ES2535011T3 - Tolerancia a la sequía y al calor en plantas - Google Patents

Tolerancia a la sequía y al calor en plantas Download PDF

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Abstract

Un método para producir una planta, comprendiendo dicho método crecer una célula de planta que comprende un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico exógeno una región reguladora unida de manera operativa a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene un 80 por ciento o más de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 749; y en el que una planta producida a partir de dicha célula de planta tiene una diferencia en la tolerancia a la sequía o tolerancia al calor comparada con una planta control que no comprende dicho ácido nucleico.

Description

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A. Dominios Indicativos de polipéptidos de tolerancia al calor y/o sequía
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede ser un miembro de la familia ARN polimerasa Rpb4. La subunidad RPB4 de la ARN polimerasa eucariota forma un heterodímero con la subunidad RPB7 que se asocia reversiblemente con el núcleo de la ARN polimerasa II. SEQ ID NO: 442 muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificado en la presente memoria como LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID No. ME00029 (SEQ ID NO: 441), que se predice que codifica un polipéptido Rpb4 de ARN polimerasa.
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede contener un dominio sulfotransferasa 1 característico de los polipéptidos que pertenecen a la familia sulfotransferasa. Los miembros de la familia sulfotransferasa catalizan la transferencia de grupos sulfato a compuestos específicos. La SEQ ID NO: 590, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID No. ME02549 (SEQ ID NO: 589), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio sulfotransferasa 1.
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede contener un dominio de dedo de cinc semejante a AN1 (zf-AN1) y un dominio de dedo de cinc semejante a A20 (zf-A20). El dominio de dedo de cinc semejante a AN1 se identificó inicialmente como un dedo de cinc en el extremo C terminal de An1, una proteína semejante a ubiquitina en Xenopus laevis. El dominio de dedo de cinc semejante a AN1 se caracteriza por el patrón, C-X2-C-X(9-12)-C-X(1-2)-C-X4-C-X2-H-X5-H-X-C en el que X puede ser cualquier aminoácido, y los números en paréntesis indican el número de residuos. En A20, el dominio de dedo de cinc semejante a A20 media la auto-asociación y la activación de NFkappa B inducida por IL-1. La SEQ ID NO: 742, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como Clon Ceres ID No. 24255 (SEQ ID NO: 1241), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de dedo de cinc semejante a AN1 y un dominio de dedo de cinc semejante a A20 La SEQ ID NO: 749, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis,identificada en la presente memoria como LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID No. ME02401 (SEQ ID NO: 1188), también se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de dedo de cinc semejante a AN1 y un dominio de dedo de cinc semejante a A20.
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede contener un dominio de deshidrogenasa de cadena corta (adh_short). La mayor parte de los polipéptidos que contienen un dominio de deshidrogenasa de cadena corta son polipéptidos de aproximadamente 250 a 300 residuos de aminoácidos, y son óxidorreductasas dependientes de NAD o NADP. La SEQ ID NO: 1012, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presentememoria como LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID No. 18396 (SEQ ID NO: 1260), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de deshidrogenasa de cadena corta.
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede contener un dominio de trehalosa-fosfatasa (Trehalosa_PPasa) característico de los polipéptidos trehalosa fosfatasa. Las trehalosa fosfatasas catalizan la desfosforilación de trehalosa-6-fosfato a trehalosa y ortofosfato. La trehalosa es un disacárido común en bacterias, hongos, e invertebrados que parece jugar un papel en la tolerancia a la desecación. La SEQ ID NO: 1129, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID No. ME20095 (SEQ ID NO: 1126), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de trehalosa-fosfatasa.
Un polipéptido de tolerancia al calor puede ser un polipéptido relacionado con sinaptobrevina. La SEQ ID NO: 160, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como Clon Ceres ID no. 41543 (SEQ ID NO: 159), se predice que codifica un polipéptido relacionado con sinaptobrevina.
Un polipéptido de tolerancia al calor puede contener un dominio de unión a ADN de tipo HSF, que se predice que es característico del activador de la transcripción del factor de choque térmico. Los activadores de la transcripción del factor de choque térmico se encuentran a menudo asociados con promotores de proteínas de choque térmico durante el choque térmico. La SEQ ID NO: 311, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como LOCUS Ceres ID no. At1g32330 (SEQ ID NO: 310), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de unión a ADN de tipo HSF. La SEQ ID NO: 364, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como LOCUS Ceres ID no. At2g26150 (SEQ ID NO: 363), también se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio de unión a ADN de tipo HSF.
Un polipéptido de tolerancia al calor puede contener un dominio DnaJ. La proteína de choque térmico eucariota DnaJ interacciona con la proteína DnaK semejante a chaperona hsp70. Estructuralmente, la proteína DnaJ consiste en un dominio N terminal conservado (denominado dominio "J") de aproximadamente 70 aminoácidos, un región rica en glicina (dominio "G") de aproximadamente 30 residuos, un dominio central que contiene cuatro repeticiones de un resto CXXCXGXG (dominio "CRR") y una región C terminal de 120 a 170 residuos. La SEQ ID NO: 60, que muestra la secuencia de aminoácidos de un clon de Arabidopsis, identificada en la presente memoria como CLON Ceres ID no. 31309 (SEQ ID NO: 58), se predice que codifica un polipéptido que contiene un dominio DnaJ.
Un polipéptido de tolerancia a la sequía puede contener un dominio KH_2. La mayor parte de los polipéptidos que contienen un dominio KH_2 tienen típicamente alrededor de 70 aminoácidos y están presentes en una amplia variedad de proteínas de unión a ácido nucleico bastante diversas. Se ha mostrado que se une a ARN. Como
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NO: 629), ANOT Ceres ID no. 1448307 (SEQ ID NO: 631), GI Público ID no. 92888243 (SEQ ID NO: 635), GI Público ID no. 92879395 (SEQ ID NO: 636), CLON Ceres ID no. 528876 (SEQ ID NO: 638), ANOT Ceres ID no. 1448352 (SEQ ID NO: 640), ANOT Ceres ID no. 1437745 (SEQ ID NO: 642), ANOT Ceres ID no. 1464146 (SEQ ID NO: 644), ANOT Ceres ID no. 1437744 (SEQ ID NO: 646), GI Público ID no. 92894684 (SEQ ID NO: 647), CLON Ceres ID no. 3964 (SEQ ID NO: 650), GI Público ID no. 13272389 (SEQ ID NO: 651), ANOT Ceres ID no. 1481203 (SEQ ID NO: 653), GI Público ID no. 15227699 (SEQ ID NO: 654), GI Público ID no. 92886084 (SEQ ID NO: 655), GI Público ID no. 15239947 (SEQ ID NO: 656), CLON Ceres ID no. 34878 (SEQ ID NO: 658), CLON Ceres ID no. 150484 (SEQ ID NO: 660), GI Público ID no. 21553545 (SEQ ID NO: 661), GI Público ID no. 15222843 (SEQ ID NO: 662), GI Público ID no. 38230552 (SEQ ID NO: 663), GI Público ID no. 3420008 (SEQ ID NO: 664), GI Público ID no. 15230602 (SEQ ID NO: 665), GI Público ID no. 3420004 (SEQ ID NO: 666), GI Público ID no. 2129586 (SEQ ID NO: 667), GI Público ID no. 15217849 (SEQ ID NO: 668), GI Público ID no. 15227704 (SEQ ID NO: 669), ANOT Ceres ID no. 1465750 (SEQ ID NO: 671), CLON Ceres ID no. 1983975 (SEQ ID NO: 673), GI Público ID no. 15226028 (SEQ ID NO: 675), GI Público ID no. 115459524 (SEQ ID NO: 676), CLON Ceres ID no. 1793353 (SEQ ID NO: 678), ANOT Ceres ID no. 1467399 (SEQ ID NO: 680), CLON Ceres ID no. 1982930 (SEQ ID NO: 684), GI Público ID no. 125540700 (SEQ ID NO: 685), ANOT Ceres ID no. 1448743 (SEQ ID NO: 687), GI Público ID no. 50251910 (SEQ ID NO: 688), CLON Ceres ID no. 1836748 (SEQ ID NO: 690), GI Público ID no. 3420006 (SEQ ID NO: 691), GI Público ID no. 92879376 (SEQ ID NO: 692), CLON Ceres ID no. 838941 (SEQ ID NO: 694), ANOT Ceres ID no. 1437746 (SEQ ID NO: 696), ANOT Ceres ID no. 6017241 (SEQ ID NO: 698), ANOT Ceres ID no. 6085947 (SEQ ID NO: 700), y ANOT Ceres ID no. 6017242 (SEQ ID NO: 702). En algunos casos, un homólogo funcional de SEQ ID NO: 590 tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 40% de identidad de secuencia, por ejemplo, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 590.
Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de homólogos funcionales del polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 705 se proporcionan en la Figura 5 y en el listado de secuencias. Dichos homólogos funcionales incluyen GI Público ID no. 79320952 (SEQ ID NO: 706) y GI Público ID no. 79320957 (SEQ ID NO: 707). Otros homólogos funcionales de SEQ ID NO: 705 incluyen GI Público ID no. 6692094 (SEQ ID NO: 708) y GI Público ID no. 145323049 (SEQ ID NO: 709). En algunos casos, un homólogo funcional de SEQ ID NO: 705 tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 40% de identidad de secuencia, por ejemplo, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 705.
Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de homólogos funcionales del polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 711 se proporcionan en la Figura 6 y en el listado de secuencias. Dichos homólogos funcionales incluyen CLON Ceres ID no. 964616 (SEQ ID NO: 714), CLON Ceres ID no. 100009667 (SEQ ID NO: 715), ANOT Ceres ID no. 1444568 (SEQ ID NO: 719), CLON Ceres ID no. 719489 (SEQ ID NO: 725), CLON Ceres ID no. 587748 (SEQ ID NO: 733), GI Público ID no. 125528114 (SEQ ID NO: 734), y CLON Ceres ID no. 274172 (SEQ ID NO: 737). Otros homólogos funcionales de SEQ ID NO: 711 incluyen GI Público ID no. 144923134 (SEQ ID NO: 712), ANOT Ceres ID no. 1471437 (SEQ ID NO: 717), CLON Ceres ID no. 1270484 (SEQ ID NO: 721), CLON Ceres ID no. 1075098 (SEQ ID NO: 723), GI Público ID no. 18412211 (SEQ ID NO: 727), CLON Ceres ID no. 20358 (SEQ ID NO: 729), CLON Ceres ID no. 1915503 (SEQ ID NO: 731), GI Público ID no. 115440619 (SEQ ID NO: 735), GI Público ID no. 125572387 (SEQ ID NO: 738), y ANOT Ceres ID no. 6015812 (SEQ ID NO: 740). En algunos casos, un homólogo funcional de SEQ ID NO: 711 tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 40% de identidad de secuencia, por ejemplo, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 711.
Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de homólogos funcionales del polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 742 se proporcionan en la Figura 7 y en el listado de secuencias. Dichos homólogos funcionales incluyen GI Público ID no. 147783026 (SEQ ID NO: 743), GI Público ID no. 119367488 (SEQ ID NO: 744), GI Público ID no. 147860340 (SEQ ID NO: 745), GI Público ID no. 115477170 (SEQ ID NO: 757), CLON Ceres ID no. 1620215 (SEQ ID NO: 759), CLON Ceres ID no. 1931889 (SEQ ID NO: 761), CLON Ceres ID no. 1798756 (SEQ ID NO: 763), CLON Ceres ID no. 1918424 (SEQ ID NO: 767), CLON Ceres ID no. 1845154 (SEQ ID NO: 771), GI Público ID no. 38016527 (SEQ ID NO: 796), CLON Ceres ID no. 1084216 (SEQ ID NO: 797), GI Público ID no. 113196593 (SEQ ID NO: 798), GI Público ID no. 75133829 (SEQ ID NO: 799), ANOT Ceres ID no. 1460527 (SEQ ID NO: 801), Anot Ceres ID no. 8644540 (SEQ ID NO: 805), ANOT Ceres ID no. 1450673 (SEQ ID NO: 807), GI Público ID no. 116778802 (SEQ ID NO: 808), GI Público ID no. 116778893 (SEQ ID NO: 809), GI Público ID no. 116778998 (SEQ ID NO: 810), GI Público ID no. 157849766 (SEQ ID NO: 811), GI Público ID no. 159474166 (SEQ ID NO: 812), GI Público ID no. 168036656 (SEQ ID NO: 813), ANOT Ceres ID no. 1456578 (SEQ ID NO: 815), GI Público ID no. 168053490 (SEQ ID NO: 816), GI Público ID no. 193237563 (SEQ ID NO: 817), CLON Ceres ID no. 100879386 (SEQ ID NO: 819), CLON Ceres ID no. 2055733 (SEQ ID NO: 823), CLON Ceres ID no. 2056478 (SEQ ID NO: 825), CLON Ceres ID no. 13007 (SEQ ID NO: 832), CLON Ceres ID no. 5522 (SEQ ID NO: 834), CLON Ceres ID no. 30543 (SEQ ID NO: 836), CLON Ceres ID no. 14203 (SEQ ID NO: 839), CLON Ceres ID no. 975913 (SEQ ID NO: 846), CLON Ceres ID no. 967417 (SEQ ID NO: 848), GI Público ID no. 119720772 (SEQ ID NO: 857), CLON Ceres ID no. 708446 (SEQ ID NO: 859), CLON Ceres ID no. 1614593 (SEQ ID NO: 863), CLON Ceres ID no. 2025938 (SEQ ID NO: 885), GI Público ID no. 92896423 (SEQ ID NO: 892), CLON Ceres ID no. 634261 (SEQ ID NO: 900), CLON Ceres ID no. 1387149 (SEQ ID NO: 912), CLON Ceres ID no. 1423851 (SEQ ID NO: 918), CLON Ceres ID no. 1589047 (SEQ ID NO: 939), CLON Ceres ID no. 1748922 (SEQ ID NO: 944), GI Público ID no. 5031281 (SEQ ID NO: 953), CLON
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Público ID no. 121594508 (SEQ ID NO: 1132), GI Público ID no. 91202290 (SEQ ID NO: 1133), GI Público ID no. 89900939 (SEQ ID NO: 1134), GI Público ID no. 77917672 (SEQ ID NO: 1135), GI Público ID no. 77165252 (SEQ ID NO: 1136), GI Público ID no. 115375374 (SEQ ID NO: 1137), GI Público ID no. 110602449 (SEQ ID NO: 1138), GI Público ID no. 125540573 (SEQ ID N0:1151), GI Público ID no. 125561519 (SEQ ID NO: 1152), GI Público ID no. 125528345 (SEQ ID NO: 1153), GI Público ID no. 116310408 (SEQ ID NO: 1154), GI Público ID no. 115483332 (SEQ ID NO: 1156), GI Público ID no. 125575640 (SEQ ID NO: 1157), GI Público ID no. 115476368 (SEQ ID NO: 1158), GI Público ID no. 115478841 (SEQ ID NO: 1159), GI Público ID no. 115467158 (SEQ ID NO: 1160), GI Público ID no. 72384477 (SEQ ID NO: 1161), GI Público ID no. 116054703 (SEQ ID NO: 1162), CLON Ceres ID no. 1786317 (SEQ ID NO: 1164), CLON Ceres ID no. 1791336 (SEQ ID NO: 1166), CLON Ceres ID no. 1877752 (SEQ ID NO: 1168), CLON Ceres ID no. 1821191 (SEQ ID NO: 1170), CLON Ceres ID no. 446838 (SEQ ID NO: 1172), CLON Ceres ID no. 1556915 (SEQ ID NO: 1174), GI Público ID no. 90200725 (SEQ ID NO: 1175), CLON Ceres ID no. 1580247 (SEQ ID NO: 1177), CLON Ceres ID no. 644201 (SEQ ID NO: 1179), CLON Ceres ID no. 538689 (SEQ ID NO:1181), CLON Ceres ID no. 817225 (SEQ ID NO: 1184), y CLON Ceres ID no. 923842 (SEQ ID NO: 1186). En algunos casos, un homólogo funcional de SEQ ID NO: 1129 tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 40% de identidad de secuencia, por ejemplo, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1129.
Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de homólogos funcionales del polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 60 se proporcionan en la Figura 10 y en el listado de secuencias. Dichos homólogos funcionales incluyen CLON Ceres ID no. 872030 (SEQ ID NO: 62), CLON Ceres ID no. 100029223 (SEQ ID NO: 74), CLON Ceres ID no. 1939845 (SEQ ID NO: 98), CLON Ceres ID no. 2015383 (SEQ ID NO: 102), CLON Ceres ID no. 1607893 (SEQ ID NO: 104), CLON Ceres ID no. 1075133 (SEQ ID NO: 152), y CLON Ceres ID no. 1218065 (SEQ ID NO: 915). Otros homólogos funcionales de SEQ ID NO: 60 incluyen GI Público ID no. 15227919 (SEQ ID NO: 64), GI Público ID no. 9843641 (SEQ ID NO: 65), GI Público ID no. 124294789 (SEQ ID NO: 66), GI Público ID no. 15233446 (SEQ ID NO: 67), GI Público ID no. 115477679 (SEQ ID NO: 68), GI Público ID no. 42407552 (SEQ ID NO: 69), GI Público ID no. 125562450 (SEQ ID NO: 70), GI Público ID no. 115469980 (SEQ ID NO: 71), ANOT Ceres ID no. 1442539 (SEQ ID NO: 76), ANOT Ceres ID no. 1442538 (SEQ ID NO: 78), ANOT Ceres ID no. 1460661 (SEQ ID NO: 80), ANOT Ceres ID no. 1452884 (SEQ ID NO: 82), ANOT Ceres ID no. 1450523 (SEQ ID NO: 84), ANOT Ceres ID no. 1442257 (SEQ ID NO: 86), ANOT Ceres ID no. 1541121 (SEQ ID NO: 88), ANOT Ceres ID no. 1480481 (SEQ ID NO: 90), ANOT Ceres ID no. 1487713 (SEQ ID NO: 92), ANOT Ceres ID no. 1456204 (SEQ ID NO: 94), CLON Ceres ID no. 1387402 (SEQ ID NO: 100), CLON Ceres ID no. 972919 (SEQ ID NO: 106), CLON Ceres ID no. 1645860 (SEQ ID NO: 108), CLON Ceres ID no. 1042804 (SEQ ID NO: 110), CLON Ceres ID no. 1606678 (SEQ ID NO: 112), CLON Ceres ID no. 684496 (SEQ ID NO: 114), CLON Ceres ID no. 1062366 (SEQ ID NO: 116), CLON Ceres ID no. 1722931 (SEQ ID NO: 118), CLON Ceres ID no. 746169 (SEQ ID NO: 120), CLON Ceres ID no. 1050475 (SEQ ID NO: 122), CLON Ceres ID no. 1728904 (SEQ ID NO: 124), CLON Ceres ID no. 1698538 (SEQ ID NO: 126), CLON Ceres ID no. 1762328 (SEQ ID NO: 130), CLON Ceres ID no. 1590072 (SEQ ID NO: 132), CLON Ceres ID no. 471593 (SEQ ID NO: 134), CLON Ceres ID no. 1031667 (SEQ ID NO: 136), CLON Ceres ID no. 1826085 (SEQ ID NO: 138), CLON Ceres ID no. 373932 (SEQ ID NO: 142), CLON Ceres ID no. 1797836 (SEQ ID NO: 144), CLON Ceres ID no. 1102774 (SEQ ID NO: 146), CLON Ceres ID no. 842287 (SEQ ID NO: 148), CLON Ceres ID no. 568205 (SEQ ID NO: 150), ANOT Ceres ID no. 6108997 (SEQ ID NO: 154), ANOT Ceres ID no. 6023609 (SEQ ID NO: 156), y ANOT Ceres ID no. 6017906 (SEQ ID NO: 158). En algunos casos, un homólogo funcional de SEQ ID NO: 60 tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 40% de identidad de secuencia, por ejemplo, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 60.
Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de homólogos funcionales del polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 364 se proporcionan en la Figura 11 y en el listado de secuencias. Dichos homólogos funcionales incluyen ANOT Ceres ID no. 1455221 (SEQ ID NO: 407), GI Público ID no. 729774 (SEQ ID NO: 408), CLON Ceres ID no. 1414288 (SEQ ID NO: 410), GI Público ID no. 115482048 (SEQ ID NO: 413), y GI Público ID no. 56117815 (SEQ ID NO: 421). Otros homólogos funcionales de SEQ ID NO: 364 incluyen ANOT Ceres ID no. 1485538 (SEQ ID NO: 366), ANOT Ceres ID no. 1538505 (SEQ ID NO: 368), GI Público ID no. 8347238 (SEQ ID NO: 369), GI Público ID no. 125542955 (SEQ ID NO: 370), GI Público ID no. 115446219 (SEQ ID NO: 371), CLON Ceres ID no. 1597127 (SEQ ID NO: 373), CLON Ceres ID no. 1584568 (SEQ ID NO: 375), CLON Ceres ID no. 286056 (SEQ ID NO: 377), ANOT Ceres ID no. 1543432 (SEQ ID NO: 379), CLON Ceres ID no. 1728062 (SEQ ID NO: 381), ANOT Ceres ID no. 1448950 (SEQ ID NO: 383), CLON Ceres ID no. 771500 (SEQ ID NO: 385), ANOT Ceres ID no. 1485096 (SEQ ID NO: 387), CLON Ceres ID no. 1646104 (SEQ ID NO: 389), GI Público ID no. 111184724 (SEQ ID NO: 390), CLON Ceres ID no. 1362475 (SEQ ID NO: 392), CLON Ceres ID no. 597906 (SEQ ID NO: 394), CLON Ceres ID no. 615781 (SEQ ID NO: 396), CLON Ceres ID no. 538713 (SEQ ID NO: 398), CLON Ceres ID no. 1794141 (SEQ ID NO: 400), GI Público ID no. 5821138 (SEQ ID NO: 401), GI Público ID no. 886742 (SEQ ID NO: 402), CLON Ceres ID no. 1814498 (SEQ ID NO: 404), GI Público ID no. 7158882 (SEQ ID NO: 405), ANOT Ceres ID no. 1452564 (SEQ ID NO: 412), GI Público ID no. 125557431 (SEQ ID NO: 414), ANOT Ceres ID no. 1442880 (SEQ ID NO: 416), ANOT Ceres ID no. 1463437 (SEQ ID NO: 418), GI Público ID no. 42415865 (SEQ ID NO: 419), GI Público ID no. 33087081 (SEQ ID NO: 420), GI Público ID no. 115521217 (SEQ ID NO: 422), GI Público ID no. 115521211 (SEQ ID NO: 423), GI Público ID no. 115521215 (SEQ ID NO: 424), ANOT Ceres ID no. 1454376 (SEQ ID NO: 426), CLON Ceres ID no. 835571 (SEQ ID NO: 428), ANOT Ceres ID no. 1500046 (SEQ ID NO: 430), GI Público ID no. 110738569 (SEQ ID NO: 431), GI Público ID no. 125542510 (SEQ ID NO: 432), GI Público ID no. 30686034 (SEQ ID
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no. 1772747 (SEQ ID NO: 463), CLON Ceres ID no. 225960 (SEQ ID NO: 465), GI Público ID no. 115443807 (SEQ ID NO: 470), CLON Ceres ID no. 569388 (SEQ ID NO: 483), CLON Ceres ID no. 1915549 (SEQ ID NO: 449), CLON Ceres ID no. 529871 (SEQ ID NO: 453), CLON Ceres ID no. 1067079 (SEQ ID NO: 455), CLON Ceres ID no. 1079572 (SEQ ID NO: 457), ANOT Ceres ID no. 1456550 (SEQ ID NO: 461), CLON Ceres ID no. 1437889 (SEQ ID NO: 469), CLON Ceres ID no. 2014249 (SEQ ID NO: 472), CLON Ceres ID no. 2033133 (SEQ ID NO: 474), CLON Ceres ID no. 707404 (SEQ ID NO: 476), CLON Ceres ID no. 1770680 (SEQ ID NO: 478), ANOT Ceres ID no. 1450989 (SEQ ID NO: 480), GI Público ID no. 72384445 (SEQ ID NO: 481), CLON Ceres ID no. 1059299 (SEQ ID NO: 485), y ANOT Ceres ID no. 6008086 (SEQ ID NO: 487).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 100 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 2. Dichos polipéptidos incluyen LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME00045 (SEQ ID NO: 489), CLON Ceres ID no. 571200 (SEQ ID NO: 494), CLON Ceres ID no. 1928532 (SEQ ID NO: 496), ANOT Ceres ID no. 1490637 (SEQ ID NO: 498), CLON Ceres ID no. 295496 (SEQ ID NO: 514), GI Público ID no. 115463637 (SEQ ID NO: 515), CLON Ceres ID no. 1999444 (SEQ ID NO: 518), GI Público ID no. 147844794 (SEQ ID NO: 490), GI Público ID no. 147842279 (SEQ ID NO: 491), GI Público ID no. 145355441 (SEQ ID NO: 492), ANOT Ceres ID no. 1461381 (SEQ ID NO: 500), ANOT Ceres ID no. 1440313 (SEQ ID NO: 502), ANOT Ceres ID no. 1448275 (SEQ ID NO: 504), ANOT Ceres ID no. 1437838 (SEQ ID NO: 506), ANOT Ceres ID no. 1501275 (SEQ ID NO: 508), CLON Ceres ID no. 1644562 (SEQ ID NO: 510), CLON Ceres ID no. 1925967 (SEQ ID NO: 512), GI Público ID no. 115435904 (SEQ ID NO: 516), GI Público ID no. 125552168 (SEQ ID NO: 519), GI Público ID no. 125594093 (SEQ ID NO: 520), CLON Ceres ID no. 221188 (SEQ ID NO: 522), ANOT Ceres ID no. 1477714 (SEQ ID NO: 524), CLON Ceres ID no. 1787953 (SEQ ID NO: 526), ANOT Ceres ID no. 1531210 (SEQ ID NO: 528), CLON Ceres ID no. 521176 (SEQ ID NO: 530), GI Público ID no. 22327055 (SEQ ID NO: 531), ANOT Ceres ID no. 1508824 (SEQ ID NO: 533), CLON Ceres ID no. 38879 (SEQ ID NO: 535), GI Público ID no. 42569309 (SEQ ID NO: 536), CLON Ceres ID no. 1817784 (SEQ ID NO: 538), CLON Ceres ID no. 284637 (SEQ ID NO: 540), GI Público ID no. 125596251 (SEQ ID NO: 541), GI Público ID no. 125554300 (SEQ ID NO: 543), CLON Ceres ID no. 1935437 (SEQ ID NO: 545), ANOT Ceres ID no. 1455622 (SEQ ID NO: 547), GI Público ID no. 55771354 (SEQ ID NO: 548), ANOT Ceres ID no. 1514655 (SEQ ID NO: 550), CLON Ceres ID no. 1848736 (SEQ ID NO: 552), GI Público ID no. 125569872 (SEQ ID NO: 553), CLON Ceres ID no. 1645078 (SEQ ID NO: 555), CLON Ceres ID no. 1790573 (SEQ ID NO: 557), GI Público ID no. 4567251 (SEQ ID NO: 558), CLON Ceres ID no. 444113 (SEQ ID NO: 561), GI Público ID no. 125525355 (SEQ ID NO: 562), ANOT Ceres ID no. 6028854 (SEQ ID NO: 564), y ANOT Ceres ID no. 6115356 (SEQ ID NO: 566).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 150 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 3. Dichos polipéptidos incluyen LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME02190 (SEQ ID NO: 568), CLON Ceres ID no. 695006 (SEQ ID NO: 578), ANOT Ceres ID no. 1527488 (SEQ ID NO: 584), GI Público ID no. 79318519 (SEQ ID NO: 569), GI Público ID no. 79318537 (SEQ ID NO: 570), CLON Ceres ID no. 956998 (SEQ ID NO: 572), CLON Ceres ID no. 978154 (SEQ ID NO: 574), CLON Ceres ID no. 1035628 (SEQ ID NO: 576), CLON Ceres ID no. 464169 (SEQ ID NO: 580), ANOT Ceres ID no. 1474075 (SEQ ID NO: 582), ANOT Ceres ID no. 1474073 (SEQ ID NO: 586), y ANOT Ceres ID no. 1527486 (SEQ ID NO: 588).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 120 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 4. Dichos polipéptidos incluyen LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME02549 (SEQ ID NO: 590), ANOT Ceres ID no. 1501305 (SEQ ID NO: 623), CLON Ceres ID no. 607280 (SEQ ID NO: 627), GI Público ID no. 92887174 (SEQ ID NO: 632), CLON Ceres ID no. 1857162 (SEQ ID NO: 634), GI Público ID no. 115477272 (SEQ ID NO: 674), CLON Ceres ID no. 264002 (SEQ ID NO: 682), GI Público ID no. 147822456 (SEQ ID NO: 591), GI Público ID no. 144923935 (SEQ ID NO: 592), GI Público ID no. 140038730 (SEQ ID NO: 593), GI Público ID no. 78708014 (SEQ ID NO: 594), GI Público ID no. 115481362 (SEQ ID NO: 595), GI Público ID no. 125531350 (SEQ ID NO: 596), GI Público ID no. 125525598 (SEQ ID NO: 597), GI Público ID no. 77548630 (SEQ ID NO: 598), GI Público ID no. 46798895 (SEQ ID NO: 599), GI Público ID no. 125564653 (SEQ ID NO: 600), CLON Ceres ID no. 998865 (SEQ ID NO: 602), GI Público ID no. 125556140 (SEQ ID NO: 603), GI Público ID no. 125534482 (SEQ ID NO: 604), GI Público ID no. 125550135 (SEQ ID NO: 605), CLON Ceres ID no. 639816 (SEQ ID NO: 607), GI Público ID no. 125562170 (SEQ ID NO: 608), CLON Ceres ID no. 1797059 (SEQ ID NO: 610), CLON Ceres ID no. 1031510 (SEQ ID NO: 612), CLON Ceres ID no. 1973081 (SEQ ID NO: 614), GI Público ID no. 125561002 (SEQ ID NO: 615), GI Público ID no. 125541732 (SEQ ID NO: 616), GI Público ID no. 125560677 (SEQ ID NO: 617), GI Público ID no. 125559115 (SEQ ID NO: 618), GI Público ID no. 15809903 (SEQ ID NO: 619), GI Público ID no. 30681703 (SEQ ID NO: 620), GI Público ID no. 9759556 (SEQ ID NO: 621), ANOT Ceres ID no. 1448303 (SEQ ID NO: 625), ANOT Ceres ID no. 1448305 (SEQ ID NO: 629), ANOT Ceres ID no. 1448307 (SEQ ID NO: 631), GI Público ID no. 92888243 (SEQ ID NO: 635), GI Público ID no. 92879395 (SEQ ID NO: 636), CLON Ceres ID no. 528876 (SEQ ID NO: 638), ANOT Ceres ID no. 1448352 (SEQ ID NO: 640), ANOT Ceres ID no. 1437745 (SEQ ID NO: 642), ANOT Ceres ID no. 1464146 (SEQ ID NO: 644), ANOT Ceres ID no. 1437744 (SEQ ID NO: 646), GI Público ID no. 92894684 (SEQ ID NO: 647), CLON Ceres ID no. 3964 (SEQ ID NO: 650), GI Público ID no. 13272389 (SEQ ID NO: 651), ANOT Ceres ID no. 1481203 (SEQ ID NO: 653), GI Público ID no. 15227699 (SEQ ID NO: 654), GI Público ID no. 92886084 (SEQ ID NO: 655), GI Público ID no. 15239947 (SEQ ID NO: 656), CLON Ceres ID no. 34878 (SEQ ID NO: 658), CLON Ceres ID no. 150484 (SEQ ID NO: 660), GI Público ID no. 21553545 (SEQ ID NO: 661), GI Público ID no. 15222843
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Público ID no. 119503368 (SEQ ID NO: 1014), GI Público ID no. 72161874 (SEQ ID NO: 1015), GI Público ID no. 91780661 (SEQ ID NO: 1016), ANOT Ceres ID no. 835908 (SEQ ID NO: 1022), GI Público ID no. 38326750 (SEQ ID NO: 1023), CLON Ceres ID no. 1939396 (SEQ ID NO: 1025), CLON Ceres ID no. 403637 (SEQ ID NO: 1027), GI Público ID no. 42539907 (SEQ ID NO: 1028), CLON Ceres ID no. 1836494 (SEQ ID NO: 1030), GI Público ID no. 15192945 (SEQ ID NO: 1031), CLON Ceres ID no. 1607947 (SEQ ID NO: 1033), CLON Ceres ID no. 115880 (SEQ ID NO: 1035), CLON Ceres ID no. 1074009 (SEQ ID NO: 1037), CLON Ceres ID no. 476073 (SEQ ID NO: 1039), CLON Ceres ID no. 554053 (SEQ ID NO: 1041), CLON Ceres ID no. 391449 (SEQ ID NO: 1045), CLON Ceres ID no. 1846400 (SEQ ID NO: 1048), ANOT Ceres ID no. 1475185 (SEQ ID NO: 1050), GI Público ID no. 115457148 (SEQ ID NO: 1051), ANOT Ceres ID no. 1454960 (SEQ ID NO: 1053), GI Público ID no. 50346893 (SEQ ID NO: 1056), CLON Ceres ID no. 1931526 (SEQ ID NO: 1058), ANOT Ceres ID no. 1454260 (SEQ ID NO: 1061), GI Público ID no. 115456131 (SEQ ID NO: 1062), CLON Ceres ID no. 159151 (SEQ ID NO: 1064), CLON Ceres ID no. 1842801 (SEQ ID NO: 1071), CLON Ceres ID no. 533030 (SEQ ID NO: 1073), CLON Ceres ID no. 1931881 (SEQ ID NO: 1075), ANOT Ceres ID no. 1480006 (SEQ ID NO: 1077), CLON Ceres ID no. 1895007 (SEQ ID NO: 1079), GI Público ID no. 3598863 (SEQ ID NO: 1080), ANOT Ceres ID no. 1471735 (SEQ ID NO: 1082), CLON Ceres ID no. 1937530 (SEQ ID NO: 1084), CLON Ceres ID no. 1833050 (SEQ ID NO: 1086), CLON Ceres ID no. 644213 (SEQ ID NO: 1088), CLON Ceres ID no. 568154 (SEQ ID NO: 1090), CLON Ceres ID no. 527598 (SEQ ID NO: 1092), ANOT Ceres ID no. 1487614 (SEQ ID NO: 1096), ANOT Ceres ID no. 1541881 (SEQ ID NO: 1098), ANOT Ceres ID no. 1488465 (SEQ ID NO: 1100), ANOT Ceres ID no. 1488468 (SEQ ID NO: 1102), ANOT Ceres ID no. 1541884 (SEQ ID NO: 1104), ANOT Ceres ID no. 1454972 (SEQ ID NO: 1106), ANOT Ceres ID no. 1475186 (SEQ ID NO: 1108), CLON Ceres ID no. 686198 (SEQ ID NO: 1112), GI Público ID no. 84579420 (SEQ ID NO: 1114), CLON Ceres ID no. 605144 (SEQ ID NO: 1116), GI Público ID no. 15077028 (SEQ ID NO: 1119), ANOT Ceres ID no. 1454963 (SEQ ID NO: 1121), ANOT Ceres ID no. 6030208 (SEQ ID NO: 1123), y ANOT Ceres ID no. 6076767 (SEQ ID NO: 1125).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 105 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 9. Dichos polipéptidos incluyen LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME20095 (SEQ ID NO: 1129), GI Público ID no. 72255610 (SEQ ID NO: 933), LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME20095 (SEQ ID NO: 1129), CLON Ceres ID no. 1562633 (SEQ ID NO: 1140), ANOT Ceres ID no. 1692728 (SEQ ID NO: 1142), CLON Ceres ID no. 921110 (SEQ ID NO: 1144), CLON Ceres ID no. 1791180 (SEQ ID NO: 1146), CLON Ceres ID no. 527891 (SEQ ID NO: 1148), ANOT Ceres ID no. 1522414 (SEQ ID NO: 1150), GI Público ID no. 51458330 (SEQ ID NO: 1182), GI Público ID no. 18399940 (SEQ ID NO: 63), ANOT Ceres ID no. 6107929 (SEQ ID NO: 73), ANOT Ceres ID no. 1473094 (SEQ ID NO: 96), ANOT Ceres ID no. 1503955 (SEQ ID NO: 127), ANOT Ceres ID no. 1526501 (SEQ ID NO: 139), GI Público ID no. 15235713 (SEQ ID NO: 179), GI Público ID no. 15234552 (SEQ ID NO: 180), ANOT Ceres ID no. 1520801 (SEQ ID NO: 209), ANOT Ceres ID no. 1443434 (SEQ ID NO: 467), GI Público ID no. 30696058 (SEQ ID NO: 559), ANOT Ceres ID no. 1509601 (SEQ ID NO: 648), ANOT Ceres ID no. 1451912 (SEQ ID NO: 726), ANOT Ceres ID no. 6017545 (SEQ ID NO: 741), ANOT Ceres ID no. 1504999 (SEQ ID NO: 765), ANOT Ceres ID no. 1456402 (SEQ ID NO: 773), ANOT Ceres ID no. 1496359 (SEQ ID NO: 781), ANOT Ceres ID no. 1447260 (SEQ ID NO: 842), ANOT Ceres ID no. 1469023 (SEQ ID NO: 861), ANOT Ceres ID no. 1474186 (SEQ ID NO: 865), ANOT Ceres ID no. 1527596 (SEQ ID NO: 867), CLON Ceres ID no. 1919624 (SEQ ID NO: 896), CLON Ceres ID no. 677797 (SEQ ID NO: 916), GI Público ID no. 7960729 (SEQ ID NO: 932), CLON Ceres ID no. 941845 (SEQ ID NO: 1043), GI Público ID no. 30683008 (SEQ ID NO: 1046), GI Público ID no. 42568786 (SEQ ID NO: 1059), CLON Ceres ID no. 255364 (SEQ ID NO: 1069), GI Público ID no. 147771549 (SEQ ID NO: 1130), GI Público ID no. 144924741 (SEQ ID NO: 1131), GI Público ID no. 121594508 (SEQ ID NO: 1132), GI Público ID no. 91202290 (SEQ ID NO: 1133), GI Público ID no. 89900939 (SEQ ID NO: 1134), GI Público ID no. 77917672 (SEQ ID NO: 1135), GI Público ID no. 77165252 (SEQ ID NO: 1136), GI Público ID no. 115375374 (SEQ ID NO: 1137), GI Público ID no. 110602449 (SEQ ID NO: 1138), GI Público ID no. 125540573 (SEQ ID NO: 1151), GI Público ID no. 125561519 (SEQ ID NO: 1152), GI Público ID no. 125528345 (SEQ ID NO: 1153), GI Público ID no. 116310408 (SEQ ID NO: 1154), GI Público ID no. 115483332 (SEQ ID NO: 1156), GI Público ID no. 125575640 (SEQ ID NO: 1157), GI Público ID no. 115476368 (SEQ ID NO: 1158), GI Público ID no. 115478841 (SEQ ID NO: 1159), GI Público ID no. 115467158 (SEQ ID NO: 1160), GI Público ID no. 72384477 (SEQ ID NO: 1161), GI Público ID no. 116054703 (SEQ ID NO: 1162), CLON Ceres ID no. 1786317 (SEQ ID NO: 1164), CLON Ceres ID no. 1791336 (SEQ ID NO: 1166), CLON Ceres ID no. 1877752 (SEQ ID NO: 1168), CLON Ceres ID no. 1821191 (SEQ ID NO: 1170), CLON Ceres ID no. 446838 (SEQ ID NO: 1172), CLON Ceres ID no. 1556915 (SEQ ID NO: 1174), GI Público ID no. 90200725 (SEQ ID NO: 1175), CLON Ceres ID no. 1580247 (SEQ ID NO: 1177), CLON Ceres ID no. 644201 (SEQ ID NO: 1179), CLON Ceres ID no. 538689 (SEQ ID NO: 1181), CLON Ceres ID no. 817225 (SEQ ID NO: 1184), y CLON Ceres ID no. 923842 (SEQ ID NO: 1186).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 55 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 10. Dichos polipéptidos incluyen CLON Ceres ID no. 31309 (SEQ ID NO: 60), CLON Ceres ID no. 872030 (SEQ ID NO: 62), CLON Ceres ID no. 100029223 (SEQ ID NO: 74), CLON Ceres ID no. 1939845 (SEQ ID NO: 98), CLON Ceres ID no. 2015383 (SEQ ID NO: 102), CLON Ceres ID no. 1607893 (SEQ ID NO: 104), CLON Ceres ID no. 1075133 (SEQ ID NO: 152), CLON Ceres ID no. 1218065 (SEQ ID NO: 915), GI Público ID no. 15227919 (SEQ ID NO: 64), GI Público ID no. 9843641 (SEQ ID NO: 65), GI Público ID no. 124294789 (SEQ ID NO: 66), GI Público ID no. 15233446 (SEQ ID NO: 67), GI Público ID no. 115477679 (SEQ ID NO: 68), GI Público ID no. 42407552 (SEQ ID NO: 69), GI Público ID no. 125562450 (SEQ ID NO: 70), GI Público ID no. 115469980 (SEQ ID NO: 71), ANOT
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Ceres ID no. 1442539 (SEQ ID NO: 76), ANOT Ceres ID no. 1442538 (SEQ ID NO: 78), ANOT Ceres ID no. 1460661 (SEQ ID NO: 80), ANOT Ceres ID no. 1452884 (SEQ ID NO: 82), ANOT Ceres ID no. 1450523 (SEQ ID NO: 84), ANOT Ceres ID no. 1442257 (SEQ ID NO: 86), ANOT Ceres ID no. 1541121 (SEQ ID NO: 88), ANOT Ceres ID no. 1480481 (SEQ ID NO: 90), ANOT Ceres ID no. 1487713 (SEQ ID NO: 92), ANOT Ceres ID no. 1456204 (SEQ ID NO: 94), CLON Ceres ID no. 1387402 (SEQ ID NO: 100), CLON Ceres ID no. 972919 (SEQ ID NO: 106), CLON Ceres ID no. 1645860 (SEQ ID NO: 108), CLON Ceres ID no. 1042804 (SEQ ID NO: 110), CLON Ceres ID no. 1606678 (SEQ ID NO: 112), CLON Ceres ID no. 684496 (SEQ ID NO: 114), CLON Ceres ID no. 1062366 (SEQ ID NO: 116), CLON Ceres ID no. 1722931 (SEQ ID NO: 118), CLON Ceres ID no. 746169 (SEQ ID NO: 120), CLON Ceres ID no. 1050475 (SEQ ID NO: 122), CLON Ceres ID no. 1728904 (SEQ ID NO: 124), CLON Ceres ID no. 1698538 (SEQ ID NO: 126), CLON Ceres ID no. 1762328 (SEQ ID NO: 130), CLON Ceres ID no. 1590072 (SEQ ID NO: 132), CLON Ceres ID no. 471593 (SEQ ID NO: 134), CLON Ceres ID no. 1031667 (SEQ ID NO: 136), CLON Ceres ID no. 1826085 (SEQ ID NO: 138), CLON Ceres ID no. 373932 (SEQ ID NO: 142), CLON Ceres ID no. 1797836 (SEQ ID NO: 144), CLON Ceres ID no. 1102774 (SEQ ID NO: 146), CLON Ceres ID no. 842287 (SEQ ID NO: 148), CLON Ceres ID no. 568205 (SEQ ID NO: 150), ANOT Ceres ID no. 6108997 (SEQ ID NO: 154), ANOT Ceres ID no. 6023609 (SEQ ID NO: 156), y ANOT Ceres ID no. 6017906 (SEQ ID NO: 158).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 55 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 11. Dichos polipéptidos incluyen LOCUS Ceres ID no. At2g26150 (SEQ ID NO: 364), ANOT Ceres ID no. 1455221 (SEQ ID NO: 407), GI Público ID no. 729774 (SEQ ID NO: 408), CLON Ceres ID no. 1414288 (SEQ ID NO: 410), GI Público ID no. 115482048 (SEQ ID NO: 413), GI Público ID no. 56117815 (SEQ ID NO: 421), ANOT Ceres ID no. 1485538 (SEQ ID NO: 366), ANOT Ceres ID no. 1538505 (SEQ ID NO: 368), GI Público ID no. 8347238 (SEQ ID NO: 369), GI Público ID no. 125542955 (SEQ ID NO: 370), GI Público ID no. 115446219 (SEQ ID NO: 371), CLON Ceres ID no. 1597127 (SEQ ID NO: 373), CLON Ceres ID no. 1584568 (SEQ ID NO: 375), CLON Ceres ID no. 286056 (SEQ ID NO: 377), ANOT Ceres ID no. 1543432 (SEQ ID NO: 379), CLON Ceres ID no. 1728062 (SEQ ID NO: 381), ANOT Ceres ID no. 1448950 (SEQ ID NO: 383), CLON Ceres ID no. 771500 (SEQ ID NO: 385), ANOT Ceres ID no. 1485096 (SEQ ID NO: 387), CLON Ceres ID no. 1646104 (SEQ ID NO: 389), GI Público ID no. 111184724 (SEQ ID NO: 390), CLON Ceres ID no. 1362475 (SEQ ID NO: 392), CLON Ceres ID no. 597906 (SEQ ID NO: 394), CLON Ceres ID no. 615781 (SEQ ID NO: 396), CLON Ceres ID no. 538713 (SEQ ID NO: 398), CLON Ceres ID no. 1794141 (SEQ ID NO: 400), GI Público ID no. 5821138 (SEQ ID NO: 401), GI Público ID no. 886742 (SEQ ID NO: 402), CLON Ceres ID no. 1814498 (SEQ ID NO: 404), GI Público ID no. 7158882 (SEQ ID NO: 405), ANOT Ceres ID no. 1452564 (SEQ ID NO: 412), GI Público ID no. 125557431 (SEQ ID NO: 414), ANOT Ceres ID no. 1442880 (SEQ ID NO: 416), ANOT Ceres ID no. 1463437 (SEQ ID NO: 418), GI Público ID no. 42415865 (SEQ ID NO: 419), GI Público ID no. 33087081 (SEQ ID NO: 420), GI Público ID no. 115521217 (SEQ ID NO: 422), GI Público ID no. 115521211 (SEQ ID NO: 423), GI Público ID no. 115521215 (SEQ ID NO: 424), ANOT Ceres ID no. 1454376 (SEQ ID NO: 426), CLON Ceres ID no. 835571 (SEQ ID NO: 428), ANOT Ceres ID no. 1500046 (SEQ ID NO: 430), GI Público ID no. 110738569 (SEQ ID NO: 431), GI Público ID no. 125542510 (SEQ ID NO: 432), GI Público ID no. 30686034 (SEQ ID NO: 433), GI Público ID no. 125570883 (SEQ ID NO: 434), GI Público ID no. 42562463 (SEQ ID NO: 435), CLON Ceres ID no. 100043265 (SEQ ID NO: 436), ANOT Ceres ID no. 6089790 (SEQ ID NO: 438), y ANOT Ceres ID no. 6043635 (SEQ ID NO: 440).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 50 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 12. Dichos polipéptidos incluyen LOCUS Ceres ID no. At1g32330 (SEQ ID NO: 311), ANOT Ceres ID no. 1538958 (SEQ ID NO: 319), GI Público ID no. 115521213 (SEQ ID NO: 320), GI Público ID no. 42415865 (SEQ ID NO: 321), GI Público ID no. 729775 (SEQ ID NO: 322), GI Público ID no. 11386827 (SEQ ID NO: 323), GI Público ID no. 115456675 (SEQ ID NO: 326), GI Público ID no. 89274218 (SEQ ID NO: 335), GI Público ID no. 125546035 (SEQ ID NO: 312), CLON Ceres ID no. 125228 (SEQ ID NO: 314), GI Público ID no. 115465055 (SEQ ID NO: 315), GI Público ID no. 125553080 (SEQ ID NO: 316), GI Público ID no. 8920606 (SEQ ID NO: 317), CLON Ceres ID no. 1919643 (SEQ ID NO: 325), GI Público ID no. 429155 (SEQ ID NO: 327), CLON Ceres ID no. 1194199 (SEQ ID NO: 329), GI Público ID no. 15236631 (SEQ ID NO: 330), ANOT Ceres ID no. 1523420 (SEQ ID NO: 332), ANOT Ceres ID no. 1447046 (SEQ ID NO: 334), GI Público ID no. 25296101 (SEQ ID NO: 336), GI Público ID no. 15228440 (SEQ ID NO: 337), GI Público ID no. 6624612 (SEQ ID NO: 338), GI Público ID no. 125588688 (SEQ ID NO: 339), GI Público ID no. 115470859 (SEQ ID NO: 340), GI Público ID no. 15228865 (SEQ ID NO: 341), CLON Ceres ID no. 1571069 (SEQ ID NO: 343), GI Público ID no. 115455903 (SEQ ID NO: 344), ANOT Ceres ID no. 1459422 (SEQ ID NO: 346), CLON Ceres ID no. 1577511 (SEQ ID NO: 348), GI Público ID no. 115451657 (SEQ ID NO: 349), GI Público ID no. 15225255 (SEQ ID NO: 350), GI Público ID no. 125545695 (SEQ ID NO: 351), ANOT Ceres ID no. 1471817 (SEQ ID NO: 353), ANOT Ceres ID no. 1440896 (SEQ ID NO: 355), GI Público ID no. 119393868 (SEQ ID NO: 356), ANOT Ceres ID no. 1517025 (SEQ ID NO: 358), ANOT Ceres ID no. 1512410 (SEQ ID NO: 360), y ANOT Ceres ID no. 6035498 (SEQ ID NO: 362).
