ES2555557A2 - Fármaco y uso para preparar un medicamento destinado a la prevención de la infección del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA - Google Patents

Fármaco y uso para preparar un medicamento destinado a la prevención de la infección del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA Download PDF

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Abstract

Fármaco y uso para preparar un medicamento destinado a la prevención de la infección del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA. El fármaco comprende una forma activada potenciada de anticuerpos contra un antígeno que es una proteína o péptido del sistema inmune que interactúa con el VIH o que tiene un contenido y/o actividad funcional que cambia en relación con la infección del VIH. Además, la forma activada potenciada de anticuerpos contra un antígeno que es una proteína o péptido del sistema inmune que interactúa con el VIH o que tiene un contenido y/o actividad funcional que cambia en relación con la infección del VIH se usa para preparar un medicamento destinado a la prevención de la infección del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA.

Description

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DESCRIPCION
Farmaco y uso para preparar un medicamento destinado a la prevention de la infection del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA
Campo tecnico
La invention pertenece al campo de la medicina y puede ser usada para preparar un medicamento destinado a la prevencion eficaz de la infeccion del VIH, la prevencion y el tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA.
Tecnica anterior
La tecnica anterior incluye un farmaco para el tratamiento de enfermedades infecciosas, incluidas enfermedades virales, en base a la forma activada de dosis muy pequenas de anticuerpos anti-interferon (RU 2192888 C1, A61K39/395, 20.11.2002). Sin embargo, este farmaco puede no ser eficaz en la prevencion de la infeccion del VIH, como tampoco en la prevencion y tratamiento de un amplio espectro de enfermedades causadas por el VIH o asociadas con el VIH, incluido el SIDA.
Divulgacion de la invencion
La invencion esta dirigida al descubrimiento de un farmaco complejo sin marcados efectos adversos, que permita la prevencion eficaz de la infeccion del VIH, as! como la prevencion y el tratamiento eficaz de las enfermedades causadas por el VIH o asociadas al VIH, incluyendo infecciones e infestaciones, neoplasmas malignos y el SIDA en los sujetos positivos para el VIH.
La solution al problema planteado se basa en que el farmaco para la prevencion de la infeccion del VIH, y la prevencion y el tratamiento de enfermedades causadas por el VIH o asociadas con el VIH, incluido el SIDA, conforme a la invencion, contiene una forma activada - potenciada de anticuerpos contra un antlgeno - una protelna o peptido del sistema inmune o, principalmente, producido por el sistema inmune, el cual interactua con el VIH, o cuyo contenido y/o actividad funcional cambia en presencia del VIH.
Ademas es posible utilizar la forma activada - potenciada de anticuerpos dirigidos predominantemente contra el antlgeno disuelto (o contra el antlgeno soluble, es decir, el antlgeno, no unido a la membrana externa de las celulas del sistema inmune).
Las citoquinas (a exception del interferon gamma) se pueden usar como antlgenos solubles.
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Ademas, es posible usar tambien la forma activada - potenciada de anticuerpos dirigidos predominantemente contra el antigeno unido a la membrana externa de las celulas del sistema inmune.
Para esto, se usan los receptores de celulas inmunocompetentes en calidad de antigeno unido a la membrana externa de las celulas del sistema inmune.
Ademas, en calidad de antigeno undio a la membrana externa de las celulas del sistema inmune es posible usar los clusteres de diferenciacion, (a exception de las moleculas CD4 de los linfocitos T).
La forma activada - potenciada de anticuerpos contra antigenos disueltos o la forma activada - potenciada de anticuerpos contra antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune se usa en forma de solution acuosa o acuoso-alcoholica activada - potenciada, cuya actividad esta basada en el proceso de dilution multiple seriada de la solucion stock (inicial) de los anticuerpos en un disolvente acuoso o acuoso- alcoholico en combination con el impacto mecanico externo de agitation vertical despues de cada dilucion.
Para ello, el farmaco reivindicado puede ser disenado en forma solida de dosificacion de composition farmaceutica, la cual contiene la cantidad tecnologicamente necesaria (eficaz) del vehiculo neutro saturado con la mezcla de las soluciones acuosas o acuso- alcoholicas de las formas activadas - potenciadas de anticuerpos contra los antigenos disueltos o de la forma activada - potenciada de anticuerpos contra los antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune, y los excipientes farmaceuticamente aceptables, dentro de los cuales estan, por ejemplo, la lactosa, la celulosa microcristalina y el estearato de magnesio.
Las soluciones acuosas o acuoso-alcoholicas de las formas activadas - potenciadas de anticuerpos contra los antigenos disueltos o contra los antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune pueden ser obtenidas por dilucion multiple consecutiva de la solucion stock (inicial) de anticuerpos, en combinacion con el impacto mecanico externo de agitacion vertical despues de cada dilucion. La concentration de la solucion stock es 0,5 - 5,0 mg/ml.
