ES2541689T3 - Métodos para tratar trastornos resistentes a metotrexato con 10-propargil-2-desazaaminopterina - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una cantidad eficaz de 10-propargil-10-desazaminopterina o sus sales farmacéuticamente aceptables para su uso en el tratamiento de un trastorno resistente a metotrexato en un individuo que tiene un trastorno resistente a metotrexato, en el que el trastorno resistente a metotrexato es un trastorno con resistencia adquirida a metotrexato.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

5

15

25

35

45

55

65

E11790419

06-07-2015

dosificaciones pueden ajustarse gradualmente para lograr una respuesta óptima. A dosis mayores, tales como por encima de 20 mg/m2/semana, o de 0,65 a 1,0 mg/kg/semana, puede lograrse una mejor absorción mediante dosificaciones intramusculares o subcutáneas. La dosificación adecuada también puede incluir 7,5 mg por semana,

o dosis orales divididas de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 10 mg; en una realización, la dosificación puede ser una dosis oral dividida de 2,5 mg a intervalos de 12 horas durante tres dosis, administrado en forma de un ciclo una vez a la semana. La dosificación puede continuarse durante tanto tiempo como sea eficaz, e incluye terapia durante hasta dos años y más prolongadas.

La 10-propargil-10-desazaminopterina se usa de manera adecuada en combinación con suplementación de ácido fólico y vitamina B 12 para reducir los efectos secundarios del tratamiento. Por ejemplo, puede tratarse a los pacientes con ácido fólico (1 mg/m2 una vez al día comenzando una semana antes del tratamiento con la 10propargil-10-desazaminopterina, o como alternativa 1 mg perioral (p.o.) a diario sin basarse en el área superficial corporal (BSA)); y B12 (1 mg/m2 mensualmente, o como alternativa administrándose 1 mg intramuscularmente (I.M.) cada 8-10 semanas (no basándose en la BSA), o como alternativa 1 mg p.o. a diario (no basándose en la BSA)).

En una realización, la 10-propargil-10-desazaminopterina de acuerdo con la invención se formula para administración oral. En otra realización, la 10-propargil-10-desazaminopterina de acuerdo con la invención se formula para administración intravenosa.

La 10-propargil-10-desazaminopterina puede administrarse en una amplia variedad de formas de dosificación diferentes. Por ejemplo, la 10-propargil-10-desazaminopterina puede administrarse preferentemente por vía oral o parenteral.

La 10-propargil-10-desazaminopterina puede administrarse con varios vehículos inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, pastillas para chupar, trociscos, caramelos duros, polvos, pulverizadores, cremas, salvas, supositorios, gelatinas, geles, pastas, lociones, pomadas, elixires, jarabes, y similares. La administración de dichas formas de dosificación puede llevarse a cabo en dosis individuales o múltiples. Los vehículos incluyen diluyentes sólidos o cargas, medio acuoso estéril y varios disolventes orgánicos no tóxicos, y otros. Las composiciones farmacéuticas orales pueden endulzarse y/o aromatizarse de manera adecuada. Para la administración oral de la 10-propargil-10-desazaminopterina, se combinan comprimidos que contienen uno o ambos de los agentes activos con cualquiera de diversos excipientes, tales como, por ejemplo, celulosa microcristalina, citrato de sodio, carbonato cálcico, fosfato dicálciclo y glicina, junto con varios disgregantes, tales como almidón (y preferentemente almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y determinados silicatos complejos, junto con aglutinantes de granulación, tales como polivinil pirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábiga. Adicionalmente, a menudo son muy útiles agentes lubricantes como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio y talco para preparar comprimidos. También pueden emplearse composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina; los materiales preferidos a este respecto también incluyen lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de elevado peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, la 10-propargil-10-desazaminopterina puede combinarse con varios agentes edulcorantes o aromatizantes, materiales colorantes o tintes, y, si se desea, también agentes emulsionantes y/o suspensores, junto con diluyentes, tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y varias combinaciones similares de los mismos. Puede prepararse un comprimido que contiene la composición de la presente invención mediante compresión o moldeado, de manera opcional con uno o más ingredientes o adyuvantes accesorios. Los comprimidos pueden prepararse comprimiendo, en una máquina adecuada, el principio activo en una forma de flujo libre, tal como polvo o gránulos, mezclado opcionalmente con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeables pueden prepararse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo mojado con un diluyente líquido inerte. Cada comprimido contiene preferentemente de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 10 g del principio activo y cada sello o cápsula contiene preferentemente de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 10 g del principio activo; los comprimidos también pueden contener de manera adecuada aproximadamente 2,5 mg de principio activo por cápsula o aproximadamente 7,5 mg por cápsula.

