ES2480193T3 - Composiciones y métodos para tratar osteoartritis - Google Patents

Composiciones y métodos para tratar osteoartritis Download PDF

Info

Publication number
ES2480193T3
ES2480193T3 ES09790642.4T ES09790642T ES2480193T3 ES 2480193 T3 ES2480193 T3 ES 2480193T3 ES 09790642 T ES09790642 T ES 09790642T ES 2480193 T3 ES2480193 T3 ES 2480193T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
mrna
composition
positively
protein
negatively
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES09790642.4T
Other languages
English (en)
Inventor
Ryan Michael Yamka
Nolan Zebulon Frantz
Xiangming Gao
Samer Al Murrani
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hills Pet Nutrition Inc
Original Assignee
Hills Pet Nutrition Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hills Pet Nutrition Inc filed Critical Hills Pet Nutrition Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2480193T3 publication Critical patent/ES2480193T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/174—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
    • A23K20/30—Oligoelements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/15—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/16—Inorganic salts, minerals or trace elements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/175—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/01—Hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Una composición que comprende, a) al menos un ácido graso omega 3, b) al menos un glicosaminoglicano, c) al menos un azúcar amino, d) al menos un antioxidante, y e) carnitina o acetilcarnitina.

Description

Composiciones y métodos para tratar osteoartritis
5 Campo de la invención
La invención se refiere a composiciones y métodos para tratar afecciones anormales de articulaciones en un animal, en donde la afección anormal de las articulaciones involucra las articulaciones musculoesqueléticas del animal. En concreto, la presente invención se refiere al tratamiento de afecciones anormales de las articulaciones 10 musculoesqueléticas incluyendo osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones y al alivio de los síntomas asociados con dichas afecciones anormales de articulaciones musculoesqueléticas. La solicitud también engloba genes moduladores expresados diferencialmente en animales, por ejemplo, genes expresados diferencialmente en animales artríticos en comparación con animales no artríticos, administrando una composición de la invención. La presente invención también se refiere a la identificación de biomarcadores novedosos en
15 animales de compañía, incluyendo perros y gatos, métodos diagnósticos, composiciones y kits relacionados con estos.
Antecedentes de la invención
20 Se acepta generalmente en la comunidad científica que los genes juegan un papel en el desarrollo animal y que la regulación de la expresión génica juega un papel clave en el desarrollo de algunas enfermedades o afecciones que afectan a la salud y bienestar de un animal. De manera similar, la expresión diferencial de genes es un factor en el desarrollo de dichas enfermedades y afecciones, y la evaluación de patrones de expresión génica ha llegado a ser ampliamente reconocida como crucial para entender el desarrollo y control de dichas enfermedades y afecciones a
25 nivel molecular. Para avanzar en el entendimiento de los genes y su relación con la enfermedad, se han desarrollado un número de métodos para estudiar la expresión diferencial de genes, por ejemplo, micromatrices de ADN, secuenciación de marcadores expresados (EST), análisis en serie de expresión génica (SAGE), hibridación sustractiva, clonaje sustractivo y representación diferencial (PD) para ARNm, PCR de ARN arbitrariamente cebado (RAP-PCR), Análisis Representacional de Diferencia (RDA), electroforesis en gel de dos dimensiones,
30 espectrometría de masas, y micromatriz de proteínas basada en la unión de anticuerpos para proteínas.
Prácticamente todas las articulaciones en el cuerpo de un mamífero tienen cartílago. El cartílago es la estructura de soporte del cuerpo y consiste en paquetes espesos de proteína fibrosa (colágeno) que se entretejen para formar una superficie articular. Los proteoglicanos rellenan los espacios extracelulares no ocupados por colágeno. Dichos 35 proteoglicanos están compuestos de una combinación de una proteína y un azúcar. Cada subunidad de proteoglicano contiene un núcleo proteico que consiste en cadenas largas de azúcares modificados conocidos como glicosaminoglicanos (GAG). La glucosamina es el componente individual más importante y precursor de los GAG. La síntesis de colágeno por el cuerpo es dependiente de la síntesis de GAG. Los condrocitos en el cartílago utilizan glucosamina para producir N-acetilglucosamina (NAG) y ácido glucurónico, que se utilizan por parte del cuerpo para
40 formar hialurón. El hialurón confiere una propiedad lubricante a la articulación del cuerpo del animal.
El cartílago es importante en el cuerpo de los animales para proporcionar flexibilidad, compresibilidad bajo presión, amortiguación, resistencia a la tracción, intervalo de movimiento y fluidez de movimiento entre las articulaciones. Los ejemplos de articulaciones que tienen cartílago incluyen los dedos de la mano y del pie, cuello, rodilla, cadera,
45 hombro y similares. Los animales pueden padecer una variedad de afecciones donde el cartílago se degrada dando lugar por tanto a una reducción en la flexibilidad y compresibilidad de la articulación, y a menudo dando como resultado una inflamación generalizada de la articulación y/o tejido que rodea la articulación y en algunos casos el desarrollo de afecciones como osteoartritis y artritis reumatoide. Dichos animales tienen por tanto una pérdida significativa de la función articular y experimentan dolor.
50 La artritis es un trastorno musculoesquelético. La osteoartritis es el tipo más común de artritis en animales y humanos. La osteartritis es una enfermedad degenerativa de las articulaciones que sucede comúnmente en humanos y animales de compañía y la enfermedad se caracteriza por cambios degenerativos en el cartílago articular, con pérdida de proteoglicanos y colágeno y proliferación de formación de nuevo hueso en los márgenes
55 articulares. Estos cambios se acompañan por una respuesta inflamatoria variable en la membrana sinovial. Un defecto principal del cartílago de hialina en la superficie articular de una articulación es la alteración en la proporción de glicosaminoglicanos a contenido en fibra de colágeno de la matriz. Los huesos directamente subyacentes al cartílago en las articulaciones se llaman huesos subcondrales. Estos huesos subcondrales nutren al cartílago adyacente que de por sí carece de vasos sanguíneos, nervios o tejido linfático.
60 Con la edad sucede una erosión natural del cartílago, pero también puede ser el resultado de una carga excesiva situada en las articulaciones, obesidad, herencia, trauma, circulación disminuida, mal alineamiento de los huesos y estrés por repetición que pueden exacerbar la afección de la articulación. Se postula que el daño por radicales libres puede contribuir al desarrollo de osteoartritis.
Las células del cartílago hialino conocidas como condrocitos producen y mantienen la matriz extracelular circundante. El mantenimiento de la homeostasis de la matriz del cartílago depende del catabolismo de las proteínas de la matriz como colágeno tipo II y agrecán. Estas proteínas se digieren y reemplazan por nuevas proteínas sintetizas por los condrocitos. El catabolismo es efectuado en parte por enzimas proteolíticas como metaloproetinasa
5 de la matriz (MMP) y proteínas agrecanasas. En un animal normal, se logra un equilibro entre la síntesis y degradación, por tanto manteniendo el cartílago sano. Cuando el equilibrio se desplaza hacia la degradación, surge la patogénesis y puede dar como resultado la inflamación de la articulación y osteoartritis.
Una afección homeostática en el cartílago depende de la regulación a través de la señalización intercelular entre condrocitos. Los condrocitos por tanto producen y responden a moléculas de señalización. Dichas moléculas de señalización pueden comprender citoquinas y factores de crecimiento que pueden influenciar directamente el metabolismo celular. La señalización intercelular es compleja y no se ha caracterizado completamente. Las moléculas de factor de crecimiento como TGF-beta están involucradas y se cree que promueven la producción de colágeno de tipo II y para inhibir la escisión de colágeno. Las citoquinas como TNF-alfa e IL-1-beta, también juegan
15 un papel. Se cree que estas citoquinas promueven la producción de proteasas que pueden degradar el cartílago. Se cree que otras varias interacciones complejas suceden como resultado de la señalización intercelular.
Debido a la complejidad del proceso de señalización intercelular, es elevadamente deseable entender a nivel genético las interacciones que están teniendo lugar. La detección de genes desregulados en una afección perartrítica o artrítica es de ayuda en el entendimiento de la biología de trastornos anormales de articulaciones musculoesqueléticas, especialmente en una base genómica amplia. Un entendimiento más detallado de las vías biológicas involucradas a través de los perfiles de expresión génica pueden ayudar en el desarrollo de intervenciones farmacéuticas, nutraceúticas y nutricionales (dietéticas) saludables en las vías de la enfermedad. Estos enfoques pueden permitir la prevención, detección temprana y tratamiento de las afecciones anormales de
25 articulaciones musculoesqueléticas subyacentes así como en el seguimiento de la prognosis de dichos trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, especialmente en osteoartritis. Los genes desregulados involucrados en la patología de dichos trastornos pueden servir como biomarcadores importantes para optimizar la selección de intervenciones farmacéuticas, nutraceúticas y nutricionales (dietéticas) apropiadas.
Todavía está por identificar un medicamento que revierta el transcurso de la osteoartritis. Los agentes terapéuticos actualmente disponibles se emplean para reducir la inflamación y/o para aliviar el dolor. La terapia actual emplea una clase de medicamentos conocidos como medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) para tratar los trastornos de las articulaciones musculoesqueléticas como osteoartritis, pero estas terapias tienen una variedad de inconvenientes, incluyendo, en concreto, trastornos gastrointestinales y también puede inhibir la formación de
35 cartílago.
Los perros grandes pueden desarrollar artritis a medida que envejecen. Las razas de perros grandes son más susceptibles de padecer artritis debido a su masa aumentada y/o disposición genética. Los perros grandes no son los únicos animales en riesgo de padecer artritis y otras afecciones del cartílago. La artritis y otras enfermedades degenerativas de las articulaciones se han reconocido comúnmente en perros y dichas afecciones se han mostrado como prevalentes en gatos. La osteoartritis felina es una enfermedad que afecta principalmente a felinos envejecidos de diez años o mayores. Los animales en riesgo de desarrollar trastornos anormales de articulaciones musculoesqueléticas que afectan al cartílago incluyen, pero sin limitación, a especies de mamíferos como caninos, felinos, equinos, hircinos, ovinos, porcinos, bovinos, humanos y primates no humanos, y pájaros incluyendo pavos y
45 pollos.
La dieta juega un papel importante en la causación y progresión de la enfermedad debido a que está involucrada fundamentalmente en el metabolismo. Los genes regulados por la enfermedad están al menos hasta cierto punto regulados por factores nutricionales. Por tanto, los componentes de la dieta presentes en los alimentos como nutrientes pueden regular la expresión génica a nivel transcripcional y traduccional, así como en determinadas modificaciones postraduccionales. También pueden estar involucrados de manera similar en las actividades de degradación y enzimática. Los niveles de nutrientes pueden influenciar el equilibrio de las vías metabólicas. Las vías metabólicas son frecuentemente complejas y pueden involucrar muchas redundancias e interrelaciones entre vías metabólicas distintas. Alterar la concentración de una sola enzima, factor de crecimiento, citoquina o metabolito
55 puede tener un impacto en una variedad de vías metabólicas involucradas en la fisiología relacionada con la enfermedad. Se entiende generalmente que las hormonas y otras moléculas de señalización celular están reguladas por la dieta y también se sabe que están implicadas en el desarrollo y progresión de la enfermedad.
El mismo fenotipo de enfermedad puede ser el resultado de alteraciones en vías metabólicas distintas, y la composición genética de cada animal difiere, por tanto causando una variación en las respuestas a los mismos factores, incluyendo factores nutricionales y ambientales. La interrelación de factores genéticos, nutricionales y ambientales es importante en el entendimiento de la etiología, prevención, tratamiento y progresión de las enfermedades en animales. Encontrar respuestas de expresión génica a nutrientes asociados con varias enfermedades y trastornos permite la formulación de dietas para animales susceptibles de enfermedades como
65 trastornos anormales de articulaciones musculoesqueléticas, y además permite el diagnóstico, tratamiento y seguimiento de la prognosis de la patología subyacente.
Los componentes nutricionales influencian la expresión génica, incluyendo la producción de ARNm (transcripción), procesamiento de ARNm, producción de proteínas (traducción) y modificaciones postraduccionales, por tanto influenciando el estatus metabólico general de un animal. Como resultado, el uso de biomarcadores para la detección temprana y seguimiento de la progresión de la enfermedad y/o las dietas basadas en el genotipo pueden
5 permitir la prevención o tratamiento de enfermedades así como para desarrollar nuevas terapias para animales, en concreto para animales de compañía. La dieta es discutiblemente el factor ambiental más importante que afecta al fenotipo de un animal, incluyendo la susceptibilidad a la enfermedad.
La expresión génica puede regularse mediante procesos inestables que se controlan por activadores y represores de la función génica. El estatus nutricional puede causar cambios significativos en las tasas de transcripción génica. Los macronutrientes como glucosa, ácidos grasos y aminoácidos y oligoelementos como hierro, zinc y vitaminas pueden regular la expresión génica. Varios componentes alimentarios bioactivos como los carotenoides, flavonoides, monoterpenos y ácidos fenólicos pueden actuar como factores de transcripción que afectan a la expresión génica. Estas sustancias tienden a tener efectos directos en la expresión génica. En otras situaciones, las sustancias como
15 fibra alimentaria, que se fermentan en el intestino por bacterias, pueden conducir a la producción de nutrientes como ácidos grasos de cadena corta. Dichas sustancias pueden actuar como activadores indirectos o represores de la expresión génica.
La identificación de cambios relacionados con nutrientes tras la transcripción y traducción pueden detectarse en experimentos del tipo descrito en la presente memoria descriptiva. A la vista de la extensa matriz de genes perfilada en los ejemplos de la presente memoria descriptiva, las alteraciones en la expresión génica y cuantificación se detectan fácilmente mediante los métodos enseñados en la presente memoria descriptiva. Por tanto, las firmas de expresión génica dietética y metabólica pueden determinarse fácilmente usando las técnicas que se enseñan en los Ejemplos de esta memoria descriptiva. Los biomarcadores de la invención son proteínas y/o ácidos nucleicos que se
25 expresan diferencialmente en animales. La expresión de biomarcadores puede evaluarse a nivel de proteína o de ácido nucleico usando varios métodos conocidos para el experto en la técnica.
Solo se ha efectuado un trabajo muy limitado hasta la fecha en la evaluación de los genomas caninos y felinos para los perfiles de expresión génica en respuesta a componentes nutricionales en la dieta de estos animales de compañía. Se ha hecho un trabajo en el ámbito del cáncer empleando una micromatriz génica canina para el análisis de CG de tumores. Thomas R. et al. A canine cancer gene microarray for CGH analysis tumors, Cyrogenet. Genome Res., 2003; 102: 254-260. Se han efectuado trabajos adicionales en el área de la cardiomiopatía dilatada. Oyayma,
M. A. et al., Genomic expression patterns of cardiac tissue from dogs with dilated cardiomyopathy, Am. J. Vet. Res. 2005; 66: 1140-1155. Hasta la fecha el estudio del genoma canino con respecto a la osteoartritis ha sido muy
35 limitado. En un estudio, se descubrió que el gen MIG-6 estaba elevado en los perros en el grupo de alto riesgo de osteoartritis y se ha formulado la hipótesis de que este gen puede estar implicado en la degradación del cartílago y en la producción de cartílago en perros. Mateescu, R. G. et al., Increased MIG-6 mRNA transcipts in osteoarthritic cartilage. Biochem. Biophy. Res. Commun. 2005; 332: 482-486.
Los estudios en poblaciones sanas de animales frente a poblaciones que tienen una enfermedad como los trastornos anormales de articulaciones musculoesqueléticas descritos en esta memoria descriptiva no se han llevado a cabo de manera extensiva. Hay pocos datos disponibles con respecto al genoma canino y muchos menos con respecto al genoma felino. Los datos de expresión génica contenidos en esta memoria descriptiva identifican genes asociados con la degradación del cartílago en perros y gatos. Dichos datos de expresión génica permiten la
45 identificación de composiciones nutricionales capaces de modular la expresión de dichos genes de manera favorable. Este también es el caso con respecto a genes generalmente asociados con la inflamación. También se exponen adicionalmente datos análogos en felinos en la memoria descriptiva, figuras y ejemplos de esta memoria descriptiva.
Los datos de expresión génica contenidos en la memoria descriptiva y ejemplos permiten una variedad de invenciones deseables basándose en los perfiles de expresión génica descritos en el presente documento. Los datos permiten la identificación y cuantificación de productos de expresión génica como biomarcadores de la nutrición así como prevención de la enfermedad, identificación y tratamiento del trastorno anormal de articulaciones musculoesqueléticas subyacentes. Los datos de expresión génica provocados como resultado de la práctica de los
55 métodos de la invención también permiten evaluar la progresión de dichos trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas. Estas invenciones además incluyen el ensayo genético para identificar subpoblaciones de animales susceptibles de verse afectadas por dichos trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, para identificar dietas óptimas para la prevención o tratamiento de dichos trastornos, para identificar intervenciones farmacéuticas, nutracéuticas y nutricionales (dietéticas) basadas en los descubrimientos expuestos en esta memoria descriptiva para tratar las patologías subyacentes y la inflamación. Las invenciones también incluyen biomarcadores para la detección temprana de la enfermedad, agentes terapéuticos dirigidos, reactivos diagnósticos y kits para el análisis de muestras de tejido y sangre de animales susceptibles de o que tengan dichos trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas.
65 En el diseño de alimentos para animales, por ejemplo, animales de compañía como gatos y perros, es una meta importante una salud óptima del animal o bienestar mediante una buena nutrición. Sin embargo, incluso la comida
para animales más nutritiva es poco valiosa si el animal rechaza o rehúsa a comer la comida, o si la ingesta de la comida por parte del animal está restringida porque el animal encuentra la comida poco sabrosa. Por tanto, las invenciones expuestas en esta memoria descriptiva además comprenden composiciones nutricionales capaces de promover la salud y bienestar de animales susceptibles de o que tengan dichos trastornos anormales de las
5 articulaciones musculoesqueléticas. La invención por tanto engloba composiciones de comidas comestibles para animales de compañía, que tienen eficacia terapéutica y preventiva y poseen una apetecibilidad aumentada frente a los productos alimentarios para animales de compañía comercializados actualmente.
Sumario de la invención
10 La invención se refiere a composiciones que comprenden al menos un ácido graso omega 3, al menos un glicosaminoglicano, al menos un azúcar amino, al menos un antioxidante, y carnitina o acetilcarnitina. La invención incluye, pero sin limitación, composiciones nutricionales, suplementos dietéticos, nutracéuticos y golosinas para la administración a animales, especialmente animales de compañía.
15 La invención también incluye composiciones que comprenden al menos un ácido graso omega 3, al menos un glicosaminoglicano, al menos un azúcar amino, al menos un antioxidante, y carnitina o acetil carnitina para su uso en medicina. En concreto, la invención se refiere a dichas composiciones para su uso en el tratamiento de afecciones anormales de las articulaciones, y particularmente, afecciones anormales de las articulaciones musculoesqueléticas
20 en un sujeto, en donde la composición se administra al sujeto.
La invención además se refiere a las composiciones anteriormente mencionadas para su uso en el retraso de la aparición de una afección anormal de las articulaciones, y en concreto, una afección anormal de las articulaciones musculoesqueléticas en un sujeto.
25 La invención se refiere de manera adicional a las composiciones anteriormente mencionadas para su uso en un método para alterar la expresión de uno o más genes en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto las composiciones anteriormente mencionadas, y los uno o más genes seleccionándose del grupo que consiste en anexina Al, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1, IL-1[beta], TNF[alfa], TNF[beta],
30 TLR-2, TLR-4, p38 MAPK, TIMP-I, TIMP-2, MMP-I, MMP-2, MMP-13, IL-15 y receptor IL-17.
En una realización, la invención engloba una composición de comida para mascotas caninas que comprende al menos un ácido graso omega 3, al menos un glicosaminoglicano, al menos un azúcar amino, al menos un antioxidante, y carnitina o acetil carnitina.
35 En otra realización, la invención engloba una composición de comida para mascotas felinas que comprende al menos un ácido graso omega 3, al menos un glicosaminoglicano, al menos un azúcar amino, al menos un antioxidante, y carnitina o acetil carnitina.
40 Otra realización engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas en un animal que lo necesite.
Otra realización más engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, seleccionado del grupo que consiste en osteoartritis, 45 artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones, en un animal que lo necesite.
Una realización adicional más de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de un trastorno de las articulaciones musculoesqueléticas seleccionado del grupo que consiste en osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones en un animal de compañía que lo necesite.
50 Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de un trastorno de las articulaciones musculoesqueléticas, seleccionado del grupo que consiste en osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones, en un canino que lo necesite con una composición de la invención.
55 Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de un trastorno de las articulaciones musculoesqueléticas, seleccionado del grupo que consiste en osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones, en un felino que lo necesite.
60 Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de osteoartritis en un canino que lo necesite.
Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de osteoartritis en un felino que lo necesite. 65
Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de la artritis reumatoide en un canino que lo necesite con una composición de la invención.
Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de 5 la artritis reumatoide en un felino que lo necesite con una composición de la invención.
Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de la inflamación de articulaciones en un canino que lo necesite con una composición de la invención.
Otra realización de la invención engloba un uso de la composición de la invención en el tratamiento o prevención de la inflamación de articulaciones en un felino que lo necesite con una composición de la invención.
La descripción proporciona uno o más genes o segmentos de genes que se expresan diferencialmente en animales que tienen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, que puede incluir a modo de ejemplo
15 osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones, en comparación con animales que no tienen dicho trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas.
La descripción proporciona combinaciones de dos o más polinucleótidos o polipéptidos que se expresan diferencialmente en animales que tienen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, que pueden incluir a modo de ejemplo osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones en comparación con animales que no tienen dicho trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas.
La descripción proporciona composiciones de dos o más sondas de polinucleótido o polipéptido adecuadas para detectar la expresión de genes expresados diferencialmente en animales que tienen un trastorno anormal de las
25 articulaciones musculoesqueléticas, que puede incluir a modo de ejemplo osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones, en comparación con animales que no tienen dicho trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas.
La descripción proporciona métodos y composiciones para detectar la expresión diferencial de uno o más genes expresados diferencialmente en animales que tienen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, que puede incluir a modo de ejemplo osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones, en comparación con animales que no tienen dicho trastorno musculoesquelético.
La descripción proporciona métodos para medir el efecto de una sustancia de ensayo en el perfil de expresión de
35 uno o más genes expresados diferencialmente en animales que tienen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, que puede incluir a modo de ejemplo osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones, en comparación con animales que no tienen dicho trastorno anormal musculoesquelético como un método para evaluar una sustancia de ensayo para determinar si es probable que sea útil para modular dicho trastorno en dicho animal.
La descripción proporciona métodos para formular una prognosis de que es probable que un animal desarrolle un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, que puede incluir a modo de ejemplo osteoartritis, artritis reumatoide o inflamación local de las articulaciones o en el desarrollo de una diagnosis de que el animal tiene dicho trastorno de las articulaciones musculoesqueléticas.
45 La descripción proporciona métodos para la identificación de biomarcadores novedosos de trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, en concreto osteoartritis, en animales, en concreto animales de compañía, así como métodos de detección de trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas en dichos animales basándose en un patrón característico de expresión génica de dichos biomarcadores in vivo. Específicamente, los métodos de la invención comprenden detectar la expresión diferencial, en comparación con un nivel de expresión de control, de al menos un biomarcador, en una muestra corporal, preferentemente una muestra de sangre, en donde la detección de la expresión diferencial de dicho biomarcador identifica específicamente animales que tienen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, especialmente osteoartritis. Por tanto, dichos métodos se basan en la detección de al menos un biomarcador que se expresa diferencialmente en un
55 trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas en comparación con células de animales normales o control.
También es una realización de la invención el uso de la composición de la invención en un método para modular varios biomarcadores caninos relacionados con un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, en concreto osteoartritis, artritis reumatoide, o una afección local de inflamación de las articulaciones, en donde el método comprende administrar una composición de la invención a un animal que lo necesite en una cantidad efectiva para modular el biomarcador. Los ejemplos de biomarcadores relacionados con un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas que pueden modularse incluyen, pero sin limitación, anexina A I, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1, IL-1, TNF, TNF, TLR-2, TLR-4, p38 MAPK, TIMP-1, TIMP-2, MMP-1,
65 MMP-2, MMP-13, IL-15 y receptor IL-17, COL2A1, COL1A2, COL3A1, COL4A1, MMP-13, TIMP-2, MMP-2, C2C, C1,2C, FLAP, PLA2, MAPK1, MAPK2 y agrecán.
Los biomarcadores de la invención son proteínas y/o ácidos nucleicos que se expresan diferencialmente en un animal que tiene o es probable que desarrollen un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, en concreto osteoartritis, artritis reumatoide o una afección de inflamación local de las articulaciones.
5 Adicionalmente se contempla en el presente documento que los métodos de la presente descripción pueden usarse en combinación con técnicas diagnósticas tradicionales que son capaces de detectar las características físicas y morfológicas de enfermedad degenerativa de las articulaciones musculoesqueléticas. Por tanto, por ejemplo, la caracterización de la expresión diferencial en genes para biomarcadores de osteoartritis en células obtenidas de una muestra de sangre de un animal pueden combinarse con técnicas diagnósticas convencionales (por ejemplo, radiológicas) para corroborar un diagnóstico de osteoartritis.
En un aspecto adicional, la descripción proporciona composiciones que comprenden una o más sondas de ácido nucleico que hibridan específicamente con un ácido nucleico, o fragmento del mismo, que codifica un biomarcador
15 de la presente invención.
En un aspecto adicional, la descripción proporciona composiciones que comprenden anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido codificado por un gen que expresa un biomarcador de la presente invención.
La descripción proporciona kits para diagnosticar un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas en un animal que comprende un componente que puede usarse para detectar la expresión de los biomarcadores de la presente invención, incluyendo, pero sin limitación, las composiciones y micromatrices descritas en el presente documento.
25 En otro aspecto, también se contempla en el presente documento que la descripción proporciona métodos para identificar componentes dietéticos bioactivos u otros compuestos naturales (en lo sucesivo referidos como “componentes dietéticos” o “componentes”) que pueden ensayarse para su capacidad de tratar o mejorar un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas en un animal que comprende: (a) poner en contacto una célula capaz de expresar un ARN o producto proteico de uno o más biomarcadores divulgados en la Tabla 2 y/o Tabla 3 con un componente de ensayo; (b) determinar la cantidad de dicho ARN y/o producto producido en las células puestas en contacto con el compuesto de ensayo; y (c) comparar la cantidad de dicho ARN y/o producto proteico en las células puestas en contacto con el componente de ensayo con la cantidad del mismo ARN o producto proteico presente en una célula control correspondiente que no se ha puesto en contacto con el compuesto de ensayo; en donde si la cantidad de ARN o producto proteico se altera en relación a la cantidad en el control, el
35 componente se identifica como uno a ensayar para su capacidad de tratar o mejorar un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, especialmente osteoartritis, artritis reumatoide o una afección de inflamación local de las articulaciones.
