ES2575252T3 - Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium - Google Patents

Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium Download PDF

Info

Publication number
ES2575252T3
ES2575252T3 ES11764125.8T ES11764125T ES2575252T3 ES 2575252 T3 ES2575252 T3 ES 2575252T3 ES 11764125 T ES11764125 T ES 11764125T ES 2575252 T3 ES2575252 T3 ES 2575252T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
sequence encoding
hyaluronic acid
enzyme
plasmid
promoter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES11764125.8T
Other languages
English (en)
Inventor
Vincenza Corsa
Alessandro Negro
Sonia BISICCHIA
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fidia Farmaceutici SpA
Original Assignee
Fidia Farmaceutici SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fidia Farmaceutici SpA filed Critical Fidia Farmaceutici SpA
Application granted granted Critical
Publication of ES2575252T3 publication Critical patent/ES2575252T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01022—UDP-glucose 6-dehydrogenase (1.1.1.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01212—Hyaluronan synthase (2.4.1.212)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07009—UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase (2.7.7.9), i.e. UDP-glucose-pyrophosphorylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
    • C12Y503/01—Intramolecular oxidoreductases (5.3) interconverting aldoses and ketoses (5.3.1)
    • C12Y503/01009—Glucose-6-phosphate isomerase (5.3.1.9)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Proceso para la preparación de ácido hialurónico en Bacillus megaterium, que comprende las siguientes etapas: (a) cultivo de células huésped bacterianas de Bacillus megaterium transformadas de manera estable con el sistema de la ARN polimerasa T7, bajo condiciones apropiadas para la producción de ácido hialurónico en presencia de xilosa como inductor, en donde dichas células huésped bacterianas se caracterizan por ser transformadas adicionalmente con: (i) al menos un vector plásmido episomal que comprende una secuencia que codifica la hialuronano sintasa de la enzima y una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa en tándem, bajo el control del promotor T7 fuerte inducible, preferiblemente bajo el control del promotor T7 fuerte inducible del bacteriófago T7; o (ii) al menos un vector plásmido episomal que comprende una secuencia que codifica para la enzima hialuronato sintasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa pirofosforilasa y una secuencia que codifica para la enzima glucosa 6 fosfato isomerasa, bajo el control del promotor T7 fuerte inducible, preferiblemente bajo el control del promotor T7 fuerte inducible del bacteriófago T7; (b) recuperación del ácido hialurónico del medio de cultivo, en donde dichas células huésped bacterianas de Bacillus megaterium transformadas de manera estable con el sistema de la ARN polimerasa T7 y con el vector plásmido (i) o (ii) capaz de producir ácido hialurónico de la etapa a) se preseleccionan en la placa en un gradiente de xilosa.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
5
10
15
20
25
30
35
40
pueden ser utilizados para verificar la clonación. Dos oligonucleótidos para uso con PCR se diseñaron y sintetizaron para recuperar la secuencia de codificación:
5’atgagaacattaaaaaacctcataac 3’ (SEQ ID NO:9) y 5’taataattttttacgtgttccccag 3’ (SEQ ID NO:10)
El ADN genómico de la bacteria Streptococcus zooepidemicus se recuperó con el kit de extracción de Qiagen. La secuencia codificante de 1254 pb se recuperó con PCR. El amplificado esperado de las dimensiones correctas fue controlado con la enzima de restricción HindIII, y dio lugar a dos bandas de aprox. 100 pb y 1150 pb que se corresponden con el corte esperado.
Ejemplo 3: Construcción del plásmido pGEM4hasA
Otros dos oligonucleótidos con la siguiente secuencia se crearon para clonar la secuencia de hasA en el plásmido pGEM4Z:
5’ ggaggatccatgagaacattaaaaaacctcat 3’ (SEQ ID NO:11) y
5’ cagtctagattataataatttttacgtgtcc 3’ (SEQ ID NO:12)
El sitio de restricción BamHI fue creado en el primer oligonucleótido cerca de 5', y el sitio de restricción XbaI fue creado en el segundo oligonucleótido, de nuevo en 5'. El amplificado obtenido a través de estos dos oligonucleótidos se clonó entre los sitios de restricción BamHI y XbaI en el plásmido pGEM4Z (PROMEGA) entre los mismos sitios para dar el plásmido pGEM4hasA.
La secuencia de ADN entre dichos dos sitios de restricción se analizaron con un secuenciador ABI 7000, resultó ser correcta, y es idéntica a la publicada.
HindIII-BamHI ----------------hasA---------------XbaI-SalI
Se comprobó el plásmido para la expresión de la proteína recombinante en E. coli y presentó un peso molecular de aprox. 42 kDa, lo que concuerda con el peso reportado para la proteína en la bibliografía, aunque tiene un peso molecular teórico de 47.778 kDa (Figura 3).
