ES2528799T3

ES2528799T3 - Métodos para el pronóstico de insuficiencia renal aguda

Info

Publication number: ES2528799T3
Application number: ES09828325.2T
Authority: ES
Inventors: Joseph Anderberg; Jeff Gray; Paul Mcpherson; Kevin Nakamura
Original assignee: Astute Medical Inc
Current assignee: Astute Medical Inc
Priority date: 2008-11-22
Filing date: 2009-11-21
Publication date: 2015-02-12
Anticipated expiration: 2029-11-21
Also published as: NZ604873A; MX2011005379A; EP2364370A4; EP2811036A2; JP5735922B2; CN104034901A; US20110229915A1; EP2811036A3; CN102272328A; CA2743253A1; JP2015064381A; CN102272328B; CN103439510A; KR20110097850A; CN103439510B; HK1199931A1; HK1161901A1; JP2012510058A; BRPI0921921A2; EP2364370A1

Abstract

Método para evaluar el estado renal en un sujeto, que comprende: realizar uno o más ensayos configurados para detectar un marcador de lesión de riñón en una muestra de fluido corporal obtenida del sujeto para proporcionar uno o más resultados de ensayo, siendo el marcador de lesión de riñón factor de crecimiento epidérmico y además opcionalmente uno o más de complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento; y correlacionar el/los resultado(s) de ensayo con uno o más de estratificación del riesgo, estadificación, pronóstico, clasificación y monitorización del estado renal del sujeto, en el que dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de insuficiencia renal aguda (IRA) futura padecida por el sujeto y opcionalmente uno o más cambios futuros en el estado renal del sujeto basándose en el/los resultado(s) de ensayo.

Description

Métodos para el pronóstico de insuficiencia renal aguda

Antecedentes de la invención

El riñón es responsable de la excreción de agua y solutos del cuerpo. Sus funciones incluyen el mantenimiento del

5 equilibrio ácido-base, la regulación de las concentraciones de electrolitos, el control del volumen de sangre y la regulación de la tensión arterial. Como tal, la pérdida de función del riñón por medio de lesión y/o enfermedad da como resultado morbimortalidad sustancial. Se proporciona una discusión detallada de lesiones renales Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17ª ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830. La enfermedad y/o lesión renal puede ser aguda o crónica. Se describen enfermedades del riñón agudas y crónicas tal como sigue (a partir de

10 Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47ª ed, McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815: “La insuficiencia renal aguda es el empeoramiento de la función renal a lo largo de horas o días, dando como resultado la retención de desechos nitrogenados (tales como nitrógeno de urea) y creatinina en la sangre. La retención de estas sustancias se denomina azotemia. La insuficiencia renal crónica (enfermedad del riñón crónica) resulta de una pérdida anómala de función renal a lo largo de meses a años”.

15 La insuficiencia renal aguda (IRA, también conocida como lesión de riñón aguda o LRA) es una reducción brusca (detectada normalmente en el plazo de aproximadamente 48 horas a 1 semana) en la filtración glomerular. Esta pérdida de capacidad de filtración da como resultado la retención de productos de desecho nitrogenados (urea y creatinina) y productos de desecho no nitrogenados que se excretan normalmente por el riñón, una reducción en la diuresis o ambos. Se notifica que IRA causa complicaciones en aproximadamente el 5% de las admisiones

20 hospitalarias, el 4-15% de las cirugías de derivación cardiopulmonar y hasta el 30% de las admisiones de cuidados intensivos. La IRA puede clasificarse como prerrenal, renal intrínseca o posrenal según su causa. La enfermedad renal intrínseca puede dividirse adicionalmente en anomalías glomerulares, tubulares, intersticiales y vasculares. Las causas principales de IRA se describen en la siguiente tabla, que está adaptada del Merck Manual, 17ª ed., capítulo

222:

Tipo: Factores de riesgo

Prerrenal

Agotamiento del volumen de ECF: Diuresis excesiva, hemorragia, pérdidas GI, pérdida de fluido intravascular al espacio extravascular (debido a ascitis, peritonitis, pancreatitis o quemaduras), pérdida de piel y membranas mucosas, estados de pérdida de sales y agua renales

Bajo gasto cardiaco: Cardiomiopatía, IM, taponamiento cardíaco, embolia pulmonar, hipertensión pulmonar, ventilación mecánica de presión positiva

Baja resistencia vascular sistémica: Choque septicémico, insuficiencia hepática, fármacos antihipertensores

Resistencia vascular renal aumentada: AINE, ciclosporinas, tacrolimús, hipercalcemia, anafilaxia, anestésicos, obstrucción de arteria renal, trombosis de vena renal, septicemia, síndrome hepatorrenal

Tono arteriolar eferente disminuido (que conduce a: Inhibidores de ACE o bloqueantes del receptor de

GFR disminuido de presión transcapilar glomerular: angiotensina II

reducida, especialmente en pacientes con estenosis

de arteria renal bilateral)

Renal Intrínseca

Lesión tubular aguda: Isquemia (estado prerrenal prolongado o grave): cirugía, hemorragia, obstrucción arterial o venosa; toxinas: AINE, ciclosporinas, tacrolimús, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos, estreptozotocina

Glomerulonefritis aguda: asociada a ANCA: glomerulonefritis crescéntica, poliarteritis nudosa, granulomatosis de Wegener; glomerulonefritis anti-GBM: síndrome de Goodpasture; complejo inmunitario: glomerulonefritis por lupus, glomerulonefritis posinfecciosa, glomerulonefritis crioglobulinémica

Nefritis tubulointersticial aguda: Reacción farmacológica (por ejemplo, -lactamas, AINE, sulfonamidas, ciprofloxacino, diuréticos de tiazida, furosemida, fenitoína, alopurinol, pielonefritis, necrosis papilar

Nefropatía vascular aguda: Vasculitis, hipertensión maligna, microangiopatías trombóticas, esclerodermia, ateroembolia

Enfermedades infiltrantes: Linfoma, sarcoidosis, leucemia

Posrenal

Precipitación tubular: Ácido úrico (lisis tumoral), sulfonamidas, triamtereno, aciclovir, indinavir, metotrexato, ingestión de etilenglicol, proteína de mieloma, mioglobina

Obstrucción uretral: Intrínseca: Cálculos, coágulos, tejido renal desprendido, bola de hongos, edema, tumor maligno, defectos congénitos; extrínseca: Tumor maligno, fibrosis retroperitoneal, traumatismo uretral durante cirugía o lesión de alto impacto

Obstrucción de vejiga: Mecánica: hiperplasia prostática benigna, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, estructuras uretrales, fimosis, parafimosis, válvulas uretrales, catéter urinario permanente obstruido; reurogénica: fármacos anticolinérgicos, lesión de neuronas motoras superiores o inferiores

En el caso de IRA isquémica, el transcurso de la enfermedad puede dividirse en cuatro fases. Durante una fase de inicio, que dura de horas a días, la perfusión reducida del riñón está evolucionando a lesión. La ultrafiltración glomerular se reduce, el flujo del filtrado se reduce debido a residuos dentro de los túbulos y se produce fuga posterior del filtrado a través del epitelio lesionado. La lesión renal puede estar mediada durante esta fase por

5 reperfusión del riñón. Al inicio le sigue una fase de extensión que se caracteriza por lesión isquémica continua e inflamación y puede implicar daños endoteliales y congestión vascular. Durante la fase de mantenimiento, que dura de 1 a 2 semanas, se produce lesión de células renales y la filtración glomerular y la diuresis llegan a un mínimo. Puede seguir una fase de recuperación en la cual el epitelio renal se repara y la TFG se recupera gradualmente. A pesar de esto, la tasa de supervivencia de sujetos con IRA puede ser tan baja como de aproximadamente el 60%.

10 La lesión de riñón aguda provocada por agentes de radiocontraste (también denominados medios de contraste) y otras nefrotoxinas tales como ciclosporina, antibióticos incluyendo aminoglucósidos y fármacos anticancerígenos tales como cisplatino se manifiesta a lo largo de un período de días a aproximadamente una semana. Se cree que la nefropatía inducida por contraste (NIC, que es LRA provocada por agentes de radiocontraste) está provocada por la vasoconstricción intrarrenal (conduciendo a lesión isquémica) y a partir de la generación de especies reactivas de

15 oxígeno que son directamente tóxicas para células epiteliales tubulares renales. NIC se presenta clásicamente como una elevación aguda (comienzo en el plazo de 24-48 horas) pero reversible (pico de 3-5 días, resolución en 1 semana) en nitrógeno de urea en sangre y creatinina en suero.

Un criterio notificado comúnmente para definir y detectar LRA es una elevación abrupta (comúnmente en el plazo de aproximadamente 2-7 días o en el plazo de un período de hospitalización) de creatinina en suero. Aunque el uso de 20 la elevación de creatinina en suero para definir y detectar LRA está bien establecido, la magnitud de la elevación de creatinina en suero y el tiempo a lo largo del que se mide para definir LRA varía considerablemente entre publicaciones. Tradicionalmente, aumentos relativamente grandes en creatinina en suero, tales como del 100%, el

200%, un aumento de al menos el 100% a un valor de más de 2 mg/dl y otras definiciones se usaron para definir LRA. Sin embargo, la tendencia reciente ha sido hacia utilizar aumentos de creatinina en suero más pequeños para definir LRA. La relación entre el aumento de creatinina en suero, LRA y los riesgos para la salud asociados se revisan en Praught y Shlipak, Curr Opin Nephrol Hypertens 14:265-270, 2005 y Chertow et al, J Am Soc Nephrol 16: 3365-3370, 2005. Tal como se describe en estas publicaciones, el empeoramiento agudo de la función renal (LRA) y el aumento del riesgo de muerte y otros desenlaces perjudiciales se sabe ahora que están asociados con aumentos muy pequeños de creatinina en suero. Estos aumentos pueden determinarse como un valor relativo (por ciento) o un nominal. Se ha notificado que aumentos relativos de creatinina en suero de tan sólo el 20% del valor de antes de la lesión indican el empeoramiento de manera aguda de la función renal (LRA) y el aumento del riesgo de salud, pero el valor más comúnmente notificado para definir LRA y aumento del riesgo de salud es un aumento relativo de al menos el 25%. Se ha notificado que aumentos nominales de tan sólo 0,3 mg/dl, 0,2 mg/dl o incluso 0,1 mg/dl indican empeoramiento de la función renal y aumento del riesgo de muerte. Se han usado diversos períodos de tiempo para que la creatinina en suero es eleve hasta estos valores de umbral para definir LRA, por ejemplo, oscilando entre 2 días, 3 días, 7 días o un período variable definido como el tiempo en el que el paciente está en el hospital o unidad de cuidado intensivo. Estos estudios indican que no hay una elevación de creatinina en suero umbral particular (o período de tiempo para la elevación) para el empeoramiento de la función renal o LRA, sino más bien un aumento continuo en el riesgo con el aumento de la magnitud de la elevación de creatinina en suero.

Un estudio (Lassnigg et al., J Am Soc Nephrol 15:1597-1605, 2004) investigó tanto los aumentos como las disminuciones de creatinina en suero. Los pacientes con una caída suave de creatinina en suero de -0,1 a -0,3 mg/dl tras la cirugía cardiaca tuvieron la tasa de mortalidad más baja. Los pacientes con una caída más grande de creatinina en suero (mayor o igual a -,4 mg/dl) o cualquier aumento de creatinina en suero tuvieron una tasa de mortalidad más grande. Estos hallazgos provocaron que los autores concluyeran que incluso cambios muy sutiles en la función renal (tales como los detectados por cambios de creatinina pequeños en el plazo de 48 horas de la cirugía) afectan gravemente a los resultados del paciente. En un esfuerzo por alcanzar un consenso sobre un sistema de clasificación unificado para usar creatinina en suero para definir LRA en pruebas clínicas y en la práctica clínica, Bellomo et al., Crit Care. 8(4):R204-12, 2004 proponen las siguientes clasificaciones para estratificar los pacientes con LRA:

“Riesgo”: creatinina en suero aumentada 1,5 veces con respecto a la producción de orina de OR inicial de <0,5 ml/kg de peso corporal/hora durante 6 horas;

“Lesión”: creatinina en suero aumentada 2,0 veces con respecto a la producción de orina de OR inicial <0,5 ml/kg/hora durante 12 horas;

“Insuficiencia”: creatinina en suero aumentada 3,0 veces con respecto a la creatinina de OR inicial >355 mol/litro (con una elevación de >44) o diuresis menor de 0,3 ml/kg/hora durante 24 horas o anuria durante al menos 12 horas;

E incluyeron dos desenlaces clínicos:

“Pérdida”: necesidad persistente de terapia de sustitución renal durante más de cuatro semanas.

“ERFT”: enfermedad renal en fase terminal -necesidad de diálisis durante más de 3 meses.

Estos criterios se denominan criterios de RIFLE, que proporcionan una herramienta clínica útil para clasificar el estado renal. Tal como se comenta en Kellum, Crit. Care Med. 36: S141-45, 2008 y Ricci et al., Kidney Int. 73, 538546, 2008, cada una incorporada por el presente documento como referencia en su totalidad, los criterios de RIFLE proporcionan una definición uniforme de LRA que ha sido validada en numerosos estudios.

Más recientemente, Mehta et al., Crit. Care 11:R31 (doi:10.1186.cc5713), 2007 proponen las siguientes clasificaciones similares para estratificar pacientes con LRA, que han sido modificados a partir de RIFLE:

“Etapa I”: aumento de creatinina en suero de más de o igual a 0,3 mg/dl (≥ 26.4 mol/l) o aumento hasta más de o igual al 150% (1,5 veces) con respecto a la diuresis de OR inicial inferior a 0,5 ml/kg por hora durante más de 6 horas;

“Etapa II”: aumento de creatinina en suero hasta más del 200% (> 2 veces) con respecto a la diuresis de OR inicial inferior a 0,5 ml/kg por hora durante más de 12 horas;

“Etapa III”: aumento de creatinina en suero hasta más del 300% (> 3 veces) con respecto a la creatinina en suero de OR inicial ≥ 354 mol/l acompañado por un aumento agudo de al menos 44 mol/l de la diuresis de OR inferior a 0,3 ml/kg por hora durante 24 horas o anuaria durante 12 horas.

