ES2464465T3 - Composiciones de esteroles a partir de jabón de pulpa - Google Patents
Composiciones de esteroles a partir de jabón de pulpa Download PDFInfo
- Publication number
- ES2464465T3 ES2464465T3 ES05011507.0T ES05011507T ES2464465T3 ES 2464465 T3 ES2464465 T3 ES 2464465T3 ES 05011507 T ES05011507 T ES 05011507T ES 2464465 T3 ES2464465 T3 ES 2464465T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cholesterol
- phytosterols
- forbes
- compositions
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
- A23L33/11—Plant sterols or derivatives thereof, e.g. phytosterols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/15—Vitamins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Crushing And Pulverization Processes (AREA)
- Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Una composición, que es un suplemento alimentario o una formulación de vitaminas, que comprende una composición de fitoesteroles que comprende una cantidad eficaz para disminuir el LDL de estigmastanol, campesterol y b-sitosterol, en la que la proporción de beta-sitosterol es de 1,0, la proporción de campesterol es de entre 0,2 y 0,4, y la proporción de estigmastanol es de entre 0,2 y 0,5.
Description
Composiciones de esteroles a partir de jabon de pulpa
Campo de la invención
La presente invencion se refiere a la preparacion y purificacion de composiciones de esteroles a partir de jabon de 5 pulpa, a las propias composiciones per se y al uso de estas composiciones y sus derivados como agentes para prevenir o tratar dislipidemias primarias y secundarias.
Antecedentes de la invención
La causa directa de la angina y el ataque cardiaco es un proceso degenerativo denominado aterosclerosis. La aterosclerosis es el resultado de una serie de factores ambientales y heredados (geneticos) integrados. La
10 interaccion de estos factores, de los cuales, en nuestra civilizacion, la dieta parece ser el mas importante, conduce al desarrollo de la aterosclerosis. El crecimiento de placas ateroscleroticoas con un relleno de colesterol corta, en ultimo termino, el suministro de sangre al musculo cardiaco o, como alternativa, al cerebro o a las piernas, dependiendo de la localizacion de la placa en el arbol arterial.
Uno de los principales factores de riesgo para la aterosclerosis que pueden modificarse potencialmente es el nivel
15 de colesterol sanguineo. Una serie de estudios bien documentados han demostrado que el nivel de colesterol sanguineo en efecto es un importante factor predictivo para el riesgo de ataque cardiaco y tambien para el ictus. La relacion entre la concentracion sanguinea de colesterol y el riesgo de padecer estos trastornos es una gradacion (cuanto mayor sea el nivel, mas probable es la enfermedad) continua (abarca todos los niveles de colesterol), sin un umbral aparente (incluso disminuyendo los niveles considerados bajos, se puede disminuir aun mas el riesgo de la
20 enfermedad). Por ejemplo, en personas mayores de cuarenta aros, un nivel de colesterol sanguineo de 7,0 mmol/l presenta un riesgo de enfermedad de las arterias coronarias de tres a cuatro veces mayor que el asociado con unos niveles menores que 5,0 mmol/l. La relacion se convierte en especialmente pronunciada cuando los niveles son mayores que 5,2 mmol/l. Por ejemplo, la tasa de mortalidad entre hombres con unos niveles de colesterol de 8,0 mmol/l es casi seis veces mayor que entre los hombres con niveles de 4,0 mmol/l. Estos descubrimientos mas
25 recientes son coherentes con estudios anteriores.
Otros grandes ensayos clinicos han demostrado claramente que disminuyendo los niveles altos de colesterol se puede reducir el riesgo de infacto de miocardio mortal y no mortal, angina, cambios en electrocardiogramas y en la cirugia de bypass de las arterias coronarias. El primero y mas conocido de estos ensayos se realizo en Lipid Research Clinics, en el que los ensayos de prevencion primaria coronaria demostraron que con cada reduccion del
30 1% en el nivel de colesterol total sanguineo se produce una reduccion del 2% en el riesgo de enfermedad de las arterias coronarias.
Para que cualquier terapia preventiva a largo plazo de la hipercolesterolemia tenga exito, esta debe comenzar a una edad relativamente temprana y continuar indefinidamente. Aunque una dieta baja en grasas es la piedra angular de dicha terapia a largo plazo, hasta 60% de los pacientes la abandonan despues de seis meses. La dificultad para
35 seguir la dieta es muy alta en muchos paises occidentales porque la dieta general es rica en grasas. Los malos perfiles de colesterol en muchos pacientes se exacerban por la frecuencia de otros factores de riesgo para la enfermedad cardiovascular, tales como alta presion sanguinea, diabetes, obesidad y tabaquismo.
Las modificaciones en la dieta como terapia para la aterosclerosis y otras enfermedades cardiovasculares se ha refinado significativamente a lo largo de los ultimos 10 a 15 aros. En particular, los investigadores han reconocido
40 que los esteroles vegetales (fitoesteroles) son eficaces para disminuir los niveles plasmaticos de colesterol (Lees et al., Atherosclerosis, 28 (1977) 325-338; Kudehodkar et al., Atherosclerosis, 23 (1976) 239; Day, Artery, 18(3):125132 (1991)).
Los fitoesteroles son compuestos similares a esteroles sintetizados en plantas sin valor nutricional para los seres humanos. En las plantas son ncecesarios para la funcion celular, de una manera similar a la forma en que se
45 necesita el colesterol en los seres humanos. La dieta occidental media contiene hasta 360 mg de fitoesteroles diarios. En fechas recientes, estos esteroles vegetales dieteticos han recibido mucha atencion por sus posibles propiedades anticancer y su capacidad para disminuir los niveles de colesterol cuando se proporcionan como alimento a una serie de especies de mamifero, que incluyen el ser humano.
Desde el punto de vista quimico, los fitoesteroles se parecen mucho al colesterol en su estructura. Los principales
50 fitoesteroles son el beta-sitosterol, campesterol y estigmasterol. Otros incluyen el estigmastanol (beta-sitostanol), sitostanol, desmosterol, calinasterol, poriferasterol, clionasterol y brassicasterol. Las estructuras quimicas del betasitosterol, campesterol y estigmasterol son:
30 beta-sitosterol
campesterol
estigmasterol
El mecanismo mediante el cual los fitoesteroles disminuyen el colesterol sanguineo en animales no esta claro, pero parece implicar la inhibicion de la absorcion del colesterol desde el yeyuno proximal compitiendo con el colesterol en sitios de captacion especificos. Los datos de las investigaciones tambien sugieren que algunos fitoesteroles no son absorbidos en el yeyuno proximal (sitostanol) y, cuando se produce una absorcion (beta-sitosterol), es de cantidades muy limitadas.
Basandose en esteos descubrimientos de las investigaciones, el uso de fitoesteroles como suplemento dietetico para reducir la absorcion del colesterol se ha estudiado ampliamente (Lees et al., supra; Pollak, Pharmac. Ther., 31 (1985), 177-208; Raicht et al., Biochimica et Biophysica Acta, 388 (1975), 374-384).
En Lees et al., supra, se realiza una comparacion entre los efectos de preparaciones de sitosterol procedente de dos fuentes, esteroles de soja y esteroles de talloil, sobre el colesterol plasmatico. Se descubrio que las preparaciones de esteroles vegetales son eficaces para tratar pacientes con hipercolesterolemia. Pollak, supra, es un articulo de investigacion sobre los fitoesteroles y su efecto sobre los lipidos sericos. Raicht, supra, describe mas a fondo el efecto del beta-sitosterol sobre el equilibrio de los esteroles y las enzimas limitantes de la velocidad del metabolismo de los esteroles.
En general se acepta que los fitoesteroles ofrecen una combinacion exclusiva de seguridad a largo plazo, eficacia y versatilidad en el tratamiento de seres humanos. El desafio actual con respecto a los fitoesteroles es su aislamiento y purificacion a partir de fuentes vegetales, y la determinacion de otras fuentes que sean baratas, utilizables a gran escala y que muestren efectos hipocolesteremicos.
Tradicionalmente, los fitoesteroles se han aislado a partir de fuentes tales como aceite de maiz, aceite de germen de trigo, brea de sjoa y brea de aceite de maiz. De modo similar, se ha utilizado la brea de talloil, que se obtiene durante el proceso de la preparacion de papel a partir de madera, en particular madera de pino, como fuente de fitoesteroles. En general, en este proceso, las virutas de madera son digeridas con sosa caustica para producir una pulpa o "jabon". El jabon despues se destila para eliminar los materiales volatiles y queda una "brea" como residuo. Los investigadores han aislado fitoesteroles a partir de esta brea.
