ES2532333T3 - Uso de megalina en orina como marcador para la detección de nefropatía por IgA - Google Patents
Uso de megalina en orina como marcador para la detección de nefropatía por IgA Download PDFInfo
- Publication number
- ES2532333T3 ES2532333T3 ES10769753.4T ES10769753T ES2532333T3 ES 2532333 T3 ES2532333 T3 ES 2532333T3 ES 10769753 T ES10769753 T ES 10769753T ES 2532333 T3 ES2532333 T3 ES 2532333T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- urine
- megalin
- human
- binding
- human megalin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/34—Genitourinary disorders
- G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Uso de megalina humana en una muestra de orina obtenida a partir de un sujeto como marcador de diagnóstico para detectar un trastorno renal que es nefropatía por IgA, en el que se mide el nivel de megalina humana en una muestra de orina y un nivel aumentado de megalina humana indica el trastorno renal.
Description
5
15
25
35
45
55
65
E10769753
06-03-2015
La Fig. 7 muestra la compatibilidad de la concentración de albúmina en orina (valor de corrección de creatinina) con la tasa de filtración glomerular aparente de acuerdo con la estadificación de la nefropatía diabética en casos de nefropatía diabética de etapas I a III (68 casos).
La Fig. 8 muestra los resultados de la medida de la cantidad de megalina humana excretada en la orina (valor de corrección de creatinina) en casos de pacientes con insuficiencia renal aguda. Las enfermedades subyacentes del grupo de trastornos renales agudos (5 casos) son: 1: infarto cerebral, 2: choque séptico causado por necrosis intestinal, 3: trasplante de hígado, 4: neumonía aguda e insuficiencia respiratoria y 5: choque cardiogénico.
REALIZACIONES PREFERIDAS DE LA INVENCIÓN
De aquí en adelante, se describe la presente invención con detalle.
La presente invención implica el uso de megalina humana en una muestra de orina como marcador para un trastorno renal. El trastorno renal es nefropatía por IgA.
La SEQ ID NO: 1 muestra la secuencia nucleotídica de la megalina humana y la SEQ ID NO: 2 muestra la secuencia aminoacídica de la megalina humana. La megalina humana en orina puede medirse mediante cualquier técnica. Por ejemplo, puede usarse un ligando capaz de unirse a megalina humana.
Según una realización, se usan dos ligandos capaces de unirse a megalina humana, el primer ligando se une a un soporte sólido y el segundo ligando se marca y se usa.
Puede usarse cualquier soporte sólido que se use en técnicas inmunoanalíticas convencionales. Por ejemplo, pueden usarse preferiblemente pocillos de una placa de microvaloración de plástico o partículas magnéticas. Es un ejemplo de ligando capaz de unirse a megalina humana un anticuerpo anti-megalina humana, y puede usarse un anticuerpo monoclonal o policlonal. La lectina, que es específica de una cadena de azúcar de la megalina humana, puede usarse como ligando capaz de unirse a megalina humana. Los ejemplos de lectina incluyen, pero sin limitación, concanavalina A, aglutinina de germen de trigo (WGA), lectina de Ricinus communis (RCA) y lectina de Lens culinaris (LCA). Los ejemplos adicionales de ligandos capaces de unirse a megalina humana incluyen sustancias seleccionadas del siguiente grupo de sustancias o fragmentos capaces de unirse a la misma: proteínas de unión a vitamina tales como transcobalamina-vitamina B12, proteína de unión a vitamina D y proteína de unión a retinol; lipoproteínas tales como apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina y apolipoproteina H; hormonas y receptores de hormonas, tales como hormona paratiroidea (PTH), insulina, factor de crecimiento epidérmico (EGF), prolactina, leptina y tiroglobulina, y receptores de las mismas; proteínas asociadas a la respuesta inmunitaria y al estrés tales como cadena ligera de inmunoglobulina y PAP-1 o 2-microglobulina; enzimas e inhibidores enzimáticos tales como PAl-I, PAl-I-urocinasa, PAI-I-tPA, prourocinasa, lipoproteina lipasa, plasminógeno, -amilasa, -amilasa, 1-microglobulina y lisozima, e inhibidores de los mismos; fármacos y venenos tales como aminoglucósido, polimixina B, aprotinina y tricosantina; proteínas portadoras tales como albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de unión sustancias odoríferas, transtiretina y L-FABP; y proteínas asociadas a receptor (RAP) tales como citocromo c, calcio (Ca2+), productos finales de glicación avanzada (AGE), cubilina e isoforma 3 intercambiadora de Na+-H+ (NHE3). El término “fragmento capaz de unirse a” hace referencia a un fragmento de una sustancia anteriormente mencionada que contiene un sitio de unión a megalina humana.