En el listado de secuencias se muestran polipéptidos que tienen puntuaciones bit HMM mayores de 25 cuando se ajustan a un HMM generado a partir de las secuencias de aminoácidos mostradas en la Figura 13. Dichos polipéptidos incluyen CLON Ceres ID no. 41543 (SEQ ID NO: 160) CLON Ceres ID no. 1837065 (SEQ ID NO: 162), ANOT Ceres ID no. 1531178 (SEQ ID NO: 184), CLON Ceres ID no. 470694 (SEQ ID NO: 242), GI Público ID no. 92867368 (SEQ ID NO: 253), CLON Ceres ID no. 859707 (SEQ ID NO: 256), CLON Ceres ID no. 392275 (SEQ ID
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En algunos casos, un polipéptido de tolerancia a la sequía tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 35% de identidad de secuencia, por ejemplo, 36%, 40%, 47%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1012. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 35% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 1012 se proporcionan en la Figura 8. Dichos polipéptidos incluyen CLON Ceres ID no. 287430 (SEQ ID NO: 1018), ANOT Ceres ID no. 451889 (SEQ ID NO: 1020), CLON Ceres ID no. 936084 (SEQ ID NO: 1055), CLON Ceres ID no. 1792501 (SEQ ID NO: 1066), ANOT Ceres ID no. 1437875 (SEQ ID NO: 1068), GI Público ID no. 1853968 (SEQ ID NO: 1093), GI Público ID no. 27530032 (SEQ ID NO: 1094), CLON Ceres ID no. 1834483 (SEQ ID NO: 1110), GI Público ID no. 84579418 (SEQ ID NO: 1113), GI Público ID no. 15077030 (SEQ ID NO: 1117), y GI Público ID no. 13752458 (SEQ ID NO: 1118).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia a la sequía tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 30% de identidad de secuencia, por ejemplo, 31%, 35%, 40%, 41%, 49%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1129. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 30% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 1129 se proporcionan en la Figura 9. Dichos polipéptidos incluyen GI Público ID no. 72255610 (SEQ ID NO: 933), LÍNEA DE SEMILLAS Ceres ID no. ME20095 (SEQ ID NO: 1129), CLON Ceres ID no. 1562633 (SEQ ID NO: 1140), ANOT Ceres ID no. 1692728 (SEQ ID NO: 1142), CLON Ceres ID no. 921110 (SEQ ID NO: 1144), CLON Ceres ID no. 1791180 (SEQ ID NO: 1146), CLON Ceres ID no. 527891 (SEQ ID NO: 1148), ANOT Ceres ID no. 1522414 (SEQ ID NO: 1150), y GI Público ID no. 51458330 (SEQ ID NO: 1182).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia al calor tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 25% de identidad de secuencia, por ejemplo, 26%, 27%, 30%, 32%, 40%, 42%, 47%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 60. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 25% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 60 se proporcionan en la Figura 10. Dichos polipéptidos incluyen CLON Ceres ID no. 872030 (SEQ ID NO: 62), CLON Ceres ID no. 100029223 (SEQ ID NO: 74), CLON Ceres ID no. 1939845 (SEQ ID NO: 98), CLON Ceres ID no. 2015383 (SEQ ID NO: 102), CLON Ceres ID no. 1607893 (SEQ ID NO: 104), CLON Ceres ID no. 1075133 (SEQ ID NO: 152), y CLON Ceres ID no. 1218065 (SEQ ID NO: 915).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia al calor tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 25% de identidad de secuencia, por ejemplo, 27%, 28%, 31%, 36%, 44%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 364. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 25% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 364 se proporcionan en la Figura 11. Dichos polipéptidos incluyen ANOT Ceres ID no. 1455221 (SEQ ID NO: 407), GI Público ID no. 729774 (SEQ ID NO: 408), CLON Ceres ID no. 1414288 (SEQ ID NO: 410), GI Público ID no. 115482048 (SEQ ID NO: 413), y GI Público ID no. 56117815 (SEQ ID NO: 421).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia al calor tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 25% de identidad de secuencia, por ejemplo, 29%, 35%, 40%, 47%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 311. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 25% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 311 se proporcionan en la Figura 12. Dichos polipéptidos incluyen ANOT Ceres ID no. 1538958 (SEQ ID NO: 319), GI Público ID no. 115521213 (SEQ ID NO: 320), GI Público ID no. 42415865 (SEQ ID NO: 321), GI Público ID no. 729775 (SEQ ID NO: 322), GI Público ID no. 11386827 (SEQ ID NO: 323), GI Público ID no. 115456675 (SEQ ID NO: 326), y GI Público ID no. 89274218 (SEQ ID NO: 335).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia al calor tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 25% de identidad de secuencia, por ejemplo, 30%, 33%, 40%, 45%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 160. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 25% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 160 se proporcionan en la Figura 13. Dichos polipéptidos incluyen CLON Ceres ID no. 1837065 (SEQ ID NO: 162), ANOT Ceres ID no. 1531178 (SEQ ID NO: 184), CLON Ceres ID no. 470694 (SEQ ID NO: 242), GI Público ID no. 92867368 (SEQ ID NO: 253), CLON Ceres ID no. 859707 (SEQ ID NO: 256), CLON Ceres ID no. 392275 (SEQ ID NO: 268), CLON Ceres ID no. 1828394 (SEQ ID NO: 282), y GI Público ID no. 115466694 (SEQ ID NO: 294).
En algunos casos, un polipéptido de tolerancia al calor tiene una secuencia de aminoácidos con al menos 20% de identidad de secuencia, por ejemplo, 21%, 22%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 52%, 56%, 59%, 61%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2. Las secuencias de aminoácidos de polipéptidos que tienen más de 20% de identidad de secuencia con el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 2 se proporcionan en la Figura 14. Dichos polipéptidos incluyen GI Público ID no. 115470807 (SEQ ID NO: 5), CLON Ceres ID no. 1842931 (SEQ ID NO: 15), CLON Ceres ID no. 321308 (SEQ ID NO: 17), CLON Ceres ID no. 1725811 (SEQ ID NO: 19), CLON Ceres ID no. 1357455 (SEQ
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Un ácido nucleico de tolerancia al calor puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO:
310. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 310. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 80% de identidad de secuencia, por ejemplo, 81%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 310 o un homólogo funcional de éste tal como los identificados en el listado de secuencias.
Un ácido nucleico de tolerancia al calor puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO:
159. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 159. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 80% de identidad de secuencia, por ejemplo, 81%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 159 o un homólogo funcional de éste tal como los identificados en el listado de secuencias.
Un ácido nucleico de tolerancia al calor puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 80% de identidad de secuencia, por ejemplo, 81%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1 o un homólogo funcional de éste tal como los identificados en el listado de secuencias.
Un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1008. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1008. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 80% de identidad de secuencia, por ejemplo, 81%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1008 o un homólogo funcional de éste tal como los identificados en el listado de secuencias.
Un ácido nucleico de tolerancia al calor puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 56. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 56. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia al calor puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 80% de identidad de secuencia, por ejemplo, 81%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 56.
Un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede comprender la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1362. Alternativamente, un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede ser una variante del ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1362. Por ejemplo, un ácido nucleico de tolerancia a la sequía puede tener una secuencia de nucleótidos con al menos 30% de identidad de secuencia, por ejemplo, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ó 99% de identidad de secuencia, con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID NO: 1362 o un homólogo funcional de éste tal como los identificados en el listado de secuencias.
Las moléculas de ácido nucleico aisladas pueden producirse por técnicas estándar. Por ejemplo, pueden usarse técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para obtener un ácido nucleico aislado que contiene una secuencia de nucleótidos descrita en la presente memoria. La PCR puede usarse para amplificar secuencias específicas de ADN así como ARN, incluyendo secuencias de ADN genómico total o ARN celular total. Se describen varios métodos de PCR, por ejemplo, en PCR Primer: A Laboratory Manual, Dieffenbach y Dveksler, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995. Generalmente, se emplea la información de la secuencia desde los extremos de la región de interés o más allá para diseñar cebadores oligonucleotídicos que son idénticos o similares en secuencia a cadenas opuestas del molde que se va a amplificar. También están disponibles varias estrategias de PCR mediante las que pueden introducirse modificaciones en la secuencia de nucleótidos específicas de sitio en un ácido nucleico molde. Los ácidos nucleicos aislados también pueden sintetizarse químicamente, bien como una única molécula de ácido nucleico (por ejemplo, usando síntesis de ADN automatizada en la dirección 3' a 5' usando la tecnología de fósforoamidita) o como una serie de oligonucleótidos. Por ejemplo, puede sintetizarse una o más parejas de oligonucleótidos largos (por ejemplo, >100 nucleótidos) que contienen la secuencia deseada, conteniendo cada pareja un segmento corto de complementariedad (por ejemplo, aproximadamente 15 nucleótidos) de manera que se forma un dúplex cuando se hibrida la pareja de oligonucleótidos. La ADN polimerasa se usa para extender los oligonucleótidos, lo que resulta en una única molécula de ácido nucleico bicatenaria por pareja de oligonucleótidos, que puede entonces ligarse en un vector. Los ácidos nucleicos aislados de la invención también pueden obtenerse por mutagénesis, por ejemplo, de un ADN natural.
B. Uso de ácidos nucleicos para modular la expresión de polipéptidos
Expresión de un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía
Un ácido nucleico que codifica uno de los polipéptidos de tolerancia al calor y/o sequía descritos en la presente memoria puede usarse para expresar el polipéptido en una especie de planta de interés, típicamente transformando una célula de planta con un ácido nucleico que tiene la secuencia codificadora para el polipéptido unida de manera
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operativa en la orientación con sentido a una o más regiones reguladoras. Los polinucleótidos adecuados incluyen ácidos nucleicos de longitud completa que codifican polipéptidos de tolerancia al calor y/o sequía o fragmentos de dichos ácidos nucleicos de longitud completa. En algunas realizaciones, puede usarse un complemento del ácido nucleico de longitud completa o un fragmento de éste. Típicamente, un fragmento tiene al menos 50 nucleótidos, por ejemplo, al menos 50, 55, 60, 75, 100, 200, 300, 500, 600, 700, 1.000, 2.000 nucleótidos o más.
Se apreciará que debido a la degeneración del código genético, un número de ácidos nucleicos puede codificar un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía particular; es decir, para muchos aminoácidos, existe más de un triplete de nucleótidos que sirve como el codón para el aminoácido. Así, pueden modificarse codones en la secuencia codificadora para un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía dado de manera que se obtiene la expresión óptima en una especie de planta particular, usando tablas de sesgo de codones apropiadas para esa especie.
En algunos casos, la expresión de un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía inhibe una o más funciones de un polipéptido endógeno. Por ejemplo, puede usarse un ácido nucleico que codifica un polipéptido negativo dominante para inhibir la función de la proteína. Un polipéptido negativo dominante típicamente se muta o trunca respecto a un polipéptido de tipo salvaje endógeno, y su presencia en una célula inhibe una o más funciones del polipéptido de tipo salvaje en esa célula, es decir, el polipéptido negativo dominante es genéticamente dominante y confiere una pérdida de función. El mecanismo por el que un polipéptido negativo dominante confiere dicho fenotipo puede variar pero frecuentemente implica una interacción proteína-proteína o una interacción proteína-ADN. Por ejemplo, un polipéptido negativo dominante puede ser una enzima que está truncada respecto a una enzima de tipo salvaje nativa, de manera que el polipéptido truncado retiene dominios implicados en la unión de una primera proteína pero carece de dominios implicados en la unión de una segunda proteína. El polipéptido truncado es así incapaz de modular apropiadamente la actividad de la segunda proteína. Véase, por ejemplo, US 2007/0056058. Como otro ejemplo, una mutación puntual que resulta en una sustitución de aminoácidos no conservativa en un dominio catalítico puede resultar en un polipéptido negativo dominante. Véase, por ejemplo, US 2005/032221. Como otro ejemplo, un polipéptido negativo dominante puede ser un factor de transcripción que está truncado respecto a un factor de transcripción de tipo salvaje nativo, de manera que el polipéptido truncado retiene el o los dominios de unión a ADN pero carece del o de los dominios de activación. Dicho polipéptido truncado puede inhibir la unión del factor de transcripción de tipo salvaje al ADN, inhibiendo de esta manera la activación de la transcripción.
C. Construcciones/vectores
Las construcciones recombinantes proporcionadas en la presente memoria pueden usarse para transformar plantas
o células de planta con el fin de incrementar la tolerancia a la sequía y/o calor. Una construcción de ácido nucleico recombinante puede comprender un ácido nucleico que codifica un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía como se describe en la presente memoria, unido de manera operativa a una región reguladora adecuada para expresar el polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía en la planta o célula. Así, un ácido nucleico puede comprender una secuencia codificadora que codifica el polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía como se muestra en SEQ ID NO: 749. El polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía codificado por un ácido nucleico recombinante puede ser un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía nativo, o puede ser heterólogo para la célula. Los ejemplos de regiones reguladoras adecuadas se describen en la sección titulada "Regiones reguladoras".