Existen algunas desventajas notables con estas fuentes tradicionales de fitoesteroles. La brea de talloil es un material extremadamente complejo que comprende resinas, acidos grasos, productos de la oxidacion, materiales esterificados y fitoesteroles. Aunque la brea es barata, porque es el ultimo resido que queda de diversos procesos de fabricacion, es muy dificil recuperar esteroles de alto peso molecular a partir de ella con buenos rendimientos y con las altas purezas requeridas para los usos farmaceuticos.
La patente de EEUU n.D 3.840.570 de Jullan proporcina un proceso para preparar esteroles a partir de brea de tallolil mediante extraccion en una mezcla de agua-alcohol-hidrocarburo, seguido de una saponificacion y una posterior
purificacion. El material de partida en este proceso es la brea de talloil a partir de la cual se extraen los fitoesteroles y diversas impurezas. Se reconoce que, en cualquier proceso de purificacion de la brea de talloil, las impurezas de acidos y alcoholes de cadena larga son particularmente dificiles de separar de los esteroles (que, en si mismos, son alcoholes de alto peso molecular).
Oros investigadores han tratado la cuestion de la purificacion de esteroles a partir de brea de talloil: patente de EEUU n.D 2.835.682, de Steiner y Fritz; patente de EEUU n.D 2.715.638, de Albrecht y Herrlinger; patente de EEUU
n.D 2.573.891, de Christenson. Es importante advertir que en cada uno de estos procesos de purificacion conocidos, el material de partida es brea de talloil que tiene los problemas de recuperacion analizados anteriormente.
Un objeto de la presente invencion es obviar o mitigar las anteriores desventajas.
Sumario de la invención
La presente descripcion proporciona un proceso para purificar y preparar composiciones de fitoesteroles a partir de jabon de pulpa, que comprende extraer del jabon de pulpa un precipitado cremoso y purificar este precipitado para formar una composicion de fitoesteroles exclusiva. De modo mas especifico, el precipitado cremoso se extrae a partir del jabon de pulpa utilizando un procedimiento de extraccion con disolventes. La composicion resultante despues se purifica del precipitado cremoso mediante cristalizacion.
La presente invencion tambien proporciona composiciones exclusivas que son eficaces para prevenir o tratar dislipidemias y que comprenden beta-sitosterol, campesterol y estigmastanol, segun se describe en las reivindicaciones. Las composiciones de fitoesteroles proporcionadas en la presente son significativamente diferentes de las que se encuentran en plantas, alimentos y aceites. En particular, el suministro de estigmastanol parece potenciar la eficacia. Estas composiciones tambien pueden comprender diversos compuestos concurrentes, que pueden o no ser fitoesteroles. En particular, estos compuestos concurrentes pueden incluir triterpenos, alcoholes de cadena larga y otros compuestos organicos solubles en alcoholes.
La presente invencion describe tambien el uso de las composiciones descritas en la presente para prevenir o tratar dislipidemias primarias y secundarias y aterosclerosis, incluyendo enfermedad cardiaca coronaria, enfermedad vascular periferica e ictus en seres humanos y animales.
Las exclusivas composiciones de la presente invencion han mostrado resultados excelentes para disminuir el colesterol sanguineo total (TC) y de lipoproteinas de baja densidad (LDL). Ademas, y de forma bastante sorprendente, se ha descubierto que las composiciones de la presente invencion, en diferentes especies animales, mantienen o elevan los niveles plasmaticos de colesterol sanguineo de lipoproteinas de alta densidad (HDL). Esta caracteristica de la presente invencion tienen una importancia critica, debido al hecho de que las investigaciones han demostrado que, independientemente de los niveles de TC, a medida que disminuye el nivel de HDL plasmatico, aumenta el riesgo de aterosclerosis. Los fitoesteroles aislados a partir de brea de talloil, soja y otras fuentes no han mostrado, segun el conocimiento de los presentes inventores, este exclusivo efecto sobre el HDL.
Aunque se conoce la produccion de algunos tipos de fitoesteroles a partir de la brea destilada del jabon de tratamientos de virutas de madera, hasta la fecha no se han producido composiciones de fitoesteroles a partir del componente de jabon de pulpa del proceso de tratamiento de virutas de madera. La brea de talloil tiene una composicion significativamente diferente de la del jabon de pulpa. Se cree que el sorprendente efecto de las composiciones de la presente invencion es debido, al menos parcialmente, al uso del jabon de pulpa como material de partida y al exclusivo proceso de separacion.
Breve referencia a los dibujos
Mediante los siguientes dibujos no limitantes se ilustraran diversos aspectos de la invencion, en los que:
la figura 1 es un perfil de cromatografia de gases para una composicion (en lo sucesivo Forbes-2) dentro del alcance de la presente invencion;
la figura 2 es una representacion del perfil en la figura 1 de 35 a 45 minutos de tiempo de retencion;
la figura 3 es una representacion del perfil en la figura 1 de 22 a 27 minutos de tiempo de retencion;
la figura 4 es un indice del perfil de cromatografia de gases de la figura 1;
la figura 5 es un perfil de cromatografia de gases para otra composicion (en lo sucesivo Forbes-3) dentro del alcance de la presente invencion;
la figura 6 es una representacion del perfil en la figura 5 de 32 a 48 minutos de tiempo de retencion;
la figura 7 es un indice del perfil de cromatografia de gases de la figura 5;
la figura 8 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-1 y Forbes-2 sobre las concentraciones
de TC en ratas;
la figura 9 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-1 y Forbes-2 sobre las concentraciones
de colesterol-LDL en ratas;
la figura 10 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-1 y Forbes-2 sobre las
concentraciones de colesterol-HDL en ratas;
la figura 11 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-3 sobre el TC serico en hamsters;
la figura 12 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-3 sobre el colesterol-LDL serico en
hamsters;
la figura 13 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de Forbes-3 sobre el colesterol-HDL serico en
hamsters;
la figura 14 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de diversos tratamientos dieteticos sobre los
niveles de colesterol en hamsters macho y hembra;
la figura 15 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de diversos tratamientos dieteticos sobre los
niveles de colesterol plasmatico en hamsters macho;
la figura 16 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de diversos tratamientos dieteticos sobre los
niveles de colesterol plasmatico en hamsters hembra;
la figura 17 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de diversos tratamientos dieteticos sobre los
niveles de trigliceridos plasmaticos en hamsters macho y hembra;
la figura 18 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de diversos tratamientos dieteticos sobre las
proporciones de HDL/apo-B en hamsters macho y hembra;
la figura 19 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de los tratamientos dieteticos sobre el colesterol
total en hamsters en un estudio de 45 dias;
la figura 20 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de los tratamientos dieteticos sobre la correlacion
del colesterol con sitostanol;
la figura 21 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de los tratamientos dieteticos sobre los niveles
de HDL en hamsters a lo largo de 45 dias;
la figura 22 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de los tratamientos dieteticos sobre las
proporciones de no-apoA/apoA en hamsters a lo largo de 45 dias; y
la figura 23 representa una grafica de barras que ilustra los efectos de los tratamientos dieteticos sobre los esteroles
no-apoA en hamsters a lo largo de 45 dias.
Realizaciones preferidas de la invención
El proceso de la presente invencion comprende las etapas de:
- (A)
- obtener o preparar el material de partida, un jabon de pulpa derivado de plantas;
- (B)
- extraer del jabon un precipitado cremoso utilizando un disolvente apropiado; y
- (C)
- purificar, a partir del precipitado cremoso, una composicion de fitoesteroles.
Existen numerosas fuentes posibles del jabon de pulpa derivado de plantas. En general, en un proceso conocido (el proceso de "Kraft"), se tratan virutas de madera con sosa caustica para producir un jabon. Las virutas de madera pueden derivarse de cualquier variedad de arbol de madera dura o madera blanda que incluye, pero no se limita a abeto, cedro, pino, picea, roble, cicuta y alamo. Lo mas preferiblemente, las virutas de derivan de madera de cualquier variedad forestal europea o de la costa del Pacifico del noroeste americano.
En la fase de extraccion, el jabon se mezcla con una disolucion de cetona y agua. Se emplea un disolvente de hidrocarburo para extraer los esteroles. Esta etapa puede realizarse a unas temperaturas en general de aproximadamente 25 DC a aproximadamente 150 DC, pero lo mas preferiblemente de aproximadamente 50 DC a aproximadamente 100 DC. Lo mas preferiblemente, esta fase de extraccion se continua a lo largo de 15 a 24 horas. Es importante advertir que no se requiere ni se sugiere el uso de alcohol durante la fase de extraccion. El proceso de extraccion de la presente invencion se realiza utilizando un disolvente de cetona-agua-hidrocarburo.
La cetona se selecciona del grupo que tiene la estructura general RCOR1, en la que R y R1 son grupos alquilo.