Un anticuerpo anti-megalina humana o similar puede unirse a un soporte sólido de un ligando capaz de unirse a megalina humana mediante un procedimiento bien conocido en la técnica hasta ahora. Cuando un anticuerpo antimegalina humana se une a un pocillo de una placa de microvaloración, puede aplicarse, por ejemplo una solución que comprende aproximadamente 3 a 10 µg/ml de anticuerpo (y preferiblemente aproximadamente 5 µg/ml) respecto a un ligando capaz de unirse a megalina humana, a un soporte sólido y dejarse reposar entonces el resultado a 4 ºC durante una noche (y preferiblemente 12 horas o más). El intervalo de concentración recomendado de soporte sólido descrito anteriormente se determinó teóricamente al inmovilizar un anticuerpo completo en un soporte sólido. La fórmula teórica es como sigue, y se emplea cuando se inmoviliza un anticuerpo mediante adsorción física:
Q = (2/3)·(MW/N)·(2r)-2·109 (ng/cm2)
Q: densidad del peso molecular (ng/cm2) MW: peso molecular (dalton: Da)
N: número de Avogadro= 6·1023 (mol-1)
r: radio de Stokes de la molécula= (R·T20)/(6··20·D20·N) (cm)
R: constante de los gases= 8,3 ·107 (g·cm2·s-2·ºK-1·mol-1) T20: temperatura ambiente (20 ºC)= 293 °K
-1)
20: viscosidad del agua a 20 ºC = 1·10-2 (g·cm-1·s
-1)
D20: coeficiente de difusión de la referencia molecular en agua a 20 ºC (cm2·s
5
15
25
35
45
55
65
E10769753
06-03-2015
Cuando se inmoviliza un ligando capaz de unirse a megalina humana, se determinan en consecuencia las concentraciones teóricas de soportes sólidos influidas por factores variables tales como el peso molecular individual, y las concentraciones varían dependiendo de la especie molecular del soporte sólido individual y de las configuraciones de la superficie del soporte sólido. Por tanto, la concentración del soporte sólido no está limitada al intervalo descrito anteriormente. Cuando la adsorción al soporte sólido es el resultado de unión covalente, es aplicable la presente invención. Sin embargo, en dicho caso se tienen en consideración el número de grupos funcionales existentes sobre la superficie de adsorción y usados para unión covalente y otras condiciones. Por tanto, la concentración de soporte sólido no está limitada. Para bloquear la adsorción no específica de proteína después de la unión, se lleva a cabo el bloqueo con el uso de seroalbúmina bovina (abreviada de aquí en adelante como “BSA”), caseína o similar de acuerdo con una técnica convencional. Cuando el soporte sólido es una partícula magnética, se lleva a cabo el mismo procedimiento que el usado con el caso de placa de microvaloración.
Se deja reaccionar un ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como un anticuerpo anti-megalina humana unido a un soporte sólido como se describe anteriormente, con una muestra de orina, y se une la megalina humana en la muestra de orina con un soporte sólido a través del ligando capaz de unirse a megalina humana unido a un soporte sólido mediante reacción de unión ligando-receptor, tal como una reacción antígeno-anticuerpo. Específicamente, se forma un combinado del primer ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como un anticuerpo anti-megalina humana unido a un soporte sólido, con megalina humana. Esta reacción antígenoanticuerpo puede llevarse a cabo preferiblemente a 4 a 45 ºC, más preferiblemente a 20 a 40 ºC y más preferiblemente a 25 a 38 ºC. La duración de la reacción es preferiblemente de aproximadamente 10 minutos a 18 horas, más preferiblemente de 10 minutos a 1 hora, y preferiblemente además de 30 minutos a 1 hora.
Después de lavar, se deja reaccionar entonces el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana con megalina humana en la muestra unido a un soporte sólido. Específicamente, se forma un combinado del primer ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como un anticuerpo anti-megalina humana unido a un soporte sólido, megalina humana y el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana. Puede usarse un anticuerpo anti-megalina humana u otra sustancia como segundo ligando capaz de unirse a megalina humana, como con el caso del primer ligando capaz de unirse a megalina humana. Cuando tanto el primer ligando capaz de unirse a megalina humana como el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana son anticuerpos monoclonales anti-megalina humana, sin embargo, el epítopo reconocido y unido por el primer anticuerpo anti-megalina humana debería ser diferente del reconocido y unido por el segundo anticuerpo anti-megalina humana. Las combinaciones de primer anticuerpo anti-megalina humana y segundo anticuerpo anti-megalina humana pueden ser cualquiera de las siguientes: un anticuerpo monoclonal y un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monoclonal y un anticuerpo policlonal, un anticuerpo policlonal y un anticuerpo monoclonal y un anticuerpo policlonal y un anticuerpo policlonal. La reacción puede llevarse a cabo preferiblemente a 4 a 45 ºC, más preferiblemente a 20 a 40 ºC y además preferiblemente a 25 a 30 ºC. La duración de la reacción es preferiblemente de aproximadamente 10 minutos a 18 horas, más preferiblemente de 10 minutos a 1 hora, y además preferiblemente de 30 minutos a 1 hora. Por tanto, el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana puede unirse a un soporte sólido a través de megalina humana y el primer ligando capaz de unirse a megalina humana.
