ES2553770T3 - Inhibidores de apoptosis y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Un péptido que consiste en: - un fragmento de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o 24 restos de aminoácidos consecutivos de la proteína DAXX de la SEC ID Nº:1, en el que dicho fragmento comprende la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID Nº: 5, en el que dicho péptido es capaz de inhibir la apoptosis celular.

Description

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hidrógeno, o similares. Las sustituciones conservativas particularmente precedentes son las que satisfacen los criterios definidos para una "mutación puntual aceptada" en Dayhoff et al,. ("Atlas of Protein Sequence and Structure", 1978, Nat. Biomed. Res. Foundation, Washington, DC, Supl. 3, 22: 354-352).
5 En el contexto de la presente invención, el término "tratamiento" se usa para caracterizar un método que tiene como objetivo retrasar o prevenir el inicio de una enfermedad o afección, ralentizar o detener la evolución, agravamiento o deterioros de los síntomas de la afección, provocar mejoras de los síntomas de la afección, y/o curar la afección. Un tratamiento se puede administrar antes del inicio de la enfermedad o afección, para una acción profiláctica o de prevención. Como alternativa o adicionalmente, se puede administrar después del inicio de la enfermedad o afección, para una acción terapéutica.
Como se usa en el presente documento; el término "sujeto" se refiere a un ser humano o animal, en particular un mamífero (por ejemplo, primate, perro, gato, cabra, caballo, cerdo, ratón, rata, conejo y similares), que se pueden ver afectados con una enfermedad o afección asociada con la apoptosis, pero que pueden tener o no la enfermedad o
15 afección. En muchas realizaciones de la presente invención, el sujeto es un ser humano. En tales realizaciones, el sujeto a menudo se denomina "individuo". El término "individuo" no indica una edad en particular, y por lo tanto incluye niños, adolescentes, y adultos.
En el presente documento se define que una "composición farmacéutica" comprende una cantidad eficaz de a péptido de la invención, y al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a cualquier cantidad de un péptido, compuesto, agente, o composición que es suficiente para satisfacer su finalidad o finalidades pretendidas, por ejemplo, una respuesta biológica o médica deseadas en una célula, tejido, sistema o sujeto. Por ejemplo, en
25 ciertas realizaciones de la presente invención, la finalidad o finalidades pueden ser: inhibir, prevenir o disminuir la apoptosis, tal como por ejemplo la apoptosis asociada con lesión por reperfusión o trasplante de órganos; y/o prevenir o tratar una enfermedad o afección asociada con la apoptosis.
La expresión "vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a un medio de vehículo que no interfiere con la eficacia de la actividad biológica del principio o principios activos y que no es significativamente tóxico para el hospedador a la concentración a la que se administra. La expresión incluye disolventes, dispersión, medios, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos, y agentes para el retraso de la adsorción, y similares. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conoce bien en la técnica (véase por ejemplo "Remington’s Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin, 18ª Ed., 1990, Mack
35 Publishing Co.: Easton, PA, que se incorpora en el presente documento por referencia en su totalidad).
Descripción detallada de la invención
Como se ha mencionado anteriormente, la presente invención se refiere a péptidos con propiedades antiapoptóticas que son útiles como agentes terapéuticos en el tratamiento y/o prevención de una gran diversidad de enfermedades afecciones asociadas con la apoptosis.
Péptidos que inhiben la apoptosis celular
45 Los péptidos que se describen en el presente documento incluyen fragmentos de DAXX y fragmentos de FADD que presentan actividad antiapoptótica.
Los términos "DAXX" y "proteína DAXX" se usan en el presente documento de forma indistinta. Éstos hacen referencia a la proteína denominada proteína 6 asociada con muerte 6 que, en seres humanos, está codificada por el gen DAXX (Ref Sec (ARNm): NM_001141969.1) ubicado en la posición 21.3 en el brazo corto (p) del cromosoma 6. En realizaciones preferentes, DAXX tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID Nº: 1. Sin embargo, la proteína DAXX puede ser una isoforma de la proteína DAXX de la SEC ID Nº: 1 y por lo tanto puede tener cualquier secuencia de aminoácidos que está codificada por el gen DAXX humano.
