ES2579227T3 - Utilización del hongo entomopatógeno Beauveria bassiana como medio para la lucha biológica contra Paysandisia archon - Google Patents

Utilización del hongo entomopatógeno Beauveria bassiana como medio para la lucha biológica contra Paysandisia archon Download PDF

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ES2579227T3 ES07871858.2T ES07871858T ES2579227T3 ES 2579227 T3 ES2579227 T3 ES 2579227T3 ES 07871858 T ES07871858 T ES 07871858T ES 2579227 T3 ES2579227 T3 ES 2579227T3
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Abstract

Utilización de un hongo entomopatógeno de la especie Beauveria bassiana como medio de lucha biológica contra Paysandisia archon.

Description

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imagen9
Ensayo
huevos ensayados Larvas Supervivencia larvaria
no micosados
muertas supervivientes
total
micosados total no eclosionados eclosionados
Blanco de formulación
14 0 14 4 10 1 9 64%
Bb GHA
45 31 14 10 4 2 (muertas y micosadas) 2 4%
Cuando los huevos se inoculan con el testigo (blanco de formulación 1/100), el porcentaje de huevos eclosionados es del orden de 71% (10 huevos eclosionados sobre 14 ensayados). La supervivencia larvaria es del orden de 64% (9 larvas supervivientes sobre 14 huevos ensayados).
5 La mortalidad aumenta cuando se utiliza la composición Bb GHA. Efectivamente, 69% de los huevos están micosados y solamente 9% de los huevos eclosionan. La supervivencia larvaria es del orden de 4%.
Resultados similares se obtienen con la composición Bb 147 (no representada), a saber una disminución del número de huevos eclosionados y del porcentaje de supervivencia larvaria en relación al testigo.
Estos resultados muestran que las esporas de la cepa de Beauveria bassiana Bb 147 de una parte, y los de la cepa 10 de Beauveria bassiana Bb GHA, de otra parte, son patógenas respecto a los huevos de Paysandisia archon.
Ejemplo III: Patogenicidad de las cepas Bb 147 y Bb GHA de Beauveria bassiana sobre las larvas de Paysandisia archon
Para confirmar los resultados obtenidos con los huevos de P. archon, las cepas Bb GHA y Bb 147 se ensayan igualmente sobre las larvas de P. archon.
15 En un primer tiempo, los inventores han buscado validar la elección de la cepa Bb 147 para este estudio. Para ello, han investigado si la cepa Bb 147 utilizada es muy patógena respecto a su huésped original, la piral del maíz (Ostrinia nubilalis). Esta experiencia permite, además, constituir un testigo positivo de patogenicidad de la cepa Bb
147.
En un segundo tiempo, ensayaron la patogenicidad de las cepas Bb GHA t Bb 147 directamente sobre las larvas de 20 P. archon y, como comparación, la patogenicidad de la cepa Bb 147 sobre las larvas de Cydia pomonella y de Plutellla xylostella.
Por último, los inventores estudiaron la relación dosis-efecto entre la cepa Bb 147 y la mortalidad de las larvas de
Paysandisia archon.
1) Patogenicidad de la cepa Bb 147 de Beauveria bassiana respecto a las larvas de Ostrinia nubilalis
25 En este estudio, las larvas de Ostrinia nubilalis se inoculan tal como se indica en el ejemplo I.5.B con, o bien blanco de formulación 1/100, o bien composición Bb 147 1/100.
Los porcentajes de mortalidad bruta y corregida, determinados como se indica en el ejemplo I.6, se presentan en la Tabla III siguiente.
Tabla III: Determinación de los porcentajes de mortalidad bruta y corregida de las larvas de Ostrinia nubilalis 30 inoculadas con la composición Bb 147 1/100
Mortalidad
nº de días después de la inoculación % de mortalidad bruta % de mortalidad corregida
(Ostrinia nubilalis – Blanco de formulación 1/100)
3 0,0%
5
10,0%
7
10,0%
10
10,0%
12
20,0%
14
20,0%
17
20,0%
20
20,0%
24
20,0%
27
20,0%
(Ostrinia nubilalis – cepa Bb 147 1/100)
3 6,7% 6,7%
5
20,8% 11,1%
7
46,7% 40,7%
10
46,7% 40,7%
12
46,7% 33,3%
14
46,7% 33,3%
17
46,7% 33,3%
20
46,7% 33,3%
24
46,7% 33,3%
27
46,7% 33,3%
El porcentaje de mortalidad corregida calculado después de la inoculación por la cepa Bb 147 alcanza como máximo 40,7% a J+7 y J+10.