La forma activada - potenciada de anticuerpos puede ser usada en forma de mezcla de mezcla de diluciones distintas, principalmente centesimales, por tecnologia homeopatica.
La solucion del problema planteado se asegura tambien por que en el modo de prevention de la infection del VIH y el tratamiento eficaz de las enfermedades causadas
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por el VIH o asociadas con el VIH, incluido el SIDA conforme a la invention, se usa la forma activada - potenciada de anticuerpos contra un antigeno (protema o peptido del sistema inmune, o producido predominantemente por el sistema inmune) que reacciona con el VIH o cuyo contenido y/o actividad funcional se altera por la infection del VIH.
La forma activada - potenciada de anticuerpos contra los antigenos disueltos o la forma activada - potenciada de anticuerpos a los antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune se usan en forma de solution acuosa o acuoso-alcoholica activada - potenciada de cada componente, cuya actividad esta condicionada por el proceso de dilution multiple de la solucion stock (inicial) de anticuerpos en un disolvente acuoso o acuso-alcoholico en combination con el impacto mecanico externo de agitation vertical despues de cada dilucion.
Las soluciones de las formas acuosas o acuoso-alcoholicas activadas - potenciadas de anticuerpos contra los antigenos disueltos o contra los antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune se obtienen preferentemente por medio de la dilucion multiple seriada de la solucion stock (inicial) de los anticuerpos, en combinacion con el impacto mecanico externo de agitacion vertical despues de cada dilucion; la concentration de la solucion stock es 0,5 - 5,0 mg/ml.
Conforme a la invencion, la forma activada - potenciada es una forma de anticuerpos preparada segun la tecnologia homeopatica de potenciacion por medio de la dilucion multiple seriada de la solucion stock (inicial) de anticuerpos en combinacion de la action externa de agitacion vertical para cada dilucion, la cual posee actividad en los modelos farmacologicos y/o en los metodos clmicos de prevention de la infeccion del VIH, la prevention y el tratamiento de enfermedades causadas por el VIH o enfermedades asociadas con el VIH, incluido el SIDA.
El uso propuesto de la forma activada - potenciada de anticuerpos contra antigenos disueltos (por ejemplo, contra el factor de necrosis tumoral alfa o el interferon alfa humano) o contra antigenos unidos a la membrana externa de las celulas del sistema inmune (por ejemplo, contra el receptor CD8) conduce al inesperado efecto terapeutico que consiste en una mayor eficiencia del farmaco, tanto en la prevencion de la infeccion del VIH, como en la prevencion y el tratamiento de enfermedades causadas por el VIH o asociadas con el VIH, incluido el SIDA.
Se ha confirmado experimentalmente que el farmaco reivindicado se caracteriza por una elevada eficacia preventiva respecto al VIH, previniendo la penetration en las celulas del virus de la inmunodeficiencia humana y su replication intracelular y, asi, puede usarse
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tanto para el tratamiento eficaz, asi como para la prevention de las enfermedades virales con tendencia a la evolution cronica, incluso para la prevencion secundaria de la infection del VIH.
Es posible el uso del farmaco reivindicado en combination con agentes antirretrovirales, incluidos agentes complejos como los inhibidores de la transcriptasa inversa (por ejemplo, derivados de zidovudina), lo que permite reducir la dosis de los agentes antirretrovirales manteniendo la alta eficacia de la terapia y reduce la tasa de efectos indeseados.
Realizaciones de la invention
El farmaco se prepara, principalmente, del siguiente modo.
Para la preparation de la forma activada - potenciada de los componentes activos se usan anticuerpos monoclonales o, principalmente, policlonales, los cuales pueden ser obtenidos por tecnologias conocidas, en particular, las tecnicas descritas, por ejemplo, en el libro: Immunological methods, en la edition G. Frimel, M., “Meditsyna”, 1987, p. 9-33 [Ruso]; o en el articulo de Laffly E., Sodoyer R. “Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after’ - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55.
Los anticuerpos monoclonales se obtienen, por ejemplo, mediante la tecnologia de los hibridomas. En ella, la fase inicial del proceso incluye la inmunizacion, basada en principios ya desarrollados para la preparacion de los antisueros policlonales. Las posteriores etapas del proceso implican la obtencion de celulas de hibridomas, productoras de clones de anticuerpos de la misma especificidad. Su separation se realiza con los mismos metodos que se utilizan para obtener los antisueros policlonales.