Preferiblemente, los grupos alquilo son grupos C1-C6. Lo mas preferiblemente, la cetona es 2-propanona (acetona). El hidrocarburo puede seleccionarse del grupo que comprende todos los hidrocarburos C5-C10. Lo mas preferiblemente, el hidrocarburo es hexano.
Tal como se muestra en la figura 1, el producto de la fase de extraccion es un residuo o precipitado cremoso a partir del cual se purifica la composicion de fitoesteroles. Esta fase de purificacion puede realizarse mediante cristalizacion, separacion cromatografica o mediante cualquier otro procedimiento adecuado. Lo mas preferiblemente, el precipitado cremoso se disuelve en alcohol, se enfria lentamente, despues se filtra y se lava con alcohol frio. El residuo se seca, y el producto resultante es una composicion de fitoesteroles.
En una forma preferida, el alcohol utilizado en la fase de purificacion se selecciona del grupo de estructuras generales R-CHOHR, R-CH2OH y RCOH, en las que R es un grupo alquilo C1-C4. Lo mas preferiblemente, el alcohol es metanol. La fase de enfriamiento puede realizarse a unas temperaturas de 10 DC a 0 DC, lo mas preferiblemente a 3 o 4 DC durante 24 horas.
Las composiciones de fitoesteroles que resultan de los procesos descritos en la presente pueden incorporarse directamente en suplementos alimentarios y formulaciones de vitaminas.
Las composiciones de fitoesteroles de la presente invencion han demostrado una marcada capacidad para modificar lipoproteinas, incluso a concentraciones menores de fitoesteroles que las que aparecen en las formulaciones conocidas. Sin embargo, mas sorprendente ha resultado el efecto de estas composiciones para aumentar los niveles plasmaticos de las lipoproteinas de alta densidad (HDL), un efecto que hasta la fecha no ha sido asociado con ninguna otra composicion de fitoesteroles derivada de talloil. Se cree que este efecto exclusivo puede ser debido al uso de jabones de pulpa como material de partida, o el suministro de estigmastanol como elemento de la composicion.
Las composiciones de la presente invencion comprenden la siguiente proporcion de fitoesteroles: beta-sitosterol (1); campesterol (0,2-0,4); y estigmastanol (0,2-0,5). Lo mas preferiblemente, el campesterol y el estigmastanol juntos representan al menos 50% de la concentracion total de beta-sitosterol. En una forma mas preferida, las composiciones de la presente invencion comprenden la siguiente proporcion de fitoesteroles, comparado con fitoesteroles derivados de soja:
- Pureza aproximada
- Proporcion de fitoesteroles conocidos
- (%)
- b-sitosterol campesterol estigmastanol
- Soja
- 1 0,640 0,005
- Forbes-1
- 91,0 1 0,354 0,414
- Forbes-2
- 77,0 1 0,330 0,203
- Forbes-3
- 90,0 1 0,268 0,299
La composicion y la pureza de otros dos extractos dentro del alcance de la presente invencion son como sigue.
Composicion (%) Pureza aproximada (%)
b-sitosterol campesterol estigmastanol
Forbes-4 99,0 62,6 16,6 23,2
Forbes-5 98,3 64,7 16,4 17,2
En todas las composiciones descritas en la presente puede haber otros compuestos que pueden o no ser fitoesteroles. Por ejemplo, se ha descubierto que el campestanol, otro fitoesterol, puede estar presente en una cantidad relativamente pequera. Ademas, pueden estar presentes alcoholes grasos de cadena lineal, tales como behenil (C22) y lignoceril alcohol (C24). Para determinar la naturaleza de estos compuestos concurrentes se han realizado analisis de cromatografia liquida de gases en cada una de las composiciones mas preferidas de la presente invencion.
Las condiciones de realizacion de la cromatografia de gases para los fitoesteroles fueron: temperatura inicial, 80 DC, que se mantuvo durante 1 minuto; ascension hasta 120 DC a 20 DC por minuto, que se mantuvo durante 7 minutos; ascension hasta 24 DC a 20 DC por minuto, que se mantuvo durante 15 minutos; y ascension hasta 269 DC a 20 DC por minuto, que se mantuvo durante 25 minutos. Al final de cada ensayo, la temperatura ascendio hasta 320 DC y se
mantuvo durante un minimo de 5 minutos. La temperatura de inyeccion fue de 300 DC y la temperatura del detector fue de 320 DC. El caudal de la columna fue de 1 ml por minuto y el caudal de la valvula de division fue de 4 ml por minuto. El caudal de la valvula de salida fue de 4,5 ml por minuto. El gas vehiculo fue helio.
Los resultados del analisis de cromatografia liquida de gases para dos de las composiciones mas preferidas de la presente invencion se muestra en las figuras 1-7.
Con respecto a la composicion Forbes-2, los esteroles conocidos aparecen en la region de 35-45 mnutos en las figuras 1 y 2. El beta-sitosterol viene indicado en el pico 87, el campesterol viene indicado en el pico 81, y el estigmastanol viene indicado en el pico 84. Los picos 65, 66 y 77 en la figura 2 son compuestos concurrentes que pueden mostrar efectos hipocolesterolemicos. Sin embargo, es posible que estos compuestos concurrentes puedan tener un efecto sinergico sobre las acciones de los fitoesteroles conocidos en las composiciones. De modo similar, en las figuras 5 y 6, el campesterol, el estigmastanol y el beta-sitosterol son representados por los picos 6, 7 y 8, respectivamente.
Otra composicion preferida dentro del alcance de la presente invencion comprende los siguientes componentes:
Campesterol 14,1%
Campestanol 3,5%
B-sitosterol 62,8%
Estigmastanol 16,9%
para una concentracion total de fitoesteroles del 97,3%.
Ejemplo 1: Extracción y purificación
Se obtuvo un lote de 3 kg de jabon de pulpa de B.C. Chemicals Inc. Se preparo una mezcla de 3 l de acetona y 1,5 l de agua a la cual se aradio el jabon. La mezcla se extrajo de modo continuo con 4,5 l de hexano a 50 DC durante 24 horas utilizando un evaporador de 18 l. El producto de la extraccion resultante despues se seco sobre sulfato de sodio y se dejo evaporar. Esto produjo 460 g de resido o precipitado cremoso.
El precipitado cremoso se calento y se agito utilizando una barra magnetica y se aradieron lentamente 460 ml de metanol. La mezcla se sometio a reflujo con agitacion durante 15 min, y se enfrio lentamente durante 3-5 horas. La mezcla se enfrio a 3-4 DC durante la noche y despues se filtro y se lavo (dos veces) con 150 ml de metanol frio. Por ultimo, la mezcla se mantuvo al vacio durante 2 dias para producir 100 g de mezcla con una pureza del 82% (es decir, 82 g de fitoesteroles).
Ejemplo 2: Evaluación de los efectos de las composiciones de fitoesteroles en ratas
Se dividieron 90 ratas Wistar macho (80-100 g) en 3 modulos experimentales: composicion Forbes-1; composicion Forbes-2 y soja. Las treinta ratas dentro de cada modulo se volvieron a dividir en 5 regimenes dieteticos, segun se indica en la tabla 2. Las ratas se mantuvieron en un ciclo de luz inverso y se alimentaron durante 10 dias con una dieta semipurificada basal (tabla 1), suplementada con diferentes cantidades de colesterol y fitoesteroles (tabla 2). Dentro de cada uno de los 5 grupos dieteticos, a 2 ratas se les administro la composicion Forbes-1, a 2 ratas se les administro la composicion Forbes-2, y a 2 ratas se les administraron fitoesteroles derivados de soja (Sigma).
Tabla 1. Composicion de la dieta experimental
- Ingredientes
- %
- Caseina
- 20
- Almidon de maiz
- 21,5
- Sacarosa
- 35
- Aceite no volatil*
- 18
- D1-metionina
- 0,5
- Mezcla de minerales
- 4,00
- Mezcla de vitaminas
- 1,00
- *Mezcla de cartamo y manteca con una proporcion 1:3.
- 7
Tabla 2. Regimenes dieteticos
- Grupos
- Colesterol Esteroles aradidos a la dieta basal (%) Fitoesteroles
- 1
- 0 0
- 2
- 1 0
- 3
- 1 0,2
- 4
- 1 0,5
- 5
- 1 1
Al final de periodo de alimentacion, a las ratas se les inyecto por via intraperitoneal oxido de deuterio (0,4 ml) y se les privo de alimento y agua durante al menos 2 horas. Despues las ratas se anestesiaron con halotano. Se extrajeron muestras de sangre del corazon. Se retiraron con rapidez muestras del higado, intestino delgado y musculo, se pesaron, se introdujeron en nitrogeno liquido y se conservaron a -80 DC hasta la determinacion de la sintesis de colesterol. Se determino el colesterol total, el colesterol-LDL y -HDL con un kit comercial (Biopacific Diagnostic Inc.).