Después de lavar, se mide entonces el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como el segundo anticuerpo anti-megalina humana, unido a un soporte sólido mediante diversas técnicas que se usan comúnmente en el campo del inmunoanálisis. Por ejemplo, el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana se marca con una enzima, marcador fluorescente, biotina o marcador radiactivo para preparar una sustancia marcada enzimáticamente, y se mide el marcador. Por tanto, puede medirse el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana unido a un soporte sólido. El marcaje con una enzima o marcador fluorescente es particularmente preferible. Los ejemplos de enzimas incluyen, pero sin limitación, peroxidasa, fosfatasa alcalina, -galactosidasa y glucosa oxidasa. Es un ejemplo de marcador fluorescente el isotiocianato de fluoresceína (FITC), aunque los marcadores fluorescentes no están limitados al mismo. El marcaje puede detectarse dejando reaccionar el correspondiente sustrato con una sustancia marcada enzimáticamente y midiendo un pigmento, marcador fluorescente, luminiscente o similar resultante de la reacción. Cuando el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana no está marcado, como alternativa, se deja reaccionar un tercer anticuerpo marcado que reacciona con el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana, y se mide el tercer anticuerpo basándose en dicho marcaje. Por tanto, puede medirse el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana.
El anticuerpo anti-megalina humana usado para inmovilización o marcaje puede ser un fragmento de inmunoglobulina específico de megalina humana, tal como Fab o F(ab’)2, o un anticuerpo recombinante tal como scFv, dsFv, diacuerpo o minicuerpo, que se ha expresado en una sustancia recombinante. El término “anticuerpo” usado en la presente invención hace referencia también a dicho fragmento específico de megalina humana. Es bien conocido en la técnica un procedimiento para preparar dicho fragmento.
El procedimiento anterior comprende dos etapas: dejar reaccionar el primer ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como un anticuerpo anti-megalina humana unido a un soporte sólido, con una muestra seguido de lavado, y dejar reaccionar entonces el segundo ligando capaz de unirse a megalina humana con el mismo. Como alternativa, puede llevarse a cabo simultáneamente como etapa individual una etapa de dejar reaccionar el primer ligando capaz de unirse a megalina humana, tal como un anticuerpo anti-megalina humana unido a un soporte
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
E10769753
06-03-2015
sólido, con una muestra, y una etapa de dejar reaccionar el segundo ligando capaz de unirse a una muestra y megalina humana.
La presente divulgación incluye también un procedimiento para medir megalina humana en una muestra usando megalina humana unida a un soporte sólido o un fragmento parcial de la misma y un ligando capaz de unirse a megalina humana, en el que se deja reaccionar una muestra con un ligando capaz de unirse a megalina humana, se deja reaccionar el producto de reacción con la megalina humana unida a un soporte sólido, se mide el ligando capaz de unirse a megalina humana unido a un soporte sólido y se cuantifica competitivamente la megalina humana en una muestra basándose en la reducción del ligando capaz de unirse a megalina humana unida a un soporte sólido. Para implantar este procedimiento, es necesario unir megalina humana a un soporte sólido, y esto puede llevarse a cabo mediante el procedimiento de unión de una sustancia a un soporte sólido como se describe anteriormente. El fragmento parcial de megalina humana no está limitado, y puede usarse un fragmento parcial de megalina humana al que pueda unirse un ligando capaz de unirse a megalina humana. Puede prepararse un fragmento parcial de megalina humana a partir de una secuencia parcial de la secuencia aminoacídica de megalina humana como se muestra en la SEQ lD NO: 2 mediante síntesis química o ingeniería genética. Pueden usarse ligandos capaces de unirse a megalina humana descritos anteriormente, siendo particularmente preferible un anticuerpo anti-megalina humana. En la técnica competitiva, es importante la cantidad de megalina humana unida a un soporte sólido para usar o de fragmento parcial de megalina humana y ligando capaz de unirse a megalina humana. Puesto que es conocida la técnica competitiva, puede determinarse adecuadamente un procedimiento basándose en una técnica convencional
Adicionalmente, la presente divulgación incluye un procedimiento para medir megalina humana en una muestra usando un ligando capaz de unirse a megalina humana, que comprende dejar reaccionar una muestra con un ligando capaz de unirse a megalina humana unido a una partícula, causando una reacción de aglutinación, y medir la megalina humana basándose en el grado de aglutinación resultante.
