ES2532138T3 - Moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística - Google Patents

Abstract

Compuesto de Fórmula I **Fórmula** o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre:**Fórmula** en elque: R1 es -CH3, -CF3 o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH2OH; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; Ra es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo(SEM); siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno; y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono.

Description

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad según 35 U.S.C. § 119 de la solicitud provisional de EE.UU. con número de serie 61/107.844, presentada el23 de octubre de 2008 y titulada ~MODULATORS OF CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR".

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCiÓN

La presente invención se refiere a moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística ("CFTR"), a composiciones de los mismos, y a métodos con los mismos. La presente invención también se refiere a compuestos para su uso en métodos para tratar enfermedades utilizando moduladores de CFTR.

ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN

Los transportadores de casete de unión a ATP son una familia de proteinas transportadoras de membrana que regulan el transporte de una gran diversidad de agentes farmacológicos, fármacos potencialmente tóxicos y xenobióticos, así como aniones. Son proteínas de membrana homólogas que se unen y utilizan la adenosina trifosfato (ATP) celular para sus actividades especificas. Algunos de estos transportadores se descubrieron como proteínas de multirresistencia (como la glicoproteína MDRI-P o la proteina de multirresistencia MRP1), que defienden a las células cancerosas de los agentes quimioterapéuticos. Hasta la fecha, se han identificado 48 de tales transportadores y se han agrupado en 7 familias en base a su identidad de secuencia y función

Un miembro de la familia de transportadores de casete de unión a ATP comúnmente asociado con la enfermedad es el canal aniónico dependiente de AMPclATP, CFTR. CFTR se expresa en diversos tipos de células, incluidas células de epitelios de absorción y secreción, donde regula el flujo de aniones través de la membrana, así como la actividad de otros canales de iones y proteínas. En las células epiteliales, el funcionamiento normal de CFTR es fundamental para el mantenimiento del transporte de electrolitos en todo el cuerpo, incluido el tejido respiratorio y digestivo. CFTR está compuesto por aproximadamente 1.480 aminoácidos que codifican una proteina compuesta por una repetición en tándem de dominios transmembrana, conteniendo cada uno seis hélices transmembrana y un dominio de unión a nucleótidos. Los dos dominios transmembrana están unidos por un gran domino regulador (R) polar con múltiples sitios de fosforilación que regulan la actividad del canal y el tráfico celular.

Se ha identificado y secuenciado el gen que codifica el CFTR (véase Gregory, R.J. et al. (1990) Nature 347· 382-386; Rich, O.P. et al. (1990) Nature 347: 358-362), Riordan, J.R. et al. (1989) Science 245: 1066-1073). Un defecto en este gen provoca mutaciones en CFTR que dan lugar a la fibrosis quística rFQ"), la enfermedad genética fatal más común en seres humanos. La fibrosis quística afecta a aproximadamente uno de cada 2.500 recién nacidos en los Estados Unidos. Dentro de la población general de los Estados Unidos, hasta 10 millones de personas son portadoras de una sola copia del gen defectuoso sin efectos patológicos evidentes. Por el contrario, los individuos con dos copias del gen asociado a la Fa padecen los efectos debilitantes y mortales de la Fa, que incluyen la enfermedad pulmonar crónica

En los pacientes con fibrosis quistica, las mutaciones en CFTR expresadas de manera endógena en los epitelios respiratorios conducen a una secreción de aniones apicales reducida que provoca un desequilibrio en el transporte de iones y líquidos. La disminución resultante en el transporte de aniones contribuye a una mayor acumulación de mucosidad en el pulmón y las infecciones microbianas acompañantes que en última instancia causan la muerte en los pacientes con Fa . Además de enfermedades respiratorias, los pacientes con FQ padecen por lo general problemas gastrointestinales e insuficiencia pancreática que, si no se tratan, dan como resultado la muerte. Además, la mayoría de los varones con fibrosis quística son infértiles y la fertilidad disminuye entre las mujeres con fibrosis quística. A diferencia de los graves efectos de dos copias del gen asociado a la Fa , los individuos con una sola copia del gen asociado a la Fa presentan una mayor resistencia al cólera y a la deshidratación debida a la diarrea, lo que tal vez explica la frecuencia relativamente elevada del gen de la Fa en la población

El análisis de secuencias del gen del CFTR de cromosomas de FQ ha puesto de manifiesto diversas mutaciones causantes de enfermedad (Cutting, G.R. etal. (1990) Nature 346: 366-369; Dean, M. etal. (1990) Cell

61. 863-870; y Kerem, 8.S. et al. (1989) Science 245: 1073-1080; Kerem, 8.S. et al. (1990) Proc Natl Acad Sci EE.UU. 87: 8447-8451 ). Hasta la fecha, se han identificado más de 1.000 mutaciones causantes de enfermedad en el gen de la FQ (http://'AfWIN.genet.sickkids.on.ca/cflr/). La mutación más frecuente es una deleción de fenilalanina en la posición 508 de la secuencia de aminoácidos de CFTR, y se conoce comúnmente como .6.F508-CFTR. Esta mutación se produce en aproximadamente el 70 por ciento de los casos de fibrosis quística y está asociada con una enfermedad grave

La eliminación del residuo 508 en .lIr.F508-CFTR impide que la proteína naciente se pliegue correctamente. Esto da como resultado la incapacidad de la proteína mutante para salir del RE, y circular hasta la membrana plasmática. Como resultado, el número de canales presentes en la membrana es mucho menor que el observado en células que expresan el CFTR de tipo silvestre. Además del tráfico alterado, la mutación da como resultado la apertura y cierre defectuosos de canales. En conjunto, el número reducido de canales en la membrana y la apertura y cierre defectuosos conducen a un transporte reducido de aniones a través de los epitelios, lo que conduce a un transporte defectuoso de iones y líquidos. (Quinton, P.M. (1990), FASES J. 4: 2709-2727). Sin embargo, los estudios han demostrado que las cantidades reducidas de .lIr.F508-CFTR en la membrana soo funcionales, aunque menos que el CFTR de tipo silvestre. (Dolmans el al. (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Denning el al., supra; Pasyk y Foskelt (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). Además de .lIr.F508-CFTR, R117H-CFTR y G551 D-CFTR, otras mutaciones causantes de enfermedad en CFTR que dan como resultado la síntesis, la apertura y cierre de canales ylo el tráfico defectuosos, podrian regularse por aumento o disminución para cambiar la secreción de aniones y modificar la evolución ylo gravedad de la enfermedad

Aunque CFTR transporta diversas moléculas además de aniones, es evidente que esta función (el transporte de aniones, cloruro y bicarbonato) representa un elemento en un importante mecanismo de transporte de iones yag~a ~ través del epiteli? ~os demás elementos incluy~n el canal epitelial de Na-, ENaC, el cotransportador de Na /2CIIK , la bomba de Na -K -ATPasa y los canales de K de la membrana basolateral, que son responsables de la absorción de cloruro al interior de la célula

Estos elementos trabajan juntos para conseguir el transporte direccional a través del epitelio mediante su expresión y localización selectivas dentro de la célula. La absorción de cloruro tiene lugar mediante la actividad coordinada de ENaC y CFTR presentes en la membrana apical y de la bomba de Na+-K+-ATPasa y los canales de CI expresados en la superficie basolateral de la célula. El transporte activo secundario de clOfuro desde el lado luminal conduce a la acumulación de cloruro intracelular, que a continuación puede salir pasivamente de la célula a través de los canales de cr, dando como resultado un transporte vectorial. La disposición del cotransportador de Na+/2CrlK+, la bomba de Na+ -K+ -ATPasa y los canales de K+ de la membrana basolateral en la superficie basolateral y del CFTR en el lado luminal coordinan la secreción de cloruro mediante CFTR en el lado luminal. Debido a que probablemente el agua nunca se transporta activamente por sí misma, su flujo a través de los epitelios depende de minúsculos gradientes osmóticos transepiteliales generados por el flujo masivo de sodio y cloruro.

Existe la hipótesis de que el transporte defectuoso de bicarbonato debido a mutaciones en CFTR genera defectos en determinadas funciones secretoras. Véase, por ejemplo, "Cystic fibrosis· impaired bicarbonate secretion and mucoviscidosis", Paul M. Quinton, Lancet2008; 372: 415-417

Las mutaciones en CFTR que se asocian con una disfunción moderada de CFTR también son evidentes en los pacientes con afecciones que comparten determinadas manifestaciones de la enfermedad con la FQ, pero no cumplen con los criterios diagnósticos de la FQ. Éstos incluyen la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes, la pancreatitis crónica idiopática, la bronquitis crónica y la rinosinusitis crónica. otras enfermedades en las que se cree que el CFTR mutante es un faclor de riesgo junto con los genes modificadores o los factores ambientales incluyen la colangitis esclerosante primaria, la aspergilosis broncopulmonar alérgica y el asma

También se ha demostrado que el humo del tabaco, la hipoxia y factores ambientales que inducen la señalización hipóxica afectan a la función de CFTR y pueden contribuir a determinadas formas de enfermedad respiratoria, tal como la bronquitis crónica. Las enfermedades que puedan deberse a la función defectuosa de CFTR pero no cumplen con los criterios diagnósticos de la FQ se caracterizan como enfermedades relacionadas con el CFTR.

Además de la fibrosis quística, la modulación de la actividad de CFTR puede ser beneficiosa para otras enfermedades no generadas directamente por mutaciones en CFTR, tal como las enfermedades secretoras y otras enfermedades relacionadas con el plegamiento de proteínas mediadas por CFTR. CFTR regula el flujo de cloruro y bicarbonato a través de los epitelios de muchas células para controlar el movimiento de líquidos, la solubilización de proteínas, la viscosidad del moco y la actividad enzimática. Los defectos en CFTR pueden provocar la obstrucción de las vías respiratorias o de los conductos en muchos órganos, incluidos el hígado y el páncreas Los potenciadores son compuestos que potencian la actividad de apertura y cierre del CFTR presente en la membrana celular. Cualquier enfermedad que implique el espesamiento del moco, la regulación alterada de liquidas, la eliminación alterada de mucosidad o conductos bloqueados que conducen a la inflamación y a la destrucción de tejido podria ser candidata para los potenciadores

Estas incluyen, pero no se limitan a, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), el asma, la EPOC inducida por tabaquismo, la bronquitis crónica, la rinosinusitis, el estreñimiento, la enfermedad del ojo seco, y el síndrome de Sjogren, la enfermedad por reflujo gastroesofágico, los cálculos biliares, el prolapso rectal y la enfermedad inflamatoria intestinal. La EPOC se caracteriza por la limitación del flujo respiratorio que es progresiva y no completamente reversible. La limitación del flujo respiratorio se debe a la hipersecreción de mucosidad, al enfisema y a la bronquiolitis. Los activadores de CFTR mutante o de tipo silvestre ofrecen un tratamiento potencial

para la hipersecreción de mucosidad y el aclaramiento mucociliar alterado que es común en la EPOC. Concretamente, el aumento de la secreción de aniones a través de CFTR puede faci litar el transporte de líquido al líquido de la superficie de las vías respiratorias para hidratar el moco y optimizar la viscosidad del líquido periciliar Esto conduciría a un aclaramiento mucociliar potenciado y a una reducción de los síntomas asociados con la EPOC. Además, evitando la infección y la inftamación en curso gracias al despeje de las vías respiratorias, los moduladores de CFTR pueden prevenir o retardar la destrucción del parénquima de la vias respiratorias que caracteriza al enfisema y reducir o revertir el aumento del número y tamaño de células secretoras de moco que subyace a la hipersecreción de moco en las enfermedades de las vias respiratorias. La enfermedad del ojo seco se caracteriza por una disminución de la producción acuosa de lágrimas y perfiles anómalos de lípidos, proteínas y mucina en la película lacrimal. Existen muchas causas de ojo seco, algunas de las cuales incluyen la edad, la cirugía ocular LASIK, la artritis, los medicamentos, las quemaduras químicasltérmicas, las alergias y enfermedades tales como la fibrosis quística y el síndrome de SjOgren. El aumento de la secreción de aniones a traves de CFTR potenciaría el transporte de líquidos desde las células del endotelio corneal y las glándulas secretoras que rodean el ojo para aumentar la hidratación corneal. Esto ayudaria a aliviar los síntomas asociados con la enfennedad del ojo seco. El síndrome de SjOgren es una enfermedad autoinmunitaria en la que el sistema inmunitario ataca a las glándulas productOfas de humedad en todo el cuerpo, incluidos el ojo, la boca, la piel, el tejido respiratorio, el hígado, la vagina y el intestino. Los sintomas incluyen sequedad ocular, de boca y vaginal, así como enfermedad pulmonar. La enfermedad también está asociada con la artritis reumatoide, el lupus sistémico, la esclerosis sistémica y la polimiositisfdermatomiositis. Se cree que el tráfico defectuoso de proteínas origina la enfermedad, por lo que las opciones de tratamiento son limitadas. Los moduladores de la actividad de CFTR pueden hidratar los distintos órganos afectados por la enfermedad y pueden ayudar a aliviar los síntomas asociados. Los individuos con fibrosis quística tienen episodios recurrentes de obstrucción intestinal y una mayor incidencia de prolapso rectal, cálculos biliares, enfennedad por reflujo gastroesofágico, neoplasias GI y enfermedad inflamatoria intestinal, lo que indica que la función de CFTR puede desempeñar un papel importante en la prevención de tales enfennedades

Como se ha analizado anteriormente, se cree que la eliminación del residuo 508 en .lIr.F508-CFTR impide que la proteína naciente se pliegue correctamente, lo que da como resultado la incapacidad de esta proteína mutante para salir del RE y circular hasta la membrana plasmática. Como resultado, en la membrana plasmática hay cantidades insuficientes de la proteina madura y se reduce significativamente el transporte de cloruro dentro de los tejidos epiteliales. De hecho, se ha demostrado que este fenómeno celular del procesamiento defectuoso de CFTR en el RE por la maquinaria del RE es la base subyacente no solo para la enfermedad de Fa, sino para una gran diversidad de otras enfermedades aisladas y hereditarias. Las dos formas en las que la maquinaria del RE puede funcionar defectuosamente son por pérdida del acoplamiento con la exportación del RE de las proteinas lo que conduce a su degradación o por acumulación en el RE de estas proteinas defectuosas/incorrectamente plegadas lAridor M, et al. , Nature Med., 5 (7), págs. 745-751 (1999); Shastry, B.S., eta/. , Neurochem. Intemational, 43, págs 1-7 (2003); Rutishauser, J., el al., Swiss Med Wk ly, 132, págs. 211-222 (2002); Morello, JP 01 al. , TIPS, 21, págs. 466-469 (2000); Bross P., et al., Human Mul., 14, págs. 186-198 (1999)]. Las enfermedades asociadas con la primera clase de mal funcionamiento del RE son la fibrosis quistica (debida al .lIr.F50S-CFTR incorrectamente plegado como se ha analizado anteriormente), el enfisema hereditario (debido a la a1-antitripsina; variantes no Piz), la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de la coagulación-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteina C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lípidos, tal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de tipo 1, la abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como la enfermedad de células Ifpseudo-Hur1er, la mucopolisacaridosis (debida a las enzimas de procesamiento lisosomal), SandhoffTay-Sachs (debido a ¡3-hexosaminidasa), Crigler-Najjar de ti po 11 (debido a la UoP-glucuronilsialiltransferasa), la poliendocrinopatiafhiperinsulinemia, la diabetes mellitus (debida al receptor de la insulina), el enanismo de Laron (debido al receptor de la hormona del crecimiento), la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparatiroidismo primario (debido a la honnona preproparatiroidea), el melanoma (debido a tirosinasa). Las enfermedades asociadas con la última clase de mal funcionamiento del RE son la glucanosis CoG de tipo 1, el enfisema hereditario (debido a la a1 -antitripsina, variante PiZ), el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta (debida al procolágeno de tipo 1, 11 , IV), la hipofibrinogenemia hereditaria (debida al fibrinógeno), la deficiencia de ACT (debida a la a1 -antiquimotripsina), la diabetes insípida (DI), la DI neurohipofisaria (debida a la hormona vasopresinafreceptor V2), la DI nefrogénica (debida a la acuaporina 11), el síndrome de Charcot-Marie Tooth (debido a la proteína de mielina periférica 22), la enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer (debida a f3APP y las presenilinas), la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotr6fica, la parálisis supranuclear progresiva, la enf ermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa de tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentatorubro palidoluisiana y la distrofia miotónica, asi como encefalopatias espongiformes tales como la enfermedad de Creulzfeldt-Jakob hereditaria (debida al defecto de procesamiento de proteínas priónicas), la enfermedad de Fabry (debida a la a-galactosidasa A lisosomal), el sindrome de Straussler-Scheinker (debido a un defecto de procesamiento de Prp), la infertilidad, la pancreatitis, la insuficiencia pancreática, la osteoporosis, la osteopenia, el síndrome de Gorham, las canalopatías de cloruro, la miotonía congénita (formas Thomson y Becker), el sindrome de Bartler de tipo 111, la enfennedad de Dent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (DCP), la DCP con situs invorsus (también conocida como síndrome de Kartagener), la DCP sin silus invorsus y la aplasia ciliar y la enfermedad hepática.

Otras enfermedades implicadas por una mutación en CFTR incluyen la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (ABCCD), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática y la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA). Véase, ~CFTR-opathies: disease phenotypes associated with cystic fibrosis transmembrane regulator gene mutations~, Peader G. Noone y Michael R. Knowles, Respir Res. 2001 , 2: 328-332 (incorporado en el presente documento por referencia)

Además de la regulación por aumento de la actividad de CFTR, la reducción de la secreción de aniones por los moduladores de CFTR puede ser beneficiosa para tratar las diarreas secretoras, en las que el transporte de agua epitelial aumenta drásticamente como resultado dellransporte de cloruro activado por secretagogos. El mecanismo implica la elevación de AMPc y la estimu lación de CFTR

Aunque existen numerosas causas de diarrea, las principales consecuencias de las enfermedades diarreicas, resultado del excesivo transporte de cloruro son comunes a todas ellas, e incluyen deshidratación, acidosis, retraso del crecimiento y muerte. Las diarreas agudas y crónicas representan un problema médico importante en muchas zonas del mundo. La diarrea es a la vez un factor significativo en la desnutrición y la principal causa de muerte (5.000.000 muertes/año) en niños menores de cinco años de edad.

