ES2472720T3

ES2472720T3 - Compuestos heteroc�clicos y su uso como inhibidores de actividad PI3K

Info

Publication number: ES2472720T3
Application number: ES11730844.5T
Authority: ES
Inventors: Brian Lucas
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2010-07-01
Filing date: 2011-06-30
Publication date: 2014-07-02
Anticipated expiration: 2031-06-30
Also published as: CA2803259A1; EP2588468A1; JP2013530236A; AU2011271460A1; WO2012003262A1; MX2012014996A; AU2011271460B2; US8759371B2; US20130085151A1; EP2588468B1

Abstract

Compuesto que tiene la estructura:**Fórmula** o cualquier sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X1 es C(R10) o N; X2 es C(R6) o N; X3 es C(R7) o N; X4 es C(R10) o N; Y es N(R8), CRaRa, S u O; R1 se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(>=O)Ra, -C(>=O)ORa, -C(>=O)NRaRa, -C(>=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(>=O)Ra, -OC(>=O)NRaRa, -OC(>=O)N(Ra)S(>=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6- ORa, -SRa,-S(>=O)Ra, -S(>=O)2Ra, -S(>=O)2NRaRa, -S(>=O)2N(Ra)C(>=O)Ra, -S(>=O)2N(Ra)C(>=O)ORa, -S(>=O)2N(Ra)C(>=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(>=O)Ra, -N(Ra)C(>=O)ORa, -N(Ra)C(>=O)NRaRa, -N(Ra)C(>=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(>=O)2Ra, -N(Ra)S(>=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa, -NRa-alk C2-6-ORa, -NRaalk C2-6-CO2Ra, -NRa-alk C2-6-SO2Rb, -CH2 C(>=O)Ra, -CH2C(>=O)ORa, -CH2C(>=O)NRaRa, -CH2C(>=NRa)NRaRa, -CH2ORa, -CH2OC(>=O)Ra, -CH2OC(>=O)NRaRa, -CH2OC(>=O)N(Ra)S(>=O)2Ra, -CH2O-alk C2-6-NRaRa, -CH2O-alk C2-6-ORa, -CH2SRa, -CH2S(>=O)Ra, -CH2S(>=O)2Rb, -CH2S(>=O)2NRaRa, -CH2S(>=O)2N(Ra)C(>=O)Ra, -CH2S(>=O)2N(Ra)C(>=O)ORa, -CH2S(>=O)2N(Ra)C (>=O)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N(Ra)C(>=O)Ra, -CH2N(Ra)C(>=O)ORa, -CH2N(Ra) C(>=O)NRaRa, -CH2N(Ra)C(>=NRa)NRaRa, -CH2N(Ra)S(>=O)2Ra, -CH2N(Ra)S(>=O)2 NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-ORa, -CH2NRa-alk C2-6-CO2Ra y -CH2NRa-alk C2-6-SO2Rb; o R1 es un anillo monocíclico de 3, 4, 5, 6 ó 7 miembros o bicíclico de 8, 9, 10 u 11 miembros unido directamente, con unión a alk C1-4, con unión a O-alk C1-2, con unión a alk C1-2-O, con unión a N(Ra) o con unión a O saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un átomo de O o S, sustituido con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, - C(>=O)Ra, -C(>=O)ORa, -C(>=O)NRaRa, -C(>=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(>=O)Ra, -OC(>=O)NRaRa, - OC(>=O)N(Ra)S(>=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(>=O)Ra, -S(>=O)2Ra, -S(>=O)2NRaRa, - S(>=O)2N(Ra)C(>=O)Ra, -S(>=O)2N(Ra)C(>=O)ORa, -S(>=O)2N(Ra)C(>=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(>=O)Ra, - N(Ra)C(>=O)OR', -N(Ra)C(>=O)NRaRa, -N(Ra)C(>=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(>=O)2Ra, -N(Ra)S(>=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos adicionalmente con 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, y en el que el anillo está sustituido adicionalmente con 0 ó 1 grupo unido directamente, con unión a SO2, con unión a C(>=O) o con unión a CH2 seleccionado de fenilo, piridilo, pirimidilo, morfolino, piperazinilo, piperadinilo, pirrolidinilo, ciclopentilo, ciclohexilo todos los cuales están sustituidos además con 0, 1, 2 ó 3 grupos seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, - C(>=O)Ra, -C(>=O)ORa; -C(>=O)NRaRa, -C(>=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(>=O)R', -SRa, -S(>=O)Ra, -S(>=O)2Ra, - S(>=O)2NRaRa, -NRaRa, y -N(Ra)C(>=O)Ra;

Description

Compuestos heteroc�clicos y su uso como inhibidores de actividad PI3K

Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional estadounidense n.� 61/360.743, presentada el 1 de julio de 2010.

La presente invención se refiere, en general, a enzimas fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) y, más particularmente, a inhibidores selectivos de la actividad PI3K y a métodos de uso de tales materiales.

Antecedentes de la invención

La se�alizaci�n celular mediante fosfoinos�tidos fosforilados en 3’ ha estado implicada en una variedad de procesos celulares, por ejemplo, transformación maligna, se�alizaci�n por factores de crecimiento, inflamación e inmunidad (véase Rameh et al., J. Biol Chem, 274:8347-8350 (1999) para una revisión). La enzima responsable de generar estos productos de se�alizaci�n fosforilados, fosfatidilinositol 3-cinasa (PI 3-cinasa; PI3K), se identificó originariamente como una actividad asociada con oncoprote�nas virales y tirosina cinasas receptoras de factores de crecimiento que fosforila fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el hidroxilo en 3’ del anillo de inositol (Panayotou et al., Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)).

Los niveles de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3), el producto primario de la actividad de PI 3-cinasa, aumentan tras el tratamiento de células con una variedad de estímulos. Esto incluye se�alizaci�n a través de receptores para la mayoría de factores de crecimiento y muchos estímulos inflamatorios, hormonas, neurotransmisores y ant�genos, y por tanto la activación de PI3K representa un evento, si no el más prevalente, de transducci�n de señales asociado con la activación de receptores de la superficie celular de mamíferos (Cantley, Science 296:1655-1657 (2002); Vanhaesebroeck et al. Annu. Rev. Biochem, 70: 535-602 (2001)). Por tanto, la activación de PI 3-cinasa est� implicada en una amplia gama de respuestas celulares incluyendo crecimiento, migración, diferenciación y apoptosis celular (Parker et al., Current Biology, 5:577-99 (1995); Yao et al., Science, 267:2003-05 (1995)). Aunque no se han caracterizado completamente las dianas posteriores de lípidos fosforilados generados tras la activación de PI 3cinasa, se sabe que las proteínas que contienen dominios de homología de Pleckstrin (PH) y dominios de tipo dedo FYVE se activan cuando se unen a diversos lípidos de fosfatidilinositol (Stemmark et al., J Cell Sci, 112:4175-83 (1999); .Lemmon et al., Trends Cell Biol, 7:237-42 (1997)). Se han estudiado dos grupos de efectores de PI3K que contienen dominios PH en el contexto de la se�alizaci�n de células inmunitarias, miembros de la familia de las tirosina cinasas TEC y las serina/treonina cinasas de la familia AGC. Los miembros de la familia Tec que contienen dominios PH con selectividad aparente por PtdIns (3,4,5)P3 incluyen Tec, Btk, Itk y Etk. La unión de PH a PIP3 es crítica para la actividad tirosina cinasa de los miembros de la familia Tec (Schaeffer y Schwartzberg, Curr. Opin. Immunol. 12: 282-288 (2000)). Los miembros de la familia AGC que est�n regulados por PI3K incluyen la cinasa dependiente de fosfoinos�tidos (PDK1), AKT (también denominada PKB) y determinadas isoformas de proteína cinasa C (PKC) y cinasa S6. Existen tres isoformas de AKT y la activación de AKT est� fuertemente asociada con señales de supervivencia y proliferaci�n dependientes de PI3K. La activación de AKT depende la fosforilaci�n por PDK1, que también tiene un dominio PH selectivo para 3-fosfoinos�tido para su reclutamiento en la membrana donde interacciona con AKT. Otros sustratos de PDK1 importantes son PKC y cinasa S6 (Deane y Fruman, Annu. Rev. Immunol. 22563-598 (2004)). In vitro, algunas isoformas de proteína cinasa C (PKC) se activan directamente por PIP3. (Burgering et al., Nature, 376:599-602 (1995)).

En la actualidad, la familia de enzimas PI 3-cinasas se ha dividido en tres clases basándose en sus especificidades de sustrato. Las PI3K de clase I pueden fosforilar fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato y fosfatidilinositol4,5-bifosfato (PIP2) para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato y fosfatidilinositol3,4,5-trifosfato, respectivamente. Las PI3K de clase II fosforilan PI y fosfatidilinositol-4-fosfato, mientras que las PI3K de clase III sólo pueden fosforilar PI.

La purificación inicial y la clonaci�n molecular de PI 3-cinasa revel� que era un heterod�mero que consiste en las subunidades p85 y p110 (Otsu et al., Cell, 65:91-104 (1991); Hiles et al., Cell, 70:419-29 (1992)). Desde entonces, se han identificado cuatro PI3K de clase I distintas, designadas como PI3K !, ∀, # y ∃, consistiendo cada una en una subunidad catalítica de 110 kDa diferenciada y una subunidad reguladora. Más específicamente, tres de las subunidades catalíticas, es decir, p110!, p110∀ y p110#, interaccionan cada una con la misma subunidad reguladora, p85; mientras que p110∃ interacciona con una subunidad reguladora distinta, p101. Tal como se describe a continuación, los patrones de expresión de cada una de estas PI3K en células y tejidos humanos también son distintos. Aunque se ha acumulado una gran cantidad de información en los últimos tiempos sobre las funciones celulares de PI 3-cinasas en general, no se entienden completamente los papeles desempeñados por las isoformas individuales.

Se ha descrito la clonaci�n de p110! bovina. Se identificó esta proteína como relacionada con la proteína de Saccharomyces cerevisiae: Vps34p, una proteína implicada en el procesamiento vacuolar de proteínas. También se mostr� que el producto de p110! recombinante estaba asociado con p85!, para producir una actividad PI3K en

c�lulas COS-1 transfectadas. Véase Hiles et al., Cell, 70, 419-29 (1992).

La clonaci�n de una segunda isoforma de p110 humana, designada como p110∀, se describe en Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993). Se dice que esta isoforma se asocia con p85 en células, y se expresa de manera ubicua, ya que se ha encontrado ARNm de p110∀ en numerosos tejidos humanos y de ratón as� como en células endoteliales de vena umbilical humana, células T de leucemia humana Jurkat, células de ri��n embrionario humano 293, fibroblastos 3T3 de ratón, células HeLa y células de carcinoma de vejiga de rata NBT2. Tal amplia expresión sugiere que esta isoforma es muy importante en rutas de se�alizaci�n.

La identificación de la isoforma p110# de PI 3-cinasa se describe en Chantry et al., J Biol Chem, 272:19236-41 (1997). Se observ� que la isoforma p110# humana se expresa de modo restringido de tejido. Se expresa a altos niveles en linfocitos y tejidos linfoides y se ha mostrado que desempeña un papel clave en la se�alizaci�n mediada por PI 3-cinasa en el sistema inmunitario (Al-Alwan et al. JI 178: 2328-2335 (2007); Okkenhaug et al JI, 177: 51225128 (2006); Lee et al. PNAS, 103: 1289-1294 (2006)). También se ha mostrado que P110# se expresa a menores niveles en células de mama, melanocitos y células endoteliales (Vogt et al. Virology, 344: 131-138 (2006) y por ello ha estado implicada en conferir propiedades migratorias selectivas a células de cáncer de mama (Sawyer et al. Cancer Res. 63:1667-1675 (2003)). También pueden encontrarse detalles referentes a la isoforma P110# en las patentes estadounidenses n.os 5.858.753; 5.822.910; y 5.985.589. Véanse también, Vanhaesebroeck et al., Proc Nat. Acad Sci USA, 94:4330-5 (1997), y la publicación internacional WO 97/46688.

En cada uno de los subtipos de PI3K!, ∀, y #, la subunidad p85 actúa para localizar PI 3-cinasa en la membrana plasm�tica mediante la interacción de su dominio SH2 con residuos de tirosina fosforilados (presentes en un contexto de secuencia apropiado) en proteínas diana (Rameh et al., Cell, 83:821-30 (1995)). Se han identificado cinco isoformas de p85 (p85!, p85∀, p55∃, p55! y p50!) codificadas por tres genes. Transcritos alternativos del gen Pik3r1 codifican para las proteínas p85!, p55! y p50! (Deane y Fruman, Annu. Rev. Immunol. 22: 563-598 (2004)). p85! se expresa de manera ubicua mientras que p855∀ se encuentra principalmente en el cerebro y los tejidos linfoides (Volinia et al., Oncogene, 7:789-93 (1992)). Parece requerirse la asociación de la subunidad p85 a las subunidades catalíticas p1110!, ∀ o # de PI 3-cinasa para la actividad catalítica y estabilidad de estas enzimas. Además, la unión de proteínas Ras también regula por incremento la actividad PI 3-cinasa.

La clonaci�n de p110∃ revel� aún más complejidad dentro de la familia de enzimas de PI3K (Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)). La isoforma p110∃ est� estrechamente relacionada con p110! y p110∀ (identidad del 45-48% en el dominio catalítico), pero tal como se indica no hace uso de p85 como subunidad de selección como diana. En su lugar, p110∃ se une a la subunidad reguladora p101 que también se une a las subunidades ∀∃ de proteínas G heterotrim�ricas. La subunidad reguladora p101 para PI3Kgamma se clon� originariamente en cerdos, y se identificó posteriormente el ort�logo humano (Krugmann et al., J Biol Chem, 274:17152-8 (1999)). Se sabe que la interacción entre la región N-terminal de p101 con la región N-terminal de p110∃ activa PI3K∃ a través de G∀∃. Recientemente, se ha identificado un homólogo de p101, p84 o p87PIKAP (proteína adaptadora de PI3K∃ de 87 kDa) que se une a p110∃ (Voigt et al. JBC, 281: 9977-9986 (2006), Suire et al. Curr. Biol. 15: 566-570 (2005)). p87PIKAP es homóloga a p101 en zonas que se unen a p110∃ yG∀∃ y también media la activación de p110∃ de manera posterior a receptores acoplados a proteínas G. A diferencia de p101, p87PIKAP se expresa altamente en el corazón y puede ser crucial en la función cardiaca de PI3K∃.