El Panel de Trabajo de Consenso de NIC (McCollough et al., Rev Cardiovasc Med. 2006; 7(4):177-197 usa una elevación de creatinina en suero del 25% para definir la nefropatía inducida por contraste (que es un tipo de LRA). Aunque varios grupos proponen criterios ligeramente diferentes para usar creatinina en suero para detectar LRA, el consenso es que cambios pequeños en la creatinina en suero, tales como 0,3 mg/dl o el 25%, son suficientes para detectar LRA (empeoramiento de la función renal) y que la magnitud del cambio de creatinina en suero es un

indicador de la gravedad de la LRA y el riesgo de mortalidad.

Aunque la medición en serie de creatinina en suero a lo largo de un período de días es un método aceptado de detección y diagnóstico de LRA y se considera una de las herramientas más importantes para evaluar pacientes con LRA, la creatinina en suero se considera en general que tiene varias limitaciones en el diagnóstico, la evaluación y la monitorización de pacientes con LRA. El período de tiempo para que la creatinina en suero se eleve hasta valores (por ejemplo, una elevación de 0,3 mg/dl o el 25%) considerados de diagnóstico para LRA puede ser de 48 horas o mayor dependiendo de la definición usada. Puesto que la lesión celular en LRA puede producirse a lo largo de un período de horas, las elevaciones de creatinina en suero detectadas a las 48 horas o un tiempo más prolongado pueden ser un indicador tardío de lesión y depender de la creatinina en suero puede retrasar por tanto el diagnóstico de LRA. Además, la creatinina en suero no es buen indicador del estado exacto del riñón y las necesidades de tratamiento durante las fases más agudas de LRA cuando la función del riñón está cambiando rápidamente. Algunos pacientes con LRA se recuperarán completamente, algunos necesitarán diálisis (o bien a corto plazo o bien a largo plazo) y algunos tendrán otros desenlaces perjudiciales incluyendo muerte, acontecimientos cardíacos adversos mayores y enfermedad del riñón crónica. Debido a que la creatinina en suero es un marcador de la tasa de filtración, no diferencia entre los casos de LRA (prerrenal, renal intrínseca, obstrucción posrenal, ateroembólica, etc.) o la categoría o ubicación de la lesión en enfermedad renal intrínseca (por ejemplo, de origen tubular, glomerular o intersticial). La diuresis está limitada de manera similar. Saber estas cosas puede ser de vital importancia en el manejo y tratamiento de pacientes con LRA.

Estas limitaciones subrayan la necesidad de mejores métodos para detectar y evaluar LRA, particularmente en las fases temprana y subclínica, pero también en fases posteriores cuando puede producirse recuperación y reparación del riñón. Además, hay una necesidad de identificar mejor pacientes que corren el riesgo de tener una LRA.

El documento US2008/0090304 da a conocer marcadores predictivos para IRA pero no se menciona EGF como marcador predictivo.

Abd El Latif M M S (Journal of Medical Sciences, vol. 7, n.º 7, págs. 1171-1176) da a conocer EGF como marcador en pacientes que ya han desarrollado insuficiencia renal aguda.

Sumario de la invención

La invención en su alcance más amplio se define por las reivindicaciones independientes 1 y 7:

1. Un método para evaluar el estado renal en un sujeto, que comprende:

realizar uno o más ensayos configurados para detectar un marcador de lesión de riñón en una muestra de fluido corporal obtenida del sujeto para proporcionar uno o más resultados de ensayo, siendo el marcador de lesión de riñón factor de crecimiento epidérmico y además opcionalmente complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento;

y

correlacionar el/los resultado(s) de ensayo con uno o más de estratificación del riesgo, estadificación, pronóstico, clasificación y monitorización del estado renal del sujeto, en el que dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de insuficiencia renal aguda (IRA) futura padecida por el sujeto y opcionalmente uno o más cambios futuros en el estado renal del sujeto basándose en el/los resultado(s) de ensayo.

7. Uso de marcadores de lesión de riñón para el pronóstico de insuficiencia renal aguda futura in vitro, en el que los marcadores de lesión renal son factor de crecimiento epidérmico, y opcionalmente complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento.

Estos marcadores de lesión de riñón que comprenden al menos EGF pueden usarse individualmente o en paneles que comprenden una pluralidad de marcadores de lesión de riñón, para la estratificación del riesgo (es decir, para identificar sujetos en riesgo de una lesión futura de la función renal, para progresión futura a función renal reducida, para progresión futura a IRA, para mejora futura en la función renal, etc.); para monitorizar el deterioro o la mejora de la función renal; y para predecir un desenlace médico futuro, tal como una función renal mejorada o empeorada, un riesgo de mortalidad disminuido o aumentado, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto requiera terapia de sustitución renal (es decir, hemodiálisis, diálisis peritoneal, hemofiltración y/o trasplante renal, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto se recupere de una lesión en la función renal, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto se recuperare de IRA, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto progrese a enfermedad renal en fase terminal, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto progrese a insuficiencia renal crónica, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto sufra rechazo de un riñón trasplantado, etc.

Los métodos para evaluar el estado renal descritos en la presente son métodos para la estratificación del riesgo del sujeto; es decir, asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal en el sujeto. En estas

realizaciones, el/los resultado(s) de ensayo se correlaciona(n) con uno o más de tales cambios futuros. Las siguientes son realizaciones de estatificación del riesgo preferidas.

En realizaciones de estratificación del riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de un sujeto de una lesión futura de la función renal y el/los resultado(s) de ensayo se correlaciona(n) con la probabilidad de tal lesión futura en la función renal. Por ejemplo, cada una de la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñón “que va a positivo” se asigna una probabilidad aumentada de padecer una lesión futura en la función renal al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a negativo”, se asigna una probabilidad aumentada de padecer una lesión futura en la función renal al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En otras realizaciones de estratificación del riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de un sujeto de función renal reducida futura, y el/los resultado(s) de análisis se correlacionan con la probabilidad de tal función renal reducida. Por ejemplo, cada una de las concentraciones medidas puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a positivo”, se asigna una probabilidad aumentada de padecer una función renal reducida futura al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a negativo”, se asigna una probabilidad aumentada de función renal reducida futura al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En todavía otras realizaciones de estratificación del riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar la probabilidad de un sujeto de una mejora futura en la función renal y el/los resultado(s) de análisis se correlacionan con la probabilidad de tal mejora futura en la función renal. Por ejemplo, cada una de la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a positivo”, se asigna una probabilidad aumentada de una mejora futura en la función renal al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a negativo”, se asigna una probabilidad aumentada de una mejora futura en función renal al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral.

En aún otras realizaciones de estratificación del riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de un sujeto de progresión a IRA, y el/los resultado(s) se correlaciona(n) con la probabilidad de tal progresión a IRA. Por ejemplo, cada una de la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a positivo”, se asigna una probabilidad aumentada de progresión a IRA al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a negativo”, se asigna una probabilidad aumentada de avance a IRA al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

Además, en otras modalidades de estratificación del riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de desenlace del sujeto y el/los resultado(s) de análisis se correlaciona(n) con la probabilidad de la aparición de un desenlace clínico relacionado con una lesión renal padecida por el sujeto. Por ejemplo, cada una de la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a positivo”, una probabilidad aumentada de uno o más de: lesión de riñón aguda, progresión a una fase de empeoramiento de LRA, mortalidad, un requerimiento de terapia de sustitución renal, un requerimiento de retirada de toxinas renales, enfermedad renal en fase terminal, insuficiencia cardiaca, accidente cerebrovascular, infarto de miocardio, progresión a enfermedad del riñón crónica, etc., se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñón que “va a negativo”, una probabilidad aumentada de uno

o más de: lesión de riñón aguda, progresión a una fase de empeoramiento de LRA, mortalidad, un requerimiento de terapia de sustitución renal, un requerimiento de retirada de toxinas renales, enfermedad renal en fase terminal, insuficiencia cardiaca, accidente cerebrovascular, infarto de miocardio, progresión a enfermedad del riñón crónica, etc., se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En tales realizaciones de estratificación del riesgo, preferiblemente la probabilidad o el riesgo asignado es que un acontecimiento de interés es más o menos probable que se produzca en el plazo de 180 días del momento en el que la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto. En realizaciones particularmente preferidas, la probabilidad o el riesgo asignado se refiere a un acontecimiento de interés que se produce en el plazo de un período de tiempo más corto tal como 18 meses, 120 días, 90 días, 60 días, 45 días, 30 días, 21 días, 14 días, 7 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas o menos. Un riesgo a las 0 horas del momento en el que la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto es equivalente al diagnóstico de un estado actual.

En realizaciones de estratificación del riesgo preferidas, el sujeto se selecciona para la estratificación del riesgo basándose en la preexistencia en el sujeto de uno o más factores de riesgo conocidos para IRA prerrenal, renal intrínseca o posrenal. Por ejemplo, un sujeto que se somete a o se ha sometido a cirugía vascular mayor, derivación de arterias coronarias u otra cirugía cardíaca; un sujeto que tiene insuficiencia cardiaca congestiva preexistente, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo del intervalo normal, cirrosis, creatinina en suero por encima del intervalo normal o septicemia; o un sujeto expuesto a AINE, ciclosporinas, tacrolimús, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos o estreptozotocina son todos sujetos preferidos para monitorizar riesgos según los métodos descritos en la presente. Esta lista no pretende ser limitativa. “Preexistencia” en este contexto significa que el factor de riesgo existe en el momento en el que la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto.

En todavía otras realizaciones, los métodos para evaluar el estado renal descritos en la presente son métodos para monitorizar una lesión renal en el sujeto; es decir, determinar si una función renal está o no mejorando o empeorando en un sujeto que ha padecido una lesión en la función renal, función renal reducida o IRA. En estas realizaciones, el/los resultado(s) de ensayo, por ejemplo una concentración medida de uno o más marcadores seleccionados del grupo que consiste de factor de crecimiento epidérmico, complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina-1 y proteína alfa regulada por crecimiento se correlaciona(n) con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal. Las siguientes son realizaciones de monitorización preferidas.

En realizaciones de monitorización preferidas, estos métodos comprenden monitorizar el estado renal en un sujeto que padece una lesión de la función renal, y el/los resultado(s) de ensayo se correlaciona(n) con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto.

En otras realizaciones de monitorización preferidas, estos métodos comprenden monitorizar el estado renal en un sujeto que padece función renal reducida, y el/los resultado(s) de ensayo se correlacionan con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto.

En aún otras realizaciones de monitorización preferidas, estos métodos comprenden la monitorización del estado renal en un sujeto que padece insuficiencia renal aguda, y el/los resultado(s) de análisis se correlaciona(n) con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto.

En otras realizaciones de monitorización preferidas adicionales, estos métodos comprenden la monitorización del estado renal en un sujeto en riesgo de una lesión de la función renal debido a la preexistencia de uno o más factores de riesgo conocidos para IRA prerrenal, renal intrínseca o posrenal, y el/los resultado(s) de análisis se correlaciona(n) con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la(s) concentración/concentraciones medida(s) puede(n) compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; alternativamente, cuando la concentración medida está por encima del umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto.

Se dan a conocer también en el presente documento realizaciones en las que los métodos para evaluar el estado renal descritos en el presente documento son métodos para clasificar una lesión renal en el sujeto; es decir,

determinar si una lesión renal en un sujeto es prerrenal, renal intrínseca o posrenal; y/o subdividir adicionalmente estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis tubulointersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrativa; y/o asignar una probabilidad de que un sujeto progrese a una fase de RIFLE particular. En estas realizaciones, el/los resultado(s) de ensayo, por ejemplo, una concentración medida de uno o más marcadores seleccionados del grupo que consiste en factor de crecimiento epidérmico, complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina-1 y proteína alfa regulada por crecimiento se correlaciona(n) con una clase y/o subclase particular.

Se dan a conocer además realizaciones de clasificación, en las que estos métodos comprenden determinar si una lesión renal en un sujeto es prerrenal, renal intrínseca o posrenal; y/o subdividir adicionalmente estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis tubulointersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrativa; y/o asignar una probabilidad de que un sujeto progrese a una etapa de RIFLE particular, y el/los resultado(s) de análisis se correlaciona(n) con la clasificación de lesión para el sujeto. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral, y cuando la concentración medida está por encima del umbral, se asigna una clasificación particular; alternativamente, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una clasificación diferente al sujeto.

Pueden usarse una variedad de métodos por el experto en la técnica para llegar a un valor umbral deseado para su uso en estos métodos. Por ejemplo, el valor umbral puede determinarse a partir de una población de sujetos normales seleccionando una concentración que representa el 75º, 85º, 90º, 95º o 99º percentil de un marcador de lesión de riñón medido en tales sujetos normales. Alternativamente, el valor umbral puede determinarse a partir de una población “enferma” de sujetos, por ejemplo, aquellos que padecen una lesión o que tienen una predisposición a una lesión (por ejemplo, progresión a IRA o algún otro desenlace clínico tal como muerte, diálisis, trasplante renal, etc.), seleccionando una concentración que representa el 75º, 85º, 90º, 95º o 99º percentil de un marcador de lesión de riñón medido en tales sujetos. En otra alternativa, el valor umbral puede determinarse a partir de una medición previa de un marcador de lesión de riñón en el mismo sujeto; es decir, un cambio temporal en el nivel de un marcador de lesión de riñón en el sujeto puede usarse para asignar el riesgo al sujeto.

La discusión anterior no pretende implicar, sin embargo, que los marcadores de lesión de riñón de la presente invención deban compararse con umbrales individuales correspondientes. Métodos para combinar resultados de ensayo pueden comprender el uso de regresión logística multivariada, modelado lineal logarítmico, análisis de red neural, análisis n de m, análisis de árbol de decisión, calcular razones de marcadores, etc. Esta lista no pretende ser limitativa. En estos métodos, un resultado compuesto que se determina combinando marcadores individuales puede tratarse como si fuera por sí mismo un marcador; es decir, puede determinarse un umbral para el resultado compuesto tal como se describe en el presente documento para marcadores individuales, y el resultado compuesto para un paciente individual compararse con este umbral.

La capacidad de una prueba particular para distinguir dos poblaciones puede establecerse utilizando análisis de ROC. Por ejemplo, pueden usarse curvas de ROC establecidas a partir de una “primera” subpoblación que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, y una “segunda” subpoblación que no está predispuesta para calcular una curva de ROC, y el área bajo la curva proporciona una medida de la calidad de la prueba. Preferiblemente, las pruebas descritas en el presente documento proporcionan un área de curva de ROC mayor de 0,5, preferiblemente de al menos 0,6, más preferiblemente 0,7, todavía más preferiblemente al menos 0,8, aún más preferiblemente al menos 0,9 y lo más preferiblemente al menos 0,95.

