ES2565929T3 - Sales de mostaza de isofosforamida y análogos de las mismas como agentes antitumorales - Google Patents

Abstract

Un compuesto que comprende un anión de mostaza de isofosforamida y un ácido conjugado de amina, en el que la amina se selecciona del grupo que consiste en aminoácidos naturales básicos, aminas alifáticas acíclicas, di- y trialquil aminas, aminas heterocíclicas, aminas aromáticas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y no sustituidas.

Description

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DESCRIPCION

Sales de mostaza de isofosforamida y analogos de las mismas como agentes antitumorales Campo de la invencion

Esta divulgacion se refiere a sales de mostaza de isofosforamida y analogos de las mismas. Tambien se divulgan composiciones farmaceuticas y procedimientos para usar dichas composiciones para tratar trastornos hiperproliferativos.

Antecedentes

Las autopsias realizadas a soldados muertos por el gas mostaza en la Primera Guerra Mundial indicaron que la mostaza de azufre tiene un efecto desproporcionado sobre las celulas en division rapida y han sugerido que los compuestos de mostaza de azufre podnan tener efectos antitumorales. De hecho, los primeros investigadores intentaron tratar el cancer mediante inyeccion directa de la mostaza de azufre en tumores. Esta investigacion estaba limitada por la extrema toxicidad de los compuestos de mostaza de azufre y se investigo a los analogos de mostaza de nitrogeno, tales como mecloretamina como alternativas menos toxicas.

ch3

imagen1

mostaza de azufre

En general, los compuestos de mostaza ejercen sus efectos citotoxicos alquilando el ADN, tal como en la posicion N-7 de un residuo de guanina. El mecanismo de alquilacion mediante los compuestos de mostaza se ilustra en el Esquema 1. Con referencia al Esquema 1, los compuestos de mostaza tienen un nucleofilo interno que ayuda al desplazamiento del cloruro, como se muestra para el caso de la mecloretamina, formando un intermedio de aziridinio. Dado que la mecloretamina tiene dos grupos salientes, el mecanismo de sustitucion nucleofflica representada en el Esquema 1 se puede repetir y da como resultado el entrecruzamiento de ADN o protema-ADN.

ci

N:>_^

imagen2

Nuc

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Cl

Esquema 1

La mecloretamina es extremadamente reactiva y, como resultado, es no selectiva. Miles de agentes alquilantes se han disenado y se han preparado usando mecloretamina como modelo. No obstante, pocos de estos compuestos han mostrado suficiente superioridad terapeutica frente a la mecloretamina como para justificar la realizacion de ensayos clmicos.

Dada la ausencia de selectividad de la mayona de los analogos de mecloretamina, se han investigado profarmacos, tales como los compuestos de fosforamida, que pueden ser activados por la elevada concentracion de fosforamidasas presentes en celulas neoplasicas. Se ha demostrado que dos agentes alquilantes de fosforamida, ciclofosfamida (CPA) y el compuesto isomerico ifosfamida (Ifos) son particularmente eficaces.

H pH2CH2CI

K ,p

Pv

o N(CH2CH2CI)2

Ciclofosfamida (CPA) Ifosfamida (Ifos)

imagen4

rv

\_o NHCH2CH2CI

Fries K.M. et al en J.Med.Chem, 1991, 34, pag. 565-569 han investigado el RMN de 31P y la cinetica del ion cloruro en la alquilacion de los monoester fosforamidatos que estan relacionados con los productos metabolicos de CPA.

La via metabolica de la CPA es similar a la de la Ifos (el metabolismo de la Ifos se ilustra en la FIG. 1) y, por tanto, los dos compuestos comparten los mismos inconvenientes. Quiza lo mas importante es su toxicidad limitante de la dosis por cistitis hemorragica. Se cree que la cistitis hemorragica esta inducida por la produccion de acrolema durante la activacion de CPA y de Ifos. La acrolema es un electrofilo activo que reacciona con tioles en condiciones fisiologicas, que puede ser responsable de su toxicidad hepatica en forma de deplecion de glutation. Por ultimo, se

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ha demostrado que la acrolema es teratogena y un potente mutageno, lo que puede ser responsable del vmculo entre el tratamiento con CPA y efectos secundarios graves, tales como carcinoma de vejiga urinaria y otras neoplasias malignas.

Con referencia a la FIG. 1, la mostaza de isofosforamida (IPM) es un metabolito comun de la CPA y la Ifos. Se piensa que la IPM es responsable de al menos una porcion de la actividad antitumoral exhibida por la CPA y la Ifos. Los esfuerzos realizados para usar la IPM como agente anticanceroso directamente no han tenido exito debido, en parte, a la inestabilidad del compuesto. Se ha sintetizado IPM y se han realizado evaluaciones biologicas preliminares del compuesto, pero, por desgracia, la IPM es demasiado inestable como para ser aislada y usada para tratamiento en seres humanos.

Sumario de la divulgacion

En el presente documento se divulgan compuestos de formula:

o

. I!

A+* 'O-P—NHCH2CH2X NHCH2CH2Y

en la que A+ representa una especie de amonio seleccionada de las formas protonada (acido conjugado) o cuaternaria de aminas alifaticas y aminas aromaticas, incluidos aminoacidos basicos, aminas heterodclicas, piridinas sustituidas o no sustituidas, guanidinas y amidinas; y X e Y representan de forma independiente grupos salientes.

En una realizacion se divulgan composiciones farmaceuticas que incluyen uno o mas de los compuestos descritos con anterioridad. En un aspecto de esta realizacion, las composiciones pueden incluir uno o mas agentes terapeuticos aparte de los descritos mediante la formula anterior para usar en terapia de combinacion.

En otra realizacion se divulgan procedimientos para tratar sujetos mairnferos, tales como sujetos humanos, que tienen trastornos hiperproliferativos. Dichos procedimientos pueden emplear uno o mas de los compuestos y composiciones descritos con anterioridad.

En otro aspecto se divulgan en el presente documento composiciones farmaceuticas de compuestos de la formula

O

II

ho-p-nhch2ch2x

nhch2ch2y

en la que X e Y representan de forma independiente grupos salientes, o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. Tambien se describen procedimientos de preparacion de dichas composiciones, incluida la esterilizacion de la composicion usando un filtro antimicrobiano esteril. En ciertas realizaciones, dicha filtracion se puede realizar con menos del 10% de descomposicion del ingrediente activo, preferentemente menos del 5%, 2% o incluso menos del 1% de descomposicion.

Tambien se divulga en el presente documento un procedimiento para producir un liofilizado que comprende un compuesto de la formula anterior. En una realizacion, el procedimiento comprende poner en contacto la mostaza de isofosforamida o un analogo de la misma con una base amina en presencia de agua y liofilizar la mezcla resultante.

Breve descripcion de las figuras

La FIG. 1 es un esquema que ilustra el metabolismo de la ifosfamida, incluida la produccion de acrolema y de mostaza de isofosforamida.

La FIG. 2 es un espectro de RMN de 1H de IPM^(LYS)2 en D2O registrado a 500 MHz.

La FIG. 3 es una seccion ampliada del espectro de la FIG. 2.

La FIG. 4 es un espectro de RMN de 13C de IPM^LYS)2.

Descripcion detallada

Las siguientes explicaciones de terminos y ejemplos se proporcionan para describir mejor los presentes compuestos, composiciones y procedimientos, y para guiar a los expertos en la tecnica en la practica de la presente divulgacion. Se entendera tambien que la terminologfa usada en la presente divulgacion tiene el proposito de

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describir solo realizaciones y ejemplos particulares y no se desea que sea limitante.

Los intervalos se pueden expresar en el presente documento como de “aproximadamente” un valor concreto y/o hasta “aproximadamente” otro valor concreto. Cuando se expresa tal intervalo, otra realizacion incluye desde un valor concreto y/o al otro valor concreto. De forma similar, cuando los valores se expresan en forma de aproximaciones mediante el uso de "aproximadamente" delante del valor, se entendera que el valor concreto forma otra realizacion. Tambien debe entenderse que los extremos de cada uno de los intervalos son significativos tanto en relacion con el otro extremo como de forma independiente con el otro extremo.

En esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas se hara referencia a una serie de terminos que se entendera que tienen los significados siguientes:

“Opcional” u “opcionalmente” significan que el acontecimiento o la circunstancia que se describen mas adelante puede ocurrir pero no tiene que ocurrir necesariamente y que la descripcion incluye los casos en los que dicho acontecimiento o circunstancia se produce y los casos en los que no.

El termino “aminoacido” se refiere a aminoacidos naturales y no naturales, incluidos a-aminoacidos, en sus estereoisomeros D y L para aminoacidos quirales. Ejemplos de residuos aminoacidos basicos incluyen los que tienen una cadena lateral basica, tal como un grupo amino o guanidino. Los residuos aminoacidos basicos incluyen, pero no se limitan a, arginina, histidina, homoarginina, lisina, homolisina y ornitina.

El termino “anticuerpo” significa una inmunoglobulina, natural o producida total o parcialmente de forma sintetica. Todos los derivados del mismo que mantienen una capacidad de union espedfica tambien se incluyen dentro del termino. El termino tambien cubre cualquier protema que tiene un dominio de union que es homologo o considerablemente homologo con un dominio de union a inmunoglobulina. Estas protemas pueden proceder de fuentes naturales, o producirse total o parcialmente de forma sintetica. Los anticuerpos usados en el presente documento pueden ser monoclonales o policlonales.

Como se usa en el presente documento, “amina alifatica” se refiere a un compuesto de la formula NR1R2R3, en la que al menos uno de R1"3 es un grupo alifatico.

La expresion “amina alifatica adclica” se refiere a una amina alifatica como antes, en la que al menos uno de los grupos alifaticos es adclico.

La expresion "amina heterodclica” se refiere a un compuesto de la formula NR1R2R3, en la que al menos uno de R1"3 es un grupo heterodclico o R1 , R2 y/o R3tomados junto con su atomo de nitrogeno comun forman un anillo.

I. Sales de IPM y analogos de IPM

Los compuestos y composiciones divulgados en el presente documento incluyen IPM y analogos de IPM que se formulan con uno o mas equivalentes de una base. Dado que la IPM y sus analogos son labiles al acido y son acidas, los compuestos divulgados en el presente documento ofrecen mayor estabilidad, asf como otras ventajas. Las ventajas de las formulaciones divulgadas en terminos de smtesis, estabilidad y biodisponibilidad seran evidentes para los expertos en la tecnica tras consideracion de la presente divulgacion.

En una realizacion, los compuestos divulgados son sales de mostaza de isofosforamida o analogos de mostaza de isofosforamida, incluidos uno o mas cationes. En una realizacion, los cationes pueden ser un acido conjugado de una base amina. Contraiones adecuados para la mostaza de isofosforamida y sus analogos incluyen los acidos conjugados (como se usa en el presente documento, los terminos que hacen referencia a aminas se entendera que incluyen sus acidos conjugados a menos que el contexto indique claramente que se hace referencia a amina libre) de las bases, incluidos aminoacidos naturales basicos, aminas alifaticas adclicas, aminas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas. Las aminas alifaticas adclicas, y las di y trialquilaminas adclicas son particularmente adecuadas para usar en los compuestos divulgados. Ademas los contraiones de amonio cuaternario son ejemplos de contraiones adecuados que se pueden usar.

Ejemplos concretos de bases de amina adecuadas (y sus correspondientes iones de amonio) para usar en los presentes compuestos incluyen, pero no se limitan a, piridina, W,A/-dimetilaminopiridina, diazabiciclononano, diazabicocloundeceno, N-metil-N-etilamina, dietilamina, trietilamina, diisopropiletilamina, mono-, bis- o tris- (2- hidroxietil) amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, tris(hidroximetil)metilamina, W,W-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina, tri-(2- hidroxietil)amina y W-metil-D-glucamina.