55 Los términos "FADD" y "proteína FADD" se usan en el presente documento de forma indistinta. Éstos hacen referencia a la proteína denominada proteína Asociada con Fas con Dominio de Muerte que, en seres humanos, está codificada por el gen FADD (Ref Sec (ARNm): NM_003824.3) ubicado en la posición 13.3 en el brazo largo (q) del cromosoma 11. Preferentemente, FADD tiene la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID Nº: 8. Sin embargo, la proteína FADD puede ser una isoforma de la proteína FADD de la SEC ID Nº: 8 y por lo tanto puede tener cualquier secuencia de aminoácidos que este codificada por el gen FADD humano.
Los inventores han mostrado que algunos péptidos que consisten en una secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID Nº: 5 ("DAXXp"), en la SEC ID Nº: 6 ("DAXXp-14") o en la SEC ID Nº: 2 ("DAXXp-15" = "DAXXp-211"), todos los cuales son fragmentos de la proteína DAXX (SEC ID Nº:1), interactúan con el receptor Fas, 65 pero que solamente DAXXp es capaz de disminuir la apoptosis celular. De forma análoga, los inventores han encontrado que algunos péptidos que consisten en una secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID
Nº: 9 ("FADDp15") y SEC ID Nº: 12 ("FADDp"), que ambos son fragmentos de la proteína FADD (SEC ID Nº: 8), interactúan con el receptor Fas y disminuyen la apoptosis celular.
Por lo tanto, en una realización en particular, el péptido antiapoptótico de acuerdo con la invención es un fragmento
5 de DAXX de 16 restos de aminoácidos consecutivos que consiste en la SEC ID Nº: 5. En otra realización en particular, el péptido antiapoptótico de acuerdo con la invención es un fragmento de DAXX de 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o 24 restos de aminoácidos consecutivos que comprende la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEC ID Nº: 5. Preferentemente, tal péptido antiapoptótico tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en
SEC ID Nº: 17 (KKSRKEKKQTGSGPLGN), SEC ID Nº: 18 (KKSRKEKKQTGSGPLGNS), SEC ID Nº: 19 (KKSRKEKKQTGSGPLGNSY), SEC ID Nº: 20 (KKSRKEKKQTGSGPLGNSYV),
15 SEC ID Nº: 21 (CKKSRKEKKQTGSGPLG), SEC ID Nº: 22 (PCKKSRKEKKQTGSGPLG), SEC ID Nº: 23 (PPCKKSRKEKKQTGSGPLG), SEC ID Nº: 24 (GPPCKKSRKEKKQTGSGPLG), SEC ID Nº: 25 (SGPPCKKSRKEKKQTGSGPLG), SEC ID Nº: 26 (CKKSRKEKKQTGSGPLGN), SEC ID Nº: 27 (CKKSRKEKKQTGSGPLGNS), SEC ID Nº: 28 (CKKSRKEKKQTGSGPLGNSY), SEC ID Nº: 29 (CKKSRKEKKQTGSGPLGNSYV), SEC ID Nº: 30 (PCKKSRKEKKQTGSGPLGN),
25 SEC ID Nº: 31 (PCKKSRKEKKQTGSGPLGNS), SEC ID Nº: 32 (PCKKSRKEKKQTGSGPLGNSY), SEC ID Nº: 33 (PCKKSRKEKKQTGSGPLGNSYV), SEC ID Nº: 34 (PPCKKSRKEKKQTGSGPLGN), SEC ID Nº: 35 (PPCKKSRKEKKQTGSGPLGNS), SEC ID Nº: 36 (PPCKKSRKEKKQTGSGPLGNSY), SEC ID Nº: 37 (PPCKKSRKEKKQTGSGPLGNSYV), SEC ID Nº: 38 (GPPCKKSRKEKKQTGSGPLGN), SEC ID Nº: 39 (GPPCKKSRKEKKQTGSGPLGNS), SEC ID Nº: 40 (GPPCKKSRKEKKQTGSGPLGNSY),
35 SEC ID Nº: 41 (GPPCKKSRKEKKQTGSGPLGNSYV), SEC ID Nº: 42 (SGPPCKKSRKEKKQTGSGPLGN), SEC ID Nº: 43 (SGPPCKKSRKEKKQTGSGPLGNS), y SEC ID Nº: 44 (SGPPCKKSRKEKKQTGSGPLGNSY).
