ES2580136T3 - Biomarcador novedoso y usos del mismo en el diagnóstico, tratamiento de autismo - Google Patents

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Abstract

Un péptido que tiene la secuencia aminoacídica NH2-SSKITHRIHWESASLLR*-COOH (SEQ ID NO: 1), en el que el residuo C-terminal representado con R* tiene una cadena lateral como se representa en la Fórmula (I):**Fórmula**

Description

imagen1
esclerosis múltiple, esquizofrenia, depresión y trastorno bipolar. Aún un objeto adicional de la invención es proporcionar un tratamiento para el autismo que modifique la enfermedad y no sea meramente sintomático.
Sumario de la invención
En un primer aspecto, la invención proporciona un péptido que tiene la secuencia aminoacídica NH2-SSKITHRIHWESASLLR*-COOH (SEQ ID NO: 1), en el que el residuo C-terminal representado con R* tiene una cadena lateral como se representa en la Fórmula (I):
imagen2
10
En un segundo aspecto, se proporciona un método para análisis, que comprende la etapa de determinar la presencia, ausencia y/o concentración de un péptido de acuerdo con el primer aspecto en una muestra. La muestra es preferiblemente una muestra biológica. Más preferiblemente, la muestra biológica se selecciona entre el grupo
15 que consiste en: una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de plasma heparinizado, una muestra de plasma EDTA, una muestra de suero, una muestra de orina, una muestra de saliva, una muestra de lagrima, una muestra de líquido cefalorraquídeo, una muestra de ascitis, una muestra de tejido y una biopsia. Mucho más preferiblemente, la muestra biológica es una muestra de plasma heparinizado.
20 La determinación de la presencia, ausencia y/o concentración del péptido puede realizarse por medio de un método basado en espectrometría de masas, tales como MALDI-TOF, SELDI-TOF, LC-MS o LC-MS/MS; o por medio de un ensayo inmunoquímico, tales como ELISA, RIA, FIA o DELFIA.
En un tercer aspecto, la invención proporciona un anticuerpo específico para un péptido de acuerdo con el primer 25 aspecto. El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal.
En un cuarto aspecto, se proporciona un paquete de producto para su uso en diagnóstico, que comprende un péptido de acuerdo con el primer aspecto y/o un anticuerpo de acuerdo con el tercer aspecto. El paquete de producto puede comprender adicionalmente uno o más de: inhibidores de proteasa; instrucciones para determinar la
30 concentración del péptido del primer aspecto; un péptido de la SEQ ID NO: 2; un péptido de la SEQ ID NO: 3; un anticuerpo específico para la SEQ ID NO: 2; un anticuerpo específico para la SEQ ID NO: 3.
En un quinto aspecto, se proporciona un método de diagnóstico para un trastorno neurológico o neuropsiquiátrico, que comprende las etapas de:
35 -proporcionar u obtener una muestra del sujeto a diagnosticar; -determinar la concentración de un péptido del primer aspecto en dicha muestra; y -comparar dicha concentración con un valor de referencia basado en la concentración del péptido del primer aspecto en una muestra similar de un sujeto de control sano;
40 en el que una concentración inferior a la del valor de referencia en la muestra es indicativa de la presencia de un trastorno neurológico o neuropsiquiátrico.
El método del quinto aspecto puede comprender adicionalmente las etapas de 45 -determinar la concentración de un péptido con la secuencia:
SSKITHRIHWESASLLR (SEQ ID NO: 3) y/o SSKITHRIHWESASLL (SEQ ID NO: 2) en dicha muestra; t 50 -comparar dicha concentración con un valor de referencia basado en la concentración del mismo péptido o
3
imagen3
imagen4
actividad del factor I para cada individuo. Se muestran muestras de niños con TEA que no estaban con medicación en el momento de la investigación, los que estaban con medicación de Risperdal, Ritalín, una combinación de los mismos, u otros medicamentos, tales como antipsicóticos (tioridazina) o anticonvulsivos (fenobarbital y valproato sódico). (b) Se muestran los valores medios y errores estándar de la actividad del
5 factor de complemento en plasma EDTA para los diferentes grupos de edad y géneros tanto para niños con TEA como el grupo de control sano. En el grupo TEA; edad ≤ 5 años: varones (n = 17), chicas (n = 4) y edad > 5 años: varones (n = 6), chicas (n = 3). En el grupo de control sano; edad ≤ 5 años: varones (n = 4), chicas (n = 10) y edad > 5 años: varones (n = 9), chicas (n = 7).