En una realizacion adicional, las sales descritas anteriormente pueden incluir una segunda amina o un acido conjugado de la segunda amina. En una realizacion, los compuestos divulgados en el presente documento incluyen mas de un equivalente de una amina por cada equivalente de mostaza de isofosoforamida o de un analogo de la mostaza de isofosoforamida. Dichas realizaciones incluyen las que tienen proporciones entre la amina y la mostaza de isofosforamida o analogos de la mostaza de isofosoforamida que no son numeros enteros. En ciertas realizaciones, los compuestos tienen una proporcion de dos a una o de tres a una entre la amina y la mostaza de isofosforamida o un analogo de la mostaza de isofosoforamida. En realizaciones de trabajo se produjeron sales que

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conteman dos equivalentes de base amina por equivalente de mostaza de isofosforamida. En una realizacion, una base amina usada para formar mostaza de isofosforamida y un analogo de la mostaza de isofosoforamida incluye mas de un grupo amino, dichas bases se pueden denominar “multibasicas”. Mas espedficamente, ciertos ejemplos de bases multibasicas que se pueden usar tienen dos grupos amino; dichos compuestos se pueden denominar “dibasicos”. Por ejemplo, una molecula dibasica adecuada es W,W-dimetilaminopiridina, que incluye dos grupos amino basicos. En una realizacion concreta de un compuesto divulgado en el presente documento, un compuesto incluye mostaza de isofosforamida o un analogo de la mostaza de isofosoforamida y un equivalente de una amina dibasica.

En una realizacion, los compuestos divulgados incluyen una o mas bases de ion dipolar. Ejemplos de dichas bases incluyen aminoacidos naturales basicos, que son de ion dipolar a pH fisiologico.

En una realizacion, las sales divulgadas actualmente son mas estables que la mostaza de isofosforamida y los analogos de la mostaza de isofosforamida. Por ejemplo, la mostaza de isofosforamida, tras la liofilizacion del compuesto puro, se descompone en casi el 40% durante el almacenamiento a -20°C durante tres meses. Por el contrario, la sal de lisina de la IPM no exhibe ninguna descomposicion que se pueda medir, incluso tras diez meses en condiciones de almacenamiento similares.

En ciertas realizaciones, los compuestos divulgados son sales de mostaza de isofosforamida estabilizadas o analogos de sales de mostaza de isofosforamida estabilizadas, en las que la sal tiene una semivida a temperatura ambiente (p. ej., de aproximadamente 23°C) en presencia de agua que es superior a la semivida de la mostaza de isofosforamida en presencia de agua en las mismas condiciones. En algunas de tales realizaciones preferidas, una sal de mostaza de isofosforamida tiene una semivida que es igual o superior a dos veces la de la mostaza de isofosforamida en presencia de agua, mas preferentemente igual o superior a cinco veces.

En ciertas realizaciones, los liofilizados de los compuestos divulgados son mas estables que una preparacion liofilizada de mostaza de isofosforamida. En ciertas de estas realizaciones preferidas, el liofilizado de los compuestos divulgados tiene una duracion en almacenamiento mas prolongada que una preparacion liofilizada de la propia mostaza de isofosforamida, preferentemente al menos dos veces mas larga, mas preferentemente al menos cinco veces mas larga.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmaceuticas de sales farmaceuticamente aceptables de IPM o sus analogos (tales como los compuestos de la formula anterior) son mas estables que una composicion por lo demas identica de la propia mostaza de isofosforamida (es decir, no en forma de sal) en condiciones identicas. En ciertas de estas realizaciones preferidas, las composiciones divulgadas tienen una duracion en almacenamiento mas prolongada que una preparacion liofilizada de la mostaza de isofosforamida, preferentemente al menos dos veces mas larga, mas preferentemente al menos cinco veces mas larga.

Ciertos compuestos de mostaza de isofosforamida y de analogos de mostaza de isofosforamida divulgados en el presente documento incluyen dos grupos salientes. Sin limitarse a la teona, se cree que los dos grupos salientes son desplazados in vivo por nucleofilos biomoleculares, tales como acidos nucleicos y protemas, de modo que se entrecruzan las biomoleculas. La expresion “grupo saliente” se refiere a un grupo que puede ser desplazado por un nucleofilo. Con referencia a los compuestos divulgados en el presente documento, grupo saliente se refiere a un grupo que se puede desplazar para formar un intermedio de aziridinio o puede ser desplazado directamente por un nucleofilo biomolecular, tal como un nucleofilo de acido nucleico, para formar, por ejemplo, una especie de guanidinio alquilada en la posicion 7. Ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen los halogenos y los sulfonatos (-SO2R). En una realizacion de las sales de analogos de isofosforamida divulgadas, el compuesto es un grupo saliente “mixto”, incluidos dos tipos diferentes de grupos salientes, por ejemplo un halogeno y un sulfonato o dos halogenos diferentes, tales como un bromo y un cloro. La patente de EE.UU. n° 6,197,760 de Struck ensena procedimientos para fabricar dichos compuestos de grupos salientes mixtos.

Una realizacion de la presente divulgacion se refiere a agentes anti-hiperproliferativos de la formula

O

r8l • ho-p-nhch2ch2x

1— --1 n I

n nhch2ch2y

Con referencia a la formula, B puede ser, para cada n, una molecula basica seleccionada de forma independiente. En una realizacion de la formula, B se puede seleccionar de los aminoacidos naturales basicos, aminas alifaticas adclicas, di y trialquilaminas, aminas alifaticas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas sustituidas y no sustituidas, guanidinas dclicas y adclicas, y amidinas dclicas y adclicas. Normalmente, n es de 1 a aproximadamente 3, de manera que la formula puede incluir diferentes moleculas basicas. Todavfa haciendo referencia a la formula, X e Y son grupos salientes. Un experto en la tecnica entendera que la estructura de la mostaza de isofosforamida ilustrada incluye un proton acido y como tal existe de forma predominante como su base conjugada a pH fisiologico y en presencia de una base tal como B. Asimismo, B, siendo un grupo basico existe

predominantemente como su acido conjugado a pH fisiologico y en presencia de la mostaza de isofosforamida y los analogos de la mostaza de isofosforamida. Realizaciones ejemplares de los compuestos divulgados se representan en la Tabla 1.

Tabla 1

o Fb| * ho-p-nhch2ch2x 1— —I n I n nhch2ch2y

B

n X Y

lisina

2 Cl Cl

NH3

2 Cl Cl

ciclohexilamina

2 Cl Cl

N-metil-D-glucamina

2 Cl Cl

N,N-dimetilaminopiridina

1 Cl Cl

arginina

2 Cl Cl

lisina

2 Cl -SO2CH3

lisina

2 Br -SO2CH3

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En una realizacion adicional, los compuestos divulgados incluyen sales de mostaza de isofosforamida. Ciertos ejemplos de dichas sales de mostaza de isofosforamida se pueden representar con la formula

imagen5

Con referencia a la formula anterior, B puede ser cualquier grupo basico, particularmente una amina. Se debe 10 reconocer que la formula anterior existira predominantemente como la sal correspondiente y, por tanto, puede incluir compuestos que estan representados por la formula

o

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BHVO"P\"'(NHCH2CH2CI)

(NHCH2CH2C1)

Con referencia a la formula anterior, dichos compuestos tambien pueden incluir uno o mas equivalentes adicionales de una segunda amina o acido conjugado de la segunda amina. Dichos compuestos se pueden representar con la 15 formula:

o

|jJJ[bhJ** '0-p-nhch2ch2x nhch2ch2y

en la que G representa una segunda especie de amina o amonio. En ejemplos concretos, G es un aminoacido basico y BH+ representa el acido conjugado del mismo aminoacido basico o de uno diferente.

En una realizacion, BH+ es el acido conjugado de G. En esta realizacion, las sales de mostaza de isofosforamida 20 divulgadas pueden estar representadas por la formula

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\b)\b^0'

r\^(NHCH2CH2Cl)

(NHCH2CH2C])

en la que B es una amina y BH+ es su acido conjugado.

En una realizacion, los compuestos divulgados en el presente documento incluyen un cation metalico, tal como un cation de metal alcalino. Ejemplos de dichos cationes incluyen Li+, Na+, K+ y Rb+ y Cs+. En un aspecto, dichos ejemplos se pueden representar con la formula

O

n

nfl W*-0"P\"(NHCH2CH2CI)

— 1— (NHCH2CH2CI)

en la que M+ representa un cation de metal alcalino y B es como se ha definido anteriormente.

II. Composiciones y procedimientos

Otro aspecto de la divulgacion incluye composiciones farmaceuticas, preferentemente composiciones farmaceuticas esteriles, preparadas para administrar a un sujeto y que incluyen una cantidad terapeuticamente eficaz de uno o mas de los compuestos divulgados actualmente. Dichas composiciones esteriles se pueden preparar pasando una solucion de la sal de IPM o un analogo de la misma a traves de un filtro antimicrobiano esteril. Dichas composiciones esteriles comprenden, preferentemente, el principio activo de la invencion con una degradacion menor del 10%, preferentemente menor del 5%, 2% o incluso menor del 1% de descomposicion, medido mediante ensayo para determinar la presencia de subproductos de descomposicion tales como acido fosforico y sus sales y etilaminas sustituidas.

Los compuestos divulgados en el presente documento se pueden administrar por via oral, topica, transdermica, parenteral, mediante inhalacion o pulverizacion y se pueden administrar en formulaciones monodosis que contienen portadores, adyuvantes y vetnculos no toxicos farmaceuticamente aceptables convencionales.

Normalmente se prefiere la administracion parenteral mediante inyeccion de las sales de mostaza de isofosforamida y analogos de las mismas divulgadas. Los inhibidores se pueden proporcionar en una unica dosificacion o de forma cronica, dependiendo de la enfermedad concreta, el estado del paciente, la toxicidad del compuesto y otros factores, como reconocera un experto en la tecnica.

La cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto o compuestos administrados puede variar en funcion de los efectos deseados y de los factores indicados anteriormente.

Las composiciones farmaceuticas para administrar a un sujeto pueden incluir portadores, espesantes, diluyentes, tampones, conservantes, agentes tensioactivos y similares, ademas de la molecula elegida. Las composiciones farmaceuticas tambien pueden incluir uno o mas principios activos adicionales, tales como agentes antimicrobianos, agentes antiinflamatorios, anestesicos y similares. Las formulaciones farmaceuticas pueden incluir componentes adicionales, tales como portadores. Los vetnculos farmaceuticamente aceptables utiles para estas formulaciones son convencionales. En Remington's Pharmaceutical Sciences, de E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition (1995), se describen composiciones y formulaciones adecuadas para liberacion farmaceutica de los compuestos divulgados en el presente documento.

En general, la naturaleza del vehnculo dependera del modo concreto de administracion que se emplee. Por ejemplo, las formulaciones parenterales normalmente contienen fluidos inyectables que incluyen fluidos farmaceutica y fisiologicamente aceptables, tales como agua, solucion salina fisiologica, soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, glicerol o similares como vehnculo. Para las composiciones solidas (por ejemplo, formas de polvo, pfldora, comprimido o capsula), vehnculos solidos no toxicos convencionales pueden incluir, por ejemplo, calidades farmaceuticas de manitol, lactosa, almidon o estearato de magnesio. Ademas de los portadores biologicamente neutros, las composiciones farmaceuticas que se van a administrar pueden contener cantidades minoritarias de sustancias auxiliares no toxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes, agentes de tamponamiento del pH y similares, por ejemplo, acetato sodico o monolaurato de sorbitano.

En una realizacion se formula un compuesto divulgado para administracion a un sujeto humano. En un aspecto de esta realizacion, la composicion farmaceutica incluye de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 250 mg/ml, tal como de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg/ml del compuesto de una sal de mostaza de isofosforamida o un analogo de la misma.

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En un aspecto, ciertas realizaciones de composiciones farmaceuticas se formulan en formas de dosificacion unitarias. Por ejemplo, dichas formas de dosificacion unitaria pueden contener de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 1.500 mg, tal como de aproximadamente 200 mg a aproximadamente 1.500 mg de una sal de mostaza de isofosforamida divulgada o un analogo de la misma por unidad de dosificacion.

En algunas realizaciones se contempla espedficamente que los presentes compuestos se liberan mediante un depot de farmaco inyectado y/o implantado, por ejemplo que comprende liposomas multivesiculares, tale como en DepoFoam (SkyePharma, Inc, San Diego, CA) vease, por ejemplo, Chamberlain y col., Arch. Neuro. 1993, 50, 261264; Katri y col., J. Pharm. Sci. 1998, 87, 1341-1346; Ye y col., J. Control Release 2000, 64, 155-166; y Howell, Cancer J. 2001, 7, 219-227).

