ES2581489T3 - 1,4-dihidropirimidinas 4,4-disustituidas y el uso de las mismas como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis B - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de Fórmula I**Fórmula** incluyendo cualesquiera posibles estereoisómeros o formas tautoméricas del mismo, en donde: B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o más átomos de flúor; Z se selecciona de H o halógeno; o B y Z, junto con los carbonos a los que están unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente está sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, OH y halógeno; R1 se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halógeno y alquilo C1-C3; R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, C≡N, ciclopropilo y CF3; R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo y C≡N; R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H, metilo y halógeno; R6 es alcano C1 -C3-diilo, alqueno C2-C3-diilo, ambos opcionalmente sustituidos con uno o más fluoro; R7 se selecciona del grupo que comprende hidrógeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo, alcoxi C1-C3 y CF3; o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

Description

DESCRIPCION
1,4-dihidropirimidinas 4,4-disustituidas y el uso de las mismas como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis B
Campo tecnico Tftulo
5 1,4-dihidropirimidinas 4,4-disustituidas y el uso de las mismas como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis B
Tecnica de Antecedentes
El virus de la hepatitis B (VHB) es un virus de ADN parcialmente de doble cadena (ADNds), con envoltura, de la familia Hepadnavirus (Hepadnaviridae). Su genoma contiene 4 marcos de lectura solapantes: el gen del pre- 10 nucleo/nucleo; el gen polimerasa; los genes L, M y S que codifican las 3 protemas de la envoltura; y el gen X.
Tras la infeccion, el genoma del ADN parcialmente de doble cadena (aDn circular relajado; ADNrc) se convierte en un ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc) en el nucleo de la celula huesped y los ARNms virales se transcriben. Una vez encapsidado, el ARN pre-genomico (ARNpg), que tambien codifica para la protema del nucleo y Pol, sirve como molde para la transcripcion inversa, que regenera el genoma del ADNds parcialmente ds (ADNrc) 15 en la nucleocapside.
El VHB ha provocado epidemias en partes de Asia y Africa, y es endemico en China. El VHB ha infectado aproximadamente 2 billones de personas en todo el mundo, de las cuales aproximadamente 350 millones de personas han desarrollado infecciones cronicas. El virus provoca la enfermedad hepatitis B y la infeccion cronica se correlaciona con un riesgo fuertemente incrementado de desarrollo de cirrosis y carcinoma hepatocelular.
20 La transmision del virus de la hepatitis B resulta de la exposicion a sangre o fluidos corporales infecciosos, mientras que el ADN viral se ha detectado en la saliva, lagrimas y la orina de portadores cronicos con alta titulacion de ADN en el suero.
Existe una vacuna eficaz y bien tolerada, pero las opciones de tratamiento directo se limitan actualmente a interferon y a los siguientes antivirales; tenofovir, lamivudina, adefovir, entecavir y telbivudina. El interferon es costoso y con 25 frecuencia no se tolera bien, y los nucleosidos han demostrado seleccionar mutantes resistentes.
Los rastreos de farmacos han identificado heteroarildihidropirimidinas (HAPs) como una clase de inhibidores del VHB en los cultivos de tejidos y modelos de animales, eficaces a concentraciones nanomolares (Weber et al., Antiviral Res. 54:69-78). La investigacion adicional ha demostrado que las HAPs fijan como objetivo Cp (Deres et al, Science 299:893-896), haciendo inadecuado el ensamblaje de la capside a concentraciones de farmaco mas altas.
30 Un cierto numero de patentes y solicitudes de patente describen compuestos con actividad inhibidora del VHB, en particular derivados de dihidropirimidina, incluyendo los documentos WO00/058302, WO01/68642 y
WO2010/069147.
Entre los problemas con los que se pueden topar los antivirales directos contra el VHB se encuentran la toxicidad, mutagenicidad, la falta de selectividad, una eficacia deficiente, deficiente biodisponibilidad, racemizacion de centros 35 quirales y la dificultad de la smtesis.
Existe una necesidad de inhibidores del VHB que pueden superar al menos uno de estos inconvenientes.
Descripcion de la linvencion
En un aspecto, la presente invencion proporciona compuestos, que pueden ser representados por la formula I:
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imagen1
incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas de los mismos, en donde:
B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, OH y halogeno;
Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
R2se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, Cen, ciclopropilo y CF3;
R3se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo y CeN;
R4y R5se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H, metilo y halogeno;
R6es alquilo Ci -C3, alquenilo C2-C3, ambos opcionalmente sustituidos con uno o mas fluoro;
R7se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo, alcoxi C1-C3 y CF3;
o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
En una realization,
B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, y halogeno;
Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, Cen, ciclopropilo y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo, y CeN;
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R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo C1 -C3, opcionalmente sustituido con uno o mas fluoro;
y R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo y CF3.
En un grupo particular de compuestos de Formula I de acuerdo con la invencion, B se selecciona del grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en donde el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3;
R1 se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
La invencion se refiere, ademas, a una composition farmaceutica que comprende un compuesto de Formula I, y un soporte farmaceuticamente aceptable.
La invencion tambien se refiere a los compuestos de formula I para uso como un medicamento, preferiblemente para uso en la prevention o el tratamiento de una infection por VHB en un mamifero.
En un aspecto adicional, la invencion se refiere a una combination de un compuesto de formula I, y otro inhibidor del VHB.
En aun otro aspecto, la invencion se refiere a un compuesto de acuerdo con la formula V
imagen2
La invencion se refiere, ademas, al uso de un compuesto de formula V en la smtesis de un compuesto de acuerdo con la formula I.
Definiciones
El termino "alquilo C1-3" como un grupo o parte de un grupo se refiere a un radical hidrocarbilo de Formula CnH2n + 1, en la que n es un numero que oscila entre 1 y 3. En el caso de que alquilo C1-3 se acople a un radical adicional, se refiere a una Formula CnH2n. Grupos alquilo C1-3 comprenden de 1 a 3 atomos de carbono, mas preferiblemente 1 a 2 atomos de carbono. Alquilo C1-3 incluye todos los grupos alquilo, lineales o ramificados, con entre 1 y 3 atomos de carbono y, por lo tanto, incluye, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo e y /-propilo.
El termino "alquenilo C2-4" como un grupo o parte de un grupo define radicales hidrocarbonados saturados, de cadena lineal y ramificada, que tienen de 2 a 4 atomos de carbono que contienen al menos un doble enlace tales como, por ejemplo, vinilo, propenilo, butenilo y similares.
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El termino "alquiloxi C1-3" o alcoxi C1-3 como un grupo o parte de un grupo se refiere a un radical que tiene la Formula -ORc, en donde Rc es alquilo C1-3. Ejemplos no limitantes de alquiloxi C1-3 adecuado incluyen metiloxi (tambien metoxi), etiloxi (tambien etoxi), propiloxi e isopropiloxi.
Tal como se utiliza en esta memoria, el termino carbonilo, o "(= O)" u "oxo" forma un resto carbonilo cuando esta unido a un atomo de carbono. Cabe senalar que un atomo solo puede estar sustituido con un grupo oxo cuando la Valencia del atomo de ese atomo asf lo permita.