10 Definiciones
Los términos autismo y trastorno del espectro autista (TEA) tienen el mismo significado en el contexto de la presente invención y se refieren a un diagnóstico de autismo de acuerdo con los criterios del DSM-IV (Manual de diagnóstico y estadístico de los trastornos mentales de la Asociación Americana de Psiquiatría).
15 El término sensibilidad en el contexto de la presente invención se refiere a la proporción de sujetos positivos reales que se identifican correctamente como tales (por ejemplo, el porcentaje de sujetos autistas identificados correctamente como que tienen la afección).
20 El término especificidad en el contexto de la presente invención se refiere a la proporción de sujetos negativos reales que se identifican correctamente como tales (por ejemplo, el porcentaje de sujetos sanos identificados correctamente como que no tienen autismo).
En el presente documento, en ocasiones los biomarcadores se identifican usando su peso molecular aproximado
25 observado como nombre. La tabla II muestra las relaciones entre el peso/nombre molecular observado, la secuencia y la SEQ ID NO.
Descripción detallada de la invención
30 Biomarcador peptídico modificado novedoso
En un primer aspecto, la presente invención desvela un péptido modificado que tiene la secuencia aminoacídica NH2-SSKITHRIHWESASLLR*-COOH (SEQ ID NO: 1), en el que la cadena lateral del residuo C-terminal representado con R* carece del resto NH2-C=NH normalmente presente en una arginina, por lo que el cadena lateral
35 del residuo R* tiene la estructura como se representa en la Fórmula (I):
imagen5
Para una ilustración adicional de la naturaleza de la modificación de la cadena lateral, se hace referencia a la figura
40 1. Un aminoácido con la cadena lateral de fórmula (I) se conoce como ornitina, pero no ocurre normalmente en polipéptidos.
Métodos de análisis
45 En un segundo aspecto, la presente invención desvela un método para analizar la presencia, ausencia y/o concentración del péptido del primer aspecto, preferiblemente en una muestra biológica. El análisis puede realizarse por medios conocidos en la técnica adecuados para dichos análisis, tales como métodos basados en espectrometría de masas (incluyendo MALDI-TOF, SELDI-TOF, LC-MS, LC-MS/MS y similares) o métodos inmunoquímicos conocidos adecuados (incluyendo ELISA, RIA, DELFIA, y similares). También es posible combinar métodos
6
imagen6
ilustración). Los niveles deseables de sensibilidad y especificidad variarán dependiendo de la disposición: por ejemplo, en un procedimiento de cribado que ensaya con sujetos sin sospecha previa de un trastorno es necesaria una especificidad muy alta para evitar un gran número de falsos positivos; al ensayar con sujetos ya sospechosos de padecer un trastorno, puede priorizarse en su lugar una alta sensibilidad y aceptarse una baja especificidad. La concentración o concentraciones determinadas del marcador o marcadores también son propensas a variar dependiendo de las características del método analítico particular usado para ensayar las concentraciones, así como el tipo de muestra y manipulación de la muestra. Todas estas consideraciones se conocen bien por el experto. Asimismo, las soluciones a los problemas que se han presentado anteriormente (por ejemplo, determinar los valores de corte) están dentro del alcance del experto combinando las enseñanzas en el presente documento con una simple experimentación y optimización de rutina.
