ES2553832T3 - Medio nutriente - Google Patents

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ES2553832T3 ES12741348.2T ES12741348T ES2553832T3 ES 2553832 T3 ES2553832 T3 ES 2553832T3 ES 12741348 T ES12741348 T ES 12741348T ES 2553832 T3 ES2553832 T3 ES 2553832T3
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Abstract

Medio nutriente líquido que contiene - de 10 a 20 partes en peso de extracto de levadura - de 15 a 30 partes en peso de peptona - de 35 a 75 partes en peso de monosacáridos y disacáridos - hasta 3 partes en peso de sustancias minerales - de 0,02 a 1 partes en peso de agente formador de gel estable, que es tan estable que el producto soporta un proceso en autoclave o un proceso de UHT habitual en la industria así como - agua, sometiéndose el medio nutriente a un proceso en autoclave o calentándose a temperaturas ultra-altas.

Description

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DESCRIPCION
Medio nutriente
La invencion se refiere a un medio nutriente y a su uso.
En la preparacion de una gran parte de ante todo artfculos de consumo de primera necesidad, tales como por ejemplo alimentos, por ejemplo en forma de bebidas sin alcohol o cervezas debe prestarse atencion a una libertad o la existencia de un numero maximo definido como tolerable de los correspondientes productos de o en microorganismos vivos con capacidad de metabolizacion tales como mohos, levaduras, lactobacterias o acetobacterias. Se conocen desde hace tiempo sistemas de deteccion microbiologicos para este fin.
Los medios nutrientes tfpicos usados para fines analtticos son medios nutrientes gelificados, solidos a base por ejemplo de agar, sobre los que pueden crecer microorganismos en forma de colonias.
Un procedimiento generalizado se basa en el modelo de utilidad aleman 93 19 470.6, en el que se describe un medio nutriente que se prepara por el usuario a partir de partes constituyentes individuales secas o una correspondiente premezcla en polvo, se ajusta a un valor de pH de por ejemplo 4,3 a 4,4 y a continuacion se pasteuriza. Durante la produccion del artfculo que va a someterse a estudio se toman muestras del proceso de produccion y se rellenan con el medio nutriente. El crecimiento de microorganismos puede observarse entonces en caso de existencia en una muestra en un espacio de tiempo de aproximadamente 1 a 2 dfas en una caja de luz a una temperatura de aproximadamente 28 °C. Si una muestra se enturbia, esta esta cargada de microorganismos. El grado de enturbiamiento proporciona al mismo tiempo un punto de referencia sobre la magnitud de la carga de la muestra con microorganismos.
Es desventajosa, en el procedimiento conocido, la preparacion que relativamente requiere mucho esfuerzo y tiempo del medio nutriente por parte del usuario. Esto exige experiencia por parte del usuario en la manipulacion con medios nutrientes microbiologicos y un correspondiente equipamiento del laboratorio con agitadores magneticos, matraces de Erlenmeyer, medidores de pH con compensacion de la temperatura, balanzas de precision, una disposicion de pasteurizacion etc.
Mediante un incumplimiento de las condiciones o contaminacion durante la preparacion podna obtenerse el correspondiente medio nutriente en calidad no optima, lo que podna conducir a dificultades en el uso tales como por ejemplo resultados falsos positivos.
Era objetivo de la presente invencion superar al menos algunos de los inconvenientes del estado de la tecnica.
Se consigue el objetivo mediante un medio nutriente lfquido que contiene
de 10 a 20 partes en peso de extracto de levadura de 15 a 30 partes en peso de peptona de 35 a 75 partes en peso de monosacaridos y disacaridos hasta 3 partes en peso de sustancias minerales
de 0,02 a 1 partes en peso de agente formador de gel estable, que es estable de modo que el producto soporte un proceso en autoclave o un proceso de UHT habitual en la industria asf como • agua, sometiendose a un proceso en autoclave o calentandose a temperaturas ultra-altas el medio nutriente.
Se usa agua preferentemente en una cantidad entre 100 y 2000, mas preferentemente de 1000 a 2000 partes en peso. Preferentemente se encuentra la concentracion del agente formador de gel estable en < 0,5 % en peso, preferentemente < 0,1 % en peso, aun mas preferentemente < 0,05 % en peso.
A diferencia de los medios nutrientes del estado de la tecnica puede prepararse el producto ya por parte del fabricante y puede suministrarse en forma “ready-to-use", lista para su uso, a los clientes.
Sorprendentemente, el producto con la composicion de acuerdo con la invencion es estable durante un espacio de tiempo de mas seis meses en almacenamiento a temperatura ambiente, cuando se sometio a un proceso en autoclave o como alternativa se calento a temperaturas ultra-altas.
El medio nutriente de acuerdo con la invencion contiene de manera habitual nutrientes para microorganismos mediante mezclado de extracto de levadura, peptona, monosacaridos y disacaridos y sustancias minerales.
De acuerdo con la invencion, el medio nutriente contiene uno o varios agentes formadores de gel estables que estan contenidos en una cantidad que conduce a una consistencia fluida del medio nutriente. El agente formador de gel debe ser estable de modo que el producto soporte un proceso en autoclave, es decir un calentamiento hasta una temperatura de 121 °C durante un tiempo de permanencia de como mmimo 5 minutos o un proceso de UHT habitual en la industria.
Los medios nutrientes fluidos habituales contienen por ejemplo carragenano. Este no soporta en las condiciones dadas sin embargo ningun proceso en autoclave y por tanto no es ningun agente formador de gel estable en el
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sentido de la invencion descrita. Preferentemente se usa como agente formador de gel goma gellan, sin embargo pueden usarse tambien otras sustancias polimericas naturales, semisinteticas o sinteticas con propiedades de formacion de gel analogas a la goma gellan.