Un aspecto adicional de la descripción es un método para el diagnóstico y/o prognosis de osteoartritis en un animal, en donde el método comprende las etapas de: obtener al menos una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal del animal; determinar la cantidad de uno o más biomarcadores seleccionados de la Tabla 2 y/o Tabla 3 en dicha al menos una muestra o espécimen obtenido del animal, en donde dicho biomarcador es un polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito del mismo. Una realización adicional más es dicho método en donde dichos uno o más biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en anexina A1, catepsina D,
45 catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1, IL-1, TNF, TNF, TLR-2, TLR-4, p38 MAPK, TIMP-1, TIMP-2, MMP-1, MMP-2, MMP-13, IL-15 y receptor IL-17.
Otro aspecto más de la descripción es un kit para el diagnóstico y/o prognosis de osteoartritis en un animal, en particular para desarrollar el método para el diagnóstico y/o prognosis de osteoartritis en un animal, en donde el método comprende las etapas de: obtener al menos una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal del animal; determinar la cantidad de uno o más biomarcadores seleccionados de la Tabla 2 y/o Tabla 3 en dicha al menos una muestra o espécimen obtenido del animal, en donde dicho biomarcador es un polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito del mismo, y opcionalmente, además comprende un agente detectable unido a dicho biomarcador.
55 Un aspecto adicional más de la descripción es un reactivo para el diagnóstico y/o prognosis de osteoartritis en un animal, en particular para llevar a cabo el método para el diagnóstico y/o prognosis de osteoartritis en un animal, en donde el método comprende las etapas de: obtener al menos una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal del animal; determinar la cantidad de uno o más biomarcadores seleccionados de la Tabla 2 y/o Tabla 3 en dicha al menos una muestra o espécimen obtenido del animal, en donde dicho biomarcador es un polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito del mismo, y opcionalmente además comprende un agente detectable unido a dicho biomarcador.
Otro aspecto de las descripción es el uso de uno o más polipéptidos, proteínas, ARN, ADN, polinucleótidos o
65 metabolitos de los mismos, identificados en la Tabla 2 y/o Tabla 3, como biomarcadores para el diagnóstico y/o prognosis de un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas, particularmente para formar un kit
para el diagnóstico o prognosis de un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas. Un aspecto adicional más es dicho kit donde dichos uno o más biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en anexina A1, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1, IL-1, TNF, TNF, TLR-2, TLR-4, p38 MAPK, TIMP-1, TIMP-2, MMP-1, MMP-2, MMP-13, IL-15 y receptor IL-17. Otro aspecto más es dicho kit, en donde los reactivos y
5 equipamiento comprenden materiales de análisis de micromatrices de ADN incluyendo micromatrices de oligonucleótidos, micromatrices de ADNc, y chip génico enfocado, o una combinación de los mismos.
Otro aspecto de la descripción es un método para detectar osteoartritis en un animal que comprende proporcionar una muestra del animal que comprende una muestra de tejido o espécimen de un fluido corporal; detectar los niveles de un biomarcador, identificados en la Tabla 2 y/o Tabla 3, que es un polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito del mismo en la muestra o espécimen; y comparar los niveles de dicho biomarcador en la muestra o espécimen con los niveles de dicho biomarcador en una muestra de control; en donde la expresión del biomarcador tiene al menos una diferencia de una vez o más en la expresión génica comparada con la expresión en una célula de un animal control.
15 Un aspecto adicional de la descripción es un método para detectar osteoartritis en un animal, que comprende poner en contacto la muestra o espécimen del método anteriormente indicado con un primer cebador que comprende una secuencia de polinucleótidos que hibrida selectivamente con dicho biomarcador y un segundo cebador que comprende una secuencia de polinucleótidos que hibrida con dicho polinucleótido biomarcador, efectuando una reacción de amplificación, y cuantificando un producto de amplificación del polinucleótido biomarcador en la muestra
o espécimen.
Otro aspecto de la descripción es un método para evaluar la efectividad de un ciclo de tratamiento o gestión nutricional para un animal que padece osteoartritis, comprendiendo el método (a) medir un primer nivel de un
25 polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito biomarcador del mismo, como se identifica en la Tabla 2 y/o Tabla 3, en una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal de dicho animal en un primer punto temporal durante el curso del tratamiento, (b) medir un segundo nivel de dicho biomarcador en dicha muestra o espécimen de dicho animal en un segundo punto temporal durante el ciclo de tratamiento, y (c) comparar las medidas del biomarcador a dichos primer y segundo punto temporal; en donde la expresión del biomarcador tiene al menos una diferencia de una vez o más en la expresión génica en comparación con la expresión en una célula de un animal control.
Otro aspecto de la descripción es un método para evaluar la progresión de un ciclo de tratamiento o gestión nutricional para un animal que padece osteoartritis, comprendiendo el método (a) medir un primer nivel de un
35 polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito biomarcador del mismo, identificado en la Tabla 2 y/o Tabla 3, en una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal de dicho animal en un primer punto temporal durante el ciclo de tratamiento, (b) medir un segundo nivel de dicho biomarcador en dicha muestra o espécimen de dicho animal en un segundo punto temporal durante el ciclo de tratamiento, y (c) comparar las medidas del biomarcador en dichos primer punto y segundo punto temporal; en donde la expresión del biomarcador tiene al menos una diferencia una vez o mayor en la expresión génica en comparación con la expresión en una célula de un animal control.
Un aspecto adicional de la descripción es un método para identificar una molécula para diagnosticar osteoartritis en un animal, comprendiendo el método: (1) proporcionar una muestra de una muestra de tejido o un espécimen de
45 fluido corporal de dicho animal que comprende un biomarcador, identificado en la Tabla 2 y/o Tabla 3, que es un polipéptido, proteína, ARN, ADN, polinucleótido o metabolito del mismo; (2) poner en contacto la muestra o espécimen con una molécula de ensayo; (3) determinar si la molécula de ensayo se une a, o está unida por, dicho biomarcador; en donde la expresión del biomarcador tiene al menos una diferencia una vez o mayor en la expresión en comparación con la expresión de dicho biomarcador de un animal control.
Un aspecto adicional más de la descripción es un método para evaluar osteoartritis en un animal que comprende las etapas de: i) obtener una muestra de tejido o un espécimen de fluido corporal de dicho animal y determinar un perfil de expresión génica de uno o más polipéptidos, proteínas, ARN, ADN, polinucleótidos o metabolitos biomarcadores en la muestra; y ii) comparar el perfil de expresión génica de dichos uno o más biomarcadores en la muestra con un
55 control positivo que comprende un nivel de expresión génica promedio de dichos uno o más biomarcadores en una variedad de muestras de referencia que se derivan de animales que muestran síntomas de osteoartritis para determinar la expresión génica diferencial entre las muestras y el control positivo, en donde la presencia de osteoartritis se indica si no hay expresión génica diferencial estadísticamente significativa entre el perfil de expresión génica de uno o más biomarcadores en la muestra y el control positivo, en donde los biomarcadores comprenden uno o más genes de la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto más de la descripción es un método para evaluar osteoartritis en un animal que comprende las etapas de: i) obtener una muestra de tejido o espécimen de fluido corporal de dicho animal y determinar un perfil de expresión génica de uno o más polipéptidos, proteínas, ARN, ADN, polinucleótidos o metabolitos biomarcadores en 65 la muestra; y ii) comparar el perfil de expresión génica de dichos uno o más biomarcadores en la muestra con un control positivo que comprende un nivel de expresión génica promedio de dicho uno o más biomarcadores en una
variedad de muestras de referencia que se derivan de animales control que no muestran síntomas de osteoartritis para determinar la expresión génica diferencial entre la muestra y una muestra de referencia de dichos animales control, en donde la presencia de osteoartritis se indica si hay una expresión génica diferencial de una vez entre el perfil de expresión génica de uno o más biomarcadores en la muestra y el control positivo, en donde los
5 biomarcadores comprenden uno o más genes de la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un ensayo para evaluar un agente para su capacidad de tratar o prevenir uno o más síntomas de osteoartritis que comprende las etapas de: i) aislar una muestra control de ácido nucleico de una muestra de tejido de dicho animal que produce un perfil de expresión génica diferencial representativo de 10 osteoartritis y determinar el nivel de expresión génica en la muestra control; ii) someter a la muestra de tejido a dicho agente; iii) aislar una muestra de ensayo de ácido nucleico de dicha muestra de tejido después de someter a dicha muestra de tejido al agente de la etapa (ii) y determinar el nivel de expresión génica en la muestra de ensayo; iv) comparar la producción, estabilidad, degradación y/o activación de la expresión génica entre la muestra control y la muestra de ensayo para encontrar el perfil de expresión génica diferencial entre la muestra de ensayo y la muestra
15 control; en donde un perfil de expresión génica diferencial entre la muestra de ensayo comparada con la muestra control es indicativa de la capacidad del agente para prevenir o tratar uno o más síntomas de osteoartritis.
Otro aspecto más de la descripción es un método para identificar una variedad de genes que se expresan diferencialmente entre muestras de tejido para su uso en una matriz informativa, que comprende: proporcionar un 20 primer conjunto de sondas de ácidos nucleicos heterogéneas derivadas de una primera muestra de tejido; proporcionar un segundo conjunto de sondas de ácido nucleico heterogéneas derivadas de una segunda muestra de tejido; hibridar una matriz de ácido nucleico que comprende una pluralidad de secuencias derivadas de genes de un proceso biológico con el primer conjunto de sondas y determinar un primer nivel de expresión para secuencias de la matriz; hibridar la matriz con dicho segundo conjunto de sondas y determinar un segundo nivel de expresión para 25 secuencias de la matriz; identificar una variedad de genes que se expresan diferencialmente en dicho proceso biológico comparando el primer nivel de expresión con dicho segundo nivel de expresión para secuencias hibridadas; y establecer una clasificación de los genes identificados mediante una etapa seleccionada del grupo de etapas que consisten en: determinar un valor absoluto de la diferencia entre el primer nivel de expresión y el segundo nivel de expresión, y clasificar los genes que tienen una diferencia mayor sobre los genes que tienen una
30 diferencia menor; y determinar una desviación estándar de la diferencia entre el primer nivel de expresión y el segundo nivel de expresión; y clasificar los genes que tienen una mayor desviación estándar sobre los genes que tienen una menor desviación estándar, en donde los genes comprenden uno o más genes de la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método para convertir una matriz de ácido nucleico en una matriz informativa
35 que comprende: proporcionar un primer conjunto de sondas de ácido nucleico heterogéneas derivadas de una primera muestra de tejido; proporcionar un segundo conjunto diferente de sondas de ácido nucleico heterogéneas derivadas de una segunda muestra de tejido; hibridar una matriz de ácido nucleico que comprende una pluralidad de secuencias con el primer conjunto de sondas y determinar un primer nivel de expresión para las secuencias de la matriz; hibridar la matriz con dicho segundo conjunto de sondas y determinar un segundo nivel de expresión para
40 secuencias de la matriz; identificar una pluralidad de genes que se expresan diferencialmente en dicho proceso biológico basándose en la diferencia entre el primer nivel de expresión y el segundo nivel de expresión para los genes identificados, mediante una etapa seleccionada del grupo de etapas que consisten en: determinar un valor absoluto para la diferencia entre el primer nivel de expresión y el segundo nivel de expresión, y clasificar los genes que tienen una mayor diferencia sobre genes que tienen una menor diferencia; y determinar una desviación estándar
45 de la diferencia entre el primer nivel de expresión y el segundo nivel de expresión, y clasificar los genes que tienen una mayor desviación estándar sobre los genes que tienen una menor desviación estándar; y seleccionar genes de una pluralidad de genes expresados diferencialmente identificados para su inclusión en la matriz informativa, en donde dichos genes se seleccionan de los genes listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
50 Otro aspecto más de la descripción es un método implementado por ordenador para analizar la expresión génica para evaluar osteoartritis que comprende las etapas de: i) compilar datos que comprenden una pluralidad de señales de expresión génica medidas derivadas de análisis micromatrices de ácidos nucleicos, seleccionadas del grupo que consisten en micromatrices de oligonucleótidos, micromatrices de ADNc, y análisis de chips génicos enfocados, o una combinación de los mismos, o muestras de tejido en una forma adecuada para el análisis basado por
55 ordenador: y ii) analizar los datos compilados, donde el análisis comprende identificar redes de genes de un número de genes biomarcadores regulados positivamente y genes biomarcadores regulados negativamente, donde los genes biomarcadores son genes que se han identificado como asociados con la presencia o severidad de osteoartritis, comprendiendo dichos genes los genes listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
60 Otro aspecto de la descripción es un método de evaluación in vitro de un candidato a medicamento, comprendiendo el método determinar la capacidad del candidato para modular la expresión de un gen seleccionado o la actividad del producto de expresión génica seleccionado en donde el gen seleccionado o producto de expresión génica seleccionado es un biomarcador de osteoartritis o producto de expresión génica seleccionado del grupo que consiste en los genes o productos génicos listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método de evaluación in vitro de un artículo alimentario nutricional, suplemento dietético, nutracéutico o golosina, comprendiendo el método determinar la capacidad del candidato para modular la expresión de un gen seleccionado o la actividad del producto de expresión génica seleccionado en donde el gen seleccionado o el producto de expresión génica seleccionado es un biomarcador de osteoartritis o producto de
5 expresión génica seleccionado del grupo que consiste en los genes o productos génicos listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método de evaluación in vitro de un candidato a medicamento, comprendiendo el método a) recoger al menos dos muestras biológicas; en donde una primera muestra se asemeja a osteoartritis y una segunda muestra se asemeja a un estado saludable, b) poner en contacto al menos una muestra o una mezcla de muestras con uno o más candidatos a medicamento a ensayar; c) medir la expresión génica o nivel de producto de expresión génica o actividad de genes listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3 o la actividad en las muestras biológicas
o mezcla obtenida en b); y d) seleccionar candidatos a medicamento que son capaces de modular la expresión
génica o nivel de producto de expresión génica o la actividad medida en las muestras o mezcla obtenida en b) y 15 comparar los niveles con una muestra no mezclada con el candidato a medicamento.
Otro aspecto de la descripción es un método de evaluación in vitro de un artículo alimentario nutricional, suplemento dietético, nutraceútico o golosina, comprende el método a) recoger al menos dos muestras biológicas; en donde una primera muestra se asemeja a osteoartritis y una segunda muestra se asemeja a un estado saludable, b) poner en contacto al menos una muestra o una mezcla de muestras con uno o más artículos alimentarios nutricionales, suplementos dietéticos, nutraceúticos o golosinas a ensayar; c) medir la expresión génica o nivel de producto de expresión génica o actividad de genes listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3 o actividad en las muestras biológicas o mezcla obtenida en b); y d) seleccionar un artículo alimentario nutricional, suplemento dietético, nutraceútico o golosina que es capaz de modular la expresión génica o nivel de producto de expresión génica o actividad medida
25 en las muestras o mezcla obtenida en b) y comparar los niveles con una muestra no mezclada con el artículo alimentario nutricional, suplemento dietético, nutraceútico o golosina.
Otro aspecto de la descripción es un método de determinación in vitro de la sensibilidad de un animal a osteoartritis, comprendiendo el método comparar la expresión génica o niveles de producto de expresión génica o actividad de biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en los genes y productos génicos listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método para preparar una composición para tratar osteoartritis, comprendiendo el método preparar una composición que comprende un modulador de biomarcadores de osteoartritis seleccionados
35 del grupo que consiste en genes y productos génicos listados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método para determinar la eficacia de un tratamiento para osteoartritis, comprendiendo las etapas de: (a) proporcionar una muestra biológica de un animal afectado de osteoartritis, que ha sido sometido a dicho tratamiento, (b) determinar el nivel en dicha muestra de uno o más biomarcadores de osteoartritis, para crear un perfil de expresión para dicho animal, y (c) comparar dicho perfil de expresión con : i) un perfil de expresión comparable obtenido de dicho animal de ensayo antes de la iniciación de dicho tratamiento, y/o ii) un perfil de expresión comparable obtenido de dicho animal de ensayo en una etapa más temprana de dicho tratamiento, y/o iii) un perfil de expresión comparable característico de un sujeto que no está afectado por osteoartritis, en donde el uno o más biomarcadores para osteoartritis comprenden productos de expresión de uno o
45 más genes mostrados en la Tabla 2 y/o Tabla 3.
Otro aspecto de la descripción es un método para seleccionar una composición alimentaria para un animal por su capacidad para tratar o prevenir uno o más síntomas de osteoartritis, comprendiendo las etapas de: i) acceder a al menos una base de datos que comprende un primer conjunto de datos relacionados con un perfil de expresión génica de una muestra de tejido o un espécimen de fluido biológico de una muestra de tejido de un animal que tiene osteoartritis; ii) acceder a al menos una base de datos que comprende un segundo conjunto de datos relacionados con los efectos de componentes dietéticos bioactivos sobre dicho perfil de expresión génica; y iii) mediante el uso de un primer algoritmo usar dichos primer y segundo conjuntos de datos, procesando dicho primer conjunto de datos y dicho segundo conjunto de datos para derivar una fórmula nutricional útil para seleccionar y preparar una
55 composición alimentaria para dicho animal; y iv) almacenar o usar dicha fórmula nutricional en un formato legible por el usuario.
Otros objetos adicionales, características, y ventajas de la presente invención serán evidentes para los expertos en la técnica.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa una disminución en la expresión génica de varios genes asociados con la degradación del cartílago en perros después de ser alimentados con al menos una composición de la invención identificada como
65 composición canina j/d.
La Figura 2 representa una disminución en la expresión génica de varios genes asociados con la degradación del cartílago en perros después de alimentarlos con al menos una composición de la invención identificada como composición canina j/d.
5 La Figura 3 representa un aumento en la expresión génica de varios genes asociados con la inflamación en gatos artríticos en comparación con gatos no artríticos.
La Figura 4 representa una realización de las composiciones de la presente invención identificada como composición j/d.
La Figura 5 representa la regulación positiva del gen C2C en perros artríticos en comparación con perros normales.
La Figura 6 representa la regulación positiva del gen C1,2C en perros artríticos en comparación con perros no 15 artríticos.
La Figura 7 representa determinados genes que expresan proteínas asociadas con artritis en cartílago artrítico contra cartílago no artrítico en perros.
La Figura 8 representa determinados genes que expresan proteínas asociadas con artritis en cartílago artrítico contra cartílago no artrítico en perros.
La Figura 9 representa niveles en suero de EPA y DHA después de dar de comer la composición alimentaria canina j/d a perros durante 14 y 18 días, respectivamente.
25 La Figura 10 representa la modulación en la expresión del gen C2C después de alimentar a los perros con la composición canina j/d durante un periodo de 14 días.
La Figura 11 representa la modulación en la expresión del gen C1,2C después de alimentar a perros con la composición canina j/d durante un periodo de 14 días.
La Figura 12 representa la modulación en la expresión del gen CTX-II después de alimentar a perros con la composición j/d durante un periodo de 14 días.
35 La Figura 13 representa la regulación positiva del gen C2C en gatos artríticos contra gatos no artríticos.
La Figura 14 representa la regulación positiva del gen CTX-II en gatos artríticos contra gatos no artríticos.
La Figura 15 representa la regulación positiva de varios genes asociados con la reparación del cartílago en gatos artríticos contra gatos no artríticos.
La Figura 16 representa un aumento en la movilidad de gatos después de recibir la composición felina j/d.
La Figura 17 representa una reducción en la actividad nocturna de perros, lo que indica un bienestar mejorado en 45 perros a los que se les administra la composición alimentaria canina j/d.
Descripción detallada de la invención
La invención se refiere a composiciones para su uso en el tratamiento de afecciones anormales en un animal, en donde la afección anormal afecta a las articulaciones musculoesqueléticas del animal. Las composiciones pueden formularse para administración oral, incluyendo pero sin limitación a alimentos para animales. Los alimentos para animales pueden darse a cualquier tipo de animal para el que las composiciones se hayan formulado. Por ejemplo, los alimentos pueden formularse para animales de compañía, incluyendo, pero sin limitación, a perros o gatos.
55 Como se usa en el presente documento, un animal anormal es un animal al que se le ha diagnosticado o aparentemente sufre una afección que afecta a las articulaciones musculoesqueléticas en el animal o para el que los datos de expresión génica contenidos en el presente documento sugieren una predisposición para dicha afección. Por ejemplo, un perro o un gato diagnosticado o que aparentemente sufra de osteoartritis puede considerarse un animal anormal.
Las composiciones de la presente invención comprenden al menos un ácido graso omega 3. Los ácidos grasos omega 3 son bien conocidos en la técnica. Los ácidos grasos omega 3 son nutrientes esenciales para la salud de animales y dichos ácidos grasos o bien no pueden fabricarse o se producen en cantidades insuficientes por los animales. Dichos ácidos grasos se emplean como un componente dietético o como componentes en las 65 composiciones y métodos enseñados en las invenciones del presente documento. La formulación de las composiciones nutricionales contenidas en el presente documento se basa en parte en el impacto de dichas
composiciones nutricionales en la expresión génica en animales que padecen de trastornos de las articulaciones musculoesqueléticas de los tipos descritos en el presente documento. Los ejemplos de ácidos grasos omega 3 incluyen, pero sin limitación, ácido alfa linoleico (ALA), ácido docosahexanoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA). En una realización de la presente invención, la composición comprende uno de ALA, DHA o EPA. En otra
5 realización, la composición comprende al menos dos de ALA, DHA o EPA. En otra realización más de la presente invención, la composición comprende los tres de ALA, DHA y EPA.
Las composiciones también comprenden al menos un glicosaminoglicano (GAG). Los GAG son bien conocidos en la técnica y se consideran como polisacáridos sin ramificar compuestos de unidades repetidas de disacáridos. Debido a que el polisacárido no está ramificado y está compuesto de unidades de disacáridos repetidas, la molécula o polímero se considera como un GAG. Ejemplos de GAG incluyen, pero sin limitación, sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán e hialuronán. En una realización de la presente invención, la composición comprende al menos uno de sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán o hialuronán. En otra realización de la presente invención, la composición
15 comprende al menos dos de sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán o hialuronán. En otra realización más de la presente invención, la composición comprende al menos tres de sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán o hialuronán. En otra realización más de la presente invención, la composición comprende al menos cuatro, cinco o todos de sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán y/o hialuronán
Las composiciones también comprenden al menos un azúcar amino. Un azúcar amino es bien entendido en la técnica y simplemente significa un resto de azúcar en donde un grupo amina reemplaza o sucede además de un grupo hidroxilo. Ejemplos de azúcares amino incluyen, pero sin limitación, galactosamina, glucosamina, ácido siálico y N-acetilglucosamina. En una realización de la presente invención, las composiciones comprenden al menos uno de
25 galactosamina, glucosamina, ácido siálico o N-acetilglucosamina. En otra realización de la presente invención, las composiciones comprenden al menos dos de galactosamina, glucosamina, ácido siálico y N-acetilglucosamina. En otra realización más de la presente invención, las composiciones comprenden al menos tres de galactosamina, glucosamina, ácido siálico o N-acetilglucosamina. En otra realización más de la presente invención, la composición comprende los cuatro de galactosamina, glucosamina, ácido siálico o N-acetilglucosamina.
Las composiciones también comprenden al menos un antioxidante. Los antioxidantes son bien conocidos en la técnica. Ejemplos de antioxidantes incluyen, pero sin limitación, vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles), glutatión, ácido lipoico, melatonina, carnitina y beta caroteno. En una realización de la presente invención, las composiciones comprenden al menos uno de vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles),
35 glutatión, ácido lipoico, melatonina, o beta caroteno. En otra realización de la presente invención, las composiciones comprenden al menos dos de vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles), glutatión, ácido lipoico, melatonina, o beta caroteno. En otra realización más de la presente invención, las composiciones comprenden al menos tres de vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles), glutatión, ácido lipoico, melatonina, o beta caroteno. En otra realización más de la presente invención, las composiciones comprenden al menos cuatro de vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles), glutatión, ácido lipoico, melatonina, o beta caroteno. En otra realización más de la presente invención, las composiciones comprenden al menos cinco o más de vitamina C, vitamina E (tocoferoles y/o tocotrienoles), glutatión, ácido lipoico, melatonina, y/o beta caroteno.
Las composiciones de la presente invención también comprenden carnitina o acetilcarnitina, que son compuestos de 45 amonio cuaternario con efectos antioxidantes.
En realizaciones seleccionadas, las composiciones además comprenden al menos un mineral dietético y/o al menos un aminoácido natural. Los ejemplos de minerales dietéticos y aminoácidos naturales son bien conocidos. Los ejemplos de minerales dietéticos incluyen, pero sin limitación, calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc y vanadio. En una realización la composición comprende al menos uno de calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc o vanadio. En otra realización la composición comprende al menos dos de calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc o vanadio. En otra realización más la composición comprende al
55 menos tres de calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc o vanadio. En otra realización más, la composición comprende al menos cuatro de calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc o vanadio. En otra realización más, la composición comprende al menos cinco o más de calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc o vanadio.
Los aminoácidos naturales son bien conocidos en la técnica y son los aminoácidos encontrados en proteínas. En una realización específica, la composición comprende un aminoácido esencial, donde el término aminoácido esencial es relativo a la especie del sujeto. Por ejemplo, los aminoácidos esenciales para perros y gatos incluyen
65 arginina, metionina, histidina, fenilalanina, isoleucina, treonina, leucina, triptófano, lisina y valina. La taurina también puede considerarse un aminoácido esencial en gatos.
En una realización la composición alimentaria canina j/d comprende una composición generalmente expuesta en la Figura 4, e incluye un glicosaminoglicano en forma de sulfato de condroitina, y un azúcar amino en la forma de hidrocloruro de glucosamina así como carnitina y al menos un antioxidante. La composición también puede contener
5 fuentes adicionales de nutrientes, por ejemplo: maíz integral molido, alimento de subproductos de pollo, linaza, residuos de la molienda de la soja, levadura de arroz, alimento de soja, grasa porcina (conservada con tocoferoles mezclados y ácido cítrico), aroma a hígado de pollo, celulosa en polvo, aceite de pescado, cloruro potásico, L-lisina, carbonato de calcio, cloruro de colina, sal yodada, DL-metionina, suplemento de vitamina E, vitaminas (L-ascorbil-2polifosfato (fuente de vitamina C), suplemento de vitamina E, niacina, mononitrato de tiamina, suplemento de vitamina A, pantotenato de calcio, biotina, suplemento de vitamina B12, hidrocloruro de piridoxina, riboflavina, ácido fólico, suplemento de vitamina D3), L-treonina, taurina, lecitina de soja, hidrocloruro de glucosamina, minerales (sulfato ferroso, óxido de cinc, sulfato de cobre, óxido manganoso, yodato de calcio, selenito sódico), L-triptófano, Lcarnitina, conservados con tocoferoles mezclados y ácido cítrico, sulfato de condroitina, beta caroteno, extracto de romero.