Una herramienta estadística útil en la determinación de los valores de corte se conoce como curva de características operativas del receptor (ROC), que puede construirse como se indica a continuación. Clasificar todos los sujetos (pacientes más controles) después del parámetro medido. Partir de la parte superior de la tabla y calcular, sucesivamente para cada nuevo valor medico, la sensibilidad y la especificidad de 100 para todos los sujetos (sensibilidad = posP/aIIP, donde posP es el número de pacientes (pacientes se refiere a los sujetos con la enfermedad) que se clasificarán como poseedores de la enfermedad este valor medido y la especificidad es negC/allC, donde negC se refiere a los controles que no están clasificados como poseedores de la enfermedad). Representar estos valores en un diagrama x-y donde "especificidad 100 es x" y sensibilidad es y, dando como resultado una curva ROC.
Los cortes se ajustan siempre a la situación real, incluyendo la prevalencia de la enfermedad y especialmente el grado de gravedad de la enfermedad, pero los programas estadísticos (que no saben nada sobre la situación clínica) normalmente calculan los cortes minimizando la distancia de la esquina izquierda superior de la curva ROC, es decir, minimizando ((sensibilidad 100)^2 + (especificidad 100)^2), donde ^ significa cuadrado (teorema de Pitágoras). Los valores del "Criterio" (que se refiere al corte), sensibilidad y selectividad mostrados en las figuras 5-8 se obtuvieron usando este método.
En cuanto a combinaciones de biomarcadores, es importante aclarar que en realidad son independientes en el sentido de que contribuyen a la discriminación de pacientes y controles (por lo menos hasta cierto punto -lo que quiere decir, por ejemplo, que un pico, aunque esté acoplado a otro pico, tiene algo extra para contribuir al poder discriminatorio). Pueden usarse varios métodos estadísticos conocidos, por ejemplo, análisis discriminantes o regresión logística. Para más adicionales, el lector experto se remite al manual del software MedCalc® (MedCalc Software, Mariakerke, Bélgica) disponible en línea en: http://www.medcalc.org/manual/index.php.
Considerando lo anterior, se realizó un análisis ejemplar (Ejemplo 5). El análisis mostró que el marcador 1978 novedoso (SEQ ID NO: 1) tenía claramente un potencial considerable en la diferenciación de sujetos con y sin autismo que tenía poder discriminatorio a la par con los marcadores conocidos 2021 (SEQ ID NO: 3) y 1865 (SEQ ID NO: 2) (Tabla III, figuras 3, 5 y 6). Para probar la hipótesis de que la combinación del marcador 1978 novedoso con uno o ambos marcadores conocidos 1865 y 2021 se traducirá en un mejor método de diagnóstico, también se idearon curvas ROC (después de un análisis discriminante) para la combinación de 1978 con 2021 (figura 7) y la combinación de 1865, 1978 y 2021 (figura 8). Resulta evidente a partir de la comparación de la curva ROC de la figura 7 con las curvas de la figura 5 y la figura 6 que la combinación del marcador 1978 novedoso con el marcador 2021 conocido produce mejores resultados que cualquier marcador en aislamiento. La adición del segundo marcador conocido 1865 al análisis da aún mejores resultados (figura 8 en comparación con la figura 7).
Preferiblemente, la enfermedad neurológica o neuropsiquiátrica a diagnosticar se selecciona entre autismo, síndrome de Asperger, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, esquizofrenia, depresión y trastorno bipolar. Mucho más preferiblemente, la enfermedad neurológica o neuropsiquiátrica a diagnosticar es autismo.
En un séptimo aspecto, se proporciona un método de diagnóstico para el autismo, que comprende las etapas de:
a.
proporcionar u obtener una muestra del sujeto a diagnosticar;
b.
determinar el nivel de actividad del factor de complemento I en dicha muestra; y
c.
