ES2556951T3 - Polisacárido ramno del complejo clonal 17 de Enterococcus faecium y usos del mismo - Google Patents

Polisacárido ramno del complejo clonal 17 de Enterococcus faecium y usos del mismo Download PDF

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ES2556951T3 ES11004387.4T ES11004387T ES2556951T3 ES 2556951 T3 ES2556951 T3 ES 2556951T3 ES 11004387 T ES11004387 T ES 11004387T ES 2556951 T3 ES2556951 T3 ES 2556951T3
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Abstract

Un antígeno polisacárido ramno de complejo clonal de Enterococcus faecium, que comprende una estructura antigénica de la siguiente fórmula → 2)-α-L-Rhap-(1 → 3)-α-L-Rhap-(1 → 3)-α-L-Rhap-(1 → en donde Rha se selecciona de ramnosa, y en donde opcionalmente al menos un grupo -OH está reemplazado por - OW, en donde W se selecciona de acetilo, alquilo C1 a C12 lineal o ramificado y alquenilo C1 a C12 lineal o ramificado; y sales o solvatos del mismo, para uso en el tratamiento de enfermedades

Description

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DESCRIPCION
Polisacarido ramno del complejo clonal 17 de Enterococcus faecium y usos del mismo
La presente invencion se refiere a un antigeno de polisacarido ramno del complejo clonal 17 de Enterococcus faecium que es util como un componente de vacuna para la terapia y/o profilaxis de la infeccion bacteriana.
Antecedentes de la invencion
Los enterococos se encuentran entre los patogenos mas importantes asociados con las infecciones nosocomiales. Especialmente, E. faecium han adquirido multiples resistencias a antibioticos y son a menudo resistentes a la vancomicina, un antibiotico de ultimo recurso contra las bacterias Gram-positivas multi-resistentes. Ademas, se ha demostrado que el determinante de la resistencia a la vancomicina puede ser transferido de E. faecium al Staphylococcus aureus mucho mas virulento (Chang et al. Infection with vancomycin-resistant Staphylococcus aureus containing the vanA resistance gene. N Engl J Med (2003) vol. 348 (14) pags. 1342-7). Linajes espedficos tales como el "complejo clonal" 17, se han asociado con brotes hospitalarios de E. faecium resistente a vancomicina en todo el mundo (Willems et al. Global spread of vancomycin-resistant Enterococcus faecium from distinct nosocomial genetic complex. Emerging Infect Dis (2005) vol. 11(6) pags. 821-8) y estas cepas parecen estar adaptado particularmente bien a la configuracion de hospital.
Si bien existe cierta informacion limitada en relacion con la presencia y composicion de polisacaridos capsulares en E. faecalis, casi nada se sabe acerca de los hidratos de carbono de la superficie en E. faecium. Huebner et al. (Huebner et al. Isolation and chemical characterization of a capsular polysaccharide antigen shared by clinical isolates of Enterococcus faecalis and vancomycin-resistant Enterococcus faecium. Infect Immun (1999) vol. 67 (3) pags. 1213-9) podnan demostrar que algunas cepas de E. faecium parecen estar no encapsuladas y son exterminadas con eficacia mediante sueros generados contra acido lipoteicoico. Sin embargo, una mayona de las cepas parece poseer una capsula y son resistentes a la muerte debido a los anticuerpos generados contra acidos lipoteicoicos (LTA) de enterococos (observacion no publicada).
Puesto que virtualmente a menudo no hay antibioticos disponibles para tratar a pacientes con infecciones por VRE, el desarrollo de opciones alternativas de tratamiento es de suma importancia. Es por tanto objeto de la presente invencion proporcionar antfgenos nuevos y eficaces, y en particular antfgenos polisacaridos (PS), con el fin de desarrollar nuevas vacunas prometedoras para una inmunoterapia activa o pasiva de las bacterias y, en particular, enterococos.
La presente invencion satisface estas necesidades, proporcionando un antfgeno polisacarido ramno de complejo clonal de E. faecium, que comprende una estructura antigenica de la siguiente formula
^ 2)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^
en donde Rha se selecciona de ramnosa, y en donde opcionalmente al menos un grupo -OH esta reemplazado por - OW, en donde W se selecciona de acetilo, alquilo C1 a C12, y alquenilo C1 a C12; y sales o solvatos del mismo. Preferiblemente, Rha se selecciona de ramnosa.