Un polip�ptido de PI3K activo de manera constitutiva se describe en la publicación internacional WO 96/25488. Esta publicación da a conocer la preparación de una proteína de fusión quimérica en la que se fusiona un fragmento de 102 residuos de p85 conocido como la región inter-SH2 (iSH2) a través de una región ligadora al extremo N-terminal de p110 murina. El dominio iSH2 de p85 aparentemente puede activar la actividad PI3K de manera comparable a p85 intacta (Klippel et al., Mol Cell Biol, 14:2675-85 (1994)).

Por tanto, las PI 3-cinasas pueden definirse por su identidad de amino�cidos o por su actividad. Miembros adicionales de esta familia g�nica creciente incluyen lípido y proteína cinasas relacionadas de manera más distante incluyendo Vps34 TOR1, y TOR2 de Saccharomyces cerevisiae (y sus homólogos de mamífero tales como FRAP y mTOR), el producto del gen de la ataxia-telangiectasia (ATR) y la subunidad catalítica de proteína cinasa dependiente de ADN (ADN-PK). Véase en general, Hunter, Cell, 83:1-4 (1995).

PI 3-cinasa también est� implicada en varios aspectos de la activación de leucocitos. Se ha mostrado que una actividad PI 3-cinasa asociada a p85 se asocia físicamente con el dominio citoplasmático de CD28, que es una molécula coestimuladora importante para la activación de células T en respuesta a ant�geno (Pages et al., Nature, 369:327-29 (1994); Rudd, Immunity, 4:527-34 (1996)). La activación de células T a través de CD28 disminuye el umbral para la activación por ant�geno y aumenta la magnitud y duración de la respuesta proliferativa. Estos efectos est�n vinculados a aumentos en la transcripción de varios genes incluyendo interleucina-2 (IL2), un importante factor de crecimiento de células T (Fraser et al., Science, 251:313-16 (1991)). La mutación de CD28 de manera que ya no puede interaccionar con PI 3-cinasa conduce a un fallo para iniciar la producción de IL2, lo que sugiere un papel crítico para la PI 3-cinasa en la activación de células T.

Inhibidores específicos frente a miembros individuales de una familia de enzimas proporcionan herramientas inestimables para descifrar las funciones de cada enzima. Dos compuestos, LY294002 y wortmanina, se han usado ampliamente como inhibidores de PI 3-cinasa. Sin embargo, estos compuestos son inhibidores de PI3K inespec�ficos, ya que no distinguen entre los cuatro miembros de las PI 3-cinasas de clase I. Por ejemplo, los valores de CI50 de wortmanina frente a cada una de las diversas PI 3-cinasas de clase I est�n en el intervalo de 1-10 nM. De manera similar, los valores de CI50 para LY294002 frente a cada una de estas PI 3-cinasas es de aproximadamente 1 %M (Fruman et al., Ann Rev Biochem, 67:481-507 (1998)). As�, la utilidad de estos compuestos en el estudio de los papeles de PI 3-cinasas de clase I individuales es limitada.

Bas�ndose en estudios que usan wortmanina, existen evidencias de que también se requiere la función de PI 3cinasa para algunos aspectos de la se�alizaci�n de leucocitos a través de receptores acoplados a proteínas G (Thelen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 91:4960-64 (1994)). Además, se ha mostrado que wortmanina y LY294002 bloquean la migración de neutr�liflos y la liberación de super�xido. Sin embargo, en la medida en que estos compuestos no distinguen entre las diversas isoformas de PI3K, sigue estando poco claro a partir de estos estudios qué isoforma o isoformas de PI3K particulares est�n implicadas en estos fenómenos y qué funciones realizan las diferentes enzimas PI3K de clase I en tejidos tanto normales como enfermos en general. La coexpresi�n de varias isoformas de PI3K en la mayor parte de los tejidos ha producido confusión en los esfuerzos por segregar las actividades de cada enzima hasta hace poco.

Se ha hecho un avance en la separación de las actividades de las diversas isozimas de PI3K recientemente con el desarrollo de ratones manipulados genéticamente que permitió el estudio de ratones con deficiencia de isoforma específica y con inserción de cinasa inactiva y el desarrollo de inhibidores más selectivos para algunas de las diferentes isoformas. Se han generado ratones con deficiencia en p110! y p110∀ y ambas son letales en fase embrionaria y puede obtenerse escasa información de estos ratones por lo que respecta a la expresión y función de p110 alfa y beta (Bi et al. Mamm. Genome, 13:169-172 (2002); Bi et al. J. Biol. Chem. 274:10963-10968 (1999)). Más recientemente, se generaron ratones con inserción de cinasa inactiva p110! con una única mutación puntual en el motivo DFG del bolsillo de unión a ATP (p110!D933A) que afecta a la actividad cinasa pero conserva la expresión de cinasa p110! mutante. A diferencia de los ratones con deficiencia, el enfoque de inserción conserva la estequiometria completa de se�alizaci�n, las funciones de andamiaje e imita los enfoques de molécula pequeña de manera más realista que los ratones con deficiencia. De manera similar a los ratones KO para p110!, los ratones homocigotos p110!D933A son letales en fase embrionaria. Sin embargo, los ratones heterocigotos son viables y fértiles pero presentan una se�alizaci�n gravemente reducida mediante proteínas sustrato del receptor de insulina (IRS), mediadores clave de la acción de insulina, factor de crecimiento similar a insulina-1 y leptina. La capacidad de respuesta defectuosa a estas hormonas conduce a hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, hiperfagia, aumento de la adiposidad y reducción del crecimiento global en heterocigotos (Foukas, et al. Nature, 441: 366-370 (2006)). Estos estudios revelaron un papel definido, no redundante, para p110! como intermediario en la se�alizaci�n de IGF-1, insulina y leptina que no se sustituye por otras isoformas. Habr� que esperar a la descripción de los ratones con inserción de cinasa inactiva p110∀ para comprender adicionalmente la función de esta isoforma (se han producido ratones pero aún no se ha publicado; Vanhaesebroeck). Se han generado ratones tanto con deficiencia como con inserción de cinasa inactiva p110∃ y muestran de manera global fenotipos similares y leves con defectos principales en la migración de células del sistema inmunitario innato y un defecto en el desarrollo t�mico de células T (Li et al. Science, 287: 1046-1049 (2000), Sasaki et al. Science, 287: 1040-1046 (2000), Patrucco et al. Cell, 118: 375-387 (2004)).

De manera similar a p110∃, se han preparado ratones con deficiencia e inserción de cinasa inactiva PI3K delta y son viables con fenotipos leves y similares. Los ratones con inserción mutantes p110#D910A demostraron un papel importante para delta en el desarrollo y la función de células B, con células B de la zona marginal y células B1 CD5+ casi indetectables, y se�alizaci�n de receptores de ant�genos de células B y T (Clayton et al. J. Exp. Med. 196:753

p110#D910A

763 (2002); Okkenhaug et al. Science, 297: 1031-1034 (2002)). Se han estudiado los ratones extensamente y se han dilucidado los diversos papeles que desempeña delta en el sistema inmunitario. Las respuestas inmunitarias dependientes de células T e independientes de células T se ven gravemente atenuadas en

p110#D910A

y se ven afectadas la secreción de citocinas tipo TH1 (INF-∃)y TH2 (IL-4, IL-5) (Okkenhaug et al. J. Immunol. 177: 5122-5128 (2006)). También se ha descrito recientemente un paciente humano con una mutación en p110#. Un chico taiwan�s con una inmunodeficiencia primaria de células B y una gamma-hipoglobulinemia de etiolog�a previamente desconocida presentaba una sustitución de un único par de bases, m.3256G por A en el cod�n 1021 en el ex�n 24 de p110#. Esta mutación dio como resultado una sustitución de amino�cidos de cambio de sentido (E por K) en el cod�n 1021, que est� ubicado en el dominio catalítico altamente conservado de la proteína p110#. El paciente no tiene otras mutaciones identificadas y su fenotipo concuerda con la deficiencia en p110# en ratones en la medida en que se ha estudiado. (Jou et al. Int. J. Immunogenet. 33: 361-369 (2006)).

Se han desarrollado compuestos de molécula pequeña selectivos para la isoforma con éxito variable para todas las isoformas de PI3 cinasa de clase I (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)). Se desean inhibidores para alfa debido a que se han identificado mutaciones en p110! en varios tumores sólidos; por ejemplo, una mutación por amplificación de alfa est� asociada con el 50% del cáncer de ovario, cuello uterino, pulmón y mama y se ha descrito una mutación de activación en más del 50% de los c�nceres de intestino y el 25% de mama (Hennessy et al. Nature

Reviews, 4: 988-1004 (2005)). Yamanouchi ha desarrollado un compuesto YM-024 que inhibe alfa y delta de manera equipotente y es selectivo 8 y 28 veces con respecto a beta y gamma respectivamente (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)).

P110∀ est� implicada en la formación de trombos (Jackson et al. Nature Med. 11: 507-514 (2005)) y se ha pensado después en inhibidores de molécula pequeña específicos para esta isoforma para la indicación que implica trastornos de la coagulación (TGX-221: 0,007 uM en beta; selectivo 14 veces con respecto a delta y selectivo más de 500 veces con respecto a gamma y alfa) (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)).

Est�n desarrollándose compuestos selectivos para p110∃ por varios grupos como agentes inmunosupresores para la enfermedad autoinmunitaria (Rueckle et al. Nature Reviews, 5: 903-918 (2006)). Cabe señalar que se ha mostrado que AS 605240 es eficaz en un modelo de ratón de artritis reumatoide (Camps et al. Nature Medicine, 11: 936-943 (2005)) y retrasa la aparición de la enfermedad en un modelo de lupus sist�mico eritematoso (Barber et al. Nature Medicine, 11: 933-935 (205)).

Tambi�n se han descrito recientemente inhibidores selectivos de delta. Los compuestos más selectivos incluyen los inhibidores de quinazolinona-purina (PIK39 y IC87114). IC87114 inhibe p110# en el rango nanomolar alto (triple dígito) y tiene una selectividad mayor de 100 veces frente a p110!, es selectivo 52 veces frente a p110∀ pero carece de selectividad frente a p110∃ (aproximadamente 8 veces). No muestra actividad frente a ninguna proteína cinasa sometida a prueba (Knight et al. Cell, 125: 733-747 (2006)). Usando compuestos selectivos para delta o ratones manipulados genéticamente (p110#D910A) se mostr� que además de desempeñar un papel clave en la activación de células B y T, delta también est� implicada parcialmente en la migración de neutr�filos y estallido respiratorio en neutr�filos sensibilizados y conduce a un bloqueo parcial de la desgranulaci�n de mastocitos mediada por ant�geno-IgE (Condliffe et al. Blood, 106: 1432-1440 (2005); Ali et al. Nature, 431: 1007-1011 (2002)). As�, p110# se est� perfilando como un importante mediador de muchas respuestas inflamatorias clave que también se sabe que participan en estados inflamatorios aberrantes, incluyendo pero sin limitarse a enfermedad autoinmunitaria y alergia. Para respaldar esta idea, existe un conjunto creciente de datos de validación objetivo de p110# derivados de estudios que usan tanto herramientas genéticas como agentes farmacol�gicos. Por tanto, usando el compuesto IC 87114 selectivo para delta y los ratones p110#D910A, Ali et al. (Nature, 431: 1007-1011 (2002)) han demostrado que delta desempeña un papel crítico en un modelo murino de enfermedad alérgica. En ausencia de delta funcional, se reduce significativamente la anafilaxia cut�nea pasiva (ACP) y puede atribuirse a una reducción en la desgranulaci�n y activación de mastocitos inducida por al�rgeno-IgE. Además, se ha mostrado que la inhibición de delta con IC 87114 mejora significativamente la inflamación y enfermedad en un modelo murino de asma que usa inflamación de las vías respiratorias inducida por ovoalb�mina (Lee et al. FASEB, 20: 455-465 (2006). Estos datos utilizando compuesto en ratones mutantes p110#D910A usando el mismo modelo de inflamación alérgica de las vías respiratorias fueron corroborados por un grupo diferente (Nashed et al. Eur. J. Immunol. 37:416-424 (2007)).

Existe la necesidad de una caracterización adicional de la función de PI3K# en entornos inflamatorios y autoinmunitarios. Además, la comprensión de PI3K# requiere elaboración adicional de las interacciones estructurales de p110#, tanto con su subunidad reguladora como con otras proteínas en la célula. También sigue habiendo la necesidad de inhibidores de PI3K delta más potentes y selectivos o específicos, para evitar la posible toxicolog�a asociada con la actividad sobre las isozimas p110 alfa (se�alizaci�n de insulina) y beta (activación de plaquetas). En particular, se desean inhibidores de PI3K# selectivos o específicos para investigar adicionalmente el papel de esta isozima y para el desarrollo de productos farmacéuticos superiores para modular la actividad de la isozima.

Sumario

La presente invención comprende una nueva clase de compuestos que tienen la fórmula general

que son útiles para inhibir la actividad biológica de PI3K# humana. Otro aspecto de la invención es proporcionar compuestos que inhiben PI3K# selectivamente mientras que tienen relativamente baja potencia inhibidora frente a las otras isoformas de PI3K. Otro aspecto de la invención es proporcionar métodos de caracterización de la función

de PI3K# humana. Otro aspecto de la invención es proporcionar métodos de modulación selectiva de la actividad de PI3K# humana, y fomentando de ese modo el tratamiento m�dico de enfermedades mediadas por disfunción de PI3K#. Otros aspectos y ventajas de la invención resultarán fácilmente evidentes para el experto habitual en la técnica.