comparar dicha actividad con un valor de referencia basado en el nivel de actividad del factor de complemento I en una muestra similar de un sujeto de control sano;
en el que una actividad mayor que el valor de referencia en una muestra es indicativa de la presencia de autismo en
8
imagen7
imagen8
2. Muestreo
Se extrajo sangre venosa en tubos de heparina de 3 ml (Sistema Vacutainer; Becton-Dickinson Inc., Plymouth,
5 Reino Unido) y el plasma se separó inmediatamente por centrifugación en 1300 g durante 10 min a 4 ºC. Posteriormente, a la muestra de plasma producida se le añadió un cóctel de inhibidor libre de EDTA (Halt protease inhibitor de Thermo Scientific, Estados Unidos) (10 µl/ml de plasma) y 20 µl/ml más de Pefablock SC (Pentapharm Ltd, Suiza). El plasma producido estaba en alícuotas en pequeñas porciones, inmediatamente se congeló en hielo seco, y posteriormente se transportó a (-80 ºC) para un almacenamiento adicional. Todo el procedimiento desde la
10 extracción de sangre hasta la congelación se completó en 20 minutos.
3. Análisis espectrométrico de masas (SELDI-TOF)
Se prepararon superficies de matrices de chip de proteína CM10 de acuerdo con el protocolo estándar de BioRad.
15 Las matrices de chip de proteína CM10 (que tienen el grupo funcional COOH) con 8 puntos se equilibraron mediante 100 µl de tampón (acetato de Na 0,1 M de baja astringencia, pH 4) durante 5 min y se repitió una vez. Se usó tampón fosfato Na (25 mM, pH-7,0) para preparar diluciones de plasma (dilución 1:50). El plasma diluido se aplicó en el pocillo bioprocesador. La matriz de chip se incubó durante 45 min con agitación vigorosa. Después de la incubación, las muestras se lavaron tres veces con 150 µl de tampón fosfato Na 25 mM pH-7 (igual que el tampón
20 de dilución) seguido de dos aclarados rápidos con 150 µl de HEPES 1 mM (ácido N-2-hidroxietilpiperazin-N'-2etanosulfónico), pH 7. La matriz de chip se eliminó del bioprocesador y se secó al aire. Más tarde, se añadieron 0,8 µl de CHCA saturado (25 mg/ml) a cada punto y se dejó secar al aire, y esta etapa se repitió 1 vez más. Posteriormente, las matrices de chip se leyeron por un lector económico de proteínas BioRad Edición personal del sistema SELDI (lector PCS 4000). Antes de leer las matrices de chip, se hizo una calibración externa usando el
25 "estándar peptídico todo en uno" Biorad que es una mezcla de 7 péptidos diferentes que varían de aproximadamente 1000-7000 Da.
En el estudio, se analizaron muestras de 22 controles y 25 pacientes por SELDI-TOF como se ha especificado anteriormente. Los datos medidos se normalizaron por logaritmos naturales (Tabla I, figura 3).
30 Se detectaron varios péptidos expresados diferencialmente tales como los que tenían pesos moleculares observados de 1865, 1978 y 2021 en los espectros de niños de control sanos y el grupo TEA. Los espectros SELDI-TOF representativos de 8 sujetos (4 pacientes diferentes y 4 controles diferentes) se muestran en la figura 2.