15 La composición de alimentación felina j/k de la invención utilizada en los ejemplos contenía ácidos grados omega 3, ácidos grasos omega 6 y también contenía ácido alfa linoleico. La composición contenía un glicosaminoglicano en la forma de sulfato de condroitina, y un azúcar amino en forma de hidrocloruro de glucosamina. Además, la composición contenía carnitina y al menos un antioxidante, por ejemplo, vitamina C y beta caroteno.
El término “animal” significa un animal humano o no humano, incluyendo animales aviares, bovinos, caninos, equinos, felinos, hircinos, murinos, ovinos, primates, y porcinos.
El término “anticuerpo” significa cualquier inmunoglobulina que se une a un antígeno específico, incluyendo
25 anticuerpos IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE. El término incluye composiciones de anticuerpos policlonales, monoclonales, monovalentes, humanizados, heteroconjugados con especificidad poliepitópica, quiméricos, biespecíficos, diacuerpos, anticuerpos de cadena sencilla, y fragmentos de anticuerpos tales como Fab, Fab’, F(ab’)2, y Fv, u otros fragmentos de unión a antígenos.
El término “matriz” significa una disposición ordenada de al menos dos sondas en un sustrato. Al menos una de las sondas es un control o estándar y al menos una de las sondas es una sonda diagnóstica. La disposición de aproximadamente dos a aproximadamente 40.000 sondas en un sustrato asegura que el tamaño y la intensidad de la señal de cada complejo marcado formado entre una sonda y un polinucleótido o polipéptido de muestra es distinguible individualmente.
35 La expresión “expresión diferencial” o “expresado diferencialmente” significa expresión génica aumentada o desregulada o significa expresión génica disminuida o regulada negativamente detectada por la ausencia, presencia,
o al menos un cambio múltiplo del doble, o al menos un cambio de 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1 o 1 veces en la cantidad de ARN mensajero transcrito o proteína traducida en una muestra.
El término “múltiplo” cuando se usa como una medida de expresión génica diferencial significa una cantidad de expresión génica en un animal que es un múltiplo o una fracción de la expresión génica comparada con la cantidad de expresión génica en un animal de comparación, por ejemplo, un animal artrítico comparado con un animal no artrítico. Por ejemplo, un gen que se expresa tres veces más en el animal que en el animal de comparación tiene
45 una expresión génica diferencial de múltiplo 3 y un gen que se expresa un tercio en el animal de lo que se expresa en el animal de comparación también tiene una expresión génica diferencial de múltiplo 3.
El término “fragmento” significa (1) una secuencia de oligonucleótido o polinucleótido que es una porción de una secuencia completa y que tiene la misma actividad o similar para un uso particular que la secuencia completa de polinucleótido o (2) una secuencia de péptido o polipéptido que es un porción de una secuencia completa y que tiene la misma actividad o similar para un uso particular que la secuencia completa de polipéptido. Dichos fragmentos pueden comprender cualquier número de nucleótidos o aminoácidos considerados adecuados para un uso particular. En general, los fragmentos de oligonucleótidos o polinucleótidos contienen al menos aproximadamente 10, 50, 100, o 1.000 nucleótidos y los fragmentos de polipéptidos comprenden al menos aproximadamente 4, 10, 20,
55 o 50 aminoácidos consecutivos de la secuencia completa. El término engloba variantes de polinucleótidos y polipéptidos de los fragmentos.
El término “gen” o “genes” significa un segmento completo o parcial de ADN involucrado en la producción de un polipéptido, incluyendo regiones precedentes y consecutivas a la región codificante (líder y trailer) y secuencias intermedias (intrones) entre segmentos codificantes individuales (exones). El término engloba cualquier secuencia de ADN que hibride con el complemento de secuencias génicas codificantes.
El término “homólogo” significa (1) un polinucleótido, incluyendo polinucleótidos de la misma o distinta especie animal, que tienen más de un 30 %, 50 %, 70 %, o 90 % de similaridad de secuencia con un polinucleótido y que 65 tienen las mismas o sustancialmente las mismas propiedades y efectúan la misma o sustancialmente la misma función que el polinucleótido completo, o que tienen la capacidad o hibridan específicamente con un polinucleótido
en condiciones restrictivas o (2) un polipéptido, incluyendo polipéptidos de la misma o diferentes especies animales, que tienen una más del 30 %, 50 %, 70 %, o 90% de similitud de secuencia con un polipéptido identificado por la expresión de polinucleótidos y que tienen las mismas o sustancialmente las mismas propiedades y efectúan la misma o sustancialmente la misma función que el polipéptido completo, o que tienen la capacidad de unirse
5 específicamente a un polipéptido identificado por la expresión de polinucleótidos. La similitud de secuencia de dos secuencias de polipéptidos o de dos secuencias de polinucleótidos se determina usando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, el algoritmo de Karlin y Altschul (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268 (1990)). Dicho algoritmo se incorpora en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al. (J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)). Para obtener alineamientos espaciados con propósitos de comparación, puede utilizarse Gapped Blast como se describe en Altschul et al. (Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)). Cuando se utilizan los programas BLAST y Gapped BLAST, se usan los parámetros por defecto de los respectivos programas (por ejemplo, XBLAST y NBLAST). Véase http://ww.ncbi.nlm.nih.gov.
La expresión “complejo de hibridación” significa un complejo que se forma entre polinucleótidos de muestra cuando
15 las purinas de un polinucleótido forman enlace de hidrógeno con las pirimidinas del polinucleótido complementario, por ejemplo, los pares de bases 5’-A-G-T-C-3’ con 3’-T-C-A-G-5’. El grado de complementariedad y el uso de análogos de nucleótidos afectan a la eficiencia y rigor de las reacciones de hibridación.
La expresión “en conjunción” significa que un medicamento, alimento, u otra sustancia se administra a un animal (1) junto en una composición, en particular en una composición alimentaria, o (2) por separado con la misma o distinta frecuencia usando la misma o distintas rutas de administración aproximadamente a la vez o de manera periódica. “De manera periódica” significa que la sustancia se administra en un calendario de dosificación aceptable para una sustancia específica. “Aproximadamente a la vez” generalmente significa que la sustancia (alimento o medicamento) se administra a la vez o dentro de aproximadamente 72 horas una de la otra. “En conjunción” incluye
25 específicamente calendarios de administración donde las sustancias como medicamentos se administran durante un periodo prescrito y las composiciones de la presente invención se administran de manera indefinida.
El término “polinucleótido” u “oligonucleótido” significa un polímero de nucleótidos. El término engloba moléculas de ADN y ARN (incluyendo ADNc y ARNm), ya sean mono o bicatenarias y, en caso de monocatenarias, su secuencia complementaria ya sea en forma lineal o circular. El término también engloba fragmentos, variantes, homólogos, y alelos, según sea apropiado para las secuencias que tienen las mismas o sustancialmente las mismas propiedades y efectúan la misma o sustancialmente la misma función que la secuencia original. Las secuencias pueden ser completamente complementarias (sin desajustes) cuando se alinean o pueden tener hasta aproximadamente un 30 % de desajuste de secuencia. Preferentemente, para polinucleótidos, la cadena contiene de aproximadamente 50 a
35 10.000 nucleótidos, más preferentemente de aproximadamente 150 a 3.500 nucleótidos. Preferentemente, para oligonucleótidos, la cadena contiene de aproximadamente 2 a 100 nucleótidos, más preferentemente de aproximadamente 6 a 30 nucleótidos. El tamaño exacto de un polinucleótido u oligonucleótido dependerá de varios factores y de la aplicación concreta y uso del polinucleótido u oligonucleótido. El término incluye polímeros de nucleótidos que se sintetizan y que se aíslan y purifican a partir de fuentes naturales. El término “polinucleótido” es inclusivo de “oligonucleótido”.
El término “polipéptido”, “péptido” o “proteína” significa un polímero de aminoácidos. El término engloba polímeros de origen natural y de origen no natural (sintéticos) y polímeros en que se sustituyen miméticos químicos artificiales por uno o más aminoácidos. El término también engloba fragmentos, variantes, y homólogos que tienen las mismas o 45 sustancialmente las mismas propiedades y efectúan la misma o sustancialmente la misma función que la secuencia original. El término engloba polímeros de cualquier longitud, preferentemente polímeros que contienen de aproximadamente 2 a 1000 aminoácidos, más preferentemente de aproximadamente 5 a 500 aminoácidos. El término incluye polímeros de aminoácidos que se sintetizan y que se aíslan y purifican a partir de orígenes naturales.
El término “sonda” significa (1) un oligonucleótido o polinucleótido, tanto de ARN o ADN, ya sea de origen natural como un digerido de enzima de restricción purificada o producida sintéticamente, que es capaz de hibridar con o hibridar específicamente con un polinucleótido con secuencias complementarias a la sonda o (2) un péptido o polipéptido capaz de unir específicamente una proteína particular o fragmento de proteína a la exclusión sustancial de otras proteínas o fragmentos de proteínas. Una sonda de oligonucleótido o polinucleótido puede ser mono o 55 bicatenaria. La longitud exacta de la sonda dependerá de varios factores, incluyendo temperatura, fuente, y uso. Por ejemplo, para aplicaciones diagnósticas, dependiendo de la complejidad de la secuencia diana, una sonda de oligonucleótido típicamente contiene de aproximadamente 10 a 100, de 15 a 50, o de 15 a 25 nucleótidos. En determinadas aplicaciones diagnósticas, una sonda de polinucleótido contiene aproximadamente 100-1000, 300-600 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 300 nucleótidos. Las sondas en el presente documento se seleccionan para ser “sustancialmente” complementarias a diferentes cadenas de una secuencia diana particular. Esto significa que las sondas tienen que ser suficientemente complementarias para hibridar o hibridar específicamente con sus secuencias diana respectivas en un conjunto de condiciones predeterminadas. Por lo tanto, la secuencia de la sonda no necesita reflejar la secuencia complementaria exacta de la diana. Por ejemplo, un fragmento de nucleótido no complementario puede unirse al extremo 5’ o 3’ de la sonda, con el resto de la secuencia 65 de la sonda siendo complementaria a la secuencia diana. Como alternativa, las bases no complementarias o secuencias más largas pueden intercalarse dentro de la sonda ya que la secuencia de la sonda tiene suficiente
complementariedad con la secuencia del polinucleótido diana para hibridar específicamente con el polinucleótido diana. Una sonda de péptido o polipéptido puede ser cualquier molécula a la que la proteína o péptido se una específicamente, incluyendo ADN (para proteínas que se unen a ADN), anticuerpos, receptores de membrana celular, péptidos, cofactores, lecitinas, azúcares, polisacáridos, células, membranas celulares, orgánulos y
5 membranas organulares.
El término “muestra” significa cualquier tejido animal o fluido que contiene, por ejemplo, polinucleótidos, polipéptidos, anticuerpos, metabolitos, y similares, incluyendo células y otros tejidos que contienen ADN y ARN. Los ejemplos incluyen sangre, cartílago, tejido conectivo, epitelial, linfoide, muscular, nervioso, esputo y similares. Una muestra puede ser sólida o líquida o puede ser ADN, ARN, ADNc, fluidos corporales como sangre u orina, células, preparaciones de células o fracciones solubles o alícuotas de medios de los mismos, cromosomas, orgánulos, y similares.
El término “paquete unitario” significa que los componentes de un kit están asociados físicamente en o con uno o
15 más contenedores y se consideran una unidad de fabricación, distribución, venta, o uso. Los contenedores incluyen, pero sin limitación, bolsas, cajas, botellas, paquetes de envoltura reducida, componentes grapados o fijados de otro modo, o combinaciones de los mismos. Un paquete unitario puede ser contenedores de composiciones alimentarias individuales asociadas físicamente de tal modo que se consideran una unidad de fabricación, distribución, venta, o uso.
La expresión “variaciones útiles” significa (1) para un polinucleótido, los complementos del polinucleótido; los homólogos del polinucleótido y sus complementos; las variantes del polinucleótido, sus complementos, y sus homólogos; y los fragmentos del polinucleótido, sus complementos, sus homólogos, y sus variantes y (2) para un polipéptido, los homólogos del polipéptido; las variantes del polipéptido y sus homólogos; y los fragmentos del
25 polinucleótido, sus homólogos, y sus variantes.
El término “paquete virtual” significa que los componentes de un kit se asocian mediante instrucciones en uno o más componentes físicos o virtuales del kit que instruyen el usuario en cómo obtener los otros componentes, por ejemplo, en una bolsa que contiene un componente que instruya al usuario a ir a una página web, contactar con un mensaje grabado, ver un mensaje visual, o contactar con un cuidador o instructor para obtener instrucciones de cómo usar el kit.
La expresión “estándar” significa (1) una muestra de control que contiene tejido de un animal normal si, por ejemplo, se está evaluando un animal artrítico o tejido de, por ejemplo, un animal artrítico si se está evaluando un animal
35 normal o (2) una muestra de control que contiene tejido de un animal normal o, por ejemplo artrítico que no se ha expuesto a una sustancia de ensayo siendo examinada en el normal correspondiente o, por ejemplo animal artrítico para determinar si la sustancia de ensayo causa una expresión génica diferencial, según sea apropiado para el contexto de su uso.
La expresión “condiciones rigurosas” significa (1) hibridación en formamida al 50 % (vol/vol) con seroalbúmina bovina al 0,1 %, ficoll al 0,1 %, polivinilpirrolidona al 0,1 %, tampón de fosfató sódico 50 mM a pH 6,5 con 750 mM de NaCl, 75 mM de citrato sódico a 42 ºC, (2) hibridación en formamida al 50 %, SSC 5x (0,75 M de NaCl, 0,075 M de citrato de sodio), 50 mM de fosfato de sodio (pH 6,8), pirofosfato de sodioal 0,1 %, 5x de solución de Denhardt, ADN de esperma de salmón sonicado (50 g/ml), SDS al 0,1 %, y sulfato de dextrán al 10 % a 42 ºC; con lavados a
45 42 ºC en SSC 0,2x y SDS al 0,1 % o lavados con 0,015 M de NaCl, 0,0015 M de citrato de sodio, Na2SO4 al 0,1 % a 50 ºC o procedimientos similares que emplean agentes de lavado de baja fuerza iónica y elevada temperatura y agentes desnaturalizantes similares.
La expresión “sustancia” significa un elemento, compuesto, molécula, o una mezcla de los mismos o cualquiera otro material que puede ser potencialmente útil para diagnosticar, pronosticar, o modular la aparición o severidad de una afección anormal de articulaciones en un animal, incluyendo cualquier medicamento, entidad química o entidad biológica.
El término “ARNsi” significa un polinucleótido que forma un ARN bicatenario que reduce o inhibe la expresión de un
55 gen cuando el ARNsi se expresa en la misma célula que el gen. El término engloba ARN bicatenario formado por cadenas complementarias. Las porciones complementarias de ARNsi que hibridan para formar la molécula bicatenaria tienen típicamente una identidad sustancial o completa. Típicamente, el ARNsi contiene al menos aproximadamente 15-50 nucleótidos y el ARNsi bicatenario contiene aproximadamente 15-50 pares de bases, preferentemente aproximadamente 20-30 nucleótidos y pares de bases.
La expresión “se une específicamente” significa una interacción especial y precisa entre dos moléculas que es dependiente de su estructura, en particular de sus grupos laterales moleculares. Por ejemplo, la intercalación de una proteína reguladora en el surco mayor de una molécula de ADN, la unión de hidrógeno a lo largo de la estructura entre dos ácidos nucleicos monocatenarios, o la unión entre un epítopo de una proteína y un agonista, antagonista,
65 o anticuerpo.
La expresión “hibrida específicamente” significa una asociación entre dos polinucleótidos monocatenarios de secuencia suficientemente complementaria para permitir dicha hibridación en condiciones predeterminadas generalmente usadas en la técnica (a veces citado “sustancialmente complementario”). Por ejemplo, la expresión puede referirse la hibridación de una sonda de polinucleótido con una secuencia sustancialmente complementaria
5 contenida en una molécula de ADN o ARN monocatenaria de acuerdo con un aspecto de la invención, a la exclusión sustancial de hibridación de la sonda de polinucleótido con polinucleótidos monocatenarios de secuencia no complementaria.
El término “variante” significa (1) una secuencia de polinucleótido que contiene cualquier sustitución, variación, modificación, reemplazo, deleción, o adición de uno o más nucleótidos de o a una secuencia de polinucleótidos y que tiene las mismas o sustancialmente las mismas propiedades y efectúa la misma o sustancialmente la misma función que la secuencia original y (2) una secuencia de polipéptido que contiene cualquier sustitución, variación, modificación, reemplazo, deleción, o adición de uno o más aminoácidos de o a una secuencia de polipéptidos y que tiene las mismas o sustancialmente las mismas propiedades y efectúa la misma o sustancialmente la misma función
15 que la secuencia original. El término por lo tanto incluye polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) y variantes alélicas e incluye sustituciones de aminoácidos conservativas y no conservativas en los polipéptidos. El término también engloba derivación química de un polinucleótido o polipéptido y sustitución de nucleótidos o aminoácidos con nucleótidos o aminoácidos de origen no natural, según sea necesario.
A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos y cualquier acrónimo usado en el presente documento tienen los mismos significados que los comúnmente entendidos por un experto en la técnica de la invención.
En un aspecto, la presente descripción proporciona uno o más genes o segmentos de genes (“genes” según se
25 define en el presente documento) que se expresan diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales. Esto se basa en el descubrimiento de polinucleótidos que se expresan diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales. Los genes se identificaron comparando la expresión de genes en linfocitos de animales diagnosticados como anormales con genes en linfocitos de animales diagnosticados como normales usando la tecnología Affymetrix GeneChip®.
Los polinucleótidos y genes se identifican midiendo diferencias en la expresión génica de linfocitos de caninos diagnosticados como anormales con la expresión génica en linfocitos de caninos diagnosticados como normales. Los cambios en la expresión génica pueden determinarse por cualquier método conocido para los expertos en la técnica. Generalmente, los cambios en la expresión génica se determinan midiendo la transcripción (determinando la 35 cantidad de ARNm producida por un gen) o midiendo la traducción (determinando la cantidad de proteína producida por un gen). La cantidad de ARN o proteína producida por un gen puede determinarse usando cualquier método conocido para los expertos en la técnica para cuantificar polinucleótidos y proteínas. Generalmente, la expresión de ARN se determina usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (incluyendo, sin limitación, PCR de transcripción inversa (RT-PCR) y PCR en tiempo real cuantitativa (qPCR)), protección de ARNasa, transferencia de Northern, y otros métodos de hibridación. El ARN medido se encuentra típicamente en forma de ARNm o ARNm retrotranscrito. La expresión de proteína o polipéptido se determina usando varios ensayos colorimétricos y espectroscópicos y métodos tales como el ensayo lowry, el ensayo biuret, ensayos de fluorescencia, métodos turbidimétricos, el ensayo bisincrónico, tecnología de chip de proteínas, absorbancia infrarroja, ninhidrina, el ensayo Bradford, y absorbancia ultravioleta. En un método preferido, los cambios en la expresión génica se determinan
45 usando los chips génicos Affymetrix Canine-1 y Canine-2 disponibles para su compra a través de Affymetrix, Inc. y las instrucciones para usar dichos chips para determinar la expresión génica.
Generalmente, la expresión génica diferencial en animales anormales comparada con animales normales se determina midiendo la expresión de al menos un gen. Preferentemente, la expresión de dos o más genes expresados diferencialmente se mide para proporcionar un patrón de expresión génica o perfil de expresión génica. Más preferentemente, la expresión de una pluralidad de genes expresados diferencialmente se mide para proporcionar información adicional para un patrón o perfil de expresión génica más significativo.
En otro aspecto, la descripción proporciona un dispositivo adecuado para detectar la expresión de una pluralidad de
55 genes expresados diferencialmente en animales anormales comparados con animales normales. El dispositivo comprende un sustrato que tiene una pluralidad de las sondas de oligonucleótidos o polinucleótidos de la presente invención fijadas al sustrato en ubicaciones conocidas. El dispositivo es esencialmente una versión inmovilizada de las sondas de oligonucleótido o polinucleótido descritas en el presente documento. El dispositivo es útil para una detección rápida y específica de genes y polinucleótidos y sus patrones y perfiles de expresión. Típicamente, dichas sondas se unen a un sustrato o soporte sólido similar y se expone una muestra que contiene uno o más polinucleótidos (por ejemplo, un gen, un producto de PCR, un producto de una reacción en cadena de la ligasa (LCR), una secuencia de ADN que se ha sintetizado usando técnicas de amplificación, o una mezcla de los mismos) a las sondas de tal forma que el o los polinucleótidos de muestra pueden hibridar con las sondas. Ya sean las sondas, el o los polinucleótidos de muestra, o ambos, se marcan, típicamente con un fluoróforo u otro marcador
65 como estreptavidina, y se detectan usando métodos conocidos para los expertos en la técnica. Si el o los polinucleótidos están marcados, la hibridación puede detectarse detectando la fluorescencia de unión. Si las sondas
están marcadas, la hibridación se detecta típicamente truncando el marcador. Si tanto la sonda como el o los polinucleótidos de muestra están marcados, la hibridación se detecta típicamente evaluando un cambio de color resultante de la proximidad de dos marcadores unidos. Una variedad de estrategias de marcaje y marcadores son conocidas para los expertos en la técnica, particularmente para marcadores fluorescentes. Preferentemente, las
5 sondas se inmovilizan en sustratos adecuados para formar una matriz (conocida por varios nombres incluyendo micromatriz de ADN, chip génico, biochip, chip de ADN, y matriz génica) comparable con aquellas conocidas en la técnica.
Las sondas de polipéptidos pueden producirse de acuerdo con métodos convencionales, por ejemplo, usando los datos de secuencia de nucleótidos proporcionados para polinucleótidos de la presente invención y métodos conocidos en la técnica. Dichos métodos incluyen, pero sin limitación, aislar el polipéptido directamente de las células, aislar o sintetizar ADN o ARN que codifica los polipéptidos y usar el ADN o ARN para producir productos recombinantes, sintetizar los polipéptidos químicamente a partir de aminoácidos individuales, y producir fragmentos de polipéptido mediante la escisión química de los polipéptidos existentes.
15 En otro aspecto, la descripción proporciona un dispositivo adecuado para detectar la expresión de una pluralidad de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales. El dispositivo comprende un sustrato que tiene una pluralidad de las sondas de péptido o polipéptido de la presente invención fijadas al sustrato en ubicaciones conocidas. El dispositivo es esencialmente una versión inmovilizada de las sondas de péptido o polipéptido descritas en el presente documento. El dispositivo es útil para la detección rápida y específica de proteínas y sus patrones de expresión. Típicamente, dichas sondas se unen a un sustrato y se expone una muestra que contiene uno o más proteínas a las sondas de tal forma que las proteínas de la muestra pueden hibridar con las sondas. En determinadas realizaciones, las sondas, se marcan y detectan las proteínas de la muestra, o ambas, típicamente con un fluoróforo u otro agente conocido para los expertos en la técnica.
25 Generalmente, los mismos métodos e instrumentación usados para leer micromatrices de polinucleótidos son aplicables para matrices de proteínas. Preferentemente, las sondas se inmovilizan sobre un sustrato adecuado para formar una matriz.
Los métodos para determinar la cantidad o concentración de proteína en una muestra son conocidos para los expertos en la técnica. Dichos métodos incluyen radioinmunoensayos, ensayos de unión competitiva, análisis de transferencia de Western, y ensayos ELISA. Para los métodos que usan anticuerpos, son adecuados los anticuerpos policlonales y monoclonales. Dichos anticuerpos pueden ser inmunológicamente específicos para una proteína, epítopo de proteína, o fragmento de proteína.
35 Algún aspecto de la descripción utiliza anticuerpos para la detección y cuantificación de proteínas producidas por la expresión de los polinucleótidos de la presente invención. Aunque las proteínas pueden detectarse mediante inmunoprecipitación, separación de afinidad, análisis de transferencia de Western, matrices de proteínas, y similares, un método preferido utiliza tecnología de ELISA en donde el anticuerpo se inmoviliza sobre un soporte sólido y se expone una proteína o péptido diana al anticuerpo inmovilizado. Ya sea la sonda, o la diana, o ambas, pueden marcarse usando métodos conocidos.
En algunos aspectos, se observan los patrones o perfiles de expresión de una pluralidad de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales utilizando una matriz de sondas para detectar polinucleótidos o polipéptidos. En una realización, pueden utilizarse matrices de sondas de
45 oligonucleótidos o polinucleótidos, mientras que otra realización puede utilizar matrices de anticuerpos u otras proteínas que se unen específicamente a los productos génicos expresados diferencialmente de la presente invención. Dichas matrices pueden estar disponibles comercialmente o pueden hacerse a medida usando métodos conocidos para los expertos en la técnica, por ejemplo, síntesis in situ sobre un soporte sólido o unión de sondas presintetizadas a un soporte sólido mediante técnicas de microimpresión. En varias realizaciones, las matrices de sondas de polinucleótidos o polipéptidos se hacen a medida para detectar específicamente transcritos o proteínas producidas por los genes expresados diferencialmente de la presente invención.
En un aspecto, las matrices de sondas de polinucleótidos o polipéptidos se hacen a medida para detectar específicamente transcritos o proteínas producidas por dos o más polinucleótidos o genes identificados en la Tabla 2
55 y/o Tabla 3. Estas sondas están diseñadas para detectar genes asociados con las vías metabólicas de los lípidos y de la glucosa en animales. En otra realización, las matrices de sondas de polinucleótidos o polipéptidos están hechas a medida para detectar específicamente transcritos o proteínas producidas por dos o más polinucleótidos o genes identificados en la Tabla 3. Estas sondas están diseñadas para detectar genes que son particularmente relevantes para animales anormales en comparación con animales normales.
En un aspecto adicional, la descripción proporciona un método para detectar la expresión diferencial de uno o más genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales en una muestra. El método comprende (a) hibridar una combinación que comprende una pluralidad de sondas de polinucleótido que están expresadas diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales con 65 polinucleótidos en la muestra para formar uno o más complejos de hibridación; (b) opcionalmente, hibridar una combinación que comprende una pluralidad de sondas de polinucleótidos que están expresadas diferencialmente en
animales anormales en comparación con animales normales con polinucleótidos en un estándar para formar uno o más complejos de hibridación; (c) detectar los complejos de hibridación de la muestra y, opcionalmente, el estándar de la etapa (b); y (d) comparar los complejos de hibridación de la muestra con los complejos de hibridación de un estándar, en donde una diferencia en la cantidad de los complejos de hibridación entre el estándar y la muestra
5 indican la expresión diferencial de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales en la muestra.