Los ejemplos de partículas usadas en dicho procedimiento incluyen partículas de látex que tienen cada una un diámetro de 0,05 a 10 µm y preferiblemente de 0,1 a 0,4 µm y partículas de gelatina y eritrocitos sanguíneos animales que tienen cada uno un diámetro de 0,5 a 10 µm. Los procedimientos de unión de un anticuerpo a una partícula son bien conocidos en la materia, y puede usarse adsorción física o unión covalente.
En el procedimiento anteriormente descrito, se mezclan las partículas con las que se ha unido anticuerpo antimegalina humana con la muestra, por ejemplo sobre un portaobjetos de vidrio negro, y se observan las partículas precipitadas tras aglutinación. Por tanto, puede detectarse la megalina humana en la muestra. Midiendo la absorbancia de dicha aglutinación, puede cuantificarse la megalina humana. Adicionalmente, la detección puede llevarse a cabo mediante inmunoensayo por pulsos.
Según el procedimiento de medida de megalina humana de la presente divulgación, pueden medirse fragmentos de megalina humana además de megalina humana intacta.
Puede detectarse un trastorno renal usando megalina humana en orina recogida de un sujeto que es un paciente con nefropatía por IgA como marcador. Se observa una cantidad aumentada de megalina excretada en la orina en una etapa temprana de la nefropatía, y por tanto puede detectarse un trastorno renal en una etapa más temprana que la posible con el uso de los marcadores de diagnóstico existentes para trastornos renales. Puesto que la cantidad de megalina humana excretada en la orina aumenta debido a trastornos tubulares renales proximales y fallo de la capacidad de resorción en la lesión, la medida de la megalina humana en orina puede utilizarse para determinar el sitio de un trastorno renal. Además, la medida de megalina humana en orina puede utilizarse para la evaluación de la actividad de trastornos renales progresivos (por ejemplo, el grado de progresión o pronóstico). Adicionalmente, la medida de megalina humana en orina puede utilizarse para predicción del pronóstico de un trastorno renal y dictamen de la graduación del trastorno (concretamente, la progresión de las condiciones patológicas), lo que posibilita la prevención de un trastorno renal en una etapa más temprana. En la presente invención, el término “detección de un trastorno renal” hace referencia también a la inspección de un trastorno renal, y dicha detección posibilita la predicción del pronóstico de un trastorno renal que es nefropatía por IgA. También puede evaluarse el grado de nefropatía por IgA. La megalina humana se excreta en la orina en una etapa temprana de un trastorno renal, aumentando la cantidad de la misma excretada a medida que aumenta la gravedad del trastorno renal y aumenta la concentración de megalina humana en orina. Cuando la concentración de megalina humana en orina es alta en un sujeto que es un paciente de trastorno renal, puede predecirse que el sujeto tiene un mal pronóstico. También puede detectarse disfunción tubular con el uso de megalina humana en orina como marcador para evaluar el grado de disfunción tubular. Específicamente, se realiza la predicción del pronóstico de trastorno renal descrita anteriormente para evaluar la disfunción tubular, y se realiza la evaluación de la graduación del trastorno renal para evaluar el grado de disfunción tubular. De nuevo, el trastorno renal de la presente invención es siempre nefropatía por IgA.
E10769753
06-03-2015
Respecto a los datos sobre la concentración de megalina humana excretada en la orina a partir de los 81 casos de nefropatía por IgA obtenidos en el ejemplo 3, se sometieron adicionalmente 59 muestras sometidas a biopsia renal a subanálisis usando el pronóstico determinado mediante la clasificación histológica lograda por biopsia renal como indicador. Se pretendía que este análisis examinara si la cantidad de megalina excretada en la orina podía servir o
5 no como indicador para la predicción del pronóstico, ya que el pronóstico empeora basándose en la clasificación de pronóstico histológico de nefropatía por IgA. Se muestran en la Tabla 3 los antecedentes de los pacientes con nefropatía por IgA (59 casos) de acuerdo con el pronóstico determinado mediante la clasificación histológica conseguida por biopsia renal.