35 Tabla I: Intensidades máximas normalizadas (logaritmo natural) para marcadores que tienen pesos moleculares (PM) de aproximadamente 1865, 1978 y 2021, respectivamente
Grupo
ID 1865 1978 2021
Controles
c1 2,451 5,237 4,61
Controles
c10 2,397 5,146 5,06
Controles
c11 3,231 3,972 5,19
Controles
c12 3,33 3,963 5,136
Controles
c13 3,436 5,154 4,256
Controles
c17 3,426 5,781 3,847
Controles
C18 3,415 5,046 5,206
Controles
c2 3,827 4,28 4,592
Controles
c20 3,633 5,287 5,308
Controles
c21 3,105 4,689 4,733
Controles
c22 2,819 4,782 4,355
Controles
c23 5,327 6,463 6,723
Controles
c24 2,549 5,526 4,516
Controles
c25 3,476 5,307 4,292
Controles
c26 3,543 4,542 4,207
Controles
c28 3,041 5,766 4,708
Controles
c29 2,801 4,116 4,52
Controles
c3 2,734 4,464 5,199
Controles
c31 2,978 3,653 4,454
Controles
c33 2,567 5,514 4,739
Controles
c4 3,908 4,742 5,003
11
Grupo
ID 1865 1978 2021
Controles
c6 3,519 4,917 4,976
Controles
c7 2,361 3,925 5,039
Controles
c8 2,508 3,112 5,038
Controles
c9 2,628 4,078 4,358
Pacientes
d10 4,253 4,504 6,548
Pacientes
d11 3,534 5,209 7,229
Pacientes
d13 6,522 4,731 5,353
Pacientes
d14 5,462 4,483 6,577
Pacientes
d15 3,427 4,244 5,13
Pacientes
d17 3,934 4,358 5,135
Pacientes
d19 3,811 3,522 5,055
Pacientes
d20 1,937 3,214 5,328
Pacientes
d21 3,616 3,517 6,03
Pacientes
d22 3,623 3,883 5,791
Pacientes
d25 3,229 3,064 6,077
Pacientes
d26 3,497 3,467 4,5
Pacientes
d27 3,288 4,105 5,311
Pacientes
d28 2,662 3,312 5,547
Pacientes
D3 5,297 5,76 6,936
Pacientes
d30 3,379 6,022 4,273
Pacientes
d4 3,311 4,072 4,987
Pacientes
D5 3:745 4,116 5,153
Pacientes
D6 4,652 4,146 4,651
Pacientes
d7 5,667 4,016 6,23
Pacientes
d8 3,528 3,448 6,404
Pacientes
d9 3,559 3,362 5,15
4. Determinación de estructuras de biomarcadores expresados diferencialmente
La estructura de los biomarcadores expresados diferencialmente en el Ejemplo 3 se determinaron usando MALDI
5 TOFTOF MS y se confirmaron por la información LC-FTICR MS/MS. Se identificaron y se secuenciaron los péptidos de interés (aquellos que se identificaron por SELDI-TOF y diferían significativamente entre el grupo de control y de autismo).
Se diluyeron 100 µl de muestras de plasma con 300 µl de tampón (tampón fosfato Na 25 mM, pH 7,0) y 100 µl de
10 acetonitrilo (AcN) y se mezclaron bien, posteriormente, se realizó una ultrafiltración mediante el uso de una membrana Microcon de corte de 10 kDa (Millipore Bedford, MA, Estados Unidos). El ultrafiltrado se secó en una centrífuga Speed vac, posteriormente, se reconstituyó en 10 µl de tampón (fosfato Na 25 mM, pH 7,0), y se desaló en una columna ZipTip® C18 (Millipore, Bedford, MA, Estados Unidos). Se aplicaron 5 µl de la muestra reconstituida en la diana CM-10 SELDI-TOF preparada (Biorad, Estados Unidos), se incubó, se lavó y se secó.
15 Se añadieron 1,0 µl de CHCA de matriz saturada (25 mg/ml) a los puntos de muestra y se dejó secar al aire, y esta etapa se repitió 1 vez más.
El instrumento MALDI-TOF-MS usado para la verificación de los péptidos fue un Ultraflex II TOF/TOF (Bruker
20 Daltonik GmbH, Bremen, Alemania). El instrumento se equipó con un láser SmartBeam™. Todos los espectros se adquirieron usando el modo reflectrón. Para adquirir los espectros MS/MS, se realizó TOF/TOF con decaimiento post-fuente (PSD) por disociación inducida por láser.
La diana de elección para el enfoque MALDI fue la diana SELDI-TOF (BioRad, Estados Unidos). La matriz/puntos de
25 muestra preparados en la diana SELDI-TOF se introdujeron en el Ultraflex II y los espectros MS se registraron del punto de muestra preparado. La calibración usada fue una calibración de vecinos cercanos externa. Las muestras usadas para la calibración eran una mezcla de péptidos que incluían el intervalo de masa de 1000 a 5000 Da. A partir de las masas peptídicas adquiridas (datos TOF MS), el péptido candidato se seleccionó manualmente para experimentos/secuenciación posterior. Los espectros se anotaron con software de procesamiento de datos
30 (FlexAnalysis™) y finalmente se interpretaron por un análisis de secuencias de novo asistido por software
12
imagen9
Tabla III: Análisis estadístico de los datos mostrados en la Tabla II.