Con el fin de identificar los objetivos de anticuerpos opsonicos en E. faecium, los autores de la invencion utilizaron un aislado clmico perteneciente al complejo clonal 17 (CC17) (E. faecium E155, Leavis et al. Insertion sequence- driven diversification creates a globally dispersed emerging multiresistant subspecies of E. faecium. PLoS Pathog (2007) vol. 3 (1) pags. E7) que fue exterminado por calor (65°C durante 45 min) e inyectado en un conejo. El suero resultante se ensayo en un ensayo opsonofagodtico, el mejor sustituto para una respuesta inmune protectora contra agentes patogenos bacterianos. Los sueros resultantes mostraron un exterminio de 72% a una dilucion de 1:20 contra la cepa homologa (vease la Fig. 2).
El antfgeno polisacarido ramno de la invencion proporciona una diana antigenica nueva y eficaz para el desarrollo de estrategias mas eficientes para tratar con eficacia y/o prevenir la infeccion en vertebrados causada, al menos en parte, por enterococos u otras bacterias Gram-positivas, permite estrategias de vacunacion mejoradas, y permite el desarrollo y la produccion de vacunas respectivas tales como vacunas de glicoconjugados.
El antfgeno polisacarido ramno de la invencion del polisacarido de E. faecium consiste en una unidad repetitiva de trisacaridos de acuerdo con la formula anterior. Por lo tanto, aun mas preferido es un antfgeno polisacarido ramno de la invencion, en el que dicho antfgeno comprende 1 a 20 unidades repetitivas de trisacaridos, preferiblemente de 1 a 10 unidades tales como, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 o 6, y lo mas preferido de 1 a 3 unidades.
El antfgeno polisacarido ramno anterior puede incluir, ademas al menos un (lo cual se prefiere) grupo enlazador L, que se fija preferiblemente a uno de los extremos de la cadena de la o las unidades de repeticion y/o restos azucar,
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con el fin de ser acoplado o conjugado con otras entidades qmmicas. Estos grupos enlazadores son conocidos en el estado de la tecnica y, habitualmente, son inmunologicamente inactivos, es decir, no interfieren con las propiedades inmunologicas del antigeno polisacarido ramno. Enlazadores preferidos incluyen, pero no se limitan a enlazadores alquil C1 a Ci2-amino, que estan opcionalmente sustituidos con otros grupos, o enlazadores peptidicos. Otras modificaciones incluyen la adicion de restos qmmicos al antigeno polisacarido ramno (tambien incluido en "L") con el fin de portar una etiqueta detectable tal como grupos quelantes o grupos enzimaticos. Ademas, se pueden anadir el peptido (p. ej., His) u otros “marcadores” o "etiquetas" con el fin de ser capaz de purificar y/o utilizar el antigeno polisacarido ramno, por ejemplo, en ensayos de diagnostico.
Aunque se especula que la actividad inmunologica de dicha molecula aumenta con su longitud de unidades de antfgeno polisacarido ramno, los autores de la invencion asumen que las moleculas mas cortas ya pueden ser bastante eficaces en su respuesta inmune.
Otro aspecto de la invencion se refiere entonces a una composicion farmaceutica, que comprende al menos uno de los antfgenos polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion y/o al menos un anticuerpo de acuerdo con la presente invencion segun se describe a continuacion, junto con al menos un soporte, adyuvante y/o diluyente farmaceuticamente aceptable.
Se prefiere particularmente una composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion, en donde dicha composicion comprende un antfgeno polisacarido ramno tal como se describe en esta memoria.
Adicionalmente preferida es una composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion, en donde dicha composicion se formula como una vacuna, en particular contra infecciones provocadas por enterococos, en particular enterococos resistentes a antibioticos, tales como cepas de VRE, preferiblemente de E. faecalis o E. faecium, p. ej., el complejo clonal 17 de E. faecium. La mas preferida es una composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion, en donde dicho antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion esta presente en una vacuna de glicoconjugados.
El antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion (ya este presente como el antfgeno solo o en un extracto bacteriano o fraccion de la pared celular) se utiliza preferiblemente para una vacuna enterococica, estafilococica o neumococica, ya sea para la inmunizacion activa o pasiva.
Por lo tanto, la invencion proporciona, ademas, una composicion farmaceutica, y en particular una vacuna, para la prevencion de infecciones enterococicas en un vertebrado, comprendiendo dicha composicion farmaceutica al menos un antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, opcionalmente junto con un soporte, adyuvante y/o diluyente farmaceuticamente aceptable. Soportes preferidos incluyen, pero no se limitan a, CRM (CRM197), hemocianina de Tachypleus tridentatus (TTH), hemocianina de Limulus polyphemus (LPH), toxoide tetanico (TT), toxoide difterico (DT), albumina de suero bovino (BSA) y la protema ExoU.