Los resultados de los efectos de las composiciones de fitoesteroles sobre el colesterol total, el colesterol-LDL y -HDL se representan en las figuras 8, 9 y 10, respectivamente. La eficacia de Forbes-1 y Forbes-2 resulta evidente por la reduccion en el colesterol-LDL mostrada en la figura 9 y el aumento en el colesterol-HDL mostrado en la figura 10, en particular por Forbes-1. En la figura 8, la adicion de colesterol (grupo dietetico 2) a la dieta base (grupo 1) produjo un aumento en las concentraciones de colesterol en la circulacion. La adicion progresiva de niveles crecientes de fitoesteroles (grupos 3-5) dio como resultado una normalizacion de los niveles de colesterol en los grupos que recibieron Forbes-2 y Forbes-1, pero no fitoesteroles de soja, segun se determina mediante un analisis de regresion. La figura 9 demuestra que los fitoesteroles de Forbes-2 y Forbes-2 poseen mejor eficacia para disminuir el colesterol que los fitoesteroles de soja para el LDL. La figura 10 demuestra la mayor capacidad para aumentar el HDL de las composiciones preferidas de la presente invencion, en particular Forbes-1, comparado con los fitoesteroles de soja.
Ejemplo 3: Evaluación de los efectos de las composiciones de fitoesteroles en hámsters
El presente estudio se realizo para estudiar el efecto de las composiciones de fitoesteroles dieteticos de la presente invencion sobre el aumento inducido por el colesterol dietetico de las concentraciones sericas de colesterol en hamsters.
Un total de 40 hamsters macho (80-100 g), alojados individualmente en jaulas de malla de acero inoxidable, se alimentaron con pienso para roedores y se aclimataron durante tres dias en una sala con condiciones ambientales (20-22 DC, con iluminacion de 17:00-05:00 h). Despues los hamsters se dividieron en cinco grupos de 8 animales por grupo y se alimentaron durante 34 dias con una dieta semipurificada basal (tabla 3) suplementada con diferentes cantidades de colesterol y una de las composiciones de fitoesteroles de la presente invencion (Forbes-3) (tabla 4).
Tabla 3. Composicion de la dieta experimental
- Ingredientes
- %
- Caseina
- 20
- Almidon de maiz
- 28
- Sacarosa
- 36,3
- Aceite de maiz
- 5,0
- Celulosa
- 5,0
- D1-metionina
- 0,5
- Mezcla de minerales
- 4,00
- Mezcla de vitaminas
- 1,00
- Bitartrato de colina
- 0,2
- 8
45 Colesterol 0,025, 0,25
Tabla 4. Regimenes dieteticos
- Grupos
- Colesterol aradido a la dieta control (%) Fitoesteroles aradidos a la dieta control (%)
- 1
- 0,025 ninguno
- 2
- 0,25 ninguno
- 3
- 0,25 0,25
- 4
- 0,25 0,5
- 5
- 0,25 1,0
Al final de periodo de alimentacion, a los animales se les inyecto por via intraperitoneal oxido de deuterio (0,4 ml) y se les privo de alimento y agua durante al menos 2 horas. Despues los hamsters se anestesiaron con halotano. Se extrajeron muestras de sangre del corazon. Se retiraron con rapidez otras muestras de tejidos, que incluyen higado, intestino delgado y musculo, se pesaron, se introdujeron en nitrogeno liquido y se conservaron a -80 DC hasta la determinacion de la sintesis de colesterol. Se determino el colesterol total, el colesterol-LDL y -HDL con un kit comercial. Los resultados se evaluaron de modo estadistico con un analisis ONEWAY del procedimiento de varianza (SYSTAT).
Los hamstes alimentados con la dieta con alto contenido en colesterol presentaban un colesterol total y colesterol-LDL serico significativamente mayor que los alimentados con la dieta con un contenido normal en colesterol (al 0,025%). El suplemento de fitoesteroles a niveles del 0,5% y 1% suprimio notablemente estos aumentos inducidos por el consumo de un nivel alto de colesterol (figuras 11 y 12). La concentracion de colesterol-LDL en el grupo 5 fue menor, comparado con los niveles en hamstes alimentados con dietas normales que contienen colesterol (figura 12). Ademas, se produjo una asociacion de regresion negativa del colesterol total y el colesterol-LDL con el nivel de fitoesteroles aradidos en la dieta (figura 13).
El suplemento de fitoesteroles provoco un ligero aumento en HDL, pero sin que supusiese una diferencia significativa (figura 13).
Ejemplo 4: Evaluación de los efectos de las composiciones de fitoesteroles en hámsters - ensayo de 90 días
Seis grupos de 20 hamsters (10 machos, 10 hembras) se alimentaron con dietas semipurificadas que contenian grasa al 30% (proporcion de grasas poliinsaturadas/saturadas = 0,3) durante 90 dias. La dieta 1 no contenia colesterol. Las dietas 2-6 contenian colesterol dietetico al 0,25% (en p/p). Las dietas 3 y 4 contenian fitoesteroles de Forbes (con una pureza mayor que 90%) al 0,5% y al 1%, respectivamente. Las dietas fueron preparadas a partir de los ingredientes primarios cada semana. Los niveles de grasas, fitoesteroles y colesterol fueron determinados mediante una cromatografia liquida de gases. Todos los animales pudieron acceder sin restricciones al agua y a las dietas durante el periodo experimental. Los animales se pesaron cada semana. Tambien se determino la ingesta de alimento a diario y se promedio por semana pesando las cubetas de comida antes y despues de cada periodo de alimentacion de 24 h. Despues de 90 dias de alimentacion, los animales se sacrificaron utilizando halotano y se recogio sangre para los analisis del perfil de lipoproteinas. Se determinaron los niveles en la circulacion de trigliceridos y de colesterol total, colesterol-HDL y de particulas de colesterol que contienen apoB. Ademas, justo antes del sacrificio, se determinaron las tasas de sintesis y absorcion de colesterol utilizando metodos que miden la desaparicion del 14C-colesterol del intestino y la incorporacion de deuterio al colesterol tisular, respectivamente. Tambien se estudio la captacion de fitoesteroles en el intestino y otros tejidos. Ademas, se conservaron muestras del intestino y del higado para su envio a Bio-Research Laboratories de Senneville, Quebec, para los analisis histopatologicos, de carcinogenicidad y de funcion enzimatica.
Resultados
Los resultados se muestran en las figuras 14-18. Los grupos en estas figuras a menudo se indican mediante numeros, que se corresponden con los descritos en el disero experimental. Las letras sobre las barras en las graficas de barras identifican las diferencias significativas entre grupos. Cuando se indican letras, las barras que comparten la misma letra no son significativamente diferentes, mientras que las que tienen letras diferentes son diferentes a un nivel estadistico de p<0,05.
En las figuras 14-16 se muestran los datos de colesterol en la circulacion para hamsters macho y hembra que consumieron las dietas de ensayo durante 90 dias. Se observaron efectos significativos del sexo en los niveles de colesterol total en la circulacion para los animales que consumieron la dieta 2, la dieta base solo con colesterol
aradido, y la dieta 5 que contiene colesterol � fitoesteroles de soja. Las hembras, aunque no se diferencian de los machos en los niveles de colesterol en la dieta basal (grupo 1), mostraron una mayor respuesta al colesterol aradido solo, comparado con los machos. La adicion de fitoesteroles niega esta diferencia, con la excepcion del grupo 5.
Los datos del nivel de colesterol desglosados por sexos se muestran en las figuras 15 y 16. Para los machos (figura 15), la adicion de colesterol solo a la dieta basal produjo un aumento significativo en el nivel de colesterol total en la circulacion. La adicion de fitoesteroles de Forbes al 0,5% dio como resultado la aparicion de una tendencia hacia una disminucion en el nivel de colesterol; sin embargo, la adicion de fitoesteroles de Forbes al 1% indujo una reduccion estadisticamente significativa en el colesterol, hasta aproximadamente los mismos niveles que el grupo control sin colesterol aradido. Cuando se araden fitoesteroles de soja a la dieta al 0,5% o al 1% no se produce una disminucion significativa en el nivel de colesterol total en la circulacion en los machos. Para el HDL, se observa un efecto diferencial de Forbes frente a soja, en el que la alimentacion con Forbes no produce cambios en los niveles de HDL del grupo que recibe solo colesterol (grupo 2), pero la alimentacion con soja produjo una disminucion significativa en los valores de HDL en ambos niveles ensayados (grupos 5 y 6). No se produjeron diferencias significativas en las particulas de colesterol que contienen apoB, aunque aparece una tendencia hacia unos niveles menores con la alimentacion de colesterol y Forbes al 1%, comparado con los otros grupos.