Descripci�n detallada

Un aspecto de la invención se refiere a compuestos que tienen la estructura:

o cualquier sal farmac�uticamente aceptable de los mismos, en la que:

X1 es C(R10)o N;

X2 es C(R6) o N;

X3 es C(R7)o N;

X4 es C(R10)o N;

Y es N(R8), CRaRa, S u O;

R1 se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa, -NRa-alk C2-6-ORa, -NRa-alk C2-6-CO2Ra, -NRa-alk C2-6-SO2Rb, -CH2C(=O)Ra, -CH2C(=O)ORa, -CH2C(=O)NRaRa, -CH2C(=NRa)NRaRa, -CH2ORa, -CH2OC(=O)Ra, -CH2OC(=O)NRaRa, -CH2OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -CH2O-alk C2-6-NRaRa, -CH2O-alk C2-6-ORa, -CH2SRa, -CH2S(=O)Ra, -CH2S(=O)2Rb, -CH2S(=O)2NRaRa, -CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N(Ra)C(=O)Ra, -CH2N(Ra)C(=O)ORa, -CH2N(Ra)C(=O)NRaRa, -CH2N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -CH2N(Ra)S(=O)2Ra, -CH2N(Ra)S(=O)2NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-ORa, -CH2NRa-alk C2-6-CO2Ra y-CH2NRa-alk C26-SO2Rb; o R1 es un anillo monoc�clico de 3, 4, 5, 6 � 7 miembros o bic�clico de 8, 9, 10 u 11 miembros unido directamente, con unión a alk C1-4, con unión a O-alk C1-2, con unión a alk C1-2-O, con unión a N(Ra) o con unión a O saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un átomo de O o S, sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos adicionalmente con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, y en el que el anillo est� sustituido adicionalmente con 0 � 1 grupo unido directamente, con unión a SO2, con unión a C(=O) o con unión a CH2 seleccionado de fenilo, piridilo, pirimidilo, morfolino, piperazinilo, piperadinilo, pirrolidinilo, ciclopentilo, ciclohexilo todos los cuales est�n sustituidos además con 0, 1, 2 � 3 grupos seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, S(=O)2NRaRa, -NRaRa y-N(Ra)C(=O)Ra;

R2 se selecciona de un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros o bic�clico de 8, 9, 10 u 11 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un O o S, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en el que el anillo est� sustituido con 0 � 1 sustituyentes R2, y el anillo est� sustituido

adicionalmente con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa; o R3 se selecciona de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -Oalk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa;

R3 se selecciona de H, halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, O-haloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)-alk C1-4, C(=O)NH2, C(=O)NH-alk C1-4, C(=O)N(alk C1-4)-alk C1-4, N(H)C(=O)-alk C1-4, N(alk C1-4)C(=O)-alk C1-4 y haloalk C1-4;

R4 se selecciona de H, halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, O-haloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)-alk C1-4, C(=O)NH2, C(=O)NH-alk C1-4, C(=O)N(alk C1-4)-alk C1-4, N(H)C(=O)-alk C1-4, N(alk C1-4)C(=O)-alk C1-4 y haloalk C1-4;

R5 es, independientemente, en cada caso, H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4 o alk C1-6 sustituido con 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C1-4 y N(alk C1-4)-alk C1-4; o ambos grupos R5 forman juntos un espiroalk C3-6 sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C1-4 y N(alk C1-4)-alk C1-4;

R6 se selecciona de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NHR9, N(alk C1-4)-alk C1-4, -C(=O)ORa, -C(=O)N(Ra)Ra, -N(Ra)C(=O)Rb y un anillo heteroc�clico de 5 � 6 miembros saturado o parcialmente saturado que contiene 1, 2 � 3 heteroat�mos seleccionados de N, O y S, en el que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, oxo, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C1-4 y N(alk C1-4)-alk C1-4;

R7 se selecciona de H, halo, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa, -NRa-alk C2-6-ORa y alk C1-6, en los que el alk C1-6 est� sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa, y el alk C1-6 est� sustituido adicionalmente con 0 � 1 anillos monoc�clicos de 5, 6 � 7 miembros saturados, parcialmente saturados o insaturados que contienen 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contienen más de un O o S, en los que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en los que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, O-haloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)alk C1-4 y haloalk C1-4; o R7 yR8 forman juntos un puente -C=N-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, ciano, o un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un O o S, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en el que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2, 3 � 4 sustituyentes seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -Oalk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa; o R7 yR9 forman juntos un puente -N=C-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, ORa, NRaRa, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra o -S(=O)2NRaRa;

R8 es H, alk C1-6, C(=O)N(Ra)Ra, C(=O)Rb o haloalk C1-4;

R9 es H, alk C1-6 o haloalk C1-4;

R10 es independientemente en cada caso H, halo, alk C1-3, haloalk C1-3 o ciano;

R11

se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa-SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Rb, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa;

Ra es independientemente, en cada caso, H o Rb; y

Rb es independientemente, en cada caso, fenilo, bencilo o alk C1-6, estando el fenilo, bencilo y alk C1-6 sustituidos con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, alk C1-4, haloalk C1-3, -O-alk C1-4, -NH2, -NH-alk C1-4 y -N(alk C1-4)-alk C1-4.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, X1 es N.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, X4 es N.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, X1 es N y X4 es N.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, Y es N(R8).

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, Y es N(H).

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros o bic�clico de 8, 9, 10 u 11 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado unido directamente que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un átomo de O o S, sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos adicionalmente con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es un anillo monoc�clico de 6 miembros insaturado unido directamente que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un átomo de O o S, sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa-SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es fenilo, piridilo o pirimidinilo, todos los cuales est�n sustituidos con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa; -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es fenilo sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -Oalk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es fenilo, piridilo o pirimidinilo, todos los cuales est�n sustituidos con 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6 y haloalk C1-4.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R1 es fenilo que est� sustituido con 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6 y haloalk C1-4.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R2 es H.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R3 se selecciona de H y halo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R4 se selecciona de H y halo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R3 yR4 son ambos H.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R5 es, independientemente, en cada caso, H,

halo, alk C1-6 y haloalk C1-4.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, un R5 es H y el otro R5 es alk C1-6.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, un R5 es H y el otro R5 es metilo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, un R5 es H y el otro R5 es (R)-metilo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, un R5 es H y el otro R5 es (S)-metilo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R6 es NHR9.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R7 es ciano.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R7 yR8 forman juntos un puente -C=N-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, ciano, o un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un O o S, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en el que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2, 3 � 4 sustituyentes seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa,-ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y-NRa-alk C2-6-ORa.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R7 yR9 forman juntos un puente -N=C-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, ORa, NRaRa, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R7 yR9 forman juntos un puente -N=C-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H o halo.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R11 se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4 y ciano.

En otra realización, junto con las realizaciones anteriores y siguientes, R11 se selecciona de H, halo y alk C1-6.

Otro aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento de estados o trastornos mediados por PI3K.

En determinadas realizaciones, el estado o trastorno mediado por PI3K se selecciona de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias. En otras realizaciones, el estado o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, accidente cerebrovascular, infarto de miocardio, angina inestable, tromboembolia, embolia pulmonar, enfermedades trombol�ticas, isquemia arterial aguda, oclusiones tromb�ticas periféricas y arteriopat�a coronaria. En todavía otras realizaciones, el estado o trastorno mediado por PI3K se selecciona de cáncer, cáncer de colon, glioblastoma, carcinoma de endometrio, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de pulmón de células escamosas, glioma, cáncer de mama, cáncer de pr�stata, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino y leucemia. En aún otra realización, el estado o trastorno mediado por PI3K se selecciona de diabetes tipo II. En todavía otras realizaciones, el estado o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades respiratorias, bronquitis, asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica. En determinadas realizaciones, el sujeto es un ser humano.

Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias o enfermedades autoinmunitarias que comprende la etapa de administrar un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores.

Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios oculares, trastornos inflamatorios o inestables de la vejiga, afecciones cut�neas con componentes inflamatorias, estados inflamatorios crónicos, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sist�mico (LES), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, púrpura trombocitop�nica idiop�tica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemol�tica autoinmunitaria, estados alérgicos e hipersensibilidad, que comprende la etapa de administrar un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes.

Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de c�nceres que est�n mediados, dependen de o est�n asociados con actividad de p110#, que comprende la etapa de administrar un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes.

5 Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de c�nceres que se seleccionan de leucemia mieloide aguda, síndrome mielodispl�sico, enfermedades mieloproliferativas, leucemia mieloide crónica, leucemia linfobl�stica aguda de células T, leucemia linfobl�stica aguda de células B, linfoma no Hodgkin, linfoma de células B, tumores sólidos y cáncer de mama, que comprende la etapa de administrar un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes.

10 Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores y un diluyente o portador farmac�uticamente aceptable.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores 15 como medicamento.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto según cualquiera de las realizaciones anteriores en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias.

20 Los compuestos de esta invención pueden tener en general varios centros asimétricos y se representan normalmente en forma de mezclas rac�micas. Esta invención pretende abarcar mezclas rac�micas, mezclas parcialmente rac�micas y enanti�meros y diastere�meros independientes.

25 A menos que se especifique de otro modo, se aplican las siguientes definiciones a los términos que se encuentran en la memoria descriptiva y las reivindicaciones:

“alk C!-∀” significa un grupo grupo alk que comprende un mínimo de ! y un máximo de ∀ átomos de carbono en una relación ramificada, cíclica o lineal o cualquier combinación de las tres, en el que ! y ∀ representan número enteros. 30 Los grupos alk descritos en esta sección también pueden contener uno o dos dobles o triples enlaces. Los ejemplos de alk C1-6 incluyen, pero no se limitan a los siguientes:

35 “Grupo benzo”, solo o en combinación, significa el radical divalente C4H4=, una representación del cual es -CH=CH-CH=CH-, que cuando se une de manera vecinal a otro anillo forma un anillo de tipo benceno, por ejemplo tetrahidronaftileno, indol y similares.

Los términos “oxo” y “tioxo” representan los grupos =O (como en carbonilo) y =S (como en tiocarbonilo), 40 respectivamente.

“Halo” o “halógeno” significa un átomo de halógeno seleccionado de F, Cl, Br e I.

“Haloalk Cv-w” significa un grupo alk, tal como se describió anteriormente, en el que cualquier número (al menos uno) 45 de los átomos de hidrógeno unidos a la cadena de alk se sustituyen por F, Cl, Br o I.

“Heterociclo” significa un anillo que comprende al menos un átomo de carbono y al menos otro átomo seleccionado de N, O y S. Ejemplos de heterociclos que pueden encontrarse en las reivindicaciones incluyen, pero no se limitan a, los siguientes:

y

“átomos de nitrógeno disponibles” son aquellos átomos de nitrógeno que son parte de un heterociclo y se unen 5 mediante dos enlaces sencillos (por ejemplo piperidina), dejando un enlace externo disponible para sustitución con, por ejemplo, H o CH3.

“Sal farmac�uticamente aceptable” significa una sal preparada mediante medios convencionales, y se conocen bien por los expertos en la técnica. Las “sales farmacol�gicamente aceptables” incluyen sales básicas de ácidos 10 inorgánicos y orgánicos, incluyendo pero sin limitarse a ácido clorhídrico, ácido bromh�drico, ácido sulfúrico, ácido fosf�rico, ácido metanosulf�nico, ácido etanosulf�nico, ácido m�lico, ácido acético, ácido ox�lico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido l�ctico, ácido fum�rico, ácido succ�nico, ácido maleico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fenilac�tico, ácido mand�lico y similares. Cuando los compuestos de la invención incluyen una función ácida tal como un grupo carboxilo, entonces los expertos en la técnica conocen bien pares cati�nicos farmac�uticamente

15 aceptables adecuados para el grupo carboxilo e incluyen cationes alcalinos, alcalinot�rreos, de amonio, de amonio cuaternario y similares. Para ejemplos adicionales de “sales farmacol�gicamente aceptables”, véanse las citadas anteriormente y Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 (1977).

“Saturado, parcialmente saturado o insaturado” incluye sustituyentes saturados con hidrógenos, sustituyentes 20 completamente insaturados con hidrógenos y sustituyentes parcialmente saturados con hidrógenos.

“Grupo saliente” se refiere en general a grupos fácilmente desplazables por un nucle�filo, tal como un nucle�filo de amina, tiol o alcohol. Tales grupos salientes se conocen bien en la técnica. Los ejemplos de tales grupos salientes incluyen, pero no se limitan a, N-hidroxisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol, haluros, triflatos, tosilatos y similares. Se indican grupos salientes preferidos en el presente documento cuando sea apropiado.

“Grupo protector” se refiere en general a grupos bien conocidos en la técnica que se usan para impedir que grupos reactivos seleccionados, tales como carboxilo, amino, hidroxilo, mercapto y similares, experimenten reacciones no deseadas, tales como nucle�filas, electr�filas, de oxidación, reducción y similares. Se indican grupos protectores preferidos en el presente documento cuando sea apropiado. Los ejemplos de grupos protectores de amino incluyen, pero no se limitan a, aralk, aralk sustituido, cicloalquenil-alk y cicloalquenil-alk sustituido, alilo, alilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, sililo y similares.

Los ejemplos de aralk incluyen, pero no se limitan a, bencilo, orto-metilbencilo, tritilo y benzhidrilo, que pueden estar opcionalmente sustituidos con halógeno, alk, alcoxilo, hidroxilo, nitro, acilamino, acilo y similares, y sales, tales como sales de fosfonio y amonio. Los ejemplos de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, indanilo, antracenilo, 9-(9fenilfluorenilo), fenantrenilo, durenilo y similares. Los ejemplos de radicales cicloalquenil-alk o cicloalquenil-alk sustituido, tienen preferiblemente 6-10 átomos de carbono, incluyen, pero no se limitan a, ciclohexenil-metilo y similares. Los grupos acilo, alcoxicarbonilo y aralcoxicarbonilo adecuados incluyen benciloxicarbonilo, tbutoxicarbonilo, iso-butoxicarbonilo, benzo�lo, benzo�lo sustituido, butirilo, acetilo, trifluoroacetilo, tricloroacetilo, ftalo�lo y similares. Puede usarse una mezcla de grupos protectores para proteger el mismo grupo amino, tal como un grupo amino primario puede protegerse mediante tanto un grupo aralk como un grupo aralcoxicarbonilo. Los grupos protectores de amino también pueden formar un anillo heteroc�clico con el nitrógeno al que est�n unidos, por ejemplo, 1,2-bis(metilen)benceno, ftalimidilo, succinimidilo, maleimidilo y similares y en los que estos grupos heteroc�clicos pueden incluir además anillos de arilo y cicloalk colindantes. Además, los grupos heteroc�clicos pueden estar mono-, di-o tri-sustituidos, tales como nitroftalimidilo. También pueden protegerse grupos amino frente a reacciones no deseadas, tales como oxidación, a través de la formación de una sal de adición, tal como clorhidrato, ácido toluenosulf�nico, ácido trifluoroac�tico y similares. Muchos de los grupos protectores de amino son también adecuados para proteger grupos carboxilo, hidroxilo y mercapto. Por ejemplo, grupos aralk. Los grupos alk también son grupos adecuados para proteger grupos hidroxilo y mercapto, tales como terc-butilo.