En el presente documento se divulga el tratamiento de afecciones caracterizadas por una actividad proliferativa anormal o patologica o neoplasias mediante la administracion de uno o mas de los compuestos divulgados y composiciones de los mismos. “Neoplasia” hace referencia al proceso de crecimiento celular anormal e incontrolado. Neoplasia es un ejemplo de un trastorno proliferativo. El producto de una neoplasia es un neoplasma (un tumor), que es un crecimiento anormal de tejido que es el resultado de un exceso de division celular. Un tumor que no produce metastasis se denomina “benigno”. Un tumor que invade el tejido circundante y/o que puede producir metastasis se denomina “maligno”.

Las afecciones que se pueden tratar de acuerdo con el uso divulgado incluyen las caracterizadas por un crecimiento y/o diferenciacion celular anormal, tal como canceres y otras afecciones neoplasicas. Ejemplos tfpicos de trastornos proliferativos que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones divulgados se indican a continuacion.

Ejemplos de tumores hematologicos que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones divulgados en el presente documento incluyen leucemias, incluidas leucemias agudas (tales como leucemia linfodtica aguda, leucemia mielocftica aguda, leucemia mielogena aguda y leucemia mieloblastica, promielocftica, mielomonocftica, monodtica y eritroleucemia), leucemias cronicas (tales como leucemia mielodtica (granuloctica) cronica, leucemia mielogena cronica y leucemia linfocftica cronica), policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (las formas indolente y de grado alto), mieloma multiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de las cadenas pesadas, srndrome mielodisplasico, leucemia de celulas pilosas y mielodisplasia.

Otros ejemplos adicionales de afecciones que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones divulgados incluyen tumores solidos, tales como sarcomas y carcinomas, incluyen fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogenico y otros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, neoplasia maligna linfoide, cancer de pancreas, cancer de mama, cancer de pulmon, cancer de ovarios, cancer de prostata, carcinoma hepatocelular, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas basales, adenocarcinoma, carcinoma de glandulas sudonparas, carcinoma de glandulas sebaceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medular, carcinoma broncogenico, carcinoma de celulas renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, tumor de Wilms, cancer cervical, tumor testicular, carcinoma de la vejiga urinaria y tumores del SNC (tales como un glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acustico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma)

En una realizacion, los compuestos divulgados en el presente documento son superiores a CPA o Ifos solas contra el crecimiento de tumores resistentes a CPA. Por tanto, un aspecto de un uso divulgado en el presente documento incluye tratar a un sujeto que tiene una afeccion neoplasica resistente a CPA con una sal de mostaza de isofosforamida o un analogo de la misma divulgados en el presente documento.

En una realizacion del uso para tratamiento descrito en la presente memoria, se administra a un sujeto de aproximadamente 0,2 mg/kg/dfa a aproximadamente 20 mg/kg/dfa de una sal de mostaza de isofosforamida o un analogo de la misma divulgada. Por ejemplo, se puede administrar a un sujeto de aproximadamente 0,5 mg/kg/dfa a aproximadamente 10 mg/kg/dfa, tal como de aproximadamente 1 a aproximadamente 7,5 mg/kg/dfa de un compuesto divulgado.

En otra realizacion del uso para tratamiento descrito en la presente memoria, se administra a un sujeto de aproximadamente 10 a aproximadamente 700 mg/m2Ma, tal como de aproximadamente 20 a aproximadamente 400 mg/m2/dfa o de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mg/m2Ma. Por ejemplo, de aproximadamente 30 a aproximadamente 100 mg/m2Ma, tal como de aproximadamente 40 a aproximadamente 90 mg/m2/dfa de un compuesto divulgado en el presente documento.

En una realizacion del uso para tratar trastornos hiperproliferativos divulgados en el presente documento se administra a un sujeto un compuesto divulgado segun una programacion de multiples dosis diarias. En dichas realizaciones, el compuesto se administra durante al menos dos dfas y durante como mucho en cinco dfas diferentes. En un aspecto de programaciones de multiples dosis diarias, el compuesto se administra al sujeto en dfas consecutivos, tal como de dos a cinco dfas consecutivos.

En una realizacion del procedimiento se administran a un sujeto uno o mas agentes terapeuticos ademas de los compuestos y composiciones divulgados en el presente documento. Por ejemplo, agentes terapeuticos adicionales

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que se pueden usar incluyen agentes de union a microtubulos, de intercalado o entrecruzamiento de ADN, inhibidores de la smtesis de ADN, inhibidores de la transcripcion de ADN y/o ARN, anticuerpos, enzimas, inhibidores enzimaticos, reguladores genicos y/o inhibidores de la angiogenesis.

“Agente de union a microtubulos” se refiere a un agente que interacciona con la tubulina para estabilizar o desestabilizar la formacion de microtubulos de modo que se inhibe la division celular. Ejemplos de agentes de union a microtubulos que se pueden usar junto con las sales de mostaza de isofosforamida divulgadas en el presente documento y analogos de las mismas incluyen, pero no se limitan a, paclitaxel, docetaxel, vinblastina, vindesina, vinorelbina (navelbina), las epotilonas, colchicina, dolastatina 15, nocodazol, podofilotoxina y rizoxina. Tambien se pueden usar analogos y derivados de dichos compuestos que conoceran los expertos en la tecnica. Por ejemplo, epotilonas y analogos de epotilona adecuados para incorporar en los presentes compuestos se describen en la publicacion internacional n° WO 2004/018478, que se incorpora en el presente documento por referencia. Actualmente se cree que los taxoides, tales como paclitaxel y docetaxel, son particularmente utiles como agentes terapeuticos en los compuestos divulgados en el presente documento. Ejemplos de taxoides adicionales utiles, incluidos analogos de paclitaxel se ensenan en las patentes de EE.UU. n° 6,610,860 de Holton, 5,530,020 de Gurram y col., y 5,912,264 de Wittman y col.

Reguladores adecuados de la transcripcion de ADN y/o ARN, incluidos, pero no se limitan a, actinomicina D, daunorubicina, doxorubicina y derivados y analogos de los mismos tambien son adecuados para usar en combinacion con los compuestos divulgados en el presente documento. Los agentes de intercalado y reticulacion de ADN que se pueden incorporar en los compuestos divulgados incluyen, pero no se limitan a, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, mitomicinas, tales como mitomicina C, bleomicina, clorambucilo, ciclofosfamida y derivados y analogos de los mismos.

Inhibidores de la smtesis de ADN adecuados para usar como agentes terapeuticos incluyen, pero no se limitan a, metotrexato, 5- fluoro-5'-desoxiuridina, 5-fluorouracilo y analogos de los mismos.

Ejemplos de inhibidores enzimaticos adecuados para usar en combinacion con los compuestos divulgados en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, camptotecina, etoposido, formestano, tricostatina y derivados y analogos de los mismos.

Terapeuticas adecuadas para usar con los compuestos divulgados en el presente documento que afectan a la regulacion genica incluyen agentes que dan como resultado aumento o disminucion de la expresion de uno o mas genes, tales como, pero no se limitan a, raloxifeno, 5-azacotidina, 5-aza-2'-desoxicitidina, tamoxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, mifepristona y derivados y analogos de los mismos.

La expresion “inhibidor de la angiogenesis” se usa en el presente documento para indicar una molecula que incluye, pero no se limita a, biomoleculas, tales como peptidos, protemas, enzimas, polisacaridos, oligonucleotidos, ADN, ARN, vectores recombinantes y moleculas pequenas que funcionan inhibiendo el crecimiento de los vasos sangumeos. La angiogenesis esta implicada en ciertos procesos patologicos, tales como los implicados en trastornos tales como retinopatfa diabetica, enfermedades inflamatorias cronicas, artritis reumatoide, dermatitis, psoriasis, ulceras gastricas y la mayona de los tipos de tumores solidos humanos.

En la tecnica se conocen los inhibidores de la angiogenesis y ejemplos de inhibidores de la angiogenesis adecuados incluyen, pero no se limitan a, angiostatina K1-3, estaurosporina, genistema, fumagilina, medroxiprogesterona, suramina, interferon-alfa, inhibidores de la metaloproteinasa, factor 4 de las plaquetas, somatostatina, tromobospondina, endostatina, talidomida, y derivados y analogos de los mismos.

Otros agentes terapeuticos, particularmente agentes antitumorales, que pueden o no entrar dentro de una o mas de las clasificaciones anteriores, tambien son adecuados para administrar en combinacion con los compuestos divulgados en el presente documento. A modo de ejemplo, dichos agentes incluyen adriamicina, apigenina, rapamicina, zebularina, cimetidina, y derivados y analogos de los mismos

III. Ejemplos

La divulgacion anterior se explica adicionalmente mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplo 1

Este ejemplo describe la smtesis del ester de fenilo de IPM de acuerdo con el esquema.

1? _+ 9

PhO^CI 1-C— H3-N^EH2£l »- PhO"PC<NyCH2CH2CI)

Cl 2. Et3N (NHCH2CH2CI)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

En un matraz de fondo redondo de 3 cuellos y 5 litros equipado con un agitador mecanico, un embudo de goteo de 500 ml y un tubo de secado de cloruro calcico se suspende clorhidrato de 2-cloretilamina (116g; 1,0 mol) en 1.200 ml de cloruro de metileno y se agita en un bano de agua helada. Cuando la temperature disminuyo hasta 5°C se anadio fenilidiclorofosfonato (105,5 g; 0.5 mol) (disponible comercialmente en Aldrich, Milwaukee, WI). Mediante goteo se anadio trietilamina (202 g, 2 mol) a 1 gota por segundo; la temperatura no supero los 5°C. La mezcla se dejo agitar durante la noche. Al dfa siguiente se mezclaron 200 ml de acido clorhndrico concentrado (12M) con 1.800 ml de agua. A la mezcla de la reaccion se anadio lentamente 200 ml de la solucion acida. La mezcla paso a ser transparente y se transfirio a un embudo de separacion de 2 l y se separaron las capas organica y acuosa. La capa organica se extrajo con la solucion acida 9 x 200 ml, seguido de agua 1 x 200 ml. Despues, se separo la capa organica y se seco sobre sulfato sodico y se filtro. Despues se evaporo el cloruro de metileno a presion reducida y el residuo oleoso se disolvio en 40 ml de acetato de etilo y lentamente se anadieron 60 ml de hexano con agitacion; a continuacion se cubrio con Parafilm y se guardo a 5°C en refrigerador durante la noche. Al dfa siguiente los cristales blancos se filtraron por succion y se lavaron con 100 ml de hexano frio y despues se dejaron secar al aire. El lfquido madre se conservo en el refrigerador durante 9 horas y se formo una segunda cosecha de cristales que se dejaron secar al aire. Una tercera cosecha de cristales se formo tras la refrigeracion del licor madre a partir de la segunda cosecha durante la noche y se dejaron secar al aire. Las cosechas combinadas tuvieron un rendimiento de 117,3 gramos, 0,39 mol. El rendimiento fue del 82%; p.f. 53-55; Anal. calculado para C10H15O2N2O2P (P.M. 297,13) C, 40,44%; H, 5,09%; N, 9,43%; Hallado C, 39,7%; H4,97%; N, 9,00%.

Ejemplo 2

Este ejemplo describe la smtesis de IPM (acido W,W'-di(2-cloroetil)fosforodiaiTndico) a partir del ester de fenilo IPM descrito en el ejemplo 1.