Estos resultados confirman que la composición Bb 147 es patógena respecto a las larvas de Ostrinia nubilalis.
5 2) Patogenicidad de las cepas Bb 147 y Bb GHA de Beauveria bassiana respecto a las larvas de Paysandisiaarchon, y de la cepa Bb 147 de Beauveria bassiana respecto a las larvas de Cydia pomonella y de Plutella xylostella
Para ensayar si las cepas Bb 147 y Bb GHA tienen igualmente un efecto patógeno respecto a las larvas de Paysandisia archon, se realizó la experiencia siguiente:
10 Las larvas de Paysandisia archon se inoculan como se indica en el ejemplo I.5.B, con blanco de formulación 1/100 (modalidad 1), la composición Bb 147 1/100 (modalidad 2), la composición Bb GHA 1/100 (modalidad 3) o el polvo de esporas puras Bb 147 (testigo positivo).
Los porcentajes de mortalidad bruta y corregida se calcularon a continuación como se indica en el ejemplo I.6. La Tabla IV ilustra los resultados obtenidos para la cepa Bb GHA
15 Tabla IV: Determinación del porcentaje de mortalidad bruta y corregida de las larvas de Paysandisia archon inoculadas con la composición Bb GHA 1/100
Modalidad
nº de días después de la inoculación % de mortalidad bruta % de mortalidad corregida
1 (Paysandisia archon blanco de formulación 1/100
3 6,7%
5
6,7%
7
6,7%
10
10,0%
12
14,3%
14
17,9%
17
17,9%
20
22,2%
24
23,1%
27
30,8%
3 (Paisandisia archon cepa BbGHA 1/100
3 10,0% 3,6%
5
36,7% 32,1%
7
60,0% 57,1%
10
80,0% 77,8%
12
80,0% 76,7%
14
83,3% 79,7%
17
93,3% 91,9%
20
93,37% 91,4%
24
93,3% 91,3%
27
93,3% 90,4%
El porcentaje de mortalidad corregida, calculado después de la inoculación por la cepa Bb GHA es de 3,6% desde el tercer día; sobrepasa el 50% a J+7 y sobrepasa 90% a J+17.
Resultados similares se obtienen con la composición Bb 147 1/100 (modalidad 2) (no representada). El testigo 5 positivo realizado a partir del polvo de esporas puras Bb 147 confirma el efecto patógeno de la cepa Bb 147 respecto a P. archon.
Estos resultados muestran que las composiciones Bb 147 y Bb GHA son patógenas respecto a las larvas de
Paysandisia archon.
Los inventores comprobaron, además, que, de manera asombrosa, aunque el huésped original de la cepa Bb 147 10 sea Ostrinia nubilalis, ésta es sin embargo más patógena respecto a Paysandisia archon que respecto aOstrinia nililalis (resultados no representados).
Estos resultados, así como los del ejemplo anterior, demuestran más generalmente la patogenicidad del hongo Beauveria bassiana respecto a Paysandisia archon.
3) Patogenicidad de la cepa Bb 147 de Beauveria bassiana respecto a las larvas de Cydia pomolella y de 15 Plutella xylostella
La patogenicidad de la cepa Bb 147 se ha ensayado igualmente respecto a las larvas de Cydia pomolella, la carpocapsa de las manzanas, y de Plutella xylostella, la tiña de las crucíferas.
Para ello, larvas de Cydia pomolella en estado larvario II, y larvas de Plutella xylostella en estado larvario III, fueron inoculadas como se indica en los ejemplos I.5.B.d.) y I.5.B.e.) con las formulaciones “Bb 147” y “blanco de 20 formulación “ (testigo) (diluciones al 1/100 de las formulaciones obtenidas según la Tabla I), las cuales se preparan como se indica en el ejemplo I.4.
Los porcentaje de mortalidad bruta y corregida se calculan como se indica en el ejemplo I.6.