Las d iarreas secretoras son tamb ién una afección peligrosa en pacientes con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y enfermedad inflamatoria intestinal (EII) crónica. Cada año, dieciséis millones de viajeros a países en vías de desarrollo desde países industrializados desarrollan diarrea, variando la gravedad y el número de casos de diarrea dependiendo del país y de la zona del viaje

Por consiguiente, existe la necesidad de potenciadores de CFTR potentes y selectivos de formas de tipo silvestre y mutante de CFTR humano Estas formas mulantes de CFTR incluyen, pero no se limitan a, ó.F508del, G551D , R117H , 2789+5G->A.

También existe la necesidad de moduladores de la actividad de CFTR y composiciones de los mismos, que puedan utilizarse para modular la actividad de CFTR en la membrana celular de un mamífero.

Existe la necesidad de métodos para tratar enfermedades debidas a la mutación en CFTR que utilicen tales moduladores de la actividad de CFTR.

Existe la necesidad de métodos para modular la actividad de CFTR en una membrana celular ex vivo de un mamífero

En el documento WO 2006/003421 A1 se describen determinados compuestos útiles en la modulación de CFTR y para tratar diversas enfermedades mediadas por CFTR

RESUMEN DE LA INVENCiÓN

Se ha descubierto recientemente que los compuestos de la presente invención, y composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos, son útiles como moduladores de la actividad de CFTR. Estos compuestos tienen la fónnula general (1) '

I

o sales fannacéuticamente aceptables de los mismos, en la que R1, R2, R3, X, Y, YA se describen en general y en las clases y subclases que se presentan más adelante

Estos compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables son útiles para tratar o disminuir la gravedad de diversas enfermedades, trastomos o afecciones asociadas con mutaciones en CFTR

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN

Descripción general de los compuestos de la invención'

La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (1) útiles como moduladores de la actividad de

CFTR

5 .-'.

. .

, A:

R' O O (y-_..,

R'~--yX

U ..Jl ~ R'

~

15 (1);

o sales farmacéutica mente aceptables de los mismos, en la que· el anillo A está seleccionado de entre·

{a} (b) {e} {d}

en la que·

R' es -CH3, -CF3 o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; siempre que,

R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno;

X es carbono o nitrógeno; y es carbono o nitrógeno; 45 siempre que X e Y no sean simultáneamente nitrógeno.

Compuestos y definiciones:

Los compuestos de la presente invención incluyen los descritos en general anteriormente, y se ilustran adicionalmente mediante las clases, subclases y especies descritas en el presente documento. Tal como se utilizan en el presente documento, se aplicarán las siguientes definiciones a menos que se indique otra cosa.

La expresión "transportador de ABC~ ta l como se utiliza en el presente documento se refiere a una proteína

55 transportadora de ABC o un fragmento de la misma que comprende al menos un dominio de unión, en la que dicha proteína o fragmento de la misma está presente in vivo o in vitro . La expresión "dominio de unión", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un dominio en el transportador de ABC que puede unirse a un modulador Véase, por ejemplo, Hwang, T. C. et al., J. Gen. Physiol. (1998): 111(3), 477-90

El término "CFTR", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere al regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística o a una mutación del mismo que puede tener actividad reguladora, incluidos, pero no limi tados a, .lIr.F508-CFTR, R117H CFTR y G551 O CFTR (véase, por ej emplo, http://WINW.genet.sickkids.on.calcftrf, para las mutaciones de CFTR)

65 La expresión "que modula" tal como se utiliza en el presente documento, se refiere al aumento o disminución en una cantidad mensurable La expresión HCFTR normal" o "función normal de CFTR", tal como se utiliza en el presente documento, se

refiere al CFTR de tipo silvestre sin alteración alguna debida a factores ambientales tales como el tabaquismo, la

contaminación o cualquier factor que produzca inflamación en los pulmones.

La expresión "CFTR reducida" o "función reducida de CFTR", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a menos del CFTR normal o menos de la función normal de CFTR. Para los fines de la presente invención, los elementos quimicos se identifican según la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 753 ed. Además, los principios generales de la química orgánica se describen en "Organic

10 Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y "March's Advanced Organic Chemistry", 5" ed., Ed . Smith, M.B. y March, J., John Wiley & Sons, Nueva York: 2001

Las combinaciones de sustituyentes previstas por la presente invención son preferentemente aquellas que dan como resultado la formación de compuestos estables o quimicamente factibles. El término "estable", tal como se 15 utiliza en el presente documento, se refiere a compuestos que no se modifican sustancialmente cuando se someten a condiciones para permitir su producciÓfl, detección, y preferentemente su recuperaciórJ, pu rificación y uso para uno o más de los fines descritos en el presente documento. En algunas formas de realización, un compuesto estable o compuesto quimicamente factible es aquel que no se modifica sustancialmente cuando se mantiene a una temperatura de 40Q C o inferior, en ausencia de humedad u otras condiciones químicamente reactivas, durante al

20 menos una semana

La expresión "grupo protector", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un agente

utilizado para bloquear temporalmente uno o más sitios reactivos deseados en un compuesto multifuncional. En

determinadas formas de realización, un grupo protector tiene una o más, o preferentemente todas, las siguientes

25 características: a) reacciona selectivamente con buen rendimiento para dar un sustrato protegido que es estable a las reacciones que se producen en uno o más de los demás sitios reactivos; y b) puede extraerse selectivamente con buen rendimiento mediante reactivos que no atacan al grupo funcional regenerado. Se detallan grupos protectores ejemplares en Greene, T.W., Wuts, P. Gen "Protective Groups in Organic Synthesis", tercera edición, John Wiley & Sons, Nueva York: 1999 y otras ediciones de este libro

A menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento también pretenden incluir todas las formas isómeras (por ejemplo, formas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales» de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, los isómeros de doble enlace (Z) y (EL Y los isómeros conformacionales (Z) y (E). Por lo tanto, los isómeros

35 estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o confOfTTlacionales) de los presentes compuestos pertenecen al alcance de la invención. A menos que se indique otra cosa, todas las formas tautómeras de los compuestos de la invención pertenecen al alcance de la invención; por ejemplo, los compuestos de Fórmula (1) puede existir como tautómeros·

,-..

R' O O

(y, .... A;

45 -.

R~N~X

. UNJi .H

R'

H

(1) (1).

Además, a menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento

55 también pretenden incluir compuestos que difieren s610 en la presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, pertenecen al alcance de la presente invención los compuestos que tengan las presentes estructuras excepto p'0r la sustitución de hidrógeno por deuterio o tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono ennquecldo con 1 C o 14C. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como sondas o herramientas analiticas en ensayos biológicos

Descripción de los compuestos ejemplares:

Según una forma de realización, la presente invención proporciona compuestos de Fórmula (1)·

.

.

lA -:

5 [(y-_...

R2 O O

R3~N~X

I A I H R'

N H

(1); 15

o sales farmacéulicamente aceptables de los mismos, en la que: el anillo A está seleccionado de entre"

(a) (b) (e) (d)

en la que" 35 R' es -eH:), -CF:¡. o -eN;

R2

es hidrógeno, -eH:), -CF3, -OH o -CH20H; R3

es hidrógeno, -eH:), -QCH3 o -eN; siempre que, R2 Y R3 no sean simultáneamente hidrógeno; y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

En un aspecto de esta forma de realizaciórJ, el compuesto es la amina libre.

En otro aspecto, el compuesto está en forma de sal farmacéuticamente aceptable, tal como la sal Hel. En una forma de realización, el anillo A es

l-~

(a)

En una forma de realización, el anillo A es

\-N~

(b) "l . 65 En olra forma de realización, el anillo A es

\:N4'

(e)

En otra forma de realización, el anillo A es

En una forma de realización, R' es -CH3. 25 En una forma de realización, R' es -CF3.

En otra forma de realización, R' es -CN.

En una forma de realización, R2 es -CH3.

En otra forma de realización, R2 es -CF3.

En otra forma de realización, R2 es -OH 35 En aira forma de realización, R2 es -CH20H En una forma de realización, R3 es -CH3 En una forma de realización, R3 es -OCH3. En aira forma de realización, R3 es -CN. En una forma de realización, R2 es hidrógeno; y R3es -CH3, -OCH3 o -CN

45 En varias formas de realización de Fórmula (1), el anillo A es

¡-N~

(a)

R' es -CF3, R2 es hidró.peno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R' es -CH3. En otras formas de realización, R es -CN. En una forma de realización, R3 es -OCH3. 0, R3es -CH3. O, R3es -CN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (1), el anillo A es

!-N~

65 (a)

5

R1 es -CF3, R2 es -CH3, -CF3l -OH o -CHzOH, y R3 es hidrógeno, En otras formas de realización, R1 es -CH3_ En otras formas de realización , R es -CN En una forma de realización, R2 es -CH3 O, R2es -CF3_ O, R2 es -OH_ O, R2 es -CH,2 0H. En otra forma de realización, R,2 es -CH3, -CF3, -OH o -CHpH; y RJ es hidrógeno

10 15 20

En varias formas de realización de Fórmula (1), el anillo A es \-N,¿-r (b) I'J R1 es -CF3, R2 es hidrópeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de real ización, R1 es -CH3. En otras formas de rea lización, R es -CN _ En una forma de rea lización, R3es -CH:) _O, R3es -OCH 3_O, R3es CN En varias formas de realización de Fórmula (1), el anillo A es

25

\-N¿r (b) I'J •

30

R1 es -CF3, R2 es hidrópeno; y RJ es -CH3, -OCH3 o -CN_ En otras formas de real ización, R1 es -CH3. En otras formas de rea lización, R es -CN. En una forma de rea lización, R3es -CH3. O, R3es -OCH 3. O, R3es -CN .

En formas de rea lización adicionales de Fórmula (1), el an illo A es

35 40 45

\-N--=:!T (b) ~ R1 es -CF3, R2 es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno_ En otras formas de realización, R1 es -CH3_ En otras formas de realización , R1 es -CN _En una forma de rea lización, R2es -CH3_ O, R2es -CF3_ O, R2es -OH O, R2 es -CH,2 0H. En varias formas de realización de Fórmula (1), el ani llo A es

50

55

R1 es -CF3, R2 es hidrópeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN _ En otras formas de real ización, R1 es -CH3 En otras formas de rea lización, R es -CN _ En una forma de rea lización, R3es -CH3_ O, R3es -OCH 3_O, R3es CN

60

En formas de realización adicionales de Fórmula (1), el an illo A es

65

R1 2 3

es -CF3, Res -eH], -CF3, -OH o. -CH20H, y Res hidrógeno. En otras formas de realización, R1 es -eH3_ En otras formas de realización, R1 es -eN. En una forma de realización, R2 es -eH]_ 0, R2 es -CF3_ O, R2es -OH. O, R2 es -CH20H

En varias formas de realización de Fórmula (1), el anillo A es

15 R'O H

\:N~

(d)

R1 2 3

es -CF3, Res hidrópeno; y Res -eH3, -QCH3 o. -eN. En otras formas de realización, R1 es -eH3_ En otras formas de realización, R es -eN. En una forma de realizaCIón, R3 es -eH3_O, R3 es -OCH3_O, R3 es -eN

En formas de realización adicionales de Fórmula (1), el anillo A es

R1

es -CF3. R2 es -eH], -CF3\ -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno. En otras formas de realización, R1 es -eH3_ En otras formas de realización, R es -eN. En una forma de rea lización, R2 es -CH3. O, R2es -CF3. O, R2 es -OH. O, R2 es -CH20H.

Según otra forma de realización, la presente invención propOfciona compuestos de Fórmula (la)·

(la)¡

55 o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que

el anillo A está seleccionado de entre·

(al (b) (el (d)

5

en la que: R1 es -eH), -CF:¡. o -eN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -eH), -QCH3 o -eN; siempre que, R2 Y R3 no sean simultáneamente hidrógeno. En una forma de realización de Fórmula (la), el anillo A es

15

¡-N~ (a)

En una forma de realización de Fórmula (la), el anillo A es

25

\-N¿r (b) \J En aira forma de realización de Fórmula (la), el anillo A es

35

En aun otra forma de realización de Fórmula (la), el an illo A es

45

55 65

En una forma de realización de Fórmula (la), R1 es -CH3. En una forma de realización de Fórmula (la), R1 es -CF3. En otra forma de realización de Fórmula (la), R1 es -eN En una forma de realización de Fórmula (la), R2 es -CH3 En otra forma de realización de Fórmula (la), R2 es -CF3 En aira forma de realización de Fórmula (la), R2 es -OH. En otra forma de realización de Fórmula (la), R2 es -CH20H En una forma de realización de Fórmula (la), R3 es -CH3.

En una forma de realización de Fórmula (la), R3 es -OCH3.

En otra forma de realización de Fórmula (la), R3 es -CN

5 En una forma de realización de Fórmula (la), R2 es hidrógeno; y R3es -CH3, -OCH3 o -CN En otra forma de realización de Fórmula (la), R2 es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; y R3es hidrógeno. En varias formas de realización de Fórmula (la), el anillo A es

!-N4i

15 (a)

R1

es -CF3, R2 es hidró.peno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3 En otras formas de rea lización, R es -CN. En una forma de rea lización, R3es -OCH3. 0, R3es -CH 3. 0, R3es -CN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (la), el anillo A es

25 ¡-N~

(a)

1 1

30 Res -CF3, R2 es -CH), -CF3\ -OH o -CH,OH, y R3 es hidrógeno. En otras formas de realización, Res -CH). En otras formas de realización, R es -CN. En una forma de realización, R' es -CH3. 0, R' es -CF3. 0, R' es -OH. 0, R' es -CH, OH

En varias formas de realización de Fórmula (la), el anillo A es

\-N~

(b) \:l

R1

es -CF3, R2 es hidrópeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3 En otras formas de rea lizaCión, R es -CN. En una forma de rea lizaCIón, R3es -CH3. 0, R3es -OCH3. 0, R3es -CN

45 En formas de realización adicionales de Fórmula (la), el anillo A es

\-N--I?"

(b) \:l

R1

es -CF3, R2 es -CH3, -CF3\ -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En 55 otras formas de realización, R es -CN. En una forma de realización, R2es -CH3. 0, R2es -CF3. 0, R' es -OH. 0, R' es -CH20H.

En varias formas de realización de Fórmula (la), el anillo A es

R1

es -CF3, R2 es hidrópeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En otras formas de rea lizaCión, R es -CN. En una forma de rea lizaCIón, R3es -CH3. 0, R3es -OCH3. 0, R3es -CN

En formas de realización adicionales de Fórmula (la), el anillo A es

R'O H

~N~

(e)

R' es -CF3, R2 es -CH3, -CF3\ -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno En otras formas de realización, R' es -CH3. En otras formas de realización, R es -CN. En una forma de realización, R2 es -CH3. 0, R2es -CF3. 0, R2 es -OH. 0, R2 es -CH20H.

En varias formas de realización de Fórmula (la), el anillo A es

ROO H

~N4'

(d)

R1

es -CF3, R2 es hidrópeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En otras formas de realizaCión, R es -CN. En una forma de realizaCIón, R3es -CH3. 0, R3es -OCH3. 0, R3es -CN

En formas de realización adicionales de Fórmula (la), el anillo A es

R' es -CF3, R2 es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno En otras formas de realización, R' es -CH3. En otras formas de realización, R' es -CN. En una forma de rea lización, R2 es -CH3. 0, R2es -CF3. 0, R2 es -OH. 0, R2 es -CH20H.

Según otra forma de realización, la presente invención proporciona compuestos de Fórmula (lb):

: A :

R' O O ~--_.,

'" N ~N

R'1Xr I

I '" N I H R'

H

(lb);

o sales farmacéutica mente aceptables de los mismos, en la que·

el anillo A está seleccionado de entre·

(a) (b) (e)

en la que" R1

es -eH3, -CFl o -eN;

R2

es hidrógeno, -eH), -CF3. -OH o -CH20H;

R3

15 es hidrógeno, -eH), -OCH3o -eN; siempre que,

R2 y R3

no sean simultáneamente hidrógeno En una forma de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

I-N~

25 ,a)

En una forma de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

\-N¿r

(b) \1

En otra forma de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

En aun otra forma de rea lización de Fórmula (lb), el anillo A es

En una forma de realización de Fórmula (lb), R1 es -CH3 En una forma de realización de Fórmula (lb), R1 es -CF3 En otra forma de realización de Fórmula (lb), R1 es -eN.

En una forma de realización de Fórmula (lb), R2 es -CH3

R"OH

>C N4t

(d)

En otra forma de realización de Fórmula (lb), R2 es -CF3. En aira forma de realización de Fórmula (lb), R2 es -OH 5 En otra forma de realización de Fórmula (lb), R2 es -CH20H En una forma de realización de Fórmula (lb), R3 es -CH3. 3

En una forma de realización de Fórmula (lb), Res -OCH3.

En otra forma de realización de Fórmula (lb), R3 es -CN 2 3

En una forma de realización de Fórmula (lb), Res hidrógeno; y Res -CH3, -OCH3 o -CN.

15 En aira forma de realización de Fórmula (lb), R2 es -CH3, -CF3, -OH o -CH2ÜH; y R3es hidrógeno. En varias formas de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

l-N~

(a)

25 R1 es -CF3, R2 es hidr6~eno; y R3 es -CH3, -OCH3, -OR -CN. En otras formas de rea lización, R1 es -CN En otras formas de realización, R es -CH3. En una forma de realización, R3 es -OCH3. 0, R3 es -CH3. O, R3es -CN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (lb), el anillo A es

l-N~

(a)

R1es -CF3, R2es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno. En olras formas de realización, R1 es -CN. En otras formas de realización, R' es -CH3. En una forma de realización, R2 es -CH3. 0, R2 es -CF3. O, R2 es -OH. 0, R2 es -CH20H.