O O

M 11

PhO"PC(NHCH2CH2CI) Hzypt°2». HO"P\^(NHCH2CH2CI)

{NHCH2CH2CI) (NHCH2CH2CI)

El ester solido blanco del ejemplo 1 (0,39 mol) se disolvio en 100 ml de etanol al 95% y se anadio a un matraz de Parr y se anadieron 2,5 g de PtO2. La suspension se hidrogeno a 50 PSI; dos horas despues se interrumpio la hidrogenacion y con cuidado se anadieron 2,5 g de PtO2 con agitacion. La hidrogenacion se continuo a 50 PSI durante dos horas. Despues se detuvo, se llevo a temperatura ambiente y se calento en una placa caliente con agitacion magnetica. Cuando la suspension estaba en ebullicion se filtro por succion inmediatamente a traves de un embudo de succion de 5,5 cm con dos papeles de filtro y el sobrenadante de almaceno a 5°C durante dos horas; el catalizador se guardo y se anadio al matraz de Parr y se almaceno en un refrigerador durante la noche. El solido blanco formado se filtro por succion traves de un embudo de succion de 9 cm y se guardo en un bote sin pesticida; el licor madre se anadio al matraz de Parr y se anadieron 1,25 gramos de PtO2, se hidrogeno a 50 PSI durante dos horas. Se detuvo, se calento y se filtro como anteriormente, y el licor madre se conservo en el refrigerador durante la noche. Los cristales blancos formados se filtraron por succion y se combinaron con la primera cosecha. El licor madre se recogio en el matraz de Parr con el catalizador usado y se anadieron 1,25 gramos adicionales de PtO2, y la hidrogenacion continuo a 50 PSI durante dos horas. Despues se detuvo, se calento y se filtro para producir una tercera cosecha que se combino con las cosechas 1 y 2. Las cosechas combinadas se agitaron en 150 ml de acetona durante 30 minutos, despues se almacenaron a 5°C durante dos horas y se filtraron y almacenaron en un desecador de vacfo durante dos horas. El rendimiento fue de 38 g; 0,17 mol; rendimiento del 44%; p.f. (corr.) 112114. Anal. calculado para C4HnN2O2PCl2 (P.M. 221,11) C, 21,73%; H, 5,01%; N, 12,67%; Hallado C, 22,12%; H 5,02%; N, 12,23%.

Ejemplo 3

Este ejemplo describe la preparacion de la sal de lisina de IPM a partir de la IPM producida de acuerdo con el ejemplo 2. La L-lisina se peso (26,4 g) y el agua se midio (6 l). La L-lisina se anadio al agua con agitacion a 2-8 °C. El volumen de la sustancia farmacologica, IPM, se peso (20 g) y se anadio lentamente con agitacion a 2-8 °C a la solucion de lisina.

Una vez disuelta a 2-8 °C, la solucion se paso a traves de un filtro antimicrobiano esteril (0,22 micrometres). La solucion se mantuvo a 2-8 °C y se dispenso en viales en condiciones esteriles.

El producto disuelto se liofilizo despues en las condiciones siguientes.

Tiempo (horas)

Accion Temperatura (°C)

0-1

Carga O 1 cn

1 -7

Retencion -45

7 -34

Secado primario -25

34 -55

Secado secundario -10

55 -76

Secado secundario 0

76 +

Purga con nitrogeno 0

Como alternativa, el producto disuelto se puede liofilizar en las condiciones siguientes.

Tiempo (horas)

Accion Temperatura (°C)

O 1 O cn

Carga O 1 cn

0,5 -6,5

Retencion -45

6,5 -33

Secado primario -25

33 -54

Secado primario - 10

cn CD cn

Secado secundario 0

95 +

Purga con nitrogeno 0

Los viales se tapan en condiciones de esterilidad de acuerdo con el procedimiento normalizado de trabajo. La sal de 5 lisina de IPM liofilizada se envasa en viales de cristal sin impresion con tapones sellados de caucho rizado. Este sistema de contenedor/cierre no incluye un revestimientol. La espectrometna de masas por electropulverizacion de iones negativos revelo picos caractensticos para IPM^(LYS)2 a M= 219,0, 441,0 (d^ero) y 662,7 unidades de masa (tnmero). La RMNA de 1H y la RMN de 13C de IPM^(LYS)2 en D2O se proporcionan en las FIG. 2-4.

La ciclohexilamina y las sales de amonio de IPM se prepararon como se ha descrito anteriormente para la sal de 10 lisina. Cada una de estas sales se aislo de modo que tuvieran una estequiometna de 2:1 entre la amina y la IPM.

Ejemplo 4

Este ejemplo describe la evaluacion de la IPM contra varias lmeas celulares de cancer diferentes implantadas en ratones. Los ratones toleraron bien el tratamiento intraperitoneal (IP) e intravenoso (IV) con IPM en cada estudio; las unicas toxicidades son patologfas de organos observadas en la autopsia que se asociaron con los tumores 15 inducidos.

En primer lugar se evaluo la IPM contra dos variantes de L1210, las lmeas celulares L1210/0 y L1210/CPA implantadas en ratones, en comparacion con Ifos. Las dosis para IPM dieron el 50% de la dosis para Ifos. Se observo ILS para los tres agentes en los grupos tratados con L1210/0. No obstante, para el modelo de L1210/CPA el tratamiento con IPM fue superior al de los otros dos grupos (Ifos vs CPA). En la lmea tumoral resistente a CPA, 20 los animales tratados con IPM experimentaron un incremento por dos de la supervivencia con una reduccion de la carga tumoral de 7. Para el modelo tumoral L1210/0, la IPM fue igual de activa que la CPA y la Ifos, pero a una dosis menor. Esto demuestra que las celulas resistentes a CPA no tienen resistencia cruzada a IPM. Los resultados de este estudio se registran mas adelante en la Tabla 2.

Actividad de la mostaza de isofosforamida contra leucemias L1210/0 y L1210/CPA (respuesta optima a n° de dosis

DL10 del estudio de dosis-respuesta)

Carga tumoral L1210/0f al principio de Carga tumoral L1210/CPAfal principio de Rx=8,5 x 107 celulas Rx=6,0 x 107 celulas

Agente

Dosis* (mg kg-) Supervivientes el d'ia 60/total % ILS (solo los ratones que mueren) Reduccion Logio neta en la carga tumoral tras la terapiaf Supervivientes el d'ia 60/total % ILS (solo los ratones que mueren) Reduccion Logio neta en la carga tumoral tras la terapiaf

Ciclofosfamida

200 0/10 + 107 7 0/10 + 57 4

Ifosfamida

431 0/10 + 185 8 0/10 + 85 5

289 0/9 + 114 8 0/10 + 57 4

Mostaza de ifosforamida

100 0/10 + 128 8 1/10 + 114 7

*Tratamiento: IP; solo el d^a 2; dosis no toxica mas alta (DL10 o menor) en un intervalo de dosis. f IP; 106 celulas en ratones CDF1 macho.

5 En un segundo estudio se demuestra la inhibicion del carcinoma de pulmon de Lewis mediante IPM en ratones en los que se implantaron tumores de carcinoma de pulmon de Lewis. Dosis IP unicas el segundo dfa con CPA, Ifos, PM e IPM en los ratones portadores de carcinoma de pulmon de Lewis revelaron que la IPM daba 6/10 supervivientes sin tumor en comparacion a 7/10 y 5/10 para CPA a dosis iguales equitoxicas. La programacion de dosis unica se uso para cada agente y las actividades observadas (T-C) fueron las mismas entre los cuatro agentes.

10 Los resultados de este estudio, registrados en la Tabla 3, demuestran que la IPM es eficaz contra el carcinoma de pulmon de Lewis.

Tabla 3

Respuesta del carcinoma de pulmon de Lewis a un implante de mostaza de isofosforamida de tamano: 20 - 30 mg; sitio del implante: s.c.; Tratamiento farmacologico: IP

Agente

Programacion Dosis no toxica mas alta (mg kg' 1/dosis) Supervivientes sin tumor -1— l * 1- O % ILS t Log total muertes 1

Ciclofosfamida

Dfa 2 Dosis unica 200 5/10 27 68 > 6,8

Ifosfamida

Dfa 2 Dosis unica 300 7/10 18 55 > 4,5

Mostaza de

Dfa 2 Dosis unica 200 0/10 4,9 15 1,2

fosforamida

Dfa 2 C5 minutos 30 0/10 6,1 17 1,5

Mostaza de

x 7 Dfa 2 Dosis unica 100 6/10 8,4 34 > 2,1

isofosforamida

* Retraso del crecimiento tumoral (T-C), en el que T = mediana del tiempo ^as) requerido para los tumores del grupo de tratamiento y C, tumores del grupo control (mediana de 120 cada uno) para alcanzar un peso previamente determinado (750 mg). Se excluyo de estos calculos a los supervivientes sin tumores.

f Control: Mediana del dfa de muerte) = 29; tiempo para que la mediana del tumor alcance 750 mg= 10,4 dfas; no hubo supervivientes sin tumores entre los 30 ratones control.

$ Incremento del tiempo de vida, excluidos los supervivientes.

8 El logi0 de muerte celular (total) se calculo usando la formula siguiente: Log de muerte= valor T-C /(3,32 T4). En la que T4 es el tiempo de duplicacion del volumen del tumor medido desde una lmea recta de mejor ajuste de los tumores del grupo control en crecimiento exponencial (intervalo de 100-400 mg). T4 = 1,2 para el tumor de Lewis en este experimento.

En un tercer estudio se evaluo la eficacia de la IPM en la inhibicion del crecimiento del melanoma B16. Administraciones de dosis unicas de IPM a 150 mg revelaron que la IPM era ligeramente inferior a la CPA pero mejor que la Ifos en este modelo animal resistente. No se observaron diferencias estadfsticas entre las respuestas de % iLs entre los tres agentes terapeuticos. Los resultados de este estudio, registrados en la Tabla 4, demuestran 5 la eficacia de la IPM contra el melanoma.

Tabla 4

Comparacion de la respuesta del melanoma B16 s.c. a ciclofosfamida, mostaza de isofosforamida, mostaza de

fosforamida y a Ifosfamida

Agente

Programacion Rx Dosis (mg mg'1) Supervivientes sin tumor T-C* (dfas) % ILS

Ciclofosfamida

Dfa 2 Dosis unica 200 5/10 27 68

Ifosfamida

Dfa 2 Dosis unica 300 7/10 18 55

Mostaza de fosforamida

Dfa 2 Dosis unica 200 0/10 4,9 15

Dfa 2 C5 minutos x 7 30 0/10 6,1 17

Mostaza de

Dfa 2 Dosis unica 100 6/10 8,4 34

isofosforamida

*Vease la nota al pie de la Tabla 3 en lo que antecede. El peso predeterminado fue 750 mg.

10 En un cuarto estudio se evaluo la IPM en la inhibicion de la leucemia P388 en ratones. En este modelo animal la IPM fue eficaz en comparacion con CPA e Ifos contra leucemia P388 implantada IP como indica el > log10 muerte celular, aunque produjo menos supervivientes sin tumor. No obstante, con el modelo de tumor P388/CPA se incremento significativamente la muerte celular ademas del % ILS para IPM en comparacion con CPA e Ifos. Los resultados de este estudio se registran en la Tabla 5. Todos los datos son estadfsticamente significativos y demuestran que la IPM 15 se puede usar contra tumores tratados o resistentes a CPA ademas de para pacientes previamente tratados con otros agentes.

Actividad de la mostaza de isofosforamida contra leucemias P388/0 y P388/CPA (respuesta optima a n° de dosis

DL10 del estudio de dosis-respuesta)

Carga tumoral P388/0f al principio de Rx= ~ 4,4 x 106 celulas Carga tumoral P388/CPAf al principio de Rx= ~4,6 x 106 celulas

Agente

Dosis* (mg kg 1) Supervivientes el d^a 60/total % ILS (solo los ratones que mueren) Reduccion logio neta en la carga tumoral tras terapiaf Supervivientes el d^a 60/total % ILS (solo los ratones que mueren) Reduccion logio neta en la carga tumoral tras terapiaf

CPA

265 7/10 + 280 7 0/10 + 35 3

175 4/10 + 130 7 0/10 + 35 3

Ifos

538 7/10 + 210 7 0/10 + 42 4

431 7/10 + 130 7 0/10 + 39 4

IPM

125 0/9 + 100 6 0/10 + 71 7

100 1/10 + 140 7 0/10 + 85 7

*Tratamiento: IP; f Implante: IP; 1C

solo el dfa 1; dosis no toxica mas alta (DL10 o menor) en un intervalo de dosis. i6 celulas en ratones CDF1 hembra.

5 En un quinto estudio se evaluo la inhibicion con IPM del sarcoma M5076 implantado en ratones. Se inyectaron dosis diarias de 18-40 mg/kg de IPM a tumores en crecimiento durante cinco dfas (el compuesto se inyecto IP diariamente los dfas 11-15). La T - C fue de 6,1 dfas a 40 mg/kg. Las dosis fueron bien toleradas con mejoras significativas en la respuesta. Los ratones toleraron bien los tratamientos (IP); las unicas toxicidades son patologfas de organos observadas en la autopsia que se asociaron con los tumores inducidos. Los resultados de este estudio, registrados 10 en la Tabla 6, demuestran que la IPM es eficaz contra el sarcoma de un modo dependiente de la dosis.

