ES2579936T3 - Nuevos lípidos catiónicos con diversos grupos de cabeza para el suministro oligonucleotídico - Google Patents

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Jennifer R. Davis
Andrea R. Geiser
Matthew G. Stanton
Vladislav V. Telyatnikov
Lu Tian
Weimin Wang
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Abstract

Un lípido catiónico de Fórmula A:**Fórmula** en la que: p es 1 a 8; R1 y R2 se seleccionan independientemente de H, alquilo (C1-C10), heterociclilo, y poliamina, en los que dicho heterociclilo y poliamina están opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4, o R1 y R2 se pueden tomar junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico con 4-7 miembros que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, estando dicho heterociclo monocíclico opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4; R3 se selecciona de H y alquilo (C1-C6), estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4, R4 se selecciona independientemente de halógeno, OR5, SR5, CN, CO2R5 y CON(R5)2; R5 se selecciona independientemente de H, alquilo (C1-C10) y arilo; e Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o un alquenilo (C4-C22); o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero de los mismos.

Description

imagen1
DESCRIPCIÓN
Nuevos lípidos catiónicos con diversos grupos de cabeza para el suministro oligonucleotídico
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a nuevos lípidos catiónicos que se pueden usar en combinación con otros
5 componentes lipídicos tales como colesterol y lípidos de PEG para formar nanopartículas lipídicas con oligonucleótidos, para facilitar la absorción celular y el escape endosómico, y para reducir ARNm diana tanto in vitro como in vivo.
Los lípidos catiónicos y el uso de lípidos catiónicos en nanopartículas lipídicas para el suministro de oligonucleótidos, en particular ARNpi y miARN, se han descrito previamente. Las nanopartículas lipídicas y el uso de nanopartículas 10 lipídicas para el suministro de oligonucleótidos, en particular ARNpi y miARN, se han descrito previamente. Los oligonucleótidos (que incluyen ARNpi y miARN) y la síntesis de oligonucleótidos se han descrito previamente. (Véanse las solicitudes de patentes US: US 2006/0083780, US 2006/0240554, US 2008/0020058, US 2009/0263407 y US 2009/0285881 y las solicitudes de patentes PCT: WO 2009/086558, WO2009/127060, WO2009/132131, WO2010/042877, WO2010/054384, WO2010/054401, WO2010/054405 y WO2010/054406). Véase también Semple
15 S. C. et al., Rational design of cationic lipids for siRNA delivery, Nature Biotechnology, publicado en línea el 17 de enero de 2010; doi:10.1038/nbt.1602.
Butil CLinDMA es uno de los lípidos catiónicos descritos en el documento US 2006/0240554. Otros lípidos catiónicos también se describen genéricamente en el documento US 2006/0240554 incluyendo octil CLinDMA. Hemos sintetizado y ensayado tanto butil CLinDMA como octil CLinDMA en formulaciones de nanopartículas lipídicas, y
20 hemos encontrado que octil CLinDMA tiene propiedades superiores a butil CLinDMA. Octil CLinDMA (conocido de otro modo como OCD) también se describe en el documento WO2010/021865.
Adoptamos un enfoque racional para diseñar lípidos catiónicos para uso en formulaciones de nanopartículas lipídicas para suministrar ARN pequeño interferente (ARNpi). Partiendo del lípido catiónico octil CLinDMA (denominado “Compuesto 12” en esta solicitud) como punto de referencia, diseñamos nuevos lípidos catiónicos con
25 propiedades superiores como se demostró en experimentos con ratones, ratas y monos.
Los compuestos de la presente invención contienen un ligador de 1,3-diéter.
Es un objeto de la presente invención proporcionar nuevos lípidos catiónicos que se pueden usar en combinación con otros componentes lipídicos, tales como colesterol y lípidos de PEG para formar nanopartículas lipídicas con oligonucleótidos, para facilitar la absorción celular y el escape endosómico, y para reducir el ARNm diana tanto in
30 vitro como in vivo.
Los documentos US 2008/0188675 y US 6060455 describen diversos lípidos catiónicos.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención proporciona nuevos lípidos catiónicos que se pueden usar en combinación con otros componentes lipídicos tales como colesterol y lípidos de PEG para formar nanopartícula lipídica con
35 oligonucleótidos, para facilitar la absorción celular y el escape endosómico, y para reducir el ARNm diana tanto in vitro como in vivo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
FIGURA 1: Inducción de citocina in vivo en ratón 3 horas después de la inyección.
FIGURA 2: Datos de ratón que comparan Compuesto 12 con Compuesto 9.
40 FIGURA 3: Datos de rata que comparan Compuesto 12 con Compuesto 9.
FIGURA 4: Datos de mono que comparan Compuesto 12 con Compuesto 9.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los diversos aspectos y realizaciones de la invención se dirigen a la utilidad de nuevos lípidos catiónicos útiles en nanopartículas lipídicas para suministrar oligonucleótidos, en particular ARNpi y miARN, a cualquier gen diana. 45 (Véanse las solicitudes de patentes US: US 2006/0083780, US 2006/0240554, US 2008/0020058, US 2009/0263407 y US 2009/0285881, y las solicitudes de patentes PCT: WO 2009/086558, WO2009/127060, WO2009/132131, WO2010/042877 WO2010/054384, WO2010/05401 WO2010/054405 y WO2010/054406). Véase también Semple S.
C. et al., Rational design of cationic lipids for siRNA. delivery, Nature Biotechnology, publicado en línea el 17 de enero de 2010; doi:10.1038/nbt.1.602.
50 Los lípidos catiónicos de la presente invención son componentes útiles en una nanopartícula lipídica para el
imagen2
suministro de oligonucleótidos, específicamente ARNpi y miARN. En una primera realización de esta invención, los lípidos catiónicos se ilustran mediante la Fórmula A:
imagen3
en la que:
5 p es 1 a 8;
R1 y R2 se seleccionan independientemente de H, alquilo (C1-C10), heterociclilo, y poliamina, en los que dicho heterociclilo y poliamina están opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4, o R1 y R2 se pueden tomar junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico con 4-7 miembros que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales
10 seleccionados de N, O y S, estando dicho heterociclo monocíclico opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4;
R3 se selecciona de H y alquilo (C1-C6), estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4,
R4 se selecciona independientemente de halógeno, OR5, SR5, CN, CO2R5 y CON(R5)2;
15 R5 se selecciona independientemente de H, alquilo (C1-C10) y arilo; e
Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o un alquenilo (C4-C22);
o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero de los mismos.
En otra realización, la invención incluye un compuesto que tiene la Fórmula A, en la que: p es 1 a 8;
se selecciona de:
imagen4
imagen5
25
n es 1 a 10;
R3 es H; e
Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o un alquenilo (C4-C22);
o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo.
Lípidos catiónicos específicos son:
30
(2S)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-3-[{4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto
4);
imagen6
(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 5); 1-[(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-il]guanidina (Compuesto 6); 1-[(2R)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,1-2-dien-1-iloxi]propan-2
amina (Compuesto 7);
5 1-[(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2amina (Compuesto 8); (2S)-1-({6-[(3))-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina
(Compuesto 9);
(3)-3-[6-{[(2S)-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]-2-(pirrolidin-1-il)propil]oxi}hexil)oxi]colest-5-eno (Compuesto 10);
10 (2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-amina (Compuesto 11); (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-(pentiloxi)propan-2-amina (Compuesto 13); (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-(heptiloxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 14); (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(2Z)-pent-2-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto
15);
15 (2S)-1-butoxi-3-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 16); (2S-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-[2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9-hexadecafluorononil)oxi]-N,Ndimetilpropan-2-amina (Compuesto 17); 2-amino-3-({9-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]nonil}oxi)-2-{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1
iloxi]metil}propan-1-ol (Compuesto 19); y
20 2-amino-3-({6-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-2-{[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]metil}propan1-ol (Compuesto 20);
o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero de los mismos. En otra realización, los lípidos catiónicos descritos son útiles en la preparación de nanopartículas lipídicas. En otra realización, los lípidos catiónicos descritos son componentes útiles en una nanopartícula lipídica para el
25 suministro de oligonucleótidos.
En otra realización, los lípidos catiónicos descritos son componentes útiles en una nanopartícula lipídica para el suministro de ARNpi y miARN. En otra realización, los lípidos catiónicos descritos son componentes útiles en una nanopartícula lipídica para el
suministro de ARNpi. 30 Las siguientes composiciones de nanopartículas lipídicas (LNPs) de la presente invención son útiles para el
suministro de oligonucleótidos, específicamente ARNpi y miARN: Lípido catiónico/colesterol/ PEG-DMG 56.6/38/5.4; Lípido catiónico/colesterol/PEG-DMG 60/38/2; Lípido catiónico/ colesterol/PEG-DMG 67,3/29/3,7;
35 Lípido catiónico/colesterol/PEG-DMG 49,3/47/3,7; Lípido catiónico/colesterol/PEG-DMG 50,3/44,3/5,4; Lípido catiónico/colesterol/PEG-C-DMA/DSPC 40/48/2/10; y Lípido catiónico/colesterol/PEG-DMG/DSPC 40/48/2/10. Los lípidos catiónicos de la presente invención pueden tener centros asimétricos, ejes quirales, y planos quirales
40 (como se describe en: E.L. Eliel y S.H. Wilen, Stereochemistry of Carbon Compounds, John Wiley & Sons, Nueva York, 1994, páginas 1119-1190), y aparecen como racematos, mezclas racémicas, y como diastereómeros individuales, incluyéndose en la presente invención todos los posibles isómeros y mezclas de los mismos, incluyendo isómeros ópticos. Además, los lípidos catiónicos descritos aquí pueden existir como tautómeros, y ambas formas tautómeras están destinadas a estar englobadas por el alcance de la invención, incluso aunque se represente solamente una estructura tautomérica.
imagen7
Cuando cualquier variable (por ejemplo R4) aparece más de una vez en cualquier constituyente, su definición en cada aparición es independiente en cada una de las otras apariciones. También, las combinaciones de sustituyentes 5 y variables son permisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables.
Si el sistema anular es bicíclico, se pretende que el enlace esté unido a cualquiera de los átomos adecuados en cualquier anillo del resto bicíclico.
Se entiende que los sustituyentes y patrones de sustitución en los lípidos catiónicos de la presente invención se pueden seleccionar por alguien de pericia normal en la técnica para proporcionar lípidos catiónicos que son
10 químicamente estables y que se pueden sintetizar fácilmente mediante técnicas conocidas en la técnica, así como aquellos métodos expuestos más abajo, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles. Si un sustituyente está él mismo sustituido con más de un grupo, se entiende que estos múltiples grupos pueden estar en el mismo carbono o en carbonos diferentes, en tanto que resulte una estructura estable.
Se entiende que se pueden incorporar uno o más átomos de Si en los lípidos catiónicos de la presente invención por
15 alguien de pericia normal en la técnica para proporcionar lípidos catiónicos que son químicamente estables y que se pueden sintetizar fácilmente mediante técnicas conocidas en la técnica a partir de materiales de partida fácilmente disponibles.