Para la administración parenteral de la 10-propargil-10-desazaminopterina, pueden emplearse soluciones, así como soluciones acuosas estériles que comprenden al principio activo o una sal correspondiente soluble en agua del mismo. Dichas soluciones acuosas estériles están preferentemente tamponadas, aunque también se pueden hacer isotónicas, por ejemplo, con suficiente suero salino o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para inyección por vía intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Las soluciones oleosas son adecuadas para inyección por vía intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se logra fácilmente mediante técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas para los expertos en la materia.

Para fines veterinarios, los principios activos pueden administrarse por separado o juntos a animales usando cualquiera de las formas y mediante cualquiera de las rutas descritas anteriormente. En una realización preferida, la 10-propargil-10-desazaminopterina se administra en forma de cápsula, bolo, comprimido, dosificación líquida forzada, mediante inyección o como un implante. Como alternativa, la 10-propargil-10-desazaminopterina puede administrarse con la comida del animal, y con este fin puede prepararse un aditivo alimentario concentrado o

8 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

E11790419

06-07-2015

premezcla para la comida normal del animal. Dichas formulaciones se preparan de manera convencional de acuerdo con la práctica veterinaria convencional.

La presente invención también incluye un método para tratar a un individuo que necesite tratamiento para una neoplasia resistente al metotrexato, comprendiendo el método administrar al individuo una cantidad eficaz de 10propargil-10-desazaminopterina, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables. Cuando un compuesto de la presente invención es ácido, su sal correspondiente puede prepararse de manera conveniente a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de dichas bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (cúpricas y cuprosas), férricas, ferrosas, de litio, magnesio, manganeso (mangánicas y manganosas), de potasio, sodio, zinc y similares. Se prefieren particularmente las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. En una realización, la sal es la sal de clorhidrato. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables también incluyen sales de aminas primarias, secundarias, y terciarias, así como aminas cíclicas y aminas sustituidas, tales como aminas sustituidas de origen natural y sintetizadas. Otras bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables a partir de las que pueden formarse sales incluyen resinas de intercambio iónico, tales como, por ejemplo, arginina, betaína, cafeína, colina, N',N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, Netilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares.

Además de las formas de dosificación comunes expuestas anteriormente, la 10-propargil-10-desazaminopterina (incluyendo sales, ésteres, solvatos, y polimorfos farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) también pueden administrarse por medios de liberación controlada y/o dispositivos de administración.

A menos que se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, dimensiones, condiciones de reacción y similares usados en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones deben entenderse como modificados en todos los casos por el término "aproximadamente".

En esta solicitud y en las reivindicaciones, el uso del singular incluye el uso del plural, a menos que se indique lo contrario. Además, el uso de “o” significa “y/o” a menos que se indique lo contrario. Además, el uso de la expresión “incluyendo”, así como otras formas, tales como “incluye” e “incluyó”, no es limitante. También, los términos tales como "elemento" o "componente" abarcan tanto elementos y componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una unidad, a menos que se indique específicamente lo contrario.