Los datos para las hembras se muestran en la figura 16. Para el colesterol total y HDL se observa una influencia pronunciada de la adicion de colesterol dietetico solo. La adicion de cualquiera de las fuentes de fitoesterol al 1% produce disminuciones significativas y similares en las concentraciones de colesterol total y HDL. Los niveles de particulas que contienen apoB no se ven influidos por la dieta.
Los niveles de trigliceridos en la circulacion en hamsters que consumen las dietas de ensayo durante 90 dias se muestran en la figura 17. Se produce un aumento en los niveles de trigliceridos en la circulacion en animales hembra que reciben la dieta basal con colesterol y Forbes al 0,5%, comparado con la dieta basal sola, pero no se observan otras diferencias intergrupales en ninguno de los sexos. En los machos no se produco ningun efecto o tendencia de la dieta sobre las concentraciones de trigliceridos.
En resumen, la clasificacion de los resultados de los machos con las dietas de ensayo es la siguiente:
- Tabla 5
- Colesterol total
- LDL HDL
- Forbes al 0,5%
- 4 2 1
- Forbes al 1,0%
- 1 1 2
- Soja al 0,5%
- 2 3-4 4
- Soja al 1,0%
- 3 4-3 3
La ventaja de las composiciones Forbes (las de la presente invencion) puede observarse claramente. Ademas, se obtuvieron clasificaciones similares para la proporcion de HDL:apoB en machos (figura 18): Forbes al 0,5% 2 Forbes al 1,0% 1 Soja al 0,5% 4 Soja al 1,0% 3
Tambien se descubrio que la proporcion de HDL:LDL para las composiciones Forbes era de casi el doble que las que solo tienen β-sitosterol.
Ejemplo 5: Efectos de una composición de fitoesteroles sobre conejos
En este estudio se evaluaron dos conejos a lo largo de 43 dias con respecto a los efectos de una de las composiciones de la presente invencion (Forbes al 1% en la dieta) sobre sus perfiles de colesterol total. Los resultados son los siguientes:
Tabla 6. Perfiles de colesterol total en conejos (mg/dl) Fecha Conejo A Conejo B 14/06/95 95
215 18/06/95 129
162 26/06/95 -comienzo de la alimentacion con
Forbes al 1% 07/07/95 75 106 09/07/95 -comienzo de la alimentacion con
Forbes al 1% 18/07/95 90 112 25/07/95 82 118 01/08/95 95 119 08/08/95 76 114
Puede observarse una disminucion en el colesterol total en los conejos A y B durante las dos semanas de administracion de la composicion de fitoesteroles (Forbes al 1%). Este efecto continua incluso despues de dejar de administrar Forbes al 1%. Los efectos de las composiciones de la presente invencion sobre la disminucion del colesterol total persisten mas alla de la fase de administracion inicial.
Ejemplo 6: Efectos de la composición de fitoesteroles en ratones deficientes en Apo-E
Animales: Se adquirieron 19 ratones deficientes en Apo-E macho de 5 semanas en Jackson Laboratory, EEUU. Los animales se dividieron aleatoriamente en 2 grupos, 9 animales en el grupo control y 10 ratones en el grupo de Forbes experimental. Despues de 5 dias como periodo de adaptacion, los ratones se sangraron desde la cola hacia tubos capilares y se separo el plasma mediante la centrifugacion de la sangre. Se calcularon los lipidos plasmaticos de los ratones.
Dieta: Se adquirio pienso para ratones con bajo contenido en colesterol y grasas en Jamieson�s Pet Food Distributors Ltd., �ancouver, B.C. Se extrajeron los fitoesteroles derivados de talloil a partir de jabon de talloil utilizando el proceso descrito en la presente invencion. Se evaluo la pureza y el porcentaje de cada fitoesterol individual en la mezcla del producto final mediante una cromatografia liquida de gases. El producto final muestra hasta 95% de pureza y contiene 69% de sitosterol, 15% de campesterol y 16% de estigmastenol. El pienso para ratones se trituro hasta alcanzar un estado de polvo fino. A este polvo se le aradio colesterol al 0,15% (en p/p) (Sigma) y se mezclo bien. Se volvio a granular una porcion de esta dieta suplementada con colesterol, se seco y se utilizo para alimentar al grupo control de ratones, y otra porcion se suplemento con fitoesteroles extraidos de talloil al 2% (en p/p), se volvio a granular, y se seco y se empleo para alimentar al grupo experimental de ratones.
Ensayos bioquímicos: Se midieron los trigliceridos y el colesterol total plasmatico utilizando un kit enzimatico (Boehringer Mannheim) y se calculo el colesterol-HDL mediante un metodo de precipitacion previamente publicado utilizando polietilenglicol 6000.
Peso corporal y consumo de alimento: El peso corporal y el consumo de alimento de los ratones se midio cada semana.
Tabla 7. Media del peso corporal de los ratones (g) (solo se indican las mediciones mensuales)
Fecha Grupo de Forbes Grupo control
20/06/95 21,42 21,02
24/07/95 29,82 28,00
22/08/95 32,12 29,73
12/09/95 34,16* 30,78
* p<0,05
Tabla 8. Media del consumo semanal de alimento (g) (solo se indican las mediciones mensuales) Fecha Grupo de Forbes Grupo control 26/06-03/07/95 19,61 21,21 01/08-08/08/95 32,62* 29,20 15/08-22/08/95 29,32 27,10 05/09-12/09/95 35,56 30,25
* p<0,05 Otros descubrimientos: No se observaron efectos secundarios con respecto a las nuevas dietas. Todos los animales de ambos grupos parecian normales, con unos habitos normales, incluyendo los habitos de evacuacion. Un raton en el grupo control fue encontrado muerto el 11/07/95. Puesto que no se guardo el cuerpo del raton, no se realizo la
autopsia. Otro raton del grupo de Forbes fue encontrado deshidratado con perdida de peso corporal. El animal se sacrifico y se descubrio que la razon de su enfermedad fue una maloclusion (crecimiento excesivo de los dientes). Análisis estadísticos: Los resultados se analizaron utilizando el ensayo de la t de dos muestras suponiendo unas
varianzas iguales. Resultados Los resultados hasta este momento se resumen en las siguienes tablas. Tabla 9. Media del nivel de colesterol total plasmatico en ratones (mg/dl) Fecha Grupo de Forbes Grupo control 20/06/95 606,28 599,61 18/07/95 1027,96* 1622,56 06/09/95 1168,57* 1508,63
- *
- p<0,0001 Tabla 10. Media del nivel de trigliceridos plasmaticos en ratones (mg/dl) Fecha Grupo de Forbes Grupo control 20/06/95 110,97 120,31 18/07/95 210,17 143,71 06/09/95 224,48 152,25
Tabla 11. Media del nivel de colesterol-HDL en ratones (mg/dl)
Fecha Grupo de Forbes (9) Grupo control (7)
08/07/95 42,00* 18,29
- *
- p<0,001
A partir de los resultados puede observarse que el grupo de la composicion Forbes muestra una disminucion significativa (33%) en el colesterol total, un aumento insignificante en los trigliceridos, y un aumento significativo en el colesterol-HDL (�100%).
Ejemplo 7: Efecto de una composición de fitoesteroles sobre hámsters - ensayo de 45 días
Cincuenta hamsters GS se alojaron durante dos semanas en una instalacion de cuidados animales antes de empezar a alimentarlos con una dieta semipurificada durante 45 dias. Se dividieron en cinco grupos que se alimentaron con colesterol al 0,25%, junto con una de cuatro mezclas de esteroles vegetales: soja, talloil, sitostanol puro, y una mezcla artificial que representa a los fitoesteroles de talloil. El gurpo control recibio solo colesterol al 0,25%. Su ingesta de alimentos se controlo durante el periodo de estudio cada tres dias. Se midio su peso corporal cada semana y en el momento de la recoleccion de los tejidos. Tres dias antes de sacriricar a los hamsters GS,
estos se anestesiaron ligeramente con eter dietilico y recibieron una inyeccion intravenosa a traves de la vena yugular de 0,4 ml de Intralipid que contenia 0,18 mg de 13C-colesterol. Directamente despues de la inyeccion, los animales fueron alimentados con sonda oral con 0,6 ml de una mezcla de lipidos (aceites de coco, oliva y cartamo) que contenia 0,44 mg de 18)-colesterol. Despues, los hamsters GS se mantuvieron en sus jaulas de alambre durante 72 horas, y se les suministro agua y alimento sin limite.
