ES2545152T3 - Procedimiento para la preparación de extractos secos - Google Patents

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Abstract

Procedimiento para la preparación de extractos secos de plantas, con las etapas: a.) extracción alcohólica/acuosa de Rumicis herba 5 , Verbena officinalis, Sambucus nigra, Primula veris y Gentiana lutea, b.) separación del sobrenadante, c.) extracción acuosa del residuo, d.) separación del sobrenadante, e.) combinación de los sobrenadantes obtenidos de b.) y d.), f.) secado de los sobrenadantes y obtención del extracto seco de planta.

Description

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E12762228
11-08-2015
caolín y bentonita y i) lubricantes, por ejemplo talco, estearato de calcio y estearato de magnesio y polietilglicoles sólidos o mezclas de sustancias enumeradas desde a) hasta i). Los comprimidos, grageas, cápsulas, pastillas y granulados pueden estar provistos de los revestimientos y cubiertas habituales, opcionalmente opacificantes, por ejemplo tales como hipromelosa no concluyente, celulosa microcristalina, ácido esteárico, dióxido de titanio, y también estar formulados de manera que estos o los principios activos den retraso opcionalmente a solo o preferentemente a una parte determinada del tracto intestinal, en el que pueden utilizarse como masas de integración, por ejemplo, sustancias poliméricas y ceras.
EJEMPLOS
Estos ejemplos sirven exclusivamente para explicar la invención, sin limitar la invención a estos ejemplos.
En lo sucesivo, "extracto seco" (ES)" quiere decir el extracto seco de plantas preparado según la invención.
Ejemplo 1:
La actividad antiviral del extracto seco según la invención se probó en una multitud de ensayos in vitro.
En estos ensayos, se analizó en primer lugar el efecto general que daña la célula (citotóxico) del extracto seco según la invención en el Sinupret® conocido (alcohólico/acuoso). Tras la incubación de las líneas celulares adecuadas (por ejemplo, HeLa, HEp-2) con los distintos virus durante un período de una hora, las líneas celulares infectadas se trataron con diferentes concentraciones, y a continuación se midió el efecto sobre la multiplicación vírica.
La determinación cuantitativa de la actividad antiviral in vitro se llevó a cabo sobre la detección de un efecto citopatógeno (adenovirus 5), en ensayo de reducción de placas (FluA, HRV14, VSR) y en ensayos de inmunoabsorción enzimática específicos de virus (ELISA; Adeno5, VSR).
En la detección de un efecto citopatógeno, las células de crecimiento confluente sensibles a los virus se infectan con una solución de virus definida (MDI, multiplicidad de infección). Después de una hora de incubación, se extrae el inóculo de virus y se lava la capa celular. A continuación se realiza la adición de las concentraciones de sustancias fisiológicas. Los respectivos lotes de pruebas se cultivan hasta que se observa en los controles de virus no tratados microscópicamente un efecto citopatógeno (ECP) al 70-90 %, que se muestra como áreas celulares destruidas. La superficie de las áreas celulares destruidas se define como infección al 100 %. En comparación, se evaluaron las superficies celulares de los respectivos lotes de pruebas, de manera que los efectos inhibidores de las sustancias que van a analizarse pueden mostrarse como inhibición porcentual ( % de inhibición).
En los ensayos de reducción de placas, las células de crecimiento confluente sensibles a los virus se infectan con una solución de virus definida (MDI, multiplicidad de infección). Después de una hora de incubación, se extrae el inóculo de virus y se lava la capa celular infectada. A continuación se realiza la adición de las concentraciones de sustancias fisiológicas así como de un componente del medio sólido (agarosa o metilcelulosa) y se volvió a incubar. Mediante los componentes sólidos en el medio superpuesto se delimita la superficie de infección, de modo que se forma un foco de células infectadas (“placa”). Los respectivos lotes de pruebas se cultivan hasta que se observa en los controles de virus no tratados microscópicamente el número de placas ajustado (MDI). Mediante la fijación y la tintura de las áreas celulares las placas de virus pueden visualizarse como granjas de color claro en áreas celulares de color oscuro. La determinación del número de placas se realiza con ayuda de los sistemas de procesamiento de imágenes. El número de placas del control no tratado se define como infección al 100 %. Por el contrario, el número de placas de los respectivos lotes de pruebas se evalúa de manera que los efectos inhibidores de las sustancias de ensayo pueden mostrarse como inhibición porcentual ( % de inhibición).
En ELISA se analiza la producción de virus. Las tiras de prueba con anticuerpos contra los virus específicos unen virus existentes en el sobrenadante del cultivo celular de las líneas celulares infectadas. Para hacer visible la reacción, se utiliza un anticuerpo de detección específico de patógenos marcado con peroxidasa. Tras la adición de una sustancia/cromógeno así como de peróxido de hidrógeno y tetrametilbencidina se realza una reacción de color. La intensidad de la coloración se determina fotométricamente y es proporcional al contenido de antígenos de virus. El análisis de la producción de virus en células infectadas y tratadas se realiza tras la infección de células de crecimiento confluente sensibles a los virus con una solución de virus definida (MDI, multiplicidad de infección). Después de una hora de incubación, se extrae el inóculo de virus y se lava la capa celular infectada. A continuación se realiza la adición de las concentraciones de sustancias fisiológicas. Los respectivos lotes de pruebas se cultivan hasta que se observa en los controles de virus no tratados microscópicamente un efecto citopatógeno (ECP) al 7090 %. Los virus recién sintetizados se encuentran en este estado en el sobrenadante del cultivo celular. El valor de absorbancia fotométrico determinado de los controles no tratados se definen como infección al 100 %. En comparación, los valores extinción de los respectivos lotes de pruebas se evalúan de manera que los efectos inhibidores de las sustancias de ensayo pueden representarse como inhibición porcentual ( % de inhibición).
En todos los ensayos se muestra una clara inhibición de la multiplicación vírica, es decir, una reducción de la carga viral, véase la Figura 1.
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Claims (1)

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