Los anticuerpos policlonales pueden ser obtenidos por la inmunizacion activa de animales. Para esto, se administra a los animales, siguiendo un esquema especialmente elaborado, una serie de inyecciones de la sustancia requerida segun la invencion - el antigeno o el antigeno conjugado (la protema o el peptido del sistema inmune o, principalmente producido por el sistema inmune, que reacciona con el VIH o cuyo contenido y/o la actividad funcional se altera por la infeccion del VIH). Como resultado de la realization de tal procedimiento se obtiene un antisuero monoespedfico con un alto contenido de anticuerpos, el cual es usado para obtener la forma activada - potenciada. En caso necesario se realiza la purification de los anticuerpos existentes en el antisuero, por ejemplo, por metodos de cromatografia de afinidad, fraccionamiento con sales o cromatografia de intercambio ionico.
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Por ejemplo, para la preparacion del farmaco reivindicado pueden ser usados anticuerpos policlonales contra el factor de necrosis tumoral alfa, los cuales se usan como una solucion primaria o stock (inicial) (concentration de 0,5 - 5,0 mg/ml), para la posterior preparacion de la forma activada - potenciada.
Para la preparacion del farmaco reivindicado se usan, preferiblemente, anticuerpos policlonales, que pueden ser obtenidos por la inmunizacion de los conejos, del modo siguiente.
Por ejemplo, los anticuerpos policlonales contra el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) pueden ser obtenidos con el uso de moleculas enteras del factor del TNF-a con la secuencia siguiente:
1 MSTESMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGATTLFCL LHFGVIGPQR
61 EEFPRDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR
121 DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL
SAIKSPCQRE
181 TPEGAEAKPW YEPIYLGGVF QLEKGDRLSA EINRPDYLDF AESGQVYFGIIAL
Para la obtencion de los anticuerpos policlonales contra el factor de necrosis tumoral - alfa (TNF-a) es posible el uso de un fragmento polipeptidico del factor de necrosis tumoral alfa seleccionado, por ejemplo, de las secuencias siguientes:
PSDKP
93-97:
VANPQ
65-199:
RDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEGAEAKPW YEPIYLGGV
77-93:
RSS SRTPSDKPVA HVV
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32-54:
GGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGA 56-73:
IGPQR EEFPRDLSLI SPL 123- 160:
QLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA 176-190:
PCQRE TPEGAEAKPW 5- 45:
SMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSL 150-184:
V LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEG 77-233:
VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGV
ELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQ
TKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSA
EINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL.
Antes de la extraccion de sangre, durante 7 - 9 dias se realiza 1-3 inyecciones intravenosas para aumentar el nivel de anticuerpos. Durante el proceso de inmunizacion, a los conejos se les extrae pequenas muestras de sangre para la valoracion de la cantidad de anticuerpos. El nivel maximo de respuesta inmune a la administration de la mayoria de antigenos es alcanzado en 40-60 dias despues de la primera inyeccion. Despues de finalizar el primer ciclo de inmunizacion de los conejos, se deja restablecer su salud durante 30 dias y se realiza la reinmunizacion, la cual incluye las 1-3 inyecciones intravenosas. Para la obtencion del antisuero de los conejos inmunizados se recoge sangre en un tubo de centrifuga de 50 ml de volumen. Con ayuda de una espatula de madera se quita de las paredes del tubo los coagulos que se han formado y se coloca la espatula en el coagulo formado en el centro del tubo. La sangre se coloca en el refrigerador (temperatura 4°C) durante una noche. Al dia siguiente se quita el coagulo que se ha pegado a la espatula, y el liquido restante se centrifuga a 13000g durante 10
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minutos. El sobrenadante (el Kquido sobre el precipitado) es el antisuero. El antisuero obtenido debe ser de color amarillo. Se puede anadir 20% de NaN3 al antisuero hasta la concentration final de 0,02% y se deberia conservar congelado hasta su utilization a - 20°C de temperatura (o sin adicion de NaN3 a -70°C de temperatura). La separation de los anticuerpos del antisuero contra el factor de necrosis tumoral - alfa se puede hacer del modo siguiente:
1. Se disuelve 10 ml del antisuero de conejo en 2 veces 0,15 M NaCl, se anade 6,26 g de Na2SO4, se mezcla y se incuba durante 12-16 h a 4°C;
2. Se quita el precipitado formado por medio de la centrifugation, se disuelve en 10 ml de tampon fosfato y luego se dializa contra el mismo tampon durante una noche a temperatura ambiente;
3. Despues de quitar el sedimento por medio de la centrifugacion, se lleva la solution a la columna con DEAE-celulosa, equilibrada con el tampon fosfato;
4. La fraction de anticuerpos se determina midiendo la densidad optica del eluato a 280 nm.
La purification de los anticuerpos se realiza por el metodo de cromatografia de afinidad en la columna con el antigeno, por medio de la union de los anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa con el antigeno (factor de necrosis tumoral alfa), conectado a la matriz insoluble de la columna, con su posterior elucion de los anticuerpos mediante soluciones concentradas de sal.