También se proporcionan vectores que contienen construcciones de ácido nucleico recombinante tales como los descritos en la presente memoria. Los núcleos de vector adecuados incluyen, por ejemplo, los usados rutinariamente en la técnica tales como plásmidos, virus, cromosomas artificiales, BAC, YAC, o PAC. Los vectores de expresión adecuados incluyen, sin limitación, plásmidos y vectores virales derivados, por ejemplo, de bacteriófagos, baculovirus, y retrovirus. Numerosos vectores y sistemas de expresión están disponibles comercialmente en empresas como Novagen (Madison, WI), Clontech (Palo Alto, CA), Stratagene (La Jolla, CA), e Invitrogen/Life Technologies (Carlsbad, CA).
Los vectores proporcionados en la presente memoria también pueden incluir, por ejemplo, orígenes de replicación, región de unión de soporte (SAR), y/o marcadores. Un gen marcador puede conferir un fenotipo seleccionable a una célula de planta. Por ejemplo, un marcador puede conferir resistencia a biocidas, tal como resistencia a un antibiótico (por ejemplo, kanamicina, G418, bleomicina, o higromicina), o un herbicida (por ejemplo, glifosato, clorsulfurón o fosfinotricina). Además, un vector de expresión puede incluir una secuencia etiqueta diseñada para facilitar la manipulación o detección (por ejemplo, purificación o localización) del polipéptido expresado. Las secuencias etiqueta, tales como secuencias luciferasa, β-glucuronidasa (GUS), proteína fluorescente verde (GFP), glutatión-S-transferasa (GST), polihistidina, c-myc, hemaglutinina, o etiqueta Flag™ (Kodak, New Haven, CT) se expresan típicamente como una fusión con el polipéptido codificado. Dichas etiquetas pueden insertarse en cualquier lugar en el polipéptido, incluyendo bien en el extremo carboxilo o amino.
D. Regiones reguladoras
La elección de regiones reguladoras para ser incluidas en una construcción recombinante depende de varios factores, incluyendo, pero no limitado a, eficiencia, capacidad de selección, capacidad de inducción, nivel de expresión deseado, y expresión preferencial de célula o tejido. Es un aspecto rutinario para un experto en la técnica el modular la expresión de una secuencia codificadora mediante la selección y posicionamiento apropiados de
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de la fertilización y ocurre principalmente en tejido del endospermo durante el desarrollo de la semilla y es típicamente mayor durante la fase de celularización. Los promotores más adecuados son los que son activos predominantemente en el endospermo en maduración, aunque pueden usarse a veces los promotores que también son activos en otros tejidos. Los ejemplos no limitativos de promotores del endospermo en maduración que pueden incluirse en las construcciones de ácido nucleico proporcionadas en la presente memoria incluyen el promotor napin, el promotor de Arcelina-5, el promotor de faseolina (Bustos et al, Plant Cell, 1(9): 839-853 (1989)), el promotor del inhibidor de tripsina de soja (Riggs et al., Plant Cell, 1(6): 609-621 (1989)), el promotor ACP (Baerson et al., Plant MoI. Biol., 22(2): 255-267 (1993)), el promotor de estearoil-ACP desaturasa (Slocombe et al., Plant Physiol., 104(4): 167-176 (1994)), el promotor de la subunidad α' de β-conglicinina de soja (Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
83: 8560-8564 (1986)), el promotor de oleosina (Hong et al., Plant MoI. Biol., 34(3): 549-555 (1997)), y los promotores de zeína, tales como el promotor de zeína 15 kD, el promotor de zeína 16 kD, promotor de zeína 19 kD, promotor de zeína 22 kD y promotor de zeína 27 kD. También son adecuados el promotor de Osgt-1 del gen de glutelina-1 de arroz (Zheng et al., MoI. Cell Biol., 13: 5829-5842 (1993)), el promotor de beta-amilasa, y el promotor de hordeína de cebada. Otros promotores de endospermo en maduración incluyen los promotores YP0092, PT0676, y PT0708.
iv. Promotores de tejido de ovario
Los promotores que son activos en tejidos de ovario tal como la pared y mesocarpo del óvulo también pueden ser útiles, por ejemplo, un promotor de poligalacturonidasa, el promotor TRX de banana, el promotor de actina de melón, YP0396, y PT0623. Los ejemplos de promotores de son activos principalmente en óvulos incluyen YP0007, YP0111, YP0092, YP0103, YP0028, YP0121, YP0008, YP0039, YP0115, YP0119, YP0120, e YP0374.
v. Promotores del saco embrionario/endospermo temprano
Para conseguir la expresión en el saco embrionario/endospermo temprano, pueden usarse regiones reguladoras que son activas en núcleos polares y/o la célula central, o en precursores de los núcleos polares, pero no en células del huevo o precursores de las células del huevo. Los promotores más adecuados son los que dirigen la expresión sólo
o predominantemente en núcleos polares o precursores de éstos y/o la célula central. Un patrón de transcripción que se extiende desde los núcleos polares hasta el desarrollo del endospermo temprano también puede encontrarse con promotores preferenciales del saco embrionario/endospermo temprano, aunque la transcripción típicamente disminuye significativamente en el desarrollo del endospermo tardío durante y después de la fase de celularización. La expresión en el cigoto o embrión en desarrollo no está presente típicamente con promotores del saco embrionario/endospermo temprano.
Los promotores que pueden ser adecuados incluyen aquellos derivados de los genes siguientes: vivíparo-1 de Arabidopsis (véase, GenBank No. U93215); atmycl de Arabidopsis (véase, Urao (1996) Plant MoL Biol, 32: 571-57; Conceicao (1994) Plant, 5: 493-505); FIE de Arabidopsis (GenBank No. AF129516); MEA de Arabidopsis; FIS2 de Arabidopsis (GenBank No. AF096096); y FIE 1.1 (Patente U.S. 6.906.244). Otros promotores que pueden ser adecuados incluyen aquellos derivados de los genes siguientes: MACI de maíz (véase, Sheridan (1996) Genetics,
142: 1009-1020); Cat3 de maíz (véase, GenBank No. L05934; Abler (1993) Plant MoI. Biol, 22: 10131-1038). Otros promotores incluyen los promotores de Arabidopsis siguientes: YP0039, YP0101, YP0102, YP0110, YP0117, YP0119, YP0137, DME, YP0285, e YP0212. Otros promotores que pueden ser útiles incluyen los promotores de arroz siguientes: p530c10, pOsFIE2-2, pOsMEA, pOsYp102, y pOsYp285.
vi. Promotores de embrión
Las regiones reguladoras que preferentemente dirigen la transcripción en células cigóticas después de la fertilización pueden proporcionar expresión preferencial de embrión. Los más adecuados son los promotores que preferentemente dirigen la transcripción en embriones de estadio temprano antes del estadio de corazón, pero también es adecuada la expresión en embriones de estadio tardío y en maduración. Los promotores preferenciales de embriones incluyen el promotor de la proteína de transferencia de lípidos de cebada (Ltp1) {Plant Cell Rep (2001)
20: 647-654), YP0097, YP0107, YP0088, YP0143, YP0156, PT0650, PT0695, PT0723, PT0838, PT0879, y PT0740.
vii. Promotores de tejido fotosintético
Los promotores activos en tejido fotosintético confieren transcripción a tejidos verdes tales como hojas y tallos. Los más adecuados son promotores que dirigen la expresión sólo o predominantemente en dichos tejidos. Los ejemplos de dichos promotores incluyen los promotores de ribulosa-1,5-bifosfato carboxilasa (RbcS) tales como el promotor RbcS de alerce oriental (Larix laricina), el promotor cab6 de pino (Yamamoto et al, Plant Cell Physiol, 35: 773-778 (1994)), el promotor Cab-1 de trigo (Fejes et al, Plant MoI Biol, 15: 921-932 (1990)), el promotor CAB-1 de espinaca (Lubberstedt et al, Plant Physiol, 104: 997-1006 (1994)), el promotor cab1R de arroz (Luan et al, Plant Cell, 4: 971981 (1992)), el promotor de piruvato ortofosfato diquinasa (PPDK) de maíz (Matsuoka et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 90: 9586-9590 (1993)), el promotor Lhcb1*2 de tabaco (Cerdan et al, Plant MoI Biol, 33: 245-255 (1997)), el promotor SUC2 de simportador de sacarosa-H+ de Arabidopsis thaliana (Truernit et al, Planta, 196: 564-570 (1995)), y promotores de proteínas de membrana tilacoide de espinaca (psaD, psaF, psaE, PC, FNR, atpC, atpD, cab, rbcS). Otros promotores de tejido fotosintético incluyen PT0535, PT0668, PT0886, YP0144, YP0380 y PT0585.
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viii. Promotores de tejido vascular
Los ejemplos de promotores que tienen una actividad alta o preferencial en haces vasculares incluyen YP0087, YP0093, YP0108, YP0022, e YP0080. Otros promotores preferenciales de tejido vascular incluyen el promotor de la proteína GRP 1.8 de la pared celular rica en glicina (Keller y Baumgartner, Plant Cell, 3(10): 1051-1061 (1991)), el promotor del virus moteado amarillo de Commelina (CoYMV) (Medberry et al., Plant Cell, 4(2): 185-192 (1992)), y el promotor del virus baciliforme de tungro de arroz (RTBV) (Dai et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(2): 687-692 (2004)).
ix. Promotores inducibles
Los promotores inducibles confieren transcripción en respuesta a estímulos externos tales como agentes químicos o estímulos medioambientales. Por ejemplo, los promotores inducibles pueden conferir transcripción en respuesta a hormonas tales como ácido giberélico o etileno, o en respuesta a la luz o sequía. Los ejemplos de promotores inducibles por sequía incluyen YP0380, PT0848, YP0381, YP0337, PT0633, YP0374, PT0710, YP0356, YP0385, YP0396, YP0388, YP0384, PT0688, YP0286, YP0377, PD1367, y PD0901. Los ejemplos de promotores inducibles por nitrógeno incluyen PT0863, PT0829, PT0665, y PT0886. Los ejemplos de promotores inducibles por sombra incluyen PR0924 y PT0678. Un ejemplo de un promotor inducido por sal es rd29A (Kasuga et al., Nature Biotech 17: 287-291 (1999)).
x. Promotores basales
Un promotor basal es la secuencia mínima necesaria para el ensamblaje de un complejo de transcripción requerido para el inicio de la transcripción. Los promotores basales incluyen frecuentemente un elemento de "caja TATA" que puede estar localizado entre aproximadamente 15 y aproximadamente 35 nucleótidos en 5' del sitio del inicio de la transcripción. Los promotores basales también pueden incluir un elemento de "caja CCAAT" (típicamente la secuencia CCAAT) y/o una secuencia GGGCG, que puede estar localizado entre aproximadamente 40 y aproximadamente 200 nucleótidos, típicamente aproximadamente 60 a aproximadamente 120 nucleótidos, en 5' del sitio de inicio de la transcripción.
xi. Promotores de tallo
Un promotor de tallo puede ser específico para uno o más tejidos de tallo o específico para el tallo y otras partes de la planta. Los promotores de tallo pueden tener una actividad alta o preferencial, por ejemplo, en la epidermis y corteza, cambium vascular, procambium, o xilema. Los ejemplos de promotores de tallo incluyen YP0018 que se describe en US20060015970 y CryIA(b) y CryΙA(c) (Braga et al, Journal of New Seeds 5: 209-221 (2003)).
xii. Otros promotores
Otras clases de promotores incluyen, pero no están limitados a, promotores preferenciales de brote, preferenciales de callo, preferenciales de células del tricoma, preferenciales de células guarda tales como PT0678, preferenciales de tubérculo, preferenciales de células parenquimales, y preferenciales de senescencia. También pueden ser útiles los promotores designados YP0086, YP0188, YP0263, PT0758, PT0743, PT0829, YP0119, e YP0096, como se describe en las solicitudes de patente referenciadas anteriormente.
xiii. Otras regiones reguladoras
Una región no traducida 5' (UTR) puede incluirse en las construcciones de ácido nucleico descritas en la presente memoria. Una 5' UTR se transcribe, pero no se traduce, y se encuentra entre el sitio de inicio del transcrito y el codón de inicio de la traducción y puede incluir el nucleótido +1. Una 3' UTR puede posicionarse entre el codón de terminación de la traducción y el final del transcrito. Las UTR pueden tener funciones particulares tales como incremento de la estabilidad del ARNm o atenuación de la traducción. Los ejemplos de 3' UTR incluyen, pero no están limitadas a, señales de poliadenilación y secuencias de terminación de la transcripción, por ejemplo, una secuencia de terminación de nopalina sintasa.
Se entenderá que puede estar presente más de una región reguladora en un polinucleótido recombinante, por ejemplo, intrones, potenciadores, regiones de activación en 5', terminadores de la transcripción, y elementos inducibles. Así, por ejemplo, más de una región reguladora puede estar unida de manera operativa a la secuencia de un polinucleótido que codifica un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía.
Las regiones reguladoras, tales como promotores para genes endógenos, pueden obtenerse por síntesis química o por subclonación a partir de un ADN genómico que incluye dicha región reguladora. Un ácido nucleico que comprende dicha región reguladora también puede incluir secuencias flanqueantes que contienen sitios de enzimas de restricción que facilitan la manipulación posterior.
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incrementada al calor. La selección y/o cribado puede llevarse a cabo en una o más generaciones, y/o en más de una localización geográfica. En algunos casos, las plantas transgénicas pueden crecerse y seleccionarse en condiciones que inducen un fenotipo deseado o que son necesarias de otra manera para producir un fenotipo deseado en una planta transgénica. Además, la selección y/o cribado pueden aplicarse durante un estadio de desarrollo particular en el que se espera que el fenotipo se presente por la planta. La selección y/o cribado pueden llevarse a cabo para elegir aquellas plantas transgénicas que tienen una diferencia estadísticamente significativa en la tolerancia al calor y/o sequía respecto a una planta control que carece del transgén. Las plantas transgénicas seleccionadas o cribadas tienen un fenotipo alterado comparado con una planta control correspondiente, como se describe en la sección "Fenotipos de plantas transgénicas" en la presente memoria.
C. Especies de plantas
Los polinucleótidos y vectores descritos en la presente memoria pueden usarse para transformar un número de plantas y sistemas de células de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas, incluyendo especies de una de las familias siguientes: Acanthaceae, Alliaceae, Alstroemeriaceae, Amaryllidaceae, Apocynaceae, Arecaceae, Asteraceae, Berberidaceae, Bixaceae, Brassicaceae, Bromeliaceae, Cannabaceae, Caryophyllaceae, Cephalotaxaceae, Chenopodiaceae, Colchicaceae, Cucurbitaceae, Dioscoreaceae, Ephedraceae, Erythroxylaceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, Lamiaceae, Linaceae, Lycopodiaceae, Malvaceae, Melanthiaceae, Musaceae, Myrtaceae, Nyssaceae, Papaveraceae, Pinaceae, Plantaginaceae, Poaceae, Rosaceae, Rubiaceae, Salicaceae, Sapindaceae, Solanaceae, Taxaceae, Theaceae, o Vitaceae.
Las especies adecuadas pueden incluir miembros del género Abelmoschus, Abies, Acer, Agrostis, Allium, Alstroemeria, Ananas, Andrographis, Andropogon, Artemisia, Arundo, Atropa, Berberis, Beta, Bixa, Brassica, Calendula, Camellia, Camptotheca, Cannabis, Capsicum, Carthamus, Catharanthus, Cephalotaxus, Chrysanthemum, Cinchona, Citrullus, Coffea, Colchicum, Coleus, Cucumis, Cucurbita, Cynodon, Datura, Dianthus, Digitalis, Dioscorea, Elaeis, Ephedra, Erianthus, Erythroxylum, Eucalyptus, Festuca, Fragaria, Galanthus, Glycine, Gossypium, Helianthus, Hevea, Hordeum, Hyoscyamus, Jatropha, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Lycopodium, Manihot, Medicago, Mentha, Miscanthus, Musa, Nicotiana, Oryza, Panicum, Papaver, Parthenium, Pennisetum, Petunia, Phalaris, Phleum, Pinus, Poa, Poinsettia, Populus, Rauwolfia, Ricinus, Rosa, Saccharum, Salix, Sanguinaria, Scopolia, Secale, Solanum, Sorghum, Spartina, Spinacea, Tanacetum, Taxus, Theobroma, Triticosecale, Triticum, Uniola, Veratrum, Vinca, Vitis, y Zea.
Las especies adecuadas incluyen Panicum spp. o híbridos de éstas, Sorghum spp. o híbridos de éstas, zahína, Miscanthus spp. o híbridos de éstas, Saccharum spp. o híbridos de éstas, Erianthus spp., Populus spp., Andropogon gerardii (tallo azul alto), Pennisetum purpureum (hierba de elefante) o híbridos de éstas (por ejemplo, Pennisetum purpureum x Pennisetum typhoidum), Phalaris arundinacea (alpiste rojo), Cynodon dactylon (hierba de las Bermudas), Festuca arundinacea (festuca alta), Spartina pectinata (espartillo de pradera), Medicago sativa (alfalfa), Arundo donax (caña gigante) o híbridos de éstas, Secale cereale (centeno), Salix spp. (sauce), Eucalyptus spp. (eucalipto), Triticosecale (Triticum -trigo X centeno), Tripsicum dactyloides (zacate maicero), Leymus cinereus (centeno silvestre de cuenca), Leymus condensatus (centeno silvestre gigante), y bambú.
En algunas realizaciones, una especie adecuada puede ser una especie de sorgo salvaje, maleza, o cultivada tal como, pero no limitado a, Sorghum almum, Sorghum amplum, Sorghum angustum, Sorghum arundinaceum, Sorghum bicolor (tal como bicolor, guinea, caudatum, kafϊr, y durra), Sorghum brachypodum, Sorghum bulbosum, Sorghum burmahicum, Sorghum controversum, Sorghum drummondii, Sorghum ecarinatum, Sorghum exstans, Sorghum grande, Sorghum halepense, Sorghum interjectum, Sorghum intrans, Sorghum laxiflorum, Sorghum leiocladum, Sorghum macrospermum, Sorghum matarankense, Sorghum miliaceum, Sorghum nigrum, Sorghum nitidum, Sorghum plumosum, Sorghum propinquum, Sorghum purpureosericeum, Sorghum stipoideum, Sorghum sudanensese, Sorghum timorense, Sorghum trichocladum, Sorghum versicolor, Sorghum virgatum, Sorghum vulgare, o híbridos tales como Sorghum χ almum, Sorghum x zahína o Sorghum χ drummondii.
Las especies adecuadas también incluyen Helianthus annuus (girasol), Carthamus tinctorius (alazor), Jatropha curcas (jatrofa), Ricinus communis (ricino), Elaeis guineensis (palma), Linum usitatissimum (lino), y Brassica juncea.