En los compuestos de Fórmula A, los átomos pueden mostrar sus abundancias isotópicas naturales, o uno o más de los átomos pueden estar artificialmente enriquecidos en un isótopo particular que tiene el mismo número atómico 20 pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico encontrado predominantemente en la naturaleza. La presente invención incluye todas las variaciones isotópicas adecuadas de los compuestos de Fórmula A. Por ejemplo, las formas isotópicas diferentes de hidrógeno (H) incluyen protio (1H) y deuterio (2H). El protio es el isótopo de hidrógeno predominante encontrado en la naturaleza. El enriquecimiento en deuterio puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas, tales como el incremento de la semivida in vivo o la
25 reducción de los requisitos de dosis, o puede proporcionar un compuesto útil como un estándar para la caracterización de muestras biológicas. Los compuestos isotópicamente enriquecidos en la Fórmula A se pueden preparar sin experimentación excesiva mediante técnicas convencionales bien conocidas por aquellos de pericia en la técnica o mediante procedimientos análogos a los descritos en el Esquema y Ejemplos aquí usando reactivos y/o intermedios apropiados enriquecidos isotópicamente.
30 Como se usa aquí, “alquilo” significa un hidrocarburo alifático saturado que tiene el número especificado de átomos de carbono.
Como se usa aquí, “alquenilo” significa un hidrocarburo alifático insaturado que tiene el número especificado de átomos de carbono.
Como se usa aquí, “arilo” pretende significar cualquier anillo de carbono monocíclico o bicílico estable de hasta 7
35 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de tales elementos arílicos incluyen fenilo, naftilo, tetrahidro-naftilo, indanilo y bifenilo.
Como se usa aquí, “heterociclilo” significa un heterociclo aromático o no aromático de 4 a 10 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N y S, e incluye grupos bicíclicos. Por lo tanto, “heterociclilo” incluye los siguientes: benzoimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzopirazolilo, 40 benzotriazolilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, carbazolilo, carbolinilo, cinolinilo, furanilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, indolazinilo, indazolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftpiridinilo, oxadiazolilo, oxazolilo, oxazolina, isoxazolina, oxetanilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridopiridinilo, piridazinilo, piridilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolilo, quinoxalinilo, tetrahidropiranilo, tetrazolilo, tetrazolopiridilo, tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo, azetidinilo, 1,4-dioxanilo, hexahidroazepinilo, piperazinilo, 45 piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, dihidrobenzoimidazolilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotiofenilo, dihidrobenzoxazolilo, dihidrofuranilo, dihidroimidazolilo, dihidroindolilo, dihidroisooxazolilo, dihidroisotiazolilo, dihidrooxadiazolilo, dihidrooxazolilo, dihidropirazinilo, dihidropirazolilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidropirrolilo, dihidroquinolinilo, dihidrotetrazolilo, dihidrotiadiazolilo, dihidrotiazolilo, dihidrotienilo, dihidrotriazolilo, dihidroazetidinilo, metilendioxibenzoílo, tetrahidrofuranilo, y tetrahidrotienilo, y N-óxidos de los mismos, todos los
50 cuales están opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados de R3.
Como se usa aquí, “poliamina” significa compuestos que tienen dos o más grupos amino primarios – tales como putrescina, cadaverina, espermidina, y espermina.
En una realización, En una realización,
imagen8
se selecciona de:
En una realización,
se selecciona de NH2 y NMe2. En una realización,
imagen9
imagen10
es NH2. 15 En una realización, n es 1 a 5.
En una realización, p es 1 a 8.
En una realización, R3 es H o alquilo (C1-C6), dicho alquilo está opcionalmente sustituido con uno a tres OH.
En una realización, R3 es H, metilo, etilo o propilo, dicho metilo, etilo o propilo está opcionalmente sustituido con un
OH. 20 En una realización, R3 es H o hidroximetilo.
En una realización, R3 es H.
En una realización, R4 es independientemente halógeno, OH, O-alquilo (C1-C6), SH, S-alquilo (C1-C6), CN, CO2H,
CO2-alquilo (C1-C6), CONH2, o CON-alquilo(C1-C6)2. En una realización, R4 es independientemente halógeno, OH u O-alquilo (C1-C6).
imagen11
En una realización, R5 es independientemente H o alquilo (C1-C6).
En una realización, Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o alquenilo (C4-C22).
En una realización de Fórmula A, “heterociclilo” es pirrolidina, piperidina, morfolina, imidazol o piperazina.
En una realización de Fórmula A, “heterociclilo monocíclico” es pirrolidina, piperidina, morfolina, imidazol o 5 piperazina.
En una realización de Fórmula A, “poliamina” es putrescina, cadaverina, espermidina, y espermina.
Se incluye en la presente invención la forma libre de lípidos catiónicos de Fórmula A, así como las sales farmacéuticamente aceptables o estereoisómeros de los mismos. Algunos de los lípidos catiónicos específicos aislados ejemplificados aquí son las sales protonadas de lípidos catiónicos de amina. La expresión “forma libre” se 10 refiere a los lípidos catiónicos de amina en forma no salina. Las sales farmacéuticamente aceptables englobadas incluyen no solamente las sales aisladas ejemplificadas para los lípidos catiónicos específicos descritos aquí, sino también todas las sales farmacéuticamente aceptables típicas de la forma libre de lípidos catiónicos de Fórmula A. La forma libre de los lípidos catiónicos de sales específicos descrita se puede aislar usando técnicas conocidas en la técnica. Por ejemplo, la forma libre se puede regenerar tratando la sal con una disolución de base acuosa diluida
15 adecuada, tal como NaOH acuoso diluido, carbonato potásico, amoníaco y bicarbonato sódico. Las formas libres pueden diferir de sus formas salinas respectivas en cierto modo en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero para los fines de la invención las sales de ácidos y de bases son de otro modo farmacéuticamente equivalentes a sus formas libres respectivas.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los lípidos catiónicos presentes se pueden sintetizar a partir de los
20 lípidos catiónicos de esta invención que contienen un resto básico o ácido por métodos químicos convencionales. Generalmente, las sales de los lípidos catiónicos básicos se preparan mediante cromatografía de intercambio iónico
o haciendo reaccionar la base libre con cantidades estequiométricas o con un exceso del ácido inorgánico u orgánico formador de sal deseado en un disolvente adecuado o diversas combinaciones de disolventes. De forma similar, las sales de los compuestos ácidos se forman mediante reacciones con la base inorgánica u orgánica
25 apropiada.
De este modo, las sales farmacéuticamente aceptables de los lípidos catiónicos de esta invención incluyen las sales no tóxicas convencionales de los lípidos catiónicos de esta invención como se forman haciendo reaccionar lípidos catiónicos presentes básicos con un ácido inorgánico u orgánico. Por ejemplo, las sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico,
30 nítrico y similar, así como sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxi-benzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etano disulfónico, oxálico, isetiónico, trifluoroacético (TFA) y similar.
Cuando los lípidos catiónicos de la presente invención son ácidos, “sales farmacéuticamente aceptables” adecuadas
35 se refiere a sales preparadas a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, férrica; ferrosa, litio, magnesio, sales mangánicas, manganosa, potasio, sodio, cinc y similar. Se prefieren particularmente las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas
40 sustituidas, incluyendo aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas y resinas de intercambio iónico básicas, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N1-dibenziletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares.
45 La preparación de las sales farmacéuticamente aceptables descritas anteriormente y otras sales farmacéuticamente aceptables típicas se describen más completamente por Berg et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., 1977:66:1-19.
También se observará que los lípidos catiónicos de la presente invención son potencialmente sales internas o zwitteriones, puesto que en condiciones fisiológicas un resto ácido desprotonado en el compuesto, tal como un
50 grupo carboxilo, puede ser aniónico, y esta carga electrónica puede compensarse internamente frente a la carga catiónica de un resto básico protonado o alquilado, tal como un átomo de nitrógeno cuaternario.
UTILIDAD
Los lípidos catiónicos y el uso de lípidos catiónicos en nanopartículas lipídicas para el suministro de oligonucleótidos, en particular ARNpi y miARN, para fines terapéuticos, se han descrito previamente. (Véanse las solicitudes de 55 patentes US: US 2006/0240554 y US 2008/0020058). Las nanopartículas lipídicas y el uso de nanopartículas lipídicas para el suministro de oligonucleótidos, en particular ARNpi y miARN, para fines terapéuticos, se han
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descrito previamente. (Véanse las solicitudes de patentes US: US 2006/0240554 y US 2008/0020058). Los oligonucleótidos (incluyendo ARNpi y miARN) y la síntesis de oligonucleótidos se han descrito previamente. (Véanse las solicitudes de patentes US: US 2006/0240554 y US 2008/0020058).
La utilidad de lípidos catiónicos en LPNs para el suministro de oligonucleótidos para fines terapéuticos también se 5 describe en Guo, K. et al. Molecular Pharaceutics (2009) 6:3, 651-658; y Whitehead, K.A. et al. Nature Reviews Drug Discovery (2009) 8, 129-138.
EJEMPLOS
Los ejemplos proporcionados aquí están destinados a ayudar a una comprensión adicional de la invención. Los materiales particulares empleados, las especies y condiciones están destinados a ilustrar adicionalmente la 10 invención y no limitar el alcance razonable de la misma. Los reactivos utilizados en la síntesis de los lípidos catiónicos están comercialmente disponibles o se preparan fácilmente por alguien de pericia normal en la técnica.
ESQUEMAS GENERALES
Esquema General 1: La síntesis de los nuevos lípidos catiónicos es un procedimiento convergente mediante el cual la reacción catalizada por ácido de Lewis entre el epóxido (i) y el ligador (ii) da el regioisómero alcohólico deseado 15 (iii). La interconversión de grupos funcionales del grupo hidroxilo en un grupo saliente adecuado, por ejemplo un triflato ((iv), X = OTf), seguido del desplazamiento con una amina apropiada, da el lípido catiónico requerido (v).
Esquema General 2: Los lípidos catiónicos de tipo (x) se pueden preparar como se esquematiza más abajo. Los aminodioles se pueden proteger como un hemiaminal cíclico (vi). La alquilación del alcohol libre con mesilato de linoleílo puede generar compuestos de tipo (vii). La desprotección del hemiaminal, seguido de la protección de la
20 amina primaria, puede generar el alcohol (vii). La alquilación de este alcohol, la desprotección de la amina y la aminación reductora pueden producir los compuestos de tipo (x).
Esquema General 3: Los compuestos de tipo (xv) se pueden preparar como se esquematiza más abajo. El grupo amino de tris se puede proteger, y el diol se puede convertir en un cetal cíclico. La alquilación del alcohol libre puede generar el compuesto (xii). La desprotección del cetal, seguido de la reprotección de la amina, puede dar el diol
25 (xiii). Un esquema sintético análogo al descrito en el Esquema General 2 generaría entonces compuestos de tipo (xv).