10 Tabla 3
- Parámetros
- 1: Individuo sano 2: Nefropatía por IgA (grupos de buen pronóstico y pronóstico relativamente bueno) 3: Nefropatía por IgA (grupo de pronóstico relativamente malo) 4: Nefropatía por IgA (grupo de mal pronóstico)
- Número (n)
- 66 8 29 22
- Sexo (F/M)
- 20/46 6/2 25/4 17/5
- Edad
- 31,5 ± 10,3 28,3 ± 8,1 29,8 ± 6,1 34,2 ± 8,6
- IMP (kg/m2)
- 20,5 ± 1,8 20,5 ± 2,6 19,5 ± 2,8 21,6 ± 2,8
- Presión sanguínea sistólica (mm Hg)
- 108,5 ± 9,8 104,0 ± 16,1 107,3 ± 8,2 118,0 ± 16,6
- Presión sanguínea diastólica (mm Hg)
- 64,5 ± 7,4 57,6 ± 3,6 63,1 ± 10,5 64,6 ± 12,8
- Albúmina excretada en la orina (mg/g de creatinina en orina)
- 4,5 ± 2,5 1474,0 ± 2929,6 1113,8 ± 3026,9 493,4 ± 413,5
- HbA1c (%)
- - - - -
- Nivel de azúcar en sangre en ayunas (mg/dl)
- 75,2 ±7,7 - - -
- eGFR (ml/min/1,73m2)
- 90,2 ± 15,2 105,6 ± 18,0 88,6 ± 20,5 67,6 ± 19,6
La Fig. 3 y la Tabla 4 muestran los resultados del subanálisis de la cantidad de megalina excretada en la orina basándose en el pronóstico determinado mediante la clasificación histológica de nefropatía por IgA lograda por biopsia renal.
Tabla 4
- imagen9
- Individuo sano Nefropatía por IgA
- Buen pronóstico y pronóstico relativamente bueno
- Diagnóstico relativamente malo Mal pronóstico
- Valor de referencia respecto al (número de casos)
- 2/66 casos 4/8 casos 19/29 casos 17/22 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 3,0 % 50,0 % 65,5 % 77,3 %
Como se muestra en la Fig. 3 y la Tabla 4, se encontró que la cantidad de megalina excretada en la orina aumenta y se encontró que el porcentaje de casos con niveles anormalmente altos de megalina en la orina aumenta a
20 medida que el pronóstico empeora. Se sometieron a un análisis similar otros marcadores de diagnóstico de enfermedades renales y el nivel de megalina en orina, y se compararon los resultados. Se muestran los resultados en la Tabla 5.
E10769753
06-03-2015
Tabla 5
- Nefropatía por IgA
- Buen pronóstico y pronóstico relativamente bueno
- Diagnóstico relativamente malo Mal pronóstico Total
- Megalina en orina
- Valor de referencia respecto al (número de casos) 4/8 casos 19/29 casos 17/22 casos 40/59 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 50,0 % 65,5 % 77,3 % 67,8 %
- Proteína en orina
- Valor de referencia respecto al (número de casos) 1/8 casos 12/29 casos 15/22 casos 28/59 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 12,5 % 41,4 % 68,2 % 47,5 %
- 2-MG en orina
- Valor de referencia respecto al (número de casos) 0/8 casos 1/29 casos 3/22 casos 4/59 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 0,0 % 3,4 % 13,6 % 6,8 %
- 1-MG en orina
- Valor de referencia respecto al (número de casos) 0/8 casos 0/29 casos 2/22 casos 2/59 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 0,0 % 0,0 % 9,1 % 3,4 %
- NAG en orina
- Valor de referencia frente al (número de casos) 2/8 casos 11/29 casos 14/22 casos 27/59 casos
- Valor de referencia respecto a (%)
- 25,0 % 37,9 % 63,6 % 45,8 %
Como se muestra en la Tabla 5, los niveles de megalina en orina para 40 casos superaban los valores de referencia para los 59 casos de nefropatía por IgA. Los resultados indican que el nivel de megalina en orina es el 5 marcador más útil para diagnóstico de cribado de trastorno renal (Tabla 5).
Además, se comparó la utilidad del nivel de megalina en orina con la de otros marcadores de diagnóstico en orina para enfermedades renales en términos de predicción del pronóstico y diagnóstico. Específicamente, se clasificó el desenlace de nefropatía por IgA basándose en el pronóstico determinado por la clasificación histológica lograda 10 por biopsia renal como sigue: los grupos de buen pronóstico y pronóstico relativamente bueno (puntuación 1); el grupo de pronóstico relativamente malo (puntuación 2) y el grupo de mal pronóstico (puntuación 3). En este caso, los desenlaces se indicaron por la cuota de aparición de desenlaces que exhibían valores mayores o iguales a los valores de referencia (concretamente, valores de corte) para cada marcador. Se determinó una reducción significativa mediante la prueba U de Mann-Whitney y se evaluó. Se usaron como marcadores de diagnóstico en
15 orina para trastornos renales: 2-microglobulina en orina (corte: 300 µg/g de creatinina en orina), 1-microglobulina en orina (corte: 12 mg/g de creatinina en orina), N-acetil--D-glucosaminidasa en orina (corte: 6 UI/g de creatinina en orina) y proteína en orina (corte: 0,5 g/g de creatinina en orina), y se emplearon como valores de corte para los marcadores de control los valores de referencia usados comúnmente en atención médica rutinaria. Se muestran los resultados en la Tabla 6.