Las especies adecuadas también incluyen Beta vulgaris (remolacha), y Manihot esculenta (mandioca).
Las especies adecuadas también incluyen Lycopersicon esculentum (tomate), Lactuca sativa (lechuga), Musa paradisiaca (banana), Solanum tuberosum (patata), Brassica oleracea (brécol, coliflor, coles de bruselas), Camellia sinensis (té), Fragaria ananassa (fresa), Theobroma cacao (cacao), Coffea arabica (café), Vitis vinifera (uva), Ananas comosus (piña), Capsicum annum (pimiento picante y dulce), Allium cepa (cebolla), Cucumis melo (melón), Cucumis sativus (pepino), Cucurbita maxima (calabacín), Cucurbita moschata (calabacín), Spinacea oleracea (espinaca), Citrullus lanatus (sandía), Abelmoschus esculentus (ocra), y Solanum melongena (berenjena).
Las especies adecuadas también incluyen Papaver somniferum (adormidera), Papaver orientale, Taxus baccata, Taxus brevifolia, Artemisia annua, Cannabis sativa, Camptotheca acuminate, Catharanthus roseus, Vinca rosea, Cinchona officinalis, Colchicum autumnale, Veratrum californica, Digitalis lanata, Digitalis purpurea, Dioscorea spp., Andrographis paniculata, Atropa belladonna, Datura stomonium, Berberis spp., Cephalotaxus spp., Ephedra sinica, Ephedra spp., Erythroxylum coca, Galanthus wornorii, Scopolia spp., Lycopodium serratum (= Huperzia serrata),
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condiciones. Por ejemplo, una planta transgénica a que expresa un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía puede tener un área de hoja que es 5% hasta aproximadamente 100% mayor (por ejemplo, aproximadamente 5% hasta aproximadamente 7%; aproximadamente 5% hasta aproximadamente 20%; aproximadamente 8% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 20%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 25%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 90%; aproximadamente 15% hasta aproximadamente 25%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 45%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 70%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 40%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 70%; aproximadamente 40% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 45% hasta aproximadamente 60%; aproximadamente 50% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 55% hasta aproximadamente 75%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 95%; aproximadamente 75% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 80% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 90% hasta aproximadamente 95%; o aproximadamente 95% hasta aproximadamente 100% mayor) que una planta control correspondiente que no expresa el polipéptido cuando se crece en condiciones de choque térmico o condiciones de sequía, o después de dichas condiciones. En otro ejemplo, una planta transgénica a que expresa un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía puede tener una longitud de hoja que es de aproximadamente 5% hasta aproximadamente 100% mayor (por ejemplo, aproximadamente 5% hasta aproximadamente 12%; aproximadamente 5% hasta aproximadamente 40%; aproximadamente 5% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 7% hasta aproximadamente 20%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 15%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 90%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 25%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 45%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 75%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 60%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 70%; aproximadamente 40% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 45% hasta aproximadamente 60%; aproximadamente 50% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 55% hasta aproximadamente 75%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 95%; aproximadamente 75% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 80% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 90% hasta aproximadamente 95%; o aproximadamente 95% hasta aproximadamente 100% mayor) que una planta control correspondiente que no expresa el polipéptido cuando se crece en condiciones de choque térmico o condiciones de sequía, o después de dichas condiciones.
En otros casos, cuando un polipéptido descrito en la presente memoria se expresa en una planta transgénica, la planta transgénica puede presentar un número de semillas (número de semillas por planta) de aproximadamente 10% hasta aproximadamente 95% mayor (por ejemplo, de aproximadamente 10% hasta aproximadamente 20%; de aproximadamente 10% hasta aproximadamente 50%; de aproximadamente 10% hasta aproximadamente 70%; de aproximadamente 20% hasta aproximadamente 60%; de aproximadamente 20% hasta aproximadamente 75%; de aproximadamente 25% hasta aproximadamente 85%; de aproximadamente 30% hasta aproximadamente 70%; de aproximadamente 35% hasta aproximadamente 90%; de aproximadamente 40% hasta aproximadamente 60%; de aproximadamente 40% hasta aproximadamente 85%; de aproximadamente 50% hasta aproximadamente 80%; de aproximadamente 50% hasta aproximadamente 90%; o de aproximadamente 70% hasta aproximadamente 90% mayor) que una planta control que no expresa el polipéptido cuando se crece en condiciones de choque térmico o condiciones de sequía. En determinados casos, cuando un polipéptido descrito en la presente memoria se expresa en una planta transgénica, la planta transgénica puede presentar un incremento en el peso de las semillas por planta de aproximadamente 5% hasta aproximadamente 100% mayor (por ejemplo, aproximadamente 5% hasta aproximadamente 12%; aproximadamente 5% hasta aproximadamente 40%; aproximadamente 5% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 7% hasta aproximadamente 20%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 15%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 10% hasta aproximadamente 90%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 25%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 45%; aproximadamente 20% hasta aproximadamente 75%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 60%; aproximadamente 25% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 30% hasta aproximadamente 70%; aproximadamente 40% hasta aproximadamente 50%; aproximadamente 45% hasta aproximadamente 60%; aproximadamente 50% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 55% hasta aproximadamente 75%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 80%; aproximadamente 60% hasta aproximadamente 95%; aproximadamente 75% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 80% hasta aproximadamente 100%; aproximadamente 90% hasta aproximadamente 95%; o aproximadamente 95% hasta aproximadamente 100% mayor) que el peso de las semillas en una planta que no expresa el polipéptido cuando se crece en condiciones de choque térmico o condiciones de sequía.
Las plantas transgénicas que expresan un polipéptido de tolerancia al calor y/o sequía también pueden presentar una velocidad de transpiración menor comparada con las plantas control con el mismo fondo genético. La velocidad de transpiración es otro parámetro fisiológico que es indicativo de lo bien que una planta puede tolerar condiciones de sequía. Por ejemplo, se espera que las plantas con una baja velocidad de transpiración pierdan agua más lentamente que las plantas con velocidades de transpiración mayores y, por lo tanto, se esperaría que soportaran mejor las condiciones de sequía (es decir, tienen una mejor tolerancia a la sequía). Cuando un polipéptido descrito
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durante 3 días, Las placas se transfirieron a una cámara de crecimiento Conviron® ajustada a 22ºC, ciclo luz:oscuridad 16:8 horas. y 70% de humedad con lámparas fluorescentes emitiendo una intensidad de luz de aproximadamente 60 μE.
Después de crecer las plantas en la cámara de crecimiento Conviron® durante 11 días, las placas se escanearon
5 usando un generador de imágenes CF (Technologica) para registrar la eficiencia de operación de PSII (∆ΦPSII) y el área de la plántula. Las placas se transfirieron a una cámara de calor vertical ("reach-in") Conviron® ajustada a 42ºC durante 5 horas. Después del tratamiento con calor, las plantas se escanearon inmediatamente usando el generador de imágenes CF, y se transfirieron de nuevo a la cámara de crecimiento Conviron®. Después de 2 y 4 días de recuperación en la cámara de crecimiento, las placas se escanearon de nuevo usando el generador de imágenes
10 CF. El estado transgénico de cada planta se evaluó por resistencia a Finale™.
Se calcularon las diferencias en la eficiencia de operación de PSII y el tamaño de las plántulas antes del choque térmico, inmediatamente después del choque térmico, y después de la recuperación después del choque térmico. Las diferencias en la eficiencia de operación de PSII y el tamaño de las plántulas de las plantas transgénicas se compararon con los controles combinados que comprendían segregantes no transgénicos y controles Ws de tipo
15 salvaje crecidos en la misma placa. La significancia de la tolerancia al calor se evaluó usando un ensayo de la t de Student de una cola, asumiendo varianza desigual, a p≤0,5.
Ejemplo 4 -Resultados para eventos ME00029
Se analizaron semillas T2 y T3 de dos eventos de ME00029 que contenían SEQ ID NO: 441 bajo el control de un promotor p32449 para área de roseta, altura terminal de la planta, y rendimiento de semillas como se describe en el
20 Ejemplo 2. Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.
Tabla 1: Respuesta a la sequía crónica de plántulas de ME00029
Población Control
Plantas
Medición Interna Combinada
Plántulas T2 del evento -01 de ME00029
Área de Roseta N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -04 de ME00029
Área de Roseta N.A. Sig.
Plántulas T2 del evento -01 de ME00029
Hoja más Larga N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -01 de ME00029
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -01 de ME00029
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -04 de ME00029
Altura Terminal de la Planta N.A. Sig.
Plántulas T3 del evento -04 de ME00029
Altura Terminal de la Planta N.A. Sig.
Plántulas T3 del evento -01 de ME00029
Rendimiento de Semillas N.S. Sig.
N.A. -resultados no disponibles debido a un tamaño insuficiente de la muestra (n<5); N.S. -no significativo; Sig. significativo (p≤0,5).
Ejemplo 5 -Resultados para eventos ME00045
25 Se analizaron semillas T2 y T3 de tres eventos de ME00045 que contenían SEQ ID NO: 488 bajo el control de un promotor p32449 para área de roseta, altura terminal de la planta, mayor longitud de hoja, y rendimiento de semillas como se describe en el Ejemplo 2. Los resultados se proporcionan en la Tabla 2.
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Tabla 2: Respuesta a la sequía crónica de plántulas de ME00045
Población Control
Plantas
Medición Interna Combinada Ws
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Área de Roseta N.S. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Área de Roseta N.S. N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Área de Roseta N.A. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Área de Roseta N.S. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Área de Roseta N.A. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Área de Roseta N.S. N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Hoja Más Larga Sig. Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Hoja Más Larga N.S. N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Hoja Más Larga N.A. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Hoja Más Larga N.S. N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Hoja Más Larga N.A. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Hoja Más Larga N.S. N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.S. N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.S. N.S. N.S.*
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.A. Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -07 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.S. Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.A. N.S.* N.S.
Plántulas T2 del evento -08 de ME00045
Altura Terminal de la Planta N.S. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Rendimiento de Semillas Sig. N.S.* Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME00045
Rendimiento de Semillas N.S. N.S. N.S.
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Plántulas T2 del evento -02 de ME02549
Área de Roseta N.S.* N.S.* Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME02549
Área de Roseta N.S. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02549
Área de Roseta N.A. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -05 de ME02549
Área de Roseta N.S. N.S.* Sig.
Plántulas T3 del evento -01 de ME02549
Hoja Más Larga N.S. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME02549
Hoja Más Larga N.S. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -05 de ME02549
Hoja Más Larga N.S. N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -01 de ME02549
Altura Terminal de la Planta N.A. N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -01 de ME02549
Altura Terminal de la Planta N.S. N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -02 de ME02549
Altura Terminal de la Planta N.S. Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02549
Altura Terminal de la Planta N.A. N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -05 de ME02549
Altura Terminal de la Planta Sig. N.S. Sig.
N.A. -resultados no disponibles debido a un tamaño insuficiente de la muestra (n<5); N.S. -no significativo; N.S.* no significativo (0,5<p<0,10); Sig. -significativo (p<0,5).
Ejemplo 8 -Resultados para eventos ME02865
Se analizaron semillas T2 y T3 de dos eventos de ME02865 que contenían SEQ ID NO: 704 bajo el control de un promotor 35S para área de roseta, altura terminal de la planta, mayor longitud de hoja, y peso de las semillas como se describe en el Ejemplo 2. Los resultados se proporcionan en la Tabla 5.
Tabla 5: Respuesta a la sequía crónica de plántulas de ME02865
Población Control
Plantas
Medición Interna Combinada
Plántulas T2 del evento -02 de ME02865
Área de Roseta N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02-01 de ME02865
Área de Roseta - N.S.
Plántulas T3 del evento -02-02 de ME02865
Área de Roseta N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02865
Área de Roseta - Sig.
Plántulas T3 del evento -05-01 de ME02865
Área de Roseta - Sig.
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Plántulas T3 del evento -05-02 de ME02865
Área de Roseta N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -02 de ME02865
Hoja Más Larga N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02-01 de ME02865
Hoja Más Larga - N.S.
Plántulas T3-del evento -02-02 de ME02865
Hoja Más Larga N.S.* Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02865
Hoja Más Larga - Sig.
Plántulas T3 del evento -05-01 de ME02865
Hoja Más Larga - N.S.
Plántulas T3 del evento -05-02 de ME02865
Hoja Más Larga N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -02 de ME02865
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -02-01 de ME02865
Altura Terminal de la Planta - N.S.*
Plántulas T3 del evento -02-02 de ME02865
Altura Terminal de la Planta N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02865
Altura Terminal de la Planta - Sig.
Plántulas T3 del evento -05-01 de ME02865
Altura Terminal de la Planta - N.S.*
Plántulas T3 del evento -05-02 de ME02865
Altura Terminal de la Planta N.S.* Sig.
Plántulas T2 del evento -02 de ME02865
Peso de las Semillas N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -02-01 de ME02865
Peso de las Semillas - N.S.
Plántulas T3 del evento -02-02 de ME02865
Peso de las Semillas Sig. N.S.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02865
Peso de las Semillas - Sig.
Plántulas T3 del evento -05-01 de ME02865
Peso de las Semillas - N.S.
Plántulas T3 del evento -05-02 de ME02865
Peso de las Semillas N.S. N.S.*
N.A. -resultados no disponibles debido a un tamaño insuficiente de la muestra (n<5); N.S. -no significativo; N.S.* no significativo (0,5<p<0,10); Sig. -significativo (p<0,5).
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME02865 fueron similares a las de las plantas control correspondientes
5 crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las plantas T2 de los eventos -02 y -05 de ME02865 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
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Plántulas T3 del evento -01-01 de ME20095
Hoja Más Larga Sig.. Sig.
Plántulas T3 del evento -01-02 de ME20095
Hoja Más Larga N.S. N.S.
Plántulas T2 del evento -04 de ME20095
Hoja Más Larga Sig.. Sig.
Plántulas T3 del evento -04-01 de ME20095
Hoja Más Larga Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -04-02 de ME20095
Hoja Más Larga N.S.* Sig.
Plántulas T2 del evento -01 de ME20095
Altura Terminal de la Planta N.S. Sig.
Plántulas T3 del evento -01-01 de ME20095
Altura Terminal de la Planta N.S.* Sig.
Plántulas T3 del evento -01-02 de ME20095
Altura Terminal de la Planta N.S. N.S.*
Plántulas T2 del evento -04 de ME20095
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -04-01 de ME20095
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -04-02 de ME20095
Altura Terminal de la Planta N.S. Sig.
Plántulas T2 del evento -01 de ME20095
Peso de las Semillas Sig. Sig.
Plántulas T3 del evento -01-01 de ME20095
Peso de las Semillas Sig. N.S.*
Plántulas T3 del evento -01-02 de ME20095
Peso de las Semillas Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -04 de ME20095
Peso de las Semillas N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -04-01 de ME20095
Peso de las Semillas N.S. N.S.
Plántulas T3 del evento -04-02 de ME20095
Peso de las Semillas N.S. N.S.