Esquema General 4: Los compuestos de tipo (xvii) se pueden preparar como se esquematiza más abajo. 2-Amino2-(hidroximetil)propano-1,3-diol se puede monoalquilar al tratarlo con hidruro de sodio y un electrófilo lipídico en tolueno para generar el derivado de monoéter (xvi). Se puede llevar a cabo una segunda alquilación en condiciones
30 similares para generar los derivados de diéter tris de tipo (xvii).
ESQUEMA GENERAL 1
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ESQUEMA GENERAL 2
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ESQUEMA GENERAL 3
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ESQUEMA GENERAL 4
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Preparación de (2R)-2-{[4Z)-dec-4-en-1-iloxi]metil}oxirano (Compuesto 1)
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5 A una mezcla agitada, enfriada (< 5ºC) de cis-4-decen-1-ol (1, 14,42 g, 156 mmoles), bromuro de tetrabutilamonio (1,26 g, 3,91 mmoles) e hidróxido de sodio (4,67 g, 117 mmoles) se añadió R-(-)-epiclorohidrina (6,1 ml, 78 mmoles) en una porción, la mezcla se agitó durante 2 horas, y después se añadió una segunda porción de R-(-)epiclorohidrina (6,1 ml, 78 mmoles). La mezcla se agitó toda la noche. Se añadió hexano (150 ml), y la mezcla se filtró. El filtrado se concentró hasta un aceite, y la purificación a través de cromatografía ultrarrápida dio producto (1,
10 14,3 g, 67,3 mmoles) con un rendimiento de 86%. Compuesto 1: C13R24O2 HRMS M+H esperado 213,1856; encontrado 213,1849 uma. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 5,34 (2H, multiplete); 3,70 (1H, dd, J = 3,2, 11,5 Hz); 3,52 (1H, dt, J = 6,6,9,2 Hz); 3,47 (1H, dt, J = 6,6, 9,2 Hz); 3,39 (1H, dd, J = 5,5, 11,6 Hz); 3,15 (1H, multiplete); 2,80 (1H, dd, J = 4,1,4,9 Hz); 2,61, (1H, dd, J = 2,7, 5,0 Hz); 2,11 (2H, c, 7,2 Hz); 2,02 (2H, c, J = 7,2 Hz); 1,66 (1H, c, J = 6,7 Hz); 1,63 (1H, t, J = 6,9 Hz); 1,38-1,24 (6H, complejo); 0,89 (3H, t, J = 6,9 Hz) ppm.
15 Preparación de 8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octan-1-ol (Compuesto 2)
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Una mezcla de 1,7-heptanodiol (30,6 g, 231 mmoles) y tosilato de colesterilo (25 g, 46,2 mmoles) en tolueno (80 ml) se calentó a 80ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se añadió hexano (70 ml). Las dos capas resultantes se separaron, y la capa superior se recogió y se lavó con una disolución
20 1:1 de salmuera saturada y Na2CO3 1M (100 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró, y finalmente se concentró hasta un volumen bajo ( 40 ml). El aceite bruto se purificó a través de cromatografía ultrarrápida para dar producto (2, 17,0 g, 33,9 mmoles) con un rendimiento de 73%: Compuesto 2: C34H60O2: HRMS M+Na esperado 523,4491; encontrado 523,4486 uma. 1H RMN (500MHz,, CDCl3) δ 5,34 (1H, complejo); 3,64 (2H, complejo); 3,45 (2H, complejo); 3,12 (1H, complejo); 2,35 (1H, ddd, J = 2,2, 4,7, 13,2 Hz); 2,19 (1H, complejo); 2,05-1,77 (5H, complejo); 1,63-0,83 (44H,
25 complejo); 0,68 (3H,s) ppm.
Preparación de (2R)-1-[{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptil}oxi)-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]propan-2-ol. (Compuesto 3)
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A una disolución agitada, enfriada (0ºC), del alcohol (2, 6,00 g, 12 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (20 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se añadió SnCl4 1M en CH2Cl2 (1,2 ml, 1,2 mmoles). Una disolución del epóxido (1, 3,1 g, 14,6 mmoles) en CH2Cl2 (5 ml) se añadió gota a gota durante 2 horas. La disolución se agitó durante 1 hora adicional. La reacción se paralizó con Na2CO3 1 M (3 ml), y se añadió hexano (50 ml). La mezcla se filtró, y el filtrado
5 se recogió y se concentró hasta un aceite bruto (9,7 g). La purificación a través de cromatografía ultrarrápida produjo producto (3, 4,95 g, 6,94 mmoles) con un rendimiento de 58%. C47H84O4 HRMS M+H esperado 713,6442; encontrado 713,6423 uma. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 5,42-5,30 (3H, complejo); 3,94 (1H, complejo); 3,52-3,40 (10H, complejo); 3,12 (1H, complejo); 2,45 (1H, d, J = 4,1 Hz); 2,35 (1H, ddd, J = 2,4, 13,2 Hz); 2,18 (1H, t ancho, J = 12,7 Hz); 2,09 (2H, c ancho, J = 7,0 Hz); 2,05-1,77 (7H, complejo); 1,67-0,82 (55H, complejo); 0,68 (3H, s) ppm.
10 Preparación de (2 S)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina. (Compuesto 4)
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A una disolución agitada enfriada (0ºC) del alcohol (3, 4,9 g, 6,87 mmoles) y piridina anhidra (0,7 ml, 8,67 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (20 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se añadió anhídrido tríflico (1,4 ml, 8,3 mmoles) gota a 15 gota. La disolución se agitó durante 2 horas, y después se añadió a una disolución 2M de dimetilamina en THF (18 ml, 36 mmoles) a 0ºC. La disolución se agitó durante 2 horas, y después se añadió diclorometano (150 ml). La disolución se lavó entonces con NaHCO3 0,5 M (150 ml). La capa orgánica se separó y se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta un aceite (6,2 g). Se añadió hexano (60 ml), los sólidos formados se eliminaron mediante filtración, y el filtrado se concentró para dar un aceite bruto (5,4 g). La purificación a través de
20 cromatografía produjo producto (4, 2,83 g, 3,82 mmoles) con un rendimiento de 56%. C49H87NO3 HRMS M+H esperado 740,6921; encontrado 740,6898 uma. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 5,41-5,31 (3H, complejo); 3,53 (2H, dd, J = 5,6, 9,9 Hz); 3,47 (2H, dd, J = 5,6, 9,9 Hz); 3,44 (2H, multiplete); 3,41 (2H, t, J = 6,9 Hz) 3,40 (2H, t, J = 6,9 Hz); 3,12 (1H, multiplete); 2,73 (1H, multiplete); 2,38 (6H,s); 2,35 (1H, ddd, J = 2,2, 4,8, 3,1 Hz); 0,84-2,25 (64 H, complejo); 0,68 (3H, s) ppm.
25 Los Compuestos 5-11 y 13-17 son lípidos catiónicos nuevos. El Compuesto 12 es S-Octil CLinDMA. Los Compuestos se pueden preparar según el Esquema anterior. A continuación se muestra la síntesis del Compuesto
9.
Compuesto 5
Compuesto 9
Compuesto 6
Compuesto 10
Compuesto 7
Compuesto 11
Compuesto 8
Compuesto 12
Compuesto 13
Compuesto 14
Compuesto 15
Compuesto 16
Compuesto 17
Preparación de (2S)-1-({6-[(3))-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxilpropan-2-amina. (Compuesto 9)
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A una disolución agitada, enfriada (-7ºC) del alcohol (41,99 g, 50,7 mmoles) y lutidina (5,90 g, 55,1 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (420 ml) se añadió anhídrido tríflico (9 ml, 53,3 mmoles) en porciones durante 30 minutos. La disolución se agitó durante 2,5 horas, y después se transfirió a una NHMe2 2M agitada enfriada (2ºC) en THF (1425 ml, 2850 mmoles). La disolución se agitó entonces durante 3 horas. Los volátiles se evaporaron, y el residuo oleoso se disolvió en hexanos (500 ml) y se lavó con Na2CO3 al 10% (500 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se volvió a extraer con hexanos (200 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (200 ml), y los orgánicos se secaron sobre Na2SO4. La disolución se filtró, y los volátiles se evaporaron, y el bruto se purificó a través de HPFC para producir compuesto 9 (25,5 g, 30,4 mmoles) con un rendimiento de 60%. C56H103NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 838,8017 uma, m/z medida 838,7996 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,36-5,33 (3H, complejo); 4,13-3,40 (10H, complejo); 3,13 (1H, multiple); 2,76 (1H, multiplete); 2,40 (6H, s) 2,35, (1H, ddd, J = 2,3, 4,8, 13,2 Hz); 2,18 (1H, complejo); 2,06-0,86 (77H, complejo); 0,68 (3H,s) ppm.
Compuesto 5: (2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina.
2,70 g, 3,90 mmoles, con un rendimiento de 57%. C46H83NO3: HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 698,6446, medida m/z 698,6480. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 5,42-5,31, (3H, complejo); 3,57-3,38, (10H, complejo); 3,12 (1H, multiplete); 2,73, (1H, multiplete); 2,38 (6H, s); 2,35, (1H, ddd, J = 2,3, 4,8, 13,2 Hz); 2,22-0,84 (58H, complejo); 0,68, (3H, s) ppm.
Compuesto 6: 1-[(2R)-1-{4-((3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(ocliloxi)propan-2-il]guanidina
1,28 g, 1,87 mmoles, con un rendimiento de 51%. C43H79N3O3: HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 686,6194 uma, medida m/z 686,6201 uma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,92 (1H, d, J = 5,9 Hz); 7,52 (2H, ancho); 7,13 (2H, ancho); 5,34 (1H, complejo); 3,71-3,40 (10H, complejo); 3,12 (1H, complejo); (2,35 (1H, ddd, 2,2, 4,6, 13,4 Hz); 2,18 (1H, complejo); 2,03-0,82 (57H); 0,68 (3H,s) ppm.
Compuesto 7: 1-[(2R)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1iloxi]propan-2-amina.
2,00 g, 2,35 mmoles, con un rendimiento de 64%. C57H103N3: HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 850,8011 uma, medida m/z 850,8011 uma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 5,42-5,29 (5H, complejo); 3,53 (2H, dd, J = 5,6, 9,9 Hz); 3,47 (2H, dd, J = 5,6, 9,9 Hz); 3,44 (2H, multiplete); 3,40 (2H, t, 6,6 Hz); 3,39 (2H, t, 6,6 Hz); 3,12 (1H, multiplete); 2,77 (2H, t, 6,7 Hz); 2,71 (1H, multiplete); 2,37 (6H, s); 2,35 (1H, ddd, J = 2,3, 4,6, 13,2 Hz); 2,18 (1H, multiplete); 2,08-1,93 (6H, complejo); 1,92-1,78 (3H, complejo); 1,70-0,84 (66H, complejo); 0,68 (3H, s) ppm.
Compuesto 8: 1-[(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-N,N-dimetil-3-{(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan2-amina.
2,90 g, 3,60 mmoles, con un rendimiento de 56%. C54H97NO3: HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 808,7654 uma, medida m/z 808,7580 uma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 5,42-5,30 (3H complejo); 3,56-3,37 (10H, complejo); 3,12 (1H, complejo); 2,77 (2H, t, J = 6,5 Hz); 2,72 (1H, multiplete); 2,38 (6H,s); 2,35 (1H, ddd, J = 2,3, 4,5, 3,4 Hz); 2,260,83 (70H, complejo); 0,68 (3H,s) ppm.