Las propiedades de formacion de gel analogas a la goma gellan significa que las sustancias pueden conseguir una estabilizacion y fijacion de partfculas o materiales particulados descritos en la disolucion, sin producir un aumento significativo de la viscosidad. Un agente formador de gel estable es en particular aquel que con su uso en las cantidades mencionadas tras un proceso en autoclave con un tiempo de permanencia de 5 min a 121 °C forma aun sistema cuya viscosidad se encuentra por encima de la del mismo sistema sin adicion del agente formador de gel, sin embargo asciende a menos de 100 mPas a 20 °C.
Preferentemente se encuentra la viscosidad del sistema en al menos 2 mPas.
La goma gellan puede obtenerse por ejemplo con la denominacion Gelrite de Merck und Co. USA. La goma gellan se usa en el estado de la tecnica de modo que se usa en presencia de iones divalentes y forma geles solidos. Los medios nutrientes de acuerdo con la invencion son, a diferencia de esto, lfquidos.
Los agentes formadores de gel no estables, tales como por ejemplo carragenano, se modifican en el proceso en autoclave de modo que pierden sus propiedades de formacion de gel.
Si bien estos pueden pasteurizarse eventualmente, sin embargo esto no es suficiente para una capacidad de almacenamiento a largo plazo de los correspondientes medios nutrientes, sino que significa que los medios nutrientes deben usarse a corto plazo.
En los intervalos de cantidades mencionados resultan lfquidos que presentan preferentemente una viscosidad < 100, preferentemente < 10 mPas a 20 °C. A diferencia de caldos de cultivos habituales, que o bien son consistentes o no garantizan como caldo ninguna fijacion ni una union de una colonia de microorganismos, los medios nutrientes de acuerdo con la invencion pueden fluir y proporcionan una fijacion (ninguna sedimentacion) y la union de una colonia en crecimiento (por consiguiente puede distinguirse bien por el ojo humano). Los nutrientes pueden difundirse libremente, sin que se vean impedidos mediante una matriz.
Mediante la composicion de acuerdo con la invencion pueden almacenarse los medios nutrientes tras un proceso en autoclave o como alternativa un calentamiento a temperaturas ultra-altas durante un espacio de tiempo largo. En un almacenamiento oscuro que ha de preferirse a de 4 °C a 8 °C en un recipiente cerrado se modifican las propiedades del producto durante un espacio de tiempo de 12 meses.
Mientras que sea posible suministrar el medio nutriente como botella de deposito a los usuarios, se prefiere especialmente que el medio nutriente se envase en porciones, por ejemplo en recipientes con paredes transparentes, que puedan cerrarse hermeticamente. Son especialmente adecuados por ejemplo los recipientes con tapa de rosca. Por parte del usuario tan solo debe abrirse el recipiente con tapa de rosca, debe anadirse la muestra y debe cerrarse de nuevo el recipiente con tapa de rosca.
Para su uso se mezcla el medio nutriente con una muestra y se conserva en una incubadora, por ejemplo a de 25 °C a 37 °C. Los microorganismos pueden crecer en el medio nutriente, lo que se muestra en un enturbiamiento del medio en el caso mmimo localmente limitado. La intensidad del enturbiamiento puede ser al mismo tiempo una medida de la carga de germen de la muestra. De esta manera puede diferenciarse de manera sencilla una gran numero de muestras “a primera vista” en muestras cargadas y no cargadas.
El uso del medio nutriente es adecuado ante todo en areas en las que se da importancia al control del estado microbiologico de productos que consumen los seres vivos o se administran a estos en todas las formas de administracion concebibles, por ejemplo en el area de la fabricacion de bebidas y alimentos, de la fabricacion de piensos, de la cosmetica o de la industria farmaceutica. Ademas es adecuado el medio nutriente en forma adaptada segun las circunstancias para el area del diagnostico clmico.
Basicamente pueden obtenerse los microorganismos de los medios nutrientes de manera sencilla mediante pipeteado y pueden caracterizarse en mas detalle, por ejemplo por medio de PCR o procedimientos similares.
La invencion se explica en mas detalle los siguientes ejemplos no limitativos:
Ejemplo comparativo 1
Un medio nutriente se preparo con los siguientes ingredientes en la masa seca:
70 % de monosacaridos y disacaridos 2 % de sustancias minerales 14 % de extracto de levadura 15,1 % de peptona 0,9 % de carragenano.
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Se prepararon 5 partes de esta masa seca con 95 partes de agua y el medio de deteccion resultante se mezclo con una suspension de levadura muy diluida tras el ajuste del valor de pH hasta pH = 4,3 y la pasteurizacion a 80 °C durante 5 minutes.
La incubacion del recipiente con tapa de rosca a 25 °C proporciona tras 1 a 3 dfas un resultado interpretable a simple vista, concretamente el crecimiento de colonias de celulas de levadura que pueden distinguirse como enturbiamientos discretos en forma de puntos y que flotan libremente en el medio de deteccion.
Ejemplo comparativo 2
Se procedio como en el ejemplo 1, sin embargo diferenciandose de este no se pasteurizo el medio nutriente listo para su uso, sino que se sometio en autoclave a 121 °C durante 5 minutos.
Tras la inoculacion con celulas de levadura se produce tras de 1 a 3 dfas la formacion de un sedimento que se genera mediante los microorganismos. Una interpretacion sencilla y de valor informativo del resultado microbiologico no es posible en este caso y tampoco sin manipulacion del recipiente con tapa de rosca.
Ejemplo 1
Un medio nutriente que se diferencia de los ejemplo comparativos 1 y 2 con respecto al agente formador de gel usado se preparo con los siguientes ingredientes en la masa seca:
70 % de monosacaridos y disacaridos 2 % de sustancias minerales 14 % de extracto de levadura 15,1 % de peptona 0,9 % de goma gellan.
Se prepararon 5 partes de esta masa seca con 95 partes de agua y el medio de deteccion resultante se mezclo con una suspension de levadura muy diluida tras el ajuste del valor de pH hasta pH = 4,3 y el proceso en autoclave a 121 °C durante cinco minutos.
La incubacion del recipiente con tapa de rosca a 25 °C proporciona tras 1 a 2 dfas un resultado interpretable a simple vista, concretamente el crecimiento de colonias de celulas de levadura que pueden distinguirse como enturbiamientos discretos en forma de puntos y que flotan libremente en el medio de deteccion.