Otro péptido antiapoptótico que se describe en el presente documento es un fragmento de FADD de 9 restos de aminoácidos consecutivos que consiste en la SEC ID Nº: 12, o un fragmento de FADD de 15 restos de aminoácidos consecutivos que consiste en la SEC ID Nº: 9, o un fragmento de FADD de 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 17 restos de aminoácidos consecutivos que comprenden la SEC ID Nº: 12. Preferentemente, tal péptido antiapoptótico tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:
45 SEC ID Nº: 45 (KRKLERVQSG), SEC ID Nº: 46 (KRKLERVQSGL), SEC ID Nº: 47 (KRKLERVQSGLD), SEC ID Nº: 48 (KRKLERVQSGLDL), SEC ID Nº: 49 (RKRKLERVQS), SEC ID Nº: 50 KRKRKLERVQS), SEC ID Nº: 51 (GKRKLERVQSG), SEC ID Nº: 52 (GKRKLERVQSGL), SEC ID Nº: 53 (GKRKLERVQSGLD),
55 SEC ID Nº: 54 (GKRKLERVQSGLDL), SEC ID Nº: 55 (VGKRKLERVQSG), SEC ID Nº: 56 (VGKRKLERVQSGL), y SEC ID Nº: 57 (VGKRKLERVQSGLD).
Como se ha mencionado anteriormente, en ciertas realizaciones, la proteína DAXX es una isoforma de la proteína DAXX de la SEC ID Nº: 1. En tales realizaciones, el péptido antiapoptótico de acuerdo con la invención puede ser el fragmento de DAXX de 16 restos de aminoácidos consecutivos que corresponde al fragmento de la SEC ID Nº: 5 en la proteína DAXX de la SEC ID Nº: 1.
65 De forma análoga, como se ha mencionado anteriormente, la proteína FADD puede ser una isoforma de la proteína FADD de la SEC ID Nº: 8, o el fragmento de FADD de 9 restos de aminoácidos consecutivos que corresponde al
imagen7
grupos químicos de los aminoácidos con otros grupos químicos de estructura similar. El desarrollo de peptidomiméticos se puede ver ayudado con la determinación de la estructura terciaria del fragmento/péptido original, ya sea libre o unido a la región intracelular del receptor Fas, mediante espectroscopía de RMN, cristalografía y/o formación de modelos moleculares ayudada por ordenador. Una vez que se identifica un
5 compuesto peptidomimético potencial, éste se puede sintetizar y su capacidad para inhibir la apoptosis celular se puede someter a ensayo.
Algunos peptidomiméticos pueden contener cualquier combinación de componentes estructurales no naturales, que por lo general son de tres grupos estructurales: grupos de unión de restos distintos de los grupos de enlace amino 10 natural ("enlace peptídico"); restos no naturales en lugar de restos de aminoácidos de origen natural; restos que inducen imitación de la estructura secundaria (por ejemplo, giro beta, giro gamma, lámina beta, conformación de hélice alfa); u otros cambios que confieren resistencia a la proteólisis. Por ejemplo, se pueden generar miméticos de lisina por reacción con ácido succínico u otros anhídridos de ácido carboxílico. También se pueden generar lisina y otros miméticos de restos que contienen alfa-amino por reacción con imidoésteres, tales como picolinimidato de
15 metilo, fosfato de piridoxal, piridoxal, cloroborohidruro, ácido trinitrobencenosulfónico, O-metilisourea, 2,4pentanodiona, y reacciones catalizadas con transamidasa con glioxilato.
Uno o más restos también se pueden sustituir con un aminoácido (o resto peptidomimético) de la quiralidad opuesta. Por lo tanto, cualquier aminoácido de origen natural en la configuración L (que también se puede denominar R o S,
20 dependiendo de la estructura de la entidad química) se puede sustituir con el mismo aminoácido o un mimético, pero de la quiralidad opuesta, denominado D-aminoácido, pero que también se puede hace referencia adicionalmente como a la forma R o S.