Compuesto 9: (2S)-1-({6-[(3))-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina.
14,2 g, 16,9 mmoles, con un rendimiento de 68%. C56H103NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 838,8017 uma, medida m/z 838,7996 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,36-5,33 (3H, complejo); 4,13-3,40 (10H, complejo); 3,13 (1H, multiplete); 2,76 (1H, multiplete); 2,40 (6H, s) 2,35, (1H, ddd, J = 2,3, 4,8,13,2 Hz); 2,18 (1H, complejo); 2,060,86 (77H, complejo); 0,68 (3H,s) ppm.
Compuesto 10: (3)-3-[6-([(2S)-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxil]-2-(pirrolidin-1-il)propil]oxi}hexil)oxi]colest-5-eno.
1,72 g, 1,99 mmoles, con un rendimiento de 81% C58H105NO4 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 864,8172 uma, medida m/z 864,8240 uma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 5,38-5,30 (3H, complejo); 3,58-3,52 (4H, complejo); 3,483,39 (6H, complejo); 3,12 (1H, multiple); 2,66 (4H, ancho); 2,50 (1H, c, J = 4Hz); 2,36 (1H, ddd, J = 2, 4, 12 Hz) 2,18 (1H, multiplete) 2,05-1,75 (14H, complejo); 1,57-0,86 (66H, complejo); 0,68 (3H,s) ppm. Compuesto 11: (2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-amina. 3,79 g, 5,88 mmoles, con un rendimiento de 76%. C42H77NO43 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 644,5976 uma, medida m/z 644,6012 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,73 (2H, ancho); 5,29 (1H, multiplete); 3,56-3,35 (10H, complejo); 3,08 (1H, multiplete); 2,29 (1H, multiplete); 2,13 (1H, multiplete); 2,01-1,74 (4H, complejo); 1,64-0,81 (54H, complejo); 0,64 (3H, s) ppm.
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C45H83NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 686,6446 uma, medida m/z 686,6443 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,30 (1H, multiplete); 3,50-3,33 (10H, complejo); 3,06 (1H, multiplete); 2,66 (1H, multiplete); 2,31 (6H, singlete); 2,29 (1H, multiplete); 2,13 (1H, multiplete); 1,94-1,72 (5H, complejo); 1,53-0,80 (54H, complejo); 0,62 (3H,
5 singlete) ppm.
Compuesto 14: (2R)-1-((8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-(heptiloxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina.
C47H87NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 714,6759 uma, medida m/z 714,6746 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,30 (1H, multiplete); 3,52-3,35 (10H, complejo); 3,08 (1H, multiplete); 2,67 (1H, multiplete); 2,33 (6H, singlete); 2,30 (1H, multiplete); 2,15 (1H, multiplete); 2,00-1,74 (5H, complejo); 1,59-0,82 (58H, complejo); 0,64 (3H,
10 singlete) ppm.
Compuesto 15: (2R)-1-({8-{(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(2Z)-pent-2-en-1-iloxi]propan-2-amina.
C45H81NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 684,6289 uma, medida m/z 684,6276 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,49 (2H, multiplete); 5,30 (1H, multiplete); 3,99 (2H, d, J = 6 Hz); 3,51-3,33 (8H, complejo); 3,08 (1H, multiplete); 2,69 (1H, multiplete); 2,33 (6H, singlete); 2,30 (1H, multiplete); 2,20-1,70 (8H, complejo); 1,51-0,82 (48H,
15 complejo); 0,64 (3H, singlete) ppm.
Compuesto 16: (2S)-1-butoxi-3-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina:
C44H81NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 672,6289 uma, medida m/z 672,6285 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,31 (1H, multiplete); 3,51-3,34 (10H, complejo); 3,08 (1H, multiplete); 2,67 (1H, multiplete); 2,33 (6H, singlete); 2,30 (1H, multiplete); 2,14 (1H, multiplete); 2,00-1,75 (5H, complejo); 1,54-0,81 (52H, complejo); 0,64 (3H,
20 singlete) ppm.
Compuesto 17: (2S-1-({8-{(3}-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-[2,2,3,374,4,5,5,-6,6,7,7,8,8,9,9hexadecafluorononil)oxi}-N,N-dimetilpropan-2-amina.
C49H75F16NO3 HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 1030,5564 uma, medida m/z 1030,5506 uma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 6,15-5,89 (1H, tt, J = 6,3, 65,0 Hz); 5,30 (1 H, multiplete); 3,95-3,88 (2H, t, J = 16,8 Hz); 3:69 (2H,
25 multiple); 3,51-3,33 (6H, complejo); 3,08 (1H, multiplete); 2,72 (1H, multiplete); 2,33 (6H, singlete); 2,03 (1H, multiplete); 2,15 (1H, multiplete); 1,96 (2H, multiplete); 1,80 (3H, multiplete); 1,56-0,82 (45H, complejo); 0,64 (3H, singlete) ppm.19FNMR (500 MHz, CDCl3) δ 119,92 (2F, singlete); -122,40 (6F, singlete); -123,73 (4F, singlete); -129,74 (2F, singlete); -137,33 a -137,44 (2F, doblete, J = 55,0 Hz) ppm.
30 Preparación de 2-amino-2-{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]metil}propano-1,3-diol. (Compuesto 18)
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A una disolución agitada de hidruro de sodio (2,2 g, 55 mmoles) en tolueno (200 ml) a 0ºC se añadió lentamente 2amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (5 g, 41,3 mmoles). La suspensión resultante se agitó a 0ºC durante 1 hora. A esta mezcla se añadió mesilato de linoleílo (15 g, 43,5 mmoles), y la mezcla resultante se agitó durante 18 horas a 35 temperatura ambiente. La reacción se paralizó mediante adición lenta de alcohol isopropílico, seguido de hielo. La reacción se repartió entre éter y agua. Los orgánicos se lavaron con agua y con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron a vacío. El compuesto del título se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (MeOH/DCM-amoníaco 0-20%) para dar 3,25 g del producto deseado. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,39 (m, 4H), 3,53 (s, 4H), 3,49 (s, 2H), 3,43 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 3,41 (s, 2H), 2,78 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,05 (m, 6H), 1,72
40 (s ancho, 4H), 1,57 (m, 4H), 1,34 (m, 14H), 0,89 (t, J = 6,78 Hz, 3H).
Preparación de 2-amino-3-({9-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]nonil)oxi)-2-{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien1-iloxi]metil}propan-1-ol. (Compuesto 19)
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A una disolución agitada de 2-amino-2-{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]metil}propano-1,3-diol (2,7 g, 7,31
45 mmoles) en tolueno (50 ml) a 0ºC se añadió hidruro de sodio (0,44 g, 11 mmoles) en porciones pequeñas. La suspensión resultante se curó durante 30 minutos y se trató con metanosulfonato de 9-[{3,8,9,14,17,20)colest-5-en-3-iloxi]nonilo (6,5 g, 11 mmoles). La reacción se calentó a reflujo durante 24 horas, después se enfrió
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hasta 0ºC y se paralizó con agua. La reacción se repartió entre agua/acetato de etilo, y los orgánicos se lavaron con agua y con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron a vacío. El material bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (EtOH/EtOAc 0-10%) para proporcionar 0,91 g (14%) del compuesto del título como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,36 (m, 4H), 3,50 (d ancho, 2H, 3,42 (m, 8H), 3,15 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,77 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 2:38 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 2,10-1,80 (complejo, 10H), 1,60-0,80 (complejo, 67H), 0,68 (s, 3H); HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 866,7960 uma, medida m/z 866,7981 uma.
Preparación de 2-amino-3-({6-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-2-{[(9Z)-octadec-9-en-1il]metil}propan-1-ol. (Compuesto 20)
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El Compuesto 20 se preparó según el Esquema general 4 según se describió para el compuesto 19. HRMS (ESI positiva) M+H, m/z teórica 840,7803 uma, medida m/z 840,7808 uma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,37 (m, 2H), 3,42 (m, 10H), 3,12 (m, 1H), 2,83 (s ancho, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,18 (m, 1-H), 2,05-1,78 (complejo, 10H), 1,55-0,85 (complejo, 69H), 0,68 (s, 3H).