En determinados aspectos, la concentración medida de uno o más marcadores de lesión de riñón, o un compuesto de tales marcadores, puede tratarse como variables continuas. Por ejemplo, cualquier concentración particular puede convertirse en una probabilidad correspondiente de reducción futura en la función renal para el sujeto, la aparición de una lesión, una clasificación, etc. En aún otra alternativa, un umbral que puede proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad en la separación de una población de sujetos en “cubos” tal como una “primera” subpoblación (por ejemplo, que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la presencia de una lesión, una clasificación, etc.) y una “segunda” subpoblación que no está así predispuesta. El valor umbral se selecciona para separar esta primera y segunda subpoblación por una o más de las siguientes medidas de exactitud de la prueba:

una razón de probabilidades mayor de 1, preferiblemente de al menos aproximadamente 2 o más o aproximadamente 0,5 o menos, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 o más o aproximadamente 0,33

o menos, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 4 o más o aproximadamente 0,25 o menos, incluso más preferiblemente al menos aproximadamente 5 o más o aproximadamente 0,2 o menos, y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 10 o más o aproximadamente 0,1 o menos;

una especificidad mayor de 0,5, preferiblemente al menos aproximadamente 0,6, más preferiblemente al menos aproximadamente 0,7, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 0,8, incluso más preferiblemente al menos aproximadamente 0,9 y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 0,95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0,2, preferiblemente mayor de aproximadamente 0,3, más preferiblemente mayor de 0,4, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 0,5, incluso más preferiblemente aproximadamente 0,6,

aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,7, todavía más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,8, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,9 y lo más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,95;

una sensibilidad mayor de 0,5, preferiblemente al menos aproximadamente 0,6, más preferiblemente al menos aproximadamente 0,7, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 0,8, incluso más preferiblemente al menos aproximadamente 0,9 y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 0,95, con una especificidad correspondiente mayor de 0,2, preferiblemente mayor de aproximadamente 0,3, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,4, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 0,5, incluso más preferiblemente 0,6 aproximadamente, aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,7, todavía más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,8, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,9 y lo más preferiblemente mayor de aproximadamente 0,95;

al menos aproximadamente el 75% de sensibilidad, combinada con al menos aproximadamente el 75% de especificidad;

una razón de probabilidad positiva (calculada como sensibilidad/(1-especificidad)) de más de 1, al menos aproximadamente 2, más preferiblemente al menos aproximadamente 3, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 5 y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 10; o

una razón de probabilidad negativa (calculada como (1-sensibilidad)/especificidad) de menos de 1, menor o igual a aproximadamente 0,5, más preferiblemente menor o igual a aproximadamente 0,3 y los más preferiblemente menor

o igual a aproximadamente 0,1.

El término “aproximadamente” en el contexto de cualquiera de las mediciones anteriores se refiere a +/-5% de una medición dada.

También pueden usarse umbrales múltiples para determinar el estado renal en un sujeto. Por ejemplo, pueden combinarse una “primera” subpoblación que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la aparición de una lesión, una clasificación, etc., y una “segunda” subpoblación que no está predispuesta en un único grupo. Este grupo se subdivide entonces en tres o más partes iguales (conocidos como tertiles, cuartiles, quintiles, etc., dependiendo del número de subdivisiones). Se asigna una razón de probabilidades a sujetos basándose en qué subdivisión se encuentran. Si se considera un tercil, el tercil más bajo o más alto puede usarse como referencia para la comparación de las otras subdivisiones. A esta subdivisión de referencia se le asigna una razón de probabilidades de 1. Al segundo tercil se le asigna una razón de probabilidades que es relativa al primer tercil. Es decir, alguien que está en el segundo tercil puede tener una probabilidad de 3 veces más de padecer uno o más cambios futuros en el estado renal en comparación con alguien en el primer tercil. También se le asigna al tercer tercil una razón de probabilidades que es relativa a ese primer tercil.

En determinadas realizaciones, el método de análisis es un inmunoensayo. Los anticuerpos para uso en tales análisis se unirán específicamente a un marcador de lesión de riñón de longitud completa de interés, y también pueden unirse a uno o más polipéptidos que están “relacionados” con el mismo, tal como ese término se define a continuación en el presente documento. Se conocen numerosos formatos de inmunoensayo por los expertos en la técnica. Se seleccionan muestras de fluido corporal preferidas del grupo que consiste en orina, sangre, suero, saliva, lágrimas y plasma.

Las etapas de método anteriores no debe interpretarse que significan que el/los resultado(s) de ensayo del marcador de lesión de riñón se usa(n) aislado(s) en los métodos descritos en el presente documento. Más bien, pueden incluirse variables adicionales u otros indicios clínicos en los métodos descritos en el presente documento. Por ejemplo, un método de una estratificación del riesgo, diagnóstico, clasificación, monitorización, etc. puede combinar el/los resultado(s) de ensayo con una o más variables medidas para el sujeto seleccionado del grupo que consiste en información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza), historia médica (por ejemplo, historia familiar, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, insuficiencia cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria, proteinuria, insuficiencia renal o septicemia, tipo de exposición a toxinas tales como AINE, ciclosporinas, tacrolimús, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos o estreptozotocina), variables clínicas (por ejemplo, tensión arterial, temperatura, tasa de respiración), puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, puntuación de riesgo TIMI por UA/NSTEMI, puntuación de riesgo de Framingham), una tasa de filtración glomerular, una tasa de filtración glomerular estimada, una tasa de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una razón de creatinina en orina con respecto a creatinina en suero o plasma, un peso específico de orina, una osmolalidad de orina, una razón de nitrógeno de urea de orina con respecto a nitrógeno de urea en plasma, una razón de BUN en plasma con respecto a creatinina, un índice de insuficiencia renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina / creatinina en plasma), una concentración de gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en suero o plasma, una concentración de NGAL en orina, una concentración de cistatina C en suero o plasma, una concentración de troponina cardiaca en suero o plasma, una concentración de BNP en suero o plasma, una concentración de NTproBNP en suero o plasma, y una concentración de proBNP en suero o plasma. Otras medidas de la función renal que pueden combinarse con uno o

más resultado(s) de ensayo de marcador de lesión de riñón se describen a continuación en el presente documento y en Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17ª ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47ª ed, McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815.

Cuando se mide más de un marcador, los marcadores individuales pueden medirse en muestras obtenidas al mismo tiempo, o pueden ser determinados a partir de muestras obtenidas a tiempos diferentes (por ejemplo, una más pronto o más tarde). Los marcadores individuales también pueden medirse en las mismas o diferentes muestras de fluido corporal. Por ejemplo, un marcador de lesión de riñón puede medirse en una muestra de suero o plasma y otro marcador de lesión de riñón puede medirse en una muestra de orina. Además, la asignación de una probabilidad puede combinar un resultado de ensayo de marcador de lesión de riñón individual con cambios temporales en una o más variables adicionales.

En varios aspectos relacionados, la presente memoria descriptiva también se refiere a dispositivos y kits para efectuar los métodos descritos en el presente documento. Los kits apropiados comprenden reactivos suficientes para efectuar un análisis para al menos uno de los marcadores de lesión de riñón descritos, junto con instrucciones para efectuar las comparaciones de umbral descritas.

En determinadas realizaciones, se proporcionan reactivos para efectuar tales ensayos en un dispositivo de análisis, y tales dispositivos de análisis pueden incluirse en tal kit. Reactivos preferidos pueden comprender uno o más anticuerpos en fase sólida, comprendiendo el anticuerpo en fase sólida anticuerpo que detecta el/las diana(s) de biomarcador propuesta(s) unida(s) a un soporte sólido. En el caso de inmunoensayo de tipo sándwich, tales reactivos pueden también incluir uno o más anticuerpos marcados de manera detectable, comprendiendo el anticuerpo marcado de manera detectable anticuerpo que detecta el/las diana(s) de biomarcador propuesta(s) unida(s) a un marcador detectable. Elementos opcionales adicionales que pueden proporcionarse como parte de un dispositivo de análisis se describen a continuación en el presente documento.

Los marcadores detectables pueden incluir moléculas que son por sí mismas detectables (por ejemplo, restos fluorescentes, marcadores electroquímicos, marcadores de ecl (luminiscencia electroquímica), quelatos de metal, partículas de metal coloidales, etc.) así como moléculas que pueden detectarse indirectamente mediante la producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como peroxidasa del rábano, fosfatasa alcalina, etc.) o por medio del uso de una molécula de unión específica que puede ser detectarse por sí misma (por ejemplo, un anticuerpo marcado que se une al segundo anticuerpo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2,4-dintrobenceno, fenilarseniato, ADNmc, ADNbc, etc.).

La generación de una señal a partir del elemento de revelado de señal puede efectuarse utilizando diversos métodos ópticos, acústicos y electroquímicos bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de modos de detección incluyen fluorescencia, detección radioquímica, reflectancia, absorbancia, amperometría, conductancia, impedancia, interferometría, elipsometría, etc. En determinados de estos métodos, el anticuerpo de fase sólida se acopla a un transductor (por ejemplo, rejilla de difracción, detector electroquímico, etc.) para la generación de una señal, mientras que en otros, se genera una señal mediante un transductor que está separado espacialmente del anticuerpo en fase sólida (por ejemplo, un fluorómetro que emplea una fuente de luz de excitación y un detector óptico). Esta lista no pretende ser limitativa. También pueden emplearse biodetectores a base de anticuerpos para determinar la presencia o cantidad de analitos que eliminan opcionalmente la necesidad de una molécula marcada.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 6 para la comparación de niveles de marcador en muestra de orina recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase R, I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 2 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 7 para la comparación de niveles de marcador en muestras de orina recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0 o R de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 3 proporciona tablas de datos determinado de acuerdo con el ejemplo 8 para la comparación de niveles de marcador en muestras de orina recogidas para la cohorte 1 (pacientes que llegaron, pero no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 4 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 9 para la comparación de niveles de marcador en muestras de orina recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase F en la

cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 5 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 6 para la comparación de niveles de marcador en muestras de plasma recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de plasma recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase R, I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 6 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 7 para la comparación de niveles de marcador en muestras de plasma recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0

o R de RIFLE) y en muestras de plasma recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 7 proporciona tablas de datos determinados de acuerdo con el ejemplo 8 para la comparación de niveles de marcador en muestras de plasma recogidas para la cohorte 1 (pacientes que llegaron, pero no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y en muestras de plasma recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase I o F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.

La figura 8 proporciona tablas de datos determinadas de acuerdo con el ejemplo 9 para la comparación de niveles de marcador en muestras de plasma recogidas para la cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de plasma recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase F en la cohorte 2. Las tablas proporcionan estadística descriptiva, análisis de AUC, y sensibilidad, especificidad y cálculos de razones de probabilidades a varios niveles de umbral (corte) para los diversos marcadores.+++

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a métodos para evaluar el estado renal en un sujeto, que comprenden:

realizar uno o más ensayos configurados para detectar un marcador de lesión renal en una muestra de fluido corporal obtenida del sujeto para proporcionar uno o más resultados de ensayo, siendo el marcador de lesión renal factor de crecimiento epidérmico y opcionalmente además complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento;

y

correlacionar el/los resultado(s) del ensayo con uno o más de estratificación del riesgo, estadificación, pronóstico, clasificación y monitorización del estado renal del sujeto, en el que dicha etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de insuficiencia renal aguda (IRA) futura padecida por el sujeto y opcionalmente uno o más cambios futuros en el estado renal al sujeto basándose en el/los resultado(s) de ensayo y el uso de marcadores de lesión de riñón para el pronóstico de insuficiencia renal aguda futura in vitro, en el que el marcador de lesión renal es factor de crecimiento epidérmico y opcionalmente además complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento.

En la invención reivindicada se usa al menos factor de crecimiento epidérmico (EGF) como marcador.

Por fines de este documento, se aplican las siguientes definiciones:

Tal como se usa en el presente documento, una “lesión de la función renal” es una reducción medible brusca (en el plazo de 14 días, preferiblemente en el plazo de 7 días, más preferiblemente en el plazo de 72 horas, y todavía más preferiblemente en el plazo de 48 horas) en una medida de la función renal. Tal lesión puede identificarse, por ejemplo, por una disminución en tasa de filtración glomerular o TFG estimada, una reducción en la excreción de orina, un aumento de creatinina en suero, un aumento de cistatina C en suero, un requerimiento de terapia de reemplazo renal, etc. “Mejora de la función renal” es un aumento medible abrupto (en el plazo de 14 días, preferiblemente en el plazo de 7 días, más preferiblemente en el plazo de 72 horas, y todavía más preferiblemente en el plazo de 48 horas) en una medida de la función renal. A continuación en el presente documento se describen métodos preferidos para medir y/o estimar la TFG.

Tal como se usa en el presente documento, “función renal reducida” es una reducción abrupta (en el plazo de 14 días, preferiblemente en el plazo de 7 días, más preferiblemente en el plazo de 72 horas, y todavía más preferiblemente en el plazo de 48 horas) de la función del riñón identificada por un aumento absoluto de creatinina en suero mayor o igual a 0,1 mg/dl (≥ 8,8 mol/l), un aumento en porcentaje de creatinina en suero mayor o igual al

20% (1,2 veces del valor de referencia), o una reducción de la diuresis (oliguria documentada de menos de 0,5 ml/kg por hora).

Tal como se usa en el presente documento, “insuficiencia renal aguda” o “IRA” es una reducción abrupta (en el plazo de 14 días, preferiblemente en el plazo de 7 días, más preferiblemente en el plazo de 72 horas, y todavía más

5 preferiblemente en el plazo de 48 horas) en la función del riñón identificada por un aumento absoluto de creatinina en suero mayor o igual a 0,3 mg/dl (≥ 26,4 mol/l), un aumento en porcentaje de creatinina en suero mayor o igual al 50% (1,5 veces del valor de referencia), o una reducción de la diuresis (oliguria documentada de menos de 0,5 ml/kg por hora durante al menos 6 horas). Este término es sinónimo a “lesión renal aguda” o “LRA”.

