188

<211> 1401

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 188

<210> 189

<211> 213

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 189

<210> 190

<211> 642

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 190

<210> 191

<211> 235

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 191

<210> 192

<211> 708

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 192

<210> 193

<211> 445

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 193

<210> 194

<211> 1338

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 194

<210> 195

<211> 464

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 195

<210> 196

<211> 1395

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 196

<210> 197

<211> 214

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 197

<210> 198

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 198

<210> 199

<211> 234

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 199

<210> 200

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 200

<210> 201

<211> 447

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 201

<210> 202

<211> 1344

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 202

<210> 203

<211> 466

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 203

<210> 204

<211> 1401

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 204

<210> 205

<211> 215

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 205

<210> 206

<211> 645

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 206

<210> 207

<211> 237

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 207

<210> 208

<211> 711

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 208 <210> 209

<211> 445

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 209

<210> 210

<211> 1335

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 210 <210> 211

<211> 464

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 211

<210> 212

<211> 1392

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 212

<210> 213

<211> 215 10 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 15

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

20 <400> 213 <210> 214

<211> 645 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 214 <210> 215

<211> 237 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 215 <210> 216

<211> 711 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 216 <210> 217

<211> 447 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223>Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 217

<210> 218

<211> 1341 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10 <220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 218 15

<210> 219

<211> 466 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 219

<210> 220

<211> 1398 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 220 <210> 221

<211> 215 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 221 <210> 222

<211> 645 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 222 <210> 223

<211> 237 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 223 <210> 224

<211> 711 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 224

<210> 225 20 <211> 451

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 25 <223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 225

<210> 226

<211> 1353

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético

<400> 226

10 15

<210> 227 <211> 470 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Polipéptido sintético

20

<220> <221> MISC_FEATURE <223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 227

<210> 228

<211> 1410

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 5

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10 <400> 228

<210> 229 15 <211> 213

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 20 <223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 25

<400> 229

5 <210> 230

<211> 639

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

10 <220>

<223> Polinucleótido sintético

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 230

<210> 231

<211> 235 10 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 15

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

20 <400> 231 <210> 232

<211> 705 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10 <220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 232