Grupos protectores de sililo son átomos de silicio opcionalmente sustituidos con uno o más grupos alk, arilo y aralk. Los grupos protectores de sililo adecuados incluyen, pero no se limitan a, trimetilsililo, trietilsililo, triisopropilsililo, tercbutildimetilsililo, dimetilfenilsililo, 1,2-bis(dimetilsilil)benceno, 1,2-bis(dimetilsilil)etano y difenilmetilsililo. La sililaci�n de un grupo amino proporciona grupos mono-o disililamino. La sililaci�n de compuestos de aminoalcohol puede conducir a un derivado de N,N,O-trisililo. La eliminación de la función sililo de una función silil éter se logra fácilmente mediante tratamiento con, por ejemplo, un reactivo de hidróxido de metal o fluoruro de amonio, o bien como etapa de reacción diferenciada o bien in situ durante una reacción con el grupo alcohol. Agentes de sililaci�n adecuados son, por ejemplo, cloruro de trimetilsililo, cloruro de terc-butil-dimetilsililo, cloruro de fenildimetilsililo, cloruro de difenilmetilsililo o sus productos de combinación con imidazol o DMF. Los expertos en la técnica conocen bien métodos para la sililaci�n de aminas y la eliminación de grupos protectores de sililo. Los expertos en la técnica de la química orgánica también conocen bien métodos de preparación de estos derivados de amina a partir de los amino�cidos, amidas de amino�cido o ésteres de amino�cido correspondientes incluyendo química de amino�cidos/ésteres de amino�cido o aminoalcohol.

Se eliminan los grupos protectores en condiciones que no afectarán a la parte restante de la molécula. Estos métodos se conocen bien en la técnica e incluyen hidrólisis ácida, hidrogen�lisis y similares. Un método preferido implica la eliminación de un grupo protector, tal como la eliminación de un grupo benciloxicarbonilo mediante hidrogen�lisis utilizando paladio sobre carbono en un sistema de disolventes adecuado tal como un alcohol, ácido acético, y similares o mezclas de los mismos. Puede eliminarse un grupo protector de t-butoxicarbonilo utilizando un ácido inorgánico u orgánico, tal como HCl o ácido trifluoroac�tico, en un sistema de disolventes adecuado, tal como dioxano o cloruro de metileno. Puede neutralizarse fácilmente la aminosal resultante para producir la amina libre. Puede eliminarse un grupo protector de carboxilo, tal como metilo, etilo, bencilo, terc-butilo, 4-metoxifenilmetilo y similares, en condiciones de hidrólisis e hidrogen�lisis bien conocidas por los expertos en la técnica.

Debe indicarse que los compuestos de la invención pueden contener grupos que pueden existir en formas tautom�ricas, tales como grupos amidina y guanidina cíclicos y acíclicos, grupos heteroarilo sustituidos con hetero�tomos (Y’ = O, S, NR), y similares, que se ilustran en los siguientes ejemplos:

y aunque se nombre, describa, presente y/o reivindique una forma en el presente documento, se pretende que todas las formas tautom�ricas est�n incluidas inherentemente en tal nombre, descripción, presentación y/o reivindicación.

Tambi�n se dan a conocer prof�rmacos de los compuestos de esta invención. Un prof�rmaco es un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de acción fisiológica in vivo, tal como hidrólisis, metabolismo y similares, para dar un compuesto de esta invención tras la administración del prof�rmaco a un paciente. Los expertos en la técnica conocen bien la idoneidad y las técnicas implicadas en la preparación y el uso de prof�rmacos. Para un comentario general de prof�rmacos que implican ésteres véanse Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de un ani�n carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alk (por ejemplo, metilo, etilo), cicloalk (por ejemplo, ciclohexilo), aralk (por ejemplo, bencilo, p-metoxibencilo) y alkcarboniloxialk (por ejemplo, pivaloiloximetilo). Se han enmascarado aminas como derivados sustituidos con arilcarboniloximetilo que se escinden por esterasas in vivo liberando el fármaco libre y formaldeh�do (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Además, se han enmascarado fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol y similares, con grupos Naciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Se han enmascarado grupos hidroxilo como ésteres y �teres. El documento EP 039.051 (Sloan y Little, 4/11/81) da a conocer prof�rmacos de ácido hidrox�mico-base de Mannich, su preparación y uso.

La memoria descriptiva y las reivindicaciones contienen listados de especies que usan el lenguaje “seleccionado de ... y ...” y “es ... o ...” (denominados a veces grupos de Markush). Cuando se usa este lenguaje en esta solicitud, a menos que se indique de otro modo, pretende incluir el grupo en su totalidad, o cualquier elemento individual del mismo, o cualquier subgrupo del mismo. El uso de este lenguaje es simplemente para fines de abreviar y no pretende limitar en modo alguno la eliminación de elementos o subgrupos individuales, según sea necesario.

La presente invención también incluye compuestos marcados isot�picamente, que son idénticos a los citados en el presente documento, excepto en el hecho de que se sustituyen uno o más átomos por un átomo que tiene una masa atómica o un número músico diferente de la masa atómica o el número músico que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 16O, 17O, 31P, 32P,35S, 18F y 36Cl.

Los compuestos de la presente invención que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/u otros isótopos de otros átomos est�n dentro del alcance de esta invención. Determinados compuestos marcados isot�picamente de la presente invención, por ejemplo aquéllos en los que se incorporan isótopos radiactivos tales como 3Hy 14C, son útiles en ensayos de distribución tisular de sustratos y/o fármacos. Se prefieren particularmente los isótopos tritiados, es decir, 3H y carbono-14, es decir, 14C, por su facilidad de preparación y detección. Además, la sustitución por isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, 2H, pueden proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo aumento de la semivida in vivo o reducción de los requerimientos de dosificación y as�, pueden preferirse en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isot�picamente de esta invención pueden prepararse en general sustituyendo un reactivo no marcado isot�picamente por un reactivo marcado isot�picamente disponible fácilmente.

Parte experimental

Se usan las siguientes abreviaturas: ac.-acuoso BINAP -2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftilo conc. – concentrado DCM – diclorometano DIAD -azodicarboxilato de diisopropilo DMF -N,N-dimetilformamida Et2O-dietil éter EtOAc -acetato de etilo EtOH -alcohol etílico h -hora(s) min – minutos MeOH -alcohol met�lico MsCl -cloruro de metanosulfonilo ta -temperatura ambiente sat. – saturado THF -tetrahidrofurano

General

Los reactivos y disolventes usados a continuación pueden obtenerse de fuentes comerciales. Los espectros de 1H-RMN se registraron en espectrómetros de RMN Bruker 400 MHz y 500 MHz. Se tabulan los picos significativos en orden: multiplicidad (s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuartete; m, multiplete; s a, singlete ancho), constante(s) de acoplamiento en hercios (Hz) y número de protones. Se notifican los resultados de la espectrometr�a de masas como la razón de masa con respecto a la carga, seguido por la abundancia relativa de cada ion (entre paréntesis). Se realizó análisis de espectrometr�a de masas de ionizaci�n por electropulverizaci�n (ESI) en un espectrómetro de masas de electropulverizaci�n CL/EMD serie 1100 de Agilent. Pudieron analizarse todos los compuestos en el modo de ESI positiva usando acetonitrilo:agua con el 0,1% de ácido f�rmico como el disolvente de suministro. Se llev� a cabo HPLC analítica de fase inversa usando un aparato serie 1200 de Agilent en una columna de 5 %m Eclipse XDB-C18 (4,6 x 150 mm) de Agilent como fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo:agua con el 0,1% de TFA. Se llev� a cabo HPLC semiprep. de fase inversa usando un aparato serie 1100 de Agilent en una columna de 10 %m C18 Gemini™ (250 x 21,20 mm) de Phenomenex como fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo:H2O con el 0,1% de TFA.

Ejemplo 1 1-(2-Bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol

A una disolución de 2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-carbaldeh�do (2,4 g, 8,7 mmol) (Meth-Cohn, O. Narine B.

Tetrahedron Lett., 1978, 2045) en THF (50 ml) a -20�C se le a�adi� cloruro de metilmagnesio (3,04 ml de 3 N en THF, 9,1 mmol) gota a gota. Se agit� la reacción a -20�C durante 45 minutos y luego se extinguió con 25 ml de NH4Cl (sat.) y 25 ml de agua. Se diluyó la reacción con éter y se separaron las fases. Se lav� la fase orgánica con salmuera y se concentr�. La purificación mediante cromatograf�a en columna proporcion� 1-(2-bromo-6clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol. CL/EM (M+1, hallado = 293,8). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,21 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 5,32 (qd, J = 6,3, 2,7 Hz, 1H), 2,19 (s a, 1H), 1,55 (d, J = 6,3 Hz, 3H) ppm.

2-(1-(2-Bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona

A un matraz de fondo redondo que contenía 1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol (2,0 g, 6,8 mmol), ftalimida (1,2 g, 8,2 mmol, 1,2 eq.) y trifenilfosfina (2,15 g, 8,2 mmol) se le a�adi� THF (45 ml). Se enfri� la disolución hasta 0�C y se le a�adi� gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD, 1,6 ml, 8,2 mmol, 1,2 eq.). Se permitió

15 que se calentase la reacción hasta temperatura ambiente.

Despu�s de 1 h, se consider� que la reacción era completa mediante CL/EM. Se elimin� el disolvente a vacío y se redisolvi� el residuo en éter y se lav� con agua. Se sometió la fase acuosa a retroextracci�n con éter. Se lavaron las fases de éter combinadas con salmuera y se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. Se purificó el

20 producto bruto mediante cromatograf�a en columna usando EA al15% en hexanos proporcionando 2-(1-(2-bromo-6clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona. CL/EM (M+1, hallado = 422,8). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,40 (s, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 5,92 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 1,92 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm.

2-(1-(6-Clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona: 25

En un aparato de hidrogenación, se combinaron 2-(1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)-etil)isoindolin-1,3-diona (800 mg,1,9 mmol) y paladio al 5% sobre carbono (151 mg). Se purg� el recipiente de reacción con nitrógeno y se 30 añadieron 60 ml de acetato de etilo, 15 ml de etanol y 15 gotas de HCl concentrado. Se presuriz� el recipiente de reacción con gas hidrógeno hasta 50 psi. Después de 4 días, se purg� el aparato con nitrógeno y se filtr� el contenido a través de Celite. Se lav� la capa de Celite™ con acetato de etilo proporcionando una disolución naranja. Se elimin� el disolvente en el rotavapor y se redisolvi� en diclorometano. Se le a�adi� gel de sílice (3,2 g) a la disolución en diclorometano y se elimin� el disolvente en el rotavapor. Se transfirió el gel de sílice a la cabeza de 35 una columna de cromatograf�a y se eluy� con acetato de etilo al 15% en hexanos proporcionando 2-(1-(6clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona y se recuper� 2-(1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5il)etil)isoindolin-1,3-diona. CL/EM (M+1, hallado = 343,0). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,52 (s, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 7,54 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,95 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 1,95 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm.

40 2-(1-(6-(Piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

Se disolvió una mezcla de 2-(1-(6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (300 mg, 0,875 mmol), 2(tributilestannil)piridina (340 %l, 1,05 mmol, 1,2 eq.) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) (101 mg, 0,0875 mmol, 5 0,1 eq.) en 10 ml de dioxano bajo nitrógeno. Se calentó la reacción hasta 100�C durante 2 días, se enfri� hasta ta y se concentr� a vacío. La purificación mediante cromatograf�a en columna usando acetato de etilo / hexanos proporcion� 2-(1-(6-(piridin-2-il)-tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona. CL/EM (M+1, hallado = 386,0). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,69 (s, 1H), 8,66 (ddd, J = 4,9, 1,6, 0,8 Hz, 1H), 7,76 (td, J = 7,8, 1,8 Hz, 1H), 7,73-7,62, serie de m, 5H), 7,57 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,31 (ddd, J = 7,2, 4,7, 1,4 Hz, 1H), 6,33 (q, J = 7,2

10 Hz, 1H), 1,99 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

1-(6-(Piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina

15 Se form� una suspensión espesa de 2-(1-(6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (220 mg, 0,57 mmol) en etanol (5 ml). A esta suspensión espesa se le a�adi� hidrato de hidrazina (500 %l, 10,3 mmol, 18 eq.). Se calentó la reacción hasta 60�C durante 2 h, entonces se enfri� hasta ta y se filtr�. Se concentr� el filtrado y se redisolvi� en acetato de etilo y agua. Se separaron las fases y se lav� la fase orgánica con salmuera, se secó sobre

20 MgSO4, se filtr� y se concentr� a vacío proporcionando 1-(6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)-etanamina (134 mg, rendimiento del 91,9%). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,69 (ddd, J = 4,7, 1,6, 0,8 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,57 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,34 (ddd, J = 6,8, 5,1, 2,0, 1H), 7,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,63 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 1,44 (d, J = 6,7 Hz, 3H) ppm.

25 N-(1-(6-(Piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina:

A un matraz de reacción que contenía 1-(6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina (134 mg, 0,525 mmol), 6

30 cloropurina (97 mg, 0,63 mmol, 1,2 eq.) y diisopropiletilamina (137 %l, 0,79 mmol, 1,5 eq.) se le a�adi� 5 ml de nbutanol. Se calentó la reacción hasta 110�C durante 24 h, entonces se enfri� hasta ta y se concentr� a vacío. Se disolvió el residuo en acetato de etilo (&50 ml) con calor y sonicaci�n, entonces se lav� con 5 ml de agua y 5 ml de salmuera. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. La purificación mediante cromatograf�a en columna usando un gradiente del 0-80% de (DCM:MeOH:NH4OH 90:9:1) en diclorometano proporcion� N-(1-(6(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina rac�mica. El espectro de RMN a temperatura ambiente en CDCl3 existe como una mezcla aproximadamente 3:1 de isómeros. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,80 (d a, J = 4,3 Hz, 0,75 H), 8,73 (d a, J = 3,1 Hz, 0,25 H), 8,55 (s, 0,25 H), 8,36-8,26 (serie de m, 1,75 H), 8,15-8,03 (serie de m, 1,5 H), 7,93 (s a, 0,75 H), 7,88 (m, 1,4 H), 7,56 (m, 0,5 H), 7,55 (d, J = 5,9 Hz, 0,75 H), 7,37 (dd, J = 6,6, 5,1 Hz, 0,75 H),

5 7,26 (d, J = 5,9 Hz, 0,75 H), 7,20 (d, J = 5,9 Hz, 0,25 H), 6,65 (m, 0,25 H), 6,35 (m, 0,25 H), 6,15 (s a, 0,75 H), 1,55 (d, J = 7,0 Hz, 2,25 H), 1,35 (d, J = 6,3 Hz, 0,75 H) ppm. CL/EM (M+1, hallado = 374,0). La separación mediante CFS quiral del racemato proporcion� los enanti�meros individuales, (S)-N-(1-(6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5il)etil)-9H-purin-6-amina y (R)-N-(1-(6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina.