Tal como se utiliza en esta memoria, el termino "heterocicloalquilo C3-7" significa un grupo hidrocarbonado saturado dclico tal como se define para "heterocicloalquilo C3-7" en el que al menos un atomo de carbono esta reemplazado por un heteroatomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O. Ejemplos de heterocicloalquilo C3-7 incluyen tetrahidro-2H-piranilo, piperidinilo, tetrahidrofuranilo, morfolinilo y pirrolidinilo.
El termino "heteroarilo" significa un anillo aromatico monodclico o polidclico que comprende atomos de carbono, atomos de hidrogeno, y uno o mas heteroatomos, preferiblemente, de 1 a 3 heteroatomos, seleccionados independientemente entre nitrogeno, ox^geno y azufre. Para los fines de la invencion, un grupo heteroarilo necesita solamente tener algun grado de caracter aromatico. Ejemplos ilustrativos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a piridilo, piridazinilo, pirimidilo, pirazilo, triazinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, (1,2,3,)- y (1,2,4)-triazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, isoxazolilo e oxazolilo. Un grupo heteroarilo puede estar no sustituido o estar sustituido con uno o dos sustituyentes adecuados. Preferiblemente, un grupo heteroarilo es un anillo monodclico, en el que el anillo comprende de 2 a 5 atomos de carbono y 1 a 3 heteroatomos, al que se alude en esta memoria como "heteroarilo (C2-C5)".
Debe tenerse en cuenta que pueden existir diferentes isomeros de los diversos heterociclos dentro de las definiciones tal como se utiliza en toda la memoria. Por ejemplo, pirrolilo puede ser 1H-pirrolilo o 2H-pirrolilo.
El termino halo es generico para fluoro, cloro, bromo o yodo.
Tambien hay que senalar que las posiciones de los radicales en cualquier resto molecular utilizado en las definiciones pueden estar en cualquier parte de dicho resto con tal de que sea qmmicamente estable. Por ejemplo, piridilo incluye 2-piridilo, 3-piridilo y 4-piridilo; pentilo incluye 1-pentilo, 2-pentilo y 3-pentilo.
La expresion "B y Z junto con los carbonos a los que estan unidos forman un anillo de 4-7 miembros" indica que B y Z juntos forman un puente que consiste en 1, 2, 3 o 4 atomos. B y Z pueden representar juntos un atomo. B y Z pueden estar acoplados a traves de un enlace saturado o insaturado, directo, o B y Z pueden estar acoplados a traves de 1 o 2 atomos adicionales a traves de enlaces saturados o insaturados. Graficamente, esto se representa abajo por las siguientes formulas estructurales (I)4, (I)5, (I)6 y (I)7, en donde R1-R5 tienen el significado como se define en la presente solicitud y X, B y Z representan un carbono o heteroatomo, preferiblemente carbono u oxfgeno:
Para un anillo de 4 miembros:
imagen3
Para un anillo de 5 miembros:
imagen4
Para un anillo de 6 miembros:
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Y para un anillo de 7 miembros:
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Cuando cualquier variable (p. ej., halogeno o alquilo C1-4) aparece mas de una vez en cualquier constituyente, cada definition es independiente.
Para uso terapeutico, las sales de los compuestos de formula (I) son aquellas en las que el ion conjugado es farmaceutica o fisiologicamente aceptable. Sin embargo, tambien pueden encontrar uso las sales que tienen un ion 10 conjugado farmaceuticamente inaceptable, por ejemplo, en la preparation o purification de un compuesto farmaceuticamente aceptable de formula (I). Todas las sales, ya sean farmaceuticamente aceptables o no estan incluidas dentro del ambito de la presente invencion.
Las formas de sales por adicion farmaceuticamente aceptables o fisiologicamente tolerables que los compuestos de la presente invention son capaces de formar se pueden preparar convenientemente utilizando los acidos apropiados 15 tales como, por ejemplo, acidos inorganicos tales como hidracidos halogenados, p. ej., acido clorhidrico o bromhidrico; sulfurico; hemisulfurico, mtrico; fosforico y acidos similares; o acidos organicos tales como, por ejemplo, acetico, aspartico, dodecil-sulfurico, heptanoico, hexanoico, nicot^nico, propanoico, hidroxiacetico, lactico, piruvico, oxalico, malonico, succrnico, maleico, fumarico, malico, tartarico, dtrico, metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, ciclamico, salic^lico, p-amino-salic^lico, pamoico y acidos similares.
20 Inversamente, dichas formas de sal por adicion de acidos se pueden convertir, mediante tratamiento con una base apropiada, en la forma de base libre.
El termino "sales" tambien comprende los hidratos y las formas por adicion de disolventes que los compuestos de la presente invencion son capaces de formar. Ejemplos de tales formas son p. ej., hidratos, alcoholatos y similares.
Los presentes compuestos pueden existir tambien en sus formas tautomericas. Por ejemplo, formas tautomericas de grupos amida (-C(=O)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Se pretende que las formas tautomericas, aunque no 5 se indica explfcitamente en las formulas estructurales representadas en esta memoria, esten incluidas dentro del alcance de la presente invencion.
La expresion formas estereoqmmicamente isomericas de compuestos de la presente invencion, tal como se utiliza anteriormente en esta memoria, define todos los compuestos posibles constituidos por los mismos atomos unidos por la misma secuencia de enlaces, pero que tienen estructuras tridimensionales diferentes que no son 10 intercambiables, que los compuestos de la presente invencion puede poseer. A menos que se mencione o indique otra cosa, la designacion qmmica de un compuesto abarca la mezcla de todas las posibles formas estereoqmmicamente isomericas que dicho compuesto puede poseer. Dicha mezcla puede contener todos los diastereomeros y/o enantiomeros de la estructura molecular basica de dicho compuesto. Todas las formas estereoqmmicamente isomericas de los compuestos de la presente invencion tanto en forma pura o en mezcla unos 15 con otros estan destinadas a ser abarcadas dentro del alcance de la presente invencion.
Las formas estereoisomericas puras de los compuestos y compuestos intermedios como se menciona en esta memoria se definen como isomeros sustancialmente libres de otras formas enantiomericas o diastereomericas de la misma estructura molecular basica de dichos compuestos o compuestos intermedios. En particular, la expresion "estereoisomericamente puros" se refiere a compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso de 20 estereoisomerico de al menos 80% (es decir, mmimo 90% de un isomero y maximo l0% de los otros isomeros posibles) hasta un exceso estereoisomerico de 100% (es decir, 100% de un isomero y nada del otro), mas en particular, compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomerico de 90% hasta 100%, incluso mas en particular que tienen un exceso estereoisomerico de 94% hasta 100% y lo mas en particular que tienen un exceso estereoisomerico de 97% hasta 100%. Las expresiones "enantiomericamente puros" y 25 "diastereomericamente puros" deben entenderse de manera similar, pero entonces teniendo en cuenta el exceso enantiomerico, respectivamente el exceso diastereomerico de la mezcla en cuestion.
Las formas estereoisomericas puras de los compuestos y compuestos intermedios de esta invencion se pueden obtener por la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los enantiomeros pueden separarse unos de otros mediante la cristalizacion selectiva de sus sales diastereomericas con acidos o bases 30 opticamente activos. Ejemplos de los mismos son acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canfosulfonico. Alternativamente, los enantiomeros pueden separarse por tecnicas cromatograficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoqmmicamente isomericas puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoqmmicamente isomericas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reaccion ocurra de forma estereoespedfica. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero 35 espedfico, dicho compuesto se sintetizara por metodos estereoespedficos de preparacion. Estos metodos
emplearan ventajosamente materiales de partida enantiomericamente puros.
