ES2556631T3 - Composiciones y métodos para obtener células para tratar tejido cardíaco - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende TGß-1, BMP4, α-trombina, Cardiotrofina, Cardiogenol C, FGF-2, IGF-1 y la Activina A.

Description

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hMSC sin modificaciones o de simulación tuvieron un impacto limitado en la fracción de eyección. Un asterisco y dos asteriscos indican un p < 0.01 con respecto a hMSC sin modificación para los dos puntos de tiempo.

En corazones tratados con células cardiopoyéticas derivadas de hMSC, la mejora funcional se correlaciona a los tres meses y 18 meses de evaluación histopatológica con la regeneración del miocardio. Los aneurismas y cicatrices, que permanecieron sin corregir en los corazones tratados con hMSC sin modificaciones, se resolvieron con el tratamiento de hMSC cardiopoyéticas que indujeron remuscularización (figura 13).

Una evaluación patológica general demostró la resolución de las cicatrices más debajo de la ligación de la arteria descendente anterior izquierda (LAD) (círculo amarillo en los corazones) con, en sección transversal, remuscularización robusta y remodelación disminuida en corazones infartados tratados con hMSC cardiopoyéticas (CP, derecha) en contraste con el que están sin modificación (izquierda) a los 6 meses después del inicio del tratamiento. Estos resultados son particularmente buenos.

El sondeo para ADN ALU se realizó utilizando una sonda de ALU humana (Biogenex, San Ramon, CA) mediante hibridación a 85ºC durante 5-10 minutos e incubaciones a 37ºC durante la noche seguido por detección secundaria marcada con GFP anti-fluoresceína.

La resolución confocal reveló, en el miocardio de murino tratado con CP-hMSC, una presencia extendida de células derivadas de humano con tinción positiva para secuencias de ADN ALU especificas para la especie humana validadas con inmunocoloración con lamina específica humana, todas ausentes en controles infartados (figura 14).

En contraste con la simulación (izquierda), los corazones tratados con hMSC cardiopoyéticas en evaluación por microscopía confocal reveló la presencia dramática de núcleos humanos como los teñidos por una sonda de ADN h-ALU humana (en la mitad) incrustada dentro del miocardio infartado de murino, confirmado además con una tinción adicional para un anticuerpo de lamina específica humana (derecha, recuadro mostrado en la figura 14). Las secciones congeladas de miocardio se elaboraron a partir de paraformaldehído al 3% súper oxigenado en corazones fijados por perfusión de PBS. La barra indica 50 µM. La figura 15 muestra que el anticuerpo troponina-l especifica humana no reveló tinción en células sin modificaciones (izquierda) versus una tinción significativa en la pared anterior de los corazones tratados con hMSC cardiopoyéticas (paneles medio y derecho).

Además, como se muestra en la figura 16, la tinción con troponina-l humana de corazones tratados con hMSC sin modificaciones (parte superior) versus cardiopoyéticas (parte inferior), teñidas con colorante de contraste mlC2v, demostró la generación del miocardio ventricular a partir de células humanas injertadas. Las barras indican 20 µm (parte superior) y 50 µm (parte inferior).

Como se ilustra en la figura 17, dentro de la cicatriz restante de células cardiopoyéticas derivadas de corazones tratados con hMSC, el miocardio derivado de células madre humanas podía distinguirse del miocardio nativo de murino con colocalización de troponina humana con mlC2V. La barra indica 50 µm.

En la figura 18, la microscopía superficial detectó angiogénesis distal para la LAD ligada (circulo negro) en corazones tratados con CP-hMSC que surgen de la arteria coronaria derecha (RCA; parte inferior izquierda) y circunflejo (parte inferior derecha).

La figura 19, muestra la evaluación confocal de vasos colaterales de corazones tratados con hMSC cardiopoyéticas, que demostraron tinción con CD-31 humano específica (PECAM-1). La barra representa 20 µm.

La figura 20, muestra la evolución del cambio de la fracción de eyección con relación a la simulación en %, durante 12 meses, para el tratamiento tanto con hMSC guiadas por cóctel (CP) como sin modificaciones. Con relación a la simulación, el tratamiento con hMSC sin modificaciones mostró un efecto de fracción de eyección del 5% y 2.5% a los 6 y 12 meses, respectivamente.

En contraste, los ratones infartados tratados con CP-hMSC demostraron una mejora significativa de la fracción de eyección del 25% a los 6 y 12 meses con relación a la simulación (figura 20). Además, la cohorte infartada se estratificó para evaluar la eficacia en los subgrupos con una deficiencia cardiaca manifiesta documentada (fracción de eyección <45%) al momento de la intervención. A pesar de la fracción de eyección equivalente previa al tratamiento del 35%, sólo el tratamiento con hMSC cardiopoyéticas mejoró la fracción de eyección absoluta en un 10% a los 6 y 12 meses, en contraste con una declinación del 5% en la fracción de eyección en la cohorte tratada con hMSC sin modificaciones (figura 23). Como se muestra en la figura 22, se determinó un beneficio de supervivencia superior en el grupo tratado con hMSC cardiopoyéticas en contraste con la cohorte tratada con células sin modificaciones y la simulación, a través de la aplicación de la función de Kaplan-Meier con limitación de observaciones.

La eficacia del hMSC cardiopoyéticas (CP) se demostró mediante ecocardiografía al primer año de seguimiento (véase la figura 25). La formación de imágenes de eje largo de corazones tratados con células madre sin

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Claims (1)

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