La clonación de hasA a partir de streptococcus, por lo tanto, también se manifestó en términos de expresión de la proteína. El plásmido es incapaz de producir cantidades significativas de ácido hialurónico debido a que carece del gen tuaD.
Ejemplo 4: Construcción de un plásmido con el gen tuaD después de hasA
Con esta construcción, el gen hasA se coloca en tándem con el gen tuaD. Para este fin, el plásmido pGEM4hasA, que ya contiene el gen hasA, se utiliza como vector. El plásmido se cortó con XbaI y SalI, y la secuencia del gen tuaD del plásmido pRSEtuaD se cortó con XbaI y -XhoI y se clonó en los mismos sitios (XhoI y SalI son compatibles) pGEM4hasA
HindIII-BamHI ---------------hasA---------------XbaI-SalI pRSE triaD
XbaI--NdeI----------------tuaD-----------------NheI -BamHI--BglI -XhoI
se obtiene la siguiente secuencia final:
HindIII-BamHI ---------hasA----------XbaI--NdeI---------tuaD-NheI -BamHI--BglI -XhoI
Ejemplo 5 Clonación del gen hasA-tuaD en el plásmido pPT7 para B. megaterium.
Este plásmido pPT7 (MoBiTec) contiene dos orígenes de replicación, uno para E. coli y uno para B. megaterium, y por lo tanto se pueden propagar en ambas bacterias. También contiene la resistencia a los antibióticos ampicilina y tetraciclina, que se puede utilizar para E. coli y B. megaterium respectivamente, y la secuencia de reconocimiento para ARN polimerasa T7, es decir, el promotor dependiente de la ARN polimerasa T7 del bacteriófago T7 seguido por su terminador.
El plásmido contiene el sitio de restricción BsrGI con la secuencia tgtaca unas pocas bases después de la secuencia Shine-Dalgarno, y un sitio BamHI (ggatcc) después de la metionina inicial. Se sintetizaron dos oligonucleótidos para la clonación con el fin de crear los siguientes dos sitios de restricción en el extremo:
5’GCTTGTACATGAGAACATTAAAAAACCTCA 3’ (SEQ ID NO:13) 5’AGGGATCCTTATAAATTGACGCTTCCCAAG 3’ (SEQ ID NO:14)
esto es BsrGI y BamHI en dirección 5’ y en dirección 3’ de los genes hasA y tuaD respectivamente. El amplificado de 2698 pb obtenido se cortó con las enzimas de restricción BsrGI y BamHI y se clonó en los mismos sitios de restricción como plásmido pPT7 para obtener el plásmido pPT7hasAtuaD (Figura 4).
La secuencia completa de este plásmido, denominado pPT7hasAtuaD, se analizó y se expone a continuación:
imagen7
imagen8
imagen9
imagen10
imagen11
imagen12
imagen13
imagen14
El plásmido tiene un peso molecular de 7880 pb y contiene los diversos genes responsables de la síntesis de ácido hialurónico bajo el control del promotor fuerte T7 del bacteriófago T7. La secuencia de la sintasa de hasA a partir de Streptococcus equi cae entre las bases 196 y 1383, y la del gen tuaD entre las bases 1430 y 2873.
5 Ejemplo 6: Clonación del gen gtaB (UDP-Glc pirofosforilasa)
El gen gtaB a partir de Bacillus Subtilis se recuperó del genoma bacteriano como el anterior, y a través de dos oligonucleótidos que tienen las siguientes secuencias:
5’ATGTCTAGAATAATAAGGAAGGTGCCTTTTAAATGAA 3’ (SEQ ID NO:15)
5’CTCTCGAGCTAGCTTAGATTTCTTCTTTGTTTAGTAAAG 3’ (SEQ ID NO:16)
10 El producto amplificado de 925 pb se cortó con XbaI y XhoI y se clonó en el plásmido pGEM4hasA en los mismos sitios de restricción; el plásmido pGEMhasA-gtaB se obtiene de esta manera.
Ejemplo 7 Clonación del gen pgi a partir de Bacillus subtilis en el plásmido pRSET B
El gen pgi (glucosa 6 fosfato isomerasa, también llamado pgi fosfoglucoisomerasa, correspondiente a hasE de S. zooepidemicus) se recuperó a partir del genoma de bacterias como se describe anteriormente con estos dos
15 oligonucleótidos
5’TACATATGACGCATGTACGCTTGACTACTCCAAAAG 3’ (SEQ ID NO:17)
5’ATGCTAGCTCATTTATAATCTTCCAGACGTTTTTCAAG 3’ (SEQ ID NO:18)
y PCR, y se clonó después del corte con enzimas de restricción NdeI y NheI en plásmido pRSETB entre los mismos sitios de restricción. El plásmido pRSEpgi se obtiene de esta manera. Se coloca el gen pgi bajo el control de un 20 promotor T7, y cuando se transfiere a las células de E. coli BL21 DE3 que produce la proteína del peso molecular esperado. Este plásmido se cortó con XbaI y PstI, y el fragmento de 1340 pb se clonó en el plásmido pGEMhasA-gtaB entre los sitios NheI y PstI. El sitio de restricción XbaI, como NheI, se pierde después de la clonación. De esta manera el gen pgi se coloca detrás del gen gtaB. El plásmido, denominado pGEM hasA-gtaB-pgi, se cortó con XbaI y XhoI, y el fragmento que contiene las secuencias que codifican para gtaB y pgi se clonó en el plásmido pRSEtuaD entre los
25 mismos sitios. El plásmido obtenido se denomina pRSEtuaD-gtaB-pgi.
Este último se cortó con XbaI y BamHI y el fragmento que contiene la secuencia que codifica para tuaD, gtaB y pgi se clonó en el plásmido pPT7hasAtuaD entre los mismos sitios para obtener el plásmido pPT7hasAtuaDgtaBpgi, que se llama pT7hyal.
La secuencia del plásmido pT7hya1 se muestra a continuación
imagen15
imagen16
imagen17
imagen18
imagen19
imagen20
imagen21
imagen22
imagen23
imagen24
imagen25
imagen26
imagen27
imagen28
imagen29