Tal como un experto en la materia observara, los peptidomiméticos de la presente invención también pueden incluir 25 una más de las modificaciones que se describen en el presente documento para los aminoácidos "alterados o derivatizados químicamente", por ejemplo, una etiqueta, o una o más modificaciones después de la traducción.
Los péptidos, derivados y peptidomiméticos se pueden producir y aislar usando cualquier método conocido en la técnica. Algunos péptidos se pueden sintetizar, totalmente buen parte, usando métodos químicos habituales. 30 Algunas técnicas para generar bibliotecas de péptidos y peptidomiméticos se conocen bien, e incluyen, por ejemplo, las técnicas de múltiples sujeciones, de bolsa de té, división-acoplamiento-mezcla y síntesis de SPOT.
Conjugados
35 La invención también se refiere a conjugados que comprenden un péptido de la invención o un derivado del mismo, unido a un Péptido de Penetración Celular o CPP.
De hecho, para facilitar la absorción de los péptidos de acuerdo con la invención, o derivados de los mismos, a través de membranas celulares, tales como la membrana plasmática de una célula, los inventores han mostrado que
40 es muy útil conjugar esos péptidos derivados de los mismos con "péptidos de penetración celular" (CPP). Los CPP son péptidos bien conocidos que se pueden conjugar a cargas para facilitar el transporte través de las membranas. Los CPP se describen bien por ejemplo en Lebleu B. et al., Advanced Drug Delivery Reviews 60 (2008) 517-529 y en Said Hassane F. et al., Cell. Mol. Life Sci. (2010) 67: 715-726. Se puede usar cualquier CPP para mejorar la administración citoplasmática de fragmentos o derivados de los mismos de acuerdo con la invención.
45 Algunos ejemplos de los CPP que se pueden conjugar con los fragmentos de DAXX o FADD, o derivados de los mismos, que se describen en el presente documento, incluyen, pero no se limitan a:
Nombre Secuencia
50 Tat GRKKRRQRRRPPQ RXR RXRRXRRXRRXR Bpep RXRRBRRXRRBRXB Pip2b RXRRXRRXRIHILFQNrRMKWHK
55 en las que:
- X = aminohexilo, β-alanilo, p-aminobenzoílo, isonipecotilo, o 4-aminobutirilo
- B = beta Alanina
- letra minúscula = D-aminoácido (los D-aminoácidos se pueden sustituir por L-aminoácidos).
60 Un CPP por lo general tiene dos o más aminoácidos catiónicos con aminoácidos hidrófobos o grupos espaciadores que separan algunos de los aminoácidos catiónicos. Por ejemplo, el aminoácido catiónico es Arginina (R). Además, por lo general, un CPP tiene generalmente al menos 3 o 4 restos de Arginina. En algunas realizaciones el CPP contiene 5, 6 o más restos de Arginina.
65
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1,1’-carbonildi(1,2,4-triazol) (CDT). El grupo Fmoc se retiró de las aplicaciones puntuales, y las secuencias peptídicas se completaron usando el protocolo de síntesis de SPOT convencional (Frank, Tetrahedron, 1992, 48: 9217) seguido de una etiqueta N-terminal con β-alanina.
5 Para la síntesis de SPOT convencional se usó Fmoc-aa-Opfp con la siguiente protección de la cadena lateral: E-, D(OtBu); C,- S-, T-, Y-(tBu); K-, W-(Boc); N-, Q-, H-(Trt); R-(Pbf). Para el ciclado de tioéter todos los péptidos se Nacilaron con éster de 2,4-dinitrofenilo del ácido bromoacético en DMF (1M), doble acoplamiento, tiempo de reacción de 15 min cada una.
10 La membrana se lavó con DMF (3 x 3 min) y diclorometano (DCM, 3 x 3 min) y se secó. Para permitir el ciclado, el grupo protector de cadena lateral de tritilo de la cisteína se escindió con ácido trifluoroacético (TFA, 7 %), H2O (2 %) en DCM (1 x 5 min) seguido de TFA (7 %), TIBS (3 %), H2O (2 %) en DCM. La membrana se lavó con DCM (3 x 3 min), DMF (2 x 3 min), y DMF (2 x 3 min). Los péptidos se ciclaron durante una noche por tratamiento con Cs2CO3 acuoso al 25 %/DMF (1:1). La membrana se lavó con DMF (2 x 3 min), H2O (2 x 3 min), etanol (2 x 3 min), y éter
15 dietílico (2 x 3 min) y se secó al aire.