La etapa (b) y parte de la etapa (c) son opcionales y se usan si se va a realizar una comparación relativamente contemporánea de dos o más sistemas de ensayo. Sin embargo, en una realización preferida, el estándar usado para la comparación se basa en datos obtenidos previamente usando el método.
Estas sondas se exponen a una muestra para formar complejos de hibridación que detectan y comparan con los de un estándar. Las diferencias entre los complejos de hibridación de la muestra y el estándar indican expresión diferencial de polinucleótidos y por tanto genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación
15 con animales normales en la muestra. En una realización preferida, las sondas se hacen para detectar específicamente nucleótidos o fragmentos de los mismos producidos por uno o más de los genes o fragmentos de genes identificados en la presente invención. Los métodos para detectar los complejos de hibridación son conocidos para los expertos en la técnica.
En un aspecto, el método además comprende exponer al animal o muestra a una sustancia de ensayo antes de la hibridación. A continuación, la comparación es indicativa de si la sustancia de ensayo alteró la expresión de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, particularmente genes asociados a la anormalidad, en la muestra.
25 En otro aspecto, la descripción proporciona un método para detectar la expresión diferencial de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales en una muestra. El método comprende (a) hacer reaccionar una combinación que comprende una pluralidad de sondas de polipéptidos con proteínas en la muestra en condiciones que permiten que suceda la unión específica entre las sondas y las proteínas, en donde las proteínas unidas por las sondas se expresan diferencialmente en un animal anormal en comparación con un animal normal; (b) opcionalmente, hacer reaccionar una combinación que comprende una pluralidad de sondas de polipéptido con proteínas en un estándar en condiciones que permiten que suceda la unión específica entre las sondas y las proteínas, en donde las proteínas unidas por las sondas se expresan diferencialmente en un animal anormal en comparación con un animal normal; (c) detectar la unión específica en la muestra y, opcionalmente, el estándar de la etapa (b); y (d) comparar la unión específica en la muestra con la de un
35 estándar, en donde las diferencias entre la unión específica en el estándar y la muestra indica la expresión diferencial de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales en la muestra.
Estas sondas se exponen a una muestra para formar unión específica que se detecta y compara con aquellas de un estándar. Las diferencias entre la unión específica de la muestra y estándar indican la expresión diferencial de proteínas y por tanto genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, en particular genes asociados a la anormalidad, en la muestra. En una realización preferida, las sondas se producen para detectar específicamente proteínas o fragmentos de las mismas producidas por uno o más de los genes o fragmentos génicos identificados por la presente invención.
45 En un aspecto, el método además comprende exponer al animal o muestra a una sustancia de ensayo antes de hacer reaccionar los polipéptidos con las proteínas. Por tanto, la comparación es indicativa de si la sustancia de ensayo alteró la expresión de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, particularmente genes asociados a la anormalidad, en la muestra.
En otro aspecto, el método para detectar la expresión de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales en una muestra se usa para evaluar el progreso de un animal cuando se intenta modular la cantidad de, por ejemplo, tejido artrítico en el animal en respuesta a un programa de modulación de tejido del cartílago. El método se efectúa a intervalos, preferentemente intervalos prefijados, durante el programa
55 de modulación y el progreso del animal se evalúa comparando los resultados del método en dos o más puntos durante el programa de modulación. Un cambio en la expresión de uno o más de los genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, particularmente genes asociados a la anormalidad, o en el patrón de expresión génica, o la ausencia de cualquier cambio, que sea resultado de la comparación indica la efectividad del programa de modulación.
Las sustancias de ensayo pueden ser cualquier sustancia que pueda tener un efecto sobre los polinucleótidos o genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, en particular genes asociados a la anormalidad. Las sustancias de ensayo incluyen, pero sin limitación, aminoácidos, proteínas, péptidos, polipéptidos, ácidos nucleicos, oligonucleótidos, polinucleótidos, moléculas pequeñas, macromoléculas, 65 vitaminas, minerales, azúcares simples, azúcares complejos, polisacáridos, carbohidratos, triglicéridos de cadena mediana (MCT), triacilglicéridos (TAG), ácidos grasos n-3 (omega 3) incluyendo DHA, EPA, ALA, ácidos grasos n-6
(omega 6) incluyendo LA, ácido -linolénico (GLA) y ARA, SA, ácido linoleico conjugado (CLA), fuentes de colina como lecitina, vitaminas liposolubles incluyendo vitamina A y precursores de la misma como carotenoides (por ejemplo, -caroteno), fuentes de vitamina D como vitamina D2 (ergocalciferol) y vitamina D3 (colecalciferol), fuentes de vitamina E como tocoferoles (por ejemplo, -tocoferol) y tocotrienoles, y fuentes de vitamina K como vitamina KI
5 (filoquinona) y vitamina K2 (menadiona), vitaminas hidrosolubles incluyendo vitaminas de tipo B como riboflavina, niacina (incluyendo nicotinamida y ácido nicotínico), piridoxina, ácido pantoténico, ácido fólico, biotina y cobalamina, y vitamina C (ácido ascórbico), antioxidantes, incluyendo algunas de las vitaminas listadas anteriormente, especialmente las vitaminas E y C, también bioflavonoides como catequina, quercetina y teaflavina; quinonas como ubiquinona, carotenoides como licopeno y licoxantina; resveratrol; y ácido -lipoico, L-carnitina; D-limoneno, glucosamina; S-adenosilmetionina, y quitosano. En una realización preferida, las sustancias de ensayo son nutrientes que pueden añadirse a alimentos o consumirse como un suplemento. Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, ácidos grasos como ácidos grasos omega 3 (por ejemplo, DHA y EPA) y ácidos grasos omega 6 (por ejemplo, ARA), carnitina, metionina, vitamina C, vitamina E y vitamina D.
15 En un aspecto preferido, las sustancias útiles para afectar a la expresión de genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, particularmente genes asociados a la anormalidad, pueden identificarse usando métodos divulgados en la Solicitud de Patente Provisional de los Estados Unidos del mismo autor Nº 60/657980, registrada el 2 de marzo de 2005 y cualquier solicitud de patente de los Estados Unidos
o extranjera posterior que reclame la prioridad sobre esta.
El perfil de expresión para animales normales usado en la comparación puede obtenerse a partir de uno o más animales normales contemporáneamente con el perfil de expresión para el animal que está siendo evaluado o a partir de una base de datos de perfiles de expresión de animales normales. Preferentemente, se encuentra disponible una base de datos de perfiles de expresión para animales normales acumulada durante un periodo de
25 tiempo para su uso como referencia.
Determinar si los polinucleótidos o polipéptidos se expresan diferencialmente puede lograrse detectando los polinucleótidos o polipéptidos usando los métodos conocidos para los expertos en la técnica, algunos de los cuales se describen en el presente documento.
En otro aspecto, la invención proporciona una composición adecuada para manipular el genoma de un animal. La composición comprende una o más sustancias que interfieren con la expresión de uno o más genes expresados diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales, en particular genes asociados con una anormalidad.
35 En concreto, en una realización la invención engloba una composición que comprende al menos un ácido graso omega 3, al menos un glicosaminoglicano, al menos un azúcar amino, al menos un antioxidante, y carnitina o acetilcarnitina para su uso en un método para alterar la expresión de uno o más genes en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto la composición anteriormente mencionada, los uno o más genes seleccionándose del grupo que consiste en anexina Al, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGBI, IL1[beta], TNF[alfa], TNF[beta], TLR-2, TLR-4, p38 MAPK, TIMP-I, TIMP-2, MMP-I, MMP-2, MMP-13, IL-15 y repetor IL-17.
En otra realización, la invención engloba un uso de la composición de la invención en un método para modular la
45 expresión de uno o más genes expresados diferencialmente en animales que tienen trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas en comparación con animales normales, en particular genes asociados con un trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas. En realizaciones preferidas la composición comprende, en miligramos por kilogramo de peso corporal por día (mg/kg/día), DHA en cantidades de aproximadamente 1 a aproximadamente 30, preferentemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 15; EPA en cantidades de aproximadamente 1 a aproximadamente 30, preferentemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 15; combinación EPA/DHA (relación de 1,5:1) en cantidades de aproximadamente 4/2 a aproximadamente 30/45, preferentemente de aproximadamente 9/6 a aproximadamente 18/12; ALA en cantidades de aproximadamente 10 a aproximadamente 100, preferentemente de aproximadamente 30 a aproximadamente 60; LA en cantidades de aproximadamente 30 a aproximadamente 600, preferentemente de aproximadamente 60 a aproximadamente 300;
55 ARA en cantidades de aproximadamente 5 a aproximadamente 50, preferentemente de aproximadamente 15 a aproximadamente 30; SA en cantidades de aproximadamente 3 a aproximadamente 60, preferentemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 30; y CLA (como control) en cantidades de aproximadamente 6 a aproximadamente 120, preferentemente de aproximadamente 12 a aproximadamente 60. El uso comprende administrar la composición al animal de cualquier forma o modo adecuado para la composición. Preferentemente, el uso comprende administrar la composición al animal oralmente en forma de una composición alimenticia o un suplemento. La composición alimenticia puede ser en cualquier forma, por ejemplo, una composición alimenticia equilibrada nutricionalmente conocida en la técnica como piensos secos, piensos semihidratados, y piensos hidratados para animales, en particular animales de compañía como animales felinos y caninos. Los suplementos incluyen formas de dosificación como comprimidos, cápsulas, y formas similares. En un aspecto adicional, el uso
65 comprende administrar la composición en combinación con uno o más medicamentos u otras sustancias que modulan la cantidad de tejido cartilaginoso en un animal.
En otro aspecto, la invención proporciona una composición adecuada para modular la expresión de uno o más genes expresados diferencialmente en animales que tienen trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas en comparación con animales normales, en particular genes asociados con trastornos 5 anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, o modular la cantidad de tejido cartilaginoso en un animal. La composición comprende una cantidad moduladora de expresión génica o de tejido de uno o más de DHA, EPA, EPA y DHA, ALA, LA, ARA, y SA. En varias realizaciones, la composición comprende, en mg/kg/día, DHA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 1 a aproximadamente 30; EPA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 1 a aproximadamente 30; combinación de EPA/DHA (relación 1,5:1) en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 4/2 a aproximadamente 30/45; ALA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 10 a aproximadamente 100; LA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 30 a aproximadamente 600; ARA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 5 a aproximadamente 50; SA en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 3 a aproximadamente 60; y CLA (como
15 control) en cantidades suficientes para administrar a un animal de aproximadamente 6 a aproximadamente 120. Dichas sustancias pueden ser útiles para modular la cantidad de tejido cartilaginoso en un animal. Preferentemente, las sustancias afectan a la expresión de una pluralidad de dichos genes. En una realización, la composición además comprende uno o más medicamentos u otras sustancias que modulan la cantidad de tejido cartilaginoso en un animal.
En un aspecto adicional, la presente descripción proporciona kits adecuados para determinar la expresión diferencial de uno o más genes expresados diferencialmente en animales que tienen trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas en comparación con animales normales, en particular genes asociados a trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, en un sistema de ensayo.
25 Ejemplo 1: determinación del efecto de varias sustancias o ingredientes en la expresión génica en líneas celulares caninas
Se usan los chips génicos caninos Canine Genome-1 y Canine Genome-2 de Affymetrix para determinar el efecto de varias sustancias de ensayo o ingredientes tales como MCT; TAG; ALA; EPA; DHA; ácido linoleico; ácido esteárico; (SA), ácido linoleico conjugado (CLA), GLA; ácido araquidónico; lecitina; vitamina A, vitamina D, vitamina E, vitamina K, riboflavina, niacina, piridoxina, ácido pantoténico, ácido fólico, biotina vitamina C, catequina, quercetina, teaflavina, ubiquinona, licopeno, licoxantina, resveratrol, ácido -lipoico, L-carnitina, D-limoneno, glucosamina, S-adenosilmetionina; quitosano, varios materiales que contienen uno o más de estos compuestos, y varias 35 combinaciones de los mismos en la expresión génica en cuatro líneas celulares caninas y controles apropiados. Cada ingrediente se evalúa en dos concentraciones como se ilustra para los ingredientes de la muestra seleccionados mostrados en la Tabla 1. El disolvente en la mayor de las dos concentraciones se usa como control. Se usan cuatro líneas celulares caninas: CCL34 (riñón), CRL1430 (timo), CCL183 (hueso) (obtenido de The American Tissue Culture Collection) y CTAC (tiroides) (Véase, Measurement of NK Activity in Effector Cells Purified from Canine Peripheral Lymphocytes, Veterinary Immunology and Immunopathology, 35 (1993) 239-251). Una línea celular tratada con un ingrediente a una concentración específica se cita como “tratamiento” y una muestra sin tratar se cita como “control”. Las palabras “genes” y “sondas” se usan de manera sinónima en este método. La expresión génica se mide para las líneas celulares de tratamiento y controles usando las instrucciones proporcionadas por los chips Affymetrix. La información detallada de secuencia para cada número de identificación de sonda única está
45 disponible a través del fabricante.
Los datos de expresión génica se determinan como regulados “positivamente” o “negativamente” para cualquier tratamiento dado. La decisión de si un gen está “positivamente” o “negativamente” se basa en el cambio múltiplo, que se calcula como intensidad de tratamiento/intensidad de control para cada sonda individual. El cambio múltiplo se considera regulado negativamente si su valor es < 1/1,5 (para el análisis de las 4 líneas celulares) o < 1/2 (para el análisis dentro de las líneas celulares) y está regulado positivamente si es > 1,5 (para el análisis de las 4 líneas celulares) o > 2 (para el análisis dentro de las líneas celulares). También, se considera que una sonda es significante para un escrutinio adicional si está presente en solamente una de las condiciones que se están comparando (tratamiento o control) y está “ausente” o “marginal” en la otra y el cambio múltiplo es significante de acuerdo con el
55 programa informático usado. Las sondas que parecen estar reguladas en direcciones opuestas en los dos tratamientos se excluyen de análisis posteriores.
Los datos primarios se analizan usando el programa informático GeneSpring versión 7.0 (GS) (Agilent Corporation) y se validan usando el programa libre R-Bioconductor (RB). Ambos paquetes informáticos se usan para calcular por ordenador las intensidades de las sondas a partir de los archivos CEL generados por el Instrumento Affymetrix. Las llamadas Presente/Ausente/Marginal por sonda y valores de P se calculan por ordenador usando los programas informáticos R-Bioconductor y GeneSpring de manera separada.
Se usan dos enfoques para el análisis de datos. Primero; “entre líneas celulares” y “dentro de líneas celulares
65 individuales”. En el primer enfoque, los genes se seleccionan para su puntuación debido a que se consideran significativos y comunes entre todas las líneas celulares. El “entre las líneas celulares” proporciona los datos de
mayor confianza con un ruido mínimo y pueden proporcionar las mejores pistas posibles de qué genes se ven afectados por ingredientes individuales. En el segundo enfoque, se puntúan únicamente aquellos genes que muestran un cambio múltiplo significativo en los dos tratamientos de acuerdo con ambos paquetes de programas informáticos dentro de líneas celulares individuales. Una muestra de los datos obtenidos de estos experimentos se
5 muestra en la Tabla 2. La Tabla 2 muestra la correlación entre la sustancia de tratamiento (Columna 1), Sonda (unión de datos) (Columna 2), Dirección (Columna 3), Mejor Anotación de BLAST (determinada estadísticamente) (Columna 4), y Número de Acceso Humano (Columna 5). La información para todos los ingredientes evaluados se almacena en una base de datos para referencia.
10 Basándose en el estado fisiológico de los caninos (una diagnóstico de anormal) y una comparación de la información a partir de las Tablas 1-2, es decir, indicando genes que están influenciados por una sustancia o ingrediente de ensayo también están expresados diferencialmente en caninos anormales en comparación con caninos normales, se cree que una fórmula nutricional útil para seleccionar y preparar una composición alimenticia para caninos anormales contendrá uno o más de los siguientes ingredientes en las cantidades siguientes (las cantidades in vivo
15 en miligramos por kilogramo de peso corporal por día (mg/kg/día) se basan en la extrapolación de las cantidades usadas in vitro, por ejemplo: DHA de aproximadamente 1 a aproximadamente 30; EPA de aproximadamente 1 a aproximadamente 30; combinación EPA/DHA (relación 1,5:1) de aproximadamente 4/2 a aproximadamente 30/45; ALA de aproximadamente 10 a aproximadamente 100; LA de aproximadamente 30 a aproximadamente 600; ARA de aproximadamente 5 a aproximadamente 50; y SA de aproximadamente 3 a aproximadamente 60). Basándose en
20 estos datos, una composición alimenticia y dieta relacionada que contiene uno o más de estos ingredientes puede prepararse y usarse para regular los genes que se expresan diferencialmente en animales anormales en comparación con animales normales. Dicha regulación causará la modulación de los trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas en el animal y, por tanto, en una realización, promover un cambio a deseable o estatus normal y promover una mejor salud y bienestar del animal.
Ejemplo 2: procedimientos de aislamiento de ARN
Materiales y Métodos. Los siguientes procedimientos generales pueden usarse para aislar ARN a partir de muestras de tejido de perros y gatos para realizar un perfil de expresión génica utilizando chips génicos como se describe
30 adicionalmente en los ejemplos de esta memoria descriptiva. Será evidente para un experto en la técnica que estos procedimientos o modificaciones de los mismos reconocidos dentro de la técnica pueden aplicarse para aislar ARN a partir de tejido o muestras de fluido corporal para análisis de expresión génica adicionales usando una variedad de procedimientos analíticos disponibles para un experto en la técnica, en particular tecnologías de micromatrices.
35 Aislamiento de ácido ribonucleico (RNA) de tejido
Se pueden recoger muestras de tejido, congelarlas en nitrógeno líquido, descongelarlas y después homogeneizarlas y procesarlas usando un método de extracción de ARN TRIzol® para producir ARN de buena calidad que a continuación se somete a análisis genómicos adicionales.
40 Materiales: hielo, nitrógeno líquido, tejido canino o felino congelado, reactivo de lisis TRIzol®, cloroformo mínimo 99 %, alcohol isopropílico, etanol al 70 % (preparado con etanol, agua absoluta y desionizada, libre de ARNasa), ARNasa Zap®, agua desionizada, RNA Storage Solution®, de Ambion.
45 Equipamiento: homogeneizador Ultra-Turrax T25 Power Homogenizer, Centrifugadora Beckman Coulter Allegra 25R, Centrifugadora Eppendorf, fórceps, escalpelo, superficie de corte dura, es decir tabla de cortar, tubos de microcentrífuga de 1,5 ml estériles libres de ARNasa y ADNasa, tubos de polipropileno desechables de 50 ml estériles libres de ADNasa y ARNasa, pipetas Rainin Pipetman P1000, P200, P20, P10 y P2, puntas de pipeta con filtro para las pipetas P1000, P200, P20, P10 y P2, estériles/libres de ADNasa y ARNasa, y toallitas sin pelusas.
50 Preparaciones: se preparan tubos de polipropileno de 50 ml con 4 ml de TRIzol® (un tubo para cada tejido seleccionado para aislamiento de ARN).
Homogeneización de Tejido: se rellena un contenedor capaz de contener nitrógeno líquido con 3 o 4 cucharadas de
55 nitrógeno líquido. Se coloca una pieza de tejido congelado inmediatamente en el contenedor anteriormente mencionado (el tejido debe ser aproximadamente del tamaño de un guisante) y se coloca el tejido en el tubo de polipropileno de 50 ml adecuadamente etiquetado (que ya contiene 4 ml de TRIzol®). Se comienza la homogeneización inmediatamente usando el Homogeneizador Ultra-Turrax T25 Power Homogenizer. Se homogeniza al ajuste máximo (6) durante 10-15 segundos. Se enfría la muestra en hielo durante 10-15 segundos y
60 después se repite. Se continúa hasta que el tejido está totalmente homogeneizado y la solución es turbia. Tras la homogeneización completa, se tapa el tubo de 50 ml y se vuelve a poner en hielo. Se incuban los tejidos homogeneizados a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de continuar con el procedimiento de aislamiento.
Ejemplo 3: procedimientos de preparación de ARN
Aislamiento de ARN: se siguen generalmente los procedimientos proporcionados en las instrucciones de Invitrogen proporcionadas con el reactivo TRIzol®. Se separa la muestra homogeneizada en cuatro alícuotas de 1 ml en cuatro tubos de microcentrífuga de 1,5 ml. Se añaden 200 l de cloroformo a cada alícuota de 1 ml. Se tapan los tubos, se agitan vorticialmente durante 15 segundos y después se agitan a mano. El resultado debe ser un líquido lechoso de 5 color rosa. Los tubos se incuban a temperatura ambiente durante 2-3 minutos. Los tubos se centrifugan durante 15 minutos a 14.000 rpm y 4 ºC. Se transfiere la fase acuosa (capa superior) a un tubo estéril de microcentrífuga de 1,5 ml. El volumen típico de la fase acuosa que debe transferirse al nuevo tubo es de aproximadamente 500 l. Hay que asegurarse de no transferir cualquiera de las fases intermedias o inferiores. El ARN se precipita de la solución añadiendo 500 l de alcohol isopropílico a cada tubo de microcentrífuga conteniendo la capa acuosa. Los tubos se 10 agitan a mano durante al menos 20 segundos. Las muestras se incuban a temperatura ambiente durante 10 minutos. Las muestras se centrifugan durante 10 minutos, 14.000 rpm a 4 ºC. Se retira el sobrenadante con cuidad aspirando el líquido asegurándose de no soltar el precipitado. Se añade 1 ml de etanol al 70 % para lavar el precipitado. El precipitado se disgrega sacudiendo el tubo (o golpeando el tubo con la parte superior del banco de trabajo) y se agita para mezclar. Se centrifuga durante 5 minutos a 8.200 rpm a 4 ºC. Se retira el sobrenadante con 15 cuidado aspirando el líquido asegurándose de no perder el precipitado. Se usa una toallita sin pelusas para absorber el exceso de etanol para asegurarse de que el precipitado está seco. Se resuspende cada precipitado en 30 l de Solución de Almacenamiento de ARN. Se mezcla con cuidado pipeteando hasta que el ARN se vuelve a disolver y después se almacena a -80 ºC. Puede ser necesario agitar vorticialmente la muestra durante unos cuantos segundos a baja velocidad para facilitar la resuspensión del ARN. Si esto es necesario, hay que centrifugar las
20 muestras, usando la microcentrífuga, antes de congelar.
Limpieza de ARN: se siguen los procedimientos proporcionados en el Manual de Usuario RNeasy®.
Aislamiento de células cultivadas en cámaras OptiCell usando el kit RNeasy Mini
25 Se usan células cultivadas de líneas celulares de mamífero para aislar ARN de buena calidad que luego se usa para un futuro análisis genómico aguas abajo. Todo el trabajo relacionado con el cultivo de las células tiene que hacerse bajo condiciones asépticas estrictas.
30 Reactivos: PBS 10X, H2O desionizada, etanol absoluto, Solución de Almacenamiento de ARN, -Mercaptoetanol, ARNasa Zap®, Tampón RLT, y Tampón RW1 y Tampón RPE (proporcionado en el Kit RNeasy Mini).
Equipamiento/Materiales: Kit RNeasy Mini, columna de centrifugación QIAshredder, cuchillo OptiCell, jeringa estéril de 20 ml, puntas OptiCell, rascador de células, pipeta Pipetman Rainin P1000, pipeta Pipetman Rainin P200, puntas 35 de pipeta con filtro 100-100 l, puntas de pipeta con filtro de 1-200 l, pipetas de transferencia estériles, pila para solución estéril de 55 ml, tubos para microcentrífuga estériles de 1,5 ml, y Microcentrífuga Eppendorf.
Soluciones: tampón RLT (stock proporcionado en Kit RNeasy Mini); se añaden 100 l de -Mercaptoetanol por cada 10 ml de Tampón RLT antes de comenzar el protocolo. Etanol al 70 %: se preparan 50 ml de etanol al 70 % 40 añadiendo 35 ml de etanol absoluto a 15 ml de agua desionizada libre de ARNasa. PBS 1X: agua sin ARNasa. Se filtra la solución usando un filtro de 0,22 m.
Procedimiento: se retiran las células de la Cámara OptiCell (se retiran de un OptiCell cada vez). Se comprueban las células al microscopio para asegurarse de que las células están vivas antes de aislar el ARN. Se retira y desecha el 45 medio de cultivo celular. Usando el cuchillo OptiCell, se corta la membrana superior exponiendo las células en la membrana inferior. Se lava la membrana a la que las células están unidas tres veces con PBS 1X. Se pipetean 600 l de solución de Tampón RLT (que contiene -Mercaptoetanol) sobre el centro de la membrana en la cual las células están unidas. Usando el rascador de células, se extiende con cuidado el Tampón RLT sobre la superficie completa de la membrana, y después se recoge el líquido en una esquina. Se pipetea el volumen completo de
50 Tampón RLT y se coloca en una columna de centrifugación QIAshredder.
Aislamiento de ARN: se centrifugan las columnas de centrifugación QIAshredder a 14.000 rpm durante 2 minutos. Se desecha la columna de centrifugación pero se conserva el tubo de recogida y su contenido. Se añaden 600 l de etanol al 70 % al tubo de recolección y se mezcla bien pipeteando (el volumen total es ahora = 1,2 ml). Se 55 transfieren 600 l del lisado de células a la columna RNeasy mini y se centrifuga durante 15 segundos a 14.000 rpm. Se desecha el flujo a través pero se conserva el tubo de recolección y la columna de centrifugación. Se transfiere el volumen restante de lisado de células (600 l) a la columna de centrifugación y se repite la centrifugación. Se desecha el flujo a través pero se mantiene el tubo de recolección y la columna de centrifugación. Se añaden 700 l de tampón RW1 a la columna de centrifugación. Se centrifuga durante 15 segundos a 14.000 rpm para lavar la 60 columna. Se desecha el flujo a través y el tubo de recolección. Se transfiere la columna de centrifugación a un nuevo tubo de recolección de 2 ml y se añaden 500 l de Tampón RPE a la columna. Se centrifuga durante 15 segundos a
14.000 rpm. Se desecha el flujo a través, se mantiene el tubo de recolección/columna. Se añaden otros 500 l de tampón RPE a la columna. Se centrifuga durante 2 minutos a 14.000 rpm. Se transfiere la columna de centrifugación a un tubo de recolección de 1,5 ml. Se añaden 30 l de Solución de Almacenamiento de ARN directamente a la
membrana de gel de sílice y se centrifuga durante 1 minuto a 14.000 rpm para eluir el ARN. Se almacena el ARN a -70 ºC.
Ensayo RNA 6000 Nano
5 Usando el Bioanalizador Agilent 2100 y el Ensayo RNA 6000 Nano, se analiza la calidad del ARN aislado de las células de mamífero cultivadas, linfocitos o tejidos.
