ES2505466T3 - Procedimientos para predecir la respuesta al tratamiento del cáncer de mama triple negativo - Google Patents

Procedimientos para predecir la respuesta al tratamiento del cáncer de mama triple negativo Download PDF

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Abstract

Un procedimiento para predecir la respuesta de un tumor de mama triple negativo al tratamiento con un fármaco antineoplásico, comprendiendo el procedimiento : (a) lisar una célula tumoral obtenida del tumor de mama triple negativo para producir un extracto celular; (b) determinar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular; y (c) comparar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular determinado en la etapa (b) con un nivel de expresión de VEGFR2 de referencia, en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo en comparación con la referencia es un factor pronóstico de la respuesta al tratamiento con el fármaco antineoplásico, en el que el fármaco antineoplásico es una combinación de bevacizumab (Avastin®), carboplatino y paclitaxel.

Description

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19-09-2014
Tabla 2. Identificación de tejido de cáncer de mama con ERBB2.
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20520 3 >2x10e6 113.161 3.687
26379
KW7VHAET
1 -3.367 36
21704 3 1.520,673 48.669 93
WUQT6
2 314.653 17.864 47
NP11802
1 -2.053 17
26811 3 >2x10e6 307.337 4.523
25882
2 219.387 3.026 39
19898
1 -894 -
26106 3 >2x10e6 125.062 935
25798
2 137.399 10.424 248
21655
1 137.941 11.983 65
22080 3 1.340,073 142.055 2.215
24960
2 -15.563 43
24676
1 -2.905 -
19844 3 956,628 49.042 158
26154
2 110.091 3.511 111
9895
1 -8.896 214
20371 3 >2x10e6 105.413 728
25061
2 -8.993 105
19692
1 -2.664 50
AUBBG 3 486,835 15.525 56
22176
2 -3.788 95
17253
0 ---
22715 3 1.148,445 58.781 3.467
21962
2 -1.515 102
20007
0 -5.536 52
21703 3 643.263 31.597 92
24708
2 -4.769 16
21603
0 -4.463 44
19927 3 1.452,313 91.566 563
20525
2 -1.806 50
1R2117
0 --66
20330 3 458,839 45.080 1.251
24916
2 -2.224 15
0
Las imágenes de matrices CEER ilustrativas para las muestras subrayadas se muestran en la figura 6 y la IPtransferencia de bandas de tipo Western para las muestras recuadradas se muestran en la figura 7. Los valores de RTK/célula se determinan por comparación de la cantidad de muestras de entrada y la cantidad equivalente de células BT474 de referencia.
Tabla 3. Análisis de t-ERBB2 para muestras de AAF.
ID de la muestra
t-ERBB2 (RTK/célula) Pt-ERBB2 (pRTK/célula)
8C3-002-001
57,341 3,062
8C3-005-006
26,989 5,309
8C3-005-007
50,741 5,204
10 Como se muestra en la figura 8, en 174 muestras de cáncer de mama se observó la expresión y la activación de proteínas de una amplia variedad de rutas. La muestra con la señal más alta para cada marcador se indica con el color más oscuro. El CEER-HER2 mostró una alta correlación con el estado de IHQ-HER2. El estado de HER2 discordante entre el CEER y la IHQ se resolvió por IP-transferencia de bandas Western y mostró una correlación de
15 >98 %. El nivel de HER3-P mostró un grado de correlación alto con la activación de HER3-T y PI3K. El perfil de cMET también mostró una fuerte correlación con la activación de PI3K. El 27 % (12/45 de 2+ por IHQ) y el 21 % (11/53 de 0/1+ por IHQ) de los tejidos con cáncer de mama con niveles no sobreexpresados, pero sí significativos, de HER2 mostraron una fosforilación de más del 5 % del receptor HER2 expresado.
20 Conclusión
El estado de HER2 y sus formas variantes, así como otras RTK, proporciona información fundamental sobre los posibles mecanismos de los pacientes con cáncer de mama positivo para HER2 que no responden al trastuzumab debido a su resistencia primaria o adquirida. Se puede utilizar el análisis CEER descrito en el presente documento
25 para identificar en pacientes con cáncer de mama las proteínas de transducción de señales para seleccionar un tratamiento dirigido adecuado.
Ejemplo 5. Identificación integral de rutas para predecir la respuesta al tratamiento en el cáncer de mama triple negativo metastásico (CMTNM).
30 En el CMTN, se necesitan mejores tratamientos y marcadores pronósticos. En este estudio se usaron piezas de biopsia con aguja gruesa de pacientes con cáncer de mama triple negativo tratados con B (Avastin® [bevacizumab]), C (carboplatino) y nabP (Abraxane®) ("tratamiento triple") para (1) determinar el nivel de expresión y el grado de activación de diversas proteínas de rutas de señalización en CMTNM (p. ej., VEGFR2, c-KIT, HER1, etc.) y (2)
35 correlacionar estos patrones de expresión y activación del CMTNM con la respuesta.
Se recogieron piezas de biopsia con aguja gruesa de cáncer de mama triple negativo (n=17) obtenidas de pacientes antes de comenzar el tratamiento con B (Avastin® [bevacizumab]), C (carboplatino) y nabP (Abraxane®) y se congelaron adecuadamente a -80 °C. Se aplicó un procedimiento de inmunoensayo novedoso para estudiar los 40 niveles de expresión y el grado de activación de proteínas de señalización en de 1000ng a 5000ng de tejidos congelados. El inmunoensayo colaborativo reactivo potenciado por enzimas (CEER) (también conocido como el inmunoensayo colaborativo de proximidad (COPIA)) como se describe en el presente documento es una plataforma de inmunomicromatrices múltiple que utiliza la formación de un inmunocomplejo exclusivo que requiere la colocalización de dos anticuerpos detectores para canalizar acontecimientos para lograr la generación/amplificación 45 de la señal que da lugar a una sensibilidad analítica y una especificidad extremadamente altas. La figura 9 proporciona un ejemplo de identificación funcional de rutas por CEER en una muestra de cáncer de mama triple negativo obtenida por biopsia por punción con aguja gruesa en comparación con células de cáncer de mama T47D
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