INFORMACIÓN ADICIONAL
El Esquema General 1, descrito anteriormente, representa la reacción de alcóxido de linoleílo, formado en las condiciones señaladas, y epiclorohidrina. Nuestra comprensión original de esta reacción fue que ocurrió vía un mecanismo SN2 en el carbono que porta el átomo de haluro, sin cambio en el centro de carbono asimétrico, por ejemplo como se representa en la síntesis del Compuesto 1. Las modificaciones químicas subsiguientes del Compuesto 1, como se representan, conducen al Compuesto 4 con la estereoquímica sin cambiar en esa posición. Sin embargo, estudios recientes (experimentos en la reacción de alcohol linoleílico con S-epiclorohidrina, en condiciones descritas, condiciones de ácido de Lewis y junto con experimentos de dicroísmo circular vibracional (VCD), un método espectroscópico válido para determinar la configuración absoluta de moléculas quirales (R. K. Dukor y L. A. Nafie, en Encyclopedia of Analytical Chemistry: Instrumentation and Applications, Ed. R. A. Meyers (Wiley, Chichester, 2000) 662-676.)), han revelado que la reacción se produce vía un mecanismo SN2’, es decir, reacción en el carbono terminal del epóxido que conduce a la apertura subsiguiente del anillo, seguido de una etapa de cierre del anillo in situ que conduce a la inversión de la estereoquímica en el carbono asimétrico. La consecuencia de este hallazgo es que la estereoquímica en los Compuestos 1,3,4-11, y 13-16 está representada incorrectamente en el carbono asimétrico, y la representación correcta es aquella en la que el enlace está invertido. Por ejemplo, el Compuesto 1 se debería de dibujar como se muestra en 1a; 3 se debería de dibujar como se muestra en 3a; y 4 se debería de dibujar como se muestra en 4a; etc. Para ser claros, los Compuestos-1a, 3a, 4a-11a, y 13a-16a se obtuvieron originalmente y se ensayaron siguiendo los Esquemas Generales anteriores. Los estudios realizados, como se describen en los Ejemplos 1-3 más abajo y
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Compuesto 5a
Compuesto 9a
Compuesto 6a
Compuesto 10a
Compuesto 7a
Compuesto 11a
Compuesto 8a
Compuesto 12a
Compuesto 13a
Compuesto 14a
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Compuesto 15a
Compuesto 16a
Compuesto 17a
(2R)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto
4a);
(2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 5 5a);
1-[(2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-il]guanidina (Compuesto 6a); 1-[(2S)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2amina (Compuesto 7a);
1-[(2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2
10 amina (Compuesto 8a); (2R)-1-({6-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 9a);
(3)-3-[6-{[(2R)-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxil]-2-(pirrolidin-1-il)propil]oxi}hexil)oxi]colest-5-eno (Compuesto
10a);
15 (2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-amina (Compuesto 11a);
(2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi}-N,N-dimetil-3-(pentiloxi)propan-2-amina (Compuesto 13a);
(2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-(heptiloxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 14a);
(2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(2Z)-pent-2-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 15a); y
20 (2R)-1-butoxi-3-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 16a). COMPOSICIÓN LNP Descripción 1 del procedimiento de LNP:
Las nanopartículas lipídicas (LNP) se preparan mediante un procedimiento de chorro incidente. Las partículas se forman mezclando volúmenes iguales de lípidos disueltos en alcohol con ARNpi disuelto en un amortiguador de
25 citrato. La disolución lipídica contiene un nuevo lípido catiónico de la presente invención, un lípido auxiliar (colesterol) y un lípido de PEG (PEG-DMG) a una concentración de 5-15 mg/ml con un objetivo de 9-12 mg/ml en un alcohol (por ejemplo etanol). La relación de los lípidos tiene un intervalo de porcentaje en moles de 25-98 para el lípido catiónico con un objetivo de 45-65, el lípido auxiliar tiene un intervalo de porcentaje en moles de 0-75 con un
imagen32
objetivo de 30-50, y el lípido de PEG tiene un intervalo de porcentaje en moles de 1-6 con un objetivo de 2-5. La disolución de ARNpi contiene una o más secuencias de ARNpi en un intervalo de concentraciones de 0,7 a 1,0 mg/ml con un objetivo de 0,8-0,9 mg/ml en un amortiguador de citrato de sodio:cloruro de sodio pH 4. Los dos líquidos se mezclan en una mezcladora de chorro incidente, formando instantáneamente las LNP. El ID tiene un 5 intervalo de 0,25 a 1,0 mm, y un caudal total de 10-200 ml/min. La combinación de caudal e ID de tubo tiene un efecto sobre el control del tamaño de partículas de las LNPs entre 50 y 200 nm. Las LNPs mixtas se mantienen desde 30 minutos hasta 48 h antes de una etapa de dilución. La etapa de dilución comprende un mezclamiento de chorro incidente similar que diluye instantáneamente las LNP. Este procedimiento usa IDs de tubo que oscilan de 1 mm ID a 5 mm ID y un caudal de 10 a 400 ml/min. Las LNPs se concentran y diafiltran vía un procedimiento de ultrafiltración en el que se elimina el alcohol y el amortiguador de citrato se intercambia con la disolución de amortiguador final, tal como disolución salina amortiguada con fosfato. El procedimiento de ultrafiltración usa un formato de filtración de flujo tangencial (TFF). Este procedimiento usa un intervalo de corte de pesos moleculares nominal de membrana de 30-500 KD. El formato de la membrana puede ser fibra hueca o casete de lámina plana. Los procedimientos de TFF con el corte de pesos moleculares apropiado retienen las LNP en el retenido, y el filtrado
15 o permeado contiene el alcohol, amortiguador de citrato, desechos del amortiguador final. El procedimiento de TFF es un procedimiento de múltiples etapas con una concentración inicial hasta una concentración de ARNpi de 1-3 mg/ml. Tras la concentración, la disolución de las LNPs se diafiltra frente al amortiguador final durante 15-20 volúmenes para eliminar el alcohol y llevar a cabo el intercambio de amortiguador. El material se concentra entonces 1-3 veces adicionales. Las etapas finales del procedimiento de LNP son filtrar de forma estéril la disolución de LNP concentrada e introducir el producto en un vial.
Procedimiento analítico:
1) Concentración de ARNpi
Las concentraciones de los dúplex de ARNpi se determinan mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones de intercambio aniónico fuerte (SAX-HPLC) usando un sistema Waters 2695 Alliance (Water
25 Corporation, Milford MA) con un detector 2996 PDA. Las LNPs, de otro modo denominadas como vehículos de suministro de ARNi (RDVs), se tratan con 0,5% de Triton X-100 para liberar ARNpi total, y se analizan mediante separación con SAX usando una columna Dionex BioLC DNAPac PA 200 (4 x 250 mm) con detección de UV a 254 nm. La fase móvil está compuesta de A: 25 mM de NaClO4, 10 mM de Tris, 20% de EtOH, pH 7,0 y B: 250 mM de NaClO4, 10 mM de Tris, 20% de EtOH, pH 7,0 con gradiente lineal de 0-15 min. y caudal de 1 ml/min. La cantidad de ARNpi se determina comparando la curva patrón de ARNpi.
2) Tasa de encapsulamiento
El reactivo de fluorescencia SYBR Gold se emplea para la cuantificación de ARN para monitorizar la tasa de encapsulamiento de los RDVs. Los RDVs con o sin Triton X-100 se usan para determinar la cantidad de ARNpi libre y ARNpi total. El ensayo se lleva a cabo usando un espectrofotómetro de microplaca SpectraMax M5e de Molecular
35 Devices (Sunnyvale, CA). Las muestras se excitan a 485 nm, y la emisión de fluorescencia se mide a 530 nm. La cantidad de ARNpi se determina comparando con la curva patrón de ARNpi.
Tasa de encapsulamiento = (1 – ARNpi libre/ARNpi total) x 100%
3) Tamaño de partículas y polidispersidad
Los RDVs que contienen 1 g de ARNpi se diluyen hasta un volumen final de 3 ml con 1 x PBS. El tamaño de partículas y la polidispersidad de las muestras se miden mediante un método de dispersión dinámica de la luz usando el instrumento ZetaPALS (Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY). La intensidad dispersada se mide con un láser de He-Ne a 25ºC con un ángulo de dispersión de 90º.
4) Análisis del potencial zeta
Los RDVs que contienen 1 g de ARNpi se diluyen hasta un volumen final de 2 ml con amortiguador de Tris 1 mM
45 (pH 7,4). La movilidad electroforética de las muestras se determina usando el instrumento ZetaPALS (Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY) con electrodo y láser de He-Ne como fuente de luz. En el cálculo de los potenciales zeta se adopta el límite Smoluchowski.
5) Análisis de lípidos
Las concentraciones de lípidos individuales se determinan mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones de fase inversa (RP-HPLC) usando el sistema Waters 2695 Alliance (Water Corporation, Milford-MA) con un detector de aerosol cargado Corona (CAD) (ESA Biosciences, Inc, Chelmsford, MA). Los lípidos individuales en los RDVs se analizan usando una columna Agilent Zorbax SB-C18 (50 x 4,6 mm, tamaño de partículas 1,8 m) con CAD a 60ºC. La fase móvil está compuesta de A: 0,1% de TFA en H2O y B: 0,1% de TFA en IPA. El gradiente es 75% de fase móvil A y 25% de fase móvil B desde tiempo 0 hasta 0,10 min.; 25% de fase móvil A y 75% de fase móvil B desde 55 0,10 a 1,10 min.; 25% de fase móvil A y 75% de fase móvil B desde 1,10 a 5,60 min.; 5% de fase móvil A y 95% de fase móvil B desde 5,60 a 8,01 min.; y 75% de fase móvil A y 25% de fase móvil B desde 8,01 hasta 13 min., con
caudal de 1 ml/min. La concentración de lípidos individuales se determina comparando la curva patrón con todos los componentes lipídicos en los RDVs con un ajuste cuadrático de curva. El porcentaje molar de cada lípido se calcula en base a su peso molecular.
Utilizando el procedimiento de LNP descrito anteriormente, se identificaron LNPs específicos con las siguientes 5 relaciones y ARNpi:
Composición nominal:
Lípido catiónico/colesterol/PEG-DMG 60/38/2.
ARNpi de Luc
5’-iB-AUAAGGCUAUGAAGAGAUATT-iB 3’ (SEC.ID.NO.:1)
10 3’-UUUAUUCCGAUACUUCUCUAU-5’ (SEC.ID.NO.:2)
AUGC – Ribosa
iB – Desoxi abásico invertido
UC -2’ Fluoro
AGT -2’ Desoxi
15 AGU -2’OCH3
Lípido catiónico /colesterol/PEG-DMG 60/38/2
ARNpi de ApoB
5’-iB-CUUUAACAAUUCCUGAAAUTT-iB (SEC ID NO.:3)
3’-UUGAAAUUGUUAAGGACUUUA-5’ (SEQ ID NO.:4)
20 AUGC – Ribose
iB -Desoxi abásico invertido
UC -2’ Fluoro
AGT -2’ Desoxi
AGU -2’-OCH3
25 Descripción 2 del procedimiento de LNP:
Las nanopartículas lipídicas (LNP) se preparan mediante un procedimiento de chorro incidente. Las partículas se forman mezclando lípidos disueltos en alcohol con ARNpi disuelto en un amortiguador de citrato. La relación de mezclamiento de lípidos a ARNpi se centran en 45-55% de lípido y 65-45% de ARNpi. La disolución lipídica contiene un nuevo lípido catiónico de la presente invención, un lípido auxiliar (colesterol), lípido de PEG (por ejemplo PEG-C30 DMA, PEG-DMG), y DSPC a una concentración de 5-15 mg/ml con un objetivo de 9-12 mg/ml en un alcohol (por ejemplo etanol). La relación de los lípidos tiene un intervalo de porcentaje en moles de 25-98 para el lípido catiónico con un objetivo de 35-65, el lípido auxiliar tiene un intervalo de porcentaje en moles de 0-75 con un objetivo de 3050, el lípido de PEG tiene un intervalo de porcentaje en moles de 1-15 con un objetivo de 1-6, y el DSPC tiene un intervalo de porcentaje en moles de 0-15 con un objetivo de 0-12. La disolución de ARNpi contiene una o más 35 secuencias de ARNpi en un intervalo de concentraciones de 0,3 a 1,0 mg/ml con un objetivo de 0,3-0,9 mg/ml en una disolución salina amortiguada con citrato de sodio con pH en el intervalo de 3,5-5. Los dos líquidos se calentaron hasta una temperatura en el intervalo de 15-40ºC, con un objetivo de 30-40ºC, y después se mezclaron en una mezcladora de chorro incidente, formando instantáneamente las LNP. El ID tiene un intervalo de 0,25 a 1,0 mm, y un caudal total de 10-600 ml/min. La combinación de caudal e ID de tubo tiene un efecto sobre el control del 40 tamaño de partículas de las LNPs entre 30 y 200 nm. La disolución se mezcla entonces con una disolución amortiguada a un pH mayor con una relación de mezclamiento en el intervalo de 1:1 a1:3 vol:vol pero con un objetivo de 1:2 vol:vol. Esta disolución amortiguada está a una temperatura en el intervalo de 15-40ºC, con un objetivo de 30-40ºC. Las LNPs mixtas se mantienen desde 30 minutos hasta 2 h antes de una etapa de filtración de intercambio aniónico. La temperatura durante la incubación está en el intervalo de en el intervalo de 15-40ºC, con un 45 objetivo de 30-40ºC. Tras la incubación, la disolución se filtra a través de un filtro de 0,8 um que contiene una etapa de separación de intercambio aniónico. Este procedimiento usa IDs de tubo que oscilan de 1 mm ID a 5 mm ID y un caudal de 10 a 2000 ml/min. Las LNPs se concentran y diafiltran vía un procedimiento de ultrafiltración en el que se elimina el alcohol y el amortiguador de citrato se intercambia con la disolución de amortiguador final, tal como
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disolución salina amortiguada con fosfato. El procedimiento de ultrafiltración usa un formato de filtración de flujo tangencial (TFF). Este procedimiento usa un intervalo de corte de pesos moleculares nominal de membrana de 30500 KD. El formato de la membrana puede ser fibra hueca o casete de lámina plana. Los procedimientos de TFF con el corte de pesos moleculares apropiado retienen las LNP en el retenido, y el filtrado o permeado contiene el alcohol, amortiguador de citrato, desechos del amortiguador final. El procedimiento de TFF es un procedimiento de múltiples etapas con una concentración inicial hasta una concentración de ARNpi de 1-3 mg/ml. Tras la concentración, la disolución de las LNPs se diafiltra frente al amortiguador final durante 10-20 volúmenes para eliminar el alcohol y llevar a cabo el intercambio de amortiguador. El material se concentra entonces 1-3 veces adicionales. Las etapas finales del procedimiento de LNP son filtrar de forma estéril la disolución de LNP concentrada e introducir el producto en un vial.