A este respecto, el experto entenderá que las señales obtenidas de un inmunoensayo son un resultado directo de

10 complejos formados entre uno o más anticuerpos y la biomolécula diana (es decir, el analito) y polipéptidos que contienen el/los epítopo(s) necesario(s) al cual/a los cuales se une(n) los anticuerpos. Mientras que tales ensayos pueden detectar el biomarcador de longitud completa y el resultado del ensayo puede ser expresado como concentración de un biomarcador de interés, la señal del ensayo es realmente un resultado de todos de tales polipéptidos “inmunorreactivos” presentes en la muestra. La expresión de biomarcadores también puede

15 determinarse por medios diferentes de los inmunoensayos, incluyendo mediciones de proteína (tales como transferencias de punto, inmunotransferencias de tipo Western, métodos cromatográficos, espectrometría de masas, etc.) y mediciones de ácido nucleico (cuantificación de ARNm). Esta lista no pretende ser limitante.

Tal como se usa en el presente documento, el término “factor de crecimiento epidérmico” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor del factor de crecimiento epidérmico

20 (Swiss-Prot P01133 (SEQ ID NO: 1)).

Lo más preferiblemente, el ensayo del factor de crecimiento epidérmico detecta una o más formas solubles del factor de crecimiento epidérmico. El factor de crecimiento epidérmico es una proteína de membrana tipo I de un solo paso que tiene un dominio extracelular grande, algunos o todos de los cuales están presentes en formas solubles del

5 factor de crecimiento epidérmico generadas o bien por medio de un evento de corte y empalme alternativo que deleciona todo o una parte del dominio transmembrana, o mediante proteólisis de la forma unida a membrana. En el caso de un inmunoensayo, pueden usarse uno o más anticuerpos que se unen a epítopos dentro de este dominio extracelular para detectar esta(s) forma(s) soluble(s). Se han identificado los siguientes dominios en el factor de crecimiento epidérmico:

Residuos Longitud ID de dominio

1-22 22 Secuencia señal

23-1207 1185 Pro-factor de crecimiento epidérmico

971-1023 53 Factor de crecimiento epidérmico

23-1032 1010 Extracelular

1033-1053 21 Transmembrana

1054-1207 154 Citoplasmático

10 Tal como se usa en el presente documento, el término “complemento C3” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de complemento C3 (Swiss-Prot P01024 (SEQ ID NO: 2)).

Los siguientes dominios se han identificado en el complemento C3: Residuos Longitud ID de dominio 1-22 22 Péptido señal 23-1663 1641 Complemento C3 23-667 645 Cadena beta de complemento C3 672-1663 992 Cadena alfa de complemento C3 672-748 77 Anafilatoxina de complemento C3 749-1663 915 Cadena alfa’ de complemento C3b 749-954 206 Fragmento 1 de la cadena alfa’ del complemento C3c 955-1303 349 Fragmento de complemento C3dg 955-1001 47 Fragmento de complemento C3g 1002-1303 302 Fragmento de complemento C3d 1304-1320 17 Fragmento de complemento C3f 1321-1663 343 Fragmento 2 de la cadena alfa’ del complemento C3c

Tal como se usa en el presente documento, el término “interleucina-4” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de interleucina-4 (Swiss-Prot P05112 (SEQ ID NO: 3)).

Los siguientes dominios se han identificado en interleucina-4:

Residuos Longitud ID de dominio 1-24 24 Péptido señal 25-153 129 Interleucina-4

Tal como se usa en el presente documento, el término “interleucina-1 alfa” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de interleucina-1 alfa (Swiss-Prot P01583 (SEQ ID NO: 4)).

Los siguientes dominios se han identificado en interleucina-1 alfa: Residuos Longitud ID de dominio 1-112 112 Propéptido 113-271 159 Interleucina-1 alfa Tal como se usa en el presente documento, el término “antígeno de nefritis tubulointersticial” se refiere a uno o más

polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor del antígeno de nefritis 10 tubulointersticial (Swiss-Prot Q9UJW2 (SEQ ID NO: 5)).

Los siguientes dominios se han identificado en el antígeno de nefritis tubulointersticial: Residuos Longitud ID de dominio 1-476 112 Antígeno de nefritis tubulointersticial 59-107 49 SMB Tal como se usa en el presente documento, el término “factor de crecimiento transformante beta-1” se refiere a uno

o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor del factor de crecimiento transformante beta-1 (Swiss-Prot P01137 (SEQ ID NO: 6)).

Los siguientes dominios se han identificado en el factor de crecimiento transformante beta-1: Residuos Longitud ID de dominio 1-29 29 Péptido señal 30-278 249 Péptido de latencia-asociada 279-390 112 Factor de crecimiento transformante beta-1 Tal como se usa en el presente documento, el término “proteína morfogénica ósea 7” se refiere a uno o más

polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de proteína morfogénica ósea 7

(Swiss-Prot P18075 (SEQ ID NO: 7)).

Los siguientes dominios se han identificado en la proteína morfogénica ósea 7:

Residuos: Longitud ID de dominio

1-29: 29 Péptido señal

30-292: 263 Propéptido

293-431 139 Proteína morfogénica ósea 7

Tal como se usa en el presente documento, el término “osteopontina” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de osteopontina (Swiss-Prot P10451 (SEQ ID NO: 8)).

Los siguientes dominios se han identificado en Osteopontina: Residuos Longitud ID de dominio 1-16 16 Péptido señal 17-314 427 Osteopontina Tal como se usa en el presente documento, el término “proteína alfa regulada por crecimiento” se refiere a uno o

más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de proteína alfa regulada por

crecimiento (Swiss-Prot P09341 (SEQ ID NO: 9)).

Los siguientes dominios se han identificado en la proteína alfa regulada por crecimiento: Residuos Longitud ID de dominio 1-34 34 Péptido señal 35-107 73 Proteína alfa regulada por crecimiento 38-107 70 Proteína alfa regulada por crecimiento (4-73) 39-107 69 Proteína alfa regulada por crecimiento (5-73) 40-107 68 Proteína alfa regulada por crecimiento (6-73)

10 Tal como se usa en el presente documento, el término “netrina-1” se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de netrina-1 (Swiss-Prot O95631 (SEQ ID NO: 10)).

Los siguientes dominios se han identificado en netrina-1:

Residuos Longitud ID de dominio

1-24 24 Péptido señal

25-604 580 Netrina-1

Tal como se usa en el presente documento, el término “relacionar una señal con la presencia o cantidad” de un analito refleja este entendimiento. Las señales de ensayo se relacionan comúnmente con la presencia o cantidad de 5 un analito por medio del uso de una curva patrón calculada usando concentraciones conocidas del analito de interés. Tal como se usa el término en el presente documento, un ensayo está “configurado para detectar” un analito si un análisis puede generar una señal detectable indicativa de la presencia o cantidad de una concentración fisiológicamente relevante del analito. Debido a que un epítopo de anticuerpo es del orden de 8 aminoácidos, un inmunoensayo configurado para detectar un marcador de interés también detectará polipéptidos relacionados con la 10 secuencia de marcador, siempre que aquellos polipéptidos contengan el/los epítopo(s) necesario(s) para unirse al anticuerpo o anticuerpos usados en el ensayo. El término “marcador relacionado” tal como se usa en el presente documento con respecto a un biomarcador tal como uno de los marcadores de lesión de riñón descritos en el presente documento se refiere a uno o más fragmentos, variantes, etc., de un marcador particular o su molécula original biosintética que puede detectarse como un sustituto para el propio marcador o como biomarcadores

15 independientes. El término también se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de biomarcador que forma complejo con especies adicionales, tales como proteínas de unión, receptores, heparina, lípidos, azúcares, etc.

El término marcador que “va a positivo”, tal como se usa este término en el presente documento se refiere a un marcador que se determina que está elevado en sujetos que padecen una enfermedad o un estado, con respecto a 20 sujetos que no padecen esta enfermedad o este estado. El término marcador que “va a negativo” tal como se usa

este término en el presente documento se refiere a un marcador que se determina que está reducido en sujetos que padecen una enfermedad o un estado, con respecto a sujetos que no padecen esta enfermedad o este estado.

El término “sujeto” tal como se usa en el presente documento se refiere a un organismo humano o no humano. Por tanto, los métodos y composiciones descritos en el presente documento pueden aplicarse en la enfermedad tanto humana como veterinaria. Además, mientras que un sujeto es preferiblemente un organismo vivo, la invención descrita en el presente documento puede usarse también en análisis post mórtem. Sujetos preferidos son seres humanos, y los más preferiblemente “pacientes”, que tal como se usa en el presente documento se refiere a seres humanos vivos que están recibiendo cuidado médico por una enfermedad o un estado. Esto incluye personas sin enfermedad definida que están siendo investigados para detectar signos de patología.

Preferiblemente, un analito se mide en una muestra. Tal muestra puede obtenerse de un sujeto, o puede obtenerse de materiales biológicos destinados a ser proporcionados al sujeto. Por ejemplo, una muestra puede obtenerse de un riñón que está siendo evaluado para determinar posible trasplante a un sujeto, y una medición de analito usada para evaluar el riñón para determinar daños preexistentes. Las muestras preferidas son muestras de líquido corporal.

El término “muestra de líquido corporal” tal como se usa en el presente documento se refiere a una muestra de líquido corporal obtenida para fines de diagnóstico, pronóstico, clasificación o evaluación de un sujeto de interés, tal como un paciente o donante de trasplante. En determinadas realizaciones, tal muestra puede obtenerse para fines de determinación del resultado de un estado en curso o el efecto de un régimen de tratamiento sobre un estado. Las muestras de líquido corporal preferidas incluyen sangre, suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, saliva, esputo, y derrame pleural. Además, el experto en la técnica se dará cuenta de que ciertas muestras de líquido corporal se analizarán más fácilmente siguiendo un procedimiento de fraccionamiento o purificación, por ejemplo, separación de sangre completa en componentes de suero o plasma.

El término “diagnóstico” tal como se usa en el presente documento se refiere a métodos mediante los cuales el experto en la técnica puede estimar y/o determinar la probabilidad (“una probabilidad”) de si un paciente padece o no de una enfermedad o un estado dados. En el caso de la presente invención, “diagnóstico” incluye usar los resultados de un ensayo, más preferiblemente un inmunoensayo, por un marcador de lesión de riñón de la presente invención, opcionalmente junto con otras características clínicas, para llegar a un diagnóstico (es decir, la presencia o no presencia) de una lesión renal aguda o IRA por el sujeto del que se obtuvo una muestra y se sometió a ensayo. Que se “determine” tal diagnóstico no quiere decir que implique que el diagnóstico es preciso al 100%. Muchos biomarcadores son indicativos de múltiples estados. El médico experto no usa resultados de biomarcador en un vacío informativo, sino que más bien los resultados de prueba son usados junto con otros indicios clínicos para llegar a una diagnóstico. Por tanto, un nivel de biomarcador medido a un lado de un umbral de diagnóstico predeterminado indica una probabilidad mayor de la presencia de enfermedad en el sujeto concón respecto a un nivel medido al otro lado del umbral de diagnóstico predeterminado.

De manera similar, un riesgo pronóstico señala una probabilidad (“una probabilidad”) de que se producriá un transcurso o resultado dado. Un nivel o un cambio en el nivel de un indicador pronóstico, que a su vez está asociado con una probabilidad aumentada de morbilidad (por ejemplo, empeoramiento de función renal, IRA futura o muerte) se refiere como “indicador de una probabilidad aumentada” de un resultado adverso en un paciente.

Análisis de marcador

En general, los inmunoensayos implican poner en contacto una muestra que contiene o que se sospecha que contiene un biomarcador de interés con al menos un anticuerpo que se une específicamente al biomarcador. Entonces se genera una señal que indica la presencia o cantidad de complejos formados mediante la unión de polipéptidos en la muestra al anticuerpo. Entonces se relaciona la señal con la presencia o cantidad del biomarcador en la muestra. El experto en la técnica conoce bien numerosos métodos y dispositivos para la detección y el análisis de biomarcadores. Véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses 6.143.576; 6.113.855; 6.019.944; 5.985.579; 5.947.124; 5.939.272; 5.922.615; 5.885.527; 5.851.776; 5.824.799; 5.679.526; 5.525.524; y 5.480.792, y The Immunoassay Handbook, David Wild, ed. Stockton Press, Nueva York.

Los dispositivos de ensayo y métodos conocidos en la técnica pueden utilizar moléculas marcadas en diversos formatos de ensayo de tipo sándwich, competitivos o no competitivos, para generar una señal que se relaciona con la presencia o cantidad del biomarcador de interés. Formatos de ensayo apropiados también incluyen métodos cromatográficos, de espectrografía de masas y de “transferencia” de proteínas. Adicionalmente, pueden emplearse determinados métodos y dispositivos, tales como biodetectores e inmunoensayos ópticos, para determinar la presencia o cantidad de analitos sin la necesidad de una molécula marcada. Véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses 5.631.171; y 5.955.377. Un experto en la técnica también reconoce que instrumentos robóticos incluyendo, pero sin limitarse a, los sistemas ACCESS® de Beckman, AXSYM® de Abbott, ELECSYS® de Roche, STRATUS® de Dade Behring están entre los analizadores de inmunoensayo que pueden realizar inmunoensayos. Sin embargo puede utilizarse cualquier inmunoensayo apropiado, por ejemplo, inmunoensayos ligados a enzima (ELISA), radioinmunoensayos (RIA), análisis de unión competitiva y similares.

Anticuerpos u otros polipéptidos pueden inmovilizarse sobre una variedad de soportes sólidos para su uso en ensayos. Las fases sólidas que pueden usarse para inmovilizar miembros de unión específica incluyen aquéllas desarrolladas y/o usadas como fases sólidas en ensayos de unión en fase sólida. Los ejemplos de fases sólidas apropiadas incluyen filtros de membrana, papeles a base de celulosa, perlas (incluyendo partículas poliméricas, de látex y paramagnéticas), vidrio, plaquetas de silicio, micropartículas, nanopartículas, TentaGels, AgroGels, geles de PEGA, geles de SPOCC, y placas de múltiples pocillos. Podría prepararse una banda de ensayo recubriendo el anticuerpo o una pluralidad de anticuerpos en una matriz sobre soporte sólido. Esta banda podría sumergirse entonces en la muestra de prueba y luego procesarse rápidamente por medio de lavados y etapas de detección para generar una señal medible, tal como un punto coloreado. Anticuerpos u otros polipéptidos pueden unirse a zonas específicas de dispositivos de ensayo o bien mediante conjugación directamente a una superficie de dispositivo de ensayo o bien mediante unión indirecta. En un ejemplo del último caso, pueden inmovilizarse anticuerpos u otros polipéptidos sobre partículas u otros soportes sólidos e inmovilizar ese soporte sólido a la superficie del dispositivo.