Tfpicamente, la vacuna puede comprender, ademas, celulas intactas vivas o muertas de al menos una cepa de enterococos, de preferencia de E. faecium, junto con el antfgeno polisacarido ramno de la invencion. Mas tfpicamente, la vacuna comprende lisado celular de al menos una cepa de enterococos. Los metodos para la purificacion de las fracciones bacterianas seleccionadas que contienen el antfgeno polisacarido ramno enterococico son conocidas por la persona experta. Otro aspecto se refiere a una composicion farmaceutica o vacuna, en donde el antfgeno polisacarido ramno como incluido se ha producido, al menos en parte, a traves de smtesis qrnmica.
Tfpicamente, el vertebrado es un animal monogastrico, herbvoro o rumiante o un sujeto humano. Incluso mas tfpicamente, el vertebrado se selecciona del grupo que consiste en ser humano, primate no humano, murino, bovino, ovino, equino, porcino, caprino, leporino, aviar, felino y canino. Mas tfpicamente, el vertebrado se selecciona entre el grupo que consiste en ser humano, ovino, camelidos, porcino, bovino, equino o canino.
La composicion farmaceutica se puede formular para la administracion por via intramuscular, subcutanea, topica u otra via parenteral. En general, los microorganismos de la presente invencion son comensales en la naturaleza. Por lo tanto, la administracion oral no es generalmente una via eficaz de vacunacion y, como consecuencia, se prefiere la administracion a traves de una via intramuscular, subcutanea topica u otra via parenteral. Preferiblemente, la vacuna se formula para administracion por las vfas intramuscular, subcutanea o por inhalacion. La vacuna tambien puede incluir citoquinas tales como: G-CSF, GM-CSF, interleuquinas o factor de necrosis tumoral alfa, utilizados solos o en combinacion.
La composicion farmaceutica puede incluir tambien un adyuvante. Mas tfpicamente, el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en Adyuvante Completo/Incompleto de Freund, Adyuvante de Montenide Macrol, Solucion Salina Tamponada con Fosfato y emulsiones de aceite de Mannan, saponinas (QuiLA) dextrano (sulfato de dextrano, DEAE-dextrano), compuestos de aluminio (Imject Alum), N-acetilglucosamiil-W-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina
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(adyuvante Gerbu). Mas tfpicamente, el adyuvante se selecciona del grupo segun se describe en the Vaccine 1995, vol 13, pagina 1203; 1993 vol 11 pagina 293; y 1992 vol 10 pagina 427, cuyas descripciones se incorporan aqm como referencia.
Todavfa otro aspecto importante de la presente invencion se refiere entonces al antigeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, el anticuerpo de acuerdo con la presente invencion o la composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion para uso en medicina y para el tratamiento de enfermedades tales como infecciones bacterianas, en particular por una bacteria Gram-positiva tales como, por ejemplo, infeccion bacteriana, infeccion enterococica, infecciones del tracto urinario, bacteriemia, endocarditis bacteriana, peritonitis, heridas e infecciones de tejidos blandos y meningitis, o neumoma e infecciones de cuerpos extranos. Dicha bacteria Gram-positiva se puede seleccionar preferiblemente de enterococos, estafilococos o estreptococos tal como, por ejemplo, E. faecium, p. ej., el complejo clonal 17 de E. faecium, E. faecalis, S. aureus, estafilococos coagulasa- negativos, neumococo o S. pyogenes y, en particular, cepas resistentes a antibioticos de los mismos tales como las resistentes a VRE.
Otro aspecto de la invencion se refiere entonces a un metodo para producir el antigeno polisacarido ramno de la invencion, en el que dicho metodo comprende sintetizar dicho antigeno a traves de smtesis qmmica, que comprende, por ejemplo, qmmica en fase de disolucion y/o en fase solida.
Se prefiere un metodo para producir el antigeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, que comprende sintetizar dicha molecula sobre un material de fase solida. Los metodos de la presente invencion son mas preferiblemente en un formato de smtesis en fase solida automatizada.
Otro aspecto de la invencion se refiere a un anticuerpo, preferiblemente un anticuerpo monoclonal o un fragmento antigenico del mismo, que reconoce espedficamente el antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion. El termino "anticuerpo" debe incluir tanto anticuerpos monoclonales como policlonales, anticuerpos recombinantes o fragmentos de los mismos tales como Fab y similares, asf como anticuerpos humanos o humanizados.