En varias formas de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

45 \-N,¿r

(b) \:j

R1es -CF3, R2 es hidrógeno; y R3 es -CH3, -OCH3 o -CN. En otras formas de realización, R1es -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En una forma de realización, R3es -CH3. 0, R3 es -OCH3. 0, R3 es -CN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (lb), el anillo A es

\-N¿r

(b) \l

R1es -CF3, R2es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno. En otras formas de realización, R1 es -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En una forma de realización, R2 es -eH). 0 , R2 es -CF3 O, R2 es -OH. 0 , R2 es -CH20H.

En varias formas de realización de Fórmula (lb) el anillo A es

R' es -CF3. R2 es hidrógeno; y R3 es -CH3. -QCH3 o -eN_ En otras formas de realización, R1 es -eN En otras formas de realización, R' es -CH3. En una forma de realización, R3es -CH3. 0 , R3 es -QCH3. O, R3 es -eN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (lb), el anillo A es

R' es -CF3. R2es -CH3. -CF3, -OH o -CHzOH, y R3 es hidrógeno En otras formas de realización, R' es -eN. En otras 25 formas de realización, R' es -eH3. En una forma de realización, R2 es -CH3. 0, R2 es -CF3. 0, R2 es -OH. 0, R2 es -CHzOH.

En varias formas de realización de Fórmula (lb), el anillo A es

R2

R1 es -CF3, es hidrógeno; y R3 es -CH3, -QCH3 o -eN. En olras formas de realización, R 1 es -eN . En otras formas

3 3 3

40 de realización, R' es -eH). En una forma de realización, Res -CH3. O, Res -OCH3. O, Res -CN.

En formas de realización adicionales de Fórmula (lb), el anillo A es

R1

es -CF3, R2es -CH3, -CF3, -OH o -CH20H, y R3 es hidrógeno. En otras formas de realización, R1 es -CN. En otras formas de realización, R1 es -CH3. En una forma de realización, R2 es -CH3. O, R2 es -CF3. O, R2 es -OH. O, R2 es -CH20H

Los compuestos representativos de la presente invención se exponen a continuación en la siguiente Tabla

H

bU/{? J5~h.2. ~N~ ~

NI~ . JFF

~N

N

~rW

Esquemas generales de síntesis

Los compuestos de la presente invención se preparan fácilmente mediante métodos conocidos en la técnica En los esquemas de los Ejemplos que se presentan más adelante se ilustran métodos ejemplares para la preparación de los compuestos de la presente invención

Usos, fonnulación y administración

Composiciones farmacéuticamente aceptables

En un aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéutica mente aceptables, en las que estas composiciones comprenden cualquiera de los compuestos como se describen en el presente documento, y comprenden opcionalmente un excipiente, adyuvante o vehículo farmacéutica mente aceptable. En determinadas formas de realización, estas composiciones comprenden adicionalmente de manera opcional uno o más agentes terapéuticos adicionales.

También se comprenderá que algunos de los compuestos de la presente invención pueden existir en forma libre para el tratamiento o cuando sea apropiado, como un derivado farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo. Un derivado farmacéutica mente aceptable o un profármaco incluye, pero no se limita a, ésteres, sales de tales ésteres, sales farmacéuticamente aceptables, o cualquier otro aducto o derivado, que tras la administración a un paciente que lo necesita es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un compuesto como se describe de otra manera en el presente documento, o un metabolito o residuo del mismo

Tal como se utiliza en el presente documento, ta expresión "sal farmacéutica mente aceptable" se refiere a aquellas sales que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, y acordes con una relación beneficio/riesgo razonable. Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier salo sal de un éster de un compuesto de la presente invención, no tóxica, que, tras la administración a un receptor, es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un compuesto de la presente invención o un metabolito con actividad inhibidora o residuo del mismo

Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica Por ejemplo, S. M. Serge, el al. describen sales farmaceuticamente aceptables detalladamente en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen las derivadas de bases y ácidos inorgánicos y orgánicos adecuados. Los ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas farmacéutica mente aceptables son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido percl6rico o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o utilizando otros métodos utilizados en la técnica tales como el intercambio iónico.

Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, edisilato (etanodisulfonato), etanosulfonato, fonniato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, la urato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tíocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato, y símilares. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N· (alquilo C l-4)4. La presente invención también prevé la cuatemización de cualquier grupo básico que contiene nitrógeno de los compuestos descritos en el presente documento. Pueden obtenerse productos dispersables o solubles en aceite

o agua mediante tal cuatemización. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y similares. Las sales farmacéutica mente aceptables adicionales incluyen, cuando

sea apropiado, amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes amina formados utilizando contra iones tales como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior y sulfonato de arilo

Como se ha descrito anteriormente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención comprenden adicionalmente un excipiente, adyuvante o vehiculo farmacéutica mente aceptable, que, tal como se utiliza en el presente documento, incluye cualquiera y todos los disolventes, diluyentes, u otro vehiculo líquido, auxiliares de suspensión o dispersión, tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubricantes y similares, tal como resulte adecuado para la forma de dosificación concreta deseada. En el documento Remington's Pharmaceutical Sciences, decimosexta edición,

E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) se describen diversos vehículos utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticamente aceptables y técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Excepto en la medida en que cualquier medio vehicular convencional sea incompatible con los compuestos de la invención, tal como que produzca cualquier efecto biológico indeseable o interactúe de otro modo de manera perjudicial con cualquier otro componente o componentes de la composición farmacéutica mente aceptable, también queda contemplado su uso dentro del alcance de la presente invención. Algunos ejemplos de materiales que pueden hacer de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como seroalbúmina humana, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico o sorbato de potasio, mezclas parciales de glicéridos de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, poliacrilatos, ceras, polimeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, lanolina, azúcares tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón; aceite de cártamo; aceite de sésamo; aceite de oliva; aceite de maíz y aceite de soja; glicoles; tales como propilenglicol o polietilenglicol; ésteres tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; amortiguadores del pH tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua apir6gena; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico, y soluciones de tampón fosfato, así como otros lubricantes compatibles no tóxicos tales como lauril sulfato sódico y estearato de magnesio, asi como colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, edulcorantes, saporíferos y aromatizantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en la composicioo, según el criterio del formulador.

Usos de /os compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables

En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (1) para su uso en un método para tratar o disminuir la gravedad de una afección, enfermedad o trastorno implicado por la mutación de CFTR. En determinadas formas de realización, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (1) para su uso en un método de tratamiento de una afección, enfermedad o trastorno implicado por una deficiencia de la actividad de CFTR, comprendiendo el método la administración de una composición que comprende un compuesto de Fórmula

(1) a un sujeto, preferentemente un mamifero, que lo necesita.

En determinadas formas de realización, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (1) para su uso en un método de tratamiento de enfermedades asociadas con la función reducida de CFTR debida a mutaciones en el gen que codifica el CFTR o factores ambientales (por ejemplo, humo). Estas enfermedades incluyen la fibrosis quistica, la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD), la infertilidad femenina debida a la ausencia congénita del útero y la vagina (CAUV), la pancreatitis crónica idiopática (ICP), la pancreatitis idiopática recurrente, la pancreatitis aguda idiopática, la rinosinusitis crónica, la colangitis esclerosante primaria, la diabetes, el ojo seco, el estreñimiento, la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), las enfermedades óseas (por ejemplo, la osteopomsis) y el asma

En determinadas fonnas de realización, la presente invención proporciona un método para tratar enfermedades asociadas con la función normal de CFTR. Estas enfermedades incluyen la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la rinosinusitis, el estreñimiento, la pancreatitis, incluidas la pancreatitis crónica, la pancreatitis recurrente y la pancreatitis aguda, la insuficiencia pancreática, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática, la enfermedad hepática, el enfisema hereditario, los cálculos biliares, la enfermedad por reflujo gastroesofágico, las neoplasias gastrointestinales, la enfermedad inftamatoria intestinal, el estreñimiento, la diabetes, la artritis, la osteoporosis y la osteopenia

En determinadas formas de realización, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (1) para su uso en un método para tratar enfermedades asociadas con la función normal de CFTR, incluidas la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de la coagulaciÓfl-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteína C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lipidos, lal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de tipo 1, la abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como la enfermedad de células IIpseudo-Hurler, la mucopolisacaridosis, SandhoffTay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo 11, la

poliendocrinopatía/hiperinsulinernia, la diabetes mellitus, el enanismo de Laron, la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparatiroidismo primario, el melanoma, la glucanosis CDG de tipo 1, el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta, la hipofibrinogenemia hereditaria, la deficiencia de ACT, la diabetes insípida (DI), la DI neurohipofisaria, la DI nefrogénica, el síndrome de Charcot-Marie Tooth, la enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica, la parálisis supranuclear progresiva, la enfermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa de tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, la atrofia dentatorubro palidoluisiana y la distrofia miotónica, asi como encefalopatías espongiformes, tales como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida al defecto de procesamiento de proteínas pri6nicas), la enfermedad de Fabry, el síndrome de Straussler-Scheinker, el sindrome de Gorham, las canalopatías de cloruro, la miotonia congénita (formas Thomson y Becker), el sindrome de BarUer de tipo 111, la enfermedad de Dent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (DCP), la DCP con Mus in versus (también conocida como sindrome de Kartagener), la DCP sin situs inversus y la aplasia ciliar o la enfermedad de Sjogren, que comprende la etapa de administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de una composición que comprende un compuesto de la presente invención.

Según una forma de realización preferente alternativa, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (1) para su uso en un método de tratamiento de la fibrosis quística que comprende la etapa de administrar a dicho mamífero una composición que comprende la etapa de administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de una composición que comprende un compuesto de la presente invención

Según la invención, una ~cantidad eficaz~ del compuesto o composición farmacéuticamente aceptable es aquella cantidad eficaz para tratar o reducir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o afecciones según lo expuesto anteriormente

Los compuestos y composiciones, según el método de la presente invención, pueden administrarse utilizando cualquier cantidad y cualquier vía de administración eficaz para tratar o reducir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o afecciones según lo expuesto anteriormente.

Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para tratar o reducir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes que presentan actividad residual de CFTR en la membrana apical del epitelio respiratorio y no respiratorio. La presencia de la actividad residual de CFTR en la superficie epitelial puede detectarse fácilmente utilizando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, técnicas electrofisiolágicas, bioquímicas o histoquimicas convencionales. Tales métodos identifican la actividad de CFTR utilizando técnicas electrofisiológicas in vivo o ex vivo, la medición de las concentraciones en sudor o en saliva de c r o técnicas bioquímicas o histoquímicas ex vivo para controlar la densidad de la superficie celular. Mediante tales métodos, puede detectarse fácilmente la actividad residual de CFTR en pacientes homocigóticos o heterocigóticos para diversas mutaciones diferentes, incluidos pacientes homocigóticos o heterocigóticos para la mutación más común, .6.F50B .

Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para tratar o reducir la gravedad de la fibrosis quística en pacientes que tienen actividad res idual de CFTR inducida o aumentada utilizando métodos farmacológicos o terapia génica. Tales métodos aumentan la cantidad de CFTR presente en la superficie celula r, induciendo así una actividad de CFTR hasta entonces ausente en un paciente o aumentando el nivel existente de actividad residual de CFTR en un paciente

Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para tratar o reducir la gravedad de la fibrosis quística en los pacientes dentro de determinados genotipos que presentan actividad residual de CFTR, por ejemplo, mutaciones de clase 111 (regulación o apertura y cierre allerados), mutaciones de clase IV (conductancia modificada) o mutaciones de clase V (síntesis reducida) (Lee R. Choo-Kang, Pamela L., Zeitlin, Type 1, 11,111, IV, and V cystic fibmsis Tansmernbrane Conduclance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinion in Pulmonary Medicine 6:521-529, 2000). Otros genotipos de pacientes que presentan actividad residual de CFTR incluyen pacientes homocigóticos para una de estas clases o heterocigóticos con cualquier otra clase de mutación, incluidas mutaciones de clase 1, mutaciones de clase 11 o una mutación que carezca de clasificación

Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para tratar o reducir la gravedad de la fibrosis quistica en pacientes dentro de determinados fenotipos clínicos, por ejemplo, un fenotipo clínico de moderado a leve que por lo general se correlaciona con la cantidad de actividad residual de CFTR en la membrana apical de los epitelios. Estos fenotipos incluyen pacientes que presentan ínsuficiencia pancreática o pacientes con diagnóstico de pancreatitis idiopática y ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes o enfermedad pu lmonar leve.

La cantidad exacta necesaria variará de sujeto a sujeto, dependiendo de la especie, edad y estado general del sujeto, la gravedad de la infección, el agente concreto, su modo de administración, y similares. Los compuestos de la invención se formulan preferentemente en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y por cuestiones de uniformidad de la dosificación. La expresión "forma de dosificación unitaria~ tal como se utiliza en el

presente documento, se refiere a una unidad físicamente discreta de agente apropiada para el paciente a tratar. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de los compuestos y composiciones de la presente invención lo decidiré: el médico a cargo dentro del alcance del criterio médico. El nivel de dosis eficaz específico para cualquier paciente u organismo concreto dependerá de diversos factores, incluidos el trastorno a tratar y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto especifico empleado; la composición especifica empleada; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación con o simultáneamente al compuesto específico empleado, y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas. El término ~paciente~, tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un animal, preferentemente un mamifero, y lo más preferentemente un ser humano

Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden administrarse a seres humanos y a otros animales por vía oral, rectal, parenteral, intracistemal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como mediante polvos, pomadas, gotas o parche), bucal, como aerosol oral o nasal o similares, dependiendo de la gravedad de la infección que se está tratando. En determinadas formas de realización, los compuestos de la invención pueden administrarse por vía oral o parenteral a niveles de dosificación de aproximadamente 0,01 mglkg a aproximadamente 50 mglkg y preferentemente de aproximadamente 0,5 mglkg a aproximadamente 25 mgfkg, de peso corporal del sujeto al día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral incluyen, pero no se limitan a, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes de solubilización y emulsionantes tales como alcohol etilico, alcohol isopropilico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencilico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1 ,3-butilenglicol, dimetil forma mida, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurilico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán, y mezclas de los mismos. Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como humectantes, emulsionantes y agentes de suspensión, edulcorantes, saporíferos yaromatizantes

Pueden formularse preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones oleaginosas o acuosas inyectables estériles según la técnica conocida utilizando dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un disolvente o diluyente parenteralmente aceptable no tóxico, por ej emplo, como solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, la solución de Ringer, USP y la solución de cloruro de sodio isotónica. Además, como medio disolvente o de suspensión se emplean convencionalmente aceites no volátiles estériles. Con este fin puede emplearse cualquier aceite no volátil suave incluidos mono o diglicéridos sintéticos Además, en la preparación de inyectables se utilizan ácidos grasos tales como el ácido oleico.

Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso

Con el fin de prolongar el efecto de un compuesto de la presente invención, a menudo es deseable ralentizar la absorción del compuesto a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede lograrse utilizando una suspensión liquida de material cristalino o amorfo con escasa solubilidad en agua. La velocidad de absorción del compuesto depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. Como alternativa, la absorción retardada de una forma de compuesto administrada parenteralmente se logra disolviendo o suspendiendo el compuesto en un vehículo oleoso. Las formas de liberación prolongada inyectables se elaboran formando matrices microencapsuladas del compuesto en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido. Dependiendo de la relación entre compuesto y polímero y de la naturaleza del polímero concreto empleado, puede controlarse la velocidad de liberación del compuesto. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhidridos). Las formulaciones inyectables de liberación prolongada también se preparan inmovilizando el compuesto en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con los tejidos corporales.

Las composiciones para la administración rectal o vaginal son preferentemente supositorios que pueden prepararse mezclando los compuestos de la presente invención con excipientes o vehiculos no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio que son sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a la temperatura corporal y por lo tanto se funden en el recto o en la cavidad vaginal y liberan el compuesto activo

Las formas de dosificación sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente o vehículo inerte farmacéuticamente aceptable tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico yfo a) cargas o

diluyentes tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido silícico, b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga, c) humectantes, tal como glicerol, d) agentes disgregantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos, y carbonato sódico, e) agentes retardantes de la disolución, tal como parafina, f) aceleradores de la absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, g) humeclantes tales como, por ejemplo, alcohol cetilico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolín y arci lla de bentonita, y i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y pildoras, la forma de dosificación también puede comprender amortiguadores del pH.

También pueden emplearse como cargas composiciones sólidas de tipo similar, en cápsulas de gelatina rellenas duras y blandas utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, pildoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y también pueden ser de una composición tal que liberen el(los) principio(s) activo(s) solamente o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada Los ejemplos de composiciones de inclusión que pueden utilizarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. También pueden emplearse como cargas composiciones sólidas de tipo similar, en cápsulas de gelatina rellenas blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares

Los compuestos activos también pueden estar en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se ha indicado anteriormente. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos, recubrimientos controladores de la liberación y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. En tales formas de dosificación sólidas el compuesto activo puede estar mezclado con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como es práctica normal, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes para formación de comprimidos y otros adyuvantes para formación de comprimidos tales como un estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de las cápsulas, comprimidos y píldoras, las formas de dosificación también pueden comprender amortiguadores del pH. Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y también pueden ser de una composición tal que liberen el(los) principio(s) activo(s) solamente o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada Los ejemplos de composiciones de inclusión que pueden utilizarse incluyen sustancias poliméricas y ceras

Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de la presente invención incluyen pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, pulverizaciones, inhalantes o parches. El componente activo se mezcla en condiciones estériles con un vehículo farmacéutica mente aceptable y cualquier conservante o tampón necesario según sea necesario. También quedan contempladas dentro del alcance de la presente invención las formulaciones oftálmicas, las gotas para los oídos y las gotas para los ojos. Además, la presente invención contempla el uso de parches transdérmicos, que tienen la ventaja añadida de proporcionar la administración controlada al cuerpo de un compuesto. Tales formas de dosificación se preparan disolviendo o dispensando el compuesto en el medio apropiado. También pueden utilizarse potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad puede controlarse propOfcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en un gel o matriz polimérica.