La hidrólisis y la desprotección de la cadena lateral se consiguieron a través de un tratamiento con TFA (60 %), TIBS (3 %), y H2O (2 %) en DCM durante 2,5 horas sin agitación, seguido de etapas de lavado (DCM 3 x 3 min, DMF 3 x 3 min, etanol 3 x 3 min, éter dietílico 2 x 3 min), seguido de TFA (90 %), TIBS (3 %), y H2O (2 %) en DCM durante 30
20 minutos sin agitación. La membrana se lavó con DCM (3 x 3 min), DMF (3 x 3 min), etanol (2 x 3 min), tampón de fosfato (pH 7,4, 0,1 M, 2 x 3 min), H2O (2 x 3 min), etanol (2 x 3 min), y éter dietílico (2 x 3 min) y se secó al aire.
Diseño y administración de fragmentos de acuerdo con la invención
25 La secuencia primaria de la proteína DAXX (SEC ID Nº: 1) se analizó minuciosamente haciendo coincidir péptidos 15 mer (desplazamiento de 3 aminoácidos) y todos los péptidos (243 péptidos) se sintetizaron sobre membranas de celulosa mediante síntesis de SPOT como se ha descrito anteriormente. La biblioteca de péptidos se incubó con la región intracelular etiquetada con His del receptor Fas (Sigma). La interacción entre Fas y los péptidos se determinó usando un sándwich de anti-His(ratón)/anti-ratón-HRP y las señales se revelaron usando un LumiImager (Roche)
30 como se muestra en la Figura 1A. Se encontró que la aplicación puntual Nº 211 (SEC ID Nº: 2) presentaba la intensidad de la señal más elevada y se encontró que las aplicaciones puntuales Nºs 209, 210 y 212 (SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4 y SEC ID Nº: 7, respectivamente) incluían la secuencia de epítopos mínima (KSRKEKKQT).
Sin embargo, el análisis de longitud de secuencias de las secuencias de 15 mer KSRKEKKQTGSGPLG (aplicación
35 puntual 211, SEC ID Nº: 2) y SGPPCKKSRKEKKQT (aplicación puntual 209, SEC ID Nº: 3) reveló que no es posible acortar las secuencias de forma arbitraria hasta el epítopo mínimo encontrado en la Figura 1. Usando la síntesis de SPOT como se ha mencionado anteriormente, la influencia de la longitud del péptido se analizó acortando las secuencias dadas en el extremo N-terminal, el extremo C-terminal y en ambas direcciones (Figura 2A). Las secuencias de péptidos que se presentaban las intensidades de la señal más elevadas se muestran en la Figura 2B.
40 Se realizó una combinación mezclada de la intensidad de la señal más elevada del DAXXp-211 y del DAXXp-209 que corresponde a un péptido 16 mer (KKSRKEKKQTGSGPLG), denominado el péptido DAXX o DAXXp (SEC ID Nº: 5). Se encontró que DAXXp tiene una actividad antiapoptótica in vitro e in vivo importante.
45 Es posible alargar el péptido en el extremo C-terminal manteniéndose con el hecho de que la proteína negativa dominante (DAXX-DN) [Roubille et al., Circulation, 2007; 116: 2709-2717] incluye una región que se extiende desde el péptido DAXXp-211 hasta el extremo C-terminal de la proteína DAXX (Figura 1B).
Aplicaciones en AMI
50 Se han sometido al ensayo péptidos de DAXXp, conjugados o no con los CPP, para su actividad antiapoptótica en cardiomiocitos primarios y para su capacidad para reducir el tamaño del infarto en un modelo I/R quirúrgico de razón después de administración sistémica.
55 Evaluación in vitro
En una primera etapa, la absorción celular de los péptidos enumerados en la Tabla 1 se midió en cultivo celular primario de cardiomiocitos de ratón usando medidas de citometría de flujo (FACS - con péptidos etiquetados con CF) y se verificó la ausencia de cualquier citotoxicidad.