Reactivos: matriz de gel RNA 6000 Nano, tinte concentrado RNA 6000 Nano, Marcador RNA 6000 Nano, (todos los reactivos indicados están contenidos en el kit de Ensayo RNA 6000 Nano, Agilent), marcador de peso molecular RNA 6000, ARNasa Zap, y agua sin ARNasa, de Ambion.
Equipamiento/Otros Materiales: Estación de Cebado de Chips Agilent, Agilent, chip RNA 6000, Agilent, limpiadores de electrodos Agilent, pipetas Pipetman Rainin P2, P10, P200 y P1000, puntas de pipeta con filtro libres de
15 ADNasa/ARNasa estériles, tubos de microcentrífuga estériles de 1,5 ml, vórtex, mezclador vorticial IKA, microcentrífuga, y bloque de calentamiento.
Procedimiento: el procedimiento se proporciona en la Guía del Kit de Reactivos, Ensayo RNA 6000 Nano, Edición de Noviembre de 2003, de Agilent Technologies. Los procedimientos se siguen como se proporciona en la Guía, pero con las siguientes modificaciones: Preparing the Gel, pág. 17-en vez de separar el gel filtrado en alícuotas de 65 l cada una, se mantiene el gel filtrado de stock en el tubo original de microcentrífuga y se alicuotan 65 l según sea necesario. Loading the RNA 6000 Nano Marker, pág. 22-se añade 1 l de agua libre de ARNasa (en vez de Marcador RNA 6000 Nano) a cada pocillo de muestra que no contendrá muestra. Esto no solo conservará la cantidad de Marcador usado sino que también sirve como control negativo para ver que ninguno de los reactivos
25 está contaminado, incluyendo el agua libre de ARNasa. Loading the Ladder and Samples, pág. 23-se desnaturalizan por calor las muestras y el marcador de peso molecular RNA 6000 durante 30 segundos más (total de 2,5 minutos) a 71 ºC. Starting the Chip Run, pág. 26-se selecciona la opción “Eukaryote Total RNA Nano” del menú de ensayo.
Ejemplo 4: análisis de expresión Affymetrix GeneChip
La expresión génica se analiza usando matrices GeneChip® Canine 1 y Canine 2 de Affymetrix que están disponibles comercialmente a través de Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA 95051. El ARN total se transcribe inversamente en ADNc. El ADNc se usa para generar ARNc que se fragmenta y se usa como sondas para la
35 hibridación GeneChip. El chip génico se lava y la señal de hibridación se mide con un escáner láser Affymetrix. Los datos de hibridación se validan y normalizan para análisis posteriores.
Materiales: Affymetrix proporciona la mayor parte de los reactivos y kit. Otros reactivos listados en el Manual de Affymetrix pero no suministrados en el kit se pueden obtener por separado (para más detalles mirar el Manual Técnico de Análisis de Expresión GeneChip (701021 Rev.4)), ARNasa Zap® y agua desionizada.
Equipamiento: microcentrífuga Eppendorf, tubos de microcentrífuga estériles/libres de ARNasa y ADNasa de 1,5 ml, tubos de polipropileno desechables estériles/libres de ADNasa y ARNasa de 50 ml, pipetas Pipetman Rainin P1000, P200, P20, P10 y P2, puntas de pipeta con filtro para las pipetas P1000, P200, P20, P10 y P2, libres de ADNasa y
45 ARNasa/estériles, y Ciclador Termal Peltier PTC-200.
Procedimiento: se siguen todos los procedimientos exactamente como se describen en el Manual Técnico de Análisis de Expresión GeneChip (Affymetrix Copyright 1999-2003). Se usan 5 microgramos de ARN total para la síntesis de la primera cadena de ADNc. Se usa o bien el Ciclador Termal Peltier PTC-200 o el bloque térmico para el control de la temperatura en las reacciones y desnaturalización de la sonda. El control de calidad se efectúa usando chips ARN NanoDrop con BioAnalyer 2100. Se usa el Formato 100 (Matriz Midi) para el chip génico canino.
Ejemplo 5: procedimientos de ensayo en gatos
55 Se obtiene sangre completa de los gatos en los estudios proporcionados en el presente documento usando tubos PAXgene™ RNA y el ARN total se aísla de las muestras de sangre completa usando el kit de aislamiento de ARN PAXgene™ de acuerdo con los métodos detallados a continuación.
Aislamiento de ARN en sangre PAXgene™: se usan en conjunto tubos de ARN para Sangre PAXgene™ y el Kit de ARN de Sangre PAXgene™ (Qiagen) para aislar y purificar el ARN intracelular de sangre completa obtenida de felinos como se indica a continuación (véase también el Manual de Instrucciones PAXgene™ Blood RNA Kit Handbook, PreAnalytix, Junio 2005). En resumen, la sangre se recoge usando una aguja Vacutainer®, directamente en el tubo para ARN de Sangre PAXgene™ y después se somete a varios ciclos de centrifugación, lavado y etapas de purificación que en última instancia dan como resultado un ARN de alta calidad. El ARN a continuación pasa por
65 una etapa de control de calidad y a continuación se usa en análisis por PCR en tiempo real cuantitativa y/o micromatrices usando un chip génico felino de propiedad fabricado a medida producido en la plataforma Affymetrix.
Preparaciones de ensayo: se incuban los tubos PAXgene™ (que contienen sangre) durante un mínimo de 2 horas a temperatura ambiente antes de empezar el ensayo. Si los tubos están congelados, y no se dejan incubar durante 2 horas antes de congelar, necesitarán reposar a temperatura ambiente para descongelación unas 2 horas 5 adicionales. Se invierte cada tubo PAXgene™ de 8 a 10 veces antes de la primera centrifugación. Si se usa Tampón BR4 (los tampones se incluyen con el Kit de ARN en Sangre PAXgene™) para la primera vez, se añaden 4 volúmenes de etanol al 96-100 % al tampón concentrado para obtener una solución de trabajo. Se precalientan dos bloques de calentamiento antes de empezar el ensayo a 65 ºC y 55 ºC. Se prepara la solución de stock de ADNasa I (el conjunto de ADNasa sin ARNasa se incluye en el Kit para ARN en Sangre PAXgene™). Se disuelve la enzima ADNasa I sólida en 550 l de agua libre de ARNasa proporcionada con el kit. Hay que asegurarse de no perder ADNasa I cuando se retire la cobertura. Se mezcla con cuidado invirtiendo el tubo. No se somete a agitación vorticial
o centrifugación. Se prepara una mezcla de enzima ADNasa I y Tampón RDD (componente del kit) (volumen suficiente para el número de muestras que se procesan por lote). Cada muestra necesita 70 l de Tampón RDD y 10 l de ADNasa I (es decir, 20 muestras necesitarán un coctel de 1,4 ml de Tampón RDD y 200 l de ADNasa I). El
15 coctel debe almacenarse a 2-8 ºC hasta que se necesite. La enzima reconstituida se mantiene en buenas condiciones hasta 6 semanas a 2-8 ºC.
Almacenamiento de las muestras: los tubos PAXgene™ (que contienen sangre) pueden almacenarse a temperatura ambiente durante hasta 3 días antes de procesar. De acuerdo con el prospecto del producto proporcionado con los tubos para ARN en Sangre PAXgene™, el perfil de ARN celular es estable en estas condiciones durante hasta 3 días. Esto, sin embargo, puede variar entre especies. Los tubos PAXgene™ también pueden almacenarse a 4 ºC durante hasta 5 días. Si se requiere almacenamiento de larga duración, los tubos PAXgene™ pueden almacenarse a -20 ºC o -70 ºC durante hasta 6 meses. Los tubos deben congelarse en una rejilla de alambres sueltos en una posición vertical. Se recomienda congelar primeramente a -20 ºC y después transferir a -70 ºC si los tubos se van a
25 almacenar a -70 ºC. Después de retirar los tubos del congelador deben dejarse descongelar a temperatura ambiente (temperatura que no exceda de 22 ºC). Cada tubo debe ser invertido 10 veces antes de proceder con el ensayo.
Aislamiento de ARN de sangre completa: se centrifugan los tubos de ARN de Sangre PAXgene™ a 4000 x g durante 10 minutos. Se retira el sobrenadante por decantación y se desecha. Se transfiere el exceso de sobrenadante restante en el borde del tubo PAXgene™. Se añaden 4 ml de agua libre de ARNasa y se tapa con un nuevo cerramiento Hemogard. Se resuspende el precipitado por agitación vorticial y a continuación se centrifuga a 4000 x g durante 10 minutos. Se retira el sobrenadante por decantación y se desecha. Se transfiere el exceso de sobrenadante restante en el borde de PAXgene™. Se añaden 360 l de Tampón BR1 (componente del kit) al precipitado y se pipetea con cuidado hasta que el precipitado está completamente resuspendido. Se transfiere la 35 muestra a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml y se añaden 300 l de Tampón BR2 (componente del kit) y 40 l de Proteinasa K (no se debe mezclar Tampón BR2 y Proteinasa K antes de añadir a la muestra). Se mezcla cada tubo intensamente mediante agitación vorticial y se coloca en un termomezclador precalentado a 55 ºC. Se incuba/agitan los tubos durante 10 minutos a 1400 rpm. Se pipetea el lisado a una columna de centrifugación QIAshredder colocada en un tubo de recolección de 2 ml. Se centrifuga a 14.000 rpm durante 3 minutos. Se transfiere el sobrenadante de la fracción de flujo a través a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml estéril. Se añaden 350 l de etanol al 96-100 % y se mezcla con cuidado pipeteando. Se añaden 700 l de la muestra a la columna de centrifugación PAXgene™ colocada en un tubo de recolección de 2 ml y se centrifuga a 14.000 rpm durante 1 minuto. Se transfiere la columna de centrifugación PAXgene™ a un nuevo tubo de recolección de 2 ml y se desecha el flujo a través y el tubo de recolección usado. Se añade el volumen restante de la muestra a la columna de
45 centrifugación PAXgene™. Se centrifuga a 14.000 rpm durante 1 minuto.
Se desecha el tubo de recolección usado y el flujo a través de la centrifugación de la columna de centrifugación descrita anteriormente. Se coloca la columna de centrifugación PAXgene™ en un nuevo tubo de recolección de 2 ml. Se añade 350 l de Tampón BR3 (componente del kit) a la columna de centrifugación PAXgene™ y se centrifuga a 14.000 rpm durante 1 minuto. Se desecha el flujo a través y el tubo de recolección. Se coloca la columna en un tubo de recolección de 2 ml nuevo y se añaden 80 l del coctel ADNasa I Tampón RDD (véase “Preparaciones del Ensayo”) directamente a la membrana de la columna y se incuba durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se añaden otros 350 l de Tampón BR3 a la columna de centrifugación PAXgene™. Se centrifuga a 14.000 rpm durante 1 minuto. Se transfiere la columna de centrifugación PAXgene™ a un nuevo tubo de recolección de 2 ml y
55 se desecha el tubo de recolección usado y el flujo a través.
Se añaden 500 l de Tampón BR4 (componente del kit) a la columna de centrifugación PAXgene™. Se centrifuga a
14.000 rpm durante 1 minuto. Se coloca la columna de centrifugación PAXgene™ en un nuevo tubo de recolección de 2 ml y se desecha el tubo de recolección usado y el flujo a través. Se añaden otros 500 l de Tampón BR4 a la columna de centrifugación PAXgene™. Se centrifuga a 14.000 rpm durante 3 minutos para secar la membrana de la columna de centrifugación. Se desecha el tubo de recolección y el flujo a través y se colocan las columnas en otro tubo de recolección de 2 ml. Se centrifugan las muestras de nuevo a 14.000 rpm durante un minuto adicional para secar más la membrana de la columna. Se desecha el flujo a través y el tubo de recolección. Se transfiere la columna de centrifugación PAXgene™ a un tubo de elución de 1,5 ml. Se añaden 40 l de Tampón BR5
65 (componente del kit) directamente a la membrana de la columna de centrifugación PAXgene™. Se centrifuga a
14.000 rpm durante 1 minuto. Se retira la columna de centrifugación PAXgene™ y se pipetea el eluido en el tubo de 1,5 ml sobre la misma columna de centrifugación PAXgene™. Se devuelve la columna de centrifugación PAXgene™ al mismo tubo de elución de 1,5 ml y se centrifuga a 14.000 rpm durante 1 minuto. Se incuba el eluído final a 65 ºC durante 5 minutos y se enfría inmediatamente sobre hielo. Se almacena la muestra final de ARN a
5 80 ºC para usos posteriores.
Ejemplo 6: expresión génica en gatos con osteoartritis en comparación con gatos control
Se llevaron a cabo estudios de acuerdo con el Ejemplo 5 usando gatos no artríticos y gatos con osteoartritis para determinar las diferencias en la expresión génica subyacente entre gatos no artríticos y gatos con osteoartritis. En un primer estudio, se efectúa una comparación de línea basal entre los dos grupos de gatos para determinar las diferencias en la expresión génica subyacente entre gatos no artríticos y gatos con osteoartritis. Los procedimientos generalmente descritos en los Ejemplos de esta memoria descriptiva pueden usarse para preparar muestras de tejido y fluidos corporales.
15 Respecto a los estudios proporcionados en el presente documento, se gradúan los gatos con osteoartritis de acuerdo con un método anteriormente publicado, es decir, todos los gatos no artríticos son “grado 0” indicando que la articulación parece ser normal, los gatos con osteoartritis tienen grados que son o bien 1 (entesofitos pequeños o osteofitos pequeños presentes) o 2 (entesofitos y osteofitos más prominentes). Los gatos con osteoartritis severa (grado 3) no están incluidos en este estudio.
Se usa un gene chip felino de propiedad, a medida (Affymetrix) para evaluar la expresión génica de la línea basal en gatos con y sin osteoartritis (10 normales, 10 animales artríticos). Como se indica anteriormente, los análisis de chips génicos se llevan a cabo usando métodos convencionales y de acuerdo con las instrucciones del fabricante
25 para obtener una comparación de la línea basal entre los dos grupos para determinar las diferencias de la expresión génica subyacente entre gatos no artríticos y gatos con osteoartritis.
Los datos primarios del chip génico se normalizan usando el algoritmo de normalización Robust Multiarray Average (RMA) (Irizarry, et al., Biostatistics 2003 Vol 4, Pág. 249-264) y a continuación se someten a análisis estadístico usando el algoritmo Support Vector Machine (SVM) (Partek Genomic Suite, Versión 6) para determinar las diferencias de expresión génica que pueden diferenciar entre animales artríticos y no artríticos. Se seleccionan los genes que identifican biomarcadores de OA basándose en el valor de corte de p y cambio múltiplo (CM).
Se determinó el perfil de expresión génica en gatos artríticos y no artríticos y los resultados se muestran en las
35 Figuras 3 y 15. Los genes que se encontró que se regulaban positivamente en más de 1 vez en gatos artríticos fueron los siguientes: IL-1beta, TNF, HMGB1, p38, TLR2 y TLR4. Estos genes y sus productos génicos se asocian con procesos inflamatorios y pueden considerarse como marcadores de trastornos anormales musculoesqueléticos, en concreto osteoartritis. Además, los siguientes genes se encontraron regulados positivamente en más de 1 vez en gatos artríticos: COL2A1, COL1A1, COL3A1, COL4A1 y agrecán. Estos genes y sus productos génicos se asocian con degradación del cartílago y pueden servir como marcadores de trastornos anormales musculoesqueléticos, en concreto osteoartritis.
Los resultados de un estudio llevado a cabo de acuerdo con el Ejemplo 6 indican que la expresión génica puede usarse para diferenciar entre gatos normales y gatos con osteoartritis. Los genes expresados diferencialmente
45 asociados con la inflamación en gatos artríticos aparecen en las Figuras 3 y 15. Por lo tanto, los genes identificados pueden servir como biomarcadores en gatos para las invenciones descritas en el presente documento e incluyen los siguientes genes: IL-1 beta, TNF, HMGB1, p38, TLR2, TLR4, COL2A1, COL1A1, COL3A1, COL4A1 y agrecán.
Ejemplo 7: actividad media de gatos artríticos después de la administración de una composición alimentaria felina j/d.
Los datos clínicos obtenidos de estudios nutricionales que involucran a los gatos artríticos y no artríticos descritos en el Ejemplo 6 indican que la intervención dietética podrá afectar y potenciar la movilidad de gatos artríticos. Los gatos a los que se les alimenta con una dieta de composición alimentaria felina j/d de la invención evidenciaron un
55 aumento estadísticamente significativo en la actividad respecto de gatos alimentados con una dieta control. Los resultados de la investigación clínica se indican en la Figura 16. Basándose en los datos observacionales, los gatos alimentados con la composición alimentaria j/d de la presente invención mostraron un aumento mayor de un 30 % en el movimiento, lo que significa que se logró una mejora en la sintomatología subyacente de osteoartritis mediante la administración de la dieta ensayada de la invención. Un experto puede inferir a partir de los datos presentados en la Figura 16 que los gatos tenían una mayor movilidad, menos dolor e inflamación como resultado de la administración de la dieta de composición alimentaria j/d del ensayo.
Ejemplo 8: actividad nocturna en perros después de la administración de la composición j/d.
65 Se efectuó un ensayo clínico en perros que involucraba la administración de la composición alimentaria canina j/d de la presente invención en perros. Las observaciones de actividad nocturna de perros artríticos alimentados con la
composición alimentaria j/d se llevaron a cabo y registraron frente a perros alimentados con un alimento de control y en perros que no recibían medicaciones. Las medidas se efectuaron con dispositivos ACTIWATCH®. Estos dispositivos son registradores de datos basados en actigrafía que registran una medida integrada digitalmente de la actividad motora principal. Cada dispositivo usa principios de actigrafía para proporcionar variabilidad en el horario
5 de sueño, cantidad de sueño y estadísticas de calidad y patrones de actividad diaria. Los dispositivos recogen datos objetivos en relación con el ambiente ambulatorio del animal. Los resultados de este ensayo clínico demostraron una reducción significativa en la actividad nocturna de los perros artríticos, por tanto demostrando que los perros alimentados con la composición alimentaria j/d disfrutaron de un mayor alivio y confort de la sintomatología artrítica subyacente incluyendo la rigidez de las articulaciones y dolor. Los datos de este ensayo clínico se muestran en la Figura 17.
Ejemplo 9: niveles de marcadores proteicos en perros después de recibir la composición alimentaria canina j/d.
15 Se obtuvieron los niveles de la línea basal de dos marcadores proteicos asociados con la degradación de cartílago en perros, C2C y C1,C2 en perros artríticos y no artríticos. Se recogieron y ensayaron muestras de sangre de los animales por medios convencionales descritos en la presente memoria descriptiva. Los resultados del ensayo demostraron que los productos génicos de estos marcadores estaban elevados en perros artríticos y podrían usarse como marcadores para determinar la efectividad de los componentes dietéticos sobre la expresión génica. Los datos de la línea basal se presentan en las Figuras 5 y 6.
Datos clínicos obtenidos de estudios nutricionales que incluyen perros artríticos y no artríticos. Se alimentaron a los perros del ensayo como se describe en este Ejemplo con una dieta de la presente invención, que se identifica como composición alimentaria j/d en la Figura 4. Se efectuaron las evaluaciones de los niveles de los marcadores C2C y 25 C1,C2 de artritis y el nivel de otro marcador de proteína conocido como relevante para trastornos anormales de las articulaciones musculoesqueléticas, llamado CTX-II de Colágeno. Los datos representados en las Figuras 10, 11 y 12 presentan niveles de marcadores proteicos determinados en sangre de animales de ensayo y control. Los perros alimentados con una dieta de composición alimentaria canina j/d como se expone en la Figura 4 evidenciaron una disminución estadísticamente significativa de los niveles de C2C, C1,C2 y CTX-II en plasma como se ilustra en las Figuras 10, 11 y 12. Un experto reconocerá que estos datos de biomarcadores apoyan la observación clínica de que los perros alimentados con la composición dietética de la invención, en concreto, la composición alimentaria j/d como se demuestra en este Ejemplo, muestran una mejora en la sintomatología clínica del proceso de enfermedad subyacente, en este caso osteoartritis, que se correlaciona con la regulación negativa de determinados genes y la expresión reducida de determinados productos génicos que se han asociado con la degradación del cartílago y las
35 afecciones de inflamación local de las articulaciones, incluyendo osteoartritis.
Ejemplo 10: análisis en chip génico de genes caninos regulados positiva y negativamente en caninos artríticos y no artríticos
Se usó un chip génico canino comercial (GeneChip2 de Affymetrix) para evaluar la expresión génica de la línea basal en dos grupos de perros con y sin artritis, determinados de acuerdo con criterios diagnósticos clínicos estándar conocidos en la técnica. Los análisis de chip génico se llevaron a cabo usando métodos convencionales y de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Mediante el uso de los procedimientos generales de perfil de expresión del Ejemplo 1 y las técnicas analíticas indicadas en otros Ejemplos expuestos en esta memoria descriptiva, se
45 efectuó un perfil de expresión génica para obtener una comparación de la línea basal entre los dos grupos para determinar las diferencias en la expresión génica subyacente entre perros no artríticos y artríticos.
Siguiendo procedimientos de ensayo nutricional animal estándar familiares para un experto en la técnica, se dio de comer a los perros artríticos y normales las dietas de ensayo que comprenden la composición alimentaria designada como j/d y a continuación se analizaron los cambios en la expresión génica en los animales usando qRT-PCR.
Los datos primarios del chip génico se normalizan usando el algoritmo de normalización Robust Multiarray Average (RMA) (Irizarry, et al., Biostatistics 2003 Vol 4, Page 249-264) y a continuación se someten a análisis estadístico usando el algoritmo Support Vector Machine (SVM) (Partek Genomic Suite, Versión 6) para determinar las
55 diferencias de expresión génica que pueden diferenciar entre animales artríticos y no artríticos. Los genes que identifican biomarcadores de artritis se seleccionan basándose en el valor de corte de p y cambio múltiplo (CM).
Los datos primarios del chip génico se normalizan usando el algoritmo de normalización Robust Multiarray Average (RMA) (Irizarry, et al., Biostatistics 2003 Vol 4, Page 249-264) y a continuación se someten a análisis estadístico usando el algoritmo Support Vector Machine (SVM) (Partek Genomic Suite, Versión 6) para determinar las diferencias de expresión génica que pueden diferenciar entre animales artríticos y no artríticos. Los genes que identifican los biomarcadores de OA se seleccionan basándose en los valores de corte de p y cambio múltiplo (CM).
Los resultados de estos estudios indican que la expresión génica puede usarse para diferenciar entre perros
65 normales y perros con artritis. Los genes expresados diferencialmente asociados a la inflamación en perros artríticos aparecen en las Figuras 1, 2, 7 y 8. Sin limitar la generalidad de las divulgaciones expuestas en esta solicitud, los
genes presentados en las Figuras 1, 2, 7 y 8 pueden servir como biomarcadores para las invenciones descritas en el presente documento e incluyen anexina A1, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1,IL-15, receptor IL-17, TLR4, COL2A1, COL1A1, COL4A1, MMP-13, TIMP-2, MMP-2, FLAP, PLA2, MAPK1, MAPK2.
5 Ejemplo 11: análisis de chip génico de genes caninos regulados positiva y negativamente en caninos artríticos y no artríticos alimentados con una dieta de composición alimentaria j/d
Se usó un chip génico canino comercial (GeneChip2 de Affymetrix) para evaluar la expresión génica en dos grupos de perros con y sin osteoartritis. Se estudiaron un total de 30 perros artríticos y 31 perros no artríticos. Los análisis de chip génico se llevaron a cabo usando métodos convencionales y de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Usando los procedimientos de perfil de expresión del Ejemplo 1 y las técnicas analíticas comentadas en otros Ejemplos expuestos en esta memoria descriptiva, se efectuó el perfil de expresión génica. El primer grupo de 30 animales de ensayo se determinó como artrítico de acuerdo con procedimientos diagnósticos clínicos que son bien conocidos en la técnica. El segundo grupo de caninos se consideró como no artrítico de acuerdo con el mismo
15 criterio diagnóstico clínico. Siguiendo procedimientos de ensayo nutricional animal estándar familiares para un experto en la técnica, se alimentó a perros artríticos y normales con dietas que comprenden la composición alimentaria designada como j/d y a continuación se analizaron los cambios en la expresión génica en los animales usando qRT-PCR.
Siguiendo procedimientos de ensayo nutricional animal estándar familiares para un experto en la técnica, se alimentó a perros artríticos y normales con la dieta de ensayo designada j/d y a continuación se analizaron los cambios en la expresión génica en los animales usando qRT-PCR.
En lo referente a la qRT-PCR, se usa tecnología de sondas Taqman y todos los análisis se llevan a cabo usando
25 una máquina de PCR en tiempo real de Applied Biosystems 7500. Los datos se analizan usando el paquete de programas informáticos de detección de secuencia versión 1.2.2. proporcionado por el fabricante.
Usando muestras de tejido preparadas como se describe en los Ejemplos, se usó un chip génico canino comercial (GeneChip2 de Affymetrix) para evaluar la expresión génica en perros con y sin artritis. Los datos primarios del chip génico se normalizan usando el algoritmo de normalización Robust Multiarray Average (RMA) (Irizarry, et al., Biostatistics 2003 Vol 4, Page 249-264) y a continuación se somete a análisis estadístico usando el algoritmo Support Vector Machine (SVM) (Partek Genomic Suite, Versión 6) para determinar las diferencias de expresión génica que pueden diferenciar entre animales artríticos y no artríticos. Los genes que identifican artritis y biomarcadores de inflamación se seleccionan basándose en el valor de corte de p y cambio múltiplo (CM).
35 Los datos de este Ejemplo se exponen en la Tabla 3. Los datos comprenden 2383 registros cuando se emplea un valor de corte de número de veces de 1,1, un valor de corte de p de 0,05 y un valor de corte de Q de 0,3. Usando estos criterios analíticos, un cambio múltiplo mayor de 1 implica que las sondas están reguladas POSITIVAMENTE en las muestras tomadas del grupo de perros artríticos. Los datos presentados en la Tabla 3 identifican en la primera columna el número único de identificación de sonda de Affymetrix, y respectivamente a continuación los valores de p, valores de q, cambio en el número de veces, 1/cambio múltiplo, anotación BLAST superior, porcentaje de coincidencia, número de acceso humano, número de acceso de éxito superior, símbolo del gen y descripción del gen. Un experto en la técnica deducirá a partir de estos datos la siguiente información usando únicamente análisis experimental ordinario: criterios de valor de corte en el cambio múltiplo, los genes de interés que se han regulado
45 positiva o negativamente y la identificación de dichos genes por anotación BLAST; números de acceso humanos relacionados y la secuencia para cada gen identificado de este modo así como los productos génicos correspondientes y secuencias de dichos productos génicos basándose en la información disponible del fabricante así como de bases de datos de secuencias génicas que están fácilmente disponibles para los expertos en la técnica. Además, las secuencias para las sondas únicas utilizadas en las matrices Affymetrix están disponibles públicamente a modo de referencia para fuentes publicadas del fabricante. De manera similar, la información de secuencia publicada e identificación de las sondas respectivas utilizadas en las versiones 1 y 2 de los chips Affymetrix están fácilmente y públicamente disponibles a través del fabricante así como comparaciones de los conjuntos de sonda para cada uno. A partir de estos datos un experto en la técnica puede identificar y utilizar dichos datos de expresión génica, los genes identificados que se han desregulado y sus correspondientes productos génicos en la práctica de
55 la fabricación y uso de composiciones y artículos de fabricación de la presente invención así como en la puesta en práctica de métodos de fabricación y uso de las invenciones enseñadas en esta memoria descriptiva. Sin pretender limitar el alcance de las invenciones divulgadas y reivindicadas en esta solicitud, determinados genes y productos génicos de interés puede identificarse como elevadamente pertinentes para afecciones artríticas en perros y gatos. Estos y otros productos génicos enseñados en los datos expuestos en la Tabla 3 pueden inferirse poseedores de un efecto beneficioso sobre el trastorno anormal de las articulaciones musculoesqueléticas subyacente, en concreto con afecciones artríticas, experimentadas por perros y gatos cuando a los animales se les alimenta con las composiciones de la invención, en concreto las composiciones alimentarias designadas como j/d, que modulan los genes de interés expuestos en la Tabla 3.