La invención se basa en parte en datos que muestran que las células con resistencia adquirida al metotrexato seguirán teniendo sensibilidad al pralatrexato, mientras que las células que hayan adquirido resistencia al pralatrexato también tendrán resistencia al metotrexato. En referencia a los factores genéticos predictivos de sensibilidad al pralatrexato, se desarrollaron dos líneas celulares con resistencia adquirida al fármaco a partir de las líneas celulares de cáncer DU145 (próstata) y HEP2 (cabeza y cuello). Al ser más de 200 veces más resistentes al pralatrexato que las células parentales, DU-PDX y HEP-PDX mostraron resistencia cruzada parcial al metotrexato. La resistencia adquirida al pralatrexato se asoció con la expresión disminuida de RFC-1 y con la expresión aumentada de MDR1. Fotoohi et al (2009) describieron líneas de leucemia resistentes a antifolato con niveles de ARNm de RFC-1 regulados negativamente en más del doble en células resistentes al metotrexato, haciendo énfasis en el importante papel del transporte de entrada en la resistencia al antifolato. Anteriormente se obtuvieron resultados similares por Jansen (1998), Rothen (2004), e Ifergan (2003) usando otros modelos celulares resistentes al metotrexato. La expresión aumentada de MDR1 no parece tener un papel en la resistencia adquirida observada al pralatrexato, ya que la inhibición de MDR1 no restauró la sensibilidad al pralatrexato. Se demostró que la actividad de FPGS disminuida está asociada con la resistencia adquirida al metotrexato en las células CCRF-CEM de leucemia humana (Mauritz, 2002). En un estudio, se observó una ligera disminución en la expresión de FPGS en células resistentes al pralatrexato, lo que sugiere un papel de la poliglutamación en la resistencia al pralatrexato. Los estudios llevados a cabo hace tres décadas descubrieron que otro mecanismo frecuente de resistencia adquirida a metotrexato es la amplificación del gen de DHFR y la consiguiente sobreexpresión de la enzima (revisado por Assaraf 2007; Chen et al., 1995). En este estudio, la línea celular HEP-MTX, con resistencia adquirida al metotrexato, mostró un aumento dramático en la expresión de ARNm y proteína de DHFR en comparación con su homólogo parental, No se observó expresión aumentada de DHFR en las líneas celulares resistentes a pralatrexato. Estos descubrimientos sugieren diferentes mecanismos moleculares de resistencia al metotrexato y a pralatrexato en estas líneas celulares.

Por lo tanto, la presente invención demuestra que sorprendentemente, las líneas celulares que se hacen resistentes al metotrexato no se hicieron resistentes al pralatrexato y/o mantuvieron mucha más de la sensibilidad original al pralatrexato.

9 5

15

25

35

45

55

65

E11790419

06-07-2015

Los objetos adicionales, ventajas, y nuevas características de la presente invención serán evidentes para un experto en la materia tras el examen de los siguientes ejemplos, que no se pretende que sean limitantes. Adicionalmente, cada una de las diversas realizaciones y aspectos de la presente invención tal como se delinean anteriormente en el presente documento y tal como se reivindican en el capítulo reivindicatorio más adelante se encuentra apoyado experimentalmente en los siguientes ejemplos.

EJEMPLOS

Los siguientes ejemplos se proporcionan con fines únicamente ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1:

La FIG. 1 muestra un esquema sintético útil para preparar 10-propargil-10-desazaminopterina. Una mezcla de NaH al 60% en dispersión oleosa (1,06 g, 26,5 mmol) en 18 ml de THF secado por tamizado se enfrió hasta 0 °C. La mezcla fría se trató con una solución de dimetil éster de ácido homotereftálico (5,0 g, 24 mmol. compuesto 1 en la FIG. 1) en THF seco (7 ml), y la mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C. Se añadió bromuro de propargilo (26,4 mmol), y la mezcla se agitó a 0,0 °C durante 1 hora adicional, y después a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla resultante se trató entonces con 2,4 ml de ácido acético al 50 % y después se vertió en 240 ml de agua. La mezcla se extrajo con éter (2 X 150 ml). Se combinaron los extractos de éter, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron hasta obtener un aceite de color naranja-amarillo. La cromatografía sobre gel de sílice (600 ml de malla 230-400) con elución mediante ciclohexano-EtOAc (8:1) dio el producto, dimetil éster del ácido αpropargilhomoterftálico (compuesto 2) en forma de un sólido de color blanco (4,66) que mediante TLC (ciclohexano-EtOAc, 3:1) parecía homogéneo. Los datos de espectros de masas de este producto, sin embargo, mostraron que era una mezcla del producto 2 deseado, y del compuesto dipropargilado. No se detectó material de partida 1. La HPLC muestra que la proporción de productos monopropargilados a dipropargilados es de aproximadamente 3:1. Ya que el producto dipropargilado, a diferencia del compuesto 1, no puede producir un coproducto no deseado en la siguiente etapa de la reacción, este material era adecuado para su conversión a compuesto 3. La ausencia de compuesto 1 de partida en el producto usado para llevar a cabo la síntesis es muy importante para evitar la formación secuencial de 10-dAM durante las transformaciones que dan lugar al producto final, debido a que la completa eliminación de 10-dAM de la 10-propargil-10-desazaminopterina es muy difícil.