Marcador
Media autista Media control valor t df p t separ. var.est. df p bilateral Desv. Est. Pacientes Desv. Est. Controles
2021
5,608718 4,802606 4,05927 45 0,000194 3,96775 36,806 0,000323 0,798449 0,554487
1865
3,906028 3,160416 2,97598 45 0,004686 2,8918 34,333 0,006603 1,043658 0,65134
1978
4,116157 4,778406 -2,89728 45 0,005795 -2,89437 44,059 0,005888 0,788326 0,776276
imagen10
con TEA. Los niños que tuvieron cualquier tipo de enfermedad infecciosa dos semanas antes del momento del examen fueron excluidos de este estudio.
El estudio se aprobó (MT/1247) por el comité de ética de la Iran University of Medical Sciences, Teherán.
6.1.2 Procedimiento 6.1.2.1 Extracción de muestra de sangre
Las muestras se sangre se extrajeron por una enfermera pediátrica, y las de los niños diagnosticados con autismo se recogieron bajo la supervisión de un psiquiatra infantil con preparación especial en el campo de la psicosis infantil. Se extrajo sangre venosa en tubos de EDTA de 3 ml (Sistema Vacutainer; Becton-Dickinson Inc., Plymouth, Reino Unido), y el plasma se separó inmediatamente posteriormente por centrifugación en 1.300 g durante 10 min a 4 ºC. Posteriormente, se añadió un cóctel de inhibidores (30 µl por 1 ml de plasma) a la muestra de plasma resultante (solución de inhibidor en cóctel: Tris 2,0 M, Na-EDTA 0,9 M, Benzamidina 0,2 M, E-64 92 µM, y Pepstatina 48 µM; Sigma, St. Louis, Mich, Estados Unidos). El plasma se almacenó a -80 ºC.
6.1.2.2 Ensayo
Se han descrito previamente métodos basados en la hidrólisis de sustratos fruorógenos por Tsiftoglou y Sim (Journal of Immunology, vol. 173, Nº 1, págs. 367-375, 2004) y Gupta y col. (Journal of Autism and Developmental Disorders, vol. 26, Nº 4, págs. 439-452, 1996). Se descubrió que el siguiente procedimiento de ensayo era óptimo para ensayar la actividad del factor de complemento I (fl) en el plasma. Se incubaron 20 µl de plasma con 80 µl de tampón (tampón fosfato 100 mM, pH 7,5, que contenía EDTA 1 mM, DTT 1 mM y azida sódica 1 mM) durante 10 min a 37 ºC para conseguir equilibrio térmico. Después, se añadieron 100 µl de solución de sustrato (Boc-Asp(OBz)-Pro-Arg-7amino-4-metilcumarina 200 µM; Bachem, Bubendorf, Suiza) en tampón fosfato 25 mM, pH 7,4, y la mezcla se incubó a 37 ºC durante 60 min (véase la figura 9). La reacción se inhibió por la adición de 1 ml de ácido acético 1,5 M, y la liberación de 7-amino-4-metilcumarina se midió por un espectrofluorómetro (Hitachi-f 2000; λex: 360 nm; λem: 440 nm; ancho de ranura: 2,5). Todas las mediciones se realizaron de forma aleatoria y por duplicado. La fluorescencia de fondo en el ensayo se controló por el uso de plasma en ausencia de sustrato y se restó de los valores obtenidos en presencia de sustrato.
6.1.3 Análisis de datos y estadísticas
La actividad fl en plasma se distribuyó normalmente logarítmicamente y, por lo tanto, se usaron valores logarítmicos al analizar las diferencias entre el grupo TEA y el grupo de control. Para el ajuste por edad (dicotomizado usando el valor medio, 5 años) y el género, se usó ANOVA factorial. Un valor <0,05 se consideró estadísticamente significativo. Se usó Statistica 8.0 (StatSoft©, Tulsa, Okla, Estados Unidos). La variabilidad intra e interensayo de la actividad fI en plasma se expresó como el error estándar de una única determinación (Smétodo) usando la fórmula:
 ⎜
 Σ
S
método
imagen11
d
i
2
(2n)
⎞ ⎟⎠
, (1)
donde di es la diferencia entre la medición emparejada de i:ésimo y n es el número de diferencias. El Smétodo se expresó como el coeficiente de variación (%).