Los racematos diastereomericos de formula (I) pueden obtenerse por separado por metodos convencionales. Metodos de separacion ffsica apropiados que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalizacion selectiva y cromatograffa, p. ej., cromatograffa en columna.
40 La presente invencion tambien pretende incluir todos los isotopos de atomos que aparecen en los presentes compuestos. Los isotopos incluyen aquellos atomos que tienen el mismo numero atomico pero diferentes numeros de masa. A modo de ejemplo general y sin limitacion, isotopos de hidrogeno incluyen tritio y deuterio. Isotopos de carbono incluyen C-13 y C-14.
Descripcion detallada de la invencion
45 Siempre que se utilice en lo sucesivo en esta memoria, la expresion "compuestos de formula (I)",
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o "los presentes compuestos" o una expresion similar se entiende que incluye los compuestos de formula general (I), sales, formas estereoisomericas y mezclas racemicas o cualquier subgrupo de los mismos.
La presente invention proporciona compuestos, que pueden ser representados por la formula I:
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incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas de los mismos, en donde:
B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
10 o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, OH y halogeno;
Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
15 R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, Cen, ciclopropilo y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo, y Ce N;
R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H, metilo y halogeno;
R6 es alquilo Ci -C3, alquenilo C2-C3, ambos opcionalmente sustituidos con uno o mas fluoro;
R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo, alcoxi C1-C3 y CF3;
20 o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
Un subgrupo interesante de compuestos de acuerdo con la invencion son compuestos de formula (I),
incluyendo cualesquiera estereoisomeros o formas tautomericas posibles de los mismos, en donde:
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B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene 5 opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3;
Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN, ciclopropilo y CF3;
10 R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo, y Ce N;
R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo C1 -C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo y CF3.
Otro subgrupo interesante de compuestos de formula (I) de acuerdo con la invencion son compuestos de formula (I), 15 en que
By Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo y halogeno;
R1 es heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
20 R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN, ciclopropilo y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo, y Ce N;
R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo C1 -C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo y CF3.
25 En una realizacion de este subgrupo, B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 5-6 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3.
Un grupo particular de compuestos son aquellos compuestos de formula (I) en donde el heteroarilo de R1 comprende un atomo de nitrogeno adyacente al carbono unido a la 1,4-dihidropirimidina 4,4-disustituida (p. ej., R1 es 2-piridinilo 30 o 2-tiazolilo).
Otro grupo particular de compuestos son aquellos compuestos de formula (I), en donde - R6-R7 representa metilo.
Un subgrupo interesante de los compuestos de formula (I) son aquellos compuestos de formula (I) o subgrupos de los mismos, en donde se aplica cualquier combinacion de las siguientes restricciones:
B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido 35 con uno o mas sustituyentes CH3 o fluoro;
Ri se selecciona entre piridinilo o tiazolilo;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, C=N, ciclopropilo y CF3;
R3es alquiloxi C1 o C2-carbonilo, preferiblemente alquiloxi C1-carbonilo;
R6 es CH2
5 R7 se selecciona de hidrogeno, morfolinilo o piperidinilo;
R4y R5se seleccionan independientemente de entre el grupo H y fluoro.
Un subgrupo preferido de la presente invencion es un compuesto de acuerdo con la formula la
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incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas de los mismos, en donde:
10 B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno 15 o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo y halogeno;
R1 se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, C=N, ciclopropilo y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo, y C= N;
20 R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo C1 -C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo y CF3; o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
Un subgrupo interesante de compuestos de acuerdo con la invencion son compuestos de formula (la),
incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas de los mismos, en donde:
B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
Z se selecciona de H o halogeno;
5 o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3;
Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
10 R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN, ciclopropilo y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo, y Ce N;
R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo Ci -C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo y CF3;
15 o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
Un subgrupo interesante de compuestos de formula (la) son los compuestos de formula (Ia), en que:
By Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3;
20 R1 es heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN y CF3;
R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo, y Ce N;
R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H y halogeno;
R6 es alquilo C1 -C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
25 R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7 o CF3.
En una realizacion de este subgrupo, B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 5-6 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3.
Un grupo particular de compuestos son aquellos compuestos de formula (la) en donde el heteroarilo de R1 30 comprende un atomo de nitrogeno adyacente al carbono unido a la 1,4-dihidropirimidina 4,4-disustituida (p. ej., R1 es 2-piridinilo o 2-tiazolilo).
Otro grupo particular de compuestos son aquellos compuestos de formula (la), en donde - R6-R7 representa metilo.
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Un subgrupo interesante de los compuestos de formula (la) son aquellos compuestos de formula (la) o subgrupos de los mismos, en donde se aplica cualquier combinacion de las siguientes restricciones:
B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes CH3 o fluoro;
R1 se selecciona entre piridinilo o tiazolilo;
R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN, ciclopropilo y CF3;
R3 es alquiloxi C1 o C2-carbonilo, preferiblemente alquiloxi Ci-carbonilo;
R6 es CH2
R7 se selecciona de hidrogeno, morfolinilo o piperidinilo;
R4 y R5 se seleccionan independientemente de entre el grupo H y fluoro.
Los mas preferidos son los compuestos que se muestran en la tabla 1.
En un aspecto adicional, la presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeutica o profilacticamente eficaz de un compuesto de formula I tal como se especifica en esta memoria, incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde Ri es S-metilo, y un soporte farmaceuticamente aceptable. Una cantidad profilacticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para prevenir la infeccion por el VHB en sujetos en riesgo de ser infectados. Una cantidad terapeuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para estabilizar la infeccion por VHB, para reducir la infeccion por VHB o para erradicar la infeccion por VHB, en los sujetos infectados. Todavfa en un aspecto adicional, esta invencion se refiere a un procedimiento de preparacion de una composicion farmaceutica tal como se especifica en esta memoria, que comprende mezclar mtimamente un soporte farmaceuticamente aceptable con una cantidad terapeutica o profilacticamente eficaz de un compuesto de formula I, incluir los compuestos adicionales de Formula (I) en donde Ri es S-metilo, tal como se especifica en esta memoria.
Por lo tanto, los compuestos de la presente invencion, incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde Ri es S-metilo, o cualquier subgrupo de los mismos, pueden formularse en diversas formas farmaceuticas para fines de administracion. Como composiciones apropiadas se pueden citar todas las composiciones empleadas habitualmente para farmacos de administracion sistemica. Para preparar las composiciones farmaceuticas de esta invencion, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal por adicion como el ingrediente activo se combina en mezcla mtima con un soporte farmaceuticamente aceptable, soporte que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas son deseables en forma de dosificacion unitaria adecuada, particularmente para la administracion por via oral, rectal, percutanea, o por inyeccion parenteral. Por ejemplo, en la preparacion de las composiciones en forma de dosificacion oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmaceuticos habituales tal como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y disoluciones; o soportes solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas, en cuyo caso se emplean soportes farmaceuticos solidos. Para las composiciones parenterales, el soporte comprendera habitualmente agua esteril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar disoluciones inyectables, en las que el soporte comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y solucion de glucosa. Tambien se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear soportes lfquidos apropiados, agentes de suspension y similares. Tambien se incluyen preparaciones en forma solida destinadas a ser convertidas, poco antes de su uso, en preparaciones en forma ifquida. En las composiciones adecuadas para administracion percutanea, el soporte comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetracion y/o un agente humectante adecuado, combinado opcionalmente con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos que no introducen un efecto deletereo significativo en la piel. Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar tambien por inhalacion oral o insuflacion en forma de una disolucion, una suspension o un polvo seco utilizando cualquier sistema de administracion conocido en la tecnica.