La solucion tampon obtenida de esta manera, de anticuerpos policlonales contra el factor de necrosis tumoral alfa con concentracion de 0,5 - 5,0 mg/ml, preferiblemente 2,0 + 3,0 mg/ml es usada como solucion matriz (inicial) para la posterior preparation de la forma activada - potenciada de los anticuerpos.
Los anticuerpos policlonales contra el interferon alfa humano se obtienen por el metodo arriba indicado, usando en calidad de inmunogeno (antigeno) para la inmunizacion de los conejos el adyuvante y la molecula entera de interferon alfa humano de una de las siguientes secuencias:
Interferon alfa humano (subtipo 2):
MALTFALLVA LLVLSCKSSC SVGCDLPQTH SLGSRRTLML LAQMRKISLF SCLKDRHDFG
FPQEEFGNQF QKAETIPVLH EMIQQIFNLF STKDSSAAWD ETLLDKFYTE LYQQLNDLEA
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CVIQGVGVTE TPLMKEDSIL AVRKYFQRIT LYLKEKKYSP
CAWEVVRAEIMRSFSLSTNL
QESLRSKE
Interferon alfa humano (subtipo 1/13): MASPFALLMV LVVLSCKSSC SLGCDLPETH SLDNRRTLML L AQMSRISPS SCLMDRHDFG
FPQEEFDGNQ FQKAPAISVL HELIQQIFNL FTTKDSSAAW DEDLLDKFCT ELYQQLNDLE
ACVMQEERVG ETPLMNADSILAVKKYFRRI TLYLTEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSLSLSTN
LQERLRRKE
Interferon alfa humano (subtipo 17):
MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL LAQMGRISPF SCLKDRHDFG
LPQEEFDGNQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW EQSLLEKFST ELYQQLNNLE
ACVIQEVGME ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS
PCAWEVVRAEIMRSLSFSTN
LQKILRRKD
Interferon alfa humano (subtipo 4):
MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL LAQMGRISHF SCLKDRHDFG
FPEEEFDGHQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW EQSLLEKFST ELYQQLNDLE
ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN
LQKRLRRKD
Interferon alfa humano (subtipo 8):
MALTFYLLVA LVVLSYKSFS SLGCDLPQTH SLGNRRALIL LAQMRRISPF SCLKDRHDFE
FPQEEFDDKQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSAAL DETLLDEFYIELDQQLNDLE
SCVMQEVGVI ESPLMYEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS
SCAWEVVRAE IMRSFSLSIN
LQKRLKSKE
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Interferon alfa humano (subtipo 7):
MARSFSLLMV VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLRNRRALIL LAQMGRISPF SCLKDRHEFR
FPEEEFDGHQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW EQSLLEKFST ELYQQLNDLE
ACVIQEVGVE ETPLMNEDFI LAVRKYFQRI TLYLMEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSFSFSTN
LKKGLRRKD
Interferon alfa humano (subtipo 21):
MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL LAQMGRISPF SCLKDRHDFG
FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW EQSLLEKFST ELNQQLNDLE
ACVIQEVGVE ETPLMNVDSI LAVKKYFQRI TLYLTEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSFSLSKI
FQERLRRKE
Interferon alfa humano (subtipo 10):
MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL LGQMGRISPF SCLKDRHDFR
IPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW EQSLLEKFST ELYQQLNDLE
ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLIERKYS
PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN
LQKRLRRKD
Interferon alfa humano (subtipo 14):
MALPFALMMA LVVLSCKSSC SLGCNLSQTH SLNNRRTLML MAQMRRISPF SCLKDRHDFE
FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMMQQTFNL FSTKNSSAAW DETLLEKFYIELFQQMNDLE
ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVKKYFQRI TLYLMEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN
LQKRLRRKD
Interferon alfa humano (subtipo 5):
MALPFVLLMA LVVLNCKSIC SLGCDLPQTH SLSNRRTLMI MAQMGRISPF SCLKDRHDFG
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FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW DETLLDKFYT ELYQQLNDLE
ACMMQEVGVE DTPLMNVDSILTVRKYFQRI TLYLTEKKYS
PCAWEVVRAE IMRSFSLSAN
LQERLRRKE
Para la obtencion de los anticuerpos policlonales contra el interferon alfa humano es posible el uso de adyuvante y, por ejemplo, un fragmento polipeptido de interferon alfa humano, como el inmunogeno (antigeno) para la inmunizacion de los conejos.