Tabla 6

Respuesta del sarcoma M5076 implantado SC al tratamiento con IPM

Agente

Dosis (mg/kg) Dfas hasta 2 duplicaciones Dfas de retraso (T-C)

IPM

40 15,4 6,1

IPM

27 12,6 3,3

IPM

18 10,3 1

En un sexto estudio se evaluo la inhibicion de tumores de mama 16/C implantados en ratones. En los ratones se implanto el tumor de mama 16/C y cuando los tumores eran palpables/mensurables se trataron con CPA, Ifos e IPM 15 como agentes individuales. CPA e Ifos se usaron como controles para IPM. Los farmacos se administraron IP a

dosis de 30-60 mg/kg/dfa durante 4 dfas, comenzando el dfa 7 tras la implantacion del tumor. Se produjo una mejora estadfstica de la actividad para IPM en comparacion con CPA e Ifos, a todas las dosis para los tres agentes. IPM fue superior en “dfas hasta 2 duplicaciones” y “dfas de retraso (T-C)' en comparacion con Ifos y CPA a la misma dosis/dfa contra este tumor mamario murino agresivo. Todas las proporciones estaban dentro de los lfmites de 20 confianza. Estos datos (registrados en la Tabla 7) demuestran la eficacia de IPM contra los tumores de mama y las

dosis de cuatro dfas avalan ademas la superioridad de multiples dosis de IPM.

Respuesta del tumor de mama 16/C SC al tratamiento con CPA, IFOS e IPM

Agente

Dosis Via Programacion Dfas hasta 2 duplicaciones Dfas de retraso (T - C)

(mg/kg)

Control.

IP C1d x 4 dfas 7 CONTROL 3,2

CPA

60 IP C1d x 4 dfas 7 7,7 4,5

CPA

50 IP C1d x 4 dfas 7 CPA 7,2 4,0

CPA

40 IP C1d x 4 dfas 7 4,4 1,2

CPA

30 IP C1d x 4 dfas 7 3,6 0,4

IFOS

60 IP C1d x 4 dfas 7 4,6 1,4

IFOS

50 IP C1d x 4 dfas 7 IFOS 4,9 1,7

IFOS

40 IP C1d x 4 dfas 7 3,8 0,6

IFOS

30 IP C1d x 4 dfas 7 4,0 0,8

IPM

50 IP C1d x 4 dfas 7 9,5 6,3

IPM

40 IP C1d x 4 dfas 7 IPM 8,5 5,2

IPM

30 IP C1d x 4 dfas 7 7,4 4,2

En un septimo estudio se evaluo la IPM contra el melanoma lox-IMVI humano implantado IP. En ratones atfmicos se implanto IP el melanoma Lox humano y se trato durante cinco dfas con CPA o IPM. Las dosis de ambos farmacos 5 fueron 40 mg/kg al dfa IV durante 5 dfas. El % ILS fue +121 parar CPA y +52 para IPM. No obstante se observaron respuestas excelentes y las dosis fueron bien toleradas. Las respuestas estaban dentro de los lfmites de confianza. Los resultados de este estudio (registrados en la Tabla 8) demuestran la eficacia de la administracion IV de IPM tambien demuestran la eficacia de la IPM contra el melanoma humano.

Tabla 8

Tratamiento: IV;C1DX5 (1)

Respuesta terapeutica

Agente

Dosificacion (mg/kg/dosis) Mediana de dfas de la muerte % ILS

Control

- 19,0 -

CPA

40 42,0 + 121

IPM

40 29,0 + 52

10

En un octavo estudio se evaluo la inhibicion de tumores de mama -1/C MX-1 humanos con IPM. La administracion IP diaria de CPA, Ifos o IPM se comparo en dosificaciones de 40-60 mg/kg siguiendo una programacion diaria x 5 dfas comenzando el dfa 12 (tras la implantacion). Los datos registrados en la Tabla 9 demuestran que la IPM es activa contra los tumores de mama humanos. Todas las proporciones estaban dentro de los lfmites de confianza.

5

10

15

20

25

Respuesta del tumor de mama MX-1 SC al tratamiento con CPA, FOS e IPM

Agente

Dosis (mg/kg) Via Programacion Dfas hasta 2 duplicaciones Dfas de retraso (T - C)

CPA

60 IP C 1d x 5 dfa 12 > 48,0 > 40,5

IFOS

60 IP C 1d x 5 dfa 12 39,4 31,9

IFOS

40 IP C 1d x 5 dfa 12 16,1 8,6

IPM

60 IP C 1d x 5 dfa 12 26,5 19,0

IPM

40 IP C 1d x 5 dfa 12 14,2 6,7

Ejemplo 5

En este ejemplo se compara la eficacia de IPM y la de IPM^(LYS)2 y la sal de IPM^(NH4)2 contra varias lmeas celulares hiperproliferativas.

La eficacia de la IPM y la IPM^(LYS)2 y la sal de IPM^(NH4)2 contra el tumor murino de pulmon de Lewis se comparo cuando se administraron los compuestos por v^a IP a diario durante 5 d^as a dosis de 20-125 mg/kg al dfa x 5 d^as, comenzando el d^a 6 (tras la implantacion). La IPM y su sal de lisina posefan actividades equivalentes a dosis que reflejaban un incremento por dos de la DMT (mg/kg/dosis) de la sal sobre el farmaco parental. Todas las proporciones estaban dentro de los lfmites de confianza. Los ratones toleraron bien la administracion IP de la sal; las unicas toxicidades son patologfas de organos observadas en la autopsia que se asociaron con los tumores inducidos. Los resultados de este estudio (registrados en la Tabla 10) demuestran que IPM^(LYS)2 exhibe una eficacia equivalente a la de la IPM contra el tumor murino de pulmon de Lewis y que la sal de IPM^(NH4)2 es eficaz contra el tumor murino de pulmon de Lewis.

Tabla 10

Tumores murinos de pulmon de Lewis

Agente

Dosificacion MTD (mg/kg/dosis) T -C (dfas)

Sal de lisina de IPM

93,2 8,3*

Sal de amonio de IPM

42,8 9,1

IPM

40,0 12,5*

Implante: 20-30 mg de fragmentos tumorales Via de tratamiento: Intraperitoneal Programacion: todos los dfas x 5 comenzando el dfa 6 *Aunque los valores de T-C son estadfsticamente diferentes (P = 0,004),

las actividades antitumorales son comparables.

Una segunda comparacion de la eficacia de IPM, sal de IPM^(LYS)2 y sal de IPM^(NH4)2 se condujo con respecto a la inhibicion de tumores de mama MX-1. En este estudio, los efectos de IPM y la sal de IPM^(LYS)2 se compararon cuando se administraron por via IP a dosis de 20-100 mg/kg al dfa x 5 dfas, comenzando el dfa 12 tras la implantacion de los tumores de mama MX-1 en los ratones. La sal de IPM^(LYS)2 fue 8 veces mayor a la IPM a dosis comparables. La DMT tambien fue mayor para la sal de lisina. Todas las proporciones estaban dentro de los lfmites de confianza. Los ratones toleraron bien el tratamiento IP con las sales IPM^(LYS)2 y con IPM^(NH4)2; las unicas toxicidades son patologfas de organos observadas en la autopsia que se asociaron con los tumores inducidos. Estos datos (registrados en la Tabla 11) demuestran que tanto la sal de IPM^(LYS)2 como la sal de IPM^(NH4)2 son significativamente superiores a la IPM contra celulas de tumor de mama humano.

5

10

15

20

25

30

35

40

Tumor de mama humano MX-1

Agente

Dosificacion DMT (mg/kg/dosis) T -C (dfas)

Sal de lisina de IPM

93,2 10,2*

Sal de amonio de IPM

28,6 4,6

IPM

40,0 2,1*

Implante: 20-30 mg de fragmentos tumorales fmplantados por via subcutanea en la almohadilla de grasa de la mama Via de tratamiento: Intraperitoneal

Programacion: todos los dfas x 5 comenzando el dfa 12 Valor p*= 0,041

Ejemplo 6

En este ejemplo se describe la evaluacion de la toxicidad aguda de la sal de lisina de la mostaza de isofosforamida siguiendo tres d^as de inyeccion intravenosa diaria (bolo) en ratones. Este estudio constaba de dos fases:

En primer lugar, la fase de busqueda de intervalo de dosis consistio en cuatro grupos de tratamiento (un raton/sexo/grupo) que recibieron el artfculo de ensayo como una unica dosis diaria durante tres dfas consecutivos a los respectivos niveles de dosis de 100, 200, 400, y 600 mg/kg. El vetuculo fue cloruro sodico al 0,9% para inyeccion, USP y todas las dosis estaban a un volumen constante de 15 ml/kg. Los animales se sometieron a observacion durante siete dfas tras la dosis. El dfa 10, tras el periodo de observacion de siete d^as, todos los supervivientes de la fase de busqueda del intervalo de dosis se presentan en el Apendice F de este informe. En base a las muertes observadas en la fase de busqueda del intervalo de dosis a 200, 400, y 600 mg/kg, los niveles de dosis elegidos para la fase del estudio principal fueron 50, 75, 100, 200, 300, 500 y 600 mg/kg (vease mas adelante).

La segunda, la fase principal del estudio consistio en ocho grupos de tratamiento (cinco ratones/sexo/grupo) que recibieron el artfculo de ensayo como una unica dosis diaria durante tres dfas consecutivos a los respectivos niveles de dosis de 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500 y 600 mg/kg. Un grupo adicional (5 ratones/sexo) sirvio como control del compuesto parental y recibio el compuesto parental mostaza de isofosforamida del mismo modo, a un nivel de dosis de 150 mg/kg. El vetuculo fue cloruro sodico al 0,9% para inyeccion, USP y todas las dosis estaban a un volumen constante de 15 ml/kg. Los animales se sometieron a observacion durante 11 dfas tras el periodo de dosis de tres dfas.

Las observaciones de mortalidad, morbididad y la disponibilidad de comida y agua se realizaron dos veces al dfa para todos los animales. Las observaciones de signos clmicos se realizaron a diario durante el estudio (aproximadamente una y cuatro horas despues de la dosis los dfas 1, 2 y 3, y una vez al dfa los dfas de no administracion de dosis). Los pesos corporales de todos los ratones supervivientes se midieron y registraron el segundo dfa desde la recepcion, antes de la aleatorizacion, y los dfas -1 y 7. Los pesos corporales tambien se midieron en todos los animales supervivientes de la fase principal del estudio el dfa 14. Se realizaron evaluaciones macroscopicas en cada animal del estudio principal en la necropsia (Dfa 15).

Adquisicion y adimatacidn de los animales:

Un total de 62 ratones CD-1(1CR) BR macho y 61 hembras (de aproximadamente 6 semanas de edad) se recibieron de CD-1(1CR) Charles River Laboratories, Portage, Michigan, el 21 de abril de 2003. Durante el periodo de aclimatacion de siete a 16 dfas se verifico el sexo de los animales, se peso a los animales y se sometieron a observacion dos veces al dfa con respecto a su salud general y para detectar cualquier signo de enfermedad. En el momento de la recepcion se estabulo a los animales a razon de tres o cuatro ratones/jaula con el fin de aclimatarlos al sistema de agua automatico. Tres dfas despues de la recepcion se estabulo a los animales individualmente. En todos los animales se realizo una observacion clmica detallada antes de la seleccion para el estudio.

Aleatorizacion, asignacion al estudio y mantenimiento:

Antes de la asignacion al estudio se peso a los ratones y se les exploro en busca de signos de enfermedad u otras anomalfas ffsicas. Los animales asignados al estudio teman pesos corporales dentro del 20% del peso corporal medio para cada sexo. Usando un sencillo procedimiento de aleatorizacion se coloco a los animales en los grupos de tratamiento. Animales adicionales obtenidos para este estudio se sacrificaron mediante inhalacion de dioxido de carbono y se desecharon.

Cuarenta y nueve ratones macho y 49 hembra (de un peso de 24,8 a 29,1 g y de 21,5 a 24,2 g, respectivamente en el momento de la aleatorizacion) fueron asignados a los grupos de tratamiento identificados en la Tabla 12.