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Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmaceuticas mencionadas anteriormente en forma de dosificacion unitaria para facilidad de administracion y uniformidad de dosificacion. Forma de dosificacion unitaria, tal como se utiliza en esta memoria, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el soporte farmaceutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificacion unitaria son comprimidos (incluyendo comprimidos con muesca o recubiertas), capsulas, pfldoras, supositorios, paquetes de polvos, obleas, disoluciones o suspensiones inyectables y similares, y multiplos segregados de los mismos.
Los compuestos de formula I, que incluyen los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo, son activos como inhibidores del ciclo de replicacion del VHB y se pueden utilizar en el tratamiento y la profilaxis de la infeccion por VHB o enfermedades asociadas con el vHb. Estos ultimos incluyen fibrosis hepatica progresiva, inflamacion y necrosis que conduce a cirrosis, enfermedad hepatica en fase terminal y carcinoma hepatocelular.
Debido a sus propiedades antivirales, particularmente sus propiedades anti-VHB, los compuestos de formula I, incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo, o cualquier subgrupo de los mismos, son utiles en la inhibicion del ciclo de replicacion del VHB, en particular en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con el VHB, y para la profilaxis de infecciones por VHB. La presente invencion se refiere, ademas, a un compuesto para uso en un metodo de tratamiento de un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado por el VHB, o que esta en riesgo de infeccion por el VHB, comprendiendo dicho metodo la administracion de una cantidad terapeuticamente eficaz de una compuesto de formula I, incluyendo los compuestos adicionales de formula (I) en donde R1 es S-metilo.
Los compuestos de formula I, tal como se especifican en esta memoria, incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I), en donde R1 es S-metilo, pueden, por lo tanto, ser utilizados como un medicamento, en particular como un medicamento para tratar o prevenir una infeccion por el VHB. Dicho uso como medicamento o metodo de tratamiento comprende la administracion sistemica a sujetos infectados por el VHB o para sujetos susceptibles a la infeccion por el VHB de una cantidad eficaz para combatir las condiciones asociadas con la infeccion por el VHB o una cantidad eficaz para prevenir la infeccion por el VHB.
La presente invencion tambien se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de la infeccion por el VHB.
En general, se contempla que una cantidad diaria eficaz antiviral sena de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg, o aproximadamente 0,01 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o mas sub-dosis a intervalos apropiados a lo largo del dfa. Dichas sub-dosis pueden formularse como formas de dosificacion unitaria, por ejemplo, que contiene aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 300 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg, o aproximadamente 2 a aproximadamente 50 mg de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria.
La presente invencion tambien se refiere a combinaciones de un compuesto de formula (I), incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo, o cualquier subgrupo de los mismos, tal como se especifica en esta memoria con otros agentes anti-HBV. El termino "combinacion" puede referirse a un producto o kit que contiene (a) un compuesto de formula I, incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo, tal como se especifica anteriormente, y (b) al menos otro compuesto capaz de tratar la infeccion por el VHB (en adelante designado como agente anti-VHB), como una preparacion combinada para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHB.
En una realizacion, la invencion se refiere a la combinacion de un compuesto de formula (I), incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo o cualquier subgrupo de los mismos con al menos un agente anti-VHB. En una realizacion particular, la invencion se refiere a la combinacion de un compuesto de formula (I), incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo o cualquier subgrupo de los mismos, con al menos dos agentes anti-VHB. En una realizacion particular, la invencion se refiere a la combinacion de un compuesto de formula (I), incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I) en donde R1 es S-metilo, o cualquier subgrupo de los mismos con al menos tres agentes anti-VHB. En una realizacion particular, la invencion se refiere a la combinacion de un compuesto de formula (I), incluyendo los compuestos adicionales de Formula (I), en donde R1 es S-metilo, o cualquier subgrupo de los mismos con al menos cuatro agentes anti-VHB.
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La combinacion de agentes anti-VHB previamente conocidos, tales como interferon-a (IFN-a), interferon-a pegilado, 3TC, adefovir o una combinacion de los mismos, y, un compuesto de formula (I) o cualquier subgrupo de los mismos se puede utilizar como un medicamento en una terapia de combinacion.
En un aspecto adicional, la invencion se refiere a un compuesto de acuerdo con la formula V
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en donde Ri, R3, R4y Rsse definen como anteriormente para las Formulas I y la.
de un compuesto de acuerdo Ejemplos de condiciones de reaccion adecuadas se muestran en la parte metodos de smtesis generales y en mas detalle en la seccion experimental.
Un subgrupo interesante de los compuestos de formula (V) son aquellos compuestos de formula (V) en donde:
B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en donde el anillo de 5 o 6 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3;
Ri es heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 o mas atomos de halogeno;
R2se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN y CF3;
R3se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo, y CeN;
R4y R5se seleccionan independientemente del grupo que comprende H y halogeno;
R6es alquilo C1-C3, opcionalmente sustituido con fluoro;
R7se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7 o CF3;
Un grupo particular de compuestos son aquellos compuestos de formula (V) en donde el heteroarilo de R1 comprende un atomo de nitrogeno adyacente al carbono unido a la 1,4-dihidropirimidina 4,4-disustituida (p. ej., R1 es 2-piridinilo o 2-tiazolilo).
Un subgrupo interesante de los compuestos de formula (V) son aquellos compuestos de formula (V) o subgrupos de los mismos, en donde se aplica cualquier combinacion de las siguientes restricciones:
B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes CH3;
R1 se selecciona entre piridinilo o tiazolilo;
La invencion se refiere, ademas, al uso de un compuesto de formula V en la smtesis con la formula I. La smtesis general se muestra en el Esquema 1 mas adelante.
R3es alquiloxi Ci- o C2-carbonilo, preferiblemente alquiloxi Ci-carbonilo
R6 es CH2;
R7se selecciona de hidrogeno, morfolinilo o piperidinilo;
R4y R5 se seleccionan independientemente de entre el grupo H y fluoro.
5 Metodos de sintesis generales
Una posible sintesis de un compuesto de formula I se describe en el Esquema 1.
Un compuesto de formula general II se hace reaccionar con un compuesto de amidina de formula general III, posiblemente en presencia de una base (por ejemplo Na2CO3, KOtBu o NaHCO3), resultando un compuesto ciclico de formula general IV. Este compuesto de formula general IV puede ser clorado para dar un compuesto de formula 10 general V, por ejemplo por calentamiento en POCl3. El compuesto de formula general V a continuacion, se puede transformar en compuestos de formula general I, por ejemplo mediante un acoplamiento de tipo Suzuki en el caso de que R2 sea igual a -CH2-Het, en donde Het representa un heterocicloalquilo C3-7 o ciclopropilo; un acoplamiento de tipo Stille en el caso de que R2 sea igual a Me; una sustitucion, en el caso de que R2 sea igual a CN o como se ejemplifica en la seccion experimental. Alternativamente uno de los dos nitrogenos de la amidina en el compuesto V 15 se puede proteger, por ejemplo, con un grupo Boc, despues de lo cual por ejemplo se puede realizar un acoplamiento de Suzuki o Stille, seguido de desproteccion del nitrogeno, resultando el compuesto I.