En el dia del sacrificio, cada hamster GS recibio una inyeccion intraperitoneal de 1 ml de agua deuterada y se dejo que pasara una hora antes del sacrificio. Los animales se anestesiaron con eter dietilico y se recogieron muestras de sangre mediante cardiopuncion. Se recogio el higado, la vesicula biliar, el intestino delgado, el intestino grueso, y el corazon, se congelaron en nitrogeno liquido y se conservaron en la nevera a -80 DC. Sus cadaveres y heces se conservaron a -20 DC para el posterior analisis de esteroles y lipidos totales.
Mediciones del peso del higado, corporal y de la ingesta de alimentos
Se midio la ingesta de alimentos de los hamsters GS cada tres dias. El analisis estadistico no mostro una diferencia significativa entre los cinco grupos en su consumo de alimentos. La media de la ingesta diara en los cinco grupos varia de 8,84 a 9,34 g diarios, valor de p = 0,4. Los animales mostraron un significativo aumento en su peso corporal de aproximadamente 25 a 40 g durante el periodo de estudio, valor de p < 0,05 (ensayo de la t apareado). Las mediciones finales de su peso corporal variaron de 112,5 a 154,3 g. No se observo significancia estadistica entre los diferentes grupos de tratamiento, valor de p = 0,43.
El peso del higado vario significativamente entre las diferentes divisiones. El grupo tratado con sitostanol mostro el peso del higado menor, comparado con el grupo control y otros grupos alimentados con colesterol al 0,25% y diferentes fitoesteroles, respectivamente. Ademas, el grupo tratado con soja presento una diferencia significativa similar con el tratado con sitostanol cuando los datos se analizan estadisticamente utilizando el ensayo de Ne�man-Keuls. En general, todos los grupos que se alimentaron con esteroles vegetales mostraron un peso del higado menor, comparado con el control alimentado con colesterol al 0,25%, valor de p = 0,01. Los hamsters GS alimentados con esteroles de talloil y sitostanol presentaron un peso medio del higado del 15% y 20% menor que el del control, respectivamente. El talloil natural y el talloil preparado de modo artificial mostraron unos valores similares de los pesos del higado, lo cual sugiere que el compuesto que falta en los esteroles de soja, el sitostanol, desempera un papel principal en la disminucion del contenido en esterol del higado.
Analisis de los lipidos
I. Colesterol total
Se determinaron los valores de colesterol total utilizando kits de reactivos enzimaticos comerciales en un analizador automatico �P. Las muestras de sangre se midieron dos veces, y se empleo la media de los dos valores en el analisis estadistico final. Se emplearon metodos de ANO�A de una via, con Ne�man-Keuls, y Bonferroni para los diferentes analisis de lipidos. El sitostanol disminuye significativamente el nivel de colesterol total en el plasma de hamsters GS en 34%, comparado con el control. El valor medio para el grupo control fue de 226,9 mg/dl, y el del grupo tratado con sitostanol fue de 151,2 mg/dl, valor de p = 0,007. Los fitoesteroles de talloil y las mezclas de talloil artificial mostraron una disminucion similar en el colesterol plasmatico (17,5%), 118,4 mg/dl y 186,1 mg/dl, respectivamente. Sin embargo, los fitoesteroles de talloli (Forbes) mostraron una disminucion significativa en el valor de colesterol total (175,2 mg/ld) cuando una valor de la muestra fuera de escala se excluye del analisis, valor de p < 0,02 en el grupo de talloil, comparado con el grupo control (solo colesterol al 0,25%). La correlacion entre la presencia de sitostanol y el menor nivel plasmatico es significativo, valor de p < 0,0001, y r = 0,46.
II. Colesterol-HDL
La porcion de apoA de las lipoproteinas presentes en el colesterol-HDL no mostro cambios significativos en sus valores entre los cinco grupos diferentes, valor de p = 0,18. Se observo una disminucion no significativa del 15% en la media del valor de HDL en el grupo tratado con sitostanol. No obstante, este elemento no afecta a la disminucion significativa en el colesterol total, que es del 34%. La proporcion de lipoproteinas no-apoA a lipoproteinas apoA (HDL) no varia significativamente entre los grupos. El efecto confuso de los menores valores de HDL no significativos en los grupos de sitostanol y de talloil contribuye a crear un resultado no significativo en los valores de no-apoA/apoA (HDL). En general, los diferentes tipos de fitoesteroles no varian el nivel de colesterol-HDL en el plasma de hamsters GS.
III. LDL y/o esteroles no-apoA
El sitostanol es eficaz para disminuir los esteroles no-apoA en el plasma. Se demuestra una disminucion del 55% en las lipoproteinas no-apoA, valor de p = 0,02. De forma similar a su efecto sobre el colesterol total, el talloil y la mezcla de talloil artificial disminuyen los esteroles no-apoA en 21%, respectivamente, lo cual sugiere de nuevo que existe una fuerte correlacion entre el contenido en sitostanol en los fitoesteroles y sus efectos beneficiosos para disminuir los niveles de colesterol en el plasma de hamsters GS. Sin embargo, esta disminucion no es estadisticamente significativa debido a la variabilidad en los valores de los trigliceridos.
I�. Trigliceridos
Cuando se aplica el metodo de ANO�A de una via a los valores de TG, estos no aprueban el ensayo de la normalidad. Los hamsters GS se sacrificaron en una condicion de no ayuno (un estado importante para los futuros analisis de sintesis de colesterol, cinetica, y absorcion). Debido a esta situacion, los diferentes valores estaban fuera
5 de la escala. Con ANO�A y los rangos, los niveles de TG no mostraron una diferencia estadistica entre los grupos. Los esteroles vegetales no afectaron a los niveles de TG plasmaticos en los hamsters GS.
Tabla 12. Rango de potencia
Colesterol total HDL LDL TG
Control C C C C
β-sitostanol de soja 4 1 3-4 1-4
Talloil (Forbes) 2-3 2-2 2-3 1-4
Sigmastanol 1 4 1 1-4
Talloil artificial 3-2 3-2 4-3-2 1-4
En conclusion, la composicion derivada de jabon de talloil de la presente invencion muestra el perfil mas favorable
10 debido al aumento en el colesterol-HDL y la disminucion en el colesterol total. Este efecto de HDL no se observa en la composicion de talloil artificial. De modo similar, el efecto global del sitostanol no es favorable debido a la significativa disminucion en HDL.
Aunque no esta completamente claro, parece que, con respecto a los esteroles vegetales, los esteroles relativamente hidrofobos inhiben mas la absorcion del colesterol total, mientras que los esteroles relativamente
15 hidrofilos influyen mas sobre el nivel de HDL. Las composiciones de fitoesteroles de la presente invencion son exclusivas porque conservan ambos efectos.
Claims (5)
- REIVINDICACIONES1.- Una composicion, que es un suplemento alimentario o una formulacion de vitaminas, que comprende una composicion de fitoesteroles que comprende una cantidad eficaz para disminuir el LDL de estigmastanol, campesterol y β-sitosterol, en la que la proporcion de beta-sitosterol es de 1,0, la proporcion de campesterol es de5 entre 0,2 y 0,4, y la proporcion de estigmastanol es de entre 0,2 y 0,5.
- 2.- La composicion de la reivindicacion 1, que es un suplemento alimentario.
- 3.- La composicion de la reivindicacion 1, que es una formulacion de vitaminas.
- 4.- La composicion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la proporcion de beta-sitosterol es de 1,0, la proporcion de campesterol es de 0,354, y la proporcion de estigmastanol es de 0,414.10 5.- La composicion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la proporcion de beta-sitosterol es de 1,0, la proporcion de campesterol es de 0,330, y la proporcion de estigmastanol es de 0,203.