10 Ejemplo 2

1-(2-Bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanona:

15 Se disolvió una porción de 2,2 g (7,5 mmol) de 1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)-etanol en tolueno y se trat� con di�xido de manganeso (6,5 g, 75 mmol, 10 eq.). Se calentó la mezcla hasta 90�C durante la noche, entonces se enfri� hasta ta y se filtr� a través de Celite™. Se enjuag� la torta de filtración con tolueno y se concentr� proporcionando material bruto. Se purificó el residuo mediante cromatograf�a en columna usando acetato de etilo en

20 hexanos proporcionando 1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanona. CL/EM (M+1, hallado = 291,9). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,17 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 2,75 (s, 3H) ppm.

(R)-1-(2-Bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol:

En 30 ml de THF se disolvió (+)-DIP-Chloride(TM) (3,3 g, 10,2 mmol, 2,2 eq.) y se enfri� la disolución resultante hasta -55�C. A esta disolución se le a�adi� 1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanona en 10 ml de THF mediante c�nula, seguido por un enjuagado con 10 ml de THF. Se permitió que se calentase la reacción hasta TA

30 lentamente durante la noche y luego se extinguió con 5 ml de acetona y Na2CO3 sat. al 50%. Después de agitar durante 1 h, se diluyó la reacción con acetato de etilo (100 ml) y se transfirió a un embudo de decantación. Se lav� la fase orgánica con 2 x 50 ml de Na2CO3 sat. al 50%, 2 x 50 ml de agua y 2 x 50 ml de salmuera.

Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. Se logr� la purificación del producto bruto formando

35 una suspensión espesa en 20 ml de agua y 50 ml de hexanos. Se filtr� el sólido resultante y se secó durante la noche proporcionando un polvo blanco puro, (R)-1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol. HPLC quiral (Chiralcel-AD, isopropanol al 30% / hexanos) = e.e. del 92%. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,22 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 5,32 (dq, J = 5,9, 3,5 Hz, 1H), 2,17 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 1,56 (d, J = 6,3 Hz, 3H) ppm.

40 (S)-2-(1-(2-Bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

Se obtuvo (S)-2-(1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona a partir de (R)-1-(2-bromo-645 clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol de la manera descrita para 2-(1-(2-bromo-6-clorotieno[2,3-b]piridin-5il)etil)isoindolin-1,3-diona rac�mica. CL/EM (M+1, hallado = 423,0). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,40 (s, 1H), 7,82

(m, 2H), 7,72 (m, 2H), 5,92 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 1,92 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm. (S)-2-(1-(6-Clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

Se obtuvo (S)-2-(1-(6-clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona a partir de (S)-2-(1-(2-bromo-6clorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona de la manera descrita para 2-(1-(6-clorotieno[2,3-b]piridin-5il)etil)isoindolin-1,3-diona rac�mica. CL/EM (M+1, hallado = 343,0). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,52 (s, 1H), 7,82

10 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 7,54 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,95 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 1,95 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm.

(S)-1-(6-(3-Fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina:

En un matraz de reacción de fondo redondo de 25 ml se combin� tetrakistrifenil-fosfina-paladio (0) (25 mg, 22 %mol), ácido 3-fluorofenilbor�nico (67 mg, 481 %mol), carbonato de sodio (232 mg, 2188 %mol) y (S)-2-(1-(6-clorotieno-[2,3b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (150 mg, 438 %mol). Se purg� el matraz de reacción con nitrógeno antes de la 20 adición de 4 ml de acetonitrilo:agua 3:1. Se calentó la reacción hasta 90�C durante tres días, tiempo después del cual la reacción no era completa. Se sometió la reacción a tratamiento final eliminando el disolvente y repartiéndola entre 10 ml de diclorometano y 10 ml de agua. Se separ� la fase de diclorometano y se extrajo con 10 ml de Na2CO3 sat. al 50%. Se ajust� el pH de las fases ac. combinadas a 1 usando 20 ml de HCl 1 N, formándose un sólido blanco. Se le a�adi� diclorometano para disolver el sólido y se separ� la fase orgánica. Se extrajo la fase ac. dos veces con 25 10 ml de diclorometano y se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. Se disolvió el material bruto en 3 ml de MeCN y 1 ml de agua. A esto se le a�adi� 115 mg de Na2CO3, 35 mg de ácido 3-fluorofenilbor�nico y 13 mg de tetrakis-trifenilfosfina. Se calentó la reacción hasta 90�C durante la noche, entonces se enfri� hasta temperatura ambiente y se sometió a tratamiento final como anteriormente. Se sometió a cromatograf�a en columna (DCM:MEOH) proporcionando ácido 2-(((S)-1-(6-(3-fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-530 il)etil)carbamoil)benzoico. Entonces se disolvió el producto en 3 ml de etanol y se trat� con HCl concentrado (118 %l, 1427 %mol). Se calentó la reacción hasta 80�C durante 2 días, tiempo después del cual se le a�adi� una carga adicional de HCl (118 %l, 1427 %mol) y se calentó a 80�C durante 1 día. Se enfri� la reacción hasta ta y se diluyó con 6 ml de agua. Se ajust� el pH de la disolución a 10 usando NaOH 1 N. Se extrajo la reacción con diclorometano y se secó la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtr� y se concentr�. Se trat� el residuo con 2 ml de etanol, formándose una

35 suspensión. A esta suspensión se le a�adi� monohidrato de hidrazina (71 %l, 1427 %mol). Después de agitar a 60�C durante 2 h, se enfri� la reacción hasta ta y se diluyó con acetato de etilo, se filtr� y se concentr�. Se disolvió el residuo en 20 ml de acetato de etilo y se lav� con 1 x 3 ml de agua y 1 x 3 ml de salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtr�, se concentr� proporcionando (1S)-1-(6-(3-fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina en bruto. CL/EM (M+1, hallado = 273,0).

N-((S)-1-(6-(3-Fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina:

5 En un matraz de reacción se combin� (1S)-1-(6-(3-fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina (39 mg, 143 %mol), 6cloropurina (24 mg, 158 %mol), base de Hunig (38 %l, 215 %mol) y n-butanol (1,5 ml). Se calentó la disolución hasta 110�C. Después de 24 h, se elimin� el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatograf�a en columna usando un gradiente del 0-70% de (CH2Cl2:MeOH:NH4OH 90:9:1) en CH2Cl2 proporcionando N-((S)-1-(6-(3fluorofenil)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) # 12,90 (s a, 1H), 8,51 (s a,

10 1H), 8,34 (s a, 1H), 8,10 (m, 2H), 7,88 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,59 (m, 3H), 7,45 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,30 (t a, J = 6,3 Hz, 1H), 5,60 (s a, 1H), 1,44 (d a, J = 5,1 Hz, 3H) ppm. CL/EM (M+1, hallado = 391,1).

Ejemplo 3

15 Oxima de (E)-1-(5-clorotiofen-2-il)etanona:

Se combinaron 1-(5-clorotiofen-2-il)etanona (100g, 622 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (47,6 g, 685 mmol,

20 1,1 eq.) y acetato de sodio (56,2 g, 685 mmol, 1,1 eq.) en 1 l de etanol y 300 ml de agua. Se calentó la reacción a reflujo. Después de 3 h, se enfri� la reacción hasta ta y se concentr�. Se form� una suspensión espesa del residuo en 500 ml de agua durante la noche, se filtr� y se secó proporcionando el sólido bruto. Se purificó mediante extracción del sólido con diclorometano caliente, enfriamiento hasta ta y filtración para retirar el material de partida sin reaccionar. Se form� una suspensión espesa del sólido en diclorometano caliente varias veces para extraer el

25 sólido enriquecido en el compuesto que eluy� en primer lugar (oxima E) (DCM al 100%) después de concentración. Se purificó el material altamente cristalino mediante cromatograf�a en columna usando diclorometano al 100% proporcionando oxima de (E)-1-(5-clorotiofen-2-il)etanona. RMN (400 MHz, DMSO-d6) # 11,31 (s, 1H), 7,21 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 2,12 (s, 3H) ppm.

30 N-(5-Clorotiofen-2-il)acetamida:

Se disolvió oxima de (E)-1-(5-clorotiofen-2-il)etanona (10,7 g, 60,9 mmol) en 180 ml de acetona. A esta disolución se

35 le a�adi� cloruro de 4-metilbenceno-1-sulfonilo (11,61 g, 60,9 mmol, 1 eq.) e hidróxido de sodio (2,437 g, 60,9 mmol, 1 eq.) en 61 ml de agua a 0�C. Se permitió que se calentase la reacción hasta ta a lo largo de 1 h. Después de 3 h, se calentó la reacción hasta 60�C durante 1,5 h. Después de enfriar hasta ta, se elimin� el disolvente a vacío. Se disolvió el residuo en acetato de etilo (300 ml) y se lav� con agua, NaHCO3 sat. y salmuera. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. Se form� una suspensión espesa del residuo en 60 ml de diclorometano

40 caliente, se enfri� hasta 0�C y se filtr� proporcionando N-(5-clorotiofen-2-il)acetamida como un polvo gris. RMN (400 MHz, DMSO-d6) # 11,34 (s, 1H), 6,83 (d, J = 3,9, 1H), 6,42 (d, J =3,9 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H) ppm.

2,6-Diclorotieno [2,3-b]piridin-5-carbaldeh�do: A tricloruro de fosforilo (32,8 ml, 359 mmol) a 0�C se le a�adi� N,N-dimetil-formamida (11,90 ml, 154 mmol) gota a

5 gota. Después de agitar durante 20 min, se calentó la disolución hasta ta durante 30 min y se le a�adi� N-(5clorotiofen-2-il)acetamida (9 g, 51,2 mmol) como un sólido. Se calentó la mezcla hasta 75�C durante 4 h, se enfri� hasta ta y se vertió en 500 g de hielo-agua. Se agit� la reacción extinguida en un baño de hielo durante 30 minutos y se filtr�. Se secó el sólido a vacío durante la noche proporcionando el sólido bruto. Se extrajo el sólido bruto con acetato de etilo en ebullición y se decant� para separarlo de su alquitrán insoluble. Se concentr� la fase orgánica y

10 se recristaliz� el residuo en acetato de etilo proporcionando el producto puro. Se hicieron pasar las aguas madre a través de un lecho de gel de sílice y se recristalizaron en acetato de etilo proporcionando producto adicional, 2,6diclorotieno[2,3-b]piridin-5-carbaldeh�do. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 10,50 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,25 (s, 1H) ppm.

1-(2,6-Diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol: 15

A un matraz de reacción que contenía 2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-carbaldeh�do (5,1 g, 21,97 mmol) en 300 ml de THF a -20�C se le a�adi� cloruro de metilmagnesio, disolución 3,0 M en tetrahidrofurano (7,69 ml, 23,07 mmol) gota 20 a gota. Después de 1 h, se le a�adi� una carga adicional de 0,7 ml de MeMgCl. Después de 15 min, se extinguió la reacción mediante la adición de 50 ml de NH4Cl sat. y 50 ml de agua. Después de calentar hasta ta, se le a�adi� acetato de etilo y se separ� la fase orgánica y se lav� con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtr� y se concentr� proporcionando 1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)-etanol. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,19 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,32 (qdd, J = 6,3, 3,5, 0,8 Hz, 1H), 2,07 (J = 3,5 Hz, 1H), 1,56 (d, J = 6,6 Hz, 3H)

25 ppm.

1-(2,6-Diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanona:

30 A una disolución de 1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol (5 g, 20,15 mmol) en 200 ml de tolueno anhidro se le a�adi� MnO2 (14 g, 161 mmol). Se calentó la reacción a reflujo durante la noche, se enfri� hasta ta, se filtr� a través de Celite™ y se enjuag� con acetato de etilo. La concentración y purificación mediante cromatograf�a en columna proporcionaron 1-(2,6-diclorotieno[ 2,3-b]piridin-5-il)etanona. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,15 (s, 1H), 7,19 (s, 1H),

35 2,75 (s, 3H) ppm.

(R)-1-(2,6-Diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol:

40 Se disolvió 1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanona (3,6 g, 14,63 mmol) en THF (100 ml) y se enfri� hasta -55�C en un baño de hielo seco / MeCN. A esta disolución se le a�adi� una disolución de (+)-DIP-Chloride(TM) (10,32 g, 32,2 mmol) en THF gota a gota. Se permitió que se calentase la reacción lentamente hasta ta durante la noche y se extinguió mediante la adición de 10 ml de acetona y 50 ml de Na2CO3 sat. al 50%. Se agit� la reacción durante 1 h y

45 se diluyó con 400 ml de acetato de etilo. Se lav� la fase orgánica con 2 x 100 ml de Na2CO3 sat. al 50%, 2 x 100 ml de agua y 2 x 100 ml de salmuera. Se secó la reacción sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. Se form� una suspensión espesa del residuo en 100 ml de agua / 200 ml de hexanos durante 3 h para formar un prec. blanco que se filtr� y se secó proporcionando (R)-1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etanol. Se hall� que el exceso enantiom�rico determinado mediante HPLC quiral era = 99%. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,19 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,32 (qdd, J = 6,3, 3,5, 0,8 Hz, 1H), 2,07 (J = 3,5 Hz, 1H), 1,56 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ppm.