<210> 233

<211> 447

<212> PRT 10 <213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético

15 <220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 233 20

<210> 234

<211> 1341 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 234 <210> 235

<211> 466 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 235

<210> 236

<211> 1398 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 236 <210> 237

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 237

<210> 238

<211> 8

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 238

<210> 239

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 239 <210> 240

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 240

<210> 241

<211> 8

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 241

<210> 242

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 242

<210> 243

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 243

<210> 244

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 244

<210> 245

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 245

<210> 246

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 246

<210> 247

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 247

<210> 248

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 248

25 <210> 249

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 249

<210>

250 35 <211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 250

<210>

251 45 <211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 251

<210> 252

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 252

<210> 253

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 253

<210> 254

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 254

<210> 255

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 255

<210> 256

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 256

<210> 257

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 257 <210> 258

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 258

<210> 259

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 259

<210> 260

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus 25

<400> 260

<216> 261

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

35 <400> 261

<210> 262

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 262

<210> 263

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 263

<210> 264

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 264

<210> 265

<211> 14

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 265

<210> 266

<211> 5

<212> PRT 25 <213> Mus musculus

<400> 266

<210> 267

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus 35

<400> 267

<210> 268

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 268

<210> 269

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 269

<210> 270

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 270

<210> 271

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 271

<210> 272 25 <211> 5

<212> PRAT

<213> Mus musculus

<400> 272

<210> 273

<211> 17 35 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 273

<210> 274

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 274

<210> 275

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 275

<210> 276

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 276

<210> 277

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 277

<210> 278

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 278

<210> 279

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 279

<210> 280

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 280

<210> 281

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 281 <210> 282

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 282

<210> 283

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 283

<210> 284

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 284

<210> 285

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 285

<210> 286

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 286

<210> 287

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 287

<210> 288

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 288

<210> 289

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 289

<210> 290

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus 25

<400> 290

<210> 291

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

35 <400> 291

<210> 292

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 292

<210> 293

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 293

<210> 294

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 294

<210> 295 15 <211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 295

<210> 296

<211> 5 25 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 296

<210> 297

<211> 17

<212>

PRT 35 <213> Mus musculus

<400> 297

<210> 298

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 298

<210> 299

<211> 130

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 299

<210> 300

<211> 390

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 300

<210> 301

<211> 141

<212>

PRT 20 <213> Mus musculus

<400> 301

<210> 302

<211> 423

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 302

<210> 303

<211> 130

<212>

PRT 15 <213> Secuencia artificial

15 10

<220>

<223> Polipéptido sintético

20 <220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 303

5 <210> 304

<211> 390

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

10 <220>

<223> Polinucleótido sintético

<220>

<221> misc_feature 15 <223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 304

<210> 305

<211> 141

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 5

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10 <400> 305

15 <210> 306

<211> 423

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

20 <220>

<223> Polinucleótido sintético

<220>

<221> misc_feature 25 <223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 306 <210> 307

<211> 127 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 307

<210> 308 20 <211> 381

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 308 25

<210> 309

<211> 139

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 309

<210> 310

<211> 417

<212> ADN 15 <213> Mus musculus

<400> 310 <210> 311

<211> 127 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 311

<210> 312 20 <211> 381

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220> 25 <223> Polinucleótido sintético

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 312

<210> 313

<211> 139 10 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 15

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

20 <400> 313

<210> 314

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 314

10 <210> 315

<211> 128

<212> PRT

<213> Mus musculus

15 <400> 315

<210> 316

<211> 381

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 316

<210> 317

<211> 138

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 317

<210> 318

<211> 411

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 318

<210> 319

<211> 130

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 319

<210> 320

<211> 390

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 320

<210> 321

<211> 138

<212>

PRT 15 <213> Secuencia artificial

10 10

<220>

<223> Polipéptido sintético

20 <220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 321 <210> 322

<211> 414 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polinucleótido sintético 10