Esquema 1
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El compuesto de formula general II se puede sintetizar tal como se describe en el Esquema 2 (a, b, c, d), las 20 condiciones utilizadas dependen de los sustituyentes Z, B y R3 en un compuesto de formula general II. R8representa alquilo C1-C3, preferiblemente metilo o etilo.
Un posible metodo se describe en el Esquema 2a para la sintesis del compuesto con la formula IIa general. En el caso de que B sea igual a alquilo C1-3 o CF3, o que B y Z esten conectados de modo que el compuesto de formula general VI es un derivado de indan-1-ona, se pueden utilizar las condiciones de Lehnnert (TiCU/piridina, por ejemplo 25 descritas en Tetrahedron Letters N° 34, pags. 4723-4724, 1970 o modificaciones de las mismas) para la condensation de Knoevenagel de VI y VII. Alternativamente, en el caso de que B sea igual a alquilo C1-3, el compuesto de formula general IIb se puede sintetizar tal como se describe en el Esquema 2b, a traves de una reaction de tipo Suzuki de un acido boronico (u otro derivado de boro) de formula general IX y un cloruro vinilico de formula general VIII (preparado como se describe en la bibliografia, condiciones similares a Organic Synthesis, Coll 30 Vol 8, p. 247 (1993); Vol. 66, p.173 (1988)) tal como se describe en Journal of Organic Chemistry 2004, 69, 20, 6920-6922. Otra alternativa se describe en el Esquema 2c, reacciones de un alquino de formula general X y un malonato de formula general VII en presencia de InCMal como se describe en Tetrahedron 2005, 61, 32, 78077813, resultando un compuesto de formula general IIc.
Esquema 2a
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Esquema 2c
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En el caso de que la condensation de Knoevenagel se lleve a cabo con un 2-cianoacetato de alquilo de formula general XI y el compuesto de formula general VI, tal como se describe en el Esquema 2d, por ejemplo p- alanina/acido acetico en benceno se puede utilizar como una condition para formar el aducto de formula general IId.
Esquema 2d
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Ejemplos adicionales para la smtesis de compuestos de formula general II se pueden encontrar en: Jones, G. 2011. The Knoevenagel Condensation. Organic Reactions. 204-599. En el caso de que el compuesto de formula general IId se haga reaccionar con una amidina de formula general III, posiblemente en presencia de una base tal como, por ejemplo, KOAc, NaHCO3o Na2CO3, un compuesto de formula IVa se puede formar como se describe en el Esquema 5 3. Ademas de utilizar este compuesto directamente en la secuencia de reaction tal como se describe en el Esquema
1, el mismo tambien se puede convertir en un derivado de ester de formula general IVb, mediante la realization de una alcoholisis de nitrilo, por ejemplo, utilizando acido clorhidrico en MeOH o EtOH, seguido de la reaccion con agua, resultando el compuesto IVb tal como se describe en el Esquema 3.
Esquema 3
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Esquema 4
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Alternativamente, un compuesto de formula general XII se puede transformar en un compuesto de formula general XIII tal como se describe en el Esquema 4, por ejemplo por calentamiento en POCh. El compuesto de formula XIII se 15 puede transformar, a continuation, en un compuesto de formula general I mediante una reaccion catalizada por metal de transition, por ejemplo un acoplamiento de tipo Stille con R1Sn(Bu)3 y un catalizador tal como bis (tri-terc.- butilfosfina)paladio (0). Durante esta secuencia, se puede utilizar una estrategia de grupo protector en el caso de que grupos funcionales no sean compatibles con las condiciones utilizadas, por ejemplo, una protection de p- metoxibencilo en una funcionalidad NH.
20 Esquema 5
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Un compuesto de formula XIIa se puede sintetizar tal como se describe en el Esquema 5, de acuerdo con las condiciones descritas en Synthetic Communications, 41(19), 2899-2904; 2011. R9es R8o H.
Un ejemplo de la smtesis de compuestos de formula general Ib se representa en el Esquema 6. El compuesto XIV se condensa con 2-metil-2-tiopseudourea, por ejemplo mediante tratamiento con el hemisulfato de 2-metil-2- 5 tiopseudourea y bicarbonato de sodio en DMF a 50°C, dando como resultado la formacion del compuesto XV. XV se puede transformar adicionalmente en un compuesto con la estructura general Ib, por ejemplo utilizando una formacion de enlaces C-C catalizada por un metal de transition tal como, por ejemplo, el acoplamiento con Ri- Sn(Bu)3en presencia de acetato de paladio (II)/butildi-1-adamantilfosfina y bromuro de cobre (I)-sulfuro de dimetilo a 140°C por irradiation de microondas.
10 Esquema 6
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Ejemplos para la smtesis de compuestos con formula general XIV se describen en los esquemas 7a y 7b. En el caso de que B sea igual a -CH3, un acoplamiento catalizado por InCh de un alquino X y un 3-oxobutanoato de alquilo C1- C3 da lugar a un aducto de formula general XIVc.
15 Esquema 7a
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Alternativamente, la condensation del compuesto VI y un 3-oxobutanoato de alquilo C1-C3 en condiciones de Lehnnert (TiCl4/ piridina o modificaciones del mismo), dan como resultado un compuesto de formula general XIV. Ejemplos de compuestos adecuados representados por VI en este caso son los derivados de 2,2-difluoro-2,3- 20 dihidro-1H-inden-1-ona.
Esquema 7b
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Parte experimental:
Metodos LCMS
Metodo A: La medicion LC se realizo utilizando un sistema Acquity UPLC (Waters). UPLC de fase inversa (Cromatograffa L^quida de Ultra-Alta Resolution) se llevo a cabo en un hfbrido de etilsiloxano/silice puenteado (BEH) en columna C18 (1,7 Mm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 mL/min. Se utilizaron dos fases moviles (acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para procesar una condition de gradiente desde 95% de A y 5% de B hasta 5% de A y 95% B en 1,3 minutos y mantener durante 0,3 minutos. Se utilizo un volumen de inyeccion de 0,5 Ml. La tension del cono era 10 V para el modo de ionization positiva.
Metodo B: fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de Parada: 2 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [90/10] a 0,9 [20/80] a 1,5 [20/80] a 1,51 [90/10]; caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50°C, Xtimate C18 2,1*30 mm, 3 Mm
Metodo C: fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de Parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80]; 9,5[10/10]: caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C, Agilent TC-C18 2,1*50 mm, 5 Mm
Metodo D: La medicion LC se realizo utilizando un sistema Acquity UPLC (Waters). UPLC de fase inversa (Cromatograffa Liquida de Ultra-Alta Resolucion) se llevo a cabo en un hfbrido de etilsiloxano/silice puenteado (BEH) en columna C18 (1,7 Mm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 mL/min. Se utilizaron dos fases moviles (fase movil A: acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para procesar una condicion de gradiente desde 95% de A y 5% de B hasta 5% de A y 95% B en 1,3 minutos y mantener durante 0,2 minutos. Se utilizo un volumen de inyeccion de 0,5 Ml. La tension del cono era 10 V para el modo de ionizacion positiva.