Otro aspecto de la invencion se refiere entonces a un metodo para producir el anticuerpo de acuerdo con la presente invencion, que comprende inmunizar a un mairnfero, preferiblemente un conejo, con el antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, o con la composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion o, preferiblemente, la vacuna de acuerdo con la presente invencion y, opcionalmente, aislar dicho anticuerpo de dicho animal. Metodos respectivos son conocidos para la persona experta, y se describen en el estado de la tecnica.
Todavfa otro aspecto de la presente invencion se refiere entonces a un metodo para producir un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la presente invencion que es espedfico para el antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, que comprende generar celulas de hibridoma que producen dicho anticuerpo como un anticuerpo monoclonal, o que comprende una produccion recombinante de dicho anticuerpo en una celula huesped. Metodos respectivos son conocidos por la persona experta, y se describen en el estado de la tecnica.
Todavfa otro aspecto de la presente invencion se refiere entonces a un metodo para producir un anticuerpo anti- idiotfpico que es espedfico para el anticuerpo de acuerdo con la presente invencion segun se describe arriba. Otro aspecto de la invencion se refiere entonces a dicho anticuerpo anti-idiotipico, que tambien pueden ser anticuerpos monoclonales o policlonales, anticuerpos recombinantes o fragmentos de los mismos, tales como Fab y similares, asf como anticuerpos humanos o humanizados.
Todavfa otro aspecto importante de la presente invencion se refiere entonces al uso del antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion como un antfgeno en la produccion de anticuerpos que son espedficos para dicho antfgeno polisacarido ramno.
Todavfa otro aspecto importante de la presente invencion se refiere entonces al uso del antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, el anticuerpo o anticuerpo anti-idiotipico de acuerdo con la presente invencion, o la composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion para el tratamiento contra infecciones bacterianas o para la produccion de un medicamento para el tratamiento profilactico o terapeutico de una enfermedad o afeccion provocada por infecciones bacterianas, en particular la infeccion enterococica tal como la infeccion nosocomial, bacteriemia, endocarditis, infecciones del tracto urinario, infecciones de heridas quirurgicas, peritonitis, infecciones de heridas y tejidos blandos, meningitis, neumoma e infecciones de cuerpos extranos, en particular provocadas por enterococos resistentes a antibioticos tales como cepas de VRE, tales como E. faecalis, y tambien estafilococos y estreptococos. Preferiblemente, dicho medicamento es una vacuna segun se describe en esta memoria.
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De acuerdo con todavfa otra realizacion preferida de la invencion, se proporciona un metodo para inducir una respuesta inmune contra al menos una cepa bacteriana Gram-positiva tal como una cepa de enterococos, que comprende el antfgeno polisacarido ramno de la presente invencion en un vertebrado, comprendiendo dicho metodo administrar a dicho vertebrado una cantidad inmunologicamente eficaz de la vacuna de acuerdo con la invencion, o una composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion.
De acuerdo con todavfa otra realizacion preferida de la invencion, se proporciona un metodo para tratar o prevenir una infeccion bacteriana en un vertebrado, que comprende administrar a dicho vertebrado una cantidad terapeuticamente eficaz del antigeno polisacarido ramno de acuerdo con la presente invencion, el anticuerpo de acuerdo con la presente invencion o la composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion.
Se prefiere un metodo de acuerdo con la presente invencion, en el que dicha infeccion bacteriana, en particular la infeccion por enterococos, es una infeccion nosocomial, bacteriemia, endocarditis, infecciones del tracto urinario, infecciones de heridas quirurgicas, peritonitis, infecciones por heridas y de tejidos blandos, meningitis, neumoma o infecciones de cuerpos extranos, en particular provocadas por enterococos resistentes a antibioticos tales como cepas de VRE tales como E. faecalis, estafilococos o estreptococos.
La presente invencion se describira ahora adicionalmente en los siguientes ejemplos no limitantes preferidos con referencia a las figuras adjuntas. Para los fines de la presente invencion, todas las referencias citadas en esta memoria se incorporan en su totalidad.
La Fig. 1 muestra la estructura de la unidad repetitiva de la PS de acuerdo con la invencion: ^ 2)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)- a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^
La Fig. 2 muestra el exterminio opsonico de E. faecium 155 con suero de conejo generado contra bacterias enteras exterminadas por calor, y la inhibicion del exterminio con diferentes cantidades de polisacarido ramno E155 purificado.