- 6.- La composicion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la proporcion de beta-sitosterol es de 1,0, la proporcion de campesterol es de 0,268 , y la proporcion de estigmastanol es de 0,299.FIG. 4
- FORBES-2
- Índice
- Tiempo min. Área, V*5 Área, % Línea de base, V Altura, V Verdadero, %
- 73
- 34,65 0,039 0,051 0,016 0,005 0,890674
- 74
- 35,267 0,029 0,037 0,016 0,004 0,646175
- 75
- 36,629 0,087 0,114 0,017 0,007 1,990919
- 76
- 36,808 0,004 0,005 0,019 0,001 0,087321
- 77
- 37,054 0,093 0,121 0,017 0,011 2,113168
- 78
- 37,354 0,16 0,208 0,017 0,014 3,632553
- 79
- 37,492 0,018 0,024 0,022 0,003 0,419141
- 80
- 37,879 0,094 0,123 0,017 0,01 2,148096
- 81
- 38,688 0,615 0,798 0,017 0,057 13,93643
- 82
- 39,675 0,24 0,311 0,017 0,017 5,431366
- 83
- 39,908 0,021 0,027 0,021 0,003 0,471533
- 84
- 40,208 0,377 0,49 0,017 0,039 8,557457
- 85
- 40,675 0,269 0,35 0,017 0,02 6,112469
- 86
- 41,154 0,33 0,428 0,017 0,03 7,474677
- 87
- 42,229 1,862 2,416 0,017 0,124 42,1935
- 88
- 42,625 0,088 0,114 0,017 0,005 1,990919
- 89
- 43,646 0,039 0,05 0,017 0,004 0,87321
- 90
- 46,742 0,045 0,059 0,017 0,004 1,030388
FIG. 7- Índice
- Tiempo min. Área, V*5 Área, % Línea de base, V Altura, V
- 1
- 4,012 0,078 3,224 0,011 0,033
- 2
- 4,486 0,161 6,649 0,011 0,017
- 3
- 4,775 0,007 0,269 0,018 0,004
- 4
- 32,117 0,05 2,077 0,009 0,011
- 5
- 32,433 0,083 3,858 0,009 0,009
- 6
- 40,217 0,347 14,328 0,01 0,041
- 7
- 41,879 0,389 16,084 0,01 0,038
- 8
- 44,058 1,297 53,532 0,01 0,074
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US31494594A | 1994-09-29 | 1994-09-29 | |
| US314945 | 1994-09-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2464465T3 true ES2464465T3 (es) | 2014-06-02 |
Family
ID=23222178
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05011507.0T Expired - Lifetime ES2464465T3 (es) | 1994-09-29 | 1995-09-29 | Composiciones de esteroles a partir de jabón de pulpa |
| ES95932593T Expired - Lifetime ES2173966T5 (es) | 1994-09-29 | 1995-09-29 | Composiciones de esteroles a partir de jabon formado de la trituracion de pasta papelera. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES95932593T Expired - Lifetime ES2173966T5 (es) | 1994-09-29 | 1995-09-29 | Composiciones de esteroles a partir de jabon formado de la trituracion de pasta papelera. |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5770749A (es) |
| EP (3) | EP0783514B2 (es) |
| JP (1) | JPH10506394A (es) |
| CN (1) | CN1057768C (es) |
| AT (1) | ATE216395T1 (es) |
| AU (1) | AU3559795A (es) |
| BG (1) | BG64054B1 (es) |
| BR (1) | BR9509119A (es) |
| CA (1) | CA2201328A1 (es) |
| CZ (1) | CZ298622B6 (es) |
| DE (1) | DE69526442T3 (es) |
| DK (2) | DK0783514T4 (es) |
| EE (1) | EE9700073A (es) |
| ES (2) | ES2464465T3 (es) |
| GE (1) | GEP20022657B (es) |
| HU (1) | HUT77522A (es) |
| LT (1) | LT4305B (es) |
| LV (1) | LV11900B (es) |
| MD (1) | MD1721C2 (es) |
| MX (1) | MX9702308A (es) |
| NO (2) | NO310293B1 (es) |
| NZ (1) | NZ293210A (es) |
| PL (1) | PL186441B1 (es) |
| PT (1) | PT783514E (es) |
| RU (1) | RU2165431C2 (es) |
| SK (1) | SK284250B6 (es) |
| TJ (1) | TJ302B (es) |
| WO (1) | WO1996010033A1 (es) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5965449A (en) * | 1996-07-03 | 1999-10-12 | Forbes Medi-Tech, Inc. | Method of assessing risk for cardiovascular disease and other disorders and phytosterol-based compositions useful in preventing and treating cardiovascular disease and other disorders |
| US6139872A (en) * | 1996-08-14 | 2000-10-31 | Henkel Corporation | Method of producing a vitamin product |
| US5985936A (en) * | 1997-12-18 | 1999-11-16 | Forbes Medi-Tech, Inc. | Method of preventing and delaying onset of Alzheimer's disease and composition therefor |
| US5952393A (en) * | 1998-02-12 | 1999-09-14 | Sorkin, Jr.; Harlan Lee | Composition for reducing serum cholesterol levels |
| US6110502A (en) * | 1998-02-19 | 2000-08-29 | Mcneil-Ppc, Inc. | Method for producing water dispersible sterol formulations |
| JP2002517418A (ja) * | 1998-06-05 | 2002-06-18 | フォーブス メディ−テック インコーポレーテッド | 高められた溶解性および分散性を有するフィトステロールおよび／またはフィトスタノ−ルよりなる組成物 |
| AU4891699A (en) | 1998-07-20 | 2000-02-14 | Forbes Medi-Tech Inc. | Compositions comprising phytosterol, phytostanol or mixtures of both and omega-3fatty acids or derivatives thereof and use of the composition in treating or preventing cardiovascular disease and other disorders |
| US6242001B1 (en) | 1998-11-30 | 2001-06-05 | Mcneil-Ppc, Inc. | Method for producing dispersible sterol and stanol compounds |
| DE19916034C1 (de) * | 1999-04-09 | 2000-08-03 | Cognis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Gewinnung von Phytosterinen |
| NZ515155A (en) * | 1999-04-27 | 2003-06-30 | Sterol Technologies Ltd | Extraction and isolation method for extracting unsaponifiable neutral substances from soaps |
| DE60039232D1 (de) * | 1999-04-27 | 2008-07-31 | Forbes Medi Tech Inc | Verfahren zur Herstellung einer Phytosterolzusammensetzung |
| US6770767B1 (en) * | 1999-04-27 | 2004-08-03 | Sterol Techologies Ltd. | Method for the extraction and isolation of neutral substances from a soap |
| FI991533L (fi) * | 1999-07-05 | 2001-01-06 | Sohkar Oy | Menetelmä orgaanisten aineiden käsittelemiseksi |
| US6998501B1 (en) | 1999-08-30 | 2006-02-14 | Ocean Nutrition Canada Limited | Nutritional supplement for lowering serum triglyceride and cholesterol levels |
| AU6813700A (en) * | 1999-08-30 | 2001-03-26 | Ocean Nutrition Canada Ltd. | A nutritional supplement for lowering serum triglyceride and cholesterol levels |
| US6197832B1 (en) | 1999-09-14 | 2001-03-06 | Harlan Lee Sorkin, Jr. | Composition for reducing serum cholesterol levels |
| US6355274B1 (en) | 1999-12-15 | 2002-03-12 | Mcneil-Ppc, Inc. | Encapsulated long chain alcohols |
| US7232574B1 (en) | 1999-12-15 | 2007-06-19 | Mcneil-Ppc, Inc. | Long chain alcohols provided in edible oils |
| NZ519268A (en) * | 1999-12-15 | 2004-12-24 | Mcneil Ppc Inc | Cholesterol lowering comestibles comprising policosanol (predominately octasanol) and sterol |
| BR0001794A (pt) * | 2000-05-15 | 2001-12-26 | Laboratorios Biosintetica Ltda | Aplicação de fitosteróides (e seus isÈmeros), ácidofólico, cianocobalamina e piridoxina em fibrasdietéticas (alimentares) |
| US7147859B2 (en) * | 2000-05-15 | 2006-12-12 | Laboratorios Biosintetica Ltda. | Application of phytosterols (and their isomers), folic acid, cyanocobalamin and pyridoxin in dietetic (alimentary) fibers |
| WO2003009854A1 (en) * | 2001-07-20 | 2003-02-06 | Lonza Ag | Lipid lowering composition comprising carnitine and phytosterol |
| AU2003218547B2 (en) * | 2002-03-14 | 2007-11-01 | Forbes Medi-Tech Inc. | A method of treating diabetes mellitus including conditions associated with diabetes mellitus and complications of diabetes mellitus |
| US7368138B2 (en) * | 2002-03-21 | 2008-05-06 | Archer-Daniels-Midland Company | Extraction of phytosterols from corn fiber using green solvents |
| CA2433246A1 (en) * | 2003-06-25 | 2004-12-25 | Telum Technologies Inc. | Process for recovering value-added products from pulping soap |
| US8309156B2 (en) * | 2005-12-20 | 2012-11-13 | Pharmachem Laboratories, Inc. | Compositions comprising one or more phytosterols and/or phytostanols, or derivatives thereof, and high HLB emulsifiers |
| WO2007071036A1 (en) * | 2005-12-20 | 2007-06-28 | Forbes Medi-Tech Inc. | Emulsions comprising non-esterified phytosterols in the aqueous phase |