Ejemplo 13 -Resultados para eventos ME02401
N.S. -no significativo; N.S.* -no significativo (0,5<p<0,10); Sig. -significativo (p<0,5).
Las plantas T1 ME20095 mostraron una floración retardada y crecimiento vegetativo prolongado comparado con las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o
5 estadísticamente significativas entre las plantas T2 de los eventos -02 y -04 de ME20095 y las plantas control en germinación, inicio de la floración, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecieron en condiciones estándar. El área de roseta en las plantas T2 de los eventos -02 y -04 fue significativamente mayor y el rendimiento de semillas se incrementó comparado con las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar.
10 Se analizaron semillas T2 y T3 de dos eventos de ME02401 que contenían SEQ ID NO: 1188 bajo el control de un promotor 35S para área de roseta, altura terminal de la planta, y mayor longitud de hoja como se describe en el Ejemplo 2. Los resultados se proporcionan en la Tabla 10.
E09710460
15-04-2015

Tabla 10: Respuesta a la sequía crónica de plántulas de ME02401
Población Control
Plantas
Medición Interna Combinada
Plántulas T2 del evento -05 de ME02401
Área de Roseta N.A. N.S.*
Plántulas T3 del evento -01 de ME02401
Hoja Más Larga N.S.* Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02401
Hoja Más Larga N.A. Sig.
Plántulas T3 del evento -01 de ME02401
Altura Terminal de la Planta Sig. Sig.
Plántulas T2 del evento -05 de ME02401
Altura Terminal de la Planta N.A. Sig.
N.A. -resultados no disponibles debido a un tamaño insuficiente de la muestra (n<5); N.S. -no significativo; N.S.* no significativo (0,5<p<0,10); Sig. -significativo (p<0,5).
Ejemplo 14 -Resultados para eventos ME02932
Se analizaron semillas T2 y T3 de dos eventos de ME02932 que contenían SEQ ID NO: 59 bajo el control de un promotor 35S para área de plántula después de un ensayo de Choque Térmico I como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en la Tabla 11.

