ES2533343T3 - Uso de 2 anticuerpos anti-SPARC para predecir la respuesta a quimioterapia - Google Patents

Uso de 2 anticuerpos anti-SPARC para predecir la respuesta a quimioterapia Download PDF

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Abstract

Método para predecir la respuesta de un tumor en un animal a un régimen quimioterápico, que comprende: (a) aplicar un primer anticuerpo anti-SPARC a una sección histológica del tumor, en el que el primer anticuerpo anti-SPARC inmunotiñe de manera preferente SPARC en células tumorales; (b) aplicar un segundo anticuerpo anti-SPARC a la sección histológica de (a) o una segunda sección histológica del tumor, en el que el segundo anticuerpo anti-SPARC inmunotiñe de manera preferente SPARC en fibroblastos; y (c) predecir una respuesta positiva al régimen quimioterápico si el primer anticuerpo anti-SPARC y el segundo anticuerpo anti-SPARC inmunotiñen la sección o secciones histológicas.

Description

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nanoparticulado (Abraxane™), carboplatino, o combinaciones de los mismos. Cuando el tumor es positivo para receptor de estrógenos, el régimen quimioterápico puede comprender paclitaxel, preferiblemente paclitaxel unido a albúmina nanoparticulado (Abraxane™), un antagonista de estrógenos o terapia de ablación ER+, o combinaciones de los mismos.
Los métodos descritos según la solicitud incluyen, por ejemplo, terapias de combinación en las que el animal también está sometiéndose a una o más terapias contra el cáncer seleccionadas del grupo que consiste en cirugía, quimioterapia, radioterapia, termoterapia, inmunoterapia, terapia hormonal y terapia con láser. Los términos “administración conjunta” y “terapia de combinación” se refieren a administrar a un sujeto dos o más agentes terapéuticamente activos. Los agentes pueden estar contenidos en una única composición farmacéutica y pueden administrarse al mismo tiempo, o los agentes pueden estar contenidos en formulaciones separadas y administrarse en serie a un sujeto. Siempre que los dos agentes puedan detectarse en el sujeto al mismo tiempo, se dice que los dos agentes se administran conjuntamente.
La administración de las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación puede lograrse mediante cualquier vía adecuada incluyendo, pero sin limitarse a, administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intratumoral, oral, rectal, vaginal, intravesical y por inhalación, siendo las más preferidas la administración intravenosa e intratumoral. La composición puede comprender además cualquier otro componente adecuado, especialmente para potenciar la estabilidad de la composición y/o su uso final. Por consiguiente, existe una amplia variedad de formulaciones adecuadas de la composición de la invención. Las siguientes formulaciones y métodos son simplemente a modo de ejemplo y no son en ningún modo limitativos.
Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir, si se desea, agentes terapéuticos o biológicamente activos adicionales. Por ejemplo, pueden estar presentes factores terapéuticos útiles en el tratamiento de una indicación particular. Factores que controlan la inflamación, tales como ibuprofeno o esteroides, pueden ser parte de la composición para reducir la hinchazón y la inflamación asociadas con la administración in vivo de la composición farmacéutica y el estrés fisiológico.
El portador será normalmente líquido, pero también puede ser sólido, o una combinación de componentes líquidos y sólidos. De manera deseable, el portador es portador fisiológicamente aceptable (por ejemplo, farmacéutica o farmacológicamente aceptable) (por ejemplo, excipiente o diluyente). Los portadores fisiológicamente aceptables se conocen bien y están fácilmente disponibles. La elección del portador se determinará, al menos en parte, por la ubicación del tejido y/o las células diana, y el método particular usado para administrar la composición.
Normalmente, tales composiciones pueden prepararse como productos inyectables, ya sea como disoluciones o suspensiones líquidas; también pueden prepararse formas sólidas adecuadas para usarse para preparar disoluciones o suspensiones tras la adición de un líquido antes de la inyección; y las preparaciones también pueden emulsionarse. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen disoluciones o dispersiones acuosas estériles; formulaciones que contienen estabilizadores de proteínas y lioprotectores conocidos, formulaciones que incluyen aceite de sésamo, aceite de cacahuete o propilenglicol acuoso, y polvos estériles para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la formulación debe ser estéril y debe ser fluida hasta el grado de que exista una fácil inyectabilidad. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y debe protegerse frente a la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. Pueden prepararse disoluciones de los compuestos activos como base libre o sales farmacológicamente aceptables en agua mezclados de manera adecuada con un tensioactivo, tal como hidroxicelulosa. También pueden prepararse dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos, y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones habituales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para impedir el crecimiento de microorganismos.
Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición de ácido (formadas con los grupos amino libres de la proteína) y que se forman con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácidos clorhídrico o fosfórico,
o ácidos orgánicos tales como acético, oxálico, tartárico, mandélico y similares. También pueden derivarse sales formadas con los grupos carboxilo libres a partir de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, de potasio, de amonio, de calcio o férricos, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procaína y similares.
Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen disoluciones para inyección estériles isotónicas, acuosas y no acuosas, que pueden contener antioxidantes, tampones, agentes bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión, solubilizadores, agentes espesantes, estabilizadores y conservantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes sellados de dosis unitaria o de múltiples dosis, tales como ampollas y viales, y pueden almacenarse en estado secado por congelación (liofilizado) que sólo requiere la adición de un excipiente líquido estéril, por ejemplo, agua, para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Pueden prepararse disoluciones y suspensiones para inyección extemporáneas a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos de la clase descrita anteriormente. Preferiblemente, el conjugado que contiene dominio de ligando peptídico descrito se formula para inyección (por ejemplo, administración parenteral). Con respecto a esto, de manera deseable la formulación es adecuada para administración intratumoral, pero también puede formularse
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Carpinteria, CA) para su uso con inmunohistoquímica usando anticuerpos adecuados.
Este método se basa en la aplicación consecutiva de (1) un anticuerpo primario frente al antígeno que va a localizarse, (2) anticuerpo de unión biotinilado, (3) estreptavidina conjugada a enzima y (4) cromógeno de sustrato (DAB). Entonces se contratiñen los portaobjetos en hematoxilina de Richard-Allan (Kalamazoo, MI), se deshidratan a través de disoluciones de etanol graduadas y se cubren con un cubreobjetos.
EJEMPLO 5
Este ejemplo proporciona un protocolo a modo de ejemplo para la preparación y tinción inmunológica de secciones histológicas usando inmunotinciones múltiples simultáneamente (“inmunotinción doble de 2 colores”).
Como en el ejemplo 4 anterior, se cortan bloques de tejido incrustados en parafina a 4 m y se colocan en portaobjetos con carga positiva. Entonces se colocan portaobjetos con muestras en un horno a 60ºC durante 1 hora, se enfrían, se desparafinizan y se rehidratan pasando por xilenos y disoluciones de etanol graduadas hasta agua. Entonces se extinguen todos los portaobjetos durante 5 en una disolución de peróxido de hidrógeno al 3% en agua para bloquear la peroxidasa endógena. Se realiza la recuperación de antígeno mediante un método térmico en el que se colocan las muestras en una disolución de ácido cítrico (pH 6,1) durante 25 minutos (en comparación con 20 minutos para los anticuerpos individuales mencionados anteriormente) a 94ºC y se enfrían durante 15 minutos usando un aparato de cocción de verduras al vapor. Entonces se colocan los portaobjetos en un sistema de inmunotinción (Dako, Carpinteria, CA) para su uso con inmunohistoquímica.
Se incuba el primer anticuerpo primario durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se incuba el sistema de detección, unión doble EnVision+ (Dako, código K4061, Carpinteria, CA), durante 30 minutos. Por último, cromógeno DAB. Antes de aplicar el segundo anticuerpo primario, se añade bloque de proteína libre de suero (Dako, código X0909, Carpinteria, CA) para minimizar el fondo y el cruce entre anticuerpos primarios. Se incuba el segundo anticuerpo primario durante 1 hora a temperatura ambiente. Se usa de nuevo la unión doble EnVision+ (Dako, código K4061, Carpinteria, CA) como sistema de detección y se incuba durante 30 minutos. Se usa NovaRED (Vector Laboratories, Burlingame, Calif) con el segundo anticuerpo primario de modo que puede diferenciarse fácilmente la tinción por los dos anticuerpos. Entonces se contratiñen los portaobjetos en hematoxilina de Richard-Allan, se deshidratan a través de disoluciones de etanol graduadas, y se cubren con un cubreobjetos.
Debe interpretarse que el uso de los términos “un/o” y “una” y “el/la” y referentes similares en el contexto de la descripción de la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) cubre tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en el presente documento o quede claramente contradicho por el contexto. Los términos “que comprende”, “que tiene”, “que incluye” y “que contiene” deben interpretarse como términos abiertos (es decir, que significan “que incluye, pero no se limita a”) a menos que se indique lo contrario. Se pretende que la mención de intervalos de valores en el presente documento sirva simplemente como método abreviado para hacer referencia individualmente a cada valor por separado que se encuentra dentro del intervalo, a menos que se indique lo contrario en el presente documento, y cada valor por separado se incorpora en la memoria descriptiva como si se mencionara individualmente en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en el presente documento o quede claramente contradicho de otro modo por el contexto. Se pretende que el uso de todos y cada uno de los ejemplos, o términos a modo de ejemplo (por ejemplo, “tal como”), proporcionados en el presente documento, simplemente ilustre mejor la invención y no plantean una limitación sobre el alcance de la invención a menos que se reivindique lo contrario. Ningún término en la memoria descriptiva debe interpretarse como que indica que ningún elemento no reivindicado es esencial en la práctica de la invención.
En el presente documento se describen realizaciones preferidas de esta invención, incluyendo el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la invención. Variaciones de estas realizaciones preferidas pueden resultar evidentes para los expertos habituales en la técnica tras leer la descripción anterior.
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