| EP2020874A4 (en) * | 2006-05-01 | 2015-07-15 | Pharmachem Lab Inc | COMPOSITION COMPRISING ONE OR MORE EXTRACTED PHYTOSTEROLS AND / OR PHYTOSTANOLES IN WHICH ONE OR MORE NON-SELECTED PHYTOSTEROLS AND / OR PHYTOSTANOLES ARE SOLUBILIZED TO OBTAIN THERAPEUTIC ADVANTAGES AND FORMULATION BENEFITS |
| US20070254026A1 (en) * | 2006-05-01 | 2007-11-01 | Forbes Medi-Tech Inc. | Softgel capsules |
| EP2036445A1 (en) * | 2007-09-05 | 2009-03-18 | Dietetics Pharma S.r.l. | Nutraceutic preparation in powder form containing free plant sterols |
| US20110207952A1 (en) * | 2010-02-22 | 2011-08-25 | Rafael Avila | Cholesterol extraction from algae and preparation of vegan vitamin d3 |
| EA024619B1 (ru) * | 2014-11-21 | 2016-10-31 | Эльвин Гаджи оглы Керимли | ФРАКСИНОСТЕРИН - 24β-ЭТИЛХОЛЕСТА-20-КАРБОКСИ-6(7),8(9)-ДИЕН 3β-ОЛА И ЕГО ПРОИЗВОДНОЕ |
| SE540791C2 (en) | 2016-01-29 | 2018-11-13 | Stora Enso Oyj | Extraction of phytosterols |
| WO2017137908A1 (en) | 2016-02-12 | 2017-08-17 | Stora Enso Oyj | Distillation of neutral compounds from tall oil soap |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2573891A (en) * | 1950-05-09 | 1951-11-06 | Pittsburgh Plate Glass Co | Recovery of sterols |
| US2715638A (en) * | 1953-07-28 | 1955-08-16 | American Cyanamid Co | Production of sterols from tall oil pitch |
| US2835682A (en) * | 1955-08-08 | 1958-05-20 | Swift & Co | Sterol recovery process |
| US3840570A (en) * | 1970-12-07 | 1974-10-08 | Procter & Gamble | Process for preparing sterols from tall oil pitch |
| SE417107B (sv) * | 1973-06-29 | 1981-02-23 | Bjarne Holmbom | Forfarande for foredling av sapor |
| US4044031A (en) * | 1976-07-02 | 1977-08-23 | Ake Allan Johansson | Process for the separation of sterols |
| US4208286A (en) † | 1977-11-03 | 1980-06-17 | Kauppi Pekka K | Sulphate soap skimming apparatus |
| US4153622A (en) * | 1978-05-18 | 1979-05-08 | Medipolar Oy | Process for the recovery of β-sitosterol |
| FI58333C (fi) * | 1978-10-27 | 1981-01-12 | Kaukas Ab Oy | Foerfarande foer framstaellning av under 5 vikt-% alfa2-sitosterol innehaollande beta-sitosterolkoncentrat |
| FI57956C (fi) * | 1978-12-12 | 1980-11-10 | Farmos Oy | Foerfarande foer isolering av beta-sitosterol med laog alfa-sitosterolhalt |
| FI59416C (fi) * | 1979-11-19 | 1981-08-10 | Farmos Oy | Foerfarande foer utvinning av beta-sitosterol ur en sterolblandning utvunnen fraon raosaopans neutralfraktion |
| FI63423C (fi) * | 1981-01-27 | 1983-06-10 | Farmos Oy | Foerfarande foer separering av beta-sitosterol fraon en sterolblandning utvunnen ur raosaopans neutralfraktion |
| JPS57206336A (en) * | 1981-06-12 | 1982-12-17 | Ajinomoto Co Inc | Edible oil |
| FI65440C (fi) * | 1981-07-21 | 1984-05-10 | Kaukas Ab Oy | Foerfarande foer separering av beta-sitosterol med en laog alfa-sitosterolhalt |
| FI812279L (fi) * | 1981-07-21 | 1983-01-22 | Kaukas Ab Oy | Foerfarande foer rening av -sitosterol isolerad fraon neutralaemnet av sulfatcellulosaprocessens raosaopa |
| JPS58116415A (ja) * | 1981-12-28 | 1983-07-11 | Riyoushiyoku Kenkyukai | コレステロ−ル低下剤の使用方法 |
| JPS6479119A (en) * | 1987-09-22 | 1989-03-24 | Daiichi Seiyaku Co | Drug of blended two components |
| FR2653974B1 (fr) * | 1989-11-03 | 1992-12-31 | Expanchimie Sarl | Additif alimentaire constitue d'extraits de soja et/ou d'avocat. |
| CA2028759A1 (en) † | 1989-11-22 | 1991-05-23 | Jean-Marie Cassal | Steroids |
| HK1001951A1 (en) * | 1991-05-03 | 1998-07-24 | Raisio Benecol Ltd. | A substance for lowering high cholesterol level in serum and a method for preparing the same |
| US5286845A (en) † | 1992-05-20 | 1994-02-15 | Union Camp Corporation | Acidification of tall oil soap using carbon dioxide |
-
1995
- 1995-09-29 ES ES05011507.0T patent/ES2464465T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 AU AU35597/95A patent/AU3559795A/en not_active Abandoned
- 1995-09-29 EP EP95932593A patent/EP0783514B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 EP EP05011507.0A patent/EP1707572B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 CZ CZ0092797A patent/CZ298622B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 CN CN95196307A patent/CN1057768C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-29 MD MD97-0178A patent/MD1721C2/ro unknown
- 1995-09-29 EP EP01118776A patent/EP1148062A3/en not_active Withdrawn
- 1995-09-29 DK DK95932593T patent/DK0783514T4/da active
- 1995-09-29 AT AT95932593T patent/ATE216395T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 ES ES95932593T patent/ES2173966T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 HU HU9702031A patent/HUT77522A/hu unknown
- 1995-09-29 NZ NZ293210A patent/NZ293210A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 TJ TJ97000458A patent/TJ302B/xx unknown
- 1995-09-29 SK SK415-97A patent/SK284250B6/sk unknown
- 1995-09-29 WO PCT/CA1995/000555 patent/WO1996010033A1/en not_active Ceased
- 1995-09-29 JP JP8511228A patent/JPH10506394A/ja not_active Ceased
- 1995-09-29 PL PL95319384A patent/PL186441B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 DE DE69526442T patent/DE69526442T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 PT PT95932593T patent/PT783514E/pt unknown
- 1995-09-29 CA CA002201328A patent/CA2201328A1/en not_active Abandoned
- 1995-09-29 BR BR9509119A patent/BR9509119A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 RU RU97107020/04A patent/RU2165431C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-09-29 MX MX9702308A patent/MX9702308A/es unknown
- 1995-09-29 EE EE9700073A patent/EE9700073A/xx unknown
- 1995-09-29 GE GEAP19953712A patent/GEP20022657B/en unknown
- 1995-09-29 DK DK05011507.0T patent/DK1707572T3/da active
-
1996
- 1996-08-30 US US08/706,354 patent/US5770749A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-03-20 NO NO19971304A patent/NO310293B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-03-25 BG BG101354A patent/BG64054B1/bg unknown
- 1997-04-23 LT LT97-074A patent/LT4305B/lt not_active IP Right Cessation
- 1997-04-28 LV LVP-97-78A patent/LV11900B/en unknown
-
2001
- 2001-03-01 NO NO20011062A patent/NO322293B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2464465T3 (es) | Composiciones de esteroles a partir de jabón de pulpa | |
| KR950013949B1 (ko) | 오메가-3 지방산이 풍부한 계란의 제조방법 | |
| Kritchevsky et al. | Phytosterols—health benefits and potential concerns: a review | |
| US5952393A (en) | Composition for reducing serum cholesterol levels | |
| US6197832B1 (en) | Composition for reducing serum cholesterol levels | |
| US7214394B2 (en) | Policosanol compositions, extraction from novel sources, and uses thereof | |
| Daksha et al. | Estimation of sterols content in edible oil and ghee samples | |
| HUP9904042A2 (hu) | A kardiovaszkuláris betegség és egyéb rendellenességek kockázatának becslésére alkalmas eljárás, valamint a kardiovaszkuláris betegség és egyéb rendellenességek kezelésére alkalmas, fitoszterolalapú készítmények | |
| Lee et al. | Grain sorghum whole kernel oil lowers plasma and liver cholesterol in male hamsters with minimal wax involvement | |
| BRPI0513461A2 (pt) | mÉtodos de tratamento requerendo fito-ingredientes | |
| Kawamoto et al. | Effects of boiling on the antihypertensive and antioxidant activities of onion | |
| Begum | A textbook of foods, Nutrition & Dietetics | |
| CA2531312A1 (en) | Food product comprising phytosterols | |
| AU5939399A (en) | Sterol compositions from pulping soap | |
| KR970011073B1 (ko) | 들깨유를 주원료로 한 성인병 억제용 캡슐 조성물 | |
| WO2026060283A1 (en) | Lipid emulsions for parenteral nutrition | |
| AU2007200897A1 (en) | Sterol compositions from pulping soap | |
| Addnan | Effect of Polyphenol Extract from Malaysian Cocoa Powder on Plasma Lipid in Induced Rabbit Hypercholesterolemia Model |