EJEMPLO 1
Evaluación de eficacia y toxicidad in vivo de ratón
Las LNPs que utilizan Compuesto 9 o 12, en las composiciones nominales descritas inmediatamente antes, se evaluaron para determinar la eficacia in vivo y la inducción de citocinas inflamatorias en un modelo de ratón de luciferasa. El ARNpi se dirige al transcrito de ARNm para el gen de luciferasa de luciérnaga (Photinus pyralis) (número de acceso M15077). La secuencia primaria y el patrón de modificación química del ARNpi de luciferasa se muestran anteriormente. El modelo de luciferasa in vivo emplea un ratón transgénico en el que la secuencia codificante de luciferasa de luciérnaga está presente en todas las células. Ratones transgénicos ROSA26-LoxPStop-LoxP-Luc (LSL-Luc) autorizados del Dana Farber Cancer Institute son inducidos a expresar el gen de luciferasa eliminando en primer lugar la secuencia de LSL con un virus Ad-Cre recombinante (Vector Biolabs). Debido a la naturaleza organotrópica del virus, la expresión está limitada al hígado cuando se suministra mediante inyección en la vena de la cola. Los niveles de expresión de luciferasa en el hígado se cuantifican midiendo la producción de luz, usando un formador de imágenes IVIS (Xenogen) tras la administración del sustrato luciferina (Caliper Life Sciences). Los niveles de luminiscencia antes de la dosis se miden antes de la administración de los RDVs. La luciferina en PBS (15 mg/ml) se inyecta intraperitonealmente (IP) en un volumen de 150 ul. Tras un período de incubación de cuatro minutos, los ratones se anestesian con isoflurano y se colocan en el formador de imágenes IVIS. Los RDVs (que contienen ARNpi) en el vehículo PBS se inyectaron en la vena de la cola en un volumen de 0,2 ml. Los niveles de dosis finales oscilaron de 0,3 a 3 mg/kg de ARNpi. Como control, se dosificó vehículo PBS solo. Tres horas después de la dosis, los ratones se sangraron retroorbitalmente para obtener plasma para el análisis de citocinas. Se formaron imágenes de los ratones 48 horas tras la dosis usando el método descrito anteriormente. Los cambios en la producción de luz por luciferina se correlacionan con los niveles de ARNm de luciferasa y representan una medida indirecta de la actividad de ARNpi de luciferasa. Los resultados de la eficacia in vivo se expresan como % de inhibición de luminiscencia con respecto a niveles de luminiscencia previos a la dosis. Los niveles de citocinas plasmáticas se determinaron usando la matriz quimioluminiscente de citocinas multiplexada SearchLight (Pierce/Thermo). La administración sistémica de los RDVs con ARNpi de luciferasa disminuyó la expresión de luciferasa de una manera dependiente de la dosis. Se observó una mayor eficacia en ratones a los que se les dosificaron compuestos 9 que contienen RDVs que con el RDV que contiene el lípido catiónico octil-CLinDMA, Compuesto 12, (Tabla 1 y Figura 2). Los RDVs que contienen el Compuesto 9 y 12 aumentaron significativamente los niveles plasmáticos de ratón de las citocinas IL-6 y mKC con respecto al control de PBS. Sin embargo, la inducción media de citocinas fue menor en los animales dosificados con el RDV que contiene el Compuesto 9, con respecto al RDV que contiene el Compuesto 12 (Figura 1).
Tabla 1: Datos de eficacia in vivo de ratón. % de inhibición media de bioluminiscencia por LNPs preparados a partir de los compuestos 9 y 12
Compuesto 9
Compuesto 12
0.1 mg Kg-1
0.3 mg Kg-1 1.0 mg Kg-1 0.1 mg Kg-1 0.3 mg Kg-1 1.0 mg Kg-1
80
89 91 54 74 88
EJEMPLO 2
Evaluación de eficacia y toxicidad in vivo de rata
Las LNPs que utilizan los Compuestos 9 o 12 en las composiciones nominales descritas anteriormente se evaluaron para determinar la eficacia in vivo y los incrementos en alanina aminotransferasa y aspartato aminotransferasa en ratas hembra Sprague-Dawley (Crl:CD(SD)) (Charles River Labs). El ARNpi selecciona como diana el transcrito de ARNm para el gen ApoB (número de acceso NM 019287). La secuencia primaria y el patrón de modificación química del ARNpi de ApoB se presentan anteriormente. Los RDVs (que contienen ARNpi) en vehículo PBS se inyectaron en la vena de la cola en un volumen de 1 a 1,5 ml. La velocidad de infusión es aproximadamente 3 ml/min. En cada grupo de dosificación se usaron cinco ratas. Tras la administración de las LNP, las ratas se colocaron en jaulas con dieta normal y agua. Seis horas después de la dosis, se retiró la comida de las jaulas. La necropsia de los animales

Claims (6)

  1. imagen1
    REIVINDICACIONES
    1. Un lípido catiónico de Fórmula A:
    imagen2
    en la que:
    5 p es 1a 8;
    R1 y R2 se seleccionan independientemente de H, alquilo (C1-C10), heterociclilo, y poliamina, en los que dicho heterociclilo y poliamina están opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4, o R1 y R2 se pueden tomar junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico con 4-7 miembros que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales
    10 seleccionados de N, O y S, estando dicho heterociclo monocíclico opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4;
    R3 se selecciona de H y alquilo (C1-C6), estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados de R4,
    R4 se selecciona independientemente de halógeno, OR5, SR5, CN, CO2R5 y CON(R5)2;
    15 R5 se selecciona independientemente de H, alquilo (C1-C10) y arilo; e
    Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o un alquenilo (C4-C22);
    o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero de los mismos.
  2. 2. Un lípido catiónico de Fórmula A según la reivindicación 1, en el que: p es 1 a 8;
    se selecciona de:
    imagen3
    imagen4
    25 n es 1 a 10;
    R3 es H; e
    Y es un alquilo (C4-C22), perfluoroalquilo (C4-C22), o un alquenilo (C4-C22);
    o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo.
  3. 3. Un lípido catiónico según la reivindicación 1, que se selecciona de:
    30 (2S)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-3-[{4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 4); (2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 5);
    23
    imagen5
    1-[(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-il]guanidina (Compuesto 6);
    1-[(2R)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2amina (Compuesto 7); 1-[(2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2
    5 amina (Compuesto 8);
    (2S)-1-({6-[(3))-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 9); (3)-3-[6-{[(2S)-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxil]-2-(pirrolidin-1-il)propil]oxi}hexil)oxi]colest-5-eno (Compuesto 10); (2R)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-amina (Compuesto 11);
    10 (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-(pentiloxi)propan-2-amina (Compuesto 13); (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-(heptiloxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 14); (2R)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(2Z)-pent-2-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto
    15); (2S)-1-butoxi-3-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 16);
    15 (2S-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-[2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9-hexadecafluorononil)oxi]-N,Ndimetilpropan-2-amina (Compuesto 17); 2-amino-3-({9-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]nonil}oxi)-2-{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1
    iloxi]metil}propan-1-ol (Compuesto 19); y 2-amino-3-({6-[(3,8,9,14,17,20)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-2-{[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]metil}propan20 1-ol (Compuesto 20);
    o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo.
  4. 4. Un lípido catiónico según la reivindicación 1, que se selecciona de:
    (2R)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto
    4a);
    25 (2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-[(4Z)-dec-4-en-1-iloxi]-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto
    5a);
    1-[(2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-il]guanidina (Compuesto 6a);
    1-[(2S)-1-{7-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]heptiloxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2amina (Compuesto 7a);
    30 1-[(2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-2amina (Compuesto 8a);
    (2R)-1-({6-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 9a);
    (3)-3-[6-{[(2R)-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxil]-2-(pirrolidin-1-il)propil]oxi}hexil)oxi]colest-5-eno (Compuesto 35 10a);
    (2S)-1-{4-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]butoxi}-3-(octiloxi)propan-2-amina (Compuesto 11a);
    (2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi}-N,N-dimetil-3-(pentiloxi)propan-2-amina (Compuesto 13a);
    (2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-3-(heptiloxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 14a);
    (2S)-1-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(2Z)-pent-2-en-1-iloxi]propan-2-amina 40 (Compuesto 15a); y
    (2R)-1-butoxi-3-({8-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetilpropan-2-amina (Compuesto 16a).
    24
    imagen6
  5. 5. El lípido catiónico según la reivindicación 1, que es:
    (2S)-1-({6-[(3))-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 9);
    o cualquier sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo.
  6. 6. El lípido catiónico según la reivindicación 1, que es:
    (2R)-1-({6-[(3)-colest-5-en-3-iloxi]hexil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z)-octadec-9-en-1-iloxi]propan-2-amina (Compuesto 9a).
    25
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Families Citing this family (228)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2485770A4 (en) * 2009-10-08 2013-04-10 Merck Sharp & Dohme Novel cationic lipids with short lipid chains for oligonucleotide delivery
CA3009891C (en) * 2009-12-23 2020-09-15 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
MX2013002332A (es) * 2010-08-31 2013-03-18 Novartis Ag Lipidos apropiados para suministro liposomal del arn que codifica la proteina.
MX366055B (es) * 2011-08-31 2019-06-26 Novartis Ag Liposomas pegilados para admistracion de acido ribonucleico (arn) que codifica para inmunogeno.