Metodo E: La medicion LC se realizo utilizando un sistema Acquity UPLC (Waters). UPLC de fase inversa (Cromatograffa Liquida de Ultra-Alta Resolucion) se llevo a cabo en un hfbrido de etilsiloxano/silice puenteado (BEH) en columna C18 (1,7 Mm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 mL/min. Se utilizaron dos fases moviles (acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para procesar una condicion de gradiente desde 95% de A y 5% de B hasta 5% de A y 95% B en 1,3 minutos y mantener durante 0,3 minutos. Se utilizo un volumen de inyeccion de 0,5 Ml. La tension del cono era 10 V para el modo de ionizacion positiva.
Metodo F: La medicion HPLC se realizo utilizando un sistema Alliance HT 2790 (Waters). La HPLC de fase inversa se llevo a cabo en una columna Xterra MS C18 (3,5 Mm, 4,6 x 100 mm) con un caudal de 1,6 mL/min. Se emplearon tres fases moviles (fase movil A: 95% acetato de amonio 25 mM + 5% de acetonitrilo; fase movil B: acetonitrilo; fase movil C: metanol) para procesar una condicion de gradiente desde 100% de A a 1% A, 49% de B a 50% de C en 6,5 minutos, a 1% de Ay 99% de B en 1 minuto y mantener estas condiciones durante 1 minuto y re-equilibrar con 100% de A durante 1,5 minutos. Se utilizo un volumen de inyeccion de 10 Ml. El voltaje del cono era 10 V para modo de ionizacion positivo y 20 V para el modo de ionizacion negativo.
Metodo G: Agilent TC-C18, 50 x 2,1 mm, 5 Mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de Parada: 10 min; Tiempo Post.: 0,5 min; tiempo de gradiente (min) [% de A/% de B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [15/85] a 9,5 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C.
Metodo H: YMC-PACK ODS-AQ, 50 x 2,0 mm, 5 Mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de Parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% de A/% de B] 0,0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80] a 8,0 [90/10]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C.
Metodo I: YMC-PACK ODS-AQ, 50 x 2,0 mm, 5 Mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de Parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% de A/% de B] 0,0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [40/60] a 8,0 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C.
Metodo J: XBridge ShieldRP18, 50*2,1 mm, 5 Mm; fase movil:; A: H2O (NH3.H2O al 0,05%); B: CH3CN; Tiempo de Parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% de A/% de B] 0,0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [40/60] a 8,0 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 40°C.
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Metodo K: La medicion LC se realizo utilizando un sistema Acquity UPLC (Waters) que comprende una bomba binaria, un organizador de la muestra, un calentador de la columna (ajustado a 55°C), un detector de la matriz de diodos (DAD). UPLC de fase inversa (Cromatografia Liquida de Ultra-Alta Resolucion) se llevo a cabo en una columna Acquity UPLC HSS T3 (1,8 pm, 2,1 x 100 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 mL/min. Se utilizaron dos fases moviles (A: acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para procesar una condicion de gradiente desde 95% de A y 5% de B a 0% de A y 100% de B en 2,5 minutos y posteriormente a 5% de Ay 95% de B en 0,5 minutos. Se utilizo un volumen de inyeccion de 1 pl. El voltaje del cono era 30 V para el modo de ionizacion positivo y 30 V para el modo de ionizacion negativo.
Metodo L: La medicion LC se realizo utilizando un sistema Acquity UPLC (Waters) que comprende una bomba binaria, un organizador de la muestra, un calentador de la columna (ajustado a 55°C), un detector de la matriz de diodos (DAD). UPLC de fase inversa (Cromatografia Liquida de Ultra-Alta Resolucion) se llevo a cabo en una columna Acquity UPLC HSS T3 (1,8 pm, 2,1 x 100 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 mL/min. Se utilizaron dos fases moviles (A: acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para procesar una condicion de gradiente desde 100% de A y 0% de B a 5% de A y 95% de B en 2,1 minutos y posteriormente a 0% de A y 100% de B en 0,9 minutos a 5% de A y 95% de B en 0,5 min. Se utilizo un volumen de inyeccion de 1 pl. El voltaje del cono era 30 V para el modo de ionizacion positivo y 30 V para el modo de ionizacion negativo.
Abreviaturas / terminos:
NMP:
DME:
POPd:
Isolute ®HMN:
PEPPSI(TM)-
IPr:
1 -metil-2-pirrolidinona
1,2-dimetoxietano [(t-Bu)2P(OH)]2PdCl 2
columnas de extraccion Kquido-Kquido desechable que contiene una forma modificada de tierra de diatomeas
dicloruro de [1,3-bis(2,6-diisopropilfenil)imidazol-2-iliden](3-cloro-piridil)paladio (II)
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1,66 mmol) y 4-fluorofenilacetileno (15 g, 125 mmol). El tubo se lavo abundantemente con nitrogeno, se cerro y agito en un bano de aceite a 135°C durante 17 horas. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y la disolucion se utilizo como tal a continuacion. Un tubo de presion se cargo con hidrocloruro de piridina-2- carboximidamida (14,2 g, 90,3 mmol) y 1-metil-2-pirrolidinona (NMP, 100 mL). Se anadio terc-butoxido potasico (18.42 g, 164 mmol) en atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos. A continuacion, se anadio la disolucion obtenida anteriormente en xileno, el tubo de presion se calento y se agito en un bano de aceite a 80°C durante 5 horas.
La mezcla de reaccion se enfrio en un bano de hielo y se concentro en vado hasta que solo quedo NMP. La mezcla se vertio en agua con hielo y se agito durante 30 minutos. Despues de extraccion con eter diisopropflico (3 x 100 mL), los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado, proporcionando un aceite pardo. Este aceite se purifico por cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de CH2Cl2-heptano 50:50 a 100:0). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron en vado, produciendo el compuesto 1 en forma de un aceite amarillo que solidifico al dejarlo en reposo (21,3 g) Metodo A; Rt: 1,03 y 1,07 min. m/z : 356,3 (M+H)+ Masa exacta: 355,1
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Compuesto 1 (420 mg, 1,18 mmol), metanol (15 mL) y terc-butoxido potasico (199 mg, 1,77 mmol) se agitaron en un bano de aceite a 80°C durante 17 horas.
La mezcla de reaccion resultante se diluyo con agua y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 100 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado proporcionando un residuo en forma de una mezcla de un ester metflico (principal) y ester etflico (secundario). Esta mezcla y oxicloruro de fosforo (2 mL, 21,5 mmol) se calento a reflujo durante 1 hora. La mezcla se concentro en vado. El residuo resultante se recogio en CH2Cl2 y se lavo con NaHCO3 (sat/aq). La capa organica se seco utilizando (MgSO4), se concentro en vado, proporcionando una mezcla del ester metflico (principal) y el ester etflico (secundario). A este residuo obtenido en un vial de microondas se anadieron carbonato de cesio (4,08 g, 12,51 mmol), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (0,86 g, 4,17 mmol), agua (destilada 1,1 mL, 62,5 mmol) y DME (11 mL). Esta mezcla se purgo con nitrogeno durante 5 minutes. Despues se anadieron acetato de paladio(II) (47 mg, 0,21 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (120 mg, 0,33 mmol) y la mezcla de reaccion se purgo con nitrogeno durante otros 2 minutos. El vial se tapo y se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla de reaccion resultante se concentro en vado y el residuo se recogio en agua - diclorometano (50 mL/50 mL). La capa de agua se extrajo adicionalmente con diclorometano (2 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4) y se concentraron en vado.