60
Tabla 1: CPP, y conjugados de CPP-DAXXp usados en este estudio
Nombre
Secuencia AA
Tat
GRKKRRQRRRPPQ-NH2 13
Nombre
Secuencia AA
(RXR)4
(RXR)4-NH2 12
Bpep
RXRRBRRXRRBRXB-NH2 14
Pip2b
(RXR)3-IHILFQNrRMKWHK-NH2 23
Tat-DAXXp
GRKKRRQRRRPPQ-KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 (= SEC ID Nº: 58) 29
Tat-ncDAXXp
GRKKRRQRRRPPQ-AKLYVYINELCTVLK-NH2 (ncDAXXp = SEC ID Nº:13) 29
Tat-scrDAXXp
GRKKRRQRRRPPQ-KKGRKQSGESLGTPKK-NH2 29
(RXR)4-DAXXp
(RXR)4-KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 28
Bpep-DAXXp
RXRRBRRXRRBRXB-KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 30
Pip2b-DAXXp
(RXR)3-IHILFQNrRMKWHK-KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 39
DAXXp
KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 (SEC ID Nº: 5) 16
Tat-DAXXp13
GRKKRRQRRRPPQ-RKEKKQTGSGPLG-NH2 (DAXXp13 = SEC ID Nº: 14) 26
mDAXXp
KRFRKEKKQLGSGLLG-NH2 (SEC ID Nº: 15) 16
scrDAXXp
KKGRKQSGESLGTPKK -NH2 (SEC ID Nº: 16) 16
Tat-mDAXXp
GRKKRRQRRRPPQ-KRFRKEKKQLGSGLLG-NH2 (SEC ID Nº: 61) 29
Pip2b-mDAXXp
(RXR)3-IHILFQNrRMKWHK-KRFRKEKKQLGSGLLG-NH2 39
X = ácido amino-hexanoico; B = β-alanina, r = D-arginina; Para medidas de FACS, los péptidos se etiquetaron de forma N-teminal con (5,6)-carboxifluoresceína (CF); todos los péptidos están amidados de forma C-terminal. scr = versión codificada de DAXXp; mDAXXp es el homólogo de ratón de DAXXp humano
Otros derivados de CPP-DAXXp que se han estudiado se presentan en la Tabla 2 que sigue a continuación.
Tabla 2: Derivados de CPP-DAXXp adicionales estudiados.
Tat-DAXXp
GRKKRRQRRRPPQ- KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 (SEC ID Nº: 58)
Tat-DAXXp-209
GRKKRRQRRRPPQ-SGPPCKKSRKEKKQT-NH2
Tat-DAXXp-210
GRKKRRQRRRPPQ-PCKKSRKEKKQTGSG-NH2
Tat-DAXXp-211
GRKKRRQRRRPPQ- KSRKEKKQTGSGPLG-NH2
Tat-DAXXp-212
GRKKRRQRRRPPQ- KEKKQTGSGPLGNSY-NH2
Tat-DAXXp Tat-DAXXp-15 Tat-DAXXp-14 Tat-DAXXp-13 Tat- DAXXp-9
GRKKRRQRRRPPQ-KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 GRKKRRQRRRPPQ-KSRKEKKQTGSGPLG-NH2 = Tat-DAXXp-211 GRKKRRQRRRPPQ-SRKEKKQTGSGPLG-NH2 GRKKRRQRRRPPQ-RKEKKQTGSGPLG-NH2 GRKKRRQRRRPPQ-KSRKEKKQT-NH2
5 Además, la interacción potencial de los fragmentos con la región intracelular del receptor Fas se validó de forma cruzada midiendo las afinidades de unión (Kd) usando la técnica de resonancia de plasmón superficial (SPR) (Biacore Life Science, Suecia). Las afinidades de unión del fragmento solo y en conjugación con los CPP se resumen en la Tabla 3.
10 Tabla 3: Medida de las afinidades de unión (Kd, en µM) de los constructos usados.
Nombre
Secuencia Kd ± DT [µM]
DAXXp
KKSRKEKKQTGSGPLG-NH2 333 ± 62
imagen12

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  1. imagen1
    imagen2
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