Los ensayos biológicos requieren métodos para la detección, y uno de los métodos más comunes para la cuantificación de resultados es conjugar un marcador detectable a una proteína o ácido nucleico que tiene afinidad por uno de los componentes en el sistema biológico que se está estudiando. Los marcadores detectables pueden incluir moléculas que son detectables por sí mismas (por ejemplo, restos fluorescentes, marcadores electroquímicos, quelatos de metal, etc.) así como moléculas que pueden detectarse indirectamente mediante la producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, etc.) o mediante una molécula de unión específica que en sí misma puede ser detectable (por ejemplo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2,4-dinitrobenceno, fenilarseniato, ADNmc, ADNbc, etc.).

La preparación de conjugados de fases sólidas y marcadores detectables a menudo comprende el uso de agentes de reticulación químicos. Los reactivos de reticulación contienen al menos dos grupos reactivos y se dividen generalmente en agentes de reticulación homofuncionales (que contienen grupos reactivos idénticos) y agentes de reticulación heterofuncionales (que contienen grupos reactivos no idénticos). Los agentes de reticulación homobifuncionales que se acoplan por medio de aminas, sulfhidrilos o reaccionan no específicamente están disponibles de muchas fuentes comerciales. Maleimidas, haluros de alquilo y arilo, alfa-haloacilos y disulfuros de piridilo son grupos reactivos con tiol. Maleimidas, haluros de alquilo y arilo, y alfa-haloacilos reaccionan con sulfhidrilos para formar enlaces de tiol éter, mientras que los disulfuros de piridilo reaccionan con sulfhidrilos para producir disulfuros mixtos. El producto de disulfuro de piridilo puede escindirse. Los imidoésteres también son muy útiles para reticulaciones de proteína-proteína. Una variedad de agentes de reticulación heterobifuncionales, combinado cada uno atributos diferentes para una conjugación satisfactoria, están disponibles comercialmente.

En determinados aspectos, la presente memoria descriptiva proporciona kits para el análisis de los marcadores de lesión de riñón descritos. El kit comprende reactivos para el análisis de al menos una muestra de prueba que comprende al menos un anticuerpo que un marcador de lesión de riñón. El kit también puede incluir dispositivos e instrucciones para realizar una o más de las correlaciones de diagnóstico y/o pronóstico descritas en el presente documento. Los kits preferidos comprenderán un par de anticuerpos para realizar un análisis de tipo sándwich, o una especie marcada para realizar un análisis competitivo, para determinar el analito. Preferiblemente, un par de anticuerpos comprende un primer anticuerpo conjugado a una fase sólida y un segundo anticuerpo conjugado a un marcador detectable, en el que cada uno de los anticuerpos primero y segundo se unen a un marcador de lesión de riñón. Lo más preferiblemente cada uno de los anticuerpos son anticuerpos monoclonales. Las instrucciones para usar del kit y realizar las correlaciones pueden estar en forma de etiquetado, que se refiere a cualquier escrito o grabado que se une o acompaña de otra manera a un kit en cualquier momento durante su fabricación, transporte, venta o uso. Por ejemplo, el término etiquetado comprende panfletos de publicidad y folletos, materiales de envasado, instrucciones, casetes de audio o video, discos informáticos, así como escritos impresos directamente sobre los kits.

Anticuerpos

El término “anticuerpo” tal como se usa en el presente documento se refiere a un péptido o polipéptido derivado de, modelado después o codificado sustancialmente por un gen de inmunoglobulina o genes de inmunoglobulina o fragmentos de los mismos, que pueden unirse específicamente a un antígeno o epítopo. Véanse, por ejemplo Fundamental Immunology, 3ª edición, W.E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993); Wilson (1994; J. Immunol. Methods 175:267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25:85-97. El término anticuerpo incluye partes de unión a antígeno, es decir, “sitios de unión a antígeno”, (por ejemplo, fragmentos, subsecuencias, regiones determinantes de la complementariedad (CDR)) que conservan la capacidad para unirse al antígeno, incluyendo (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab’)2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste en un dominio VH; y (vi) una región determinante de la complementariedad (CDR) aislada. Los anticuerpos de cadena sencilla también están incluidos por referencia en el término “anticuerpo”.

Los anticuerpos usados en los inmunoensayos descritos en el presente documento preferiblemente se unen específicamente a un marcador de lesión de riñón de la presente invención. El término “se une específicamente” no

pretende indicar que un anticuerpo se une exclusivamente a su diana prevista puesto que, tal como se indica anteriormente, un anticuerpo se une a cualquier polipéptido que presente el/los epítopo(s) al/a los que se une el anticuerpo. Más bien, un anticuerpo “se une específicamente” si su afinidad por su diana prevista es aproximadamente 5 veces mayor en comparación con su afinidad por una molécula no diana que no presenta el/los epítopo(s) apropiado(s). Preferiblemente, la afinidad del anticuerpo será al menos aproximadamente 5 veces, preferiblemente 10 veces, más preferiblemente 25 veces, incluso más preferiblemente 50 veces y los más preferiblemente 100 veces o más, mayor por una molécula diana que su afinidad por una molécula no diana. En realizaciones preferidas, los anticuerpos preferidos se unen con afinidades de al menos aproximadamente 107 M-1, y

M-1 M-1

preferiblemente entre aproximadamente 108 y aproximadamente 109 , aproximadamente 109 y aproximadamente 1010 M-1 o aproximadamente 1010 M-1 y aproximadamente 1012 M-1 .

La afinidad se calcula como Kd = koff/kon (koff es la constante de velocidad de disociación, kon es la constante de velocidad de asociación y Kd es la constante de equilibrio). La afinidad puede determinarse en el equilibrio midiendo la fracción unida (r) de ligando marcado a varias concentraciones (c). Los datos se representan gráficamente usando la ecuación de Scatchard: r/c = K(n-r): en la que r = moles de ligando unido/mol de receptor en el equilibrio; c = concentración de ligando libre en el equilibrio; K = constante de asociación en el equilibrio; y n = número de sitios de unión a ligando por molécula receptora. Mediante análisis gráfico, r/c se representa gráficamente en el eje Y frente a r en el eje X, produciendo así una gráfica de Scatchard. En la técnica se conoce bien la medición de afinidad de anticuerpo mediante el análisis de Scatchard. Véanse, por ejemplo, van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991; Nelson and Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988.

El término “epítopo” se refiere a un determinante antigénico que puede unirse específicamente a un anticuerpo. Habitualmente los epítopos consisten en agrupaciones de superficie químicamente activa de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y habitualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Los epítopos conformacionales y no conformacionales se distinguen porque la unión al primero pero no al último se pierde en presencia de disolventes desnaturalizantes.

Numerosas publicaciones tratan el uso de la tecnología de presentación en fago para producir y examinar bibliotecas de polipéptidos para determinar la unión a un analito seleccionado. Véanse, por ejemplo, Cwirla et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 6378-82, 1990; Devlin et al., Science 249, 404-6, 1990, Scott y Smith, Science 249, 386-88, 1990; y Ladner et al., la patente estadounidense n.º 5.571.698. Un concepto básico de métodos de presentación en fago es el establecimiento de una asociación física entre ADN que codifica para un polipéptido que va a examinarse y el polipéptido. Esta asociación física se proporciona por la partícula de fago, que presenta un polipéptido como parte de la cápsida que encierra el genoma de fago que codifica para el polipéptido. El establecimiento de una asociación física entre polipéptidos y su material genético permite el examen masivo simultáneo de números muy grandes de fagos que portan diferentes polipéptidos. El fago que presenta un polipéptido con afinidad por una diana, se une a la diana y estos fagos se enriquecen mediante selección por afinidad a la diana. La identidad de los polipéptidos presentados en estos fagos puede determinarse a partir de sus genomas respectivos. Usando estos métodos, puede sintetizarse entonces un polipéptido identificado por tener una afinidad de unión por una diana deseada a granel por medios convencionales. Véase, por ejemplo, la patente estadounidense n.º 6.057.098.

Los anticuerpos que se generan mediante estos métodos pueden seleccionarse entonces examinando en primer lugar para detectar afinidad y especificidad con el polipéptido purificado de interés y, si se requiere, comparando los resultados con la afinidad y especificidad de los anticuerpos con polipéptidos que se desea que se excluyan de la unión. El procedimiento de selección puede implicar la inmovilización de los polipéptidos purificados en pocillos separados de placas de microtitulación. Entonces se coloca la disolución que contiene un posible anticuerpo o grupos de anticuerpos en los pocillos de microtitulación respectivos y se incuba durante de aproximadamente 30 minutos a 2 horas. Entonces se lavan los pocillos de microtitulación y se añade un anticuerpo secundario marcado (por ejemplo, un anticuerpo anti-ratón conjugado con fosfatasa alcalina si los anticuerpos que se han hecho crecer son anticuerpos de ratón) a los pocillos y se incuba durante aproximadamente 30 minutos y luego se lava. Se añade sustrato a los pocillos y aparecerá una reacción de color en donde esté presente el anticuerpo frente al/a los polipéptido(s) inmovilizado(s).

Entonces, los anticuerpos así identificados pueden analizarse adicionalmente para determinar la afinidad y especificidad en el diseño de ensayo seleccionado. En el desarrollo de inmunoensayos por una proteína diana, la proteína diana purificada actúa como patrón con el que juzgarse la sensibilidad y especificidad del inmunoensayo usando los anticuerpos que se han seleccionado. Debido que la afinidad de unión de diversos anticuerpos puede diferir; determinados pares de anticuerpo (por ejemplo, en ensayos de tipo sándwich) pueden interferir entre sí estéricamente, etc., el rendimiento del ensayo de un anticuerpo puede ser una medida más importante que la afinidad y especificidad absolutas de un anticuerpo.

Correlaciones de ensayo

El término “correlacionar” tal como se usa en el presente documento con referencia al uso de biomarcadores, se refiere a comparar la presencia o cantidad del/los biomarcador(es) en un paciente con su presencia o cantidad en personas que se sabe que padecen o que se sabe que corren el riesgo de padecer un estado dado; o en personas que se sabe que están libres de un estado dado. A menudo, esto toma la forma de comparar un resultado de ensayo

en forma de una concentración de biomarcador con un umbral predeterminado seleccionado para que sea indicativo de la presencia o no presencia de una enfermedad o la probabilidad de algún resultado futuro.

La selección de un umbral de diagnóstico implica, entre otras cosas, la consideración de la probabilidad de enfermedad, distribución de diagnósticos verdaderos y falsos a diferentes umbrales de prueba, y valoraciones de las consecuencias de tratamiento (o incumplimiento del tratamiento) en base al diagnóstico. Por ejemplo, cuando se considera administrar una terapia específica que es altamente eficaz y tiene un bajo nivel de riesgo, pocas pruebas son necesarias debido a que los médicos pueden aceptar incertidumbre de diagnóstico sustancial. Por otra parte, en situaciones en las que las opciones de tratamiento son menos eficaces y más arriesgadas, a menudo los médicos necesitan un grado más alto de certeza de diagnóstico. Por tanto, el análisis de coste/beneficio está implicado en la selección de un umbral de diagnóstico.

Los umbrales apropiados pueden determinarse de una variedad de maneras. Por ejemplo, un umbral de diagnóstico recomendado para el diagnóstico de infarto agudo de miocardio usando proponina cardiaca es el percentil 97,5º de la concentración observada en una población normal. Otro método puede ser observar en muestras en serie del mismo paciente, en el que se usa un resultado de “nivel inicial” anterior para monitorizar cambios temporales en un nivel de biomarcador.

También pueden usarse estudios de población para seleccionar un umbral de decisión. La característica operativa del receptor (“ROC”) surgió del campo de teoría de detección de señales desarrollada durante la Segunda Guerra Mundial para el análisis de imágenes de radar, y el análisis de ROC se usa a menudo para seleccionar un umbral que puede distinguir mejor una subpoblación “enferma” de una subpoblación “no enferma”. Un falso positivo en este caso aparece cuando el resultado de la prueba en una persona es positivo, pero realmente no tiene la enfermedad. Un falso negativo, por otra parte, aparece cuando el resultado de la prueba en una persona es negativo, sugiriendo que está sana, cuando realmente tiene la enfermedad. Para trazar una curva ROC, se determina la fracción de verdaderos positivos (FVP) y la fracción de falsos positivos (FFP) al variar el umbral de decisión continuamente. Puesto que FVP es equivalente a la sensibilidad y FFP es igual a 1 -la especificidad, la gráfica de ROC se denomina en ocasiones la gráfica de sensibilidad frente a (1 -especificidad). Una prueba perfecta tendrá un área bajo la curva ROC de 1,0; una prueba aleatoria tendrá un área de 0,5. Se selecciona un umbral para proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad.

En este contexto, “enfermo” pretende referirse a una población que tiene una característica (la presencia de una enfermedad o un estado o la aparición de algún desenlace) y “no enfermo” pretende referirse a una población que carece de la característica. Mientras que un solo umbral de decisión es la aplicación más simple de tal método, pueden usarse múltiples umbrales de decisión. Por ejemplo, por debajo de un primer umbral, la ausencia de enfermedad puede asignarse con una confianza relativamente alta y por encima de un segundo umbral, la presencia de enfermedad puede asignarse también con una confianza relativamente alta. Entre los dos umbrales puede considerarse indeterminado. Esto pretende de ser de naturaleza a modo de ejemplo solamente.

Además de comparaciones de umbrales, otros métodos para correlacionar resultados de ensayo con una clasificación de paciente (presencia o no presencia de enfermedad, probabilidad de un desenlace, etc.) incluyen árboles de decisión, conjuntos de reglas, métodos Bayesianos y métodos de red neural. Estos métodos pueden producir valores de probabilidad que representan el grado al cual un sujeto pertenece a una clasificación de una pluralidad de clasificaciones.

Medidas de exactitud de prueba pueden obtenerse tal como se describe en Fischer et al., Intensive Care Med. 29: 1043-51, 2003, y usarse para determinar la eficacia de un biomarcador dado. Estas medidas incluyen sensibilidad y especificidad, valores predictivos, razones de probabilidad, razones de probabilidades de diagnóstico, y áreas de curva ROC. El área bajo la curva (“AUC”) de una gráfica ROC es igual a la probabilidad de que un clasificador clasificará una instancia positiva escogida aleatoriamente más alta que una negativa escogida aleatoriamente. El área bajo la curva ROC puede considerarse equivalente a la prueba U de Mann-Whitney, que somete a prueba para determinar la diferencia de la mediana entre puntuaciones obtenidas en los dos grupos considerados si los grupos son de datos continuos o la prueba de Wilcoxon de rangos.