Tabla 11: Área de la plántula de ME02932 después de un ensayo de Choque Térmico I
Plantas
Área promedio de la plántula SE N valor p
Plántulas T2 del evento -01 de ME02932
0,07 0,008 33 8,77E-04
Segregantes no transgénicos T2 del evento -01 de ME02932
0,04 0,006 15
Plántulas T3 del evento -01 de ME02932
0,10 0,003 40 2,21E-04
Segregantes no transgénicos T3 del evento -01 de ME02932
0,07 0,007 9
Plántulas T2 del evento -03 de ME02932
0,08 0,012 21 1,29E-02
Segregantes no transgénicos T2 del evento -03 de ME02932
0,04 0,009 23
Plántulas T3 del evento -03 de ME02932
0,09 0,004 36 1,54E-03
Segregantes no transgénicos T3 del evento -03 de ME02932
0,07 0,005 13
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME02932 fueron similares a las de las plantas control correspondientes
10 crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las plantas T2 de los eventos -01 y -03 de ME02932 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
Ejemplo 15 -Resultados para eventos ME18240
Se analizaron semillas T2 y T3 de tres eventos de ME18240 que contenían SEQ ID NO: 363 bajo el control de un
15 promotor 35S para área de plántula después de un ensayo de Choque Térmico I y cambio en actividad fotosintética durante un ensayo de Choque Térmico II como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en las Tablas 12 y 13.
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15-04-2015