La actividad de un compuesto utilizado en la presente invención como modulador de CFTR puede ensayarse según los métodos descritos generalmente en la técnica y en los Ejemplos del presente documento

También se comprenderá que los compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden emplearse en terapias de combinación, es decir, los compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables pueden administrarse simultáneamente a, antes de o posteriormente a, uno o más de otros agentes terapéuticos o procedimientos médicos deseados. La combinación particular de terapias (agentes terapéuticos o procedimientos) a emplear en un régimen de combinación tendrá en cuenta la compatibilidad de los agentes terapéuticos ylo procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado a conseguir. También se comprenderá que las terapias empleadas pueden conseguir un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, un compuesto de la invención puede administrarse simultáneamente a otro agente utilizado para tratar el mismo trastorno) o pueden conseguir diferentes efectos (por ejemplo, control de cualquier efecto adverso). Tal como se utilizan en el presente documento, los agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar o prevenir una enfermedad o afección concreta, son conocidos como ~apropiados para la enfermedad o afección que se está tratando~

En una forma de realización, el agente adicional está seleccionado de entre un mucolítico, un broncodilatador, un antibiótico, un antiinfeccioso, un antiinflamatorio, un modulador de CFTR distinto de un

compuesto de la presente invención o un agente nutricional. En una forma de realización adicional, el agente adicional es un modulador de CFTR distinto de un compuesto de la presente invención

En una forma de realización, el agente adicional es un antibiótico. Los antibióticos ejemplares útiles en el presente documento incluyen tobramicina, incluida tobramicina inhalada en polvo (TIP), azitromicina, aztreonam, incluida la forma de aerosol de aztreonam, amikacina, incluidas formulaciones liposomales de la misma, ciprofloxacina, incluidas formulaciones de la misma adecuadas para la administración por inhalación, levoflaxacino, incluidas formulaciones del mismo en aerosol y combinaciones de dos antibióticos, por ejemplo, fosfomicina y tobramicina.

En otra forma de realización, el agente adicional es un mucolítico Los mucolíticos ejemplares útiles en el presente documento incluye Pulmozyme®.

En otra forma de realización, el agente adicional es un broncodilalador Los broncodilaladores ejemplares incluyen albuterol, sulfato de metaprotenerol, acetato de pirbuterol, salmeterol o sulfato de terbutalina.

En otra forma de realización, el agente adicional es eficaz en la restauración del líquido de la superficie de las vías respiratorias del pulmón. Tales agentes mejoran el movimiento de la sal en y fuera de las células, permitiendo que el moco en las vías respiratorias del pulmón esté más hidratado y, por lo tanto, se elimine con más facilidad. Tales agentes ejemplares incluyen solución sa lina hipertónica, denufosol tetrasódico (hidrogenofosfato de 1[(3S,5R)-5-( 4-amino-2-oxopirim idin-1-il}-3-hidroxioxolan-2-il]metoxi-hidroxifosfOliI]IU(2R,3S, 4R, 5R)-5-(2, 4dioxopirimidin-1-il)-3,4-dihidroxioxolan-2-il]metoxi-hidroxifosforil]oxihidroxifosforilo]) o bronquitol (formulación inhalada de manitol).

En otra forma de realización, el agente adicional es un antiinflamatorio, es decir, un agente que puede reducir la inflamación en los pulmones. Tales agentes ejemplares útiles en la presente invención incluyen ibuprofeno, ácido docosahexanoico (DHA), sildenafilo, glutatión es inhalado, pioglitazona, hidroxicloroquina o simvastalina.

En otra forma de realización, el agente adicional reduce la actividad del bloqueador del canal de sodio epitelial (ENaC) ya sea directamente bloqueando el canal o indirectamente mediante la modulación de las proteasas que conducen a un aumento en la actividad del ENaC (por ejemplo, serin proteasas, proteasas activadoras de canal). Tales agentes ejemplares incluyen camoslat (un inhibidor de la proteasa de tipo tripsina), QAU145, 552-02, GS-9411, INO-4995, Aerolytic y am ilorida. Pueden encontrarse agentes adicionales que reducen la actividad del bloqueador de canal de sodio epitelial (ENaC), por ejemplo en la publicación PCT N° W02009f074575

Entre otras enfermedades descritas en el presente documento, se utilizan combinaciones de moduladores de CFTR, tal como el compuesto de Fórmula 1, y agentes que reducen la actividad del ENaC para tratar el sindrome de Liddle, una afección inflamatoria o alérgica incluidas la fibrosis quistica, la discinesia ciliar primaria, la bronquitis crónica, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, el asma, las infecciones del tracto respiratorio, el carcinoma pulmonar, la xerostomia y la queratoconjuntivitis seca, las infecciones del tracto respiratorio (agudas y crónicas; viricas y bacterianas) y el carcinoma de pulmón

Las combinaciones de moduladores de CFTR, tal como el compuesto de Fórmula 1, y agentes que reducen la actividad del ENaC también son útiles para tratar enfermedades mediadas por el bloqueo del canal de sodio epitelial también incluyen enfermedades distintas de las enfermedades respiratorias que se asocian con la regulación anómala de líquido a través de un epitelio, que tal vez implica una fisiología anómala de los líquidos protectores de superficie en su superficie, por ejemplo, la xerostomia (boca seca) o la queratoconjuntivitis seca (ojo seco). Además, el bloqueo del canal de sodio epitelial en el riñón podría utilizarse para promover la diuresis y de esa manera inducir un efecto hipotensor

El asma incluye el asma intrínseca (no alérgica) y extrínseca (alérgica), el asma leve, el asma moderada, el asma grave, el asma bronquial, el asma inducida por el ejercicio, el asma ocupacional y el asma inducida después de una infección bacteriana. Debe entenderse también que el tratamiento del asma abarca el tratamiento de sujetos, por ejemplo, de menos de 4 ó 5 años de edad, que presentan síntomas de sibilancias y que están diagnosticados o pueden diagnosticarse como "niños sibilantes", una categoría establecida de pacientes de gran preocupación médica y en la actualidad identificada con frecuencia como asmáticos incipientes o de fase temprana. (Por comodidad, esta afección asmática concreta se conoce como "sindrome del niño sibilante".) La eficacia profiláctica en el tralamiento del asma quedará demostrada por la reducción de la frecuencia o gravedad del ataque sintomático, por ejemplo, de ataque asmático o broncoconstrictor agudo, la mejora de la función del pulmón o la hiperreactividad mejorada de las vías respiratorias. Puede quedar demostrada adicionalmente por una necesidad reducida de otro tratamiento sintomático, es decir, tratamiento para o destinado a restringir o anular el ataque sintomático cuando se produce, por ejemplo, antiinflamatorio (por ejemplo, corticosteroides) o broncodilatador. En particular, el beneficio profiláctico en el asma puede resultar evidente en sujetos propensos a "depresión matutina" La "depresión matutina" es un síndrome asmático reconocido, común a un porcentaje considerable de asmáticos y caracterizado por el ataque de asma, por ejemplo, entre las 4 a.m.-6 a.m., es decir, en un momento normalmente substancialmente distante de cualquier tratamiento para el asma sintomática administrado anteriormente

La enfermedad pulmonar obstructiva crónica incluye bronquitis crónica o disnea asociada con la misma, enfisema, así como empeoramiento de la hiperreactividad de las vías respiratorias como consecuencia de otro tratamiento farmacológico, en particular, otro tratamiento farmacológico inhalado. En algunas formas de realización, las combinaciones de moduladores de CFTR, tales como los compuestos de Fórmula 1, y agentes que reducen la actividad del ENaC son útiles para tratar la bronquitis de cualquier tipo o génesis incluidas, por ejemplo, la bronquitis aguda, araquídica, catarral, cruposa, crónica o tuberculosa.

En otra forma de realización, el agente adicional es un modulador de CFTR distinto de un compuesto de Fórmula 1, es decir, un agente que tiene el efecto de modular la actividad de CFTR. Tales agentes ejemplares incluyen ataluren ("PTC124®"; ácido 3-[5-(2-fluorofenil}-1 ,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico), sinapultida, lancovutida, depelestat (un inhibidor de la elastasa de neutrófilos recombinante humana), cobiprostona (ácido 7{(2R,4aR,5R, 7 aR)-2-f(3S)-1 , 1-d iftuoro-3-meti Ipentil]-2-hidroxi-6-oxoocta hid rociclopenta[b]p ira n-5-il}hepta noico) o ácido (3-(6-( 1-{2 ,2 -d iftuorobenzo[d][ 1 ,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido )-3-meti Ipiridin-2 -i 1) benzoico. E n otra forma de realización, el agente adicional es ácido (3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d]{1,3]dioxol-5il)ciciopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico.

En otra forma de realización, el agente adicional es un agente nutricional Tales agentes ejemplares incluyen pancrelipasa (reemplazo de enzimas pancreáticas), incluidos Pancrease®, Pancreacarb®, Ultrase® o Creon®, Liprotomase® (anteriormente Trizytek®), AquadekS® o inhalación de glutatión En una foona de realización, el agente nutricional adicional se la pancrelipasa

La cantidad de agente terapéutico adicional presente en las composiciones de la presente invención no será superior a la cantidad que se administraría normalmente en una composición que comprende ese agente terapéutico como el único agente activo. Preferentemente, la cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones descritas en el presente documento variará entre aproximadamente el 50% y el 100% de la cantidad normalmente presente en una compos ición que comprende ese agente como el único agente terapéuticamente activo.

Los compuestos de la presente invención o las composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos también pueden incorporarse en composiciones para recubrir un dispositivo médico implantable, tales como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, estents y catéteres. Por consiguiente, la presente invención, en otro aspecto, incluye una composición para recubrir un dispositivo implantable que comprende un compuesto de la presente invención tal como se ha descrito en general anteriormente, y en clases y subclases en el presente documento, y un vehículo adecuado para recubrir dicho dispositivo implantable. En aún otro aspecto, la presente invención incluye un dispositivo implantable recubierto con una composición que comprende un compuesto de la presente invención tal como se ha descrito en general anteriormente, y en clases y subclases en el presente documento, y un vehículo adecuado para recubrir dicho dispositivo implantable. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de dispositivos implanta bies recubiertos se describen en las patentes de EE.UU. 6.099.562,

5.886.026 Y 5.304.121. Los recubrimientos son por lo general materiales poliméricos biocompatibles tales como un polimero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, ácido poliláctico, etileno-acetato de vinilo, y mezclas de los mismos. Los recubrimientos pueden estar opcionalmente cubiertos adicionalmente por una capa superior adecuada de ftuorosilicona, polisacáridos, poliet ilenglicol, fosfolipidos o combinaciones de los mismos para conferir características de liberación controlada en la composición.

Otro aspecto de la invención se refiere a modular la actividad de CFTR en una muestra biológica o un paciente (por ejemplo, ;n vitro o in vivo), cuyo método comprende administrar al paciente o poner en contacto dicha muestra biológica con un compuesto de Fórmula (1) o una composición que comprende dicho compuesto. La expresión "muestra biológica", tal como se utiliza en el presente documento, incluye, sin limitación, cultivos celulares

o extractos de los mismos; material de biopsia obtenido de un mamífero o extractos del mismo; y sangre, saliva, orina, heces, semen, lágrimas u otros liquidos corporales o extractos de los mismos

La modulación de CFTR en una muestra biológica es útil para diversos fines conocidos para un experto en la materia. Los ejemplos de tales fines incluyen, pero no se limitan, al estudio de CFTR en fenómenos biológicos y patológicos, y a la evaluación comparativa de nuevos moduladores de CFTR

En otra forma de realización, se proporciona un método de modulación de la actividad de un canal de aniones in v;lro o ;n v;vo, que comprende la etapa de poner en contacto dicho canal con un compuesto de Fóonula (1). En formas de realización preferentes, el canal de aniones es un canal de cloruro o un canal de bicarl>onato En otras foonas de realización preferentes, el canal de aniones es un canal de cloruro

Según una forma de realización alternativa, la presente invención proporciona un método para aumentar el número de CFTR funcionales en una membrana de una célu la, que comprende la etapa de poner en contacto dicha célula con un compuesto de Fórmula (1).

Según otra forma de realización preferente, la actividad del CFTR se mide midiendo el potencial de voltaje transmembrana. Los medios para medir el potencial de voltaje a través de una membrana en la muestra biológica pueden emplear cualquiera de los métodos conocidos en la técnica, tales como el ensayo óptico de potencial de membrana u otros métodos electrofisiológicos.

El ensayo óptico de potencial de membrana utiliza sensores FRET sensibles al voltaje descritos por González y Tsien (véase, González, J.E. y R.Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells", Biophys J 69 (4): 1272-1280, y González, J.E. y R.Y. Tsien (1997); "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer", Chem BioI 4(4): 269-77) en combinación

10 con instrumentación para medir cambios de fluorescencia tal como el lector Voltageflon Probe Reader (VIPR) (Véase, González, J.E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets", Drug Discov Today 4(9): 431 -439).

Estos ensayos sensibles al voltaje se basan en el cambio de la transferencia de energia por resonancia de

15 fluorescencia (FRET) entre el colorante sensible al voltaje soluble en la membrana, DiSBAC2(3) y un fosfolípido fluorescente, CC2-DMPE, que se fija a la cara externa de la membrana plasmática y actúa como donante de FRET. Los cambios en el potencial de membrana (Vrn) hacen que el DiSBAC2(3) cargado negativamente se redistribuya a través de la membrana plasmática y que por consiguiente cambie la cantidad de transferencia de energia desde CC2-DMPE. Los cambios en la emisión de fluorescencia puede controlarse utilizando VIPRTM 11, que es un

20 manipulador de liquidas y detector fluorescente integrado diseñado para realizar cribados celulares en placas de microtitulación de 96 ó 384 pocillos

En otro aspecto, la presente invención proporciona un kit para su uso en la medición de la actividad de CFTR o un fragmento del mismo en una muestra biológica in vitro o in vivo que comprende (i) una composición que 25 comprende un compuesto de Fórmula (1) o cualquiera de las formas de realización anteriores; y (ii) instrucciones para al poner en contacto la composición con la muestra biológica y b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo. En una forma de realización, el kit comprende adicionalmente instrucciones para al poner en contacto una composición adicional con la muestra biológica; b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo en presencia de dicho compuesto adicional, y c) comparar la actividad del CFTR en presencia del compuesto

30 adicional con la densidad del CFTR en presencia de una composición de Fórmula (1). En formas de realización preferentes, el kit se utiliza para medir la densidad de CFTR.

A fin de que la invención descrita en el presente documento pueda entenderse más plenamente, se exponen los siguientes ejemplos. Debe entenderse que estos ejemplos tienen sólo fines ilustrativos y no deben 35 interpretarse como limitativos de la presente invención en modo alguno

Procesos y productos intermedios para preparar compuestos de Fórmula J

Otro aspecto de la invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula (Ic):

,-~.

, , A:,

R' O O

(y-_..,

45 R3~N~XU) H R' .

N H

(le)

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en el que el proceso comprende:

(a) hacer reaccionar el ácido de fórmula 1d con una amina de fórmula 2d para proporcionar un compuesto de

55 Fórmula (Ic)

R' O O 60

R'WI OH +

I ~

A N

H

1d

".

l.r~A)

H2 I ....,X --'

N

R'

2f

, A :

R' O --G-Y , -"" ,

O

• R'WNI/.X

1A 1 H R'

N .

H

le

en el que·

el anillo A está seleccionado de entre:

(a) (b) (e) (d) 15

en el que· R1

es -CH3, -CF3 o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3

es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; 2 3

siempre que Ry Rno sean simu ltáneamente hidrógeno, y

25 R'" es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopmpilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsilit)etoxi]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono.

En una forma de realización, la reacción del ácido de fórmula 1d con la am ina de fórmula 2e se produce en un disolvente en presencia de hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il }-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) y trielilamina o en un disolvente en presencia de anhidrido cidico del ácido propit fosfónico (T3P®) y piridina Más concretamente, el disolvente comprende N,N-dimetil formamida, acetato de etilo o 2-melilletrahidrofurano

35 En otra forma de realización, R'" es hidrógeno o TBDMS

En otra forma de realización, R" es TBDMS

En otra forma de realización, el proceso comprende una etapa de desprotección adicional; por ejemplo, cuando el anillo A es

45 o

en el que R'" es un grupo protector de sililo, para generar un compuesto de Fórmula 1, en el que el anillo A es

HO H

~N4t (e) o

H

';,:N~OH

65 (d).

Por lo general, la eliminación de un grupo protector de sililo requiere tratamiento con un ácido tal como ácido acético

o un ácido mineral diluido o similar, aunque pueden utilizarse otros reactivos, tales como una fuente de ion fluoruro (por ejemplo, f1uoruro de tetrabutilamonio).

En el proceso, la amina de fórmula 2c se prepara a partir de un compuesto de fórmula 2a comprende las etapas de:

(a) hacer reaccionar el compuesto de fórmula 2a con una amina de fórmula 3 para proporcionar el compuesto de 10 fórmula 2b

, .

: A ~

HN~ __ :

en el que:

25 Hal es F, e l, Bro 1; y

la amina de fónnula 3 es

35

y

(b) reducir el compuesto de fórmula 2b a la amina de fórmula 2c

40

50 En una forma de realización del proceso para preparar la amina de fórmula 2c, la amina de fórmula 3 de la etapa (a) se genera in situ a partir de la sal de amonio cuaternario correspondiente, tal como una sal dorhidrato de amina, aunque también pueden utilizarse otras sales de amonio (por ejemplo, la sal de trifluoroacetato).

En una forma de realización de la etapa (a) para formar la amina de fórmula 2c, cuando la amina de fórmula

65 Ra es hidrógeno o TBDMS. Más concretamente, R3 es TBDMS.

En otra forma de rea lización, la etapa (a) se produce en un disolvente aprótico polar en presencia de una base amina terciaria. Los ejemplos de disolventes que pueden emplearse incluyen N,N-dimetil formamida, dimetilsulfóxido o acetonitrilo. Los ejemplos de aminas terciarias que pueden emplearse incluyen trietilamina, diisopropiletilamina, 1 ,5-diazabicido[4.3.0[non-5-eno (D B N), 1 ,B-diazabiciclo[5.4.0)undec-7-eno (DBU), 1,4

5 diazabiciclo{2.2.2)octano (DABCO) y piridina

En una forma de realización, la base amina terciaria es trietilamina.