Tal como se trató anteriormente, pruebas apropiadas pueden presentar uno o más de los siguientes resultados en estas diversas medidas: una especificidad mayor de 0,5, preferiblemente de al menos 0,6, más preferiblemente de al menos 0,7, todavía más preferiblemente de al menos 0,8, incluso más preferiblemente de al menos 0,9 y lo más preferiblemente de al menos 0,95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0,2, preferiblemente mayor de 0,3, más preferiblemente mayor de 0,4, todavía más preferiblemente al menos 0,5, incluso más preferiblemente 0,6, aún más preferiblemente mayor de 0,7, todavía más preferiblemente mayor de 0,8, más preferiblemente mayor de 0,9, y lo más preferiblemente mayor de 0,95; una sensibilidad mayor de 0,5, preferiblemente de al menos 0,6, más preferiblemente de al menos 0,7, todavía más preferiblemente de al menos 0,8, incluso más preferiblemente de al menos 0,9 y lo más preferiblemente de al menos 0,95, con una especificidad correspondiente mayor de 0,2, preferiblemente mayor de 0,3, más preferiblemente mayor de 0,4, todavía más preferiblemente de al menos 0,5, incluso más preferiblemente 0,6, aún más preferiblemente mayor de 0,7, todavía más preferiblemente mayor de 0,8, más preferiblemente mayor de 0,9 , y lo más preferiblemente mayor de 0,95; al menos el 75% de sensibilidad, combinada con al menos el 75% de especificidad; un área de curva de ROC mayor de 0,5 preferiblemente de al

menos 0,6, más preferiblemente de 0,7, todavía más preferiblemente de al menos 0,8, incluso más preferiblemente de al menos 0,9 y lo más preferiblemente de al menos 0,95; una razón de probabilidades diferente de 1, preferiblemente de al menos aproximadamente 2 o más o de aproximadamente 0,5 o menos, más preferiblemente de al menos aproximadamente 3 o más o de aproximadamente 0,33 o menos, todavía más preferiblemente de al menos aproximadamente 4 o más o de aproximadamente 0,25 o menos, incluso más preferiblemente de al menos aproximadamente 5 o más o de aproximadamente 0,2 o menos, y lo más preferiblemente de al menos aproximadamente 10 o más o de aproximadamente 0,1 o menos; una razón de probabilidad positiva (calculada como sensibilidad/(1-especificidad)) mayor de 1, de al menos 2, más preferiblemente de al menos 3, todavía más preferiblemente de al menos 5, y lo más preferiblemente de al menos 10; y/o una razón de probabilidad negativa (calculada como (1-sensibilidad)/especificidad) menor de 1, menor o igual a 0,5, más preferiblemente menor o igual a 0,3, y lo más preferiblemente menor o igual a 0,1.

Indicios clínicos adicionales pueden combinarse con el/los resultado(s) de ensayo de marcador de lesión de riñón de la presente invención. Estos incluyen otros biomarcadores relacionados con el estado renal. Los ejemplos incluyen los siguientes, que citan el nombre de biomarcador común, seguido por el número de entrada Swiss-Prot para ese biomarcador o su molécula original: actina (P68133); proteína de unión a adenosina desaminasa (DPP4, P27487); alfa-1-glicoproteína ácida 1 (P02763); alfa-1-microglobulina (P02760); albúmina (P02768); angiotensinogenasa (renina, P00797); anexina A2 (P07355); beta-glucuronidasa (P08236); B-2-microglobulina (P61679); betagalactosidasa (P16278); BMP-7 (P18075); péptido natriurético cerebral (proBNP, BNP-32, NTproBNP; P16860); proteína beta e unión a calcio beta (S100-beta, P04271); anhidrasa carbónica (Q16790); caseína cinasa 2 (P68400); catepsina B (P07858); ceruloplasmina (P00450); clusterina (P10909); complemento C3 (P01024); proteína rica en cisteína (CYR61, O00622); citocromo C (P99999); factor de crecimiento epidérmico (EGF, P01133); endotelina-1 (P05305); fetuína A exosómica (P02765); proteína de unión a ácidos grasos, corazón (FABP3, P05413); proteína de unión a ácidos grasos, hígado (P07148); ferritina (cadena ligera, P02793; cadena pesada P02794); fructosa-1,6bifosfatasa (P09467); GRO-alfa (CXCL1, (P09341); hormona de crecimiento (P01241); factor de crecimiento de hepatocitos (P14210); factor de crecimiento similar a insulina I (P01343); inmunoglobulina G; cadenas ligeras de inmunoglobulina (kappa y lambda); interferón gamma (P01308); lisozima (P61626); interleucina-1 alfa (P01583); interleucina-2 (P60568); interleucina-4 (P60568); interleucina-9 (P15248); interleucina-12p40 (P29460); interleucina13 (P35225); interleucina-16 (Q14005); molécula de adhesión de célula L1 (P32004); lactato deshidrogenasa (P00338); leucina aminopeptidasa (P28838); subunidad alfa de meprina A (Q16819); subunidad beta de meprina A (Q16820); midkina (P21741); MIP2-alfa (CXCL2, P19875); MMP-2 (P08253); MMP-9 (P14780); netrina-1 (O95631); endopeptidasa neutra (P08473); osteopontina (P10451); antígeno papilar renal 1 (RPA1); antígeno papilar renal 2 (RPA2); proteína de unión a retinol (P09455); ribonucleasa; proteína A6 de unión a calcio S100 (P06703); componente P amiloide de suero (P02743); isoforma de intercambiador de sodio/hidrógeno (NHE3, P48764); espermidina/espermina N1-acetiltransferasa (P21673); TGF-Beta1 (P01137); transferrina (P02787); factor de trébol 3 (TFF3, Q07654); proteína de tipo toll 4 (O00206); proteína total; antígeno de nefritis tubulointersticial (Q9UJW2); uromodulina (proteína de Tamm-Horsfall, P07911).

Para fines de estratificación de riesgos, pueden combinarse adiponectina (Q15848); fosfatasa alcalina (P05186); aminopeptidasa N (P15144); calbindina D28k (P05937); cistatina C (P01034); subunidad 8 de F1FO ATPasa (P03928); gamma-glutamiltransferasa (P19440); GSTa (alfa-glutatión-S-transferasa, P08263); GSTpi (glutatión-Stransferasa P; clase-pi de GST; P09211); IGFBP-1 (P08833); IGFBP-2 (P18065); IGFBP-6 (P24592); proteína de integral membrana 1 (Itm1, P46977); interleucina-6 (P05231); interleucina-8 (P10145); interleucina-18 (Q14116); IP10 (proteína inducida por interferón-gamma de 10 kDa, P02778); IRPR (IFRD1, O00458); isovaleril-CoA deshidrogenasa (IVD, P26440); I-TAC/CXCL11 (O14625); queratina 19 (P08727); Kim-1 (receptor 1 celular de virus de hepatitis A, O43656); L-arginina:glicina amidinotransferasa (P50440); leptina (P41159); lipocalina 2 (NGAL, P80188); MCP-1 (P13500); MIG (monocina inducida por interferón-gamma Q07325); MIP-1a (P10147); MIP-3a (P78556); MIP-1beta (P13236); MIP-1d (Q16663); NAG (N-acetil-beta-D-glucosaminidasa, P54802); transportador de ion orgánico (OCT2, O15244); osteoprotegerina (O14788); proteína P8 (O60356); inhibidor del activador de plasminógeno 1 (PAI-1, P05121); ProANP(1-98) (P01160); proteína fosfatasa 1-beta (PPI-beta, P62140); Rab GDIbeta (P50395); calicreína renal (Q86U61); RT1.B-1 (alfa) cadena de la proteína integral de membrana (Q5Y7A8); miembro 1A de la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral soluble (sTNFR-I, P19438); miembro 1B de la superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral soluble (sTNFR-II, P20333); inhibidor tisular de metaloproteinasas 3 (TIMP-3, P35625); uPAR (Q03405) con el/los resultado(s) de ensayo de marcador de lesión de riñón de la presente invención.

Otros signos clínicos que pueden combinarse con el/los resultado(s) de ensayo de marcador de lesión de riñón de la presente invención incluyen información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza), historia médica (por ejemplo, historia familiar, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, insuficiencia cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria, proteinuria, insuficiencia renal o septicemia, tipo de exposición a toxinas tales como AINE, ciclosporinas, tacrolimús, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos, o estreptozotocina), variables clínicas (por ejemplo, tensión arterial, temperatura, velocidad de respiración), puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, puntuación de riesgo de TIMI o UA/NSTEMI, puntuación de riesgo de Framingham), una medición de proteína total en orina, una tasa de filtración glomerular, una tasa de filtración glomerular estimada, una tasa de producción de orina, una concentración de

creatinina en suero o plasma, una medición de antígeno papilar renal 1 (RPA1); una medición de antígeno papilar renal 2 (RPA2); una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una razón de creatinina en orina con respecto a creatinina en suero o plasma, una densidad de la orina, una osmolalidad de la orina, una razón de nitrógeno de urea en orina con respecto a nitrógeno de urea en plasma, una razón de BUN de plasma con respecto a creatinina, y/o un índice de insuficiencia renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina / creatinina en plasma). Otras medidas de función renal que pueden combinarse con el/los resultado(s) de ensayo de marcador de lesión de riñón se describen posteriormente en el presente documento y en Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17ª ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47ª Ed, McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815.

La combinación de resultados de ensayo/signos clínicos de esta manera puede comprender el uso de regresión logística de múltiples variables, modelado logarítmico lineal, análisis de red neural, análisis n de m, análisis de árbol de decisión, etc. Esta lista no pretende ser limitante.

Diagnóstico de insuficiencia renal aguda

Tal como se indicó anteriormente, los términos “lesión renal (o de riñón) aguda” e “insuficiencia renal (o de riñón) aguda” tal como se usan en el presente documento, se definen en parte en cuanto a cambios en la creatinina en suero a partir de un valor de referencia. La mayoría de las definiciones de IRA tienen elementos comunes, incluyendo el uso de creatinina en suero y, a menudo, diuresis. Los pacientes pueden presentar disfunción renal sin una medición de referencia disponible de la función renal para su uso en esta comparación. En tal caso, puede estimarse un valor de referencia de creatinina en suero asumiendo que el paciente tenía inicialmente una TFG normal. La tasa de filtración glomerular (TFG) es el volumen de líquido filtrado desde los capilares glomerulares renales (de riñón) al interior la cápsula de Bowman por tiempo unitario. La tasa de filtración glomerular (TFG) puede calcularse midiendo cualquier producto químico que tiene un nivel estable en la sangre y que se filtra libremente pero que ni se reabsrobe ni se secreta por los riñones. La TFG se expresa comúnmente en unidades de ml/min:

Al normalizar la TFG con respecto al área de superficie corporal, puede asumirse una TFG de aproximadamente 75– 100 ml/min por 1,73 m2. Por consiguiente la tasa medida es la cantidad de la sustancia en la orina que se originó de un volumen de sangre calculable.

Hay varias técnicas diferentes usadas para calcular o estimar la tasa de filtración glomerular (TFG o eTFG). En la práctica clínica, sin embargo, se usa el aclaramiento de creatinina para medir la TFG. La creatinina se produce de manera natural por el cuerpo (la creatinina es un metabolito de la creatina, que se encuentra en el músculo). Se filtra libremente por el glomérulo, pero también se secreta activamente por los túbulos renales en cantidades muy pequeñas de tal manera que el aclaramiento de creatinina sobreestima la TFG real en un 10-20%. Este margen de error es aceptable considerando la facilidad con la cual se mide el aclaramiento de creatinina.

El aclaramiento de creatinina (CCr) puede calcularse si se conocen los valores para la concentración de creatinina en la orina (UCr), caudal de orina (V), y concentración de creatinina en plasma (PCr). Puesto que el producto de la concentración en orina y el caudal de orina proporciona la tasa de excreción de creatinina, también se dice que el aclaramiento de creatinina es su tasa de excreción (UCr×V) dividida entre su concentración en el plasma. Comúnmente esto se representa matemáticamente como:

Comúnmente, se lleva a cabo una recogida de orina de 24 horas, desde la vejiga vacía en una mañana al contenido de la vejiga a la mañana siguiente, con una prueba de sangre comparativa tomada entonces:

U x volumen de 24 horas

Cr

C

Cr 

P  2460min

Cr

Para permitir la comparación de resultados entre gente de diferentes tamaños, a menudo la CCr se corrige para el área de superficie corporal (BSA) y se expresa en comparación con un ser humano de tamaño promedio como ml/min/1,73 m2. Mientras que la mayoría de los adultos tienen una BSA que se aproxima a 1,7 (1,6-1,9), los pacientes extremadamente obesos o delgados deben corregir su CCr con respecto a su BSA real:

CCr x 1,73

C

Crcorregida

BSA

La precisión de una medición de aclaramiento de creatinina (incluso cuando la recogida es completa) es limitada debido que a medida que la tasa de filtración glomerular (TFG) cae, la secreción de creatinina aumenta, y por tanto el aumento de creatinina en suero es menor. Por tanto, la excreción de creatinina es mucho mayor que la carga filtrada, dando como resultado una sobreestimación potencialmente grande de la TFG (tanto como una diferencia de dos veces). Sin embargo, para fines clínicos es importante determinar si la función renal es estable o está empeorando o mejorando. Esto se de termina a menudo monitorizando la creatinina en suero sola. Como el aclaramiento de creatinina, la creatinina en suero no será un reflejo preciso de la TFG en la condición de estado no estable de IRA. No obstante, el grado al cual los cambios de creatinina en suero del valor de referencia reflejarán el cambio en TFG. La creatinina en suero se mide rápida y fácilmente y es específica para la función renal.

Para fines de determinación de la diuresis en una diuresis en una base de ml/kg/hora, la recogida y medición de orina por hora es adecuada. En el caso en el que, por ejemplo, solamente una diuresis acumulativa de 24 horas estaba disponible y no se proporcionaron los pesos de los pacientes, se han descrito modificaciones menores de los criterios de diuresis de RIFLE. Por ejemplo, Bagshaw et al., Nephrol. Dial. Transplant. 23: 1203–1210, 2008, supone un peso del paciente promedio de 70 kg, y se asigna a los pacientes una clasificación de RIFLE en base a lo siguiente: <35 ml/h (riesgo), <21 ml/h (lesión) o <4 ml/h (insuficiencia).