20 Tabla 6
- imagen10
- Frente a proteína urinaria (dominancia/recesividad) Frente a proteína urinaria (diferencia significativa) Valor de P exacto
- Megalina en orina
- Dominante P < 0,001 0,0003
- 2-MG en orina
- Inferior P < 0,05 0,0383
- 1-MG en orina
- Inferior P < 0,05 0,0102
- NAG en orina
- Inferior NS 0,1241
Como se muestra en la Tabla 6, se encontró que el nivel de megalina en orina solo era un marcador más útil en la predicción del pronóstico y diagnóstico, en comparación con proteína urinaria que es el marcador de diagnóstico en 25 orina más común para nefropatía por IgA. La complicación de trastornos tubulares renales se considera que es un factor de tendencia en datos clínicos de mal diagnóstico de nefropatía por IgA. Actualmente, se usan 2microglobulina en orina, 1-microglobulina y N-acetil--D-glucosaminidasa en orina como indicadores del diagnóstico de dichas complicaciones. Como se muestra en la Tabla 5 y la Tabla 6, sin embargo, se encontró que
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
E10769753
06-03-2015
Como se muestra en la Tabla 9, se encontró que el nivel de megalina en orina, N-acetill--D-glucosaminidasa y proteína urinaria eran más eficaces, en términos de compatibilidad con la tasa de filtración glomerular aparente, en comparación con la cantidad de albúmina en orina, que es el marcador de diagnóstico en orina más común para nefropatía diabética. Los resultados de análisis demostrados en este ejemplo (mostrado en la Tabla 9) reflejan nefropatía diabética de etapas I a III (concretamente, desde la etapa precedente a nefropatía hasta nefropatía manifiesta). Desde el punto de vista del diagnóstico temprano, debería prestarse atención a la nefropatía de etapas I y II (concretamente, desde la etapa precedente a nefropatía hasta la etapa temprana de nefropatía). Esto se describió en el ejemplo 4.
Ejemplo de referencia 6: Comparación de la compatibilidad de megalina humana en orina y otros marcadores de enfermedades renales con la tasa de filtración glomerular aparente en los etapas I y II de nefropatía diabética (56 casos), teniendo en consideración el diagnóstico temprano de enfermedad renal (prueba de la diferencia significativa)
Al prestar atención a los etapas I y II de nefropatía diabética (concretamente, desde el etapa precedente a nefropatía hasta la etapa temprana de nefropatía), se comparó la utilidad del nivel de megalina en orina como marcador de diagnóstico de nefropatía diabética de tipo II como puede observarse en las Fig. 6 y Fig. 7 con la de otros marcadores de diagnóstico de enfermedades renales en términos de compatibilidad con la tasa de filtración glomerular aparente. Específicamente, los resultados respecto a la nefropatía diabética de tipo II se clasificaron como: eGFR de 90 o más (ml/min/1,73 m2) (puntuación 1), 60 a 89 (ml/min/1,73 m2) (puntuación 2), 30 a 59 (ml/min/1,73 m2) (puntuación 3) y 15 a 29 (ml/min/1,73 m2) (puntuación 4), basándose en la estadificación de enfermedades renales crónicas en términos de la tasa de filtración glomerular aparente. Se indicaron los desenlaces mediante la cuota de aparición de un desenlace que exhibía valores mayores o iguales a los valores de referencia (concretamente, valores de corte) para cada marcador. Se determinó la diferencia significativa mediante la prueba U de Mann-Whitney y se evaluaron los resultados. Como marcadores de diagnóstico en orina de control para trastornos renales se emplearon 2-microglobulina en orina (corte: 300 µg/g de creatinina en orina), 1microglobulina en orina (corte: 12 mg/g de creatinina en orina) N-acetil--D-glucosaminidasa en orina (corte: 6 UI/g de creatinina en orina), proteína urinaria (corte: 0,5 g/g de creatinina en orina) y albúmina en orina (corte: 30 mg/g de creatinina en orina), y se emplearon como valores de corte para marcadores de control los valores de referencia usados comúnmente en la atención médica rutinaria. Se muestran los resultados en la Tabla 10.
Tabla 10
- imagen13
- Frente a proteína urinaria (dominancia/recesividad) Frente a proteína urinaria (diferencia significativa) Valor de P exacto
- Megalina en orina
- Dominante P< 0,01 0,0060
- 2-MG en orina
- Codominante NS 0,0810
- 1-MG en orina
- Codominante NS 0,1245
- NAG en orina
- Codominante NS 0,0649
- Proteína en orina
- Codominante NS 0,1273
Como se muestra en la Tabla 10, se encontró que el nivel de megalina en orina solo era más eficaz en términos de compatibilidad con la tasa de filtración glomerular aparente, en comparación con el nivel de albúmina urinaria, que es el marcador de diagnóstico en orina más común para nefropatía diabética actualmente. El uso del nivel de megalina en orina como marcador de diagnóstico para nefropatía diabética de tipo II posibilita una predicción del pronóstico de nefropatía diabética de tipo II y un dictamen exacto y temprano de la graduación del trastorno (concretamente, la progresión de las condiciones patológicas) y dicho uso se considera por tanto útil desde el punto de vista de la atención médica preventiva en un etapa más temprana.