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
    imagen3
    imagen4
    imagen5
    imagen6
    imagen7
    imagen8
    imagen9
    imagen10
    imagen11
    imagen12
    imagen13
    imagen14
    imagen15
ES11764125.8T 2010-09-09 2011-09-09 Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium Active ES2575252T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ITMI2010A001641A IT1402384B1 (it) 2010-09-09 2010-09-09 Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus megaterium
ITMI20101641 2010-09-09
PCT/EP2011/065641 WO2012032153A1 (en) 2010-09-09 2011-09-09 "process for the production of hyaluronic acid in escherichia coli or bacillus megaterium"

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2575252T3 true ES2575252T3 (es) 2016-06-27

Family

ID=43732704

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES11764125.8T Active ES2575252T3 (es) 2010-09-09 2011-09-09 Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium

Country Status (5)

Country Link
US (2) US9163270B2 (es)
EP (1) EP2614087B1 (es)
ES (1) ES2575252T3 (es)
IT (1) IT1402384B1 (es)
WO (1) WO2012032153A1 (es)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1402384B1 (it) * 2010-09-09 2013-09-04 Fidia Farmaceutici Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus megaterium
CN103789338B (zh) * 2012-11-01 2016-12-21 中国药科大学 质粒、重组工程菌及制备均一分子量透明质酸的方法
ITPD20130110A1 (it) 2013-04-24 2014-10-25 Fidia Farmaceutici Composizioni farmaceutiche comprendenti acido ialuronico per il trattamento del black disc
ITMI20130883A1 (it) 2013-05-30 2014-12-01 Eurores S R L Composizioni farmaceutiche comprendenti collagene e sodio ialuronato
CN104212732A (zh) * 2014-09-12 2014-12-17 江南大学 一种产透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法
IT201800009444A1 (it) 2018-10-15 2020-04-15 Fidia Farm Spa Coniugati tra acido ialuronico e amminobisfosfonati e loro impiego terapeutico
IT201800009731A1 (it) 2018-10-25 2020-04-25 Fidia Farm Spa Coniugato paclitaxel - acido ialuronico nel trattamento del carcinoma vescicale non infiltrante
RU2719140C1 (ru) 2019-07-26 2020-04-17 Общество с ограниченной ответственностью "ЦЕНТР ТРАНСФЕРА БИОТЕХНОЛОГИЙ ОКА-Биотех" Бактерия рода bacillus, продуцирующая гиалуроновую кислоту, и способ получения гиалуроновой кислоты с использованием указанной бактерии
IT201900019762A1 (it) 2019-10-24 2021-04-24 Fidia Farm Spa Composizione farmaceutica per uso nel trattamento della cistite di varia eziologia
IT202000007747A1 (it) 2020-04-10 2021-10-10 Fidia Farm Spa Coniugato acido ialuronico-paclitaxel nel trattamento del mesotelioma
IT202000008209A1 (it) 2020-04-17 2021-10-17 Fidia Farm Spa Procedimento di sintesi di un coniugato acido ialuronico-paclitaxel
IT202000014017A1 (it) 2020-06-11 2021-12-11 Fidia Farm Spa Nuovi derivati ottenuti da acido ialuronico e carnosina