Los anticuerpos policlonales contra el receptor CD8 se obtienen por el metodo arriba indicado, usando como inmunogeno (antigeno) para la inmunizaion de los conejos un adyuvante y la molecula entera del receptor CD8 con la siguiente secuencia de aminoacidos:
1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP
61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN
121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA
181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV.
Para la obtencion de anticuerpos policlonales contra el receptor CD8 es posible el uso, como inmunogeno (antigeno) para la inmunizacion de los conejos, de un adyuvante y, por ejemplo, un fragmento polipeptido del receptor CD8 escogido de las siguientes secuencias:
11-30:
PLALLLHAAR PSQFRVSPLD;
81-100:
AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL;
121-140:
SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT;
201-210:
VITLYCNHRN;
221-235:
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VVKSGDKPSL SARYV
Para la preparation del farmaco se usa preferentemente la mezcla de tres diluciones acuoso-alcoholicas de la solution matriz primaria de los anticuerpos diluidos en 10012, 10030 y 100200 veces, respectivamente, lo que se corresponde con las diluciones centesimales C12, C30 y C200, preparadas por tecnolog^a homeopatica. Durante la realization del farmaco reivindicado en su forma solida medicinal se lleva la mezcla de componentes indicados a un vehiculo neutro.
La forma activada - potenciada de cada componente se prepara por medio de la reduction uniforme de la concentration como resultado de la dilution consecutiva de 1 parte de cada solucion sometida a dilucion, comenzando con la solucion matriz mencionada, en 9 partes (para la dilucion decimal D) o en 99 partes (para la dilucion centesimal C) o en 999 partes (para la dilucion milesimal M) del disolvente neutro en combination de la agitation vertical repetida (potenciacion, o "dinamizacion") de cada dilucion obtenida y el uso de recipientes independientes para cada dilucion consecutiva hasta obtener la potencia necesaria - multiplicidad de la dilucion por el metodo homeopatico (vease, por ejemplo, W. Schwabe "Homeopathic medicinal preparations", M, 1967, p. 14-29).
El tratamiento externo durante el proceso de reduccion de la concentracion tambien se puede realizar por ultrasonido, electromagnetismo o cualquier otra action fisica.
Por ejemplo, para la preparacion de la 12a dilucion centesimal C12, se diluye una parte de la solucion matriz (primaria) de los anticuerpos, por ejemplo contra el factor de necrosis tumoral alfa con la concentracion de 2,5 mg/ml en 99 partes de agua neutra o de un disolvente acuoso-alcoholico y se agita verticalmente repetidamente (10 y mas veces) - se produce la potenciacion, obteniendose la primera dilucion centesimal C1. De esta 1a dilucion centesimal C1 se prepara la 2a dilucion centesimal C2. Esta operation se repite 11 veces, obteniendo la 12a dilucion centesimal C12. Asi, la 12a dilucion centesimal C12 es la solucion obtenida por dilucion consecutiva diluyendo una 1a parte de la solucion matriz primaria, que es la solucion de anticuerpos contra el interferon gamma humano con la concentracion de 2,5 mg/ml, en 99 partes de disolvente neutro 12 veces consecutivas en recipientes diferentes, es decir la solucion obtenida por dilucion de la solucion matriz 10012 veces. Se realizan operaciones analogas con la multiplicidad de diluciones correspondientes para obtener las diluciones C30 y C 50.
En el uso, por ejemplo, de la forma activada - potenciada de anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral - alfa en forma de mezcla de distintas diluciones, principalmente
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centesimales, cada dilucion (por ejemplo, C 12, C30, C50) se prepara individualmente por la tecnologia descrita anteriormente hasta la dilucion de 3 diluciones menos que la final (para la obtencion de C9, C27, C47, respectivamente), y luego se lleva una parte de cada componente, de acuerdo a la composition de la mezcla, a un recipiente y se mezcla con la cantidad necesaria de disolvente (con 97 partes para la dilucion centesimal, respectivamente). Luego la mezcla obtenida se diluye dos veces consecutivamente en la proportion de 1 a 100, potenciando la solution obtenida despues de cada dilucion. Con ello se obtiene la forma activada - potenciada de los anticuerpos, por ejemplo, contra el interferon gamma humano en dosis ultrabajas, obtenidas por la dilucion de la solucion matriz 10012, 10030, 10050 veces, lo que es equivalentes a la mezcla de las diluciones centesimales C12, C30, C50.
Es posible el uso de cada componente por separado en forma de mezcla de otras distintas diluciones, por ejemplo, decimales y/o centesimales, (D 20, C 30, C 100 o C12, C30, C200, etc.), preparadas por tecnologia homeopatica, cuya eficacia se determina experimentalmente.