CN107266391B (zh) 2011-10-18 2020-04-17 迪克纳制药公司 胺阳离子脂质及其用途
WO2013086354A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
AU2013240051B2 (en) 2012-03-27 2017-11-30 Sirna Therapeutics, Inc. Diether based biodegradable cationic lipids for siRNA delivery
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
CN104411338A (zh) 2012-04-02 2015-03-11 现代治疗公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
CN105142614A (zh) * 2013-03-14 2015-12-09 迪克纳制药公司 用于配制阴离子试剂的方法
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
CA2917348A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
SI3071696T1 (sl) 2013-11-22 2019-11-29 Mina Therapeutics Ltd C/EBP alfa kratko delujoči RNA sestavki in postopki uporabe
KR102396026B1 (ko) 2014-01-21 2022-05-09 안자리움 바이오사이언시스 아게 하이브리도좀, 이를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법 및 이의 용도
US10821175B2 (en) 2014-02-25 2020-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
HUE060907T2 (hu) 2014-06-25 2023-04-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske formulációk nukleinsavak bevitelére
CN106794141B (zh) 2014-07-16 2021-05-28 诺华股份有限公司 将核酸包封在脂质纳米粒主体中的方法
US20170204152A1 (en) 2014-07-16 2017-07-20 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3171895A1 (en) 2014-07-23 2017-05-31 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016065349A2 (en) 2014-10-24 2016-04-28 University Of Maryland, Baltimore Short non-coding protein regulatory rnas (sprrnas) and methods of use
HK1251010A1 (zh) 2015-05-06 2019-01-18 Benitec IP Holdings Inc. 用於治疗乙型肝炎病毒(hbv)感染的试剂及用途
PT3313829T (pt) 2015-06-29 2024-07-08 Acuitas Therapeutics Inc Formulações de lípidos e de nanopartículas lipídicas para a administração de ácidos nucleicos
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
HRP20230209T1 (hr) 2015-10-28 2023-04-14 Acuitas Therapeutics Inc. Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
PL3394093T3 (pl) 2015-12-23 2022-05-16 Modernatx, Inc. Metody stosowania polinukleotydów kodujących ligand ox40
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
NZ747314A (en) 2016-04-14 2022-07-29 Benitec Ip Holdings Inc Reagents for treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (opmd) and use thereof
EP3528827A4 (en) 2016-10-21 2020-11-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Influenza hemagglutinin protein vaccines
JP7285220B2 (ja) 2017-05-18 2023-06-01 モデルナティエックス インコーポレイテッド 連結したインターロイキン－１２（ｉｌ１２）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子
EP3638292A1 (en) 2017-06-14 2020-04-22 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding coagulation factor viii
US20200208152A1 (en) 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
WO2019048632A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited STABILIZED COMPOSITIONS OF SMALL ACTIVATORY RNA (PARNA) OF HNF4A AND METHODS OF USE
ES3062820T3 (en) 2017-11-08 2026-04-14 L E A F Holdings Group Llc Platinum complexes and uses thereof
BR112020015308A8 (pt) 2018-01-29 2023-02-07 Merck Sharp & Dohme Proteínas f de rsv estabilizadas e usos das mesmas
WO2019157129A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated pralatrexate and uses thereof
US12310966B2 (en) 2018-02-07 2025-05-27 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated aminopterin and uses thereof
WO2019157145A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated pemetrexed and uses thereof
EP3749318A4 (en) 2018-02-07 2022-07-06 L.E.A.F Holdings Group LLC GAMMA-POLYGLUTAMATED RALTITREXED AND ITS USES
JP7491572B2 (ja) 2018-02-07 2024-05-28 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー アルファポリグルタミン酸化ペメトレキセドおよびその使用
CA3090389A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated raltitrexed and uses thereof
EP3749314A4 (en) 2018-02-07 2022-02-23 L.E.A.F Holdings Group LLC ALPHA-POLYGLUTAMATE METHOTREXATE AND ITS USES
WO2019160734A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated lometrexol and uses thereof
CA3090753A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated pralatrexate and uses thereof
JP7462950B2 (ja) 2018-02-14 2024-04-08 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー ガンマポリグルタミン酸化メトトレキセートおよびその使用
US12350271B2 (en) 2018-02-14 2025-07-08 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated aminopterin and uses thereof
EP3775211B1 (en) 2018-04-12 2023-04-05 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
JP7355394B2 (ja) 2018-05-03 2023-10-03 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー カロテノイド組成物およびその使用
CA3100050A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Lupagen, Inc. Systems and methods for closed loop, real-time modifications of patient cells
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof
WO2020061295A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
IL281615B2 (en) 2018-09-21 2026-01-01 Acuitas Therapeutics Inc Systems and methods for producing lipid nanoparticles and liposomes
CA3116576A1 (en) 2018-10-18 2020-04-23 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
BR112021009422A2 (pt) 2018-12-21 2021-10-26 Curevac Ag Rna para vacinas contra malária
PT3908568T (pt) 2019-01-11 2024-09-30 Acuitas Therapeutics Inc Lípidos para a administração de agentes ativos por nanopartículas lipídicas
US20220133908A1 (en) 2019-02-08 2022-05-05 Curevac Ag Coding rna administered into the suprachoroidal space in the treatment of ophthalmic diseases
EP3953473A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
EP3986452A1 (en) 2019-06-18 2022-04-27 CureVac AG Rotavirus mrna vaccine
JP7759311B2 (ja) 2019-07-19 2025-10-23 フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ シックス，エルエルシー リコンビナーゼ組成物及び使用方法
US20230000997A1 (en) 2019-08-06 2023-01-05 L.E.A.F. Holdings Group Llc Processes of preparing polyglutamated antifolates and uses of their compositions
CN114502204A (zh) 2019-08-14 2022-05-13 库尔维科公司 具有降低的免疫刺激性质的rna组合和组合物
CN114729376A (zh) 2019-09-23 2022-07-08 欧米茄治疗公司 用于调节肝细胞核因子4α(HNF4α)基因表达的组合物和方法
EP4048807A1 (en) 2019-09-23 2022-08-31 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression
KR20220144416A (ko) 2020-02-04 2022-10-26 큐어백 아게 코로나바이러스 백신
JP2023516904A (ja) 2020-02-14 2023-04-21 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー Ｈｐｖワクチン
CA3173528A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
JP2023520763A (ja) 2020-03-24 2023-05-19 ジェネレーション バイオ カンパニー ゴーシェ治療薬を発現するための非ウイルス性ｄｎａベクター及びその使用
US20230138409A1 (en) 2020-03-24 2023-05-04 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing factor ix therapeutics
IL298362A (en) 2020-05-20 2023-01-01 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Coronavirus antigen compositions and their uses
EP4153223A1 (en) 2020-05-20 2023-03-29 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Immunogenic compositions and uses thereof
WO2021243301A2 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc. Trem compositions and methods relating thereto
KR20230029685A (ko) 2020-05-29 2023-03-03 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이아이, 엘엘씨 Trem 조성물 및 이에 관련된 방법
CA3170740A1 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Curevac Ag Nucleic acid based combination vaccines
ES3054438T3 (en) 2020-07-16 2026-02-03 Acuitas Therapeutics Inc Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
JP2023535632A (ja) 2020-07-27 2023-08-18 アンジャリウム バイオサイエンシズ エージー Ｄｎａ分子の組成物、その作製方法、及びその使用方法
WO2022023559A1 (en) 2020-07-31 2022-02-03 Curevac Ag Nucleic acid encoded antibody mixtures
MA71659A (fr) 2020-08-06 2025-05-30 Modernatx, Inc. Compositions pour l'administration de molécules de charge utile à l'épithélium des voies respiratoires
EP4157344A2 (en) 2020-08-31 2023-04-05 CureVac SE Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
AU2021336976A1 (en) 2020-09-03 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and uses thereof
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
US20240132628A1 (en) * 2020-12-15 2024-04-25 Neubase Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogue therapeutics for treatment of neuromuscular disease
US11918643B2 (en) 2020-12-22 2024-03-05 CureVac SE RNA vaccine against SARS-CoV-2 variants
CA3171051A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Pharmaceutical composition comprising lipid-based carriers encapsulating rna for multidose administration
IL303886A (en) 2020-12-23 2023-08-01 Flagship Pioneering Inc Compositions of modified trems and uses thereof
US20240102065A1 (en) 2021-01-27 2024-03-28 CureVac SE Method of reducing the immunostimulatory properties of in vitro transcribed rna
TW202245835A (zh) 2021-02-04 2022-12-01 美商默沙東有限責任公司 用於肺炎球菌結合物疫苗之奈米乳化液佐劑組合物
TW202305133A (zh) 2021-03-26 2023-02-01 英商米納治療有限公司 Tmem173 sarna組合物及其使用方法
CA3212653A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions
EP4313109A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer
CA3171429A1 (en) 2021-03-31 2022-09-30 Alexander SCHWENGER Syringes containing pharmaceutical compositions comprising rna
JP2024517427A (ja) 2021-04-20 2024-04-22 アンジャリウム バイオサイエンシズ エージー アミロ－α－１，６－グルコシダーゼ、４－α－グルカノトランスフェラーゼをコードするＤＮＡ分子の組成物、その作製の方法、及びその使用の方法
US20240216535A1 (en) 2021-04-27 2024-07-04 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
EP4334446A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 CureVac SE Improved nucleic acid sequence for cell type specific expression
EP4352215A1 (en) 2021-06-11 2024-04-17 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna polymerase iii promoters and methods of use
EP4367242A2 (en) 2021-07-07 2024-05-15 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
EP4377457A1 (en) 2021-07-26 2024-06-05 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Trem compositions and uses thereof
WO2023014974A1 (en) 2021-08-06 2023-02-09 University Of Iowa Research Foundation Double stranded mrna vaccines
JP2024532127A (ja) 2021-08-19 2024-09-05 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 熱安定性脂質ナノ粒子およびその使用方法
US20240398933A1 (en) 2021-09-03 2024-12-05 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids comprising phosphatidylserine
US20240398940A1 (en) 2021-09-03 2024-12-05 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
MX2024003262A (es) 2021-09-17 2024-06-19 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Composiciones y metodos para producir poliribonucleotidos circulares.