CN114075525B (zh) * 2020-08-13 2025-02-25 宜昌东阳光生化制药有限公司 兽疫链球菌的基因工程菌株及其应用
IT202100032111A1 (it) 2021-12-22 2023-06-22 Fidia Farm Spa Nuovi sostituti biocompatibili dell’umor vitreo
IT202300025521A1 (it) 2023-11-30 2025-05-30 Fidia Farm Spa Composizioni farmaceutiche oftalmiche e relativo uso
IT202300026142A1 (it) 2023-12-06 2025-06-06 Fidia Farm Spa Composizioni mucoadesive per il trattamento locale delle affezioni vaginali

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5955310A (en) * 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
AU2002366711C1 (en) * 2001-12-21 2009-01-22 Novozymes A/S Methods for producing hyaluronan in a recombinant host cell
IT1402384B1 (it) * 2010-09-09 2013-09-04 Fidia Farmaceutici Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus megaterium

Also Published As

Publication number Publication date
US20140099673A1 (en) 2014-04-10
WO2012032153A1 (en) 2012-03-15
EP2614087B1 (en) 2016-04-06
US9695453B2 (en) 2017-07-04
US20160032337A1 (en) 2016-02-04
US9163270B2 (en) 2015-10-20
EP2614087A1 (en) 2013-07-17
IT1402384B1 (it) 2013-09-04
ITMI20101641A1 (it) 2012-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2575252T3 (es) Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium
KR102623312B1 (ko) Ruvc 도메인이 존재하는 효소
JP7785139B2 (ja) クラス２のｉｉ型ｃｒｉｓｐｒシステム
Pedrolli et al. The ribB FMN riboswitch from Escherichia coli operates at the transcriptional and translational level and regulates riboflavin biosynthesis
KR101926662B1 (ko) 닫힌 선형 ｄｎａ의 제조
US20170275665A1 (en) Direct crispr spacer acquisition from rna by a reverse-transcriptase-cas1 fusion protein
WO2021041267A1 (en) Enzymatic rna capping method
US20140295492A1 (en) Methods for Cell-Free Protein Synthesis
JP2024535672A (ja) クラスｉｉ、ｖ型ｃｒｉｓｐｒ系
JP2015091236A (ja) Ｄｎａミニサークルおよびその使用
CN113728097A (zh) 具有ruvc结构域的酶
EP2307575B1 (en) Unprocessed rolling circle amplification product
AU2020336278A1 (en) Enzymatic RNA capping method
US20240301374A1 (en) Systems and methods for transposing cargo nucleotide sequences
CN116981773A (zh) 用于编辑靶标rna的多聚腺苷酸化信号序列的指导rna
JP2006526985A (ja) ｄｓＲＮＡを大量産生するための方法およびキット
CN109385417A (zh) 体内dna无缝组装方法
CN116355877A (zh) Cas13蛋白、CRISPR-Cas系统及其应用
US12371725B2 (en) Synthesis of DNA molecules in in vitro enzymatic systems
US20220008556A1 (en) Dna vector for targeted gene therapy
WO2020050742A1 (en) The gene therapy dna vector gdtt1.8nas12 and the method for obtaining thereof
Park et al. In vitro assembly of thermostable Csm complex in CRISPR–Cas type III/A system
US20220411765A1 (en) Truncated hyaluronan synthase and polynucleotide encoding the same
WO2025208142A2 (en) Compositions, kits, and methods for in vitro transcription
US20210308282A1 (en) Gene therapy dna vectors based on vtvaf17