65 Tabla 1: Ingredientes ensayados en líneas celulares caninas
Sustancia Concentración 1 Concentración 2 Solvente
Sustancia Concentración 1 Concentración 2 Solvente
DHA 0,005 mg/ml (5 micro g/ml) 0,025 mg/ml (25 micro g/ml) ETOH EPA 0,005 mg/ml (5 micro g/ml) 0,025 mg/ml (25 micro g/ml) ETOH
Combinación EPA/DHA 0,015 mg/ml EPA y 0,010 mg/ml DHA (el 0,030 mg/ml EPA y 0,02 mg/ml DHA (el
relación 1,5:1 ratio (como ETOH
total es 0.025 mg/ml) total es 0.050 mg/ml)
en aceite de pescado)
Ácido alfa linoléico 0,05 mg/ml (50 micro g/ml) 0,1 mg/ml (100 micro g/ml) ETOH Ácido linoléico 0,1 mg/ml (100 micro g/ml) 0,5 mg/ml (500 micro g/ml) ETOH Ácido araqudónico 0,025 mg/ml (25 micro g/ml) 0,05 mg/ml (50 micro g/ml) ETOH Ácido esteárico 0,01 mg/ml (10 micro g/ml) 0,05 mg/ml (50 micro g/ml) ETOH
Ácido linoléico conjugado 0,02 mg/ml (20 micro g/ml) 0,1 mg/ml (100 micro g/ml) MEOH
Tabla 2: Resultados de los perfiles de expresión de lineas celulares caninas en presencia de ingredientes listados
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA
1582387_at NEGATIVAMENTE ARNm de yodotironina AC027016
deyodasa tipo 1 (DIO 1) de Canis familiaris, cds
completo
DHA
1582824_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Isoforma de BC000185
carnitín palmitoil
transferasa I (CPT1) de
Canis familiaris, ARNm
DHA
1584133_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Polipéptido BC038344
pesado 2 (LOC479461)
citoplásmico similar a dineina de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1584742_at POSITIVAMENTE Secuencia de ADN AL591206
humana del clon RP11
151J20 en el cromosoma
9 contiene el extremo 5'
de un gen novedoso
(FLJ20060) (contiene
FLJ12902, KIAA1574), el
gen de ADFP para la
proteína relacionada con
la diferenciación adiposa
(ADRP)
DHA
1584951_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR605429
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
DHA
1585355_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR597463
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
DHA
1586474_at NEGATIVAMENTE ADNc del gen AC078834
1500031L02
(1500031L02Rik) de Mus
musculus RIKEN, ARNm
DHA
1587029_at POSITIVAMENTE Secuencia completa de AC089999
BAC 12 RP11-545P7
(Roswell Park Cancer
Institute Human BAC
Library) de Homo sapiens
DHA
1587141_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR456571
proteína 2 SEC14-like
(proteína asociada a alfa
tocoferol) (TAP) (hTAP)
(factor de proteína
sobrenadante) (SPF)
(proteína de transferencia
de escualeno) (LOC477539) de Canis
familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA
1587268_at POSITIVAMENTE ARNm de urato oxidasa NA
(UOX) de Canis familiaris,
DHA
1587328_at POSITIVAMENTE cds completo ARNm de Homo sapiens; AP001324
ADNc DKFZp686O1232
DHA
1587418_at NEGATIVAMENTE (del clon DKFZp686O1232) PREDICHO: Similar a AJ417060
isoforma b de proteína 1 que interactúa con RPGR (LOC475400) de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1587734_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC017952
cotransportador 4 de
Na/Pi (LOC478741) de Canis familiaris, ARNm
DHA
1588058_at NEGATIVAMENTE Dominio que contiene la BC032474
proteína adaptadora de receptor toll-interleucina 1 (TIR) de Homo sapiens,
ARNm (clon de ADNc MGC:40573
IMAGE:5216171), cds
DHA
1588088_at POSITIVAMENTE completo Proteína inducible por hipoxia 2 de Homo BC008573
sapiens, ARNm (clon de
ADNc MGC:17005
IMAGE:4182067), cds
DHA
1589548_at NEGATIVAMENTE completo Clon RP24-304G 19 del AC115282
cromosoma 14 de Mus
musculus, secuencia
DHA
1590835_at NEGATIVAMENTE completa Receptor de interleucina 8 de Homo sapiens, AC055863
seudogen beta, ARNm (clon de ADNc IMAGE:5450999), con
DHA
1591083_at POSITIVAMENTE intrón aparente retenido ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2
(UNQ171) de Homo sapiens, cds completo
DHA
1591971_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK055183
complemento C1s (LOC486714) de Canis familiaris, ARNm
DHA
1592507_at NEGATIVAMENTE Prodinorfina (PDYN) de Homo sapiens, ARNm BC026334
DHA
1593226_at POSITIVAMENTE Secuencia de ADN AL358074
humana del clon RP11
423C15 en el cromosoma
9 contiene el extremo 5'
del gen MAPKAP1 para la
proteína 1 asociada con proteín kinasa activada
por mitógeno, un gen novedoso, el extremo 5'
del gen f de PBX3
DHA
1593388_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC063797
dominio de SDA1 que contiene 1 (LOC478431),
ARNm
DHA
1593590_at NEGATIVAMENTE Proteína adaptadora de linfocito de Homo AB208911
sapiens, ARNm (clon de
ADNc IMAGE:4861744), cds completo
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA
1593831_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC015854
cadena pesada 1 de
clatrina (CLH-17)
(LOC480578) de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1594976_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL035698
receptor de glutamato de
Bos taurus,
metabotrópico 1
(LOC540485), ARNm
DHA
1596448_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK095036
antígeno 16 asociado a
esperma (LOC478899) de
Canis Familiaris, ARNm
DHA
1596711_at NEGATIVAMENTE ADNc de Homo sapiens; AK024852
FLJ21199 fis, clon
COL00235
DHA
1597677_at POSITIVAMENTE Homo sapiens, clon AC012516
IMAGE:5271096, ARNm
DHA
1597789_at POSITIVAMENTE Secuencia completa de AC130404
BAC 12 RP11-337L12
(Roswell Park Cancer
Institute Human BAC
Library) de Homo sapiens
DHA
1597832_at NEGATIVAMENTE Proteína hipotética NM_207311
LOC92558 (LOC92588)
de Homo sapiens, ARNm
DHA
1598607_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC099518
dominio de tioredoxina
que contiene proteína 6
(proteína 2 tioredoxina
like) (Txl-2) (LOC485685)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA
1598932_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL354836
proteína 2 asociada con
SAP90/PSD-95
(LOC488556) de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1599339_at NEGATIVAMENTE clon RP81-117B1 de NA
Canis familiaris,
secuencia completa
DHA
1599453_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: LOC475099 NA
(LOC475099) de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1600090_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY405366
proteína-like 2 de tráfico
de vesículas SEC22
(LOC478590) de Canis
familiaris, ARNm
DHA
1601347_at NEGATIVAMENTE CBS767de NA
Debaryomyces hansenii,
DEHAOD14146g, ARNm
predicho
DHA
1602156_at POSITIVAMENTE ARNm para proteína AL590139
mKIAA4184 de Mus
musculus
DHA
1602790_at POSITIVAMENTE Gen de traslocador AC115282
nuclear de receptor de aril
hidrocarburos (ARNT) de
Homo sapiens, cds
completo
DHA
1602966_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN del AL590621
clon DKEYP-75A7 en el
grupo de unión 21 de pez
zebra, secuencia
completa
DHA
1603771_at NEGATIVAMENTE clon RP81-117B1 de NA
Canis familiaris,
secuencia completa
DHA
1604372_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC475665 AY411810
(LOC475665) de Canis
familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA
1605486_at POSITIVAMENTE ARNm de piruvato deshidrogenasa kinasa 4 de Homo sapiens, región AK096428
3' sin traducir, secuencia
EPA
1583329_at NEGATIVAMENTE parcial Homo sapiens, Similar a AC018634
proteína 4 relacionada con frizzled secretada,
clon IMAGE:4828181,
ARNm
EPA
1583403_at POSITIVAMENTE ARNm de carnitin AK172798
palmitoiltransferasa I de Sus scrofa, gen nuclear
que codifica proteína
EPA
1584742_at POSITIVAMENTE nuclear, cds completo Secuencia de ADN AL591206
humana del clon RP11
151J20 en el cromosoma
9 contiene el extremo 5'
de un gen novedoso
(FLJ20060) (contiene FLJ12902, KIAA1574), el gen de ADFP para la
proteína relacionada con la diferenciación adiposa (ADRP)
EPA
1584951_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR605429
adipofilina (proteína relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
EPA
1585292_at POSITIVAMENTE Metil CpG que se une a proteína 2 (síndrome de Rett) (MECP2) de Homo AF030876
sapiens, ARNm
EPA
1585355_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR597463
adipofilina (proteína relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
EPA
1586420_at NEGATIVAMENTE RAB37 de Homo sapiens; BC016615
miembro de la familia de
oncogenes RAS (RAB37).
ARNm
EPA
1587196_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC475665 NM_147223
(LOC475665) de Canis
familiaris, ARNm
EPA
1587428_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN AL589740
humana del clon RP11
436D23 en el cromosoma
6 contiene parte de un gen novedoso, secuencia
EPA
1588088_at POSITIVAMENTE completa Proteína inducible por hipoxia 2 de Homo BC008573
sapiens, ARNm (clon de
ADNc MGC:17005
IMAGE:4182067), cds
EPA
1589797_at NEGATIVAMENTE completo Cromosoma 15 clon AC090651
RP11-344A16 mapa 15q21.3 de Homo sapiens, secuencia
completa
EPA
1589829_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC004486
ADN helicasa Q4
dependiente de ATP
(RecQ proteína-like 4) (RecQ4) (LOC515289) de
Bos taurus, ARNm parcial
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
EPA
1590407_s_at POSITIVAMENTE Gen de kinasa 1 unida a AJ404847
integrina (ILK) de Homo
sapiens, cds completo
EPA
1591083_at POSITIVAMENTE ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2 (UNQ
171) de Homo sapiens,
cds completo
EPA
1592920_at NEGATIVAMENTE Secuencia completa de AC090013
BAC 12 RP11-407P2
(Roswell Park Cancer
Institute Human BAC
Library) de Homo sapiens
EPA
1593146_s_at POSITIVAMENTE Factor 11 Kruppel like BC063286
(KLF11) de Homo
sapiens, ARNm
EPA
1593677_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AB070003
proteína hipotética
(LOC475308) de Canis
familiaris, ARNm
EPA
1594091_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_024763
isoforma 1 de proteína
FLK23129 (LOC479538)
de Canis familiaris,
ARNm
EPA
1594227_at POSITIVAMENTE Proteína de motivo de AK096015
unión a ARN de Homo
sapiens, X-linked
(RBMX), ARNm
EPA
1594231_at POSITIVAMENTE Peptidil-prolil cis-trans NA
isomerasa A (PPIA) de
Sus scrofa, ARNm
EPA
1594415_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AP001675
GTPasa de Bos taurus,
Miembro 4 de la familia
MAP (proteína 4 asociada
a inmunidad) (proteína de
nucleótido 1 asociado a
inmunidad) (hIAN1)
(MSTP062)
(LOC510751), ARNm
EPA
1594824_at NEGATIVAMENTE Cromosoma 16 clon CTA-AC 130449
233A7 de Homo sapiens,
secuencia completa
EPA
1594939_at POSITIVAMENTE Cromosoma 8 de Homo AC090133
sapiens, clon RP11
813L8, secuencia
completa
EPA
1595021_at NEGATIVAMENTE ARNm para NM_000339
cotransportador de
cloruro de sodio de Bos
taurus, parcial
EPA
1595265_at POSITIVAMENTE CLIB99 Yarrowia NG_001333
lipolytica,
YAL10C20339g, ARNm
predicho
EPA
1595301_at POSITIVAMENTE ARNm de Homo sapiens AC113382
para proteína abundante
de músculo esquelético
EPA
1596553_s_at NEGATIVAMENTE Marco de lectura abierta AK056168
55 de cromosoma 16
(C16orf55) de Homo
sapiens, ARNm
EPA
1597390_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY400068
ataxina-10 (proteína de
tipo 10 de ataxia
espinocerebelar)
(homólogo de proteína
cerebral E46)
(LOC474467) de Canis
familiaris, ARNm
EPA
1597801_at NEGATIVAMENTE Homo sapiens, clon AL442128
IMAGE:4822875, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
EPA
1597802_at NEGATIVAMENTE Clon BAC RP23-451I11 AL078583
de 12 de Mus musculus,
secuencia completa
EPA
1598585_at NEGATIVAMENTE Gen S164 de Homo AC011306
sapiens, cds parcial;
genes de proteína PS1 e
hipotética, cds completo y
gen de S171, cds parcial
EPA
1599557_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY414168
proteína hipotética MGC
12103 (LOC481489) de
Canis familiaris, ARNm
EPA
1599565_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN AL139175
humana del clon RP4
615P17 en cromosoma
1p13-14.3, secuencia
completa
EPA
1599601_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY403773
antígeno potenciado por
macho -bovino
(LOC474906) de Canis
familiaris, ARNm
EPA
1600959_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a la NA
región constante de la
cadena pesada de IgA
(LOC480452) de Canis
familiaris, ARNm
EPA
1601005_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: LOC479025 XM_372592
(LOC479025) Canis
familiaris, ARNm
EPA
1602471_at NEGATIVAMENTE clon de ADNc AC073120
IMAGE:4797645 de
Homo sapiens, cds
parcial
EPA
1603225_at POSITIVAMENTE Secuencia de AC008429
microsatélite Hcms51 de
Haemonchus contortus
EPA
1603875_at NEGATIVAMENTE ADNc FLJ33460 fis de AC010092
Homo sapiens, clon
BRAMY2000653, ARNm
muy similar a kinasa 1
tousled-like (TLK 1) de
Homo sapiens
EPA
1604439_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AL137346
ADNc DKFZp761M0111
(del clon
DKFZp761M0111)
EPA
1604600_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AC010733
ADNc DKFZp686K122
(del clon DKFZp686K122)
EPA
1605028_at NEGATIVAMENTE Gen de proteína B7-1 NA
secretada (CD80) de
Canis familiaris, exón 4 y
cds completo
empalmados
alternativamente
EPA
1605486_at POSITIVAMENTE ARNm de piruvato AK096428
deshidrogenasa kinasa 4
de Homo sapiens, región
3' sin traducir, secuencia
parcial
EPA
1605654_at POSITIVAMENTE Dominio mbt que contiene AK028503
1 de Mus musculus,
ARNm (clon de ADNc
MGC:29000
IMAGE:2646754), cds
completo
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
EPA 1605669_s_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1582781_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1583031_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1583254_x_at NEGATIVAMENTE
DHA/EPA
1583403_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1584742_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1584951_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1585033_at NEGATIVAMENTE
DHA/EPA
1585339_at NEGATIVAMENTE
DHA/EPA
1585355_at POSITIVAMENTE
DHA/EPA
1586172_at NEGATIVAMENTE
DHA/EPA
1586287_at NEGATIVAMENTE
DHA/EPA
1586614_at NEGATIVAMENTE
ADNc FLJ38323 fis de Homo sapiens, clon FCBBF3024623, débilmente similar a ARNm de proteína de dedos de zinc C2H2 (Kruppel-type) de Homo sapiens
ARNm de la subunidad de subunidad de canal alfa 1 de Ca L-type de Canis familiaris, cds parcial ARNm de factor de crecimiento de fibroblastos 8 (FGF-8) de Canis familiaris, cds parcial ARNm de clon IMAGE:7961516 de timosin beta-4-like, cds completo ARNm de carnitin palmitoiltransferasa I de Sus scrofa, gen nuclear que codifica proteína nuclear, cds completo Secuencia de ADN humana del clon RP11151J20 en el cromosoma 9 contiene el extremo 5' de un gen novedoso (FLJ20060) (contiene FLJ12902, KIAA1574), el gen de ADFP para la proteína relacionada con la diferenciación adiposa (ADRP) PREDICHO: Similar a adipofilina (proteína relacionada con la diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm PREDICHO: Similar a proteína hipotética (LOC475308) de Canis familiaris, ARNm ARNm de Homo sapiens para GalNAc:betaGlcNAc beta 1,3galactosaminiltransferasa,
proteína variante de polipéptido 2 PREDICHO: Similar a adipofilina (proteína relacionada con la diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm Cromosoma 11 de Homo sapiens, clon RP11348A11, secuencia completa ARNm de Bos taurus para factor de transcripción COUP-TFI (gen COUP-TFI) PREDICHO: Similar a proteína SEL1p de caja F (LOC475465) de Canis familiaris, ARNm
AK095642
AF465484
NM_006119
X02493
AK172798
AL591206
CR605429
AL121983
AL672237
CR597463
AC131263
AC106818
BC037320
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA/EPA
1586695_at NEGATIVAMENTE RAD51-like 1 (S. BX161515
cerevisiae) (RAD51L1) de
Homo sapiens, variante 2
de transcrito, ARNm
DHA/EPA
1587254_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: kinasa janus AC008785
1 (JAK1) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1587413_at POSITIVAMENTE ARNm del filamento AC005996
intermedio de gliarina de
Hirundo medicinalis, cds
completo
DHA/EPA
1587813_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL160175
dJ109F14.3 (proteína
putativa de dedo anular)
(LOC472236) de Pan
troglodytes, ARNm
DHA/EPA
1589293_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens AB058707
para proteína KIAA1804,
cds parcial
DHA/EPA
1589678_s_at POSITIVAMENTE Secuencia de ARNm de BK001411
clon alpha1 de Homo
sapiens
DHA/EPA
1589929_at NEGATIVAMENTE Familia 34 de AC145098
transportador de soluto
(fosfato de sodio) de
Homo sapiens miembro
1, ARNm (clon de ADNc
IMAGE:5182821), con
intrón aparente retenido
DHA/EPA
1590942_at NEGATIVAMENTE gen de proteína netrina-2 AC106820
ike (NTN2L) humana, cds
completo
DHA/EPA
1591029_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Proteína AC023991
KIAA0146 (KIAA0146) de
Homo sapiens, ARNm
DHA/EPA
1591083_at POSITIVAMENTE ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2
(UNQ171) de Homo
sapiens, cds completo
DHA/EPA
1591601_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN AL691426
humana del clon RP11
787B4 en el cromosoma
9 contiene el extremo 5'
del gen PAPPA para la
proteína A asociada al
embarazo, un gen
novedoso y una isla de
CpG, secuencia completa
DHA/EPA
1591782_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC069335
proteína hipotética
(LOC514986) de Bos
taurus, ARNm parcial
DHA/EPA
1592123_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY891766
vimentina (LOC477991)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1592160_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC070246
precursor de cadena
alfa/alfa-E de fibrinógeno
(LOC475473) de Canis
familiaris ARNm
DHA/EPA
1592915_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC004501
proteína hipotética
MGC33867 (LOC478228)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1593146_s_at POSITIVAMENTE Factor 11 Kruppel like BC063286
(KLF11) de Homo
sapiens, ARNm
DHA/EPA
1593855_at NEGATIVAMENTE clon RP86-117J4 de Felis AL353710
catus, secuencia
completa
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA/EPA
1593993_at NEGATIVAMENTE clon BAC RP43-75I2 de 7 AC004949
de Pan troglodytes,
secuencia completa
DHA/EPA
1594205_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar DQ048939
factor de transcripción
putativo ZNF131
(LOC461893) de Pan
troglodytes, ARNm
DHA/EPA
1594291_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC014897
metilcrotonoil-coenzima A
carboxilasa 2 (beta)
(LOC478091) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1594379_x_at POSITIVAMENTE Proteína 45 inducible por AL136120
daño en ADN y arresto
del crecimiento
(GADD45) de Felis catus,
ARNm
DHA/EPA
1594413_at POSITIVAMENTE Citocromo P450 de Homo AC007002
sapiens, familia 26,
subfamilia B, polipéptido
1 (CYP26B1), ARNm
DHA/EPA
1594564_at POSITIVAMENTE Serín palmitoil transferasa AF111168
de Homo sapiens, gen de
subunidad II, cds
completo y genes
desconocidos
DHA/EPA
1594848_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Proteína AC073263
hipotética XP_513164
(LOC456583) de Pan
troglodytes, ARNm
DHA/EPA
1594939_at POSITIVAMENTE Cromosoma 8 de Homo AC090133
sapiens, clon RP11
813L8, secuencia
completa
DHA/EPA
1595083_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK055530
proteína hipotética
MGC18257 (LOC474943)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1595280_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AL355298
ADNc DKFZp686N 1929
(del clon DKFZp686N
1929)
DHA/EPA
1595481_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: LOC478639 NM_002492
(LOC478639) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1595587_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC048260
copina VIII (LOC477646)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1595673_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC048351
dominio de SDA 1 que
contiene 1 (LOC478431),
ARNm
DHA/EPA
1596041_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AL354707
ADNc DKFZp686I15205
(del clon
DKFZp686I15205)
DHA/EPA
1596238_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL110128
precursor de isoforma a
palmitoil-proteín
tioesterasa 2
(LOC474856) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1596301_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN de AC000007
ratón del clon RP23
440D4 en cromosoma 4,
secuencia completa
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA/EPA
1597387_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC032398
precursor de alfa-N
acetilglucosaminidasa (N
acetil-alfa
glucosaminidasa) (NAG)
(LOC490965) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1597847_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC098935
proteasa 37 específica de
ubiquitina (LOC424217)
de Gallus gallus ARNm
DHA/EPA
1599572_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: SImilar a NA
ORF2 (LOC475183) de
canis familiaris
,
ARNm
DHA/EPA
1599950_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL136304
antígeno potenciado por
macho -bovino
(LOC474906) de Canis
familiaris, ARNm
DHA/EPA
1600310_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK223446
derivado 1 de elemento
de transposición
piggyBac (LOC488322)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1600683_at NEGATIVAMENTE clon RP81-117B1 de NA
Canis familiaris,
secuencia completa
DHA/EPA
1601351_at POSITIVAMENTE Canis familiaris, clon XX- NA
25A1, secuencia
completa
DHA/EPA
1601383_at POSITIVAMENTE PREDICHO: similar to BT007509
proteína putativa RAY-like
de unión a GTP (proteína
4 Rab-like) (LOC474517)
de Canis familiaris,
ARNm
DHA/EPA
1601782_at NEGATIVAMENTE Lactamasa de Homo AC022731
sapiens; beta 2, ARNm
(clon de ADNc
IMAGE:3452575),
DHA/EPA
1602033_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL445467
receptor 23 acoplado a
proteína G (LOC539738)
de Bos taurus, ARNm
DHA/EPA
1602162_at NEGATIVAMENTE Clon BAC RP11-489P15 AC093850
de 2 de Homo sapiens,
secuencia completa
DHA/EPA
1603521_at NEGATIVAMENTE ADNc FLJ33134 fis de BC017798
Homo sapiens, clon
UMVEN2000453,
débilmente similar a
ARNm de factor de
inducción de globina fetal
de Mus musculus
DHA/EPA
1603534_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL592064
proteín tirosin fosfatasa
de Canis familiaris, tipo
receptor, precursor de
isoforma 1 de Q
(LOC482581), ARNm
DHA/EPA
1603559_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY413985
proteína de dedo anular
relacionada con actividad
neural (LOC475470) de
Canis familiaris, ARNm
DHA/EPA
1603658_s_at POSITIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AL834247
ADNc DKFZp451E012
(del clon
DKFZp451E012); cds
completo
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
DHA/EPA
1603674_at NEGATIVAMENTE ADNc FLJ13648 fis de AK023710
Homo sapiens, clon
PLACE1011340,
Débilmente similar a
ARNm de IDN3-B de
Homo sapiens
DHA/EPA
1605317_at NEGATIVAMENTE Cromosoma 16 clon CTD-AC093509
2337L2 de Homo
sapiens, secuencia
completa
DHA/EPA
1605486_at POSITIVAMENTE ARNm de piruvato AK096428
deshidrogenasa kinasa 4
de Homo sapiens, región
3' sin traducir, secuencia
parcial
DHA/EPA
1605832_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AK097112
ADNc DKFZp451J152
(del clon
DKFZp451J152); cds
completo
DHA/EPA
1605935_at NEGATIVAMENTE ARNm para proteína NFI- AK024964