(S)-2-(1-(2,6-Diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

10 En un matraz de reacción se combin� ftalimida (1,530 g, 10,40 mmol), trifenilfosfina (2,73 g, 10,40 mmol), (R)-1-(2,6diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)-etanol (2,15 g, 8,66 mmol) y tetrahidrofurano (57,8 ml). Se enfri� la reacción hasta 0�C y se le a�adi� gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (2,043 ml, 10,40 mmol). Se retir� la reacción del baño de hielo y se permitió que se calentase hasta ta y se agitase durante la noche. Se diluyó la reacción con acetato de etilo

15 y se lav� con NaHCO3 y salmuera. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. La purificación usando acetato de etilo al 5-10% en hexanos proporcion� (S)-2-(1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin1,3-diona. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,37 (s, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,73 *m, 2H), 7,18 (s, 1H), 5,90 (q, 7,3 Hz, 1H), 1,90 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

20 (S)-2-(1-(6-Cloro-2-metiltieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

En un recipiente para microondas se combin� carbonato de potasio (183 mg, 1,325 mmol), trimetilboroxina

25 (0,018 ml, 0,133 mmol), (S)-2-(1-(2,6-diclorotieno[2,3-b]-piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (100 mg, 0,265 mmol), tetrakis-trifenil-fosfina-paladio (0) (45,9 mg, 0,040 mmol) y 2,5 ml de DMF. Se sometió la reacción a calentamiento mediante microondas durante 30 min a 120�C. Después de enfriar, se disolvió la reacción en acetato de etilo y se lav� con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. La purificación mediante cromatograf�a en columna proporcion� la (S)-2-(1-(6-cloro-2-metiltieno[2,3-b]-piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona impura (30 mg,

30 0,084 mmol, rendimiento del 31,7%). 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,31 (s, 1H), 7,81 (m, 2H), 7,71 (m, 2H), 6,95 (q, 1,2 Hz, 1H), 5,91 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 2,60 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 1,91 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

(S)-2-(1-(2-Metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona:

En un recipiente de reacción se combin� 2-(1,1,1-tributilestannil)piridina (0,124 ml, 0,370 mmol), tetrakistrifenilfosfina (0) (35,6 mg, 0,031 mmol), (S)-2-(1-(6-cloro-2-metiltieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (110 mg, 0,308 mmol) en dioxano (3 ml). Se calentó la reacción hasta 100�C durante 2 d, se enfri� hasta ta y se diluyó con acetato de etilo. Se lav� la fase orgánica con NaHCO3 y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtr� y se concentr�. La purificación mediante cromatograf�a en columna proporcion� (S)-2-(1-(2-metil-6-(piridin-2-il)tieno-[2,3b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,64 (ddd, J = 4,7, 1,8, 0,8 Hz, 1 H), 7,72 (td, J = 7,8, 2,0 Hz, 1H), 7,67 (m, 3H), 7,62 (m, 2H), 7,29 (ddd, J = 7,4, 4,9, 1,6 Hz, 1H), 6,98 (q, J = 1,4 Hz, 1H), 6,30 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 2,60 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 1,97 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

(S)-1-(2-Metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina:

Se calentó (S)-2-(1-(2-metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)isoindolin-1,3-diona (60 mg, 0,150 mmol) en una suspensión espesa en 3,5 ml de etanol hasta 60�C y se le a�adi� monohidrato de hidrazina (73,0 %l, 1,502 mmol). Se agit� la reacción a 60�C durante 2 h, se enfri� hasta TA y se diluyó con acetato de etilo. Se filtr� la reacción y se

15 concentr�. Se redisolvi� el residuo resultante en acetato de etilo y se lav� con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtr� y se concentr� proporcionando (S)-1-(2-metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etanamina en bruto. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 8,67 (ddd, J = 4,9, 2,7, 1,2 Hz, 1H), 8,19 (s, 1 H), 7,85 (m, 2H), 7,32 (ddd J = 7,0, 4,9, 1,8 Hz, 1H), 6,93 (q, J = 1,2 Hz, 1H), 4,60 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 2,63 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,20 (s a, 3H), 1,43 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. CL/EM (M+1, hallado = 270,1).

20 (S)-N-(1-(2-Metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina:

25 Se disolvió 6-cloropurina (26,4 mg, 0,171 mmol), (S)-1-(2-metil-6-(piridin-2-il)tieno-[2,3-b]piridin-5-il)etanamina (40 mg, 0,148 mmol) y base de Hunig (38,9 %l, 0,223 mmol) en 2 ml de n-butanol y se calentó hasta 120�C durante la noche. Se enfri� la reacción hasta ta y se purificó mediante cromatograf�a de fase inversa proporcionando (S)-N(1-(2-metil-6-(piridin-2-il)tieno[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9H-purin-6-amina. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) # 12,5 (s a, 1H), 8,78 (m a, 1H), 8,55-7,80 (serie de m, 6H), 7,60-7,30 (m a, 1H), 7,26 (m, 1H), 6,89 (s a, 1H), 6,40-6,00 (m a, 1H),

30 2,60 (s a, 3H), 1,60-1,25 (serie de M, 3H). CL/EM (M+1, hallado = 388,1).

Ensayos biológicos

Expresi�n recombinante de PI3K

35 Se coexpresaron subunidades p110 de longitud completa de PI3K !, ∀ y #, marcadas en el extremo N-terminal con cola de poliHis, con p85 con vectores de expresión de baculovirus en células de insecto sf9. Se purificaron heterod�meros de p110/p85 mediante cromatograf�a secuencial de Ni-NTA, Q-HP, Superdex-100. Se almacenaron las isozimas !, ∀ y # purificadas a -20�C en Tris 20 mM, pH 8, NaCl 0,2 M, glicerol al 50%, DTT 5 mM, colato de Na

40 2 mM. Se expresaron los residuos 114-1102 de PI3K∃ truncados, marcados en el extremo N-terminal con cola de poliHis, con baculovirus en células de insecto Hi5. Se purificó la isozima ∃ mediante cromatograf�a secuencial de Ni-NTA, Superdex-200, Q-HP. Se almacen� la isozima ∃ congelada a -80�C en NaH2PO4, pH 8, NaCl 0,2 M, etilenglicol al 1%, ∀-mercaptoetanol 2 mM.

Alfa: Beta Delta gamma

Tris 50 mM: pH 8 pH 7,5 pH 7,5 pH 8

MgCl2: 15 mM 10 mM 10 mM 15 mM

Colato de Na: 2 mM 1 mM 0,5 mM 2 mM

DTT: 2 mM 1 mM 1 mM 2 mM

ATP: 1 uM 0,5 uM 0,5 uM 1 uM

PIP2: ninguna 2,5 uM 2,5 uM ninguna

tiempo: 1 h 2 h 2 h 1 h

[Enzima]: 15 nM 40 nM 15 nM 50 nM

Ensayos enzim�ticos in vitro.

5 Se realizaron ensayos en 25 %l con las concentraciones finales anteriores de componentes en placas de polipropileno blancas (Costar 3355). El fosfoaceptor de fosfatidilinositol, PtdIns(4,5)P2 P4508, procedía de Echelon Biosciences. La actividad ATPasa de las isozimas alfa y gamma no se vio muy estimulada por PtdIns(4,5)P2 en estas condiciones y por tanto se omitió del ensayo de estas isozimas. Se disolvieron los compuestos de prueba en dimetilsulf�xido y se diluyeron con diluciones en serie de tres veces. Se a�adi� el compuesto en DMSO (1 %l) por

10 pocillo de prueba, y se determin� la inhibición con relación a reacciones que no contenían compuesto, con y sin enzima. Después de la incubaci�n del ensayo a ta, se detuvo la reacción y se determin� el ATP residual mediante la adición de un volumen igual de un kit de bioluminiscencia de ATP comercial (EasyLite de Perkin Elmer) según las instrucciones del fabricante, y se detect� usando un lumin�metro AnalystGT.

15 Proliferaci�n de células B humanas estimulada por anti-IgM

Aislamiento de células B humanas:

Aislar PBMC de Leukopac o de sangre fresca humana. Aislar células B humanas usando el protocolo de Miltenyi y el 20 kit de aislamiento de células B II. Se purificaron las células B humanas usando la columna AutoMacs.

Activaci�n de células B humanas

Usar placa de fondo plano de 96 pocillos, sembrar en placa 50000 células B purificadas/pocillo en medio de

25 proliferaci�n de células B (DMEM + FCS al 5%, Hepes 10 mM, 2-mercaptoetanol 50 %M); 150 %l de medio contienen proteína recombinante CD40L-LZ 250 ng/ml (Amgen) y anticuerpo anti-IgM humana 2 %g/ml (Jackson ImmunoReseach Lab. n.� 109-006-129), mezclados con 50 %l de medio de células B que contiene inhibidores de PI3K e incubar durante 72 h en incubador a 37�C. Después de 72 h, marcar con pulsos las células B con 0,5-1 uCi de 3H-timidina/pocillo durante la noche &18 h, y recoger las células usando el colector TOM.

30 Proliferaci�n de células B humanas estimulada por IL-4

Aislamiento de células B humanas:

35 Aislar PBMC humanas de Leukopac o de sangre fresca humana. Aislar células B humanas usando el protocolo de Miltenyi y el kit de aislamiento de células B. Se purificaron las células B humanas mediante la columna AutoMacs.

Activaci�n de células B humanas

40 Usar placa de fondo plano de 96 pocillos, sembrar en placa 50000 células B purificadas/pocillo en medio de proliferaci�n de células B (DMEM + FCS al 5%, 2-mercaptoetanol 50 %M, Hepes 10 mM). El medio (150 %l) contiene proteína recombinante CD40L-LZ 250 ng/ml (Amgen) e IL-4 10 ng/ml (R&D System n.� 204-IL-025), mezclado con 50 -150 %l de medio de células B que contiene compuestos e incubar durante 72 h en incubador a 37�C. Después de 72 h, marcar con pulsos las células B con 0,5-1 uCi de 3H-timidina/pocillo durante la noche &18 h, y recoger las

45 células usando el colector TOM.

Ensayos de proliferaci�n de PBMC humanas inducidas por ant�geno específico de células T (toxoide tetánico)

Se preparan PBMC humanas a partir de reservas congeladas o se purifican a partir de sangre humana fresca

50 usando un gradiente de Ficoll. Usar placa de fondo redondo de 96 pocillos y sembrar en placa 2x105 PBMC/pocillo con medio de cultivo (RPMI1640 + FCS al 10%, 2-mercaptoetanol 50 uM, Hepes 10 mM). Para determinaciones de CI50, se sometieron a prueba inhibidores de PI3K desde 10 %M hasta 0,001 %M, en incrementos semilogar�tmicos y por triplicado. Se le a�adi� toxoide tetánico, ant�geno específico de células T (Universidad de Massachusetts Lab) a 1 %g/ml y se incub� 6 días en incubador a 37�C. Se recogen los sobrenadantes después de 6 días para ensayo

55 ELISA de IL2, entonces se pulsan las células con 3H-timidina durante &18 h para medir la proliferaci�n.

Ensayos de GFP para detectar la inhibición PI3K de clase Ia y clase III AKT1 (PKBa) est� regulada por PI3K de clase Ia activada por mediante factores mitog�nicos (IGF-1, PDGF, insulina,

trombina, NGF, etc.). En respuesta a estímulos mitog�nicos, AKT1 se transloca del citosol a la membrana plasm�tica. Forkhead (FKHRL1) es un sustrato para AKT1. Es citoplasmática cuando se fosforila por AKT

(supervivencia/crecimiento). Inhibición de AKT (estasis/apoptosis) -translocaci�n de Forkhead al núcleo Los dominios FYVE se unen a PI(3)P. La mayoría se genera mediante la acción constitutiva de PI3K clase III

Ensayo de ondulamiento de membrana de AKT (células CHO-IR-AKTI-EGFP/GE Healthcare)

Lavar las células con tampón de ensayo. Tratar con compuestos en tampón de ensayo durante 1 h. Añadir insulina 10 ng/ml. Fijar después de 10 min a temperatura ambiente y obtener imágenes

Ensayo de translocaci�n de Forkhead (células MDA MB468 Forkhead-DiversaGFP)

Tratar las células con compuesto en medio de crecimiento durante 1 h. Fijar y obtener imágenes.

Ensayo de PI(3)P de clase III (células U2OS EGFP-2XFYVE/GE Healthcare)

Lavar las células con tampón de ensayo. Tratar con compuestos en tampón de ensayo durante 1 h. Fijar y obtener imágenes.

El control para los 3 ensayos es wortmanina 10 uM:

AKT es citoplasmática

Forkhead es nuclear

PI(3)P reducido de endosomas

Ensayo de biomarcadores: estimulaci�n por receptores de células B de la expresión de CD69 o B7.2 (CD86)

Se estimul� sangre completa humana heparinizada con anti-IgD 10 %g/ml (Southern Biotech, n.� 9030-01). Se tomaron entonces alícuotas de 90 %l de la sangre estimulada por pocillo de una placa de 96 pocillos y se trataron con 10 %l de diversas concentraciones de compuesto de bloque (desde 10-0,0003 %M) diluido en IMDM + FBS al 10% (Gibco). Se incubaron las muestras juntas durante de 4 h (para la expresión de CD69) a 6 h (para la expresión de B7.2) a 37�C. Se transfirió la sangre tratada (50 %l) a una placa de pocillos profundos, de 96 pocillos (Nunc) para la tinción de anticuerpo con 10 %l de cada uno de CD45-PerCP (BD Biosciences, n.� 347464), CD19-FITC (BD Biosciences, n.� 340719) y CD69-PE (BD Biosciences, n.� 341652). Se transfirieron los segundos 50 %l de la sangre tratada a una segunda placa de pocillos profundos, de 96 pocillos para la tinción de anticuerpo con 10 %l de cada uno de CD19-FITC (BD Biosciences, n.� 340719) y CD86-PeCy5 (BD Biosciences, n.� 555666). Se realizaron todas las tinciones durante 15-30 min en la oscuridad a ta. Entonces se lis� la sangre y se fij� usando 450 %l de disolución de lisis para FACS (BD Biosciences, n.� 349202) durante 15 min a ta. Entonces se lavaron las muestras 2 veces en PBS + FBS al 2% antes del análisis mediante FACS. Se clasificaron las muestras o bien en células doblemente positivas para CD45/CD19 para la tinción de CD69, o bien células positivas para CD19 para la tinción de CD86.

Contraselecci�n gamma: estimulaci�n de monocitos humanos para la expresión de fosfo-AKT

Se mantuvo una línea celular de monocitos humanos, THP-1, en RPMI + FBS al 10% (Gibco). Un día antes de la estimulaci�n, se contaron las células usando exclusión con azul tr�pano en un hemocit�metro y se suspendieron a una concentración de 1 x 106 células por ml de medios. Entonces se tomaron alícuotas de 100 %l de células más medios (1 x 105 células) por pocillo de placas de pocillos profundos de 4-96 pocillos (Nunc) para someter a prueba ocho compuestos diferentes. Se dejaron en reposo las células durante la noche antes del tratamiento con diversas concentraciones (desde 10-0,0003 %M) de compuesto de bloqueo. Se a�adi� el compuesto diluido en medios (12 %l) a las células durante 10 min a 37�C. Se diluyó MCP-1 humana (12 %l, R&D Diagnostics, n.� 279-MC) en medios y se a�adi� a cada pocillo a una concentración final de 50 ng/ml. La estimulaci�n dur� 2 min a ta. Se a�adi� tampón de lisis/fijación Phosflow para FACS precalentado (1 ml de 37�C) (BD Biosciences, n.� 558049) a cada pocillo. Entonces se incubaron las placas a 37�C durante unos 10-15 min adicionales. Se centrifugaron las placas a 1500 rpm durante 10 min, se retir� por aspiración el sobrenadante y se a�adi� 1 ml de MeOH al 90% enfriado en hielo a cada pocillo con agitaci�n vigorosa. Entonces se incubaron las placas o bien durante la noche a -70�C o bien en hielo durante

30 min antes de la tinción de anticuerpo. Se centrifugaron las placas y se lavaron 2 veces en PBS + FBS al 2% (Gibco). Se aspir� el lavado y se suspendieron las células en el tampón restante. Se a�adi� pAKT de conejo (50 %l, Cell Signaling, n.� 4058L) a 1:100, a cada muestra durante 1 h a ta con agitaci�n. Se lavaron las células y se centrifugaron a 1500 rpm durante 10 min. Se aspir� el sobrenadante y se suspendieron las células en el tampón restante. Se a�adi� anticuerpo secundario, anticuerpo de cabra anti-Alexa 647 de conejo (50 %l, Invitrogen, n.� A21245) a 1:500, durante 30 min a ta con agitaci�n. Entonces se lavaron las células 1 vez en tampón y se suspendieron en 150 %l de tampón para análisis mediante FACS. Es necesario dispersar las células muy bien mediante pipeteo antes de aplicarlas en un cit�metro de flujo. Se aplicaron las células a un aparato LSR II (Becton Dickinson) y se clasificaron con dispersi�n directa y lateral para determinar los niveles de expresión de pAKT en la población de monocitos.