imagen10
imagen11
Grupo
Número de días después de la inoculación % Mortalidad bruta % Mortalidad corregida
Grupo 1 (testigo)
0 0,0%
3
0,0%
5
0,0%
7
0,0%
10
0,0%
12
0,0%
14
0,0%
17
0,0%
21
0,0%
24
0,0%
26
0,0%
Grupo 2 (1 /10)
0 0,0% 0,0%
3
60,0% 60,0%
5
90,0% 90,0%
7
100,0% 100,0%
10
100,0% 100,0%
12
100,0% 100,0%
14
100,0% 100,0%
17
100,0% 100,0%
21
100,0% 100,0%
24
100,0% 100,0%
26
100,0% 100,0%
Grupo 3 (1 / 30)
0 0,0% 0,0%
3
38,1% 38,1%
5
66,7% 66,7%
7
95,2% 95,2%
10
95,2% 95,2%
12
95,2% 95,2%
14
95,2% 95,2%
17
95,2% 95,2%
21
100,0% 100,0%
24
100,0% 100,0%
26
100,0% 100,0%
Grupo 4 (1 / 100)
0 0,0% 0,0%
3
16,7% 16,7%
5
45,8% 45,8%
7
83,3% 83,3%
10
95,8% 95,8%
12
95,8% 95,8%
14
100,0% 100,0%
17
100,0% 100,0%
21
100,0% 100,0%
24
100,0% 100,0%
26
100,0% 100,0%
Grupo
Número de días después de la inoculación % Mortalidad bruta % Mortalidad corregida
Grupo 5 (1 /300)
0 0,0% 0,0%
3
12,0% 12,0%
5
24,0% 24,0%
7
64,0% 64,0%
10
84,0% 84,0%
12
88,0% 88,0%
14
92,0% 92,0%
17
92,0% 92,0%
21
92,0% 92,0%
24
96,0% 96,0%
26
96,0% 96,0%
Grupo 6 (1 / 1000)
0 0,0% 0,0%
3
9,1% 9,1%
5
13,6 13,6%
7
31,8% 31,8%
10
45,5% 45,5%
12
50,0% 50,0%
14
50,0% 50,0%
17
54,5% 54,5%
21
61,9% 61,9%
24
66,7% 66,7%
26
66,7% 66,7%
Las larvas inoculadas con la composición que comprende la mayor concentración en esporas Bb147 (dilución al 1/10; grupo 2) tienen una mortalidad corregida de 60% desde el día 3, y 100% desde el día 7 después de la inoculación.
5 Cuando las diluciones son más importantes, la mortalidad corregida disminuye: ésta sobrepasa el 95% a partir del día 7 para la dilución a 1/30, a partir del día 10 para la dilución a 1/100 y a partir del día 24 para la dilución a 1/300. La mortalidad es también más baja para la dilución mayor, puesto que alcanza 50% el día 12 y alcanza solamente 66,7% el último día del estudio.
Estos resultados muestran que existe una relación dosis-efecto entre las esporas de la cepa Bb 147 y las larvas de 10 Paysandisia archon
.Ejemplo IV: Influencia de la edad de las larvas de Paysandisia archon sobre su sensibilidad a la cepa Bb 147de Beauveria bassiana
Para determinar si la edad de la larva de Paysandisia archon tiene influencia sobre su sensibilidad respecto a las esporas de la cepa Bb 147, se realizó la experiencia siguiente:
15 Larvas de Paysandisia archon de edades diferentes se reparten en cuatro grupos, de manera que en cada grupo la distribución de las larvas según su edad es la misma que en el grupo de larvas de partida. Las larvas de los grupos 1, 2, 3 y 4 se inoculan respectivamente con el blanco de formulación puro (no diluido), el blanco de formulación 1/100, la composición Bb 147 1/100 y un polvo de esporas Bb 147 puras.
No se pudo establecer ninguna correlación entre la edad de las larvas en el momento de la inoculación y su duración 20 de vida. Estos resultados sugieren que la virulencia del hongo no se ve influenciado por la edad de las larvas.
Ejemplo V: Eficacia de la cepa Bb 147 sobre las larvas de P. archon en condiciones naturales
Para probar la eficacia de Beauveria bassiana en condición natural, las palmeras se trataron preventivamente con la cepa Bb 147, después de la infección se probó sobre las palmeras adultas al aire libre.
20 palmeras de 5 a 6 años, de la especie Phoenix canariensis, que miden 30 a 35 cm de altura, se reparten en cuatro grupos de cinco individuos, numerados grupos 1 a 4 . Los ensayos se realizan al aire libre, en otoño, en cajas de tipo insect-proof® (Diatex).
Las palmeras se tratan preventivamente con dosis variables de Bb 147 en formulación líquida. La solución madre de 5 Bb 147 utilizada comprende 6,89.1012 esporas viables por litro de una mezcla aceite + emulsionante.