Ejemplo de referencia 7: Medida de la cantidad de megalina humana excretada en la orina de un paciente con insuficiencia renal aguda
Como se muestra en la Fig. 8, se encontró que la cantidad de megalina excretada en la orina aumentaba significativamente en el grupo de insuficiencia renal aguda, en comparación con individuos sanos. La insuficiencia renal aguda se diagnosticó de acuerdo con estándares internacionales relevantes (concretamente, la clasificación RIFLE). Se evaluó la cantidad de megalina excretada en la orina con el uso del valor de corrección de creatinina determinado dividiendo la concentración de megalina en orina entre la concentración de creatinina en orina y corrigiendo la concentración. Se usa comúnmente lo anteriormente mencionado como biomarcador urinario para verificar que los resultados no están influidos por la tasa de concentración en el momento de la excreción urinaria. Como valor de referencia para la cantidad de megalina excretada en la orina obtenido a partir de 66 individuos sanos (concretamente, el intervalo normal), se empleó 448 fmol de megalina en orina / g de creatinina en orina. Es decir, se calculó un intervalo de confianza del 95 % basándose en la distribución normal de las concentraciones de megalina en orina de 66 individuos sanos (concretamente, el valor de corrección de creatinina), el límite superior del intervalo de confianza del 95 % era de 448 fmol de megalina en orina / g de creatinina en orina, y se usó el valor determinado como valor de referencia para las concentraciones de megalina en orina. Debería observarse
Claims (1)
-
imagen1
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009108493 | 2009-04-27 | ||
| JP2009108493 | 2009-04-27 | ||
| PCT/JP2010/057490 WO2010126055A1 (ja) | 2009-04-27 | 2010-04-27 | 腎障害の検出用マーカーとしての尿中メガリンの使用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2532333T3 true ES2532333T3 (es) | 2015-03-26 |
Family
ID=43032199
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10769753.4T Active ES2532333T3 (es) | 2009-04-27 | 2010-04-27 | Uso de megalina en orina como marcador para la detección de nefropatía por IgA |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8628930B2 (es) |
| EP (1) | EP2426496B1 (es) |
| JP (1) | JP5694145B2 (es) |
| ES (1) | ES2532333T3 (es) |
| WO (1) | WO2010126055A1 (es) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9249467B2 (en) | 2011-09-16 | 2016-02-02 | Steven Goodison | Bladder cancer detection composition, kit and associated methods |
| JP2013178239A (ja) * | 2012-01-31 | 2013-09-09 | Ajinomoto Co Inc | 早期腎症の評価方法、早期腎症評価装置、早期腎症評価方法、早期腎症評価プログラム、早期腎症評価システムおよび情報通信端末装置 |
| JP6083937B2 (ja) * | 2012-03-01 | 2017-02-22 | 国立大学法人 新潟大学 | 急性腎障害の検査方法 |
| JP6128631B2 (ja) * | 2012-08-01 | 2017-05-17 | 国立大学法人名古屋大学 | 糖尿病性腎症鑑別用マーカー及びその用途 |
| JP6091158B2 (ja) | 2012-10-23 | 2017-03-08 | デンカ生研株式会社 | 尿を変性剤で前処理することによる免疫測定系の感度を上げる方法 |
| JP6207002B2 (ja) | 2013-02-19 | 2017-10-04 | 国立大学法人 筑波大学 | 尿中メガリン測定値から糸球体濾過量を推定する方法 |
| US10286036B2 (en) * | 2017-05-12 | 2019-05-14 | Aurinia Pharmaceuticals Inc. | Protocol for treatment of lupus nephritis |
| US20190224275A1 (en) | 2017-05-12 | 2019-07-25 | Aurinia Pharmaceuticals Inc. | Protocol for treatment of lupus nephritis |
| CN109633166A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-16 | 北京贝尔生物工程股份有限公司 | 一种高灵敏度、宽检测范围的人α1-微球蛋白测定试剂盒 |
| WO2020138260A1 (ja) | 2018-12-26 | 2020-07-02 | 学校法人慶應義塾 | 全身性エリテマトーデスの検出方法 |
| CN115247215B (zh) * | 2020-10-28 | 2026-02-13 | 郑州大学第一附属医院 | 用于鉴别糖尿病肾病及膜性肾病的微生物基因标记物及其应用 |
| JP7440093B2 (ja) * | 2021-03-15 | 2024-02-28 | 株式会社カルナヘルスサポート | 末期腎不全発症予測方法 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04351962A (ja) | 1991-05-29 | 1992-12-07 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 特異結合分析方法および特異結合分析装置 |