En otra forma de realización, la etapa (a) se produce en acetonitrilo en presencia de trietilamina.

En otra forma de realización, la temperatura de reacción de la etapa (a) es de entre aproximadamente 75"C y aproximadamente 85" C.

En otra forma de realización, el tiempo de reacción para la etapa (a) es de entre aproximadamente 2 horas 15 y aproximadamente 30 horas.

En una forma de realización del proceso para preparar la amina de fórmula 2c, la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar o una mezcla de disolventes próticos polares en presencia de un catalizador de paladio Cuando el catalizador es paladio, el disolvente de la etapa (b) es por lo general un disolvente prótico polar tal como un alcohol. Más concretamente, el disolvente comprende metanol o etanol

En otra forma de realización, la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar, tal como agua, en presencia de Fe y Zn y FeS04 o AcOH.

25 Otro aspecto de la invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula Ic:

(le)

o sales farmacéutica mente aceptables del mismo, que comprende las etapas de·

(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 2a con una amina de fórmula 3 para proporcionar un compuesto de fórmula 2b

, # --.

; A ~

HN ___ }

(b) convertir el compuesto de fórmula 2b en la amina de fÓfmula 2c mediante hidrogenación

, , A:,

(y--,-

O~~X

R, 2b

65 y

(c) hacer reaccionar la amina de fórmula 2e con un ácido de fórmula 1d para proporcionar un compuesto de Fórmula I

5

R,~R' O O 1 ~ I OH + '" NH 1d .--; A. :('y"--H~"'fX R' 2e .--.: A: R,;()Jl~~"(--V ..Jl R' N H (1,)

15

en la que Hal es F, el, Bro 1;

la amina de fórmula 3 es

y el anillo A está seleccionado de entre·

(a) (b) (e) (d)

en el que·

R' es -CH3, -CF3 o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; 45 R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno;

Ra es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc·butildimetilsililo (TBDMS), triisopmpilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo ISEM); y

uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono.

En una forma de realización, la amina de fórmula J de la etapa (a) se genera ;n situ a partir de la sal de 55 amonio cuaternario correspondiente, tal como una sal clorhidrato de am;na, aunque también pueden utilizarse otras sales de amonio (pOf ejemplo la sal de trifluoroacetato).

En una forma de realización de la etapa (a) para formar la amina de fórmula 2e, cuando la amina de fórmula

3 es

~J~t

Id)

O

R3

es hidrógeno o TBDMS. Más concretamente, R" es TBDMS

En otra forma de realización, la etapa (a) se produce en un disolvente aprótico polar en presencia de una

5 base amina terciaria. Los ejemplos de disolventes que pueden emplearse incluyen N,N-dimetil formamida, dimetilsulfóxido o acetonitrilo. Los ejemplos de aminas terciarias que pueden emplearse incluyen trietilamina, diisopropiletilamina, 1 ,5-diazabicido[4.3.0]non-5-eno (O B N), 1 ,B-diazabicido[5.4.0)undec-7-eno (DBU), 1,4diazabicido{2.2.2)octano (DABCO) y piridina.

10 En una forma de realización, la base ami na terciaria es trietilamina

En olra forma de realización, la etapa (a) se produce en acelonitrilo en presencia de trietilamina.

En otra fonna de realización, la temperatura de reacción de la etapa (a) es de entre aproximadamente 75"C 15 y aproximadamente 85" C.

En otra forma de realización, el tiempo de reacción para la etapa (a) es de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 30 horas

20 En una forma de realización del proceso para preparar la amina de fórmula 2c, la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar o una mezcla de disolventes próticos polares en presencia de un catalizador de paladio. Cuando el catalizador es paladio, el disolvente de la etapa (b) es por lo general un disolvente prótico polar tal como un alcohol. Más concretamente, comprende metanol o etanol.

25 En otra forma de realización, la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar, tal como agua, en presencia de Fe y Zn y FeS04 o AcOH

En una forma de realización de la etapa (e), la reacción del ácido de fórmula 1d con la amina de fórmula 2c se produce en un disolvente en presencia de hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N ',N'

30 telrametiluronio (HATU) y trietilamina o en un disolvente en presencia de anhídrido cíclico del ácido propil fosfónico (T3P®) y piridina. Más concretamente, el disolvente comprende N,N-dimetil formamida, acetato de etilo o 2 -metiltetrah id rofu ra no

En otra forma de realización, R" es hidrógeno o TBDMS.

En otra forma de realización, R" es TBDMS.

En otra forma de realización, el proceso comprende una etapa de desprotección adicional; por ejemplo, cuando el anillo A es

R'O H

~N4T

o Id)

en el que R" es un grupo protectOf de sililo, para generar un compuesto de Fórmula 1, en el que el anillo A es

(e)

o

60 H

ft°H

"N~ (d).

Por lo general, la eliminación de un grupco protector de sililo requiere tratamiento con un ácido tal como ácido acético

o un ácido mineral diluido o similar, aunque pueden utilizarse otros reactivos, tal como una fuente de ion nuoruro (por ejemplo, nuoruro de tetrabutilamonio)

5 Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto que es

en el que el anillo A es

\~NJ¿ vNtI ~NfrH h°R'

(a), ' (b), ~ (e), o ;"N~ (d);

25 en el que

R1

es -CH3, -CF3 o -CN,

Ra

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopmpilsililo (TIPS) y [2-(lrimetilsilit)etoxi]metilo 30 (SEM); y uno entre Xe Yes nitrógeno y el otro es carbono.

otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto que es

en el que el anillo A es 45

;"N ftOO'

~ (d);

en el que

R1

es -CH3, -CF3 o -CN,

R3

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsili l)etoxi]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de Fórmula Ic:

, ,

• A:

R' ° "y---- O 5 R'~NAyX

U.)

H R'

~

(le);

o sales farmacéulicamente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre

H

OR'

(e), O "N~ (d);

en el que

R1

es -eH:}, -CF3 o -eN; R2es hidrógeno, -eH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3

es hidrógeno, -eH3, -QCH3 o -eN; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno, y

R3

es un grupo protector de si1ilo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsi1ilo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS) y triisopropilsililo (TIPS) y [2-{trimetilsilil)etoxl]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

35 Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de Fórmula I

(1);

o sales farmacéulicamente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre

Ji

HOH

VN4:\ '(N \,N4r

(a), (b), (e), o (d);

en el que R1 es -CH3, -CF3 o -CN;

R2

es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; 65 R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN;

y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono; preparado mediante cualquiera de los procesos descritos en el presente documento.

10 • y

preparado mediante cualquiera de los procesos descritos en el presente documento

Esquemas generales de síntesis

Los Esquemas 1-3 ilustran la síntesis de los compuestos de Fórmula (I) de la presente invención

Esquema 1

R ""

I "" NH,

~

F'

1.

R3 '<::::: O .. .' '.

~yH.' + A )

I ¿X HK......:

0 2N 2.

~ 3

IH:a' ~XE~Et R'

1b

•

25 b,Có b,d

o

OH

iI) (C02Et)2CH=CH(OEt). tolueno, Cillor; (b) Dowthenn o eter difenílico, reflujo, iltmósferil de N2;

c) Eliminilción del grupo bloqueilnte hillógeno, si esu presente (por ejemplo, -CI), Pd/C, H2,

EtOH; d) NilOH; el CH3CN, EtJN, cillor; f) PdlC, Hl, EtOH; g) HATU, El:)N, DMF o ilnhidrido cíclico

del ~cido propil fosfónico (T3P®), piridinil. 2-metiltetl'ilhidrofurilno.

El Esquema 1 representa un enfoque convergente para la preparación de compuestos de Fórmula (1) a partir de 1a y 2a. En la transformación final, la formación de amida mediante acoplamiento del ácido carboxilico Id con la amina 2c para dar un compuesto de Fórmula (1) puede conseguirse utilizando hexafluoñosfato de 0-(7azabenzolriazol-1-ilrN,N,N',N'-letrameliluronio (HATU) y Irielilamina en N,N-dimelil formamida (DMF) o anhídrido ciclico del ácido propil fosfónico (T3P®) y piridina en 2-meliltelrahidrofurano. El ácido carboxilico 1d se prepara a parlir del correspondienle derivado de benceno sustituido 1a a través de una secuencia que comienza con la condensación mediada por calor de 1a con un malonalo apropiado (C02R12CH=CH(OR), en el que R es un grupo

65 alquilo, lal como melilo, elilo o similares, para proporcionar 1b.

El Compuesto 1b se convierte en el ácido carboxílico 1d a través de una secuencia de tres etapas que incluye la ciclación intramolecular tras calentamiento a reflujo en Dowtherm o éter difenilico (etapa b), seguido de la eliminación (de ser necesario) del grupo halógeno bloqueante (etapa cl con deshalogenación catalizada por paladio y saponificación catalizada por ácido o base (etapa dl. Puede invertirse el orden de las etapas de desprotección y

5 saponificación; es decir, la etapa c puede producirse antes o después de la etapa d, tal como se representa en el Esquema 1

Haciendo referencia de nuevo al Esquema 1, el derivado de anilina 2c puede prepararse a partir del compuesto nitrogenado 2a a través de una secuencia de tres etapas. Por lo tanto, el acoplamiento de 2a con una 10 amina cíclica

J tal como se define en el presente documento en presencia de trietilamina proporciona el compuesto 2b. La reducción catalizada por paladio de 2b proporciona la amina 2c

Esquema 2. Preparación de Compuestos de Fórmula l

.....,.

• A :

a

25 A f;vy '..,...,

~X

°2N •

Br

al DMSO, K2C03, 80°C; b) N,N-dimetilprop-2-in·1-amina, Pd(PPh3)2CI2, CuI, DMF, lEA, 80°C; cl Fe, FeSO., H20 oZn, AcOH, H20; dI HATIJ, EbN, DMF o anhidrido ciclico del ácido propil fosfónico (T3P®), piridina, 2.metiltetrahidrofurano.

El Esquema 2 representa la síntesis de un compuesto de Fórmula (1) que porta una cadena lateral de propinilamina. Por lo tanto, el acoplamiento del nitrobenceno 2a, en el que Hal es bromuro, cloruro o similar, con

,.-,,

, .

5 Htt.!'.. :

J como se define en el presente documento en presencia de carbonato de potasio en DMSO proporciona el compuesto 4. El acoplamiento calalizado por paladio del compuesto 4 con N,N-dimetilpmp-2-in-1-amina, seguido de reducción calalizada por hierro o cinc del resto nitro, proporciona la amina S. El acoplamiento de la amina 5 con el ácido carboxilico 1d proporciona el compuesto 6 que es un compuesto de Fórmula (1)

Esquema 3. Preparación de Compuestos de Fórmula I en los que R es H u OH

HN1'f-7 1'f7

(YyHal _ _ ~__ J;YyN~

02N~2a a O N &X b R1f 2 8

R, 25

e

R

o o

2 ('y Ni¿

OH 2 O

1d

R

fi~X 11

R,

d, e

(1)

al DMSO, K 2COJ, calor o CHJCN, TEA, calor; b) (opcional cuando R es OH) PGX

tal como TBDMSCI, base tal como imidazol, DMF; el H2, PdfC, EtOH; d) HATU,

Eb N, DMF o anhídrido elclico del ácido propil fosfónico (T3P®), piridina, 2·

metiltetrahidrofurano; el desprotección de PG, tal como Hel, EtOH. PG '" grupo

protector; X '" grupo saliente.

55 El Esquema 3 representa la síntesis de un compuesto de Fórmula (1) en el que

J es 7-azabicido[2.2.1]heptano, que porta opcionalmente un grupo exo o endo hidroxilo en la posición 2 Los aductos sustituidos con hidroxilo (+}-endo-7-azabicido[2.2.1[heptan-2-o1, (-)-endo-7-azabicido[2.2.1)heptan-2-ol, (+)65 exo-7-azabicido[2.2.1)heplan-2-o I y (-)-exo-7-azabicido{2.2.1)heptan-2-ol pueden prepararse utilizando procedimientos como los descritos en Fletcher, SR., el al., "Total Synthesis and Determination of the Absolute

Configuration of Epibatidine~, J. Org. Chem, 59, págs. 1771-1778 (1994). El propio 7-azabiciclo[2.2.1)heptano está disponible en el mercado en Tyger Scientific Inc., 324 Stokes Avenue, Ewing, NJ, 08638 EE.UU

Por lo tanto, al igual que con la serie de transformaciones que se resumen en los Esquemas 1 y 2, el acoplamiento del compuesto 2a con la amina de biciclo[2.2.1) 7 proporciona el compuesto 8. Si existe un grupo hidroxilo en el compuesto 8, puede ser necesario proteger el grupo hidroxilo con un grupo protector antes de las transformaciones posteriores. Por lo tanto, el tratamiento del compuesto 8 con cloruro de terc-butildimetilsililo utilizando condiciones conocidas proporciona el compuesto protegido 9 antes de la reducción del resto nitro para proporcionar la amina 10. La formación de la amida con 1d (véase el Esquema 4) y la eliminación del grupo protector de hidroxilo (según sea necesario) proporciona el compuesto 11 que es un compuesto de Fórmula (1)

EJEMPLOS

Producto intermedio 1· Preparación del ácido 4-oxo-5-(trifluorometil}-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxílico

loIuono o.....~

I I OEI

Q-. BOXOEI

1",0'C, ", h 260'C, 6,5 h

"H, '" N

Q-"~OE' W

° DEl a H a H

C<

12 13 QE.

14 15

10% PI:IIC, H2. Et;,N 5 M NlOH

9" I I oe &yOH

&Y

EtOH, 5"C "'OC

'" H" H

.,"" "

16 17

Preparación de 2-«2-eloro-5-(trifluorometil)fenilamino)metileno) malonato de dietilo (14). Se combinaron 2-cloro-5-(triftuorometil)anilina 12 (200 g, 1,023 mol), malonato de 2-(etoximetileno) dietilo 13 (276 g, 1,3 mol) y tolueno (1 00 mi), en atmósfera de nitrógeno, en un matraz de fondo redondo de 1 litro y tres bocas, equipado con un condensador Dean-Stark. Se calentó la solución con agitación a 140Q C y se mantuvo la temperatura durante 4 horas. Se enfrió la mezcla de reacción a 70Q C y se añadió lentamente hexano (600 mi). Se agitó la suspensión resultante y se dejó calentar a temperatura ambiente. Se recogió el sólido por filtración, se lavó con acetato de etilo en hexano al 10% (2 x 400 mi) ya continuación se secó a vacío para proporcionar un sólido blanco (350 g, rendimiento del 94%) como el producto de condensación deseado 2-«2-cloro-5-(trifluorometil)fenilamino)metileno) malonato de dietilo 14. ' H RMN (400 MHz, DMSO-de) i5 11,28 (d, J = 13,0 Hz, 1 H), 8,63 (d, J = 13,0 Hz, 1 H), 8,10 (s, 1H), 7,80 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,50 (dd, J = 1,5,8,4 Hz, 1 H), 4,24 (q, J =7,1 Hz, 2H), 4,17 (q, J =7,1 HZ,2 H), 1 ,27 (m, 6H)

Preparación de 8-cloro-4-oxo-5-(trifluorometil)-1,4-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (15). Se cargó un matraz de 1 litro y 3 bocas con Dowthef1T"llEl (200 mi, 8 mllg), que se desgasificó a 200°C durante 1 hora. Se calentó el disolvente a 260Q C y se carg ó en porciones durante 10 minutos con 2-«2-cloro-5(triftuorometil)fenilamino)metileno) malonato de dietilo 14 (25 g, 0,07 mol). Se agitó la mezcla resultante a 260Q C durante 6,5 horas (h) y se eliminó el subproducto etanol resultante por destilación. Se dejó enfriar la mezcla lentamente hasta 80Q C. Se añadió lentamente hexano (150 mi) durante 30 minutos (min), seguido de 200 mi adicionales de hexano añadido en una porción. Se agitó la suspensión hasta que alcanzó la temperatura ambiente Se filtró el sólido, se lavó con hexano (3 x 150 mi) y a continuación se secó a vacío para proporcionar 8-cloro-4-oxo5-(trifluorometil)-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo 15 en forma de sólido de color canela (13,9 g, rendimiento del 65%). l H RMN (400 MHz, DMSO-ds) i5 11 ,91 (s, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,06 (d, J =8,3 Hz, 1 H), 7,81 (d, J =8,4 Hz, 1H), 4,24 (q, J =7,1 Hz, 2H), 1,29 (t, J =7,1 Hz, 3H)

Preparación de 4-oxo-5-(trifluorometil)-1H-quinolina-3-carboxilato de etilo (16). Se cargó un matraz de 5 litros y 3 bocas, con 8-cloro-4-oxo-5-(trifluorometil)-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxilato de elilo 15 (100 g, 0,3 mal), etanol (1250 mi, 12,5 ml/g) y Irietilamina (220 mi, 1,6 mol). A continuación, se cargó el recipiente con 10 g de Pd/C al 10% (húmedo al 50%) a 5°C. Se agitó la reacción enérgicamente en atmósfera de hidrógeno durante 20 horas a SOC, después de lo cual se concentró la mezcla de reacción a un volumen de aproximadamente 150 mI. El producto, 4-oxo-5-(triftuorometil}-1H-quinolina-3-carboxilato de etilo 16, en forma de suspensión con Pd/C, se llevó directamente a la siguiente etapa

Preparación de ácido 4-oxo-5-(trifluorometil)-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxílico (17). Se suspendió 4oxo-S-(trifluorometil)-1 H-quinolina-3-carboxilato de etilo 16 (58 g, 0,2 mol, suspensión de la reacción en bruto que contenía Pd/C) en NaOH (814 mi de 5 M, 4,1 mol) en un matraz de 1 litro con un condensador de reflujo y se calentó

a 80Q C durante 18 horas, seguido de calentamiento adicional a 100Q C durante 5 horas. Se filtró la reacción en caliente a través de Celite compactado para eliminar el PdlC y se lavó el Celite con NaOH 1 N. Se acidificó el filtrado hasta aproximadamente pH 1 para obtener un precipitado blanco espeso. Se filtró el precipitado, a continuación se aclaró con agua y acetonilrilo frío. A continuación, se secó el sólido a vacío para proporcionar ácido 4-oxo-5(triftuorometil)-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxílico 17 en forma de sólido blanco (48 g, rendimiento del 92%). 'H RMN (400,0 MHz, DMSO-de) c5 15,26 (s, 1 H), 13,66 (s, 1 H), 8,98 (s, 1 H), 8,13 (dd, J = 1,6, 7,8 Hz, 1 H), 8,06 -7,99 (m, 2H)

Producto intermedio 2: Preparación de 6-(7 -azabiciclo[2.2.1]heptan-7 -il}-2-(trifluorometil)piridin-3-amina.