Estudios preparatorios permitieron determinar que el volumen de agua necesaria para cubrir toda la superficie foliar a punto de riego es de 400 ml. Las palmeras se tratan pues con 400 ml de la composición a ensayar como se indica en la Tabla IX:
Tabla IX: Composiciones que comprenden la cepa de Bb 147 utilizada para el tratamiento preventivo de las 10 palmeras
Grupo
Composición ensayada Evaluación del número de esporas por árbol
Grupo 1 (testigo)
400 ml de agua 0
Grupo 2
0,2 ml de Bb 147 en 400 ml de agua 1,4.109
Grupo 3
0,6 ml de Bb 147 en 400 ml de agua 4,1.109
Grupo 4
2,0 ml de Bb 147 3en 400 ml de agua 1,4.1010
Algunas horas después del tratamiento, 25 larvas de P. archon , de edades de 36 a 43 días, se depositan sobre el follaje de cada árbol, habiendo tenido tiempo de secarse la corona del árbol. Resultados:
15 a) Tasa de ataque y mortalidad corregida Lo primeros estragos visuales aparecen al cabo de treinta horas. Se manifiestan por la aparición de serrín en el punto de penetración de la larva. Las observaciones se efectúan a J+39, es decir 39 días después del tratamiento.
La tasa de ataques representa el porcentaje de ataques en relación al número de larvas (25). La eficacia se determina según la fórmula siguiente:
20 Eficacia de un grupo dado = (tasa de ataques del grupo testigo – tasa de ataque de dicho grupo dado) / tasa de ataque del grupo testigo. Los resultados se representan en la Tabla X siguiente. Tabla X: Determinación de la eficacia de la cepa Bb 147 sobre la reducción de la tasa de ataques de las palmeras
por las larvas de P. archon
Grupo
Ataques visibles Tasa de ataques Eficacia
Grupo 1 (testigo)
11 44%
Grupo 2
6 24% 45%
Grupo 3
3 12% 73%
Grupo 4
1 4% 91%
25
A J+70 aproximadamente, las palmeras se trocean y se descortezan a mano para encontrar las larvas supervivientes o sus cadáveres en el interior del vegetal y evaluar el nivel de estragos para cada grupo de palmeras. Los resultados se ilustran en la Tabla siguiente. Tabla XI: Determinación de los porcentajes de mortalidad bruta y corregida de larvas de P. archon después del
30 tratamiento preventivo de las palmeras con la cepa Bb 147.
imagen12
Número de la larva
Grupo Número de la palmera Longitud (en mm)
22
1 6
23
1 6
24
Grupo 3 2 17
25
3 11
26
5 32
27
2 8
28
Grupo 4 2 14
29
3 10
30
5 10
Las larvas supervivientes encontradas a J+70 en el grupo 1 (testigo) y en el grupo 2 (pequeña dosis de Bb 147) presentan una tamaño medio de 20 a 25 mm.
En los grupos 3 y 4, el tamaño de las larvas supervivientes es de 10 a 15 mm.
5 El conjunto de estos resultados muestra que la cepa Bb 147 de Beauveria bassiana presenta una eficacia a dos niveles, a saber una eficacia directa sobre la mortalidad de las larvas y una eficacia indirecta sobre el retraso de crecimiento.
Ejemplo VI: Recapitulación de los ensayos de patogenicidad sobre las larvas de P. archon, de P. xylostella,de O. nubilalis y de C. pomonella
10 Los ensayos de Chi-dos (X2) tales como los descritos en el ejemplo III.3 permitieron comparar los porcentajes de larvas supervivientes, en cada lectura, entre las larvas inoculadas con la formulación testigo (blanco de formulación 1/100) y las larvas inoculadas con la cepa Bb 147 (formulación Bb 147 1/100, y esto para las larvas de Paysandisia archon, Ostrinia nubilalis, Cydia pomonella y Plutella xylostella. Así se determinaron los grados de patogenicidad de la cepa Bb 147 respecto a las especies ensayadas, aproximadamente 10 días después de la inoculación.
15 Los resultados se recopilan en la Tabla XIII siguiente:
Tabla XIII:
Cepa ensayada
Organismo ensayado Resultado del ensayo del X2 (comparación entre la modalidad ensayada y la modalidad testigo) Patogenicidad (*)
Bb 147 (B.bassiana)
P. xylostella Ninguna diferencia significativa (p=0,05) -/+
Bb 147 (B.bassiana)
C. pomonella Ninguna diferencia significativa (p=0,05) -/+
Bb 147 (B.bassiana)
O. nubilalis Diferencia altamente significativa (p=0,01 +
Bb 147 (B.bassiana)
P. archon Diferencia muy altamente significativa (p=0,001 +++
Bb GHA (B.bassiana)
P. archon Diferencia muy altamente significativa (p=0,001 +++
(*) -/+ : poco o no patógeno
+ : patógeno +++ : muy patógeno
20
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imagen13

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