Ejemplos
Con el fin de identificar dianas de anticuerpos opsonicos en E. faecium, los autores de la invencion utilizaron un aislado clinico perteneciente al CC17 (E. faecium E155, Leavis et al. Insertion sequence-driven diversification creates a globally dispersed emerging multiresistant subspecies of E. faecium. PLoS Pathog (2007) vol. 3 (1) pags. E7) que fue exterminado por calor (65°C durante 45 min) y fue inyectado en un conejo. El suero resultante se ensayo en un ensayo opsonofagocftico, el mejor sustituto para una respuesta inmune protectora contra agentes patogenos bacterianos. Los sueros resultante mostraron un exterminio de 72% a una dilucion de 1:20 contra la cepa homologa (vease la Fig. 2).
Bacterias se cultivaron en caldo Columbia suplementado con glucosa al 0,5% a 37°C durante 24 h. Las celulas bacterianas se lavaron en PBS y las paredes celulares se digirieron por adicion de mutanolisina y lisozima (cada una a razon de 100 pg/ml en PBS suplementado con MgCh 20 mM, CaCl2 20 mM y NaN3 al 0,05%) a 37°C durante 24 h. El material insoluble se separo por centrifugacion y el sobrenadante fue tratado con nucleasas (DNasa I y RNasa A, 100 pg/ml) a 37°C durante 6 h seguido de la adicion de proteinasa K (100 pg/ml) a 59°C durante 24 h. El sobrenadante se dializo frente a H2O desionizada y se liofilizo. Para la cromatograffa de exclusion por tamano, el material se disolvio de nuevo en H2O y se aplico a una columna (1,0 x 90 cm) de BioGel P-100. La fraccion polimerica obtenida se dializo, se liofilizo, se resuspendio en CH3COONH4 20 mM (pH 8,0) y se aplico a una columna de intercambio de aniones (Q-Sepharose Ff). El antfgeno unido se eluyo de la columna mediante un gradiente de CH3COONH4 1 M (pH 8,0) y las fracciones se ensayaron en cuanto al contenido de hexosa, a continuacion se reunieron y se controlaron mediante espectroscopfa de 1H-RMN. Fracciones eluidas al comienzo del gradiente fueron sometidas a analisis qmmicos y de RMN adicionales.
El analisis de azucar de polisacarido obtenido revelo la presencia de Rha sola. La configuracion absoluta de los monosacaridos se establecio mediante GLC de glucosidos de (S,R)- y (S)-but-2-ilo. Este experimento demostro la configuracion L de los residuos de Rha.
El espectro de 1H RMN de PS mostro tres senales anomericas en 8 5,165 (residuo A, Jh1,h2 < 2 Hz), 8 4,980 (residuo B, 3Jh1,h2 < 2 Hz) y 8 4,906 (residuo C, 3Jh1,h2 < 2 Hz) y senales caractensticas de los protones de los grupos metilo de 6-desoxi-azucares (8 1,268, 8 1,269 y 8 1,232). Estas senales confirmaron la presencia de Rha que fue identificada por los resultados del analisis de azucar.
El espectro TOCSY exhibio tres sistemas de espines diferentes, lo que permitio la identificacion de todas las senales de protones pertenecientes a todos los residuos. Los ordenes de protones en todos los sistemas de espines fueron asignados utilizando el espectro COSY. Todos los desplazamientos qmmicos de 1H y 13C (vease la Tabla 1) se
establecieron utilizando 1H, 1H,1H correlacionado (COSY y TOCSY), asi como experimentos 1H, 13C HSQC RMN correlacionados.
Las configuraciones anomericas de monosacaridos se definieron sobre la base de las constantes de acoplamiento 1Jc-1,h-1 derivadas de experimentos 1H,13C HSQC RMN (registrados sin disociacion). Los valores de Jc-1,h-1 eran ~ 5 173 Hz, que revelo la configuration a-anomerica de todos los residuos. Los anillos de seis miembros de todos los
monosacaridos fueron asignados por la falta de senales de atomos de carbono en 5 ~ 83-88 en el espectro de 13C- RMN.
El espectro 1H,13C HSQC RMN mostro tres senales de carbono anomericas en 5 100,69 (A), 5 102,06 (B) y 5 101,85 (C). Este espectro tambien contema las resonancias de carbono de azucar restantes. Las senales desplazadas de 10 bajo campo de atomos de carbono demostraron sustituciones en residuos C-2 de A (5 78,04), C-3 de B (5 77,73) y C-3 de C (5 78.04).