B de Mus musculus cds
completo
ALA
1582455_at NEGATIVAMENTE ARNm de cadena alfa 1 AB209597
(I) pre-pro de colágeno
tipo I (COL1A1) de Canis
familiaris, cds completo
ALA
1584508_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: LOC464838 AK122763
(LOC464838) de Pan
troglodytes, ARNm
ALA
1584742_at POSITIVAMENTE Secuencia de ADN AL591206
humana del clon RP11
151J20 en el cromosoma
9 contiene el extremo 5'
de un gen novedoso
(FLJ20060) (contiene
FLJ12902, KIAA1574), el
gen de ADFP para la
proteína relacionada con
la diferenciación adiposa
(ADRP)
ALA
1584951_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR605429
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) (LOC474720) de
Canis familiaris, ARNm
ALA
1585266_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC005053
proteína FLJ20859
(LOC475396) de Canis
familiaris, ARNm
ALA
1585355_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR597463
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) (LOC474720) de
Canis familiaris, ARNm
ALA
1585515_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC476210 AF303134
(LOC476210) de Canis
familiaris, ARNm
ALA
1585553_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC032361
tenascina-N
(LOC490335) de Canis
familiaris, ARNm
ALA
1586185_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC093611
proteína hipotética
LOC90637 (LOC480809)
de Canis familiaris,
ARNm
ALA
1587312_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC491404 AC124862
(LOC491404) de Canis
familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ALA
1587413_at POSITIVAMENTE ARNm del filamento AC005996
intermedio de gliarina de Hirundo medicinalis, cds
ALA
1587838_at NEGATIVAMENTE completo Factor de crecimiento 13 AL031386
de fibroblastos (FGF13) de Homo sapiens, variante 1B de transcrito,
ARNm
ALA
1588093_at NEGATIVAMENTE Proteína hipotética FLJ20507 de Homo BC039892
sapiens, ARNm (clon de ADNc MGC:47628
ALA
1588502_at NEGATIVAMENTE IMAGE:5725347), cds completo ARNm de proteína variante de isoforma beta AB209262
de proteína 5 de elemento de unión en
ALA
1589017_at POSITIVAMENTE respuesta a AMPc de Homo sapiens ARNm de proteína variante 2 de isoforma 2 AB209330
de proteína asociada a microtúbulos de Homo
sapiens
ALA
1590554_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC025842
proteína 1 de unión a ATP/GTP (LOC479034) de Canis familiaris,
ARNm
ALA
1591083_at POSITIVAMENTE ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2
(UNQ171) de Homo sapiens, cds completo
ALA
1591749_at POSITIVAMENTE Proteína asociada a AY400098
resistencia natural
asociada a macrófagos (NRAMP1) de Canis familiaris, ARNm
ALA
1592201_at POSITIVAMENTE Gen de la proteína gag (gag) de la cepa A|G1612 de VIH-2 de Ghana, cds AL929410
ALA ALA
1593146_s_at 1593222_at POSITIVAMENTE POSITIVAMENTE parcial Factor 11 Kruppel like (KLF11) de Homo sapiens, ARNm Secuencia de ADN BC063286 AL139243
humana del clon RP11
439D8 en el cromosoma
10 contiene un gen novedoso, el gen HPS1 para el síndrome 1 de Hermansky-Pudlak, el extremo 3' del gen HPSE2 para heparanasa 2 y una isla de CpG,
ALA
1593224_at POSITIVAMENTE competo PREDICHO: Similar a AL138842
isoforma a de
hemojuvelina (LOC475830) de Canis familiaris, ARNm
ALA
1593710_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY338490
ALA
1593836_at POSITIVAMENTE glutatión reductasa (LOC506406) de Bos taurus, ARNm parcial clon RP81-142A6 de NA
Canis familiaris,
secuencia completa
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ALA 1595172_s_at POSITIVAMENTE
ALA 1595533_at POSITIVAMENTE
ALA
1595722_at POSITIVAMENTE
ALA
1595801_at POSITIVAMENTE
ALA
1596406_at POSITIVAMENTE
ALA
1599614_at POSITIVAMENTE
ALA
1600037_at NEGATIVAMENTE
ALA
1600155_at POSITIVAMENTE
ALA
1600793_at POSITIVAMENTE
ALA
1601394_x_at POSITIVAMENTE
ALA
1602423_at NEGATIVAMENTE
ALA
1602589_at POSITIVAMENTE
ALA
1603636_at NEGATIVAMENTE
ALA
1604861_at NEGATIVAMENTE
PREDICHO: Similar a gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (LOC479078) de Canis familiaris, ARNm Secuencia de ADN humano del clon RP11548K23 en el cromosoma 10 contiene el gen ANKRD2 para dominio repetido 2 de anquirina (músculo de respuesta a estiramiento), seis genes novedosos, el gen para fosfatidilinositol 4 quinasa Cromosoma 17 de Homo sapiens, clon CTD3022L24, secuencia completa ADNc FLJ34120 fis de Homo sapiens, clon FCBBF3009541 ARNm de Pongo pygmaeus; ADNc DKFZp459C032 (del clon DKFZp459C032); PREDICHO: LOC477772 (LOC477772) de Canis familiaris, ARNm Homo sapiens, clon IMAGE:5294477, ARNm PREDICHO: LOC479296 (LOC479296) de Canis familiaris, ARNm CG 18408-PA de Drosophila melanogaster, ARNm de isoforma A (CAP), cds completo PREDICHO: Similar a isoforma de proteasa 7 específica de ubiquitina (LOC479854) de Canis familiaris, ARNm PREDICHO: Similar a proteína 1 de unión a factor 2 de regulación de interferón (LOC484433) de Canis familiaris, ARNm Gen de tirosín aminotransferasa de Mustela vison, cds completo Secuencia de ADN humana del clon RP4715N11 en el cromosoma 20q13.1-13.2 dos genes putativos novedosos, ESTs, STSs y GSSs, secuencia completa Cromosoma 5 clon CTB53I9 de Homo sapiens, secuencia completa NA
AL355315
AC015920
AK091439 AC023795
AL365364
AC007163 AC011389 AL157781
AC022167
AC078880
NA
AL031674
AC008680
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ALA 1605047_at NEGATIVAMENTE
ALA
1605187_at POSITIVAMENTE
ALA
1605429_at NEGATIVAMENTE
ALA
1605486_at POSITIVAMENTE
LA
1582385_at NEGATIVAMENTE
LA
1582824_at POSITIVAMENTE
LA
1583273_s_at NEGATIVAMENTE
LA
1584258_at POSITIVAMENTE
LA
1584677_at NEGATIVAMENTE
LA
1584742_at POSITIVAMENTE
LA 1584951_at POSITIVAMENTE
Secuencia de ADN humana del clon RP1110C13 en el cromosoma 10 contiene el extremo 5' del gen TRIP8 para receptor interactuante 8 de hormona tiroidea (KIAA1380, DKFZp761F0118) y el extremo 3' de un gen novedoso (FLJ1 Secuencia de ADN humana del clon RP118N6 en el cromosoma 9 contiene el extremo 3' del gen MELK para kinasa de cremallera de leucina materna embrionaria (KIAA10175), secuencia completa Secuencia de ADN humana del clon RP11458I7 en el cromosoma 1 contiene el extremo 5' del gen ZA30D1 para dedos de zinc, dominio A20 que contiene 1, un seudogén de proteína L6 ribosomal (RPL6), el gen VPS45A para ARNm de piruvato deshidrogenasa kinasa 4 de Homo sapiens, región 3' sin traducir, secuencia parcial Transportador de glutamato dependiente de Na+ (GLAST) de Canis familiaris, ARNm PREDICHO: Isoforma de carnitín palmitoil transferasa I (CPT1) de Canis familiaris, ARNm ARNm de Homo sapiens; ADNc DKFZp761G179 (del clon DKFZp761G179) Calsintenina 2 de Homo sapiens, ARNm (clon de ADNc IMAGE:4130487), cds parcial PREDICHO: Similar a cistalina T (LOC469901) de Pan troglodytes, ARNm Secuencia de ADN humana del clon RP11151J20 en el cromosoma 9 contiene el extremo 5' de un gen novedoso (FLJ20060) (contiene FLJ12902, KIAA1574), el gen de ADFP para la proteína relacionada con la diferenciación adiposa (ADRP) PREDICHO: Similar a adipofilina (proteína relacionada con la diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
AL713895
AL442063
AL358073
AK096428
D26443
BC000185
BC008990
BC007943
BC024006
AL591206
CR605429
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
LA
1585355_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR597463
adipofilina (proteína relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
LA
1585417_at POSITIVAMENTE Monoxigenasa asociada a microtúbulos de Mus AC105754
musculus, dominio de
calponina y LIM que contiene 3, ARNm (clon de ADNc
LA
1585604_at NEGATIVAMENTE IMAGE:30637988), cds parcial Secuencia de ADN AL121927
humana del clon RP11
175J10 en el cromosoma
10 contiene pseudogén de proteína I que contiene super hélice acídica transformante
(TACC1) y un pseudogén de NADH deshidrogenasa
LA
1585686_at POSITIVAMENTE I mitocondrial (MTND1) PREDICHO: Similar a CR625198
proteína de unión a ARN inducible por frío (proteína de unón a ARN rica en glicina CIRP) (A18
hnRNP) (LOC507120) de Bos taurus, ARNm
LA
1586295_at NEGATIVAMENTE Regulada negativamente en cáncer de ovarios 1 de BC027860
Homo sapiens, ARNm (clon de ADNc MGC:34368
LA
1588088_at POSITIVAMENTE IMAGE:5228947), cds completo Proteína inducible por hipoxia 2 de Homo sapiens, ARNm (clon de ADNc MGC:17005 BC008573
LA
1589569_at NEGATIVAMENTE IMAGE:4182067), cds completo PREDICHO: Similar a BC039825
quinasa asociada a células germinales masculinas (LOC478721) de Canis familiaris,
ARNm
LA
1591083_at POSITIVAMENTE ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2
(UNQ171) de Homo sapiens, cds completo
LA
1592172_at POSITIVAMENTE Clon BAC CTB-17C20 de AC004543
LA
1594511_s_at POSITIVAMENTE 7 de Homo sapiens, secuencia completa Familia del dominio RGM AK054622
de Homo sapiens, miembro B, ARNm (clon de ADNc
LA
1594801_at NEGATIVAMENTE IMAGE:3852164), ARNm de compañero de fusión a HMGIC -like 2 AY309920
(LHFPL2) de Homo sapiens, cds completo
LA
1594973_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC478197 AL031387
(LOC478197) de Canis familiaris, ARNm
LA
1595021_at NEGATIVAMENTE ARNm para cotransportador de cloruro de sodio de Bos NM_000339
taurus, parcial
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
LA
1595753_at NEGATIVAMENTE ARNm de CrkRS dHomo sapiens; cds e CR954985
LA
1596117_at NEGATIVAMENTE completo Piccolo (proteína de citomatriz presináp tica) AP001266
LA
1600646_at NEGATIVAMENTE (Pclo) de Mus musARNm ARNm de Homo saADNc DKFZp547F culus, piens; 213 AC103736
LA
1600703_at POSITIVAMENTE (del clon DKFZp54PREDICHO: Similahomólogo de gemadesinhibida por bencimidazoles 3 7F213) r a ción AC012391
LA
1601942_at NEGATIVAMENTE (LOC477857) de Cfamiliaris, ARNm PREDICHO: Similafamilia con similaridsecuencia 20 de C anis r a ad de anis AC026358
LA
1603578_at NEGATIVAMENTE familiaris, miembro(LOC480458), ARNPREDICHO: Similaantígeno CD63 A m r a CR609892 anis
LA
1605486_at POSITIVAMENTE (LOC474391) de Cfamiliaris, ARNm ARNm de piruvato deshidrogenasa kinde Homo sapiens, asa 4 región AK096428
LA
1605822_at NEGATIVAMENTE 3' sin traducir, secuparcial ARNm de proteína dipeptidil aminopep encia tidasa-M96859
ARA
1582824_at POSITIVAMENTE like de humano, cds completo PREDICHO: Isoforma de carnitín palmitoil BC000185
ARA
1582851_at POSITIVAMENTE transferasa I (CPT1Canis familiaris, ARsubfamilia 1 de recnuclear de Rattus norvegicus, grupo miembro 1, ARNm ) de Nm eptor D, (clon BC047875
ARA
1582999_at NEGATIVAMENTE de ADNc MGC:722IMAGE:5598020), cds completo ARNm de inhibidorquinasa dependien 88 de te de AY399342 Canis
ARA
1583403_at POSITIVAMENTE ciclina (WAF1) de familiaris, cds parciARNm de carnitin palmitoiltransferasaSus scrofa, gen nu al I de clear AK172798
ARA
1584742_at POSITIVAMENTE que codifica proteínmitocondrial, cds completo Secuencia de ADN a AL591206
ARA 1584951_at POSITIVAMENTE
humana del clon RP11151J20 en el cromosoma 9 contiene el extremo 5' de un gen novedoso (FLJ20060) (contiene FLJ12902, KIAA1574), el gen de ADFP para la proteína relacionada con la diferenciación adiposa (ADRP) PREDICHO: Similar a adipofilina (proteína relacionada con la diferenciación adiposa) (ADRP) (LOC474720) de Canis familiaris, ARNm
CR605429
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ARA
1585355_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR597463
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) (LOC474720) de
Canis familiaris, ARNm
ARA
1586047_s_at NEGATIVAMENTE Secuencia de ADN de AL512655
RP23-348N2
ratón de clon en el
cromosoma 11 contiene
el extremo 5' del gen
Ppp3r1 para isoforma alfa
de subunidad B
reguladora de proteín
fosfatasa 3 (calcineurina
B, tipo I), una proteína
ribosómica
ARA
1586172_at NEGATIVAMENTE Cromosoma 11 de Homo AC131263
sapiens, clon RP11
348A11, secuencia
completa
ARA
1586185_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC093611
proteína hipotética
LOC90637 (LOC480809)
de Canis familiaris,
ARNm
ARA
1586281_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BX640828
proteína 5 que contiene
dominio DEP
(LOC458777) de Pan
troglodytes, ARNm
ARA
1587792_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL049589
fosfoglicerato quinasa 1
(LOC533730) de Bos
taurus, ARNm parcial
ARA
1588088_at POSITIVAMENTE Proteína inducible por BC008573
hipoxia 2 de Homo
sapiens, ARNm (clon de
ADNc MGC:17005
IMAGE:4182067), cds
completo
ARA
1588903_at POSITIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; U32996
ADNc DKFZp686I2148
(del clon
DKFZp686I2148)
ARA
1590656_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AY404349
regulador de cromatina c1
dependiente de actina
asociado a la matriz
relacionado con SWI/SNF
(LOC476640) de Canis
familiaris, ARNm
ARA
1590755_at NEGATIVAMENTE Clon BAC RP11-1246C AC102953
19 de 7 de Homo
sapiens, secuencia
completa
ARA
1591083_at POSITIVAMENTE ARNm del clon AC010323
DNA22780 NL2
(UNQ171) de Homo
sapiens, cds completo
ARA
1592286_s_at NEGATIVAMENTE ARNm de clon DNA77624 BC057284
SHATr/JAM3 (UNQ859)
de Homo sapiens, cds
completo
ARA
1592610_at NEGATIVAMENTE clon de ADNc BC071790
IMAGE:4611512 de
Homo sapiens, cds
parcial
ARA
1592947_at POSITIVAMENTE Proteína hipotética FLJ AC016585
11795 (FLJ 11795) de
Homo sapiens, ARNm
ARA
1593146_s_at POSITIVAMENTE Factor 11 Kruppel like BC063286
(KLF11) de Homo
sapiens, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ARA
1593254_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a 6
fosfofructo-2
quinasa/fructosa-2,6
bofosfatasa 1 (6PF-2-
K/Fru-2,6-P2ASE
lisozima del hígado)
(LOC491903) de Canis
familiaris, ARNm
ARA
1593907_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a
subunidad 10 reguladora
no ATPasa de
proteasoma 26S
(subunidad p28
reguladora de
proteasoma 26S)
(ganquirina)
(LOC535414) de Bos
taurus, ARNm
ARA
1594108_at POSITIVAMENTE ARNm para proteína
hipotética de Gallus
gallus, clon 15k1
ARA
1594939_at POSITIVAMENTE Cromosoma 8 de Homo
sapiens, clon RP11
813L8, secuencia
completa
ARA
1595334_at NEGATIVAMENTE ARNm de Homo sapiens;
ADNc DKFZp779M 1134
(del clon DKFZp779M
1134)
ARA
1595495_s_at POSITIVAMENTE Gen de subunidad 5 de
NADH deshidrogenasa
(ND5) de Mustela vison,
cds completo gen
mitocondrial para
producto mitocondrial
ARA
1595956_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a
proteína KIAA1389
(LOC421523) de Gallus
gallus, ARNm
ARA
1596476_at NEGATIVAMENTE Cromosoma 11 clon
OSJNBb0071K13 de
Oryza sativa (grupo
cultivar japonica),
secuencia completa
ARA
1596787_at NEGATIVAMENTE Proteína 2 que interactúa
con CASK (CASKIN2) de
Homo sapiens, ARNm
ARA
1597116_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a
elemento de
poliadenilación
citoplásmica que se une a
proteína 4 de Canis
familiaris, ARNm
ARA
1598013_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a
isoforma 1 de proteína
InaD-like (LOC479550)
de Canis familiaris,
ARNm
ARA
1598063_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a
proteína de unión a
proacrosina (LOC500316)
de Rattus norvegicus,
ARNm
ARA
1598902_at POSITIVAMENTE clon de ADNc
IMAGE:3878708 de
Homo sapiens, cds
parcial
ARA
1599787_at POSITIVAMENTE Homo sapiens, clon
IMAGE:4821877, ARNm,
cds parcial
ARA
1599851_at POSITIVAMENTE PREDICHO: frizzled-3
(FZ-3) de Gallus gallus,
ARNm
AL020991
AL034553
AC100847 AC090133
AL031290
NA
AC025467
Z84490
AC100787 BX538213
BC021135
AC112198
BC009735
AL035703 AC092040
Columna 1
Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
ARA
1601092_at POSITIVAMENTE ARNm de TRIADI tipo I AF099149
de Homo sapiens, cds
completo
ARA
1601561_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL357374
RIKEN cDNA
2010100O12
(LOC477215) de Canis
familiaris, ARNm
ARA
1601912_at NEGATIVAMENTE Secuencia AW538196 AL359494
expresada (AW538196)
de Mus musculus, ARNm
ARA
1602749_at POSITIVAMENTE Clon BAC RP11-44D21 AC108866
de 4 de Homo sapiens,
secuencia completa
ARA
1603093_at POSITIVAMENTE ADN genómico de Homo AP003083
sapiens, clon del
cromosoma 11q: RP11
179B7, secuencia
completa
ARA
1603151_at POSITIVAMENTE Cromosoma 20 de Rattus AL033380
norvegicus, complejo
principal de
histocompatibilidad,
ensamblado a partir de 40
BAC, cepa Brown Norway
(BN/ssNHsd), haplotipo
RT1n; segmento 7/11
ARA
1603452_s_at NEGATIVAMENTE clon de ADNc AC006211
IMAGE:4611044 de
Homo sapiens, cds
parcial
ARA
1603454_at POSITIVAMENTE ARNm para similar a AL158068
subunidad Vib de
citocromo c oxidasa de
Bos taurus, cds parcial,
clon: ORCS10538
ARA
1603839_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Factor de BX284687
transcripción EB
(predicho)
(Tcfeb_predicted) de
Rattus norvegicus, ARNm
ARA
1604372_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC475665 AY411810
(LOC475665) de Canis
familiaris, ARNm
ARA
1604969_at NEGATIVAMENTE Cromosoma 17 de Homo AC005332
sapiens, clon
hRPK.147_L_13,
secuencia completa
ARA
1605486_at POSITIVAMENTE ARNm de piruvato AK096428
deshidrogenasa kinasa 4
de Homo sapiens, región
3' sin traducir, secuencia
parcial
SA
Cfa.10737.1. A1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: SImilar a AL663074
HP1-BP74 de canis
familiaris variante 4 de
transcrito (LOC478203),
ARNm
SA
Cfa.10872.1. A1_at POSITIVAMENTE Factor 11 Kruppel like de CR591795
Homo sapiens, ARNm
(clon de ADNc
MGC:71570
IMAGE:30343877), cds
completo
SA
Cfa.12323.1. A1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC010323
proteína angiopoyetina
like 4 (LOC476724) de
Canis familiaris, ARNm
SA
Cfa.12533.1. A1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC144438
isoforma 1 de gen 1
inducido por insulina
(LOC511899) de Bos
taurus, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
Cfa.12594.1. A1_at POSITIVAMENTE Receptor 17 acoplado a proteína G de Homo AC096920
sapiens, ARNm (clon de
ADNc MGC:35264
IMAGE:5174146), cds
completo
SA
Cfa.12839.1. A1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC103591
isoforma s de nexilina
(LOC490202) de Canis
familiaris, ARNm
SA
Cfa.17.1.S1_s _at POSITIVAMENTE ARNm de polipéptido A NM_134431
de transporte de aniones
inorgánicos (OATPA), cds
parcial
SA
Cfa.17302.1.S 1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Dominio NM_015549
similar que contiene
homología de plequistrina
de Canis familiaris, familia
G, miembro 3
(LOC611460), ARNm
SA
Cfa. 17415.1.S 1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a XM_088459
proteína relacionada con
la región promotora del
gen de regucalcina (LOC607434) de Canis
familiaris, ARNm
SA
Cfa.17931.1.S 1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_022834
isoforma 1 de proteína
relacionada con el
dominio A de factor de
von Willebrand
(LOC607112) de Canis
familiaris, ARNm
SA
Cfa.1854.1.A 1_at POSITIVAMENTE Desaturasa 1 de ácidos AP002380
grasos (FADS1) de Homo
sapiens, ARNm
SA
Cfa.18958.1.S 1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC003409
dominio de OCIA que
contiene 1, variante 3 de
transcrito (LOC475140),
ARNm
SA
Cfa.19447.1.S 1_at NEGATIVAMENTE Lamina B1 (LMNB1) de NM_005573
Homo sapiens, ARNm
SA
Cfa.19635.1.S 1_at NEGATIVAMENTE Gen para proteínas hipotéticas de Lotus AF165140
corniculatus var.
japonicus, cds completo y
parcial,
clon:BAC259.12D-1
SA
Cfa.19704.1.S 1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC006276
familia de GTPasa
relacionada con
inmunidad de Bos taurus,
Q1 (LOC616834), ARNm
SA
Cfa.20892.1.S 1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR936765
ectonucleósido trifosfato
difosfohidrolasa 6
(NTPDase6) (antígeno
like 2 de CD39 )
(LOC485564), ARNm
SA
Cfa.21023.1.S 1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL590762
dominio non-POU que contiene de Canis
familiaris, que se une a
octámero, variante 11 de
transcrito (LOC612773),
ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
Cfa.2282.1.S1 _at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK096428
[Piruvato deshidrogenasa
[lipoamida] quinasa
isozima 4, precursor
mitocondrial (piruvato
deshidrogenasa quinasa
isoforma 4) (LOC482310) de Canis familiaris,
ARNm
SA
Cfa.394.1.A1 _x_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_000984
proteína L23A ribosomal
60S de Canis familiaris,
ARNm
SA
Cfa.431.1.A1 _at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL591206
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa)
(ADRP) de Canis
familiaris, variante 4 de
transcrito (LOC474720),
ARNm
SA
Cfa.431.2.A1 _s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_001122
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) de Canis
familiaris, variante 1 de
transcrito (LOC474720),
ARNm
SA
Cfa.5582.1.A 1_at NEGATIVAMENTE ARNm para proteína AB209010
variante de precursor de oxidasa dual 2 de Homo
sapiens
SA
Cfa.6339.1.A 1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_001122
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) de Canis
familiaris, variante 3 de
transcrito (LOC474720),
ARNm
SA
Cfa.6361.1.A 1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BX679664
proteína L17 ribosomal 60S de Canis familiaris,
variante 4 de transcrito
(LOC480221), ARNm
SA
Cfa.6482.1.A 1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Proteína AL162191
hipotética LOC612422
(LOC612422) de Canis
familiaris, ARNm
SA
Cfa.6915.1.A 1_at NEGATIVAMENTE Secuencia completa de AC073655
BAC 12 RP11-1105G2
(Roswell Park Cancer
Institute Human BAC
Library) de Homo sapiens
SA
Cfa.7119.1.A 1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC109357
coilina (LOC480564) de
Canis familiaris, ARNm
SA
Cfa.743.2.S1_ a_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Proteína BC001282
hipotética LOC614918
(LOC614918) de Bos
taurus, ARNm
SA
Cfa.6361.1.A 1_at POSITIVAMENTE Secuencia de ADN de AC008732
ratón del clon RP23
287B22 en el cromosoma
11 contiene una isla de
CpG, secuencia completa
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
Cfa.7705.2.A 1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_007192
subunidad mayor de
factor de elongación de
transcripción específico de cromatina de Canis
familiaris, variante 2 de
transcrito (LOC612874),
ARNm
SA
Cfa.791.4.A1 _at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_000986
proteína ribosomal L24 de
Canis familiaris, variante
2 de transcrito
SA
Cfa.9014.1.A 1_at NEGATIVAMENTE (LOC478547), ARNm SNF8 de Mus musculus, AC091133
subunidad de complejo ESCRT-II, homólogo (S.
cerevisiae), ARNm (clon
de ADNc
IMAGE:5372918),
SA
Cfa.9506.1.A 1_at POSITIVAMENTE ARNm de proteína AF144755
inducible por hipoxia 2 (HIG2) de Homo sapiens,
cds completo
SA
Cfa.9531.1.A 1_at NEGATIVAMENTE ARNm de proteína AC092041
relacionada con ciclofilina
de Homo sapiens, cds
completo
SA
Cfa.9685.2.S1 _a_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Locus de AL138960
repeticiones cortas en
tándem PEZ20 variante
19 (LOC476927) de Canis familiaris, ARNm
SA
Cfa.9694.1.A 1_at NEGATIVAMENTE ARNm de proteína AL359317
hipotética (PY00634) de Plasmodium yoelii yoelii
cepa 17XNL cds parcial
SA
CfaAffx. 1102 .1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: SImilar a BC065298
ORF2 (LOC475183) de
canis familiaris
RAB5B, miembro de la
familia de oncogenes
RAS.