A cada animal se le asigno un numero de animal para usar en Provantis™ y se le implanto un microchip portador de un numero de identificacion unico. El numero de cada animal individual, el numero de implante y el numero de 5 estudio comprendfan una identificacion unica para cada animal. La jaula se identifico con el numero del animal, el numero de estudio, el numero de grupo y el sexo. La identificacion del animal se verifico durante el curso del estudio tal como se documenta en los datos.

Los animales fueron estabularon individualmente en jaulas suspendidas de tipo de alambre de malla de acero inoxidable. Se proporciono luz fluorescente durante aproximadamente 12 horas al dfa y se controlo mediante un 10 cronometro automatico. La temperatura y la humedad se monitorizaron y registraron a diario y se mantuvieron entre 68 y 74 °F y de 30 a 68% respectivamente.

Los niveles de dosis para la fase de busqueda de intervalo de dosis se seleccionaron en base a los datos disponibles de estudios previos. Los niveles de dosis para la fase del estudio principal se fijaron tras una revision de los resultados de la fase de busqueda de intervalo de dosis con la excepcion de los 150 mg/kg del compuesto 15 parental en el grupo control, cuyo nivel de dosis se selecciono en base a los datos disponibles de estudios anteriores.

Tabla 12

Asignacion de grupos

Numero de grupo Nivel de dosis (mg/kg) Numero de animales

Machos Hembras

Fase de busqueda de intervalo de dosisa

1

100

1

1

2

200 1 1

3

400 1 1

4

600 1 1

Fase del estudio principal6

5c

150 5 5

6

50 5 5

7

75 5 5

8

100 5 5

9

200 5 5

10

300 5 5

11

400 5 5

12

500 5 5

13

600 5 5

a Los animales recibieron las dosis durante tres dfas, seguido de un periodo de observacion de siete dfas. bLos animales recibieron las dosis durante tres dfas, seguido de un periodo de observacion de 11 dfas. c Este grupo recibio dosis del compuesto parental mostaza de isofosforamida (compuesto parental control).

Administracion:

20 Cuatro grupos de tratamiento (un raton/sexo/grupo) recibieron el artfculo de ensayo como una unica dosis diaria durante tres dfas consecutivos por via de inyeccion intravenosa (bolo) a los respectivos niveles de dosis de 100, 200, 400, y 600 mg/kg. Todas las dosis estaban a un volumen de 15 ml/kg y se basaron en los pesos corporales

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mas recientes.

Ocho grupos de tratamiento del estudio principal (recibieron el artfculo de ensayo como una unica dosis diaria durante tres dfas consecutivos por via de inyeccion intravenosa (bolo) a los respectivos niveles de dosis de 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500 y 600 mg/kg. Un grupo adicional (5 ratones/sexo) sirvio como control del compuesto parental y recibio el compuesto parental mostaza de isofosforamida del mismo modo, a un nivel de dosis de 150 mg/kg. Todas las dosis estaban a un volumen constante de 15 ml/kg y se basaron en los pesos corporales mas recientes.

Sujetando al animal se administro la formulacion de dosificacion a traves de una aguja que se inserto en la vena de la cola y se observo el capuchon de la aguja para detectar presencia de sangre y garantizar la correcta colocacion de la aguja en la vena. A continuacion se administro la dosis al volumen de dosis absoluta para cada animal.

Observacion y exploracion:

Se realizaron observaciones en todos los animales de mortalidad, morbididad, lesiones y la disponibilidad de comida y agua dos veces al dfa durante la totalidad del estudio.

Se realizo una exploracion clmica detallada de cada animal transcurridas una y cuatro horas desde la dosis los dfas 1, 2 y 3, y una vez al dfa los dfas de no administracion de dosis. Las observaciones incluyeron, entre otras, evaluacion de la piel, el pelaje, los ojos, los ofdos, la nariz, la cavidad oral, el torax, el abdomen, los genitales externos, las extremidades y los pies, efectos respiratorios y circulatorios, efectos autonomos tales como salivacion, y efectos en el sistema nervioso, incluidos temblores, convulsiones, reactividad a la manipulacion y comportamiento extrano.

Los pesos corporales de todos los ratones supervivientes se midieron y registraron el segundo dfa desde la recepcion, antes de la aleatorizacion, y los dfas -1 y 7. Los pesos corporales tambien se midieron en todos los animales supervivientes de la fase principal del estudio el dfa 14. Los pesos corporales registrados tras la recepcion y antes de la aleatorizacion no se indican, pero se conservan en el archivo del estudio.

El dfa 10 se sacrifico y desecho a todos los animales supervivientes de la fase de busqueda de intervalo de dosis. No se realizaron necropsias en ninguno de los animales de la fase de busqueda de intervalo de dosis. Todos los animales del estudio principal recibieron una exploracion completa de la necropsia segun los procedimientos aprobados por un anatomopatologo veterinario. Al finalizar el estudio, todos los animales supervivientes del estudio principal fueron sacrificados mediante inhalacion de dioxido de carbono y exanguinacion a traves de la vena cava abdominal.

A cada animal se le exploro cuidadosamente para detectar anomalfas externas, incluidas masas. Se separo la piel desde una incision media ventral y se identificaron todas las anomalfas subcutaneas y se correlacionaron con los hallazgos previos a la muerte. Las cavidades abdominal, toracica y craneal se exploraron en busca de anomalfas y se extrajeron y examinaron todos los organos. Se registraron todas las anomalfas. No se guardo ningun tejido y se desecharon las carcasas.

Estartstica:

Cuando sea adecuado, la DL50 y la DL10 y sus lfmites de confianza del 95% se calcularon usando el procedimiento Probit (SAS Institute, Inc. SAS/STAT® User's Guide, Version 6, Cuarta Edicion, Volumen 2. Cary NC: SAS Institute; 1989) en SAS® (grupos tratados en el estudio principal).

Los sistemas informaticos usados durante la realizacion de este estudio se presentan en la Tabla 13.

Tabla 13

Sistemas informaticos

Sistema in-life

Provantis™

Aleatorizacion:

Provantis™

Patologfa

Provantis™

Analisis estadfsticos: SAS

Notificacion:

SAS y Microsoft Office Professional

Resultados:

Los datos siguientes son los resultados de la fase definitiva del estudio principal.

En la Tabla 14 que figura a continuacion se presenta un resumen de los resultados de mortalidad. Los resultados de

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mortalidad generalmente exhiben un tfpico efecto de dosis-respuesta, siendo la sal de lisina de IPM ligeramente mas toxica en hembras que en machos. El grupo control con el compuesto parental IPM exhibio la mortalidad prevista, asf como mayor toxicidad en hembras que en machos, lo que se correlaciona con los datos disponibles de estudios previos.

Tabla 14

Mortalidad por dia de estudio y acumulada

D^a del estudio (Machos/Hembras)

Nivel de dosis (mg/kg)

1 a 5 6 7 8 9 10 11 12 a 14 Mortalidad acumulada

M H M H M H M H M H M H M H M H M H Total

150a

0 0 0 1 0 1 0 2 0 0 0 0 1 0 0 0 1/5 4/5 5/10

50

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0/5 0/5 0/10

75

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0/5 0/5 0/10

100

0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1/5 0/5 1/10

200

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 1b 0/5 3/5 3/10

300

0 0 0 1 1 3 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 4/5 5/5 9/10

400

0 0 0 4 3 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 5/5 5/5 10/10

500

0 0 4 2 1 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5/5 5/5 10/10

600

0 0 3 5 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5/5 5/5 10/10

a Compuesto parental control b Muerte producida el dfa 12 M Machos - H- Hembras

La DL10 intravenosa de la sal de lisina de IPM se calculo en 133 mg/kg (lfmites de confianza del 95% de 65 a 172) en ratones (sexos combinados), mientras que la DL50 intravenosa se calculo en 220 mg/kg (lfmites de confianza del 95% de 184 ° 265 mg/kg).

Los valores de la DL10 para machos y hembras por separado fueron 140 y 179 mg/kg, respectivamente (lfmites de confianza del 95% de 12 a 199 mg/kg para machos, no pudieron calcularse para las hembras), mientras que los valores de la DL10 para machos y hembras fueron 247 y 197 mg/kg, respectivamente (lfmites de confianza del 95% de 187 a 330 para machos; no pudieron calcularse para las hembras).

No se observaron hallazgos macroscopicos relacionados con el tratamiento en ningun sexo en las observaciones posteriores a la muerte.

Conclusiones:

Los resultados de mortalidad generalmente exhibieron un tfpico efecto de dosis-respuesta, siendo la sal de lisina de IPM ligeramente mas toxica en hembras que en machos. Ningun animal murio a la dosis de 50 o 75 mg/kg, 1 de 10 animales murio a 100 mg/kg, 3 de 10 animales murieron a 200 mg/kg, 9 de 10 animales murieron a 300 mg/kg, y todos los animales murieron a 400, 500, y 600 mg/kg. El grupo control del compuesto parental de IPM exhibio la mortalidad prevista (5 de 10 animales murieron), asf como una mayor toxicidad en hembras que en machos, lo que se correlaciona con los datos disponibles de estudios previos. El inicio de la muerte en el estudio se retraso ligeramente, produciendose las primeras mortalidades el dfa 6 y las ultimas el dfa 12. En general, los signos clmicos que reflejan el estado de deterioro de los ratones antes de la muerte se observaron en ambos sexos. Estos signos clmicos incluyeron la agoma, la disminucion de la actividad, el incremento de la actividad, inflamacion (cola/nariz/hocico y/o cara), respiracion rapida/lenta/poco profunda/diffcil/audible, temblores, piel fna al tacto, aspecto descuidado, postura encorvada, alteracion de la funcion de las extremidades, decoloracion del pelaje en las regiones dorsal y/o anogenital, heces pocas/ausentes y disminucion de la miccion. Se observaron disminuciones relacionadas con el tratamiento en la ganancia media de peso corporal, o, en muchos casos, la perdida de peso corporal, en los animales supervivientes el dfa 7, con al menos una recuperacion parcial para el dfa 14 en los

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animales supervivientes al finalizar el estudio. No se observaron hallazgos macroscopicos relacionados con el tratamiento en la necropsia.

En base a la enfermedad y los hallazgos de este estudio, la DL10 intravenosa de la sal de lisina de IPM se calculo en 133 mg/kg (Smites de confianza del 95% de 65 a 172) en ratones (sexos combinados), mientras que la DL50 intravenosa se calculo en 220 mg/kg (lfmites de confianza del 95% de 184 ° 265 mg/kg).

Ejemplo 7

En este ejemplo se resumen los resultados de extensos datos preclmicos para la toxicidad de la IPM y su sal de lisina. Estos datos se usan para disenar los regfmenes de dosificacion para ensayos clmicos humanos.

La toxicidad de la IPM y su sal de lisina se han investigador mediante estudios preclmicos agudos y subagudos usando ratones, ratas y perros. Se han estudiado dosis unicas de administracion oral, intravenosa (IV) e intraperitoneal (IP) para IPM en ratones y ratas. Se han estudiado dosis multiples de administracion por via IV e IP en ratones y perros. Las dosis intravenosas subagudas (3 dfas) en ratones y perros ha proporcionado la informacion toxicologica/farmacocinetica sobre toxicidades y alteraciones farmacologicas que se usaron en el diseno de la administracion y programaciones de dosis en seres humanos. Las dosis IV subagudas (3-dfa) con la sal de lisina de IPM se realizaron en ratones.

En base a los resultados del estudio de busqueda de intervalo de dosis se requirieron dosis mayores de IPM para producir una mortalidad mayor a la prevista. Para ratas, los valores de DL50 oral se calcularon en 4443 mg/kg para machos, 2786 mg/kg para hembras y 3560 mg/kg para ambos sexos combinados. En cada caso se pudieron calcular los lfmites de confianza del 95%.

Para ratones, los valores de DL50 oral se calcularon en 1.014 mg/kg para machos, (lfmites de confianza del 95%), 1962 mg/kg para hembras (lfmites de confianza del 95% 1523-2983 mg/kg) y 1432 mg/kg para ambos sexos combinados (lfmites de confianza del 95% 1128-1742 mg/kg).