FSOtCFtC02Me

'" NO,8F.

(YS'

DMF,OJI

(} _-c;C-,,""'=N_.

~N~N

yN 6O'C,24h

BOOC, 1h

'" CF, 15 PdIC . ....

etanol

CH,cN. TEA ,6h

()'N~

80 te, 16 h ~N~N CF,

A una solución de 2,6-dibromopiridina (10,0 g, 42,6 mmol) en CH3CN anhidro (100 mi) se añadió lentamente N02'BF4-(11 ,3 g, 85,2 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 80°C en atmósfera de nitrógeno durante 24 horas. A continuación, se evaporó la mezcla a sequedad y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo en éter de petróleo al 0%-3%) para proporcionar 2,6-dibromo-3-nitropiridina (5,7 g, 47,9%). 'H RMN (400 MHz, CDCI3) c5 8,03 (d, J =8,4 Hz, 1 H), 7,65 (d, J =8,4 Hz, 1 H)

A una solución de 2,6-dibromo-3-nilropiridina (5,7 g, 20,4 mmol) en DMF (40 mi) se añadió Cul (3,9 g, 20,4 mmol) y FS02CF2C02Me (4,7 g, 24,5 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 80"C durante 1 hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, se vertió la mezcla de reacción en agua (100 mi) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se purificaron mediante cromatografia en gel de silice (acetato de etilo en éter de petróleo al 0%-3%) para proporcionar 6-bromo-3nitro-2-(triftuorometil) piridina (3,0 g, rendimiento del 45%). 'H RMN (400 MHz, CDCI3) ti 8,12 (d, J =8,4 Hz, 1 H), 7,94 (d , J =8,4 Hz, 1 H)

Una solución de 6-bromo-3-nilro-2-(lrifluorometil)piridina (300 mg, 1,107 mmol), clorhidrato de 7azabiciclo[2.2.1]heptano (177,4 mg, 1,328 mmol) y trietilamina (224,0 mg, 308,5 ~I, 2,214 mmol) en acetonitrilo (3 mi) se calentó a 80°C durante loda la noche. Se enfrió la reacción a temperatura ambiente y se interrumpió con agua. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío p'ara proporcionar 7-[5-nitro-6-(triftuorometil}-2piridil]-7-azabiciclo[2.2.1]heptano (300 mg, rendimiento del 94%). H RMN (400,0 MHz, DMSO-de) c5 8,27 (d, J =9,2 Hz, 1H), 7,20 (d, J =9,3 Hz, 1 H), 4.71 (s, 2H), 1,71 (d, J =7,7 Hz, 4H), 1,55 (d, J = 6,9 Hz, 4H)

Se lavó abundantemente con nitrógeno un matraz cargado con 7-[5-nilro-6-(triftuorometil}-2-piridil]-7azabiciclo[2.2.1]heptano (530 mg, 1,845 mmol) y PdfC al 10% (53 mg, 0,4980 mmol), seguido de la evacuación a vacío. Se añadió etanol (6 mi) en atmósfera inerte y se equipó el matraz con un globo de hidrógeno. Después de 16 horas de agitación enérgica, se eliminó el Pd/C por filtración y se eliminó el disolvente a presión reducida. Se purificó el material en bruto mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo en hexanos al 0%-10%) para proporcionar 6-(7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7-il)-2-(triftuofOmelil)piridin3-amina (381 mg, rendimiento del 80%). 'H RMN (400,0 MHz, DMSO-de) c5 7,17 (d, J =8,9 Hz, 1 H), 6,97 (d, J =8,9 Hz, 1 H), 5,03 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 1,59 (t, J =3,4 Hz, 4H), 1,37 (d , J =6,7 Hz, 4H)

Producto intennedio 3: Preparación de 6-(7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7-il}-4-metilpiridin-3-amina

eH,CN. TEA

JíNyNJ¿ ""'e. H,

6O-C,4h ~N"""-I MeOH.15mln

A una solución de 2-fluoro-4-metil-5-nitropiridina (150 mg, 0,9608 mmol) en acetonitrilo (5 mi) se añadió

10 clorhidrato de 7-azabiciclo[2.2.1]heptano (152,9 mg, 1, 153 mmol) y Et3N (243,1 mg, 334,8 ¡JI, 2,402 mmol). Se calentó la reacción a 80"C durante 16 horas. Se interrumpió la reacción con agua (2 mi) y se evaporó el disolvente Se disolvió el residuo en acetato de etilo (15 mi), se lavó con HCI 1 N (10 mi), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para proporcionar 6-(7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7-il)-4-metilpiridin-3-amina (160 mg, rendimiento del 71%) en forma de sólido amarillo que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación. l H RMN (400,0 MHz, CDCI3) 8 8,96

15 (s, 1 H), 6,37 (s, 1H), 4,59 (s, 2H), 2,59 (d, J =0,4 Hz, 3H), 1,83 -1,80 (m, 4H), 1,61 -1,54 (m, 4H).

A una solución de 6--(7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7-il)--4-metilpiridin-3-amina (146 mg, 0,6259 mmol) en una mezcla 1:1 de metanol:acetato de etilo (solución amarilla) se añadió PdfC al 10% Y se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Se diluyó la reacción con acetato de etilo (5 mi) y se filtró a través de Celite compactado.

20 Se concentró el filtrado a sequedad para proporcionar anilina en forma de sólido amarillo (120 mg, rendimiento del 94%). lH RMN (400,0 MHz, CDCI3) c5 7,68 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 4,34 -4,31 (m, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,781,75 (m, 4H), 1,44 -1,39 (m, 4H ).

Compuesto 2 de ejem plo: Preparación de N-(6-(7 -aza biciclo[2.2.1]heptan-7 -il)--2-(triftuorometil)piridin-3-il)--4--oxo-525 (trifluorometil)-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (Compuesto 2, Tabla 1)

1. T3P, plrid lna

N¿¿

N.téTHF

• qI

2. Hel

~N ...-<N

DCM, MeOH

eF, 35

A una solución de ácido 4--oxo-5-(trifluorometil)--1H-quinolina-3-carboxilico (100 mg, 0,3889 mmol) y 6--(7

azabiciclo[2.2.1]heptan-7-il)2-(triftuorometil)piridin-3-a mina (110,1 mg, 0,4278 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano

(1,0 mi) se añadió anhídrido cíclico del ácido propil fosfónico (solución al 50% en acetato de etilo, 495,0 !JI,

40 0,7778 mmol) y piridina (61 ,52 mg, 62,90 !JI, 0,7778 mmol). Se tapó la reacción y se calentó a 60"C durante 16 horas. Se enfrió la reacción a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (10 mi) y se interrumpió con solución saturada de Na2C03 (6 mi). Después de agitar durante 20 minutos, la capa orgánica se separó, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. La purificación mediante cromatografia en gel de sílice (acetato de etilo en diclorom etano al 0%-20%) propo rc ionó N-(6-(7 -azabiciclo[. 2.21] hepta n-7 -il)--2 -(trifluorom etil )piridin-3-il)--4oxo-5

45 (triftuorometil)-1,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (137 mg, rendimiento del 71%). LCfMS miz 497,5 [M+H]', tiempo de retención 1,92 minutos (RP-C18, CH3CN aI 10%-99%fTFA al 0,05% durante 3 minutos).

A u n a su sp en s ió n de N-[6-(7 -azabiciclo[2 .2.1]heptan-7 -il)--2-(trifluorometil)--3-pirid il]-4-oxo-5-(trifluorometil )-1H-quinolina-3-carboxamida (130 mg, 0,2619 mmol) en diclorometano (2 mi) y metanol (1 mi) se añadió, gota a gota, 50 HCI 2 M en éter (131 ,O !JI de 2 M, 0,2619 mmol), en atmósfera de nitrógeno. La reacción pasó de una suspensión a una solución transparente. Se agitó la solución durante 20 minutos, lo que dio como resultado la precipitación de la sal de clorhidrato. Se diluyó la suspensión con éter dietílico y se agitó durante 2 horas. La sal se filtró y se lavó con éte r die tí I i co pa r a dar clorhidrato de N-[6-(7 -azabiciclo[2.2.1]heptan-7 -il)--2-(trifluorometil )--3-piridil]-4-oxo-5(triftuorometil)-1H-quinolina-3-carboxamida (133 mg, 95°/0 de rendimiento). lH RMN (400,0 MHz, DMSO-de) c5 13, 23

55 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 12,22 (s, 1H), 8,88 (d, J =6,6 Hz, 1 H), 8,23 (d, J =9,0 Hz, 1H), 8,06 (dd, J =2,1, 7,2 Hz, 1 H), 7,96 -7,90 (m, 2H), 7,22 (d, J =9,1 Hz, 1 H), 4,52 (s, 2H ), 1,68 (d, J =7,2 Hz, 4H ), 1,47 (d, J =6,9 Hz, 4H).

Compuesto 1 de ejemplo: Preparación de clorhidrato de N-(6--(7-azabicido[2.2.1]heptan-7-il)--4-metilpiridin-3-il)--5metil 4-oxo-1 ,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (Compuesto 1, Tabla 1)

1. T3P, pi ridina 2-MeTHF

2, Hel MeOH

A una solución de ácido 5-metil-4-oxo-1H-quinolina-3-carboxilico (60 mg, 0,2953 mmol) y 6-(7azabiciclo[2,2,l]heptan-7-il}-4-metil-piridin-3-amina (60,03 mg, 0,2953 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano (1 mi) se añadió anhídrido ciclico del ácido propil fosfónico (375,8 ~I de 50% pfv, 0,5906 mmol) seguido de piridina (46,72 mg, 47,771J1, 0,5906 mmol)_ Se irradió la mezcla con microondas durante 1 hora a 100"C. l a mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo (2 mi) y se inactivó con solución de NaHC03 al 10% (3 mi). El precipitado resultante se filtró y se lavó con acetato de etilo (5 mi). Se resuspendió el sólido en Na2C03 acuoso al 20% (5 ml)fmetanol (2 mi) y se agitó durante 30 minutos. El sólido se filtró, se aclaró con agua y se secó al aire para proporcionar N-(6--(7-aza biciclo[2.2 .1]heptan-7 -il )--4-metilpiridin-3-il)--5-metil-4--oxo-1 ,4-dihid roq uinolina-3-ca rboxam ida (30 mg, rendimiento del 26%). lC/MS miz 389,4 [M+Hr, tiempo de retención 1,33 minutos (RP-C18, CH3CN al 10%-99%1 TFA al 0,05% durante 3 minutos)

S e d i s o Ivi ó N-(6-(7 -azabiciclo[2. 2.1]hepta n-7 -il)-4-metilpiridin-3-il)--5-metil-4-oxo-l ,4-dihidroquinolina-3carboxamida en metanol (2 mi) y se trató con HCI 2 M en éter (295,3 ~I de 2 M, 0,5906 mmol). Se evaporó la solución para proporcionar clorhidrato de N-(6--(7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7 -il)-4-metilpiridin-3-il)-5-metil-4-oxo-l ,4dihidroquinolina-3-carboxamida. l H RMN (400,0 MHz, DMSO-da) i5 12,71 (s, lH), 12,12 (s, 1 H), 8,78 (s, lH), 8,74 (s, lH), 7,63 -7,59 (m, lH), 7,54 (d, J= 8,3 Hz, lH), 7,22 (d, J= 7,1 Hz, lH), 6,81 (s, lH), 4,44 (s, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,65 (d, J = 7,2 Hz, 4H), 1,42 (d, J =6,8 Hz, 4H ).

los datos analíticos para los compuestos de la Tabla 1 se muestran a continuación en la Tabla 2:

Comp, de ejemplo #

l CfMS M+l LC/RT mm RM N

1

389,40 1,33 H RMN (400,0 MHz, DMSO da) li 12,71 (s, 1 H), 12,12 (s, 1 H), 8,78 (s, lH), 8,74 (s, lH), 7,63 -7,59 (m, 1H), 7,54 (d, J= 8,3 Hz, lH), 7,22 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,81 (s, lH), 4,44 (s, 2H), 2,91 (s, 3H ), 2,28 I (' , 3Hl , 1,65 (d, J =7,2 Hz, 4H l, 1,42 (d, J =6,8 Hz, 4Hl:

2

497,50 1,92 H RMN (400,0 MHz, DMSO da) 013,23 (d , J -5,8 Hz, lH), 12,22 (s , lH), 8,88 (d, J = 6,6 Hz, lH), 8,23 (d, J = 9,0 Hz, lH), 8,06 (dd , J =2,1, 7,2 Hz, 1H), 7,96-7,90 (m, 2H), 7,22 (d, J= 9,1 Hz, lH), 4,52 I (', 2Hl , 1,68 (d, J =7,2 Hz, 4H j, 1,47(d, J =6,9 Hz, 4Hl ,

3

443,70 1,94 H RMN (400,0 MHz, DMSO da) O 12,73 (s, lH), 12,52 (s, lH), 8,75 (s , lH), 8,28 (d, J = 9,2 Hz, lH), 7,64 -7,60 (m , lH), 7,54 (d, J = 8,2 Hz, lH), 7,23 -7,19 (m, 2H), 4,51 (s, 2H), 2,89 (s, 3H ), 1,67 (d, J = 7,9 Hz, 4H), 1,47 (d , J = 6,9 Hz, 4H),

Tiempo de retención

Ensayos para detectar y medir las propiedades de potenciación de .6.F508-CFTR de los compuestos

Métodos ópticos de potencial de membrana para ensayar las propiedades de modulación de .6.F508-CFTR de los compuestos

El ensayo utiliza colorantes fluorescentes de detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana utilizando un lector de placas fluorescentes (por ejemplo, FUPR 111, Molecular Devices, Inc.) como una lectura del aumento de flr.F50B-CFTR funcional en células NIH 3T3. la fuerza impulsora para la respuesta es la creación de un gradiente de ion cloruro junto con la activación del canal mediante una sola etapa de adición de líquido después de haber sido tratadas las células previamente con los compuestos y cargadas posteriormente con un colorante de detección de voltaje

Identificación de compuestos potenciadores

Para identificar los potenciadores de flr.F508-CFTR, se desarrolló un formato analítico HTS de adición doble. Este ensayo HTS uti liza colorantes fluorescentes de detección de voltaje para medir los cambios en el potencial de membrana en el FlIPR 111 como medida del aumento de la apertura y cierre (conductancia) de flr.F508-CFTR en

células NIH 3T3 con .6F508-CFTR con pretratamiento térmico. La fuerza impulsora para la respuesta es un gradiente de iones c r junto con la activación del canal con forskolina en una sola etapa de adición de liquido utilizando un lector de placas fluorescentes tal como FLlPR tll después de haber sido tratadas las células previamente con los compuestos potenciadores (o vehículo de control oMSO) y cargadas posteriormente con un colorante de redistribución

Soluciones

Solución de baño # 1: (en mM) NaC1160, KCI 4,5, CaCI2 2, MgCI2 1, HEPES 10, pH 7,4 con NaOH.

Solución de baño sin cloruro· Las sales de cloruro de la Solución de baño # 1 se sustituyen con sales de gluconato

Cultivo celular

Para las mediciones ópticas del potencial de membrana se utilizan fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan de forma estable .6F50B-CFTR. Las células se mantienen a 3r C en C02 al 5% y 90% de humedad en medio de Eagle modificado por Dulbecco complementado con glutamina 2 mM, suero de ternera fetal al 10%,

1 X NEAA, f3-ME, 1 X pen/strep y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm Para todos los ensayos ópticos, las células se sembraron a -20.000fpocillo en placas recubiertas de matrigel de 384 pocillos y se cultivaron durante 2 horas a 37"C antes de cultivarse a 27"C durante 24 horas para el ensayo del potenciador. Para los ensayos de corrección, las células se cultivan a 2r C ó 3r C con y sin los compuestos durante 16-24 horas

Ensayos electrofisiolÓQicos para ensayar las propiedades de modulación de .650B-CFTR de los compuestos.

1. Ensayo en cámara de Ussing

Se realizaron experimentos en cámara de Ussing en células epiteliales de las vías respiratorias polarizadas que expresaban .6FSOB-CFTR para caracte rizar adicionalmente los moduladores de .6F508-CFTR identificados en los ensayos ópticos. Se aislaron epitelios de las vías respiratorias FQ y no Fa a partir de tejido bronquial, se cultivaron como se ha descrito anteriormente (Galietta, L.JV, Lantero, S., Gazzolo, A., Sacco, O., Romano, L. , Rossi, GA y Zegarra-Moran, D. (1998) In vitro Cell. Dev. Biol. 34,478-481) y se sembraron en filtros Costar® Snapwell TId que se recubrieron previamente con medios acondicionados para NIH3T3. Después de cuatro días se retiraron los medios apicales y se cultivaron las células en una interiase aire-liquido durante > 14 dias antes de su uso. Esto dio como resultado una monocapa de células cilindricas completamente diferenciadas que eran ciliadas, rasgos que son característicos de los epitelios de las vías respiratorias. Se aislaron HBE no Fa de no fumadores sin enfermedad pulmonar conocida. Se aislaron HBE Fa de pacientes homocigóticos para .6F50B-CFTR.