El residuo se purifico por cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de acetato de etilo-heptano 10:90 a 50:50). Las fracciones deseadas se concentraron en vado, proporcionando el compuesto 2 en forma de un aceite transparente que se purifico adicionalmente por HPLC preparativa (Uptisphere C18 ODB - 10 ^m, 200 g, 5 cm). Fase movil (disolucion al 0,25% de NH4HCO3 en agua, CH3CN) La fraccion relevante se concentro en vado, se co- evaporo con MeOH (2 x 10 mL) a 50°C y se seco en un horno de vado a 55°C durante la noche, resultando el compuesto 2 (170 mg) en forma de un polvo blanco. . Metodo A; Rt: 1,16 min. m/z : 425,5 (M+H)+ Masa exacta: 424,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,91 (s, 3 H), 2,52 - 2,66 (m, 4 H), 3,48 (s, 3 H), 3,66 (d, J=16,3 Hz, 1 H), 3,73 (d, J=16,3 Hz, 1 H), 3,82 (t, J=4,8 Hz, 4 H), 6,88 - 7,04 (m, 2 H), 7,37 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,0 Hz, 1 H), 7,40 - 7,49 (m, 2 H), 7,74 (td, J=7,5, 1,8 Hz, 1 H), 8,21 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,50 - 8,69 (m, 1 H), 10,02 (s, 1 H)
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110,3 mmol). La mezcla de reaccion se agito en un bano de aceite a 120°C durante 30 minutos. Despues, la mezcla de reaccion se concentro en vado. El residuo se disolvio en diclorometano (100 mL) y se lavo con disolucion saturada de NaHCO3 (50 mL). La capa organica se separo y se lavo con agua, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro en vado. El producto bruto se purifico por cromatografia en gel de sflice (CH2Cl2 isocratica) proporcionando el compuesto 3 en forma de un aceite transparente que se convirtio en un solido despues de reposar (2,73 g). Metodo A; Rt: 1,18 min. m/z : 374,3 (M+H)+ Masa exacta: 373,1
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Condicion B: Un matraz de fondo redondo de 50 mL se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 1 (10,0 g,
28,1 mmol) y se mezclo con oxicloruro de fosforo (26,2 mL, 281 mmol). La mezcla se agito a reflujo durante 30 minutos bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad en vado. El residuo se almaceno a -20°C durante 40 horas, se disolvio en diclorometano (200 mL) y se lavo con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2 x 100 mL), se seco (MgSO4) y se evaporo a sequedad en vado, resultando el compuesto 3 (9,9 g) en forma de un aceite pardo que se utilizo como tal en los siguientes pasos.
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Compuesto 4
Enantiomeros del compuesto racemico 4: compuesto 4a y compuesto 4b
Un tubo de microondas 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)-metiltrifluoroborato de potasio (665 mg, 3,05 mmol), compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion B, 600 mg, 1,53 mmol), carbonato de cesio (2,98 g, 9,15 mmol), agua destilada (826 ^l, 45,7 mmol) y 1,2-dimetoxietano (7,92 mL, 76,2 mmol) y gas nitrogeno se hizo burbujear a traves durante 10 minutos. Bajo atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (34,5 mg, 0,152 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (87,5 mg, 0,244 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. 1,2-dimetoxietano se decanto y la capa de agua se extrajo con diclorometano. Las capas organicas se reunieron y se evaporaron a sequedad y el residuo obtenido se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (acetato de etilo: heptano 30-100%) dando como resultado el compuesto racemico 4 (683 mg), que se purifico adicionalmente mediante separation SFC prep (en Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm). Fase movil (dioxido de carbono, etanol con 0,2% de isopropil-amina). Se recogieron las fracciones deseadas, el disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se disolvio en metanol y se evaporo de nuevo. Resultante el compuesto 4a (243 mg) y el compuesto 4b (238 mg), enantiomeros del compuesto racemico 4. Metodo E; Rt: 1,21 min. m/z : 439,3 (M+H)+ Masa exacta: 438,2. 1H RMN (600 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 0,99 (t, J=7,1 Hz, 3 H), 1,90 (s, 3 H), 2,52 - 2,66 (m, 4 H), 3,67 (d, J=16,4 Hz, 1 H), 3,75 (d, J=16,3 Hz, 1 H), 3,81 (t, J=4,6 Hz, 4 H), 3,86 - 3,97 (m, 2 H), 6,96 (t, J=8,8 Hz, 2 H), 7,36 (ddd, J=7,4, 4,9, 1,0 Hz, 1 H), 7,43 (dd, J=8,8, 5,4 Hz, 2 H), 7,72 (td, J=7,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,18 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 8,59 (ddd, J=4,8, 1,6, 0,9 Hz, 1 H), 10,00 (s, 1 h); Columnas: OJ-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 5% (que contema iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura de la columna: 30°C; Rt, Compuesto 4a: 3,40 min; Compuesto 4b: 4,43 min.
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Compuesto 5
Compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion A, 0,5 g, 1,34 mmol), 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (0,23 g, 2,01 mmol), cianuro de tetrabutilamonio (0,54 g, 2,01 mmol) y acetonitrilo (25 mL) se agito y se calento a 100°C en un tubo de presion durante 17 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vado y el residuo obtenido se recogio en diclorometano/agua (50 mL/50 mL). La capa de agua se extrajo con diclorometano (2 x 50 mL) y los extractos reunidos se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado. El residuo obtenido se purifico por cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de elucion CH2Cl2-heptano 50:50 a
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100:0) Las fracciones deseadas se concentraron en vado, dando como resultado un aceite amarillo. El aceite se disolvio en eter diisopropflico y el precipitado formado se filtro en un filtro de vidrio y se seco en un horno de vado a 55°C durante la noche, resultando el compuesto 5 (80 mg) en forma de un solido blancuzco. Metodo D; Rt: 1,10 min. m/z : 365,0 (M+H)+ Masa exacta: 364,1.
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Compuesto 6
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)-metiltrifluoroborato de potasio (144 mg, 1,18 mmol), compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion B (170 mg, 0,455 mmol), carbonato de cesio (889 mg, 2,73 mmol), agua destilada (200 ^L, 11,1 mmol) y tolueno (2 mL, 18,8 mmol) y gas nitrogeno se burbujeo a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (20,6 mg, 0,0910 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (52,2 mg, 0,146 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 100°C durante 30 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno y dejo que alcanzara la temperatura ambiente y la mezcla de reaccion se agito a 125°C durante 30 minutos en el horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. Se anadieron acetato de paladio(lI) (20,6 mg, 0,0910 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (52,2 mg, 0,146 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 125°C durante 1 hora en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. Se anadieron bajo atmosfera de nitrogeno (morfolin-4- il)metiltrifluoroborato de potasio (144 mg, 1,18 mmol) y carbonato de cesio (889 mg, 2,73 mmol).