Para obtener la forma solida de administration oral del farmaco reivindicado se realiza el proceso de irrigation en la instalacion de lecho fluidizado (por ejemplo, del tipo de “Huttlin Pilotlab” producido por la compania Huttlin GmbH) hasta la saturation de los granulos de la sustancia neutra que son inyectados en el lecho pseudo-fluidizado hirviente; la sustancia es lactosa (el azucar de la leche) con 50 * 500 ^m de dimension de las particulas, previamente obtenidas mediante la solucion acuosa o acuoso-alcoholica de la forma activada - potenciada de los anticuerpos contra el receptor CD4, principalmente, en proporcion de 1 kg de solucion de anticuerpos en 5 o 10 kg de lactosa (1:5 - 1:10) con secado simultaneo en el flujo de aire caliente suministrado bajo la rejilla a una temperatura no mayor de 40°C. La cantidad calculada de lactosa (10 * 91% de la masa del comprimido), saturada con la forma activada - potenciada de los anticuerpos por la metodologia arriba indicada, se carga en el mezclador y se mezcla con la lactosa, humedecida con la forma activada - potenciada de los anticuerpos, en la cantidad de 3 - 10% de la masa del comprimido y con la lactosa pura en cantidad no mayor al 84% de la masa del comprimido (para reducir los costes y simplificar y acelerar el proceso tecnologico sin reducir la eficacia medicinal). Luego, se anade a la mezcla la celulosa microcristalina en la cantidad de 5 + 10% de la masa del comprimido y el estearato de magnesio en la cantidad de 1% de la masa del comprimido. La masa de comprimido obtenida es mezclada uniformente y comprimida por compresion directa en seco (por ejemplo, en la comprimidora Korsch - XL 400). Despues de la formation de comprimidos
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se obtienen comprimidos de 300 mg de masa saturados de la solucion acuoso-alcoholica de la forma activada - potenciada de los anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa en dosis ultrabajas de cada componente preparadas a partir de la solucion matriz, diluida 10012, 10030, 10050 veces, lo que es equivalente a la mezcla de las diluciones centesimales C12, C30 y C50, preparadas segun la tecnolog^a homeopatica.
Se recomienda ingerir preferentemente de 1-2 comprimidos del farmaco reivindicado 2-4 veces al dia.
Ejemplo 1.
La accion antirretroviral del farmaco reivindicado fue estudiada, inhibiendo la replication del VIH en el cultivo de las celulas mononucleares de sangre periferica humana, infectadas in vitro con la cepa VIH-1-LAI. La eficacia de la inhibition de la replicacion del VIH fue valorada por el contenido de la protema basica de la nucleocapsida del VIH p24 en los sobrenadantes.
Para la realization de los estudios experimentales fueron usados los anticuerpos policlonales de conejo anti-factor de necrosis tumoral alfa purificados por afinidad, preparados por encargo por una empresa biotecnologica especializada, que fueron la base para preparar la forma activada - potenciada de las diluciones acuosas de anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa en la dosis ultrabaja, obtenidas utilizando la tecnologia homeopatica mediante la superdilucion de la solucion matriz primaria (concentration de 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 10050 veces, lo que es equivalente a la mezcla de las diluciones homeopaticas centesimales C12, C30, C50 (en adelante: DUB AC anti-TNF alfa). La valoracion de la actividad antivrnca del complejo preparado se realizo con el uso de las celulas mononucleares de sangre periferica humana que fueron infectadas in vitro con la cepa VIH-1-LAI.
Las celulas mononucleares de sangre periferica humana fueron aisladas de la sangre de un donante sano seronegativo por centrifugation en un gradiente de densidad de Ficoll- Hypaque. Las celulas se estimularon durante 3 dias con el uso de 1 ^g/ml de fitohemaglutinina P y 5 Ul/ml de interleuquina humana recombinante.
A fin de evaluar la actividad antirretroviral, las preparaciones se colocaron en un pocillo que contema 100 ^l de celulas mononucleares activadas de sangre periferica humana, o bien 24 horas antes o 15 minutos despues de la infection de las celulas con la cepa VIH- 1-LAI a una dosis de 100 TCID50 (50 ^l de inoculo de la cepa VIH-1-LAI). Antes de colocarlo en el pocillo, la DUB AC anti-TNF-alfa (12,5 ^l) o azidotimidina (sustancia activa
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- zidovudina) a una concentration 1000 nM (la preparation control) se mezclaron con el medio RPMI1640 (DIFCO) hasta alcanzar el volumen final de 50 ^l.