Para ratas, los valores de DL50 para dosis intravenosas unicas se calcularon en 567 mg/kg para machos, 400 mg/kg para hembras y 428 mg/kg para ambos sexos combinados. En cada caso no se pudieron calcular los lfmites de confianza del 95%. Para ratones, los valores de DL50 intravenosa se calcularon en 929 mg/kg para machos, (lfmites de confianza del 95%), 484 mg/kg para hembras (lfmites de confianza del 95% 72-1.364 mg/kg) y 688 mg/kg para ambos sexos combinados (lfmites de confianza del 95% 3981.366 mg/kg).

La administracion de IPM por via IP e IV sf dio como resultado muertes agudas en ratones, ratas y perros. La administracion oral en ratones y ratas tambien se evaluo y se determinaron los valores de DL50 en el intervalo de 1,4-3,5 g/kg para estas especies de roedores. Los smtomas de toxicidad intravenosa aguda en ratones, ratas y perros incluyeron disminucion del apetito, diarrea, disminucion de la actividad y muerte.

Las dosis aceptables de los estudios de dosificacion de tres (3) dfas fueron significativamente diferentes de la programacion de dosis unicas. Se evaluaron los efectos del farmaco sobre la medula osea, el bazo y las funciones tubulares renales. El impacto de la IPM sobre estos organos parece contribuir a la causa de la muerte en estas dos especies. A continuacion se presenta un resumen.

Un estudio IV subagudo de IPM en ratones proporciono informacion en cuanto a los valores de DL10 y la toxicidad que se podnan producir en seres humanos. Los resultados de mortalidad mostraron un tfpico efecto de dosis- respuesta, siendo la IPM ligeramente mas toxica en hembras que en machos.

La DL10 intravenosa de IPM se calculo en 119 mg/kg (con lfmites de confianza del 95% de 87 - 134 mg/kg) en ratones (sexos combinados), mientras que la DL50 intravenosa se calculo en 149 mg/kg (con lfmites de confianza del 95% de 132 -169 mg/kg). Los valores de DL10 para machos y hembras por separado fueron de 168 y 125 mg/kg respectivamente, mientras que los valores de DL50 para machos y hembras fueron 173 y 132 respectivamente. En cada caso no se pudieron calcular los lfmites de confianza del 95%.

El estudio subagudo de la sal de lisina de IPM incluyo un total de 40 ratones macho y 40 hembras (Crl: CD- 1(1CR)BR) de un peso de 24,8 a 29,1 g y de 21,5 y 24,2 g, respectivamente en la aleatorizacion) fueron tratados con dosis de 50 a 600 mg/kg IV al dfa x 3 dfas (Tabla 8.8).

Para la sal de LYS de IPMA, la DL10 intravenosa de IPM para el estudio con ratones de 3 dfas se calculo en 133 mg/kg (con lfmites de confianza del 95% de 65 - 172 mg/kg) (sexos combinados), mientras que la DL50 intravenosa fue 220 mg/kg (con lfmites de confianza del 95% de 184 265 mg/kg (para sexos combinados)). Los valores de DL10 para machos y hembras por separado fueron de 140 y 179 mg/kg (lfmites de confianza del 95% de 12 a 199 mg/kg en machos; no se pudieron calcular para las hembras). Los valores de DL50 para machos y hembras fueron de 247 y 197 mg/kg respectivamente (lfmites de confianza del 95% de 187 a 330 mg/kg en machos; no se pudieron calcular para las hembras).

La sal de lisina de IPM generalmente mostro un tfpico efecto de dosis-respuesta, siendo ligeramente mas toxica en

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hembras. Ningun raton murio a la dosis de 50, 75 o 200 mg/kg, 1 de 10 animales murio a 100 mg/kg, 9 de 10 animales murieron a 300 mg/kg y todos los animales murieron a 400, 500, y 600 mg/kg. El grupo control del compuesto parental de IPM exhibio la mortalidad prevista, as^ como una mayor toxicidad en hembras que en machos, lo que se correlaciona con los datos disponibles de estudios previos. El inicio de la muerte en el estudio se retraso ligeramente, produciendose las primeras mortalidades el dfa 6 y las ultimas el dfa 12. En general, los signos clmicos que reflejan el estado de deterioro de los ratones antes de la muerte se observaron en ambos sexos.

En base a los hallazgos de la exploracion microscopica, la IPM administrada sola o como la sal de lisina IV a diario durante tres dfas produjo deplecion de medula osea, necrosis tubular renal o una combinacion de ambos relacionados con el tratamiento y se consideraron la causa de la muerte. Para IPM, habfa deplecion intensa de medula osea en machos a 178 mg/kg y mayor y en hembras a 133 mg/kg y mayor. La necrosis tubular renal se produjo en machos a 237 mg/kg y mayor y en hembras a 133 mg/kg y mayor. Ademas, se observo deplecion linfoide esplenica en la mayona de los machos y en todas las hembras que murieron durante el estudio. No se observaron hallazgos microscopicos obvios relacionados con el tratamiento en ningun sexo a 75 mg/kg. Se observaron signos clmicos generalmente secundarios al estado de deterioro de los ratones antes de la muerte, pero ninguna prueba clara de efectos sobre el peso corporal en los ratones supervivientes al finalizar el estudio.

La DL10 intravenosa para mostaza de ifosforamida (IPM) y su sal de lisina administrada a diario durante tres dfas se calculo en 119 mg/kg vs. 133 mg/kg, respectivamente, con una DL50 de149 mg/kg vs. 220 mg/kg, respectivamente.

Se han realizado estudios de toxicidad aguda y subaguda en roedores y perros con IPM y su sal de lisina. Estos estudios tambien se han usado para desarrollar dosis de partida aceptables en investigaciones con seres humanos. Un resumen de los datos de toxicidad en roedores y perros para administracion IV de IPM se registra en la Tabla 15 y un resumen de los datos de toxicidad para administracion IV de IPM^(LYS)2 se registra en la Tabla 16.

Tabla 15

Resumen de la experiencia del tratamiento intravenoso - IPM

N° y especie

Dosis, pauta y duracion Dosis total de IPM (mg) IPM en plasma. Eficacia DL50 de seguridad (mg/kg)

47 ratas

400-2.000 mg/kg; Iv x 1d 81,6-650 No analizado No analizado 428

40 ratones

100-1.200 mg/kg; Iv x 1d CD CO CM co~ No analizado No analizado 688

80 ratones

75-562 mg/kg; iv al dfa x 3 dfas 5,7 -60,6 No analizado No analizado 149

14 perros

1-100 mg/kg/d; Iv al dfa x 3 dfas 22,5 -2130 100 mg/kg/dfa x 3 dfas (Cmzx25-78 mcg/ml) No analizado 1-5 mg/kg/dfa x 3 dfas (100% Supervivencia)

Tabla 16

Sal de lisina de IPM intravenosa

N° y especie

Dosis, pauta y duracion Dosis total de IPM (mg) IPM en plasma. Eficacia DL50 de seguridad (mg/kg)

80 ratones

50-600 mg/kg; iv al dfa x 3 dfas O CO CO No analizado No analizado 220

La DMO de IPM para perros fue mg/kg/dfa x 3 dfas y una dosis de partida correspondiente en seres humanos de 100 mg/m2 al dfa durante tres (3) dfas debena ser un punto de partida seguro. Para IPM^(LYS)2, la Dl-i0 para la programacion de tres (3) dfas de dosis intravenosas en ratones se calculo en 133 mg/kg/dfa x 3 dfas. La IPM^(LYS)2 se considera que es un agente alquilante mmimamente toxico con un agudo intervalo terapeutico. En base a mg/kg,

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la dosis toxica media (DTM) en seres humanos para la sal de lisina se estima que es 1/10 de la DL10 en ratones o de 40 mg/m2^a.

Las dosis IV humanas comparables estimadas se registran en la Tabla 17.

Tabla 17

Dosis intravenosas humanas comparables estimadas

Farmaco

Especie DL10IV subaguda Dosis IV humana comparable

IPM

Raton 119 mg/kg/d 30 mg/m2/d

IPM

Perro 5 mg/kg/d 100 mg/m2/d

Sal de lisina de IPM

Raton 133 mg/kg/d 40 mg/m2/d

Ejemplo 8

Este ejemplo describe el tratamiento del cancer en sujetos humanos que tienen cancer de ovarios metastasico.

El sujeto se trata con 500 mg/m2 de IPM al dfa durante tres dfas consecutivos mediante infusion intravenosa. Los electrolitos en suero, como fosforo y cloro, se corrigen con electrolitos complementarios, que se interrumpen tras siete dfas. Los niveles de BUN y creatinina se monitorizan en los lfmites normales.

Ejemplo 9

Este ejemplo describe los resultados del tratamiento de sujetos humanos con IPM^(LYS)2. Hasta la fecha se han tratado con IPM^(LYS)2 cuatro (4) pacientes con cancer avanzado.

La dosis inicial de la sal de lisina de IPM fue 30 mg/m2 administrados por via intravenosa durante tres (3) dfas. Un paciente (cohorte) se trato por escalada de dosis cada 21-28 dfas para permitir la presentacion de toxicidad. Las dosis se aumentaron en un 40% si no se produjeron acontecimientos toxicos graves. Se han tratado cuatro pacientes, uno a cada dosis, 30, 42, 59 y 83 mg/m2 por via de administracion IV durante 3 dfas sin una toxicidad grave. Un paciente con cancer rectal presento estabilizacion de su enfermedad tras la administracion de 83 mg/m2 de IPM^(LYS)2 por via de administracion IV durante 3 dfas.

Ejemplo 10

Este ejemplo describe el tratamiento de cancer de pulmon amicrodtico que ha progresado a adenocarcinoma infiltrante moderadamente diferenciado. El estado de la enfermedad puede confirmarse mediante TAC.

La sal de lisina de mostaza de isofosforamida se administra a 350 mg/m2 al dfa durante tres dfas consecutivos por via intravenosa. Tras un periodo de descanso de 21 dfas se repitio una vez el protocolo del tratamiento de tres dfas. Durante los tratamientos se monitorizaron diariamente los analisis hematologicos y de bioqmmica en sangre. El estado del cancer se monitoriza mediante TAC.

Ejemplo 11

Este ejemplo demuestra el efecto de la formacion de una sal de amina sobre la estabilidad del compuesto.

Las muestras de la mostaza de isofosforamida y su sal de lisina se almacenaron en condiciones variables y se analizo su pureza. Los resultados se presentan en la tabla siguiente.

Compuesto

0 meses 1 mes 3 meses 1 ano

IPM, -23 °C

97% 88% 70%

IPM-LYS, -23 °C

98% 98% 100%

IPM-LYS, ambiente

98% 98% 65%

En vista de lo anterior, tambien se describen en la presente memoria los siguientes puntos:

1. Un compuesto de formula

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30

35

o

X 11

A+.-0~p~NHCH2CH2X

nhch2ch2y

en la que A+ representa una especie amonio seleccionada entre amonio cuaternario, el acido conjugado de un aminoacido basico, amonio alifatico, amonio heterodclico, amonio aromatico, piridinio, guanidinio, y amidinio sustituidos y no sustituidos; y

X e Y representan independientemente grupos salientes.

2. Un compuesto del punto 1, en el que A+ representa BH+ y B es una amina seleccionada de aminoacidos basicos, piridina, N,N-dimetilaminopiridina, diazabiciclononano, diazabicicloundeceno, N-metil-N-etilamina, dietilamina, trietilamina, diisopropiletilamina, mono-, bis- o tris- (2-hidroxietil)amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, tris(hidroximetil)metilamina, N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina y N-metil-D-glucamina.

3. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto tiene la formula

0

[g][b^. '0-P-NHCH2CH2X

nhch2ch2y

y G representa una segunda especie amonio o amina.

4. Un compuesto del punto 2, en el que B se selecciona entre lisina, homolisina, arginina, homoarginina, histidina, ornitina y combinaciones de las mismas.

5. Un compuesto del punto 2, en el que B es lisina.

6. Un compuesto del punto 2, en el que X e Y se seleccionan independientemente entre halogenos y sulfonatos.

7. Un compuesto del punto 2, en el que X e Y son halogeno.

8. Un compuesto del punto 2, en el que X e Y son cloruro.

9. Un compuesto del punto 3, en el que B y G son lisina y X e Y representan cloruro.

10. Un compuesto que comprende un anion de mostaza de isofosforamida y al menos una amina, cation amonio o ambos.

11. Un compuesto del punto 10, que ademas comprende una segunda amina o cation amonio.

12. Un compuesto del punto 10, que ademas comprende un cation de metal alcalino o cation de amonio cuaternario.

13. Un compuesto del punto 10, en el que el cation de amonio es lisina.

14. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto del punto 1 y un portador farmaceuticamente aceptable.

15. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que X e Y independientemente se seleccionan entre halogenos y sulfonatos.

16. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que B+ se selecciona entre lisina, homolisina, arginina, homoarginina, histidina, ornitina y combinaciones de las mismas.

17. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que X e Y son halogeno.

18. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que X e Y son cloruro.

19. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que la composicion comprende una solucion formulada para administrar a un ser humano.

20. Una composicion farmaceutica del punto 19, en la que la solucion comprende de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 250 mg/ml del compuesto.

21. Una composicion farmaceutica del punto 20, en la que la solucion comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg/ml del compuesto.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

22. Una composicion farmaceutica del punto 14, en la que la composicion comprende de aproximadamente 200 mg a aproximadamente 1500 mg del compuesto por unidad de dosificacion.

23. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto del punto 3 y un portador farmaceuticamente aceptable.

24. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto del punto 9 y un portador farmaceuticamente aceptable.

25. Una composicion farmaceutica que comprende mostaza de isofosforamida y una base amina, un contraion amonio o ambos; y un portador farmaceuticamente aceptable.

26. Una composicion farmaceutica que comprende una sal de mostaza de isofosforamida y una base amina; y un portadir farmaceuticamente aceptable.

27. Una composicion farmaceutica del punto 25, en la que la composicion comprende dos equivalentes de la base amina, contraion amonio o de ambos por equivalente de mostaza de isofosforamida.

28. Una composicion farmaceutica del punto 25, en la que la base amina, contraion, amonio o ambos se seleccionan entre aminoacidos basicos, aminas alifaticas, di- y tri alquil aminas, aminas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y no sustituidas.

29. Una composicion farmaceutica del punto 25, en la que la base amina, contraion amonio o ambos se seleccionan entre lisina, homolisina, arginina, homoarginina, histidina, ornitina y combinaciones de las mismas.

30. Una composicion segun el punto 25, en la que la base amina es lisina.

31. Un procedimiento para tratar a un sujecto que tiene un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar al sujeto un compuesto del punto 1.

32. Un procedimiento del punto 31, que comprende administrar de aproximadamente 10 mg/m2/dfa a aproximadamente 700 mg/m2/dfa del compuesto al sujeto.

33. Un procedimiento del punto 31, que comprende administrar de aproximadamente 100 mg/m2Ma a aproximadamente 500 mg/m2/dfa del compuesto al sujeto.

34. Un procedimiento del punto 31, que ademas comprende administrar un segundo compuesto al sujeto.

35. Un procedimiento del punto 34, en el que el segundo compuesto se selecciona entre agentes de union a microtubulos, de intercalado o entrecruzamiento de ADN, inhibidores de la smtesis de ADN, inhibidores de la transcripcion de ADN y/o ARN, inhibidores enzimaticos, reguladores genicos, enzimas, anticuerpos e inhibidores de la angiogenesis.

36. Un procedimiento del punto 34, en el que el segundo compuesto se selecciona entre paclitaxel, docetaxel, daunorubicina, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, colchicina, dolastatina 15, nocodazol, podofilotoxina, rizoxina, vinblastina, vindesina, vinorelbina (navelbina), las epotilonas, las mitomicinas, bleomicina, clorambucilo, carmustina, melfalano, mitoxantrona 5-fluoro-5'-desoxiuridina, camptotecina, topotecan, irinotecanetoposido, tenoposido, geldanamicina, metotrexato, adriamicina, actinomicina D, mifepristona, raloxifeno, 5-azacitidina, 5-aza-2'- desoxicitidina, zebularina, tamoxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, apigenina, rapamicina, angiostatina K1-3, L- asparaginasa, staurosporina, genistema, fumagillina, endostatina, talidomida y analogos de los mismos.

37. Un procedimiento del punto 34, que ademas comprende administrar un tercer compuesto al sujeto seleccionandose el tercer compuesto entre agentes de union a microtubulos, de intercalado o entrecruzamiento de ADN, inhibidores de la smtesis de ADN, inhibidores de la transcripcion de ADN y/o ARN, inhibidores enzimaticos, reguladores genicos, enzimas, anticuerpos e inhibidores de la angiogenesis.

38. Un procedimiento del punto 31, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende cancer de mama, cancer de vejiga, cancer de hueso, cancer cervical, cancer de colon, cancer del sistema nervioso central, cancer de esofago, cancer de la vesmula biliar, cancer gastrointestinal, cancer de cabeza y cuello, enfermedad de Hodgkin, linfomas no Hodgkin, cancer de laringe, leucemia, cancer de pulmon, melanoma, neuroblastoma, cancer de ovarios, cancer de pancreas, cancer de prostata, cancer rectal, cancer renal, retinoblastoma, cancer de estomago, cancer testicular o tumor de Wilms.

39. Un procedimiento del punto 31, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende adenocarcinoma, sarcoma, leucemia o linfoma.

40. Un procedimiento del punto 31, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende un tumor cutaneo.

41. Un procedimiento del punto 40, en el que el tumor es metastasico.

5

10

15

20

25

30

35

42. Un procedimiento del punto 40, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende melanoma, sarcoma o ambos.

43. Un procedimiento del punto 42, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende melanoma.

44. Un procedimiento del punto 31, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende un cancer de ovarios, mama, pulmon, prostata o rectal.

45. Un procedimiento del punto 44, en el que el tumor de pulmon es un tumor de cancer de pulmon de celulas no pequenas o de celulas pequenas.

46. Un procedimiento del punto 45, en el que el tumor de pulmon es un tumor de cancer de pulmon de celulas no pequenas.

47. Un procedimiento para tratar a un sujeto que tiene un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar al sujeto un agente anti-hiperproliferativo que tiene la formula del punto 10.

48. Un procedimiento para producir un liofilizado que comprende un compuesto del punto 1, que comprende poner en contacto un compuesto de formula

o

I!

ho-p-nhch2ch2x

nhch2ch2v

con al menos un equivalente de una base amina seleccionada entre los aminoacidos basicos, aminas alifaticas, aminas heterociclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y no sustituidas; en presencia de agua; y liofilizar la mezcla resultante, formando asi el liofilizado.

49. Un procedimiento del punto 48, en el que X e Y son cloruro.

50. Un procedimiento del punto 48, en el que poner en contacto el compuesto comprende poner en contacto el compuesto con al menos dos equivalentes de la base amina.

51. Un procedimiento del punto 48, en el que la base amina es lisina.

52. Un liofilizado producido mediante el procedimiento del punto 48.

53. Un compuesto de formula

O

ii

TbI [mVo^(nhch2ch2ci)

1—1 1—1 (NHCH2CH2CI)

en la que M+ representa un cation de metal alcalino y B representa una base amina.

54. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto es un compuesto anti-hiperproliferativo.

55. Un compuesto del punto, 2, en el que el compuesto tiene una LD50 intravenosa en ratones que es mayor que la LD50 intravenosa de mostaza de isofosforamida.

56. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto tiene una LD10 intravenosa en ratones que es mayor que la LD10 intravenosa de mostaza de isofosforamida.

57. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto tiene una LD50 intravenosa en ratones de aproximadamente 184 a aproximadamente 265 mg/kg.

58. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto tiene una LDi0 intravenosa en ratones de aproximadamente 65 a aproximadamente 172 mg/kg.

59. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto tiene una LD50 intravenosa en ratas de aproximadamente 400 a aproximadamente 570 mg/kg.

60. Una sal de mostaza de isofosforamida estabilizada, en la que la sal tiene una semivida en presencia de agua que es mayor que la semivida de la mostaza de isofosforamida en presencia de agua.

61. Un liofilizado del punto 52, en el que el compuesto es mas estable que una preparation liofilizada de mostaza de isofosforamida.

5

10

15

20

25

62. Un compuesto del punto 2, en el que el compuesto es mas eficaz contra el crecimiento de tumores resistentes a CPA que cPa, Ifos o ambos.

63. Una composicion esteril que comprende un compuesto de formula

o

ii

H0“P-NHCH2CH2X

nhch2ch2y

en la que X e Y independientemente representan grupos salientes, o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

64. Una composicion del punto 63, en la que el compuesto esta presente con menos del 10% de productos de descomposicion en relacion al propio compuesto.

65. Una composicion del punto 63, en la que la composicion tiene una duracion en almacenamiento al menos dos veces mas larga que la mostaza de isofosforamida pura.

66. Un procedimiento para tratar a un sujeto que tiene un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar al sujeto una composicion del punto 63.

67. Un procedimiento para purificar una sal o un compuesto de formula

0

II

HO-P”NHCH2CH2X

nhch2ch2y

en la que X e Y independientemente representan grupos salientes,

que comprende filtrar una solucion del compuesto a traves de un filtro antimicrobiano esteril,

con lo que el compuesto purificado sufre una descomposicion de menos del 10% durante la filtracion.

68. Un procedimiento del punto 67, en el que el compuesto purificado sufre una descomposicion de menos del 5% durante la filtracion.

69. Un procedimiento del punto 68, en el que el compuesto purificado sufre una descomposicion de menos del 1% durante la filtracion.

70. Una composicion farmaceutica producida mediante el procedimiento del punto 67.

71. Un procedimiento para tratar a un sujeto que tiene un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar al sujeto una composicion del punto 70.

Claims (14)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que comprende un anion de mostaza de isofosforamida y un acido conjugado de amina, en el que la amina se selecciona del grupo que consiste en aminoacidos naturales basicos, aminas alifaticas adclicas, di- y tri- alquil aminas, aminas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y no sustituidas.
2. 2. Un compuesto de la reivindicacion 1, que ademas comprende una segunda amina o un acido conjugado de la segunda amina.
3. 3. Un compuesto de la reivindicacion 1, que ademas comprende un cation de metal alcalino o cation de amonio cuaternario.
4. 4. Un compuesto de cualquier reivindicacion precedente, en el que la amina es lisina.
5. 5. Un compuesto de cualquier reivindicacion precedente, en el que la amina es tris(hidroximetil)metilamina.
6. 6. Una composicion farmaceutica que comprende un portador farmaceuticamente aceptable y el compuesto de la reivindicaicon 1.
7. 7. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6, en la que la composicion comprende ademas un equivalente de una segunda amina o un acido conjugado de la segunda amina por equivalente de mostaza de isofosforamida.
8. 8. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en la que la segunda amina se selecciona del grupo que consiste en aminoacidos basicos, aminas alifaticas, di- y tri-alquil aminas, aminas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y no sustituidas
9. 9. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6, en la que la amina se selecciona de aminas alifaticas adclicas.
10. 10. La composicion segun la reivindicacion 9, en la que la amina es tris(hidroximetil)metilamina.
11. 11. Un compuesto o composicion de cualquier reivindicacion precedente, para usar en el tratamiento de un sujeto que tiene un trastorno hiperproliferativo.
12. 12. El compuesto o composicion para usar segun la reivindicacion 11, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende cancer de mama, cancer de vejiga, cancer de hueso, cancer cervical, cancer de colon, cancer del sistema nervioso central, cancer de esofago, cancer de la vesfcula biliar, cancer gastrointestinal, cancer de cabeza y cuello, enfermedad de Hodgkin, linfomas no Hodgkin, cancer de laringe, leucemia, cancer de pulmon, melanoma, neuroblastoma, cancer de ovarios, cancer de pancreas, cancer de prostata, cancer rectal, cancer renal, retinoblastoma, cancer de estomago, cancer testicular, tumor de Wilms, adenocarcinoma, sarcoma, linfoma, tumor metastasico cutaneo, tumor de cancer de pulmon de celulas no pequenas y tumor de cancer de pulmon de celulas pequenas.
13. 13. El compuesto o composicion para usar segun la reivindicacion 11, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende melanoma, sarcoma o ambos.
14. 14. El compuesto o composicion para usar segun la reivindicacion 11, en el que el trastorno hiperproliferativo comprende cancer de ovarios, mama, pulmon, prostata o rectal.