Se montaron HBE cultivadas en insertos de cultivo celular Costar® Snapwell™ en una cámara de Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) y se midieron la resistencia transepitelial y la comente de cortocircuito en presencia de un gradiente de cr de basolateral a apical (Isc) utilizando un sistema de fijación de voltaje (Departamento de Bioingeniería, Universidad de lowa, lA). En resumen, se examinaron las HBE en modo de registro de fijación de voltaje (VhoId=OmV) a 37"C. La solución basolateral contenía (en mM) NaC1145, K2HP04 0,83, KH2P04 3,3, MgCI2 1,2, CaCI2 1,2, glucosa lO, HEPES 10 (pH ajustado a 7,35 con NaOH) y la solución apical contenia (en mM) gluconatode Na 145, MgCI2 1,2, CaCI2 1,2, glucosa 10, HEPES 10 (pH ajustado a 7,35 con NaOH).

Identificación de compuestos potenciadores

El protocolo típico utilizaba un gradiente de concentración de e l" de membrana basolateral a apical. Para establecer este gradiente, se utilizó solución de Ringer normal en la membrana basolateral, mientras que se sustituyó el NaCI apical por gluconato sódico equimolar (ajustado a pH 7,4 con NaOH) para dar un gran gradiente de concentración de c r a través del epitelio. Se añadieron forskolina (10 ¡.JM) Y todos los compuestos de ensayo aliado apical de los insertos de cultivo celular. Se comparó la eficacia de los supuestos potenciadores de .6F508-CFTR con la del potenciador conocido, genisteína.

2 Pinzamientos zonales

Se monitorizó la corriente total de CI" en células .6F508-NIH3T3 utilizando el pinzamiento zonal en su configuración ~periorated patch" (~parche periorado") como se ha descrito anteriormente (Rae, J., Cooper, K., Gales, P., y Watsky, M. (1991) J. Neurosci. Methods 37, 15-26). Los registros de fijación de voltaje se realizaron a 22"C utilizando un amplificador de pinzamiento zonal Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). La solución de la pipeta contenía (en mM) N-metil-o-glucamina(NMoG}-CI 150, MgCI2 2, CaCI2 2, EGTA 10, HEPES 10 Y 240 ¡.Jg/ml de anfotericina-B (pH ajustado a 7,35 con HCI). El medio extracelular contenía (en mM) NMDG-CI 150, MgCI2 2, CaCI2 2, HEPES 10 (pH ajustado a 7,35 con HCI). La generación de pulsos, la adquisición de datos y el análisis se realizaron utilizando un PC equipado con una interfaz Digidala 1320 AJO junto con Clampe.x B (Axon Instruments Inc.). Para activar el .6F50B-CFTR, se añadieron al baño forskolina 10 IJM Y genisteína 20 IJM Y la relación corriente-voltaje se monitorizó cada 30 segundos

Identificación de compuestos potenciadores

También se investigó la capacidad de los potenciadores de .6.F50B-CFTR para aumentar la cOfriente macroscópica de cr de .6.F50B-CFTR (1t.F506) en células NIH3T3 que expresan de forma estable .6.F50B-CFTR utilizando las técnicas de pinzamiento zonal en su configuración ~parche perforado" Los potenciadores identificados a partir de los ensayos ópticos provocaban un aumento dependiente de la dosis en IllF506 con potencia y eficacia similares observadas en los ensayos ópticos. En todas las células examinadas, el potencial inverso antes y durante la aplicación del potenciador fue de aproximadamente -30 mV, que es el Ea calculado (-28 mV).

Cultivo celular

Se utilizan fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan de forma estable .6.F50B-CFTR para los pinzamientos zonales en su configuración "whole cell" ("célula completa"). Las células se mantienen a 3rc en C02 al 5% y 90% de humedad en medio de Eagle modificado pOf Dulbecco complementado con glutamina 2 mM, suero de ternera fetal al 10%, 1 XNEAA, ¡3-ME, 1 Xpen/strep y HEPES 25mM en matraces de cultivo de 175cm2. Para los pinzamientos zonales en su configuración "célula completa", se sembraron 2.500-5.000 células en cubreobjetos de vidrio recubiertos con poli-L-lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 2T'C antes de su uso para ensayar la actividad de los potenciadores; y se incubaron con o sin el compuesto de corrección a 3rC para medir la actividad de los correctores

3. Registros de un solo canal

Se observó la actividad de apertura y cierre de CFTR de tipo silvestre y .6.F508-CFTR con pretratamiento térm ico expresado en células NIH3T3 utilizando pinzamientos zonales en su variante ·excised inside-out membrane" ("membrana escindida interior-fuera") como se ha descrito anteriormente (Dalemans, W., Barbry, P., Champigny, G., Jallat, S ., Dott, K., Dreyer, D., Crystal, R.G., Pavirani, A., Lecocq, J-P., Lazdunski, M. (1991) Nature 354, 526-528) utilizando un amplificador de pinzamiento zonal Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.). La pipeta contenía (en mM): NMDG 150, ácido aspártico 150, CaCI2 5, MgCI2 2 Y HEPES 10 (pH ajustado a 7,35 con base Tris). El baño contenía (en mM): NMDG-CI 150, MgCI2 2, EGTA 5, TES 10 Y base Tris 14 (pH ajustado a 7,35 con HCI). Después de la escisión, el CFTR de tipo silvestre y el .6.F50B-CFTR se activaron añadiendo Mg-ATP 1 mM, 75 nM de la subunidad calalítica de la proteína quinasa dependiente de AMPc (PKA; Promega Carpo Madison, WI) y NaF 10 mM para inhibir la proteína fosfalasas, lo que impidió la disminución de la corriente. El potencial de la pipeta se mantuvo a 80 mV. La actividad del canal se analizó a partir de "parches de membrana" (áreas de membrana pinzada) que contenían ~ 2 canales activos. El número máximo de aberturas simultáneas determinaba el número de canales activos durante un experimento. Para determinar la amplitud de corriente de un solo canal, los datos registrados de 120 segundos de actividad .6.F50S-CFTR se filtraron ·off-líne" a 100 Hz y a continuación se utilizaron para construir histogramas de amplitud de todos los puntos que se ajustaron con funciones multigaussianas mediante el software Bio-Patch Analysis (Bio-Logic Comp. Francia). La corriente microscópica total y la probabilidad de apertura (Pe) se determinaron a partir de 120 segundos de actividad del canal. La Po se determinó mediante el software Bio-Patch o a partir de la relación Po = Ifi(N), en la que I =corriente media, i =amplitud de corriente de un solo canal y N =número de canales activos en el ~parche"

Cultivo celular

Se utilizan fibroblastos de ratón NIH3T3 que expresan de forma estable .6.F50B-CFTR para los pinzamientos zonales en su variante "membrana escindida" Las células se mantienen a 37"C en C02 al 5% y 90% de humedad en medio de Eagle modificado por Dulbecco complementado con glutamina 2 mM, suero de ternera fetal al 10%, 1 X NEAA, ¡3-ME, 1 X penfstrep y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2 Para los registros de un solo canal, se sembraron 2.500-5.000 células en cubreobjetos de vidrio recubiertos con poli-L-lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 2T'C antes de su uso

Los compuestos de la invención son útiles como moduladores de los transportadores de casete de unión a ATP Los ejemplos de actividades y eficacias de los compuestos de Fórmula (1) se muestran a continuación en la Tabla 3. La actividad del compuesto se ilustra con " ........." si se medía que la actividad era inferior a 2,0 ~M, "....... si se medía que la actividad era de 2 ~M a 5,0 ~M, ..... si se medía que la actividad era superior a 5,0 ~M, Y ._. si no se disponía de datos. La eficacia se ilustra con " .......... si se calculaba que la eficacia era superior al 100%, "......" si se calculaba que la eficacia era del 100% al 25%, " ..." si se calculaba que la eficacia era inferior al 25%, y . _. si no se disponía de datos. Cabe señalar que el 100% de eficacia es la respuesta máxima obtenida con eI 4-metil-2-(5-fenil1 H-pirazol-3-íl)fenol

Tabla 3

N° de com

uesto Actividad CE50 m % de eficacia

1

+++ ++

2

+++ ++

3

+++ ++

1. Un compuesto de Fórmula I

.--,

. .

, A:

R' e e ríY-"-

R'óYNA.rX

I h I H R'

N H

(1);

o sales farmacéutica mente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre·

h eRO "N~

(a)

(b) (e) (d)

35

45

en la que· R1 es -CH~, -CFl o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno; y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono 2 El compuesto según la cláusula 1, en el que el anillo A es

55

!-N4i ja)

3. El compuesto según la cláusula 1, en el que el anillo A es

65

\-N~ (b) \l 4 El compuesto según la cláusula 1, en el que el anillo A es

(e)

5. El compuesto según la cláusula 1, en el que el anillo A es

H

oRa

",N~

(d)

6 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 2-5, en el que R' es -CF3

7. El compuesto según cualquiera de las cláusulas 2-5, en el que R' es -CN.

25 8. El compuesto según cualquiera de las cláusulas 2-5, en el que R' es -CH3.

9. El compuesto según cualquiera de las cláusu las 6-8 , en el que R2 es hidrógeno.

10 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 6-8, en el que R2 es -CH3 2

11. El compuesto según cualquiera de las cláusulas 6-8, en el que Res -CF3. 12 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 6-8, en el que R es -OH

35 13 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 6-8, en el que R2 es -CHPH 14 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 9-13, en el que R3 es hidrógeno

15. El compuesto segun cualquiera de las cláusulas 9-13, en el que R3 es -CH3. 16 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 9-13, en el que R3 es -OCH3. 17 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 9-12, en el que R3 es -CN

45 18 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-17, en el que X es nitrógeno 19 El compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-17, en el que Y es nitrógeno 20 Un compuesto seleccionado de entre

• y

21 . Una composición farmacéutica que comprende un compuesto segun cualquiera de las cláusulas 1-20 y un vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable

22. La composición farmacéutica según la cláusula 21 , que comprende adicionalmente un agente adicional

65 seleccionado de entre un mucolítico, un broncodilatador, un antibiótico, un antiinfeccioso, un antiinflamatOfio, un modulador de CFTR distinto de un compuesto de Fórmula (1) o un agente nutricional

23.

La composición farmacéutica según la cláusula 22, en la que dicho agente adicional es un modulador de CFTR distinto de un compuesto de Fórmula (1).

24.

Un método para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad en un paciente, en el que dicha enfermedad está seleccionada de entre la fibrosis quistica, el asma, la EPOC inducida por tabaquismo, la bronquitis crónica, la rinosinusitis, el estreñimiento, la pancreatitis, la insuficiencia pancreática, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática, la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), la enfermedad hepática, el enfisema hereditario, la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de coagulación-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteina C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lipidos, tal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de tipo 1, la abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como la enfermedad de células 1fpseudo-Hurler, la mucopolisacaridosis, SandhoffTay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo 11, la poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, la diabetes mellitus, el enanismo de laron, la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparaliroidismo primario, el melanoma, la glucanosis CDG de tipo 1, el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta, la hipofibrinogenemia hereditaria, la deficiencia de ACT, la diabetes insípida (DI), la DI neurohipofisaria, la DI nefrogénica, el sindrome de Charcot-Marie Tooth, la enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Par1<inson, la esclerosis lateral amiotrófica, la parálisis supranuclear progresiva, la enfermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa de tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, la atrofia dentatorubro palidoluisiana y la distrofia miotónica, asi como encefalopatias espongiformes tales como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida al defecto de procesamiento de proteínas pri6nicas). la enfermedad de Fabry, el síndrome de Straussler-Scheinker, la EPOC, la enfermedad del ojo seco, la insuficiencia pancreática, la osteoporosis, la osteopenia, el síndrome de Gorham, las canalopatias de cloruro, la miotonía congénita (formas Thomson y Becker), el síndrome de Bartler de tipo 111, la enfermedad de Oent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (DCP), la OCP con situs inversus (también conocida como síndrome de Kartagener), la OCP sin situs inversus y la aplasia ciliar o la enfermedad de Sjogren , comprendiendo dicho método la etapa de administrar a dicho paciente una cantidad eficaz de un compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-20_

25.

El método de acuerdo a la cláusula 24, en el que dicha enfermedad es la fibrosis quística.

26 Un método para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad en un paciente, en el que dicha enfermedad está asociada con la función reducida de CFTR debida a mutaciones en el gen que codifica el CFTR o factores ambientales, comprendiendo dicho método la etapa de administrar a dicho paciente una cantidad eficaz de un compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-20.

27.

El método según la cláusula 26, en el que la enfermedad es la fibrosis quística, la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVO), la infertilidad femenina debida a la ausencia congénita del útero y la vagina (CAUV), la pancreatitis crónica idiopática (ICP), la pancreatitis idiopática recurrente, la pancreatitis aguda idiopática, la rinosinusitis crónica, la colangitis esclerosante primaria, la diabetes, el ojo seco, el estreñimiento, la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), las enfermedades óseas, y el asma

28.

Un método para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad en un paciente, en el que dicha enfermedad está asociada con la función normal de CFTR, comprendiendo dicho método la etapa de administrar a dicho paciente una cantidad eficaz de un compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-20

29.

El método según la cláusula 28, en el que la enfermedad es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la rinosinusitis, el estreñimiento, la pancreatitis crónica, la pancreatitis recurrente, y la pancreatitis aguda, la insuficiencia pancreática, la infertilidad masculina debida a congénita ausencia bilateral de los conductos deferentes (CBAVo), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática, la enfermedad hepática, el enfisema hereditario, los cálculos biliares, la enfermedad por reHujo gastroesofágico, las neoplasias gastrointestinales, la enfermedad inflamatoria intestinal, el estreñimiento, la diabetes, la artritis, la osteoporosis y la osteopenia

30.

El método según la cláusula 28, en el que la enfermedad es la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de coagulación-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteina C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lípidos, tal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como enfermedad de células IIpseudo-Hurler, la mucopolisacaridosis, SandhoffTay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo 11, la poliendocrinopatíalhiperinsulinemia, la diabetes mellitus, el enanismo de Laron, la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparatiroidismo primario, el melanoma, la glucanosis COG de tipo 1, el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta, la hipofibrinogenemia hereditaria, la deficiencia de ACT, la diabetes insípida (DI), la DI neurohipofisaria, la DI nefrogénica, el síndrome de Charcot-Marie Tooth, la enfermedad Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Par1<inson, la esclerosis lateral amiotrófica, la parálisis supranuclear

progresiva, la enfermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa de tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, la atrofia dentatorubro pa lidoluisiana, y la distrofia miotónica, así como encefalopatías espongiformes, tales como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto de procesamiento de proteínas priónicas), la enfermedad de Fabry, el síndrome

5 Straussler-Scheinker, el síndrome de Gorham, las canalopatías de cloruro, la miotonía congénita (formas Thomson y Becker), síndrome de Bartter de tipo 111, la enfermedad de Dent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (DCP), la DCP con situs inversus (también conocida como síndrome de Kartagener), la DCP sin situs inversus y la aplasia ciliar o la enfermedad de Sjogren.

31 Un kit para su uso en la medición de la actividad de CFTR o un fragmento del mismo en una muestra biológica in vitro o in vivo , que comprende·

(i)

una composición que comprende un compuesto de Fórmula (1) según la reivindicación 1;

(ii)

las instrucciones para·

a) poner en contacto la composición coo la muestra biológica;

b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo

32. El kit según la cláusula 31, que comprende adicionalmente instrucciones para:

a) poner en contacto una composición adicional con la muestra biológica: b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo en presencia de dicho compuesto adicional, y c) comparar la actividad del CFTR en presencia del compuesto adicional con la densidad de CFTR en presencia de una composición de Fórmula (1)

33.

Un método para modular la actividad de CFTR en una muestra biológica que comprende la etapa de poner en contacto dicho CFTR con un compuesto según cualquiera de las cláusulas 1-20.

34.

Un proceso para preparar un compuesto de Fórmula (le):

" ..,

, A:

R, O O

(¡'y, ...., .

R3~N~X

35 'lA) H R'

~

(le)

o sales de farmacéutica mente aceptables del mismo, en el que el proceso comprende:

(a) hacer reaccionar el ácido de fórmula 1d con una amina de fórmula 2e para proporcionar un compuesto de Fórmula (1)

m .--.

: A ..

'O

R, O O

(y",,:

R, I "'<l;:; I OH ...

R3~N~X

A ~

ll)..) H R'

~

fd 2e (1)

en la que:

el anillo A está seleccionado de entre·

(a) (b) (e) (d)

en el que·

R1

es -CH3, -CF3 o -CN;

5 R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno, y

R3

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS),

10 terc-butildifenilsililo (TBDPS), lerc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsilil0 (TIPS) y (2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono,

35 El proceso según la cláusula 34, en el que la reacción del ácido de fórmula 1d con la amina de fórmula 2c se 15 produce en un disolvente en presencia de hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-i1)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) y trietilamina o en un disolvente en presencia de anhídrido cíclico del ácido propil fosfónico (T3P®) y piridina.

36. El proceso según la cláusula 35, en el que el disolvente comprende N,N-dimetil formamida, acetato de etilo o 2 -metiltetra hid rofura no.

37 El proceso según la cláusula 34, en el que Ra es hidrógeno o TBDMS

38. El proceso según la cláusula 37, en el que Ra es TBDMS.

25 39. El proceso según la cláusula 34 que comprende adicionalmente una etapa de desprotección para eliminar el grupo protectOf de sililo cuando el anillo A es

H

f"y0R'

xN~

(e) o (d, 35

en el que R3 es un grupo protectOf de sililo, para generar un compuesto de Fórmula 1, en el que el anillo A es

H

R'O H

f"y0R'

\:N~

xN~

(e) o (d)

40. El proceso según la cláusula 34, en el que la amina de fórmula 2e se prepara a partir de un compuesto de 50 fórmula 2a que comprende las etapas de

(a) hacer reaccionar el compuesto de fórmula 2a con una amina de fórmula 3 para proporcionar el compuesto de fórmula 2b

55 ,# -'.