CA3235625A1 (en) 2021-10-18 2023-04-27 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
EP4422698A1 (en) 2021-10-29 2024-09-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
TW202334080A (zh) 2021-11-08 2023-09-01 美商歐納醫療公司 用於遞送環狀聚核苷酸之脂質奈米粒子組合物
CN118829423A (zh) 2021-11-12 2024-10-22 摩登纳特斯有限公司 用于将有效载荷分子递送至气道上皮的组合物
EP4436984A1 (en) 2021-11-24 2024-10-02 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Coronavirus immunogen compositions and their uses
CN118401544A (zh) 2021-11-24 2024-07-26 旗舰创业创新六公司 水痘-带状疱疹病毒免疫原组合物及其用途
IL312965A (en) 2021-11-24 2024-07-01 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Immunogenic compositions and their uses
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CA3242402A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
KR20240118174A (ko) 2021-12-17 2024-08-02 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이아이, 엘엘씨 변성 조건 하에서의 원형 rna의 풍부화를 위한 방법
EP4453201A1 (en) 2021-12-22 2024-10-30 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
KR20240118881A (ko) 2021-12-23 2024-08-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이아이, 엘엘씨 항푸소제닉 폴리펩티드를 인코딩하는 원형 폴리리보뉴클레오티드
JP2025504404A (ja) 2022-01-14 2025-02-12 アンジャリウム バイオサイエンシズ エージー Ｖｉｉｉ因子をコードするｄｎａ分子の組成物、それを作製する方法、及びその使用方法
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
EP4475882A1 (en) 2022-02-09 2024-12-18 ModernaTX, Inc. Mucosal administration methods and formulations
US20250327041A1 (en) 2022-02-24 2025-10-23 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
CN119072330A (zh) 2022-03-14 2024-12-03 世代生物公司 异源初免加强疫苗组合物和使用方法
KR20240166554A (ko) 2022-03-25 2024-11-26 세일 바이오메디슨스, 인크. 신규한 이온화 가능 지질 및 지질 나노입자, 및 이를 사용하는 방법
WO2023196634A2 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Vaccines and related methods
CA3257006A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc TREM COMPOSITIONS AND METHODS OF USE FOR TREATING PROLIFERATIVE DISORDERS
TW202409283A (zh) 2022-05-13 2024-03-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 雙股ｄｎａ組合物及相關方法
US20250345407A1 (en) 2022-05-25 2025-11-13 CureVac SE Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
EP4536197A1 (en) 2022-06-07 2025-04-16 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
US20250179492A1 (en) 2022-06-22 2025-06-05 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions of modified trems and uses thereof
EP4565604A2 (en) 2022-08-01 2025-06-11 Flagship Pioneering Innovations VII, LLC Immunomodulatory proteins and related methods
WO2024035952A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Remix Therapeutics Inc. Methods and compositions for modulating splicing at alternative splice sites
EP4569093A1 (en) 2022-08-12 2025-06-18 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
US20260055426A1 (en) 2022-08-19 2026-02-26 Generation Bio Co. CLEAVABLE CLOSED-ENDED DNA (ceDNA) AND METHODS OF USE THEREOF
US20260060926A1 (en) 2022-08-31 2026-03-05 Sail Biomedicines, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
EP4342460A1 (en) 2022-09-21 2024-03-27 NovoArc GmbH Lipid nanoparticle with nucleic acid cargo
AU2023353931A1 (en) 2022-09-26 2025-03-20 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
US20240174732A1 (en) 2022-10-05 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
EP4612296A1 (en) 2022-10-31 2025-09-10 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
WO2024102730A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
TW202434728A (zh) 2022-11-08 2024-09-01 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 用於產生環狀多核糖核苷酸的組成物和方法
WO2024102677A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2024102762A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
WO2024119074A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Generation Bio Co. Stealth lipid nanoparticle compositions for cell targeting
AU2023406303A1 (en) 2022-12-01 2025-05-29 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids, ionizable lipids, sterols, lipid anchored polymers and helper lipids, their uses
EP4626400A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 Generation Bio Co. Novel polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same
WO2024119103A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers
EP4630057A1 (en) 2022-12-08 2025-10-15 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2024125597A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Providence Therapeutics Holdings Inc. Compositions and methods for infectious diseases
TW202430215A (zh) 2022-12-14 2024-08-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 用於將治療劑遞送至骨之組成物和方法
WO2024134199A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Mina Therapeutics Limited Chemically modified sarna compositions and methods of use
WO2024151673A2 (en) 2023-01-09 2024-07-18 President And Fellows Of Harvard College Recombinant nucleic acid molecules and their use in wound healing
WO2024151687A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
WO2024151583A2 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Vaccines and related methods
US20240252520A1 (en) 2023-01-09 2024-08-01 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Therapeutic agents and their use for treating chronic wounds
WO2024160936A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Rna formulation
WO2024167885A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory compositions and related methods
CN121263425A (zh) 2023-02-13 2026-01-02 旗舰创业创新第七有限责任公司 含可裂解接头的可电离脂质和用于治疗性组合物的脂质载体
GB202302092D0 (en) 2023-02-14 2023-03-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Analytical method
EP4665405A1 (en) 2023-02-17 2025-12-24 Flagship Pioneering Innovations VII, LLC Dna compositions comprising modified uracil
IL322378A (en) 2023-02-17 2025-09-01 Flagship Pioneering Innovations Vii Llc DNA compositions containing modified cytosine
WO2024184500A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 CureVac SE Novel lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
EP4680750A1 (en) 2023-03-15 2026-01-21 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Compositions comprising polyribonucleotides and uses thereof
CN121358494A (zh) 2023-03-15 2026-01-16 旗舰创业创新第六有限责任公司 免疫原性组合物及其用途
WO2024205657A2 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
EP4695393A1 (en) 2023-04-12 2026-02-18 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Modified trems, compositions, and related methods thereof
EP4695391A1 (en) 2023-04-12 2026-02-18 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Trems for use in correction of missense mutations
WO2024220746A2 (en) 2023-04-21 2024-10-24 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Rnai agents targeting fatty acid synthase and related methods
WO2024223724A1 (en) 2023-04-27 2024-10-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
AU2024260120A1 (en) 2023-04-27 2025-11-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
EP4705481A2 (en) 2023-05-05 2026-03-11 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
KR20260008117A (ko) 2023-05-08 2026-01-15 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 노로바이러스 vp1 항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 그의 용도
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
EP4716741A2 (en) 2023-05-23 2026-04-01 Flagship Labs 114, Inc. Compositions and methods for reducing cxcl9, cxcl10, and cxcl11 gene expression
AU2024279278A1 (en) 2023-05-31 2025-12-18 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
TW202513091A (zh) 2023-06-09 2025-04-01 美商默沙東有限責任公司 用於人類乳突病毒疫苗之奈米乳液佐劑組合物
WO2024258829A1 (en) 2023-06-12 2024-12-19 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Sars-cov-2 vaccine compositions and related methods
WO2025006799A1 (en) 2023-06-27 2025-01-02 Capstan Therapeutics, Inc. Extracorporeal and ex vivo engineering of select cell populations from peripheral blood
WO2025006684A1 (en) 2023-06-28 2025-01-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Circular polyribonucleotides encoding antifusogenic polypeptides
WO2025011529A2 (en) 2023-07-07 2025-01-16 Shanghai Circode Biomed Co., Ltd. Circular rna vaccines for seasonal flu and methods of uses
KR20260044217A (ko) 2023-07-25 2026-04-01 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨 Cas 엔도뉴클레아제 및 관련 방법
WO2025022367A2 (en) 2023-07-27 2025-01-30 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2025042786A1 (en) 2023-08-18 2025-02-27 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions comprising circular polyribonucleotides and uses thereof
WO2025045142A1 (en) 2023-08-29 2025-03-06 Shanghai Circode Biomed Co., Ltd. Circular rna encoding vegf polypeptides, formulations, and methods of uses
WO2025049690A1 (en) 2023-08-29 2025-03-06 Orna Therapeutics, Inc. Circular polyethylene glycol lipids
IL326647A (en) 2023-09-01 2026-04-01 Novoarc Gmbh Lipid nanoparticles with a nucleic acid charge and an ionizable lipid
EP4520345A1 (en) 2023-09-06 2025-03-12 Myneo Nv Product
WO2025054236A2 (en) 2023-09-06 2025-03-13 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Sars-cov-2 vaccine compositions and related methods
WO2025052180A2 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2025064475A2 (en) 2023-09-18 2025-03-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Ionizable lipidoid compositions and therapeutic uses thereof
WO2025072331A1 (en) 2023-09-26 2025-04-03 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Cas nucleases and related methods
WO2025083619A1 (en) 2023-10-18 2025-04-24 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and acive fragments and variants thereof and methods of use
WO2025096807A2 (en) 2023-10-31 2025-05-08 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Novel therapeutic dna forms
WO2025101501A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2025106670A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Ionizable lipidoid compositions and therapeutic uses thereof
US20250161347A1 (en) 2023-11-22 2025-05-22 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Methods and compositions for treating non-alcoholic fatty liver disease
US12364773B2 (en) 2023-12-01 2025-07-22 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
US12553042B2 (en) 2023-12-01 2026-02-17 Recode Therapeutics, Inc. Method for quantifying an amount of capped messenger RNA
WO2025117877A2 (en) 2023-12-01 2025-06-05 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Cas nucleases and related methods
WO2025132839A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
WO2025137646A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Recode Therapeutics, Inc. Gene editing methods and compositions for treating cystic fibrosis
TW202545974A (zh) 2024-01-26 2025-12-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 免疫受體抑制蛋白及相關方法
WO2025174908A1 (en) 2024-02-12 2025-08-21 Life Edit Therapeutics, Inc. Novel rna-guided nucleases and proteins for polymerase editing
WO2025194138A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Tessera Therapeutics, Inc. St1cas9 compositions and methods for modulating a genome
WO2025194019A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Methods for treating liver fibrosis and non-alcoholic fatty liver disease
GB202404607D0 (en) 2024-03-29 2024-05-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa RNA formulation
WO2025217275A2 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immune cell targeted compositions and related methods
US20250353881A1 (en) 2024-05-16 2025-11-20 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunoreceptor inhibitory proteins and related methods
WO2025245188A2 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Methods of treating liver steatosis and non-alcoholic fatty liver disease
WO2025245111A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunoreceptor targeting proteins and related methods
WO2025259931A1 (en) 2024-06-14 2025-12-18 Orbital Therapeutics, Inc. Compositions and methods for rna circularization
WO2026006203A2 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Orbital Therapeutics, Inc. Compositions and methods for making circular rna
WO2026003754A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Life Edit Therapeutics, Inc. Novel reverse transcriptases and uses thereof
US20260000702A1 (en) 2024-06-26 2026-01-01 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Therapeutic circular dna forms
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026027887A2 (en) 2024-08-02 2026-02-05 Mina Therapeutics Limited Hbg1/2-sarna compositions and methods of use
WO2026055543A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Modified dna compositions and related methods
WO2026055547A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Dna compositions and related methods
WO2026064313A1 (en) 2024-09-17 2026-03-26 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Rna compositions and related methods
WO2026064512A1 (en) 2024-09-18 2026-03-26 Generation Bio Co. Polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same
WO2026085300A1 (en) 2024-10-16 2026-04-23 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Compositions and methods
WO2026085495A1 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Generation Bio Co. Synthetic partially single-stranded nucleic acid compositions and uses and methods therefor

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19521412A1 (de) * 1995-06-14 1996-12-19 Boehringer Mannheim Gmbh Neue kationische und polykationische Amphiphile, diese enthaltende Reagenzien und deren Verwendung
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
US7404969B2 (en) 2005-02-14 2008-07-29 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
WO2007086881A2 (en) * 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
WO2009086558A1 (en) 2008-01-02 2009-07-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
US20090285881A1 (en) 2008-04-16 2009-11-19 Abbott Laboratories Cationic lipids and uses thereof
US20090263407A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic Lipids and Uses Thereof
WO2009132131A1 (en) 2008-04-22 2009-10-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Amino lipid based improved lipid formulation
WO2010021865A1 (en) 2008-08-18 2010-02-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids
CA2740000C (en) 2008-10-09 2017-12-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
US8722082B2 (en) 2008-11-10 2014-05-13 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipids and compositions for the delivery of therapeutics
CN111808084A (zh) 2008-11-10 2020-10-23 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的新型脂质和组合物

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