Tabla 12: Área de la plántula ME18240 después de un ensayo de Choque Térmico I
Plantas
Área promedio de la plántula SE N valor p
Plántulas T2 del evento -02 de ME18240
0,08 0,007 27 4,22E-08
Segregantes no transgénicos T2 del evento -02 de ME18240
0,03 0,004 16
Plántulas T3 del evento -02 de ME18240
0,14 0,007 31 5,83E-11
Segregantes no transgénicos T3 del evento -02 de ME18240
0,06 0,007 14
Plántulas T2 del evento -03 de ME18240
0,13 0,007 35 3,31E-05
Segregantes no transgénicos T2 del evento -03 de ME18240
0,08 0,01 14
Plántulas T3 del evento -03 de ME18240
0,14 0,008 28 5,13E-06
Segregantes no transgénicos T3 del evento -03 de ME18240
0,09 0,008 19
Plántulas T2 del evento -04 de ME18240
0,13 0,008 33 2,39E-07
Segregantes no transgénicos T2 del evento -04 de ME18240
0,06 0,009 16
Plántulas T3 del evento -04 de ME18240
0,13 0,008 29 4,68E-05
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME18240
0,08 0,008 18
Tabla 13: ∆Fv/Fm de ME18240 en respuesta al ensayo de Choque térmico II
Plantas
∆Fv/Fm promedio SE N valor p
Plántulas T2 del evento -02 de ME18240
0,24 0,013 47 3,64E-05
Segregantes no transgénicos T2 del evento -02 de ME18240
0,32 0,016 25
Plántulas T3 del evento -02 de ME18240
0,36 0,012 43 1,92E-04
Segregantes no transgénicos T3 del evento -02 de ME18240
0,43 0,016 22
Plántulas T2 del evento -03 de ME18240
0,24 0,010 41 9,27E-11
Segregantes no transgénicos T2 del evento -03 de ME18240
0,37 0,011 28
E09710460
15-04-2015
Plántulas T3 del evento -03 de ME18240
0,33 0,011 24 1,91E-02
Segregantes no transgénicos T3 del evento -03 de ME18240
0,39 0,022 10
Plántulas T2 del evento -04 de ME18240
0,21 0,009 43 5,55E-17
Segregantes no transgénicos T2 del evento -04 de ME18240
0,40 0,007 29
Plántulas T3 del evento -04 de ME18240
0,28 0,011 46 9,38E-11
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME18240
0,41 0,008 21
En la que ∆Fv/Fm= Fv/Fm antes del choque térmico -Fv/Fm después del choque térmico.
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME18240 fueron similares a las de las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las 5 plantas T2 de los eventos -02, -03, y -04 de ME18240 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
Ejemplo 16 -Resultados para eventos ME20867
Se analizaron semillas T2 y T3 de cuatro eventos de ME20867 que contenían SEQ ID NO: 310 bajo el control de un promotor 35S para área de plántula después de un ensayo de Choque Térmico I y cambio en actividad fotosintética 10 durante un ensayo de Choque Térmico II como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en las Tablas 14 y 15.

Tabla 14: Área de la plántula de ME20867 en respuesta al ensayo de Choque Térmico I
Plantas
Área promedio de la plántula SE N valor p
Plántulas T2 del evento -01 de ME20867
0,14 0,008 28 4,86E-07
Segregantes no transgénicos T2 del evento -01 de ME20867
0,07 0,011 12
Plántulas T3 del evento -01 de ME20867
0,07 0,007 31 9,84E-10
Segregantes no transgénicos T3 del evento -01 de ME20867
0,01 0,010 16
Plántulas T2 del evento -02 de ME20867
0,13 0,006 37 1,03E-02
Segregantes no transgénicos T2 del evento -02 de ME20867
0,08 0,024 3
Plántulas T3 del evento -02 de ME20867
0,09 0,006 32 6,01E-07
Segregantes no transgénicos T3 del evento -02 de ME20867
0,02 0,011 9
Plántulas T2 del evento -04 de ME20867
0,12 0,006 31 1,47E-02
E09710460
15-04-2015 E09710460
Segregantes no transgénicos T2 del evento -04 de ME20867
0,10 0,010 9
Plántulas T3 del evento -04 de ME20867
0,03 0,005 20 2,14E-04
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME20867
0,01 0,007 12
Plántulas T2 del evento -05 de ME20867
0,11 0,009 30 1,51E-02
Segregantes no transgénicos T2 del evento -05 de ME20867
0,08 0,012 10
Plántulas T3 del evento -05 de ME20867
0,03 0,004 23 1,98E-04
Segregantes no transgénicos T3 del evento -05 de ME20867
0,01 0,005 20

Tabla 15: ∆Fv/Fm -D2 de ME20867 en respuesta al ensayo de Choque térmico II
Plantas
∆Fv/Fm-D2 promedio SE N valor p
Plántulas T2 del evento -01 de ME20867
0,03 0,012 33 2,17E-08
Segregantes no transgénicos T2 del evento -01 de ME20867
-0,07 0,008 12
Plántulas T3 del evento -01 de ME20867
0,21 0,010 44 3,71E-12
Segregantes no transgénicos T3 del evento -01 de ME20867
0,06 0,015 22
Plántulas T2 del evento -02 de ME20867
0,06 0,011 25 9,39E-11
Segregantes no transgénicos T2 del evento -02 de ME20867
-0,10 0,006 12
Plántulas T3 del evento -02 de ME20867
0,25 0,012 50 4,79E-08
Segregantes no transgénicos T3 del evento -02 de ME20867
0,06 0,029 16
Plántulas T2 del evento -04 de ME20867
0,17 0,010 43 8,71E-11
Segregantes no transgénicos T2 del evento -04 de ME20867
0,03 0,014 22
Plántulas T3 del evento -04 de ME20867
0,16 0,011 24 1,39E-03
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME20867
0,06 0,027 9
15-04-2015
Plántulas T2 del evento -05 de ME20867
0,21 0,016 28 1,35E-09
Segregantes no transgénicos T2 del evento -05 de ME20867
0,07 0,012 31
Plántulas T3 del evento -05 de ME20867
0,24 0,015 19 3,72E-03
Segregantes no transgénicos T3 del evento -05 de ME20867
0,18 0,015 14
∆Fv/Fm-D2= Fv/Fm inmediatamente después del choque térmico -Fv/Fm después de 2 días de recuperación.
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME20867 fueron similares a las de las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las 5 plantas T2 de los eventos -01, -02, -04 y -05 de ME20867 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
Ejemplo 17 -Resultados para eventos ME03268
Se analizaron semillas T2 y T3 de un evento de ME03268, y semillas T3 y T4 de un evento de ME03268, conteniendo cada una SEQ ID NO: 159 bajo el control de un promotor 35S para área de plántula después de un ensayo de 10 Choque Térmico I como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en la Tabla 16.

Tabla 16: Área de la plántula de ME03268 en respuesta al ensayo de Choque Térmico I
Plantas
Área promedio de la plántula SE N valor p
Plántulas T2 del evento -02 de ME03268
0,165 0,015 26 1,09E-03
Segregantes no transgénicos T2 del evento -02 de ME03268
0,070 0,024 3
Plántulas T3 del evento -02 de ME03268
0,137 0,009 40 1,97E-07
Segregantes no transgénicos T3 del evento -02 de ME03268
0,048 0,012 9
Plántulas T3 del evento -03 de ME03268
0,062 0,007 26 3,65E-02
Segregantes no transgénicos T3 del evento -03 de ME03268
0,037 0,011 4
Plántulas T4 del evento -03 de ME03268
0,094 0,008 30 3,96E-03
Segregantes no transgénicos T4 del evento -03 de ME03268
0,054 0,012 10
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME03268 fueron similares a las de las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las 15 plantas T2 de los eventos -02 y -03 de ME03268 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
Ejemplo 18 -Resultados para eventos ME06551
Se analizaron semillas T3 y T4 de dos eventos de ME06551 que contenían SEQ ID NO: 1 bajo el control de un promotor 35S para el cambio en la actividad fotosintética durante un ensayo de Choque Térmico II como se describe 20 en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en la Tabla 17.
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15-04-2015

Tabla 17: ∆Fv/Fm de ME06551 en respuesta al ensayo de Choque térmico II
Plantas
∆Fv/Fm promedio SE N valor p
Plántulas T3 del evento -04 de ME06551
0,42 0,016 11 1,32E-02
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME06551
0,47 0,012 15
Plántulas T4 del evento -04 de ME06551
0,39 0,006 49 4,73E-03
Segregantes no transgénicos T4 del evento -04 de ME06551
0,43 0,014 11
Plántulas T3 del evento -05 de ME06551
0,39 0,013 11 4,21E-04
Segregantes no transgénicos T3 del evento -05 de ME06551
0,46 0,010 13
Plántulas T4 del evento -05 de ME06551
0,39 0,007 50 4,79E-02
Segregantes no transgénicos T4 del evento -05 de ME06551
0,41 0,010 17
En la que ∆Fv/Fm= Fv/Fm antes del choque térmico -Fv/Fm después del choque térmico.
Las apariencias físicas de las plantas T1 ME06551 fueron similares a las de las plantas control correspondientes crecidas en condiciones estándar. No hubo diferencias observables o estadísticamente significativas entre las 5 plantas T2 de los eventos -04 y -05 de ME06551 y las plantas control en la germinación, inicio de la floración, área de roseta, fertilidad, y morfología/arquitectura general cuando se crecen en condiciones estándar.
Ejemplo 19 -Resultados para eventos ME06919
Se analizaron semillas T2 y T3 de dos eventos de ME06919 que contenían SEQ ID NO: 56 bajo el control de un promotor 35S para el cambio en la actividad fotosintética durante un ensayo de Choque Térmico II como se describe 10 en el Ejemplo 3. Los resultados se proporcionan en la Tabla 18.

Tabla 18: ∆Fv/Fm de ME06919 en respuesta al ensayo de Choque térmico II
Plantas
∆Fv/Fm promedio SE N valor p
Plántulas T2 del evento -03 de ME06919
0,433 0,007 65 2,55E-09
Segregantes no transgénicos T2 del evento -03 de ME06919
0,497 0,008 37
Plántulas T3 del evento -03 de ME06919
0,281 0,013 46 1,87E-03
Segregantes no transgénicos T3 del evento -03 de ME06919
0,341 0,015 18
Plántulas T2 del evento -04 de ME06919
0,490 0,007 21 3,06E-04
Segregantes no transgénicos T2 del evento -04 de ME06919
0,531 0,009 26
Plántulas T3 del evento -04 de ME06919
0,296 0,006 44 6,15E-08
Segregantes no transgénicos T3 del evento -04 de ME06919
0,412 0,018 18
En la que ∆Fv/Fm= Fv/Fm antes del choque térmico -Fv/Fm después del choque térmico. 53
imagen29
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Claims (1)

  1. imagen1
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