Selección de un régimen de tratamiento

Una vez que se obtiene un diagnóstico, el médico puede seleccionar fácilmente un régimen de tratamiento que sea compatible con el diagnóstico, tal como iniciar terapia de reemplazo renal, abandonar la administración de compuestos que se sabe que son dañinos para el riñón, trasplante de riñón, retrasar o evitar procedimientos que se sabe que son dañinos para el riñón, modificar la administración de diuréticos, iniciar la terapia dirigida a objetivo, etc. El experto en la técnica es consciente de tratamientos apropiados para varias enfermedades mencionadas en relación con los métodos de diagnóstico descritos en el presente documento. Véase, por ejemplo, Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17ª ed. Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1999. Además, puesto que los métodos y las composiciones descritos en el presente documento proporcionan información de pronóstico, los marcadores de la presente invención pueden usarse para monitorizar un ciclo de tratamiento. Por ejemplo, un estado de pronóstico mejorado o empeorado puede indicar que un tratamiento particular es o no es eficaz.

El experto en la técnica apreciará fácilmente que la presente invención está bien adaptada para llevar a cabo los objetos y obtener los fines y las ventajas mencionados, también como aquellos inherentes a la misma. Los ejemplos proporcionados en el presente documento son representativos de realizaciones preferidas, son a modo de ejemplo y no pretenden ser limitaciones en cuanto al alcance de la invención.

Ejemplo 1: Recogida de muestras de nefropatía inducida por contraste

El objetivo de este estudio de recogida de muestras es recoger muestras de plasma y orina y datos clínicos de pacientes antes y después de recibir medios de contraste intravasculares. Se incluyen aproximadamente 250 adultos que se someten a procedimientos radiográficos/angiográficos que implican administración intravascular de medios de contraste yodados. Para incluirse en el estudio, cada paciente debe cumplir todos de los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión:

Criterios de inclusión

varones y mujeres de 18 años de edad o mayores;

someterse a un procedimiento radiográfico / angiográfico (tal como una exploración de CT o intervención coronaria) que implica la administración intravascular de medios de contraste;

se espera que estén hospitalizados durante al menos 48 horas después de la administración del contraste;

aptos y deseosos de proporcionar consentimiento informado por escrito para su participación en el estudio y para cumplir todos los procedimientos de estudio.

Criterios de exclusión

receptores de trasplante renal;

empeoramiento agudo de la función renal antes del procedimiento de contraste;

que ya reciben diálisis (o bien aguda o bien crónica) o en necesidad inminente de diálisis en la inclusión;

se espera que se sometan a un procedimiento quirúrgico mayor (tal como que implica derivación cardiopulmonar) o

un procedimiento de obtención de imágenes adicional con medios de contraste con riesgo significativo de ataque renal adicional en el plazo de 48 horas tras la administración de contraste;

participación en un estudio clínico intervencional con una terapia experimental en el plazo de los 30 días previos;

infección conocida con virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un virus de hepatitis.

Inmediatamente antes de la primera administración de contraste (y después de cualquier hidratación antes del procedimiento), se recogen una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 ml) y una muestra de orina (10 ml) de cada paciente. Luego se recogen muestras de sangre y orina 4 (±0,5), 8 (±1), 24 (±2) 48 (±2) y 72 (±2) horas tras la última administración de medios de contraste durante el procedimiento de contraste de índice. La sangre se recoge por medio de venipunción directa o por medio de otro acceso venoso disponible, tal como una vaina femoral existente, línea venosa central, línea intravenosa periférica o catéter intravenoso. Estas muestras de sangre de estudio se procesan para obtener plasma en el sitio clínico, se congelan y se envían a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de estudio de orina se congelan y se envían a Astute Medical, Inc.

La creatinina en suero se evalúa en el sitio inmediatamente antes de la primera administración de contraste (después de cualquier hidratación antes del procedimiento) y a las 4 (±0,5), 8 (±1), 24 (±2) y 48 (±2)) y 72 (±2) horas tras la última administración de contraste (idealmente al mismo tiempo que se obtienen las muestras de estudio). Además, se evalúa el estado de cada paciente hasta el día 30 con respecto a mediciones de creatinina en suero y orina adicionales, necesidad de diálisis, estado de hospitalización y desenlaces clínicos adversos (incluyendo mortalidad).

Antes de la administración del contraste, se le asigna a cada paciente un riesgo basándose en la siguiente determinación: tensión arterial sistólica <80 mm Hg = 5 puntos; bomba de balón intraarterial = 5 puntos; insuficiencia cardiaca congestiva (clase III-IV o historia de edema pulmonar) = 5 puntos; edad >75 años = 4 puntos; nivel de hematocrito <39% para hombres, <35% para mujeres = 3 puntos; diabetes = 3 puntos; volumen de medio de contraste = 1 punto por cada 100 ml; nivel de creatinina en suero >1,5 g/dl = 4 puntos TFG estimada por OR 40–60 ml/min/1,73 m2 = 2 puntos, 20–40 ml/min/1,73 m2 = 4 puntos, <20 ml/min/1,73 m2 = 6 puntos. Los riesgos asignados son los siguientes: riesgo de NIC y diálisis: 5 o menos puntos totales = riesgo de NIC -7,5%, riesgo de diálisis 0,04%; 6–10 puntos totales = riesgo de NIC -14%, riesgo de diálisis -0,12%; 11–16 puntos totales = riesgo de NIC 26,1%, riesgo de diálisis -1,09%; >16 puntos totales = riesgo de NIC -57,3%, riesgo de diálisis -12,8%.

Ejemplo 2: Recogida de muestras de cirugía cardiaca

El objetivo de este estudio de recogida de muestras es recoger muestras de plasma y orina y datos clínicos de pacientes antes y después de someterse a cirugía cardiovascular, un procedimiento que se sabe que es potencialmente dañino para la función del riñón. Se incluyen aproximadamente 900 adultos que se someten a tal cirugía. Para incluirse en el estudio, cada paciente debe cumplir todos los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión:

Criterios de inclusión

varones y mujeres de 18 años de edad o mayores;

someterse a cirugía cardiovascular;

índice de riesgo predictivo de Toronto/Ottawa para puntuación de riesgo de sustitución renal de al menos 2 (Wijeysundera et al., JAMA 297: 1801-9, 2007); y

Criterios de exclusión

embarazo conocido;

trasplante renal previo;

empeoramiento agudo de la función renal antes de la inclusión (por ejemplo, cualquier categoría de criterios de RIFLE);

actualmente incluido en otro estudio clínico o se espera que se incluya en otro estudio clínico en el plazo de 7 días de cirugía cardíaca que implica infusión de fármaco o una intervención terapéutica para LRA;

infección conocida con virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) o virus de hepatitis.

En el plazo de 3 horas antes de la primera incisión (y después de cualquier hidratación antes del procedimiento), se

recogen una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 ml), sangre completa (3 ml) y una muestra de orina (35 ml) de cada paciente. Entonces se recogen muestras de sangre y orina a las 3 (±0,5), 6 (±0,5), 12 (±1), 24 (±2) y 48 (±2) horas tras el procedimiento y luego diariamente en los días 3 a 7 si el sujeto permanece en el hospital. La sangre se recoge por medio de venipunción directa o por medio de otro acceso venoso disponible, tal como una vaina femoral, línea venosa central, línea intravenosa periférica o catéter intravenoso. Estas muestras de sangre de estudio se congelan y se envían a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de orina de estudio se congelan y se envían a Astute Medical, Inc.

Ejemplo 3: Recogida de muestras de sujetos enfermos de manera aguda

El objetivo de este estudio es recoger muestras de pacientes enfermos de manera aguda. Se incluirán aproximadamente 900 adultos que se espera que estén en la UCI durante al menos 48 horas. Para incluirse en el estudio, cada paciente debe cumplir todos los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión:

Criterios de inclusión

varones y mujeres de 18 años de edad o mayores;

Población de estudio 1: aproximadamente 300 pacientes que tienen al menos uno de:

choque (SBP <90 mmHg y/o necesidad de apoyo vasopresor para mantener MAP > 60 mmHg y/o caída documentada en SBP de al menos 40 mmHg); y

septicemia;

Población de estudio 2: aproximadamente 300 pacientes que tienen al menos uno de:

antibióticos IV ordenados en la entrada de orden del médico computarizada (CPOE) en el plazo de 24 horas de la inclusión;

exposición a medios de contraste en el plazo de 24 horas de la inclusión;

presión intraabdominal aumentada con insuficiencia cardiaca descompensada aguda; y

traumatismo grave como motivo primario para su admisión en la UCI y probabilidad de ser hospitalizado en la UCI durante 48 horas después de reclutamiento;

Población de estudio 3: aproximadamente 300 pacientes

se espera que estén hospitalizados a través de entorno de cuidados agudos (UCI o ED) con un factor de riesgo conocido de lesión renal aguda (por ejemplo, septicemia, hipotensión/choque (choque = BP sistólica < 90 mm Hg y/o la necesidad de apoyo vasopresor para mantener una MAP > 60 mm Hg y/o una caída documentada en SBP > 40 mm Hg), traumatismo mayor, hemorragia o cirugía mayor); y/o que se espera estén hospitalizados en la UCI durante al menos 24 horas después de la inclusión.

Criterios de exclusión

embarazo conocido;

individuos institucionalizados;

trasplante renal previo;

empeoramiento agudo conocido de la función renal antes de la inclusión (por ejemplo, cualquier categoría de criterios de RIFLE);

diálisis recibida (o bien aguda o bien crónica) en el plazo de 5 días antes de la inclusión o en necesidad inminente de diálisis en el momento de la inclusión;

infección conocida con virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un virus de hepatitis;

cumple solamente el criterio de inclusión de SBP < 90 mm Hg expuesto anteriormente, y no tiene choque según la opinión del médico encargado o investigador principal.

Después de proporcionar el consentimiento informado, se recogen una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 ml) y una muestra de orina (25-30 ml) de cada paciente. Entonces se recogen muestras de sangre y orina a las 4 (± 0,5) y 8 (± 1) horas después de la administración de contraste (si es aplicable); a las 12 (± 1), 24 (± 2) y 48 (± 2) horas después de la inclusión, y después de eso diariamente hasta del día 7 al día 14 mientras que el sujeto está hospitalizado. La sangre se recoge por medio de venipunción directa o por medio de otro acceso venoso disponible,

tal como una vaina femoral existente, línea venosa central, línea intravenosa periférica o catéter intravenoso. Estas muestras de sangre de estudio se procesan para obtener plasma en el sitio clínico, se congelan y se envían a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de orina de estudio se congelan y se envían a Astute Medical, Inc.

Ejemplo 4. Formato de inmunoensayo

Se miden analitos utilizando técnicas de inmunoensayo enzimático de tipo sándwich convencionales. Se inmoviliza un primer anticuerpo que se une al analito en pocillos de una microplaca de poliestireno de 96 pocillos. Se pipetean patrones de analito y muestras de prueba en los pocillos apropiados y cualquier analito presente se une al anticuerpo inmovilizado. Después de lavar cualquier sustancia no unida, se añade a los pocillos un segundo anticuerpo conjugado con peroxidasa del rábano que se une al analito, formando de ese modo complejos de tipo sándwich con el analito (si está presente) y el primer anticuerpo. Tras un lavado para eliminar cualquier reactivo anticuerpo-enzima no unido, se añade a los pocillos una disolución de sustrato que comprende tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. Se desarrolla color en proporción a la cantidad de analito presente en la muestra. El desarrollo del color se detiene y se mide la intensidad de color a 540 nm o 570 nm. Se asigna una concentración de analito a la muestra de prueba mediante comparación con una curva patrón determinada a partir de los patrones de analito.

Las concentraciones se expresan en los siguientes ejemplos tal como sigue: factor de crecimiento epidérmico – pg/ml, complemento C3 – mg/ml, interleucina-4 – pg/ml, interleucina-1 alfa – ng/ml, antígeno de nefritis tubulointersticial – g/ml, factor de crecimiento transformante beta-1 – pg/ml, proteína morfogénica ósea 7– pg/ml, osteopontina – pg/ml, netrina-1 – ng/ml y proteína alfa regulada por crecimiento regulado – pg/ml.

Ejemplo 5. Muestras de donante aparentemente sano y paciente con enfermedad crónica

Se adquirieron muestras de orina humana de donantes sin enfermedad crónica o aguda conocida (“donantes aparentemente sanos”) de dos proveedores (Golden West Biologicals, Inc., 27625 Commerce Center Dr., Temecula, CA 92590 y Virginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd., Virginia Beach, VA 23454). Se enviaron las muestras de orina y se almacenaron congeladas al menos a menos de -20ºC. Los proveedores proporcionaron información demográfica para los donantes individuales incluyendo género, raza (blanco/negro), estado de fumar y edad.

Se adquirieron muestras de orina humana de donantes con diversas enfermedades crónicas (“pacientes con enfermedad crónica”) incluyendo insuficiencia cardiaca congestiva, arteriopatía coronaria, enfermedad del riñón crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, diabetes mellitus e hipertensión de Virginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd., Virginia Beach, VA 23454. Se enviaron las muestras de orina y se almacenaron congeladas a menos de -20 grados centígrados. El proveedor proporcionó un cuaderno de recogida de datos para cada donante individual con la edad, el género, raza (negro/blanco), estado de fumar y consumo de alcohol, altura, peso, diagnóstico de enfermedad(es) crónica(s), medicaciones actuales y cirugías previas.

Ejemplo 6. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en la fase 0 de RIFLE

Los pacientes de la unidad de cuidados intensivos (UCI) se clasificaron según el estado del riñón como sin lesión (0), riesgo de lesión (R), lesión (I) e insuficiencia (F) de acuerdo con la fase máxima alcanzada en el plazo de 7 días de la inclusión tal como se determina por los criterios de RIFLE.