| JPH08105889A (ja) | 1994-10-07 | 1996-04-23 | Tomakomai Rinshiyou Kensa Center:Kk | 尿中トランスフェリン測定試薬および糖尿病合併症の早期診断方法 |
| KR100864648B1 (ko) | 2001-05-17 | 2008-10-23 | 가부시키가이샤 가네카 | 단백질 대사 기능을 갖는 인공 신장 및 그 제작 방법 |
| US6666123B1 (en) | 2002-05-30 | 2003-12-23 | Raytheon Company | Method and apparatus for energy and data retention in a guided projectile |
| EP1514117A1 (en) | 2002-05-31 | 2005-03-16 | Pfizer Products Inc. | Methods for avoiding renal injury |
| AU2003298169A1 (en) | 2003-03-24 | 2004-10-18 | Schering Ag | Modulators of the megalin-mediated uptake of radiotherapeutics and/or radiodiagnostics into kidney cells and their use in therapy and diagnostics |
| CA2565701A1 (en) | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Jonathan M. Barasch | Ngal for reduction and amelioration of ischemic and nephrotoxic injuries |
| WO2006056037A1 (en) * | 2004-09-21 | 2006-06-01 | University Of Manitoba | Method of detecting kidney dysfunction |
| US20070037232A1 (en) | 2005-03-31 | 2007-02-15 | Barasch Jonathan M | Detection of NGAL in chronic renal disease |
| US20080090304A1 (en) * | 2006-10-13 | 2008-04-17 | Barasch Jonathan Matthew | Diagnosis and monitoring of chronic renal disease using ngal |
| JP4865377B2 (ja) | 2006-03-28 | 2012-02-01 | 国立大学法人 新潟大学 | ヒトメガリンの測定方法 |
| EP1956096A1 (en) * | 2007-02-12 | 2008-08-13 | Université Catholique de Louvain | Method, device and kit for determining conditions related to a dysfunction of the renal proximal tubule |
| US8105840B2 (en) | 2007-09-27 | 2012-01-31 | Niigata University | Urine pretreatment agent for urinary protein quantitation, urine pretreatment method, and urinary protein quantitation method |
| JP2009108493A (ja) | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Asmo Co Ltd | 開閉部材制御装置 |
| CN102015652A (zh) | 2008-03-20 | 2011-04-13 | 益安药业 | 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物 |
| JP5424702B2 (ja) | 2009-04-27 | 2014-02-26 | 国立大学法人 新潟大学 | 尿中ヒトメガリンを測定することを含む腎疾患検出方法 |
-
2010
- 2010-04-27 US US13/266,397 patent/US8628930B2/en active Active
- 2010-04-27 JP JP2011511418A patent/JP5694145B2/ja active Active
- 2010-04-27 WO PCT/JP2010/057490 patent/WO2010126055A1/ja not_active Ceased
- 2010-04-27 ES ES10769753.4T patent/ES2532333T3/es active Active
- 2010-04-27 EP EP10769753.4A patent/EP2426496B1/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8628930B2 (en) | 2014-01-14 |
| JP5694145B2 (ja) | 2015-04-01 |
| EP2426496A4 (en) | 2013-03-13 |
| WO2010126055A1 (ja) | 2010-11-04 |
| JPWO2010126055A1 (ja) | 2012-11-01 |
| EP2426496A1 (en) | 2012-03-07 |
| EP2426496B1 (en) | 2014-12-31 |
| US20120058489A1 (en) | 2012-03-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2532333T3 (es) | Uso de megalina en orina como marcador para la detección de nefropatía por IgA | |
| ES2434996T3 (es) | Métodos de pronóstico en enfermedad renal crónica | |
| KR101678703B1 (ko) | 갈렉틴-３ 면역검정 | |
| ES2459165T3 (es) | Método de determinación de megalina humana | |
| EP2799879A2 (en) | Survival prognostic assay | |
| US11598781B2 (en) | Method for predicting the risk of incidence of chronic kidney disease | |
| EP2426495A1 (en) | Kidney disease detection method that includes measurement of human megalin in urine | |
| JP2008175814A (ja) | 尿中タンパク質分子の検出・定量による糖尿病性腎症の検査方法及びそれに使用するキット | |
| ES2907068T3 (es) | Detección específica de isoformas de clusterina | |
| JP5346957B2 (ja) | 不特定疾患の汎用マーカーとしてのｙｋｌ−４０ | |
| CN101268370A (zh) | 基于nr2肽诊断和治疗脑血管事件的方法 | |
| BR112017021850B1 (pt) | Métodos para detectar clusterina específica do rim, doença renal, insuficiência renal ou danos nos rins, para distinguir mais uma isoforma de clusterina a partir de outros tipos de isoformas dela e para melhorar a detecção de clusterina e de isoformas dela, kit e complexo |