Claims (10)

  1. 5
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    REIVINDICACIONES
    1. Medio nutriente Ifquido que contiene
    • de 10 a 20 partes en peso de extracto de levadura
    • de 15 a 30 partes en peso de peptona
    • de 35 a 75 partes en peso de monosacaridos y disacaridos
    • hasta 3 partes en peso de sustancias minerales
    • de 0,02 a 1 partes en peso de agente formador de gel estable, que es tan estable que el producto soporta un proceso en autoclave o un proceso de UHT habitual en la industria asf como
    • agua, sometiendose el medio nutriente a un proceso en autoclave o calentandose a temperatures ultra-altas.
  2. 2. Medio nutriente segun la reivindicacion 1, caracterizado porque los monosacaridos y disacaridos se seleccionan de maltosa, dextrosa, sacarosa y fructosa.
  3. 3. Medio nutriente segun las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque estan contenidas adicionalmente de 1 a 10 partes de acido lactico o sus sales (lactatos) en cantidades molares equivalentes.
  4. 4. Medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el gel de medio nutriente puede conservarse a de 4 a 8 °C al menos durante 365 dfas.
  5. 5. Medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el agente formador de gel estable es goma gellan.
  6. 6. Medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 5, en el que a 20 °C la viscosidad asciende a de 2 a 100 mPas.
  7. 7. Medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el contenido en agentes formadores de gel estables asciende a < 0,5 % en peso.
  8. 8. Medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el contenido en agentes formadores de gel estables asciende a < 0,1 % en peso.
  9. 9. Uso de un medio nutriente segun una de las reivindicaciones 1 a 8 para el cribado microbiologico en la industria alimentaria, tal como por ejemplo en la industria de bebidas en la preparacion de bebidas sin alcohol y sus materias primas, en la industria de alimentos para animales, en la industria cosmetica y la industria farmaceutica asf como en el area del diagnostico.
  10. 10. Uso de un medio nutriente segun la reivindicacion 9 para el cribado microbiologico en el area de la produccion de cerveza.
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