Se formó una mezcla combinando 0,36 g de dispersión de NaH al 60 % NaH (9 mmol) en aceite con 10 ml de DMF seco y se enfrió hasta 0-5 °C. La mezcla fría se trató gota a gota con una solución del producto de la primera reacción (compuesto 2) (2,94 g, 12 mmol) en 10 ml de DMF seco y a continuación se agitó a 0 °C durante 30 minutos. Después de enfriar hasta -25 °C, se añadió una solución de bromhidrato de 2,4-diamino-6-(bromometil)pteridina 0,2 y 2-propanol (1,00 g, 2,9 mmol) en 10 ml de DMF seco gota a gota mientras que se mantenía la temperatura próxima a -25 °C. Se dejó aumentar la temperatura de la solución agitada hasta -10 °C durante un periodo de 2 horas. Después de 2 horas adicionales a -10 °C, se dejó aumentar la temperatura hasta 20 °C, continuándose la agitación a temperatura ambiente durante 2 horas más. Entonces se ajustó la reacción a pH 7 añadiendo CO2 sólido. Después de concentrar al vacío para eliminar el disolvente, se agitó el residuo con éter dietílico y se recogió el material no soluble en éter, se lavó con agua, y se secó al vacío para dar 1,49 g de un producto en bruto. Este producto en bruto se disolvió en CHCl3-MeOH (10:1) para su aplicación a una columna de gel de sílice. La elución mediante el mismo sistema de disolvente produjo metil éster del ácido 10-propargil-10carbometoxi-4-desoxi-4-amino-10-desazapteroico (compuesto 3) que fue homogéneo mediante TLC con un rendimiento del 40 % (485 mg).

Se trató una suspensión agitada de compuesto 3 (400 mg, 0,95 mmol) en 2-metoxietanol (5 ml) con agua (5 ml) y después con solución de hidróxido de sodio al 10 % (3,9 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, tiempo durante el cual sucedió la disolución. La solución se ajustó a pH 8 con ácido acético y se concentró a alto vacío. El residuo resultante de disolvió en 15 ml de agua se acidificó a pH 5,5-5,8 dando como resultado la formación de un precipitado. Se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó al vacío para recuperar 340 mg de compuesto 4 (rendimiento del 91 %). El análisis HPLC indicó una pureza del producto del 90 %.

El compuesto 4 (330 mg) se descarboxiló calentándolo en 15 ml de DMSO a 115-120 °C durante 10 minutos. Una prueba mediante HPLC después de 10 minutos confirmó que la conversión estaba esencialmente completa. El DMSO se retiró mediante destilación al vacío (baño a 40 °C). El residuo se agitó con NaOH 0,5 N para dar una solución transparente. La acidificación hasta pH 5,0 con HCl 1 N dio ácido 10-propargil-4-desoxi-4-amino-10desazapteroico (compuesto 5) en forma de un sólido de color amarillo con un rendimiento del 70 %. La HPLC indicó que la pureza del producto en esta etapa era del 90 %.

El compuesto 5 (225 mg, 0,65 mmol) se acopló con clorhidrato de L-glutamato de dimetilo (137 mg, 0,65 mmol) usando reactivo BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (287 mg, 0,65 mmol, Aldrich Chemical Co.) en DMF (10 ml) que contenía trietilamina (148 mg, 1,46 mmol). La mezcla se agitó durante 3 horas a 20-25 °C y después se evaporó hasta sequedad. El residuo se agitó con agua, y el producto en bruto insoluble en agua se recogió y secó al vacío. El producto en bruto (350 mg) se purificó mediante cromatografía en gel de sílice

10

imagen7

imagen8

imagen9

imagen10

Claims (1)

1. imagen1