<220>

<221> misc_feature

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

15 <400> 322

<210> 323

<211> 106

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 323 <210> 324

<211> 320

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 324

<210> 325

<211> 106

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 325 <210> 326

<211> 327

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 326 <210> 327

<211> 120

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 327 <210> 328

<211> 120

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 328

<210> 329

<211> 120

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 329

<210> 330

<211> 226

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 330

<210> 331

<211> 447

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 331

<210> 332

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 332

<210> 333

<211> 324

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 333

<210> 334

<211> 213

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 334

<210> 335

<211> 444

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 335

<210> 336

<211> 108

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 336

<210> 337

<211> 324

<212>

ADN 15 <213> Mus musculus

<400> 337

<210> 338

<211> 119

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 338

10 <210> 339

<211> 357

<212> ADN

<213> Mus musculus

15 <400> 339

20 <210> 340

<211> 1395

<212> ADN

<213> Mus musculus

25 <400> 340

<210> 341

<211> 213

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 341 <210> 342

<211> 639

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 342 <210> 343

<211> 235

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 343 <210> 344

<211> 705

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 344

<210> 345

<211> 446

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 345

<210> 346

<211> 1338

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 346

<210> 347

<211> 465

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 347

<210> 348

<211> 1395

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 348

<210> 349

<211> 417

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 349

<210> 350

<211> 218

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 350

<210> 351

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 351

<210> 352

<211> 7

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

10 10

<400> 352

<210> 353

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus 5

<400> 353

10 <210> 354

<211> 657

<212> ADN

<213> Mus musculus

15 <400> 354

<210> 355 20 <211> 238

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 355 25

<210> 356

<211> 717

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 356 <210> 357

<211> 442

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 357

<210> 358

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus 5

<400> 358

10 <210> 359

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

15 <400> 359

<210> 360 20 <211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 360 25

<210> 361

<211> 1329 30 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 361

<210> 362

<211> 461

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 362

<210> 363

<211> 1386

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 363 <210> 364

<211> 106

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 364

<210> 365

<211> 318

<212>

ADN 15 <213> Mus musculus

<400> 365

<210> 366

<211> 120

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 366

<210> 367

<211> 360

<212>

ADN 15 <213> Mus musculus

<400> 367

<210> 368

<211> 108

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 368

10 <210> 369

<211> 324

<212> ADN

<213> Mus musculus

15 <400> 369

<210> 370 20 <211> 119

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 370 25

<210> 371

<211> 357

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 371

<210> 372

<211> 108

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 372

<210> 373

<211> 324

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 373

<210> 374

<211> 122

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 374

<210> 375

<211> 366

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 375

<210> 376

<211> 107

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 376

<210> 377

<211> 321

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 377

<210> 378

<211> 123

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 378

<210> 379

<211> 369

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 379

<210> 380

<211> 108

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

10 10 10 10

<400> 380

<210> 381

<211> 324

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 381

5 <210> 382

<211> 121

<212> PRT

<213> Mus musculus

10 <400> 382

<210> 383

<211> 363

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 383 <210> 384

<211> 108

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 384

<210> 385

<211> 324

<212>

ADN 15 <213> Mus musculus

<400> 385

<210> 386

<211> 125

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 386

<210> 387

<211> 375

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 387

<210> 388

<211> 106

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 388

<210> 389

<211> 318

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 389

<210> 390

<211> 121

<212>

PRT 15 <213> Mus musculus

<400> 390

<210> 391

<211> 363

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 391

<210> 392

<211> 448

<212>

PRT 15 <213> Secuencia artificial

10 10

<220>

<223> Polipéptido sintético

20 <220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 392 25

<210> 393

<211> 446 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 393

<210> 394

<211> 450 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético 10 <220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 394

<210> 395

<211> 446

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 395

<210> 396

<211> 445

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Polipéptido sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 396

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   un anticuerpo antiesclerostina para uso en un método para inhibir la reabsorción del hueso en un ser humano, comprendiendo el método administrar al ser humano un anticuerpo antiesclerostina en una cantidad de 1 mg/kg a 5 mg/kg, donde el anticuerpo antiesclerostina es un anticuerpo o fragmento del mismo que: (a) demuestra una afinidad de unión por esclerostina de SEC ID Nº: 1 de menos de o igual a 1 x 10-7 M; y (b) comprende una CDR-H1 de SEC ID Nº: 245, una CDR-H2 de SEC ID Nº: 246, una CDR-H3 de SEC ID Nº: 247, una CDR-L1 de SEC ID Nº: 78, una CDR-L2 de SEC ID Nº: 79 y una CDR-L3 de SEC ID Nº: 80, donde:

2. 2.

   El anticuerpo para uso de la reivindicación 1, donde la cantidad de anticuerpo antiesclerostina administrada es de 1 mg/kg a 3 mg/kg.

   15 3. El anticuerpo para uso de la reivindicación 1 o 2, donde la cantidad de anticuerpo antiesclerostina administrada es de aproximadamente 2 mg/kg.

3. 4.

   El anticuerpo para uso de la reivindicación 1 o 2, donde la cantidad de anticuerpo antiesclerostina administrada es de aproximadamente 3 mg/kg.

4. 5.

   El anticuerpo para uso de la reivindicación 1, donde el método comprende administrar una dosis de 70 a 450 mg.

5. 6.

   El anticuerpo para uso de la reivindicación 1, donde el método comprende administrar una dosis de aproximadamente 140 mg.

6. 7.

   El anticuerpo para uso de la reivindicación 1, donde el método comprende administrar una dosis de aproximadamente 210 mg.

7. 8.