Los sobrenadantes de los cultivos celulares se recogieron en el dia 7 despues de la infection de las celulas. La eficacia de los productos se definio a partir de la inhibition de la replication del VIH, que fue evaluada por el contenido de la protema basica de la nucleocapsida del VIH p24 en los sobrenadantes de las celulas utilizando el metodo de ELISA (kit de ELISA Retrotek).
Se ha visto que la DUB AC anti-TNF-alfa inhibe la replicacion del VIH en 92 ± 3% cuando se anade al recipiente 24 horas antes, y en 13 ± 13% cuando se anade al recipiente 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI, respectivamente. La azidotimidina en la dosis de 1000 nM inhibio la replicacion del VIH en 99 ± 0 y 99 ± 1%, respectivamente, cuando se anadio 24 horas antes y 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI.
Asi, el estudio in vitro ha mostrado la alta actividad antirretroviral del preparado reivindicado en base a la forma activada - potenciada de los anticuerpos policlonales de conejo contra el TNF alfa.
Nota: TCID50 es la dosis que infecta el 50% de las celulas del cultivo de tejido.
Ejemplo 2.
La action antirretroviral del farmaco reivindicado fue estudiada, inhibiendo la replicacion del VIH en el cultivo de las celulas mononucleares de sangre periferica humana, infectadas in vitro con la cepa VIH-1-LAI. La eficacia de la inhibicion de la replicacion del VIH fue valorada por el contenido de la protema basica de la nucleocapsida del VIH p24 en los sobrenadantes.
Para la realization de los estudios experimentales fueron usados los anticuerpos policlonales de conejo contra el CD8 purificados por afinidad, preparados por encargo por una empresa biotecnologica especializada, que fueron la base para preparar la forma activada - potenciada de las diluciones acuosas de anticuerpos contra el CD8 en dosis ultrabaja, obtenidas utilizando la tecnologia homeopatica mediante la superdilucion de la solution matriz primaria (concentracion de 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 10050 veces, lo que es equivalente a la mezcla de las diluciones homeopaticas centesimales C12, C30, C50 (en adelante: DUB AC CD8).
La valoracion de la actividad antivmca del complejo preparado se realizo con el uso de
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las celulas mononucleares de sangre periferica humana que fueron infectadas in vitro con la cepa VIH-1-LAI. Las celulas mononucleares de sangre periferica humana fueron aisladas de la sangre de un donante sano seronegativo por centrifugacion en un gradiente de densidad de Ficoll-Hypaque. Las celulas se estimularon durante 3 dias con el uso de 1 ^g/ml de fitohemaglutinina P y 5 Ul/ml de interleuquina-2 humana recombinante.
A fin de evaluar la actividad antirretroviral, las preparaciones se colocaron en un pocillo que contema 100 ^l de celulas mononucleares activadas de sangre periferica humana, o bien 24 horas antes o 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH- 1-LAI a una dosis de 100 TCID50 (50 ^l de inoculo de la cepa VIH-1-LAI). Antes de colocarlo en el pocillo, la DUB AC CD8 (12,5 ^l) o azidotimidina (sustancia activa - zidovudina) a una concentration 1000 nM (la preparation control) se mezclaron con el medio RPMI1640 (DIFCO) hasta alcanzar el volumen final de 50 ^l.
Los sobrenadantes de los cultivos celulares se recogieron en el dia 7 despues de la infeccion de las celulas. La eficacia de los productos se definio a partir de la inhibition de la replication del VIH, que fue evaluada por el contenido de la protema basica de la nucleocapsida del VIH p24 en los sobrenadantes de las celulas utilizando el metodo de ELISA (kit de ELISA Retrotek).
Se ha mostrado que la DUB AC CD8 inhibe la replicacion del VIH en 87 ± 11% cuando se anade al recipiente 24 horas antes, y en 40 ± 4% cuando se anade al recipiente 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI, respectivamente. La azidotimidina en la dosis de 1000 nM inhibio la replicacion del VIH en 99 ± 0 y 99 ± 1%, respectivamente, cuando se anadio 24 horas antes y 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI.
Asi, el estudio in vitro ha mostrado una alta actividad antirretroviral de las dosis ultrabajas de los anticuerpos policlonales de conejo contra el CD8.
Nota: TCID50 - dosis que infecta el 50% de las celulas del cultivo de tejido.
Ejemplo 3
La actividad antirretroviral de las formas activadas-potencias de las diluciones acuosas de anticuerpos policlonales de conejo purificados por afinidad dirigidos contra el interferon alfa en dosis ultrabajas (DUB), obtenidas utilizando la tecnologia homeopatica mediante la superdilucion de la solution matriz primaria (concentracion de 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 10050 veces, lo que es equivalente a la mezcla de las diluciones homeopaticas
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centesimales C12, C30, C50 (en adelante: DUB AC anti-IFN-a) se evaluo con el uso de las celulas mononucleares de sangre periferica humana que fueron infectadas in vitro con la cepa VIH-1-LAI. Como preparation control se uso azidotimidina.