Se definieron dos cohortes como (cohorte 1) pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, y (cohorte 2) pacientes que llegaron a la fase R, I o F en el plazo de 10 días. Para tratar fluctuaciones de marcador normales que se producen dentro de pacientes en la UCI y evaluar de ese modo la utilidad para monitorizar el estado de LRA, se midieron los niveles de marcador en muestras de orina recogidas para la cohorte 1. Se midieron las concentraciones de marcador en muestras de orina recogidas de un sujeto a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase R, I o F en la cohorte 2. En las siguientes tablas, el tiempo “previo a la fase máx.” representa el ,momento en el que se recoge una muestra, en relación con el momento en el que un paciente particular llega a la fase de enfermedad más baja tal como se definió para esa cohorte, combinado en tres grupos que son +/-12 horas. Por ejemplo, 24 horas antes de este ejemplo (0 frente R, I, F) significaría 24 horas (+/-12 horas) antes de llegar a la fase R (o I si ninguna muestra está en R, o F sin ninguna muestra está en R o I).

Se midió cada marcador mediante métodos de inmunoensayo convencionales utilizando reactivos de ensayo disponibles comercialmente. Se generó una curva característica operativa (ROC) del receptor para cada marcador y se determinó el área debajo de cada curva de ROC (AUC). Los pacientes en la cohorte 2 también se separaron de acuerdo con el motivo para la adjudicación a la fase R, I o F al basarse en las mediciones de creatinina en suero (sCr), basarse en la diuresis (D) o basarse o bien en las mediciones de creatinina en suero o bien la diuresis. Es decir, para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero solas, la cohorte de fase 0 puede haber incluido pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en la diuresis; para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en la diuresis sola, la cohorte de fase 0 puede haber incluido pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero; y para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero o la diuresis, la cohorte de fase 0 contiene solamente pacientes en la fase 0 tanto para mediciones de creatinina en suero como para la diuresis.

Además, para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero o la diuresis, se usó el método de adjudicación que produjo la fase de RIFLE más grave.

Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase 0 de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase R, I o F de RIFLE) utilizando análisis de ROC. EE es el error estándar de la AUC, n es el número de muestra o pacientes individuales (“pts”, tal como se indica). Los errores estándar se calcularon tal como se describe en Hanley, J. A., y McNeil, B.J., The meaning and use of the area under a receiver operating characterictic (ROC) curve (ROC). Radiology (1982) 143: 29-36; los valores de p se calcularon con una prueba Z de dos colas. Una AUC < 0.5 es indicativa de un marcador que va a negativo para la comparación y una AUC > 0,5 es indicativa de un marcador que va a positivo para la comparación.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”), y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. La OR es la razón de probabilidades calculada para la concentración de corte particular y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 1.

Ejemplo 7. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en las fases 0 y R de RIFLE

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 6. Sin embargo, los pacientes que llegaron a la fase R pero no progresaron a la fase I o F se agruparon con pacientes de la fase 0 sin lesión en la cohorte 1. La cohorte 2 en este ejemplo incluía solamente pacientes que progresaron a la fase I o F. Se incluyeron las concentraciones de marcador en muestras de orina para la cohorte 1. Se incluyeron las concentraciones de marcador en muestras de orina recogidas en el plazo de 0, 24 y 48 horas para llegar a la fase I o F para la cohorte 2.

Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase 0 o R de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase I o F de RIFLE) utilizando análisis de ROC.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”) y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la razón de probabilidades calculada para la concentración de corte particular y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 2.

Ejemplo 8. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes que progresan de la fase R a las fases I y F

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 6, pero sólo los pacientes que llegaron a la fase R se incluyeron en este ejemplo. La cohorte 1 contenía pacientes que llegaron a la fase R pero no progresaron a la fase I o F en el plazo de 10 días, y la cohorte 2 incluía sólo pacientes que progresaron a la fase I o

F. Las concentraciones de marcador en muestras de orina recogidas en el plazo de 12 horas de llegar a la fase R se incluyeron en el análisis para tanto la cohorte 1 como la cohorte 2.

Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase R de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase I o F de RIFLE) utilizando análisis de ROC.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”), y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la razón de probabilidades calculada para la concentración de corte particular, y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 3.

Ejemplo 9. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en la fase 0 de RIFLE

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 6. Sin embargo, los pacientes que llegaron a la fase R o I pero no progresaron a la fase F se eliminaron del análisis. Los pacientes de la fase 0 sin lesión se incluyen en la cohorte 1. La cohorte 2 en este ejemplo incluía solamente pacientes que progresaron a la fase F. Las concentraciones de marcador máximas en las muestras de orina se incluyeron para cada paciente en la cohorte 1. Las concentraciones de marcador máximas en las muestras de orina recogidas en el plazo de 0, 24 y 48 horas para llegar a la fase F se incluyeron para cada paciente en la cohorte 2.

Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase 0 o R de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase I o F de RIFLE) utilizando el análisis de ROC.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”), se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la razón de probabilidades calculada para la concentración de corte particular, y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 4.

Ejemplo 10. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en la fase 0 de RIFLE

Se clasificaron pacientes de la unidad de cuidados intensivos (UCI) según el estado del riñón como sin lesión (0), riesgo de lesión (R), lesión (I) e insuficiencia (F) de acuerdo con la fase máxima alcanzada en el plazo de 7 días de la inclusión tal como se determina por los criterios de RIFLE.

Se definieron dos cohortes como (cohorte 1) pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, y (cohorte 2) pacientes que llegaron a la fase R, I o F en el plazo de 10 días. Para tratar fluctuaciones de marcador normales que ocurren dentro de pacientes en la UCI y de ese modo evaluar la utilidad para monitorizar el estado de LRA, se midieron los niveles de marcador en el componente de plasma de muestras de sangre recogidas para la cohorte 1. Se midieron las concentraciones de marcador en el componente de plasma de muestras de sangre recogidas de un sujeto a las 0, 24 horas y 48 horas antes de llegar a la fase R, I o F en la cohorte 2. En las siguientes tablas, el tiempo “antes de fase máx.” representa el momento en el que se recoge una muestra, en relación con el momento en el que un paciente particular llega al estado de enfermedad más bajo tal como se define para esa cohorte, combinado en tres grupos que están +/-12 horas. Por ejemplo, 24 horas antes para este ejemplo (0 frente a R, I, F) significaría 24 horas (+/-12 horas) antes de llegar a la fase R (o I si ninguna muestra está en R o F sin ninguna muestra está en R o I).

Se midió cada marcador mediante métodos de inmunoensayo convencionales utilizando reactivos de ensayo disponibles comercialmente. Se generó una curva característica operativa (ROC) del receptor para cada marcador y se determinó el área debajo de cada curva de ROC (AUC). Los pacientes en la cohorte 2 también se separaron de acuerdo con el motivo para la adjudicación a la fase R, I o F al basarse en las mediciones de creatinina en suero (sCr), basarse en la diuresis (D) o basarse o bien en mediciones de creatinina en suero o bien en diuresis. Es decir, para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose a las mediciones de creatinina en suero solas, la cohorte de fase 0 puede haber incluido pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en la diuresis; para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en la diuresis sola, la cohorte de fase 0 puede haber incluido pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero; y para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero o diuresis, la cohorte de fase 0 contiene solamente pacientes en la fase 0 tanto para mediciones de creatinina en suero como para la diuresis. Además, para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero o diuresis, se usó el método de adjudicación que produjo la fase de RIFLE más grave.

Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase 0 de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase R, I o F de RIFLE) utilizando análisis de ROC. EE es el error estándar de la AUC, n es el número de muestra o pacientes individuales (“pts”, tal como se indica). Los errores estándar se calcularon tal como se describe en Hanley, J. A., y McNeil, B.J., The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology (1982) 143: 29-36; los valores de p se calcularon con una prueba Z de dos colas. Una AUC < 0,5 es indicativa de un marcador que va a negativo para la comparación y una AUC > 0,5 es indicativa de un marcador que va a positivo para la comparación.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”) y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la razón de probabilidades calculada para la concentración de corte particular, y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 5.

Ejemplo 11. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en las fases 0 y R de RIFLE

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 10. Sin embargo, los pacientes que llegaron a la Fase R pero no progresaron a la fase I o F se agruparon con pacientes de la fase 0 sin lesión en la cohorte 1. La cohorte 2 en este ejemplo incluía solamente pacientes que progresaron a la fase I o F. Las concentraciones de marcador en el componente de plasma de las muestras de sangre se incluyeron para la cohorte

1. Las concentraciones de marcador en el componente de plasma de muestras de sangre recogidas en el plazo de 0, 24 y 48 horas para llegar a la fase I o F se incluyeron para la cohorte 2.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 6.

Ejemplo 12. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes que progresan de la Fase R a las fases I y F.

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 10, pero solamente los pacientes

que llegaron a la fase R se incluyeron en este ejemplo. La cohorte 1 contenía pacientes que llegaron a la fase R pero no progresaron a la fase I o F en el plazo de diez días y la cohorte 2 incluía solamente pacientes que progresaron a la fase I o F. Las concentraciones de marcador en el componente de plasma de las muestras de sangre recogidas en el plazo de 12 horas para llegar a la fase R se incluyeron en el análisis tanto para la cohorte 1

5 como para la cohorte 2.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o “corte”) y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la razón de probabilidades calculada para la

10 concentración de corte particular y el IC del 95% es el intervalo de confianza para la razón de probabilidades.

Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 7.

Ejemplo 13. Marcadores de lesión de riñón para evaluar el estado renal en pacientes en fase 0 de RIFLE

Se clasificaron los pacientes y se analizaron tal como se describe en el ejemplo 10. Sin embargo, los pacientes que llegaron a la fase R o I que no progresaron a la fase F se eliminaron del análisis. Los pacientes de la fase 0 sin

15 lesión se incluyen en la cohorte 1. La cohorte 2 en este Ejemplo incluía solamente pacientes que progresaron a la fase F. Las concentraciones de marcador máximas en el componente de plasma de las muestras de sangre se incluyeron a partir de cada paciente en la cohorte 1. Las concentraciones de marcador máximas en el componente de plasma de muestras de sangre recogidas en el plazo de 0, 24 y 48 horas para llegar a la fase F se incluyeron a partir de cada paciente en la cohorte 2.

20 Se determinó la capacidad para distinguir la cohorte 1 (sujetos que permanecen en la fase 0 o R de RIFLE) de la cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase I o F de RIFLE) utilizando análisis de ROC.

25 Los resultados de estos tres análisis para diversos marcadores de la presente invención se presentan en la figura 8.

La invención descrita de manera ilustrativa en el presente documento puede ponerse en práctica adecuadamente en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se den a conocer específicamente en el presente documento. Así, por ejemplo, en cada caso en el presente documento cualquiera de los términos “que comprende” y “que consiste esencialmente en” puede ser reemplazarse con cualquiera de los otros dos términos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Método para evaluar el estado renal en un sujeto, que comprende:

realizar uno o más ensayos configurados para detectar un marcador de lesión de riñón en una muestra de fluido corporal obtenida del sujeto para proporcionar uno o más resultados de ensayo, siendo el marcador

5 de lesión de riñón factor de crecimiento epidérmico y además opcionalmente uno o más de complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento;

y

10 correlacionar el/los resultado(s) de ensayo con uno o más de estratificación del riesgo, estadificación, pronóstico, clasificación y monitorización del estado renal del sujeto, en el que dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de insuficiencia renal aguda (IRA) futura padecida por el sujeto y opcionalmente uno o más cambios futuros en el estado renal del sujeto basándose en el/los resultado(s) de ensayo.

15 2. Método según la reivindicación 1, en el que dicho(s) resultado(s) de ensayo comprende(n):

(i)

una concentración medida de factor de crecimiento epidérmico, y opcionalmente además una o más de

(ii)

una concentración medida de complemento C3,

(iii) una concentración medida de interleucina-4,

(iv) una concentración medida de interleucina-1 alfa,

20 (v) una concentración medida de antígeno de nefritis tubulointersticial,

(vi) una concentración medida de factor de crecimiento transformante beta-1,

(vii) una concentración medida de proteína morfogénica ósea 7,

(viii) una concentración medida de osteopontina,

(ix) una concentración medida de netrina-1,

25 y en el que dicha etapa de correlación comprende, para cada resultado de ensayo, comparar dicha concentración medida con una concentración umbral, y

para un marcador que va a positivo, asignar una probabilidad aumentada de padecer IRA futura al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral o asignar una probabilidad disminuida de

30 padecer IRA futura al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral, o

para un marcador que va a negativo, asignar una probabilidad aumentada de padecer IRA futura al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral o asignar una probabilidad disminuida de

35 padecer IRA futura al sujeto cuando la concentración medida está por encima del umbral, en relación con una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral.
3. Método según la reivindicación 1, en el que la probabilidad de IRA futura y opcionalmente uno o más cambios futuros en el estado renal es que un acontecimiento de interés sea más o menos probable que se produzca en el plazo de un período seleccionado del grupo que consiste en 30 días, 21 días, 14 días, 7

40 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas y 12 horas.
4. Método según la reivindicación 1, en el que el sujeto se selecciona para la evaluación del estado renal basándose en (i) la preexistencia en el sujeto de uno o más factores de riesgo conocidos para IRA prerrenal, renal intrínseca o posrenal o (ii) la existencia de un diagnóstico de uno o más de insuficiencia cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria,

45 proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo del intervalo normal, cirrosis, creatinina en suero por encima del intervalo normal, septicemia, lesión de la función renal, función renal reducida o IRA,

o basándose en someterse o haberse sometido a cirugía vascular mayor, derivación de arterias coronarias u otra cirugía cardíaca, o basándose en la exposición a AINE, ciclosporinas, tacrolimús, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de

50 contraste radiopacos o estreptozotocina.
5. Método según la reivindicación 1, en el que dicho método es un método de asignación de un riesgo de

(i)

la aparición o no aparición futura de insuficiencia renal aguda en dicho sujeto,

(ii)

la aparición o no aparición futura de la necesidad de terapia de sustitución renal en dicho sujeto o

(iii) la aparición o no aparición futura de la necesidad de trasplante renal.

5 6. Método según la reivindicación 2, en el que dicho uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden insuficiencia renal aguda (IRA) futura en el plazo de 72 horas, en el plazo de 48 horas o en el plazo de 24 horas del momento en el que se obtiene la muestra de fluido corporal.
7. Uso de un marcador de lesión de riñón para el pronóstico de insuficiencia renal aguda futura in vitro, en el que el marcador de lesión renal es factor de crecimiento epidérmico, y opcionalmente además uno o más

10 de complemento C3, interleucina-4, interleucina-1 alfa, antígeno de nefritis tubulointersticial, factor de crecimiento transformante beta-1, proteína morfogénica ósea 7, osteopontina, netrina 1 y proteína alfa regulada por crecimiento.

Proteína morfogénica ósea 7