La secuencia de azucar dentro de la unidad repetitiva de trisacarido del PS fue asignado a partir del experimento ROESY, que exhibia contactos NOE inter-residuales entre protones anomericos siguientes y los correspondientes protones glucosidicamente enlazados: A1/B3 (5 5,165/3,853), B1/C3 ( 5 4,980/3,792) y C1/A2 (5 4.906/4.037).
15 El analisis de la composition y los datos de RMN revelaron la estructura de la unidad repetitiva de PS tal como se muestra en la Figura 1: ^ 2)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^ 3 )-a-L-Rhap-(1 ^
Tabla 1. Desplazamientos qmmicos de datos de 1H y 13C RMN de PS aislado de E. faecium E-155
Desplazamientos quimicos 1
'H; y IJC [ppm]
Residuo
HI H2 H3 H4 H5 H6
‘Jc-i H.i [Hz]
Cl C2 C3 C4 C5 C6
-►2-L-ct-Rha (A)
5.165 4.037 3.910 3.460 3.789 1.269
173
100.69 78.04 69.73 72.12 69.20 16.64
—»3-L-a-Rha <B)
4.980 4.090 3.853 3.517 3.846 1.268
173
102.06 69:90 77.73 71.42 69.16 16.64
->3-L-a-Rha (C)
4.906 4.130 3.792 3.510 3.708 1.232
173
101.85 69.77 78.04 71.34 69.29 16.69
20 Los sueros opsonicos descritos anteriormente fueron absorbidos con el polisacarido ramno a diferentes concentraciones. Se pudo observar una inhibition dependiente de la dosis del exterminio, indicando que el PS ramno es la diana de anticuerpos opsonicos contra E. faecium E155.

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    REIVINDICACIONES
    1. Un antigeno polisacarido ramno de complejo clonal de Enterococcus faecium, que comprende una estructura antigenica de la siguiente formula
    ^ 2)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^ 3)-a-L-Rhap-(1 ^
    en donde Rha se selecciona de ramnosa, y en donde opcionalmente al menos un grupo -OH esta reemplazado por - OW, en donde W se selecciona de acetilo, alquilo C1 a C12 lineal o ramificado y alquenilo C1 a C12 lineal o ramificado; y sales o solvatos del mismo, para uso en el tratamiento de enfermedades.
  2. 2. El antigeno polisacarido ramno de complejo clonal de Enterococcus faecium para uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde Rha es ramnosa, y sales o solvatos del mismo.
  3. 3. El antfgeno polisacarido ramno para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 2, en donde dicho antfgeno comprende 1 a 20 unidades repetitivas de trisacarido, preferiblemente 1 a 10 unidades tal como, por ejemplo, 1, 2, 3,
  4. 4. 5 o 6, y lo mas preferido 1 a 3 unidades.
  5. 4. El antfgeno polisacarido ramno para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho antfgeno incluye, ademas, al menos un grupo enlazador L, en donde L esta preferiblemente fijado a uno de los extremos de la cadena y/o los restos azucar de dicho antigeno.
  6. 5. Una composicion farmaceutica que comprende el antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y un soporte, adyuvante y/o diluyente farmaceuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de enfermedades.
  7. 6. La composicion farmaceutica para uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde dicha composicion es una vacuna.
  8. 7. La composicion farmaceutica para uso de acuerdo con la reivindicacion 5 o 6, que comprende, ademas, al menos una citoquina.
  9. 8. La composicion farmaceutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde dicha vacuna se formula para administracion a traves de las vfas intramuscular, subcutanea o por inhalacion.
  10. 9. El antfgeno polisacarido ramno o la composicion farmaceutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para el tratamiento terapeutico de la infeccion bacteriana por enterococos, en donde dicha bacteria se selecciona del complejo clonal 17 de E. faecium, E. faecalis y cepas resistentes a antibioticos de los mismos.
  11. 10. Un anticuerpo que se une espedficamente al antfgeno polisacarido ramno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un anticuerpo anti-idiotfpico contra el mismo, para uso en el tratamiento de una infeccion bacteriana por enterococos, en donde dicha bacteria se selecciona del complejo clonal 17 de E. faecium, E. faecalis y cepas resistentes a antibioticos de los mismos.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5989542A (en) * 1997-08-20 1999-11-23 Brigham And Women's Hospital, Inc. Capsular polysaccharides from enterococci
US6756361B1 (en) * 1997-10-14 2004-06-29 Nabi Enterococcus antigens and vaccines

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