Las celulas mononucleares de sangre periferica humana fueron aisladas de la sangre de un donante sano seronegativo por centrifugation en un gradiente de densidad de Ficoll- Hypaque. Las celulas se estimularon durante 3 dias con el uso de 1 ^g/ml de fitohemaglutinina P y 5 Ul/ml de interleuquina-2 humana recombinante.
Las celulas se infectaron con la cepa del VIH-1-LAI, colocando 50 ^l de inoculo de la cepa del VIH-1-LAI que corresponden a una dosis de 100 TCID50 (dosis que infecta 50% de las celulas del cultivo de tejido).
A fin de evaluar la actividad antirretroviral, la preparacion DUB AC anti-IFN-a y la preparacion control de azidotimidina se colocaron en un pocillo que contenia 100 ^l de celulas mononucleares activadas de sangre periferica humana, o bien 24 horas antes o 15 minutos despues de la infection de las celulas con la cepa VIH-1-LAI. Antes de colocarla en el pocillo, la preparacion de DUB AC anti-IFN-a (12,5 ^l) y la preparacion de azidotimidina a una concentration 1000 nM se mezclaron con el medio RPMI1640 (DIFCO) hasta alcanzar el volumen final de 50 ^l.
Los sobrenadantes de los cultivos celulares se recogieron en el dia 7 despues de la infeccion. La eficacia de las preparaciones se definio a partir de la inhibition de la replication del VIH, que fue evaluada por el contenido de la protema basica de la nucleocapsida del VIH p24 en los sobrenadantes de las celulas utilizando el metodo de ELISA (kit de ELISA Retrotek).
Se ha mostrado que la DUB AC anti-IFN-a inhibe la replicacion del VIH en 95 ± 2% cuando se anade al recipiente 24 horas antes, y en 59 ± 14% cuando se anade al recipiente 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI, respectivamente. La azidotimidina en la dosis de 1000 nM inhibio la replicacion del VIH en 99 ± 0 y 99 ± 1%, respectivamente, cuando se anadio 24 horas antes y 15 minutos despues de la infeccion de las celulas con la cepa VIH-1-LAI.
Asi, el estudio in vitro ha mostrado la alta actividad antirretroviral de la preparacion DUB AC anti-IFN-a..

Claims (7)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un farmaco caracterizado por que contiene la forma activada - potenciada de anticuerpos contra una protelna o peptido del sistema inmune que interactua con el VIH o cuyo contenido y/o actividad funcional cambia debido a la infeccion del VIH, que es el factor de necrosis tumoral alfa.
  2. 2. El farmaco segun la reivindicacion 1, caracterizado por que esta en forma solida de composition farmaceutica, la cual contiene una cantidad tecnologicamente necesaria de vehlculo neutro saturado con la mezcla de soluciones acuosas o acuoso-alcoholicas de la forma activada - potenciada de los anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa, y excipientes farmaceuticos aceptables.
  3. 3. El farmaco segun la reivindicacion 2, caracterizado por que entre los excipientes farmaceuticos aceptables se incluye la lactosa, la celulosa microcristalina y el estearato de magnesio.
  4. 4. Un metodo para la preparation de un farmaco segun la reivindicacion 1, caracterizado por que la forma activada - potenciada de los anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa, se prepara en forma de solution acuosa o acuoso-alcoholica activada-potenciada, cuya actividad se obtiene por el proceso de dilution multiple consecutiva de la solucion matriz inicial de los anticuerpos en un disolvente acuoso o acuoso-alcoholico en combination con la action mecanica externa de agitation vertical de cada dilucion.
  5. 5. El metodo segun la reivindicacion 4, caracterizado por que las soluciones acuosas o acuoso-alcoholicas de las formas activadas - potenciadas de los anticuerpos contra el factor de necrosis tumoral alfa son obtenidas por medio de la dilucion multiple consecutiva de la solucion matriz inicial de anticuerpos, en combinacion con el impacto mecanico externo de agitacion vertical despues de cada dilucion, donde la concentration de la solucion matriz es de 0,5 - 5,0 mg/ml.
  6. 6. El metodo segun la reivindicacion 5, caracterizado por que las soluciones acuosas o acuoso-alcoholicas de las formas activadas - potenciadas de los anticuerpos se preparan como mezcla de diluciones distintas, principalmente centesimales, preparadas por tecnologla homeopatica.
  7. 7. Uso de un farmaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para preparar un medicamento destinado a la prevention de la infeccion del VIH y al tratamiento de las enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA.
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