   El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la cantidad de anticuerpo antiesclerostina se administra al sujeto una vez cada dos semanas.

8. 9.

   El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el anticuerpo antiesclerostina se administra al sujeto una vez al mes.

9. 10.

   El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el anticuerpo es un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo quimérico.

10. 11.

    El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el ser humano padece un trastorno relacionado con el hueso seleccionado del grupo que consiste en acondroplasia, disostosis cleidocraneal, encondromatosis, displasia fibrosa, Enfermedad de Gaucher, raquitismo hipofosfatémico, síndrome de Marfan, exostosis hereditarias múltiples, neurofibromatosis, osteogénesis imperfecta, osteopetrosis, osteopoiquilosis, lesiones escleróticas, seudoartrosis, osteomielitis piógena, enfermedad periodontal, pérdida de hueso inducida por fármaco antiepiléptico, hiperparatiroidismo primario y secundario, síndromes de hiperparatiroidismo familiar, pérdida de hueso inducida por ingravidez, osteoporosis en hombres, pérdida de hueso postmenopáusica, osteoartritis, osteodistrofia renal, trastornos infiltrantes del hueso, pérdida de hueso oral, osteonecrosis de la mandíbula, enfermedad juvenil de Paget, melorreostosis, enfermedades óseas metabólicas, mastocitosis, enfermedad/anemia falciforme, pérdida de hueso relacionada con trasplante de órganos, pérdida de hueso relacionada con el trasplante de riñón, lupus eritematoso sistémico, espondilitis anquilosante, epilepsia, artritis juvenil, talasemia, mucopolisacaridosis, Enfermedad de Fabry, Síndrome de Turner, Síndrome de Down, Síndrome de Klinefelter, lepra, Enfermedad de Perthes, escoliosis idiopática adolescente, enfermedad inflamatoria multisistémica de aparición infantil, Síndrome de Winchester, Enfermedad de Menkes, Enfermedad de Wilson, enfermedad ósea isquémica, enfermedad de Legg-Calve-Perthes, osteoporosis migratoria regional, estados anémicos, afecciones provocadas por esteroides, pérdida de hueso inducida por glucocorticoides, pérdida de hueso inducida por heparina, trastornos de la médula ósea, escorbuto, malnutrición, deficiencia de calcio, osteoporosis, osteopenia, alcoholismo, enfermedad hepática crónica, enfermedad posmenopáusica, afecciones inflamatorias crónicas, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, colitis inflamatoria, enfermedad de Crohn, oligomenorrea, amenorrea, embarazo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, trastornos tiroideos, trastornos paratiroideos, enfermedad de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, inmovilización o desuso, síndrome de distrofia simpática refleja, osteoporosis regional, osteomalacia, pérdida de hueso asociada con el reemplazo de articulaciones, pérdida de hueso asociada con VIH, pérdida de hueso asociada con pérdida de hormona del crecimiento, pérdida de hueso asociada con fibrosis quística, pérdida de hueso asociada con quimioterapia, pérdida de hueso inducida por tumor, pérdida de hueso relacionada con cáncer, pérdida de hueso ablativa hormonal, mieloma múltiple, pérdida de hueso inducida por fármaco, anorexia nerviosa, pérdida de hueso facial asociada con enfermedad, pérdida de hueso craneal asociada con enfermedad, pérdida de hueso de la mandíbula asociada con enfermedad, pérdida de hueso del cráneo asociada con enfermedad, pérdida de hueso asociada con envejecimiento, pérdida de hueso facial asociada con envejecimiento, pérdida de hueso craneal asociada con envejecimiento, pérdida de hueso de la mandíbula asociada con envejecimiento, pérdida de hueso del cráneo asociada con envejecimiento y pérdida de hueso asociada con viaje espacial.

11. 12.

    El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el ser humano es una mujer postmenopáusica.

12. 13.

    El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el ser humano padece osteoporosis.