¡ A ',

: A : HN••••

rí~Hal 3 ríy·..·:

60 O;zN--yX 02N~ R' R' 2a 2b

en la que:

Hal es F, el, Bro 1; y

la amina de fórmula 3 es

y

(b) reducir el compuesto de fórmula 2b a la amina de fórmula 2e

•

41 . El proceso según la cláusula 40, en el que la amina de fórmula 3 de la etapa (al se genera in situ a partir de la sal clorhidrato de am ina

42 El proceso según la cláusula 40, en el que Ra es hidrógeno o TBDMS

43. El proceso según la cláusula 42, en el que Ra es TBDMS.

44 El proceso según la cláusula 40, en el que la etapa (a) se produce en un disolvente aprótico polar en presencia de una base amina terciaria. 45 El proceso según la cláusula 44, en el que la etapa (a) se produce en acetonitrilo en presencia de Irietilamina 46 El proceso según la cláusula 40, en el que la t emperatura de reacción de la etapa (a) es de entre

aproximadamente 75Q e y aproximadamente 85Q e.

47.

El proceso según la cláusula 40, en el que el tiempo de reacción es de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 30 horas

48.

El proceso según la cláusula 40, en el que la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar en presencia de un catalizador de pa ladio

49.

El proceso según la cláusula 48, en el que el disolvente de la etapa (b) comprende metanol o etanol. 50 El proceso según la cláusula 40, en el que la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar en presencia de

55 Fe y FeS04 o Zn y AcOH 51 El proceso según la cláusula 50, en el que el disolvente prólico polar es agua 52 Un proceso para preparar un compuesto de FÓfmula le,

, A:

R' O O

(y, ..... .

5 R'~N~X

U ) N

H R'

H

le

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, que comprende las etapas de"

(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 2a con una amina de fórmula 3 para proporcionar un compuesto de fórmu la 2b

20 ,~ -~,

, ,

, A ' HN.....

3 • 25

(b) convertir el compuesto de fÓfmula 2b en la amina de fÓfmula 2c mediante hidrogenación

.-', ...,

. .

: A : , A'

(y..... (y....:

~N~X ~N~X

R' R' 40 2b 2e

y

(c) hacer reaccionar la amina de fórmula 2e con un ácido de fórmula 1d para proporciooar un compuesto de 4 5 Fórmula le

..--. . .

O O

' : A ; 50 .,~ R3w~Y·.~.J

I -<::;:: I OH ... H,N ~Y"'" • ~ N I ....,x

,X

¿ N

1.& I H Rt

H

R'

~

Id 2c (It)

en la que Hal es F, e l, Sr 01; la amina de fórmula 3 es

y el anillo A está seleccionado de entre·

o 15

H

4;{0R'

';,;N

en el que

R1

25 es -CH3, -CF3 o -CN; R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno;

R3

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), ferc-butildifenilsililo (TBDPS), ferc-butildimetilsililo (TBDMS), triiSOPfOpilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEMI;y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono.

53 El proceso según la cláusula 52, en el que la amina de fórmula 3

de la etapa (a) se genera in sftu a partir de la sal dorhidrato de am ina 54 El proceso según la cláusula 53, en el que R3 es hidrógeno o TBDMS 4 5 55 El proceso según la cláusula 54, en el que R3 es TBDMS

56 El proceso según la cláusula 52, en el que la etapa (a) se produce en un disolvente aprótico polar en presencia de una base amina terciaria. 57 El proceso según la cláusula 56, en el que la etapa (a) se produce en acetonitrilo en presencia de trietilamina

58. El proceso según la cláusula 52, en el que la t emperatura de reacción de la etapa (a) es de entre aproximadamente 75Q C y aproximadamente 85Q C.

55 59. El proceso según la cláusula 52, en el que el tiempo de reacción es de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 30 horas.

60. El proceso según la cláusula 52, en el que la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar en presencia de un catalizador de paladio

61 . El proceso según la cláusula 60, en el que el disolvente de la etapa (b) comprende metanol o etanol.

62 El proceso según la cláusula 52, en el que la etapa (b) se produce en un disolvente prótico polar en presencia de Fe y FeS04 o Zn y AcOH.

63.

El proceso según la cláusula 62, en el que el disolvente prótico polar es agua

64.

El proceso según la cláusula 52, en el que la etapa (e) se produce en un disolvente en presencia de hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) y trietilamina o en un disolvente en presencia de anhídrido cíclico del ácido propil fosfónico (T3P®) y piridina.

65.

El proceso según la cláusula 64, en el que el disolvente de la etapa (e) comprende N,N-dimetil formamida (DMF), acetato de eti lo o 2-metiltetrahidrofurano.

66.

El proceso según la cláusula 64, en el que R3 es hidrógeno o TBDMS. 67 El proceso según la cláusula 66, en el que R3 es TBDMS

68. El proceso según la cláusula 52 que comprende adicionalmente una reacción de desprotección cuando el ani llo

Ae, 15

R'O H

JrOR'

~N4r

. (el, o ,,~ (dl;

en el que R3 es un grupo protector de sililo, para generar un compuesto de Fórmula I en el que el anillo A es

JrOH (d).

(e), ° "N~

69. Un compuesto que es

45 en el que el anillo A está seleccionado de entre·

fr°R'

l-N~,\-N'Ef , >.N~H. "N~ H

o 55

(a) (b) (c) (d)

en el que· R1

es -CH3, -CF3 o -CN;

R3

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimelilsililo (TMS), lerc-butildifenilsililo (TBDPS), lerc-butildimetilsililo (TBOMS), triisopropilsililo (TIPS) y 65 {2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbooo.

70. Un compuesto que es

en el que el anillo A está seleccionado de entre·

H

)"y0R'

¡-N~ , \-N-(T , "N~H ,o " N'-'c::i

(a) (b) (e) (d)

en el que·

R1

es -CH3, -CF3 o -CN;

Ra

es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsi1ilo (TMS), lerc-butildifenilsililo (TBDPS), lerc-butildimetilsililo (TBOMS), triisopropilsililo (TIPS) y 12-(lrimetilsilil)etoxi]melilo (SEM); y

uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

35 71 Un compuesto de Fórmula le : A :.

R' O O ¡;y-_

'" N /.

R'cr I

lA I H R' X

~

(le);

o sales farmacéutica mente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre

R'O H

ORa 55 \NfrH '-'Q (e), o ",N (d);

en el que R1 es -CH3, -CF3 o -CN;

R2 es hidrógeno, -CH3, -CF3, -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN; 65 siempre que R2 y R3 no sean simu l1áneamente hidrógeno, y

Ra es un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS). terc-butildimetilsililo (TBDMS). triisopropilsililo (TIPS) y [2-(trimetilsili l)etoxi]metilo (SEM); y uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

5 72. Un compuesto de Fórmula I , --,

. '

, A :

R' O O

( Y"'"

R3~~X

ilA"'!! ~

R'

~ .

15 (1);

o sales farmacéutica mente aceptables del mismo, en la que: el anillo A está seleccionado de entre:

25 frH °R'

l-N~, \-N~"N~H.o "N~

(a) (b) (e) (d)

en el que·

R1 es -CH3. -CFJ, o -CN;

35 R2 es hidrógeno. -CH3. -CF3. -OH o -CH20H; R3 es hidrógeno, -CH3, -OCH3 o -CN ; siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno. y

uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono, preparado mediante el proceso según cualquiera de las cláusulas de 52-68.

73. Un compuesto que está seleccionado del grupo que consiste en

, y

55 preparado mediante el proceso según cualquiera de las cláusulas de 52-68

Claims (20)

1. Reivindicaciones

   1 Compuesto de Fórmula I

   : A : R' a a

   R3d f;YY--'-I

   x

   '" N ~

   10 I ¿. I H R'

   ~

   (1); 15

   o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que·

   el anillo A está selecx:ionado de entre:

   frH aR'

   25 "N~

   (a) (b) (e) (d)

   en el que·

   R1 es -CH.), -CF3 o -CN;

   R2

   35 es hidrógeno, -CH), -CF3, -OH o -CH20H; R.) es hidrógeno, -CH.), -OCH.) o -CN;

   R8

   es hidrógeno o un grupo protector de sililo seleccionado del grupo que consiste en trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), lerc-butildimetilsililo (TBDMS), lriisopropilsililo (TtPS) y 12-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM);

   siempre que R2 y R3 no sean simultáneamente hidrógeno; y

   uno entre X e Y es nitrógeno y el otro es carbono

   45 2 Compuesto según la reivindicación 1, en el que el anillo A es

   ¡-N~

   50 (al

   3 Compuesto según la reivindicación 1, en el que el anillo A es

   \-N~

   (b) \j
2. 4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el anillo A es

   (e)

   5 Compuesto según la reivindicación 1, en el que el anillo A es

   H

   OR'

   ,,-N~

   (d)

   6 Compuesto según cua lquiera de las reivindicaciones 2-5, en el que R1 es -CF3
3. 7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 2-5, en el que R1 es -CN. 8 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 2-5, en el que R1 es -CH3

   9 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en el que R2 es hidrógeno

4. 10.

   Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en el que R2 es -CH3.

5. 11.

   Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en el que R2 es -CF3. 12 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en el que R2 es -OH 13 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en el que R2 es -CH:pH.

6. 14. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que R3 es hidrógeno.

   15 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en el que R3es -CH3 3
7. 16. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en el que Res -OCH3. 17 Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en el que R3es -CN
8. 18. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en el que X es nitrógeno.

9. 19.

   Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-17 en el que Y es nitrógeno.

10. 20.

    Compuesto según la reivindicación 1 en el que el compuesto está seleccionado de entre

    , y

11. 21.

    Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-20 y un vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable

12. 22.

    Composición farmacéutica según la reivindicación 21 , que comprende adicionalmente un agente adicional

    65 seleccionado de entre un mucolítico, un broncodilatador, un antibiótico, un antiinfeccioso, un antiinflamatOfio, un modulador de CFTR distinto de un compuesto de Fórmula (t) o un agente nulricional

    23_ Composición farmacéutica según la reivindicación 22, en la que dicho agente adicional es un modulador de CFTR d istinto de un compuesto de Fórmula (1).

    24_ Compuesto según las reivindicaciones 1 a 20 para su uso en el tratamiento o la reducción de la gravedad de una enfermedad en un paciente, en el que dicha enfermedad está seleccionada de entre la fibrosis quística, el asma, la EPOC inducida por tabaquismo, la bronquitis crónica, la rinosinusitis, el estreñimiento, la pancreatitis, la insuficiencia pancreática, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVD), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática, la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), la enfermedad hepática, el enfisema hereditario, la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de coagulación-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteína C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lípidos, tal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de ti po 1, la abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como la enfermedad de células I/pseudo-Huner, la mucopolisacaridosis, SandhoffTay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo 11, la poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, la diabetes mellitus, el enanismo de Laron, la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparatiroidismo primario, el melanoma, la glucanosis CDG de tipo 1, el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta, la hipofibrinogenemia hereditaria, la deficiencia de ACT, la diabetes in si pida (DI), la DI neurohipofisaria, la DI nefrogénica, el sindrome de Charcot-Marie Tooth, la enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica, la parálisis supranuclear progresiva, la enfermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa de tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, la atrofia dentatorubro palidoluisiana y la distrofia miotónica, así como encefalopalías espongiformes, tales como la enfermedad hereditaria de Creutzfeldt-Jakob (debida a un defecto de procesamiento de proteinas priónicas), la enfermedad de Fabry, el sindrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, la EPOC, la enfermedad del ojo seco, la insuficiencia pancreática, la osteoporosis, la osteopenia, el síndrome de Gorham, las canalopatías de cloruro, la miotonía congénita (formas Thomson y Becker), el síndrome de Barlter de tipo 111, la enfermedad de Dent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (OCP), la OCP con situs inversus (también conocida como síndrome de Kartagener), la DCP sin situs inversus y la aplasia ciliar o la enfermedad de Sjogren_
13. 25. Compuesto para su uso según la reivindicación 24, en el que dicha enfermedad es la fibrosis quística.

    26 Compuesto para su uso según la reivindicación 24, en el que dicha enfermedad está asociada con la función reducida de CFTR debida a mutaciones en el gen que codifica el CFTR o factores ambientales, en el que la enfermedad es la fibrosis quística, la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la infertilidad masculina debida a ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVO), la infertilidad femenina debida a la ausencia congénita del útero y la vagina (CAUV), la pancreatitis crónica idiopática (ICP), la pancreatitis recurrente idiopática, la pancreatitis aguda idiopática, la rinosinusitis crónica, la colangitis esclerosante primaria, la diabetes, el ojo seco, el estreñimiento, la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), las enfermedades óseas o el asma.

    27_Compuesto para su uso según la reivindicación 24, en el que dicha enfermedad está asociada con la función normal de CFTR

    28_ Compuesto para su uso según la reivindicación 27, en el que la enfermedad es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la bronquitis crónica, la bronquitis recurrente, la bronquitis aguda, la rinosinusitis, el estreñimiento, la pancreatitis crónica, la pancreatitis recurrente, y la pancreatitis aguda, la insuficiencia pancreática, la infertilidad masculina debida a la ausencia bilateral congénita de los conductos deferentes (CBAVO), la enfermedad pulmonar leve, la pancreatitis idiopática, la enfermedad hepática, el enfisema hereditario, los cálculos biliares, la enfermedad por reflujo gastroesofágico, las neoplasias gastrointestinales, la enfermedad inflamatoria intestinal, el estreñimiento, la diabetes, la artritis, la osteoporosis o la osteopenia
14. 29. Compuesto para su uso según la reivindicación 27, en el que la enfermedad es la hemocromatosis hereditaria, las deficiencias de la coagulación-fibrinólisis, tal como la deficiencia de proteina C, el angioedema hereditario de tipo 1, las deficiencias en el procesamiento de lípidos, tal como la hipercolesterolemia familiar, la quilomicronemia de tipo 1, la abetalipoproteinemia, las enfermedades de depósito lisosomal, tal como la enfermedad de células I/pseudo-Huner, la mucopolisacaridosis, SandhoffTay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo 11, l a poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, la diabetes mellitus, el enanismo de Laron, la deficiencia de mieloperoxidasa, el hipoparatiroidismo primario, el melanoma, la glucanosis COG de tipo 1, el hipertiroidismo congénito, la osteogénesis imperfecta, la hipofibrinogenemia hereditaria, la deficiencia de ACT, la diabetes insípida (DI), la DI neurohipofisaria, la DI nefrogénica, el síndrome de Charcot-Marie Tooth, la enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica, la parálisis supranuclear progresiva, la enfermedad de Pick, varios trastornos neurológicos de la poliglutamina tales como el Huntington, la ataxia espinocerebelosa tipo 1, la atrofia muscular espinal y bulbar, la atrofia dentatorubro palidoluisiana y la distrofia miotónica, así como encefalopatías espongiformes, tales como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto de procesamiento de proteinas priónicas), la enfermedad de Fabry, el síndrome de Gerslmann-Straussler-Scheinker, el síndrome de Gorham, las canalopatías de cloruro, la miolonía congénita (formas Thomson y Becker), el síndrome de Bartler de tipo 111, la enfermedad de Dent, la hiperekplexia, la epilepsia, la enfermedad de depósito lisosomal, el síndrome de Angelman, la discinesia ciliar primaria (DCP), la DCP con situs inversus (también conocida como síndrome de Kartagener), la DCP sin situs

    5 inversus y la aplasia cil iar o la enfermedad de Sjogren
15. 30. Kit para su uso en la medición de la actividad de CFTR o un fragmento del mismo en una muestra biológica in vitro o in vivo, que comprende:

    10 (i) una composición que comprende un compuesto de Fórmula (1) segun cualquiera de las reivindicaciones 1-20;

    (ii) instrucciones para·

    a) poner en contacto la composición con la muestra biológica;

    b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo
16. 31. Kit segun la reivindicación 30, que comprende adicionalmente instrucciones para:

    a) poner en contacto un compuesto adicional con la muestra biológica;

    b) medir la actividad de dicho CFTR o un fragmento del mismo en presencia de dicho compuesto adicional, y

    20 c) comparar la actividad de CFTR o un fragmento del mismo en presencia del compuesto adicional con la actividad de CFTR o un fragmento del mismo en presencia de una composición que comprende un compuesto de Fórmula (1) segun cualquiera de las reivindicaciones 1-20.
17. 32. Kit según la reivindicación 31, en el que la etapa de comparar la actividad de dicho CFTR o fragmento del mismo 25 proporciona una medida de la densidad de dicho CFTR o fragmento del mismo.
18. 33. Método in vitre de modulación de la actividad de CFTR en una muestra biológica que comprende la etapa de poner en contacto dicho CFTR con un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-20.

    30 34. Proceso para preparar un compuesto de Fórmula I o sales farmacéutica mente aceptables del mismo, según la reivindicación 1, que comprende las etapas de:

    (a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 2a con una amina de fórmula J para proporcionar un compuesto de fórmu la 2b

    , A :

    HN ___

    40 ("'("., , 3 '

    02N~X

    R'
19. 2. 45

    (b) convertir el compuesto de fórmula 2b en la amina de fórmula 2c mediante hidrogenación

    : A '.

    (y,...:

    H2N~X

    55 R'

    2c

    60 y

    (c) hacer reaccionar la amina de fórmu la 2c con un ácido de Fórmula Id para proporcionar un compuesto de Fórmula 1,

    5

    R' O O R'u):Y1"'<::: I OH Ó N H . ' ' , A ' ~y-,' H2N ",X R' • " A" R,Wj~Y"':l .ó I H R1 ~

    10

    1d 2e (~

    en la que Hal es F, el, Sr o 1; y la amina de fórmula 3 es

    15 R'O H {tORO

    HNq HN~H

    HN

    20 HN~

    , , o
20. 35. Proceso según la reivindicación 34 que comprende adicionalmente una reacción de desprotección cuando el 25 anillo A es

    H

    R'O H

    i'Y0R'

    30 \eN

    (e), o "N~ (d),

    35 en el que Ra es un grupo protector de sililo, para generar un compuesto de Fórmula 1 en el que el anillo A es