Contraselecci�n gamma: estimulaci�n de monocitos para la expresión de fosfo-AKT en médula ósea de ratón

Se diseccionaron fémures de ratón de cinco ratones BALB/c hembra (Charles River Labs.) y se recogieron en medios RPMI + FBS al 10% (Gibco). Se retir� la médula ósea de ratón mediante corte de los extremos del fémur y mediante lavado con 1 ml de medios usando una aguja de calibre 25. Entonces se dispers� la médula ósea en medios usando una aguja de calibre 21. Se aument� el volumen de medios hasta 20 ml y se contaron las células usando exclusión con azul tr�pano en un hemocit�metro. Entonces se aument� la suspensión celular hasta 7,5 x 106 células por 1 ml de medios y se tomaron alícuotas de 100 %l (7,5 x 105 células) por pocillo en placas de pocillos profundos de 4-96-pocillos (Nunc) para someter a prueba ocho compuestos diferentes. Se dejaron en reposo las células a 37�C durante 2 h antes del tratamiento con diversas concentraciones (desde 10-0,0003 %M) de compuesto de bloqueo. Se a�adi� el compuesto diluido en medios (12 %l) a células de médula ósea durante 10 min a 37�C. Se diluyó MCP-1 de ratón (12 %l, R&D Diagnostics, n.� 479-JE) en medios y se a�adi� a cada pocillo a una concentración final de 50 ng/ml. La estimulaci�n dur� 2 min a ta. Se a�adi� 1 ml de tampón de lisis/fijación Phosflow para FACS precalentado a 37�C (BD Biosciences, n.� 558049) a cada pocillo. Entonces se incubaron las placas a 37�C durante unos 10-15 min adicionales. Se centrifugaron las placas a 1500 rpm durante 10 min. Se retir� por aspiración el sobrenadante y se a�adi� 1 ml de MeOH al 90% enfriado en hielo a cada pocillo con agitaci�n vigorosa. Entonces se incubaron las placas o bien durante la noche a -70�C o bien en hielo durante 30 min antes de la tinción de anticuerpo. Se centrifugaron las placas y se lavaron 2 veces en PBS + FBS al 2% (Gibco). Se aspir� el lavado y se suspendieron las células en el tampón restante. Se a�adi� entonces Fc block (2 %l, BD Pharmingen, n.� 553140) por pocillo durante 10 min a ta. Después del bloqueo, se añadieron 50 %l de anticuerpos primarios diluidos en tampón; CD11b-Alexa488 (BD Biosciences, n.� 557672) a 1:50, CD64-PE (BD Biosciences, n.� 558455) a 1:50 y pAKT de conejo (Cell Signaling, n.� 4058L) a 1:100, a cada muestra durante 1 h a TA con agitaci�n. Se a�adi� tampón de lavado a las células y se centrifugaron a 1500 rpm durante 10 min. Se aspir� el sobrenadante y se suspendieron las células en el tampón restante. Se a�adi� anticuerpo secundario; anticuerpo de cabra anti-Alexa 647 de conejo (50 %l, Invitrogen, n.� A21245) a 1:500, durante 30 min a ta con agitaci�n. Entonces se lavaron las células 1 vez en tampón y se suspendieron en 100 %l de tampón para análisis mediante FACS. Se aplicaron las células en un aparato LSR II (Becton Dickinson) y se clasificaron en células doblemente positivas para CD11b/CD64 para determinar los niveles de expresión de pAKT en la población de monocitos.

Ensayo de pAKT in vivo

Se administran vehículo y compuestos por v.o. (0,2 ml) mediante sonda nasog�strica (agujas de sonda nasog�stricas de Popper & Sons, New Hyde Park, NY) a ratones (línea transg�nica 3751, hembras, de 10-12 semanas. Amgen Inc, Thousand Oaks, CA) 15 min antes de la inyección i.v. (0,2 ml) de anti-IgM-FITC (50 ug/ratón) (Jackson Immuno Research, West Grove, PA). Después de 45 min se sacrifican los ratones dentro de una cámara de CO2. Se extrae sangre mediante punci�n cardiaca (0,3 ml) (jeringas de 25 g de 1 cc, Sherwood, St. Louis, MO) y se transfiere a un vial c�nico de 15 ml (Nalge/Nunc International, Dinamarca). Se fija inmediatamente la sangre con 6,0 ml de tampón de lisis/fijación BD Phosflow (BD Bioscience, San Jose, CA), se invierten 3 veces y se colocan en un baño de agua a 37�C. Se extirp� la mitad del bazo y se transfirió a un tubo Eppendorf que contenía 0,5 ml de PBS (Invitrogen Corp, Grand Island, NY). Se tritur� el bazo usando una trituradora de tejido (Pellet Pestle, Kimble/Kontes, Vineland, NJ) y se fij� inmediatamente con 6,0 ml de tampón de lisis/fijación BD Phosflow, se invirtió 3 veces y se colocó en un baño de agua a 37�C. Una vez que se han recogido los tejidos, se somete el ratón a dislocación cervical y se desecha la canal. Después de 15 min, se retiran los viales c�nicos de 15 ml del baño de agua a 37�C y se colocan en hielo hasta que se procesan adicionalmente los tejidos. Se filtran los bazos triturados a través de un filtro de células de 70 %m (BD Bioscience, Bedford, MA) a otro vial c�nico de 15 ml y se lava con 9 ml de PBS. Se centrifugan los esplenocitos y la sangre a 2.000 rpm durante 10 min (frío) y se aspira el tampón. Se resuspenden las células en 2,0 ml de alcohol met�lico al 90% frío (-20�C) (Mallinckrodt Chemicals, Phillipsburg, NJ). Se añade lentamente MeOH mientras que se agita en v�rtex rápidamente el vial c�nico. Entonces se almacenan los tejidos a -20�C hasta que pueden teñirse las células para análisis mediante FACS.

Inmunizaci�n de TNP de múltiples dosis

Se recogió sangre mediante extracciones retroorbitarias de ratones hembra BALB/c de 7-8 semanas de edad (Charles River Labs.) en el día 0 antes de la inmunizaci�n. Se permitió que se coagulase la sangre durante 30 min y

se centrifug� a 10.000 rpm en tubos Microtainer para suero (Becton Dickinson) durante 10 min. Se recogieron los sueros, se tomaron alícuotas en tubos Matrix (Matrix Tech. Corp.) y se almacenaron a -70�C hasta que se realizó el ELISA. Se les administr� a los ratones compuesto por vía oral antes de la inmunizaci�n y en periodos de tiempo posteriores basándose en la vida de la molécula. Entonces se inmunizaron los ratones con o bien 50 %g de TNP-LPS (Biosearch Tech., n.� T-5065), 50 %g de TNP-Ficoll (Biosearch Tech., n.� F-1300) o bien 100 %g de TNP-KLH (Biosearch Tech., n.� T-5060) más alumbre al 1% (Brenntag, n.� 3501) en PBS. Se prepar� la disolución de TNP-KLH más alumbre mediante inversión suave de la mezcla 3-5 veces cada10 min durante 1 h antes de la inmunizaci�n. En el día 5, tras el último tratamiento, se sacrificaron los ratones con CO2 y se les realizó punci�n cardiaca. Se permitió que se coagulase la sangre durante 30 min y se centrifug� a 10.000 rpm en tubos Microtainer para suero durante 10 min. Se recogieron los sueros, se tomaron alícuotas en tubos Matrix y se almacenaron a 70�C hasta que se realizó el análisis adicional. Entonces se midieron los niveles de IgG1, IgG2a, IgG3 e IgM específicas de TNP en los sueros mediante ELISA. Se us� TNP-BSA (Biosearch Tech., n.� T-5050) para capturar los anticuerpos específicos de TNP. Se us� TNP-BSA (10 %g/ml) para recubrir placas para ELISA de 384 pocillos (Coming Costar) durante la noche. Entonces se lavaron las placas y se bloquearon durante 1 h usando disolución de bloqueo para ELISA de BSA al 10% (KPL). Después del bloqueo, se lavaron las placas para ELISA y se diluyeron en serie muestras/patrones de suero y se permitió que se unieran a las placas durante 1 h. Se lavaron las placas y se diluyeron anticuerpos secundarios conjugados con Ig-HRP (anticuerpo de cabra anti-IgG1 de ratón, Southern Biotech n.� 1070-05, anticuerpo de cabra anti-IgG2a de ratón, Southern Biotech n.� 1080-05, anticuerpo de cabra anti-IgM de ratón, Southern Biotech n.� 1020-05, anticuerpo de cabra anti-IgG3 de ratón, Southern Biotech n.� 110005) a 1:5000 y se incubaron en las placas durante 1 h. Se us� disolución de TMB-peroxidasa (SureBlue Reserve TMB de KPL) para visualizar los anticuerpos. Se lavaron las placas y se permitió que se revelasen las muestras en la disolución de TMB durante aproximadamente 5-20 min dependiendo de la Ig analizada. Se detuvo la reacción con ácido sulfúrico 2 M y se leyeron las placas a una DO de 450 nm.

Para el tratamiento de enfermedades mediadas por PI3K#, tales como artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, los compuestos de la presente invención pueden administrarse por vía oral, por vía parental, mediante pulverización para inhalaci�n, por vía rectal o por vía típica en formulaciones unitarias de dosificación que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmac�uticamente aceptables convencionales. El término parenteral tal como se usa en el presente documento incluye técnicas de infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, o por vía intraperitoneal.

Se pretende que el tratamiento de enfermedades y trastornos en el presente documento también incluya la administración profiláctica de un compuesto de la invención, una sal farmacéutica del mismo, o una composición farmacéutica de cualquiera a un sujeto (es decir, un animal, preferiblemente un mamífero, lo más preferiblemente un ser humano) que se cree que necesita tratamiento preventivo, tal como, por ejemplo, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias y similares.

El régimen de dosificación para tratar enfermedades mediadas por PI3K#, cáncer y/o hiperglucemia con los compuestos de esta invención y/o las composiciones de esta invención se basa en una variedad de factores, incluyendo el tipo de enfermedad, la edad, el peso, el sexo, el estado m�dico del paciente, la gravedad del estado, la vía de administración y el compuesto particular empleado. Por tanto, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero puede determinarse de manera rutinaria usando métodos convencionales. Los niveles de dosificación del orden de desde aproximadamente 0,01 mg hasta 30 mg por kilogramo de peso corporal al día, preferiblemente de desde aproximadamente 0,1 mg hasta 10 mg/kg, más preferiblemente de desde aproximadamente 0,25 mg hasta 1 mg/kg son útiles para todos los métodos de uso dados a conocer en el presente documento.

Los compuestos farmac�uticamente activos de esta invención pueden procesarse según métodos de farmacia convencional para producir agentes medicinales para la administración a pacientes, incluyendo seres humanos y otros mamíferos.

Para la administración oral, la composición farmacéutica puede estar en forma, por ejemplo, de un comprimido, cápsula, suspensión o líquido. La composición farmacéutica se prepara preferiblemente en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del principio activo. Por ejemplo, éstas pueden contener una cantidad de principio activo de desde aproximadamente 1 hasta 2000 mg, preferiblemente de desde aproximadamente 1 hasta 500 mg, más preferiblemente de desde aproximadamente 5 hasta 150 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente dependiendo del estado del paciente y otros factores, pero, una vez más, puede determinarse usando métodos de rutina.

El principio activo también puede administrarse mediante inyección como una composición con portadores adecuados incluyendo solución salina, dextrosa o agua. El régimen de dosificación parenteral diario ser� de desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal total, preferiblemente de desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 10 mg/kg, y más preferiblemente de desde aproximadamente

0,25 mg hasta 1 mg/kg.

Pueden formularse preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones ac. u oleaginosas inyectables estériles, según la técnica conocida usando agentes de suspensión y agentes de dispersi�n o humectantes adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable por vía parenteral no tóxico, por ejemplo, como una disolución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse est�n agua, solución de Ringer y disolución de cloruro de sodio isot�nica. Además, convencionalmente se emplean aceites estériles fijos como medio de suspensión o disolvente. Con este fin puede emplearse cualquier aceite fijo insípido incluyendo mono o diglic�ridos sintéticos. Además, se usan ácidos grasos tales como ácido oleico en la preparación de productos inyectables.

Pueden prepararse supositorios para la administración rectal del fármaco mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao y polietilenglicoles que son sólidos a temperaturas habituales pero líquidos a la temperatura rectal y por tanto se fundirán en el recto y liberarán el fármaco.

Una dosis típica adecuada de principio activo de un compuesto de la invención es de 0,1 mg a 150 mg administrados de una a cuatro, preferiblemente una o dos veces al día. Para la administración típica, el principio activo puede comprender desde el 0,001% hasta el 10% p/p, por ejemplo, desde el 1% hasta el 2% en peso de la formulación, aunque puede comprender hasta el 10% p/p, pero preferiblemente no más del 5% p/p, y más preferiblemente desde el 0,1% hasta el 1% de la formulación.

Las formulaciones adecuadas para administración típica incluyen preparaciones líquidas o semil�quidas adecuadas para su penetraci�n a través de la piel (por ejemplo, linimentos, lociones, pomadas, cremas o pastas) y gotas adecuadas para su administración al ojo, oído o nariz.

Para la administración, los compuestos de esta invención se combinan de manera ordinaria con uno o más adyuvantes apropiados para la vía de administración indicada. Los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosf�rico y sulfúrico, goma arábiga, gelatina, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o poli(alcohol vin�lico), y prepararse como comprimidos o encapsularse para la administración convencional. Alternativamente, los compuestos de esta invención pueden disolverse en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, goma tragacanto y/o diversos tampones. Otros adyuvantes y modos de administración se conocen bien en la técnica farmacéutica. El portador o diluyente puede incluir material de retardo temporal, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solos o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la técnica.

Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse en forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o supositorios) o en forma líquida (por ejemplo, disoluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservantes, estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc.

Las formas de dosificación sólidas para la administración oral pueden incluir cápsulas, comprimidos, pastillas, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica habitual, sustancias adicionales distintas de diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de cápsulas, comprimidos y pastillas, las formas de dosificación también pueden comprender agentes tamponantes. Los comprimidos y las pastillas pueden prepararse adicionalmente con recubrimientos ent�ricos.

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral pueden incluir emulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmac�uticamente aceptables que contienen diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua. Tales composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes.

Los compuestos de la presente invención pueden tener uno o más átomos de carbono asimétricos y por tanto pueden existir en forma de isómeros ópticos as� como en forma de mezclas rac�micas o no rac�micas de los mismos. Los isómeros ópticos pueden obtenerse mediante resolución de las mezclas rac�micas según procedimientos convencionales, por ejemplo, mediante la formación de sales diastereoisom�ricas, mediante el tratamiento con un ácido o una base �pticamente activos. Ejemplos de ácidos apropiados son ácido tartárico, diacetiltart�rico, dibenzoiltart�rico, ditoluoiltart�rico y canforsulf�nico y luego separación de la mezcla de diastereois�meros mediante cristalización seguida por la liberación de las bases �pticamente activas de esas sales. Un procedimiento diferente para la separación de isómeros ópticos implica el uso de una columna de cromatograf�a quiral elegida de manera óptima para maximizar la separación de los enanti�meros. Todavía otro método disponible implica la síntesis de moléculas diastereoisom�ricas covalentes haciendo reaccionar los compuestos de la invención con un ácido �pticamente puro en una forma activada o un isocianato �pticamente puro. Los diastereois�meros sintetizados pueden separarse por medios convencionales tales como cromatograf�a, destilación, cristalización o

sublimaci�n, y luego hidrolizarse para suministrar el compuesto enantiom�ricamente puro. Los compuestos �pticamente activos de la invención pueden obtenerse asimismo usando materiales de partida activos. Estos isómeros pueden estar en forma de un ácido libre, una base libre, un éster o una sal.

Asimismo, los compuestos de esta invención pueden existir como isómeros, es decir compuestos de la misma fórmula molecular pero en la que los átomos, unos con relación a otros, est�n dispuestos de diferente manera. En particular, los sustituyentes de alquileno de los compuestos de esta invención, est�n dispuestos e insertados normal y preferiblemente en las moléculas tal como se indica en las definiciones para cada uno de estos grupos, leyéndose de izquierda a derecha. Sin embargo, en determinados casos, un experto en la técnica apreciar� que es posible preparar compuestos de esta invención en los que se invierte la orientación de esos sustituyentes con relación a los demás átomos en la molécula. Es decir, el sustituyente que va a insertarse puede ser el mismo que se indicó anteriormente excepto porque se inserta en la molécula en la orientación inversa. Un experto en la técnica apreciar� que ha de interpretarse que estas formas isom�ricas de los compuestos de esta invención est�n abarcadas dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención pueden usarse en forma de sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Las sales incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, nicotinato, 2naftalenosulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 2-fenil-propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, mesilato y undecanoato. Además los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior, tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. De ese modo se obtienen productos solubles o dispersables en agua o aceite.

Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición de ácido farmac�uticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosf�rico y ácidos orgánicos tales como ácido ox�lico, ácido maleico, ácido succ�nico y ácido cítrico. Otros ejemplos incluyen sales con metales alcalinos o metales alcalinot�rreos, tales como sodio, potasio, calcio o magnesio o con bases orgánicas.

Tambi�n est�n abarcados dentro del alcance de la presente invención ésteres farmac�uticamente aceptables de un grupo que contiene hidroxilo o ácido carbox�lico, incluyendo un éster metab�licamente l�bil o una forma de prof�rmaco de un compuesto de esta invención. Un éster metab�licamente l�bil es uno que puede producir, por ejemplo, un aumento en los niveles en sangre o prolongar la eficacia de la forma no esterificada correspondiente del compuesto. Una forma de prof�rmaco es una que no est� en una forma activa de la molécula tal como se administra sino que se vuelve terapéuticamente activa después de cierta biotransformaci�n o actividad in vivo, tal como metabolismo, por ejemplo, escisión enzim�tica o hidrol�tica. Para un comentario general de prof�rmacos que implican ésteres véanse Svensson y Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de un ani�n carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alqu�licos (por ejemplo, met�lico, etílico), cicloalqu�licos (por ejemplo, ciclohex�lico), aralqu�licos (por ejemplo, benc�lico, p-metoxibenc�lico) y alquilcarboniloxialqu�licos (por ejemplo, pivaloiloximet�lico). Se han enmascarado aminas como derivados sustituidos con arilcarboniloximetilo que se escinden por esterasas in vivo liberando el fármaco libre y formaldeh�do (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Además, se han enmascarado fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol y similares, con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Se han enmascarado grupos hidroxilo como ésteres y �teres. El documento EP 039.051 (Sloan y Little, 4/11/81) da a conocer prof�rmacos de ácido hidrox�mico-base de Mannich, su preparación y uso. Los ésteres de un compuesto de esta invención, pueden incluir, por ejemplo, los ésteres met�lico, etílico, prop�lico y but�lico, as� como otros ésteres adecuados formados entre un resto ácido y un resto que contiene hidroxilo. Los ésteres metab�licamente l�biles, pueden incluir, por ejemplo, grupos metoximetilo, etoximetilo, isopropoximetilo, !-metoxietilo, tales como !-(alquiloxi (C1-C4))etilo, por ejemplo, grupos metoxietilo, etoxietilo, propoxietilo, isopropoxietilo, etc.; 2-oxo-1,3-dioxolen-4-ilmetilo, tales como 5-metil-2-oxo-1,3,dioxolen-4-ilmetilo, etc.; grupos alquiltiometilo C1-C3, por ejemplo, grupos metiltiometilo, etiltiometilo, isopropiltiometilo, etc.; grupos aciloximetilo, por ejemplo, pivaloiloximetilo, !-acetoximetilo, etc.; etoxicarbonil-1-metilo; o grupos !-aciloxi-!-metilo sustituido, por ejemplo !-acetoxietilo.

Adem�s, los compuestos de la invención pueden existir como sólidos cristalinos que pueden cristalizarse en disolventes comunes tales como etanol, N,N-dimetil-formamida, agua, o similar. Por tanto, las formas cristalinas de los compuestos de la invención pueden existir como polimorfos, solvatos y/o hidratos de los compuestos originales o su sales farmac�uticamente aceptables. Asimismo, ha de interpretarse que todas estas formas se encuentran dentro del alcance de la invención.

Aunque los compuestos de la invención pueden administrarse como el único principio activo farmacéutico, también pueden usarse en combinación con uno o más compuestos de la invención u otros agentes. Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos pueden formularse como composiciones separadas que se administran a la vez o en momentos diferentes, o los agentes terapéuticos pueden administrarse como una única composición.

Lo anterior es meramente ilustrativo de la invención y no pretende limitar la invención a los compuestos dados a conocer.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto que tiene la estructura:

o cualquier sal farmac�uticamente aceptable del mismo, en la que:

X1 es C(R10) o N;

10 X2 es C(R6) o N;

X3 es C(R7) o N;

15 X4 es C(R10) o N;

Y es N(R8), CRaRa, S u O;

R1 se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa,

20 -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa,-S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRa-alk C2-6-NRaRa, -NRa-alk C2-6-ORa, -NRaalk C2-6-CO2Ra, -NRa-alk C2-6-SO2Rb, -CH2 C(=O)Ra, -CH2C(=O)ORa, -CH2C(=O)NRaRa,

25 -CH2C(=NRa)NRaRa, -CH2ORa, -CH2OC(=O)Ra, -CH2OC(=O)NRaRa, -CH2OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -CH2O-alk C2-6-NRaRa, -CH2O-alk C2-6-ORa, -CH2SRa, -CH2S(=O)Ra, -CH2S(=O)2Rb, -CH2S(=O)2NRaRa, -CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -CH2S(=O)2N(Ra)C (=O)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N(Ra)C(=O)Ra, -CH2N(Ra)C(=O)ORa, -CH2N(Ra) C(=O)NRaRa, -CH2N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -CH2N(Ra)S(=O)2Ra, -CH2N(Ra)S(=O)2 NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-NRaRa, -CH2NRa-alk C2-6-ORa, -CH2NRa-alk

30 C2-6-CO2Ra y -CH2NRa-alk C2-6-SO2Rb; o R1 es un anillo monoc�clico de 3, 4, 5, 6 � 7 miembros o bic�clico de 8, 9, 10 u 11 miembros unido directamente, con unión a alk C1-4, con unión a O-alk C1-2, con unión a alk C1-2-O, con unión a N(Ra) o con unión a O saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un átomo de O o S, sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro,

35 C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)OR’, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos

40 adicionalmente con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, y en el que el anillo est� sustituido adicionalmente con 0 � 1 grupo unido directamente, con unión a SO2, con unión a C(=O) o con unión a CH2 seleccionado de fenilo, piridilo, pirimidilo, morfolino, piperazinilo, piperadinilo, pirrolidinilo, ciclopentilo, ciclohexilo todos los cuales est�n sustituidos además con 0, 1, 2 � 3 grupos seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, C(=O)Ra, -C(=O)ORa; -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)R’, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra,

45 S(=O)2NRaRa, -NRaRa, y -N(Ra)C(=O)Ra;

R2 se selecciona de un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros o bic�clico de 8, 9, 10 u 11 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de un O o S, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n 50 sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en el que el anillo est� sustituido con 0 � 1 sustituyentes R2, y el anillo est� sustituido adicionalmente con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, C1-6-alk, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NR)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, 55 -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa; o R3 se selecciona de halo, alk C1-6, haloalk

C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(R)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa;

R3 se selecciona de H, halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, O-haloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)-alk C1-4, C(=O)NH2, C(=O)NH-alk C1-4, C(=O)N(alk C1-4)-alk C1-4, N(H)C(=O)-alk C1-4, N(alk C1-4)C(=O)-alk C1-4 y haloalk C1-4;

R4 se selecciona de H, halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, O-haloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)-alk C1-4, C(=O)NH2, C(=O)NH-alk C1-4, C(=O)N(alk C1-4)-alk C1-4, N(H)C(=O)-alk C1-4, N(alk C1-4)C(=O)-alk C1-4 y haloalk C1-4;

R5 es, independientemente, en cada caso, H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4 o alk C1-6 sustituido con 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C14 y N(alk C1-4)-alk C1-4; o ambos grupos R5 forman juntos un espiroalk C3-6 sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C1-4 y N(alk C1-4)-alk C1-4;

R6 se selecciona de halo, ciano, OH, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NHR9, N(alk C1-4)-alk C1-4, -C(=O)ORa, -C(=O)N(Ra)Ra, -N(Ra)C(=O)Rb y un anillo heteroc�clico de 5 � 6 miembros saturado o parcialmente saturado que contiene 1, 2 � 3 heteroat�mos seleccionados de N, O y S, en el que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, oxo, O-alk C1-4, alk C1-4, haloalk C1-3, O-alk C1-4, NH2, NH-alk C1-4 y N(alk C1-4)-alk C1-4;

R7 se selecciona de H, halo, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(-O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa, -NRa-alk C2-6-ORa y alk C1-6, en los que el alk C1-6 est� sustituido con 0, 1 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NR’)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa, y el alk C1-6 est� sustituido adicionalmente con 0 � 1 anillos monoc�clicos de 5, 6 � 7 miembros saturados, parcialmente saturados o insaturados que contienen 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contienen más de un O o S, en los que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en los que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, alk C1-4, O-alk C1-4, Ohaloalk C1-4, NH-alk C1-4, N(alk C1-4)-alk C1-4 y haloalk C1-4; o R7 y R8 forman juntos un puente -C=N en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, ciano, o un anillo monoc�clico de 5, 6 � 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene 0, 1, 2, 3 � 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de un O o S, en el que los átomos de carbono disponibles del anillo est�n sustituidos con 0, 1 � 2 grupos oxo o tioxo, en el que el anillo est� sustituido con 0, 1, 2, 3 � 4 sustituyentes seleccionados de halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(-O)2N(Ra)C(=O)ORa, S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa; o R7 y R9 forman juntos un puente -N=C-en el que el átomo de carbono est� sustituido con H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, ORa, NRaRa, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -S(=O)Ra, S(=O)2Ra o -S(=O)2NRaRa;

R8 es H, alk C1-6, C(=O)N(Ra)Ra, C(=O)Rb o haloalk C1-4;

R9 es H, alk C1-6 o haloalk C1-4;

R10 es independientemente en cada caso H, halo, alk C1-3, haloalk C1-3 o ciano;

R11

se selecciona de H, halo, alk C1-6, haloalk C1-4, ciano, nitro, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRa, -C(=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=O)Ra, -OC(=O)NRaRa, -OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra, -O-alk C2-6-NRaRa, -O-alk C2-6-ORa, -SRa, -S(=O)Ra, -S(=O)2Rb, -S(=O)2NRaRa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra, -S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa, -S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=O)Ra, -N(Ra)C(=O)ORa, -N(Ra)C(=O)NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=O)2Ra, -N(Ra)S(=O)2NRaRa, -NRa-alk C2-6-NRaRa y -NRa-alk C2-6-ORa;

Ra es independientemente, en cada caso, H o Rb; y

Rb es independientemente, en cada caso, fenilo, bencilo o alk C1-6, estando el fenilo, bencilo y alk C1-6 5 sustituidos con 0, 1, 2 � 3 sustituyentes seleccionados de halo, alk C1-4, haloalk C1-3, -O-alk C1-4, -NH2, -NHalk C1-4 y -N(alk C1-4)-alk C1-4.
2. Compuesto según la reivindicación 1, para su uso en un método de tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psori�sica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y 10 enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios oculares, trastornos inflamatorios o inestables de la vejiga, afecciones cut�neas con componentes inflamatorias, estados inflamatorios crónicos, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sist�mico (LES), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, púrpura trombocitop�nica idiop�tica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemol�tica autoinmunitaria, estados alérgicos

15 e hipersensibilidad.
3. Compuesto según la reivindicación 1, para su uso en un método de tratamiento de c�nceres, que est�n mediados, dependen de o est�n asociados con actividad de p110#.

20 4. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 y un diluyente o portador farmac�uticamente aceptable.