variante 3 de transcrito
(LOC474394), ARNm
SA
CfaAffx.1296 7.1.S1_at NEGATIVAMENTE Gen aislado cOR5D23 AF399364
receptor olfatorio familia 5
subfamilia D de Canis
familiaris cds parcial
SA
CfaAffx.1359 9.1.S1_at NEGATIVAMENTE ARNm desconocido de NA
clon 6-272 de Nicotiana
benthamiana
SA
CfaAffx. 1447 9.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK223603
proteína KIAA0652 (LOC483632) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.1459 5.1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_201532
diacilglicerol kinasa zeta
(LOC611321) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.1459 2.1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK222695
precursor de sindecán-4
(anfiglicano) (SYND4)
(proteína del núcleo de
ryudocán) (LOC485891) de Canis familiaris,
ARNm
SA
CfaAffx.1630 2.1.S1_x_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AB169501
proteína 25 de dedos de
zinc (LOC611218) de
Canis familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
CfaAffx. 1649 3.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL079340
fosfatidilinositol 4 quinasa
beta (Ptdlns 4-quinasa)
(PI4Kbeta) (PI4K-beta)
(NPIK) (PI4K92)
(LOC613348) de Bos
taurus, ARNm
SA
CfaAffx.1359 7.1.S1_at POSITIVAMENTE Esclerosis lateral NM_020919
amiotrófica 2 (juvenil) (ALS2) de Homo sapiens,
ARNm
SA
CfaAffx.1920 6.1.S1_at NEGATIVAMENTE Gen magenta para BX647478
flavonoide 3'-hidroxilasa
de Ipomea nil, cds
completo
SA
CfaAffx.197. 1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Proteína NM_003204
bZIP de Canis familiaris,
variante 1 de transcrito
(LCR-F1), ARNm
SA
CfaAffx.2051 POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL110210
5,1.S1_s_at
proteín tirosin fosfatasa de Canis familiaris, no
receptor tipo 23
(LOC609220), ARNm
SA
CfaAffx.2118 2.1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: SImilar a BC098376
GC4699-PA de canis
familiaris isoforma A,
variante 4 de transcrito
(LOC480489), ARNm
SA
CfaAffx.2128 0.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC035576
proteín quinasa 14
activada por mitógeno
(quinasa NF-kappa beta
inductora)(serín/treonín
proteín quinasa) (HsNIK)
(LOC490926) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2208 NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a XM_370654
2,1.S1_s_at
dedo de zinc tipo CCCh
que contiene 12A (LOC489416) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2256 0.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC063306
cullina-5 (CUL-5)
(receptor mobilzante de
calcio activado por
vasopresina) (VACM-1) (LOC489422) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2332 0.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC032114
RAD52B (LOC480794) de
Canis familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2378 NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC023600
4,1.S1_s_at
precursor de aldehído
deshidrogenasa 4A1 (LOC612452) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2387 POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL136747
2,1.S1_s_at
factor estimulador de la
escisión de Canis
familiaris, 3 pre-ARN
subunidad 2, tau
(LOC486459), ARNm
SA
CfaAffx.2404 0.1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NA
proteína que interactúa
con serín/treonín quinasa
11 (LOC488541) de Canis familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2584 4.1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: LOC22889 AK170490
hipotética de Canis
familiaris, variante 1 de
transcrito (LOC612936),
ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
CfaAffx.2830 1.1.S1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK222489
proteína angiopoyetina
like 4 (LOC476724) de Canis familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.2896 .1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_006116
proteína que interactúa
con proteín quinasa 7
activada por mitógeno
(proteína 1 de unión a TAK1) de Canis familiaris,
variante 1 de transcrito
(LOC481245), ARNm
SA
CfaAffx.2985 8.1.S1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC110874
proteína mutada ubicua
de melanoma
(LOC612320) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.3314 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_001122
adipofilina (proteína
relacionada con la
diferenciación adiposa) (ADRP) de Canis
familiaris, variante 4 de
transcrito (LOC474720),
ARNm
SA
CfaAffx.4425 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_024620
proteína 329 de dedos de
zinc (LOC484234) de Canis familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.4438 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AB023184
FERM y dominio de PDZ
que contiene 1
(LOC481614), ARNm
SA
CfaAffx.5367 .1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a CR614114
claudina 6 (LOC490048)
de Canis familiaris,
ARNm
SA
CfaAffx.654. 1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a proteína ribosomal
XM_499342
(LOC442598) de Homo
S27
sapiens, ARNm
SA
CfaAffx.668. 1.S1_at NEGATIVAMENTE Serina tipo Kazal de NM_001001
Homo sapiens
inhibidor de la proteasa 5325
like 2 (SPINK5L2), ARNm
SA
CfaAffx.6703 .1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK093847
homólogo 2 de pumilio de
Canis familiaris, variante
6 de transcrito
(LOC607618), ARNm
SA
CfaAffx.7822 .1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC106940
rabenosina-5 proteína
efectora de Rab5 que
contiene dedo FYVE
(LOC484642) de Canis
familiaris, ARNm
SA
CfaAffx.7845 .1.S1_s_at POSITIVAMENTE ARNm de Homo sapiens AJ222700
para proteína TSC-22,
SA
CfaAffx.8861 .1.S1_at POSITIVAMENTE LOC387790 hipotética (LOC387790) de Homo AK095089
sapiens, ARNm
SA
CfaAffx.9083 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK155096
isoforma 2 de proteína
FLJ20859 (LOC475396) de Canis familiaris,
ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
SA
CfaAffx.9353 .1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_007192
subunidad mayor de
factor de elongación de
transcripción específico de cromatina de Canis
familiaris, variante I de
transcrito (LOC612874),
ARNm
SA
CfaAffx.9845 .1.S1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a rico NM_144999
en repeticiones de
leucina que contiene 45
(LOC478431), ARNm
CLA
Cfa. 10478.1. A1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC005691
precursor de inositol
1,4,5-trisfosfato 5
fosfatasa (fosfoinositida
5-fosfatasa) (5PTasa)
(inositol polifosfato-5
fosfatasa de 75 kDa) (LOC538291) de Bos
taurus, ARNm parcial
CLA
Cfa.11267.1. A1_at NEGATIVAMENTE clon de ADNc BC024645
IMAGE:4456146 de
Homo sapiens, cds
parcial
CLA
Cfa.11358.1. A1_at POSITIVAMENTE Familia 20 de AF170802
transportador soluto
(transportador de fosfato) de Homo sapiens
miembro 2 (SLC20A2),
ARNm
CLA
Cfa .11413.1. A1_at NEGATIVAMENTE Clon BAC RP11-17N4 de AC016673
2 de Homo sapiens,
CLA
Cfa.11483.1. A1_at NEGATIVAMENTE secuencia completa Dominio POU de Danio AL138810
rerio, clase 4, factor de
transcripción 1, ARNm
(clon de ADNc
MGC:77341
IMAGE:6967996), cds
completo
CLA
Cfa.11868.1. A1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL132640
dominio contiene
homología de plequistrina
de Canis familiaris, familia
H (con dominio MyTH4)
miembro 1 (LOC480363),
ARNm
CLA
Cfa.12323.1. A1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC010323
proteína angiopoyetina
like 4 (LOC476724) de
Canis familiaris, ARNm
CLA
Cfa.1284.1.S1 _at POSITIVAMENTE ARNm de Homo sapiens; AL133026
ADNc DKFZp434C136
(del clon DKFZp434C136)
CLA
Cfa.13221.1. A1_at POSITIVAMENTE Secuencia de ADN AL137840
humana del clon RP11
241O12 en el cromosoma
Xq26.3-27.3 contiene un
gen novedoso, secuencia
completa
CLA
Cfa.13649.1. A1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK074468
transportador XTRP2
dependiente de cloro y
sodio (transportador de
soluto familia 6 miembro
18) (LOC478631) de Canis familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
CLA
Cfa.13707.1. A1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC008070
homólogo de Ssu72 ARN
polimerasa II CTD
fosfatasa de Bos taurus,
variante 2 de transcrito
(LOC614837), ARNm
CLA
Cfa.13930.1. A1_at NEGATIVAMENTE Proteína hipotética FGSC AL031779
A4 (AN0430.2) de
Aspergilus nidulans,
ARNm
CLA
Cfa.14103.1. A1_at NEGATIVAMENTE ARNm clon RAFL15-15-AC099053
K01 (R20657) citocromo
P450 putativo
(At1g13150) de
Arabidopsis thaliana, cds
completo
CLA
Cfa.15679.1. A1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC039170
C10C5.4 (LOC607282)
de Canis familiaris,
ARNm
CLA
Cfa.19017.1.S 1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: SImilar a AL137013
GC5537-PA de canis
familiaris variante 2 de
transcrito (LOC480960),
ARNm
CLA
Cfa.1935.1.A 1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: LOC481916 AL590440
hipotético (LOC481916)
de Canis familiaris,
ARNm
CLA
Cfa.20000.1.S 1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AC021754
isoforma 1 de canal 2 de
cationes asociado a
esperma (LOC609008) de
Canis familiaris, ARNm
CLA
Cfa.20451.1.S 1_at POSITIVAMENTE Ubiquitina-like 4 de Mus AC012153
musculus, ARNm (clon de
ADNc MGC:19132
IMAGE:4215699), cds
completo
CLA
Cfa.21599.1.S 1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC040721
isoforma SM1-like de la
cadena pesada 11 de
miosina de músculo liso
de Canis familiaris,
variante 3 de transcrito
(LOC474586), ARNm
CLA
Cfa.2308.1.A 1_at POSITIVAMENTE piwi-like 4 (Drosófila) AC108065
(Piwil4) de Mus musculus,
ARNm
CLA
Cfa.2586.1.S1 _at POSITIVAMENTE Gen homólogo B de ciclo AY675321
de división celular 14
CDC14 (S. cerevisiae)
(CDC14B) de Homo
sapiens, cds completo
CLA
Cfa.3584.1.S1 _s_at POSITIVAMENTE Receptor de hormonas NM_000406
que libera gonadotropina
(GNRHR) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
Cfa.4761.1.S1 _at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AK 125974
dominio que contiene 2A
dedo de zinc GATA de
Bos taurus, variante 6 de
transcrito (LOC508384),
ARNm
CLA
Cfa.4817.1.A 1_at NEGATIVAMENTE Gen de nefrina NPHS1 AC024166
(NhpsI) de Mus musculus,
cds parcial
CLA
Cfa.5394.1.A 1_at NEGATIVAMENTE Proteína MGC80410 de AC012618
Xenopus laevis, ARNm
(clon de ADNc
MGC:80410
IMAGE:5155047), cds
completo
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
CLA
Cfa.5400.1.A 1_at NEGATIVAMENTE Glutatión peroxidasa 6 AY324826
(olfatoria) (GPX6) de
Homo sapiens, ARNm
CLA
Cfa.5759.1.A 1_at POSITIVAMENTE Factor de crecimiento 5 AC006441
de fibroblastos (FGF5) de
Homo sapiens, cds
completo
CLA
Cfa.5949.1.A 1_x_at POSITIVAMENTE ADNc del gen AC009230
2500001K11
(2500001K11Rik) de Mus
musculus RIKEN, ARNm
CLA
Cfa.6989.1.A 1_at NEGATIVAMENTE ARNm para gen AL589763
KIAA0297 humano, cds
parcial
CLA
Cfa.7584.1.A 1_at NEGATIVAMENTE ARNm de forssman AC091826
sintetasa de Canis
familiaris, cds completo
CLA
Cfa.7855.1.A 1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL162595
proteína asociada a
complejo FKBP12
rapamicina (proteína de
unión a FK506 complejo
12-rapamicina proteína
asociada 1) (proteína
diana de rapamicina)
(RAPT1) (diana de
mamífero de rapamicina) (MTOR) de Canis
familiaris, variante 2 de
transcrito (LOC478232),
ARNm
CLA
Cfa.8008.2.A 1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL137818
isoforma 1 de dominio
like I de Rap/RanGAP
que activa GTPasa
(LOC490653) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
Cfa.8798.1.A 1_at POSITIVAMENTE Secuencia de ARNm AC007269
At1g50920 de
Arabidopsis thaliana
CLA
CfaAffx. 1085 3.1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: receptor AC090440
olfatorio cOR2AG1 familia
2 subfamilia AG-like
(cOR2AG1) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
CfaAffx.1228 .1.S1_at NEGATIVAMENTE Gen para homodominio- AP002762
LIM de proteína Lhx8 de Homo sapiens, cds
parcial
CLA
CfaAffx. 1321 0.1.S1_s_at POSITIVAMENTE Receptor olfatorio de Homo sapiens, familia 6, NM_001005 493
subfamilia C, miembro 6
(OR6C6), ARNm
CLA
CfaAffx.1359 9.1.S1_at NEGATIVAMENTE ARNm desconocido de NA
clon 6-272 de Nicotiana
benthamiana
CLA
CfaAffx.1379 3.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a AL391114
endonucleasa
apurínica/apirimidínica
(44,7 kDa) (apn-1)
(LOC592745) de Strongylocentrotus
purpuratus, ARNm
CLA
CfaAffx.1700 3.1.S1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: SImilar a CR593118
actinina de canis
familiaris alfa 2, variante
11 de transcrito
(LOC479191), ARNm
CLA
CfaAffx. 1821 POSITIVAMENTE PREDICHO: AK223627
4.1.S1_s_at
Complemento de receptor
componente 2 (CR2) de Canis familiaris, ARNm
Columna 1 Columna 2 Columna 3 Columna 4 Columna 5
CLA
CfaAffx.1841 4.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar to S67623
Cotocromo P450 24A1 de
Canis familiaris, precursor
mitocondrial (P450-CC24)
(Vitamina D(3) 24
hidroxilasa) (1,25
dihidroxivitamina D(3) 24
hidroxilasa) (24-OHasa)
(LOC485935), ARNm
CLA
CfaAffx. 1892 2.1.S1_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a U 18799
distonia 2 de Canis
familiaris, torsión
(autosómico recesivo)
(LOC488341), ARNm
CLA
CfaAffx.2416 9.1.S1_at POSITIVAMENTE Familia 6 de U76343
transportador soluto de Mus musculus
(transportador
neurotransmisor, GABA),
miembro 13, ARNm (clon
de ADNc MGC:19082
IMAGE:4195373), cds
completo
CLA
CfaAffx.2467 5.1.S1_x_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC000293
expresada en células no metastásicas I de Canis
familiaris, proteína
(NM23A) (nucleósido
difosfato quinasa)
(LOC611984) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
CfaAffx.2488 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Proteína AL583806
hipotética LOC612694 (LOC612694) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
CfaAffx.2976 8.1.S1_s_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BX255925
proteína 32 de motivo
tripartito (predicha) (LOC491233) de Canis
familiaris, ARNm
CLA
CfaAffx.4438 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a AB023184
FERM y dominio de PDZ
que contiene 1
(LOC481614), ARNm
CLA
CfaAffx.6670 .1.S1_at POSITIVAMENTE PREDICHO: Similar a BC009972
monoxigenasa asociada a microtúbulos de Canis
familiaris, dominio de
calponina y LIM que
contiene 1 (LOC481958),
ARNm
CLA
CfaAffx.7326 .1.S1_s_at NEGATIVAMENTE PREDICHO: Similar a NM_145032
caja F y proteína 13
repetida rica en leucina
(LOC609997) de Canis
familiaris, ARNm

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Una composición que comprende,
    a) al menos un ácido graso omega 3, b) al menos un glicosaminoglicano, c) al menos un azúcar amino, d) al menos un antioxidante, y e) carnitina o acetilcarnitina.
  2. 2.
    La composición de la reivindicación 1, en donde el ácido graso omega 3 se selecciona del grupo que consiste en ácido alfa linoleico (ALA), ácido docosahexanoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA).
  3. 3.
    La composición de la reivindicación 1, en donde el glicosaminoglicano se selecciona del grupo que consiste en sulfato de condroitina, sulfato de dermatán, sulfato de queratán, heparina, sulfato de heparán e hialuronán.
  4. 4.
    La composición de la reivindicación 1, en donde el azúcar amino se selecciona del grupo que cosiste en galactosamina, glucosamina, ácido siálico y N-acetilglucosamina.
  5. 5.
    La composición de la reivindicación 1, donde el antioxidante se selecciona del grupo que consiste en vitamina C, tocoferoles, tocotrienoles, glutatión, ácido lipoico, melatonina, y beta caroteno.
  6. 6.
    La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 que además comprende al menos un mineral dietético.
  7. 7.
    La composición de la reivindicación 6, donde el mineral dietético se selecciona del grupo que consiste en calcio, cloro, magnesio, fósforo, potasio, sodio, cobalto, cobre, flúor, yodo, hierro, manganeso, molibdeno, níquel, selenio, azufre, zinc y vanadio, y opcionalmente, en donde la composición además comprende al menos un aminoácido esencial.
  8. 8.
    La composición de la reivindicación 1 para su uso en medicina.
  9. 9.
    La composición de la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de una afección anormal de las articulaciones en un sujeto, en donde la composición se administra al sujeto.
  10. 10.
    La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el trastorno anormal de las articulaciones es osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones.
  11. 11.
    La composición de la reivindicación 1 para su uso en el retraso la aparición de una afección anormal de las articulaciones en un sujeto, en donde la composición se administra al sujeto.
  12. 12.
    La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno anormal de las articulaciones es osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones.
  13. 13.
    La composición de la reivindicación 1, para su uso en la reducción del riesgo de desarrollar una afección anormal de las articulaciones en un sujeto, en donde la composición se administra al sujeto.
  14. 14.
    La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la afección anormal de las articulaciones es osteoartritis, artritis reumatoide e inflamación local de las articulaciones.
  15. 15.
    La composición de la reivindicación 1, para su uso en un método para alterar la expresión de uno o más genes en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto la composición de la reivindicación 1, seleccionándose los uno o más genes del grupo que consiste en anexina Al, catepsina D, catepsina F, catepsina S, RELA, HMGB1, IL-1[beta], TNF[alfa], TNF[beta], TLR-2, TLR-4, p38, MAPK, TIMP-1, TIMP-2, MMP-1, MMP-2, MMP13, IL-15 y receptor IL-17.
    Nutriente
    % Garantía % % Materia Alimentado,
    nutriente
    Alimentado Seca base calórica
    g/100 kcal
    Proteína
    17,0 Mínimo: 18,5 20,1 5,1
    Grasa
    11,0 Mínimo 14,4 15,7 4,0
    Carbohidrato
    46,9 51,0 13,0
    (NFE)
    Fibra cruda
    12,0 Máximo 8,0 8,7 2,2
    mg/100 kcal3
    Calcio
    0,45 Mínimo 0,64 0,70 177
    Fósforo
    0,30 Mínimo 0,50 0,54 138
    Sodio
    0,16 0,17 44
    Potasio
    0,76 0,83 210
    Magnesio
    0,128 0,139 35
    Carnitina
    200 ppm 323 ppm 351 ppm 9
    Mínimo
    Total
    de ácidos 2,00 Mínimo: 3,49 3,79 965
    grasos Omega-3
    Relación
    de 0,7:1
    ácidos
    grasos
    Omega-6:
    Omega-3
    Total
    de ácidos 2,46 2,67 680,50
    grasos Omega-6
    Ácido
    Alfa 2,55 2,77 705,4
    linoleico (ALA)
    Figura 4
ES09790642.4T 2008-07-18 2009-07-20 Composiciones y métodos para tratar osteoartritis Active ES2480193T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8218508P 2008-07-18 2008-07-18
US82185P 2008-07-18
PCT/US2009/051169 WO2010009474A1 (en) 2008-07-18 2009-07-20 Compositions and methods for treating osteoarthritis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2480193T3 true ES2480193T3 (es) 2014-07-25

Family

ID=41059867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES09790642.4T Active ES2480193T3 (es) 2008-07-18 2009-07-20 Composiciones y métodos para tratar osteoartritis

Country Status (12)

Country Link
US (1) US9629382B2 (es)
EP (1) EP2323638B1 (es)
JP (2) JP2011528668A (es)
CN (1) CN102159197A (es)
AU (1) AU2009270718B2 (es)
BR (1) BRPI0915986A2 (es)
CA (1) CA2731067C (es)
DK (1) DK2323638T3 (es)
ES (1) ES2480193T3 (es)
RU (1) RU2619553C2 (es)
WO (1) WO2010009474A1 (es)
ZA (1) ZA201101055B (es)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9629382B2 (en) 2008-07-18 2017-04-25 Hill's Pet Nutrition, Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
US20110159500A1 (en) * 2009-12-29 2011-06-30 Hill's Pet Nutrition, Inc. Compositions including ginger for the amelioration or prevention of inflammatory conditions
CN102138961A (zh) * 2010-02-02 2011-08-03 北京绿色金可生物技术股份有限公司 黑豆皮提取物在预防和治疗骨关节炎的产品中的应用
CA2795575C (en) * 2010-05-12 2017-02-28 Hill's Pet Nutrition, Inc. Methods for the diagnosis, control and prophylaxis of inflammation and mitigation of inflammatory conditions in canines
BR112012025772A2 (pt) * 2010-05-12 2015-09-22 Hills Pet Nutrition Inc métodos de controle e profilaxia de inflamação e mitigação de condições inflamatórias em animais de estimação
WO2011143102A1 (en) * 2010-05-12 2011-11-17 Hill's Pet Nutrition, Inc. Methods of diagnosis, control and prophylaxis of inflammation and mitigation of inflammatory conditions in felines
US20130263294A1 (en) * 2010-09-20 2013-10-03 Bioiberica, S.A. Markers for joint displasia, osteoarthritis and conditions secondary thereto
WO2012150504A1 (en) * 2011-05-05 2012-11-08 Life Science Nutrition As Performance enhancing compositions and methods of use
BR112014007947A2 (pt) * 2011-10-03 2017-04-18 Univ Los Andes método para monitoramento, diagnóstico e/ou prognóstico de distúrbios relacionados à hipoxia usando nfat5
CN104039823A (zh) 2011-12-19 2014-09-10 希尔氏宠物营养品公司 用于诊断和治疗伴侣动物的甲状腺机能亢进的组合物和方法
US20140220006A1 (en) * 2013-02-01 2014-08-07 Meso Scale Technologies, Llc Lung cancer biomarkers
KR20250156824A (ko) * 2015-01-06 2025-11-03 데이비드 버톤 모바일 웨어러블 모니터링 시스템
PL3280423T3 (pl) * 2015-04-08 2023-12-27 Microvascular Health Solutions, LLC Kompozycje i sposoby do synergistycznego leczenia glikokaliksu
EP3446127A4 (en) * 2016-04-20 2020-01-22 Crescendo Bioscience, Inc. BIOMARKERS AND METHODS FOR ASSESSING RESPONSE TO INFLAMMATORY DISEASE TREATMENT
US20190316096A1 (en) * 2016-12-28 2019-10-17 Kyowa Hakko Kirin Co Method for selecting cell
EP3612570A4 (en) 2017-04-17 2021-01-13 The University of Chicago POLYMERIC MATERIALS FOR THE ADMINISTRATION OF SHORT-CHAIN FATTY ACIDS TO THE INTESTINE FOR HUMAN HEALTH AND DISEASE TREATMENT APPLICATIONS
CN107412240A (zh) * 2017-07-24 2017-12-01 冯纪敏 一种组合物及其应用
AU2017440239B2 (en) * 2017-11-17 2021-06-24 Hill's Pet Nutrition, Inc. Compositions comprising omega-3 polyunsaturated and medium chain fatty acids
JP7402225B2 (ja) 2018-05-11 2023-12-20 ロード アイランド ホスピタル ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤を用いて関節障害を処置するための組成物および方法
CN109266738A (zh) * 2018-11-19 2019-01-25 山西中医药大学 类风湿关节炎大鼠炎症因子检测引物及其方法
CN109680046B (zh) * 2019-01-17 2021-08-10 浙江大学 骨关节炎第一亚型的生物标记物以及用途
CN109965124A (zh) * 2019-03-29 2019-07-05 华熙生物科技股份有限公司 一种宠物食品及其制备方法
CN110511937B (zh) * 2019-08-05 2021-07-09 华南农业大学 Snf7基因及其防治瓢虫的应用
US20230030915A1 (en) * 2019-12-16 2023-02-02 Hill's Pet Nutrition, Inc. Pet Food Compositions
US20240382518A1 (en) * 2021-09-17 2024-11-21 Seoul National University R&Db Foundation Pharmaceutical composition and health functional food for prevention or treatment of osteoarthritis

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2210705T5 (es) * 1998-03-19 2011-02-15 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. Composición combinada que comprende una l-carnitina o una alcanoil-l-carnitina, un glucosaminoglucano y/o un constituyente del mismo.
US6506785B2 (en) * 1998-05-22 2003-01-14 Pfizer, Inc. Treating or preventing the early stages of degeneration of articular cartilage or subchondral bone in mammals using carprofen and derivatives
PL346860A1 (en) * 1998-09-08 2002-03-11 Monsanto Co Methods of treating osteoarthritis with inducible nitric oxide synthase inhibitors
US6534261B1 (en) 1999-01-12 2003-03-18 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
US6277842B1 (en) * 2000-10-17 2001-08-21 James Alexander Carthron Dietary supplemental method for fat and weight reduction
US20020099032A1 (en) * 2000-11-10 2002-07-25 Kiyotsugu Higashi Preparations and method of producing the same
WO2005000331A2 (en) * 2003-06-04 2005-01-06 Mucosal Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment and prevention of degenerative joint disorders
US8633247B2 (en) 2003-08-11 2014-01-21 Hill's Pet Nutrition, Inc. Method for decreasing cartilage damage in dogs
ES2310757T3 (es) * 2003-08-11 2009-01-16 Hill's Pet Nutrition Inc. Acidos grasos omega-3 para el tratamiento de la artrosis canina.
US8633246B2 (en) 2003-08-11 2014-01-21 Hill's Pet Nutrition, Inc. Omega-3 fatty acids for osteoarthritis
US8377904B2 (en) * 2004-02-09 2013-02-19 Hill's Pet Nutrition, Inc. Composition and method for use in cartilage affecting conditions
JP5667737B2 (ja) * 2004-07-01 2015-02-12 ネステク ソシエテ アノニム イヌ変形性関節症食餌製剤
CN102784396B (zh) * 2004-11-09 2015-07-29 希尔氏宠物营养品公司 抗氧化剂用于基因调节的用途
CN101247833B (zh) * 2005-06-29 2013-02-13 希尔氏宠物营养品公司 预防和治疗炎性疾病的方法和组合物
JP2009522553A (ja) * 2005-12-28 2009-06-11 ヒルズ・ペット・ニュートリシャン・インコーポレーテッド 体重状態または素因の診断方法
US8021659B2 (en) * 2006-04-28 2011-09-20 Naidu Lp Coenzyme Q10, lactoferrin and angiogenin compositions and uses thereof
US9629382B2 (en) 2008-07-18 2017-04-25 Hill's Pet Nutrition, Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis

Also Published As

Publication number Publication date
US20110183006A1 (en) 2011-07-28
JP2014237709A (ja) 2014-12-18
US9629382B2 (en) 2017-04-25
EP2323638B1 (en) 2014-05-07
AU2009270718B2 (en) 2012-09-06
EP2323638A1 (en) 2011-05-25
WO2010009474A1 (en) 2010-01-21
ZA201101055B (en) 2014-07-30
RU2619553C2 (ru) 2017-05-16
BRPI0915986A2 (pt) 2015-11-03
CA2731067A1 (en) 2010-01-21
JP6047128B2 (ja) 2016-12-21
JP2011528668A (ja) 2011-11-24
CN102159197A (zh) 2011-08-17
AU2009270718A1 (en) 2010-01-21
RU2011106033A (ru) 2012-08-27
CA2731067C (en) 2013-10-01
DK2323638T3 (da) 2014-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2480193T3 (es) Composiciones y métodos para tratar osteoartritis
ES2524475T3 (es) Composiciones y métodos para tratar trastornos asociados con animales con sobrepeso
AU2013405193B2 (en) Improving the level of hydration in a cat
JP2012520072A (ja) 組織特異的な加齢バイオマーカー
EP2499260B1 (en) Heart aging biomarkers and methods of use
CN102186471B (zh) 影响饱腹感、脂类代谢和脂肪利用的组合物和方法
US20140205569A1 (en) Methods and compositions for preventing and treating osteoarthritis
Fletcher The Nutrigenomic Effects of Dietary Choline and L-carnitine on the Muscle and Liver of Lean and Obese Cats when Fed for Weight Maintenance
WO2010080826A1 (en) Compositions and methods for treating disorders associated with overweight animals