6.2 Resultados
Hubo significativamente mayor actividad del fl en plasma en los niños con TEA (media geométrica (límite de confianza al 95 %): 523 (154-1776) cuando se comparó con el grupo de control: 361 (135-967; ANOVA P = 0,015, ajustado por edad y género; figura 10a).
No se encontraron interacciones estadísticamente significativas con respecto al género y la edad, y no se encontró ninguna asociación significativa entre la actividad del fl y la edad o el género (ANOVA; p = 0,25 para el género y 0,42 para los dos grupos de edad, figura 10b). En el grupo TEA, algunos niños con autismo grave se encontraban bajo medicación con Risperdal para reducir la hiperactividad y la conducta violeta, y algunos estaban bajo medicación con Ritalín para mejorar la atención (Tabla V). Hubiera sido éticamente cuestionable suspender la medicación con el
16

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Un péptido que tiene la secuencia aminoacídica NH2-SSKITHRIHWESASLLR*-COOH (SEQ ID NO: 1), en el que el residuo C-terminal representado con R* tiene una cadena lateral como se representa en la Fórmula (I):
  2. 2.
    Un método para análisis, que comprende la etapa de determinar la presencia, ausencia y/o concentración de un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 en una muestra.
    imagen1
    5
    10 3. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la muestra es una muestra biológica seleccionada entre el grupo que consiste en: una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de plasma heparinizado, una muestra de plasma EDTA, una muestra de suero, una muestra de orina, una muestra de saliva, una muestra de lagrima, una muestra de líquido cefalorraquídeo, una muestra de ascitis, una muestra de tejido y una biopsia.
    15
  3. 4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-3, en el que la determinación se realiza por medio de un método basado en espectrometría de masas, tal como MALDI-TOF, SELDI-TOF, LC-MS o LC-MS/MS; o por medio de un ensayo inmunoquímico, tal como ELISA, RIA, FIA o DELFIA.
    20 5. Un anticuerpo específico para un péptido de acuerdo con la reivindicación 1.
  4. 6. Un paquete de producto para su uso en diagnóstico, que comprende un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5.
    25 7. El paquete de producto de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el paquete de producto comprende adicionalmente uno o más de: inhibidores de proteasa; un péptido de la SEQ ID NO: 2; un péptido de la SEQ ID NO: 3; un anticuerpo específico para la SEQ ID NO: 2; un anticuerpo específico para la SEQ ID NO: 3.
  5. 8. Un método para el diagnóstico de un trastorno del espectro autista, que comprende las etapas de: 30
    a.
    proporcionar una muestra del sujeto que se va a diagnosticar;
    b.
    determinar la concentración de un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 en dicha muestra; y
    c.
    comparar dicha concentración con un valor de referencia basado en la concentración del péptido de acuerdo con la reivindicación 1 en una muestra similar de un sujeto de control sano;
    35 en el que una concentración inferior a la del valor de referencia en la muestra es indicativa de la presencia de un trastorno del espectro autista.
  6. 9. El método de la reivindicación 8, que comprende adicionalmente las etapas de 40
    a. determinar la concentración de un péptido con la secuencia:
    SSKITHRIHWESASLLR (SEQ ID NO: 3) y/o SSKITHRIHWESASLL (SEQ ID NO: 2) 45 en dicha muestra; y
    b. comparar dicha concentración con un valor de referencia basado en la concentración del mismo péptido
    o péptidos en una muestra similar de un sujeto de control sano;
    50 en el que una concentración mayor que el valor de referencia en la muestra es indicativa adicionalmente de la presencia de un trastorno del espectro autista.
    19
    imagen2
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