La mezcla de reaccion se agito a 125°C durante 10 horas en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se diluyo con diclorometano (100 mL) y se lavo con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 20 mL) y agua (20 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro hasta sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color pardo, que se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de elucion; metanol:diclorometano 0 a 7%) para proporcionar un polvo pegajoso amarillo oscuro que se disolvio en eter dietflico (2 mL) y se anadio eter de petroleo (10 mL). El disolvente se concentro (rotavap) para mantener 2 mL de disolvente, lo cual resulto en la precipitation de un solido de color naranja oscuro. El disolvente se decanto y los solidos se lavaron con eter de petroleo. Las disoluciones reunidas se concentraron a sequedad y el polvo se seco en un horno de vado a 50°C durante una noche, dando como resultado el compuesto 6 (57 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo A; Rt: 1,15 min. m/z : 354,6 (M+H)+ Masa exacta: 353,2.
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Compuesto 7
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (pirrolidin-1-il)metiltrifluoroborato de potasio (204 mg, 1,07 mmol), compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion A, 200 mg, 0,535 mmol), carbonato de cesio (1,05 g, 3,21 mmol), agua destilada (290 ^l, 16,1 mmol) y 1,2-dimetoxietano (2,78 mL, 26,8 mmol) y gas nitrogeno se burbujeo a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (12,1 mg, 0,0535 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (30,7 mg, 0,0856 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 20 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. Se decanto1,2-dimetoxietano, la capa de
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agua se extrajo con diclorometano y las capas organicas se reunieron y se evaporaron a sequedad. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente de elucion: acetato de etilo:heptano 10-80%) dando como resultado el compuesto 7 (119 mg). Metodo A; Rt: 1,01 min. m/z : 423,4 (M+H)+ Masa exacta: 422,2.
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Compuesto 8
Un tubo de microondas 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (tiomorfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (227 mg, 1,02 mmol), compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion B, 200 mg, 0,508 mmol), carbonato de cesio (994 mg, 3,05 mmol), agua destilada (275 |jl, 15,2 mmol) y 1,2-dimetoxietano (2,64 mL, 25,4 mmol) y gas nitrogeno se burbujeo a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (11,5 mg, 0,0508 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (29,2 mg, 0,0813 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. El producto se extrajo con diclorometano y las capas organicas se reunieron y se evaporaron a sequedad. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (acetato de etilo: heptano 5-70%), las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron en vado, se secaron durante la noche en un horno de vado a 50°C, resultando el compuesto 8 (172 mg). Metodo A; Rt: 1,38 min. m/z : 423,4 (M+H)+ Masa exacta: 422,2.
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Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (tiomorfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (227 mg, 1,02 mmol), compuesto 3 (obtenido a traves de la condicion B, 200 mg, 0,508 mmol), carbonato de cesio (994 mg, 3,05 mmol), agua destilada (275 jl, 15,2 mmol) y 1,2-dimetoxietano (2,64 mL) y gas nitrogeno se burbujeo a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (11,5 mg, 0,0508 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (29,2 mg, 0,0813 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. El producto se extrajo con diclorometano y las capas organicas se reunieron y se evaporaron a sequedad y se purifico dos veces utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (primero; acetato de etilo:heptano 5-70%; segundo; amodaco en metanol (7N)/CH2Cl2 0 - 5%) resultando el compuesto 9 (127 mg) despues de secar durante una noche en horno de vado a 50°C. Metodo A; Rt: 1,33 min. m/z : 437,4 (M+H)+ Masa exacta: 436,2.
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Una mezcla de fluoruro de potasio (75 mg, 1,29 mmol) y yoduro de cobre(i) (250 mg, 1,31 mmol) se agito y se calento en vado hasta que se obtuvo un color verde homogeneo de la mezcla. La reaccion se enfrio a temperatura 5 ambiente, y el mismo procedimiento se repitio tres veces. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se anadieron N-metilpirrolidona (2,00 mL, 20,8 mmol) y trimetil(trifluorometil)silano (74,2 mg, 1,00 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito a 50°C durante 45 minutos. Se enfrio a temperatura ambiente y el compuesto 3 (393 mg, 1,00 mmol) se anadio bajo nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito a 50°C durante 44 horas y se enfrio a temperatura ambiente y se anadio amodaco acuoso. La capa organica se separo. La capa 10 acuosa se lavo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las capas organicas reunidas se secaron con sulfato de sodio. El disolvente se separo por evaporacion en vado. El producto bruto se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (acetato de etilo:heptano 5% -50%). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron hasta sequedad, resultando el compuesto 10 (1,2 mg) (Metodo A; Rt: 1,26 min m/z: 408,5 (M+H)+ Masa exacta: 407,1) y compuesto 11 (43 mg) (Metodo A; Rt: 1,36 min m/z: 458,5 (M+H)+ Masa exacta: 457,1) en forma de un aceite de 15 color amarillo claro.
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Un tubo de presion se cargo con una varilla de agitacion, malonato de dimetilo (4,03 g, 30,5 mmol), 1-cloro-2- etinilbenceno (5,00 g, 36,6 mmol), cloruro de indio(III) (162 mg, 0,731 mmol), xileno (15 mL) y se lavo con nitrogeno y se cerro. La mezcla de reaccion se agito entonces a 135°C durante 17 horas y se dejo que alcanzara la 20 temperatura ambiente. Se anadio cloruro de indio(III) (405 mg, 1,83 mmol) a la mezcla de reaccion y se lavo con nitrogeno y se cerro. La mezcla de reaccion se agito entonces a 130°C durante 16 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente y se evaporo a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de elucion; 20 a 80% de diclorometano en heptano) resultando el compuesto 12 (1,26 g) en forma de un aceite.
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Compuesto 13
A hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (0,813 g, 5,16 mmol) se anadieron dimetil-formamida (22 mL, 281 mmol) y carbonato de sodio (0,994 g, 9,38 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se agito durante 5 minutos. Entonces se anadio compuesto 12 (1,26 g, 4,69 mmol) y la mezcla de reaccion se calento y se agito a 60°C durante 90 horas y se trato mediante ultrasonidos y la suspension se transfirio a un matraz de fondo redondo de 50 mL y se agito durante 18 horas a 68°C y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se vertio en agua con hielo y se agito durante 30 minutos. Se extrajo con eter diisopropilico (3 x 50 mL). Los extractos organicos reunidos se secaron (Na2SO4), y se concentraron a presion reducida para proporcionar un aceite pegajoso que se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (gradiente de elucion, 30-100% de diclorometano en heptano). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron en vacio, dando como resultado un residuo (356 mg). Este residuo (356 mg, 0,995 mmol) se disolvio en oxicloruro de fosforo (1,61 mL, 22,4 mmol) y se calento a 120°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad utilizando un flujo de nitrogeno, durante la noche a 40°C. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso, salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo hasta sequedad, resultando un residuo (219 mg) en forma de un aceite pegajoso de color pardo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Un tubo de microondas 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (254 mg, 1,16 mmol), el residuo obtenido anteriormente (219 mg), agua destilada (315 pl, 17,5 mmol) y 1, 2-dimetoxietano (3 mL). Se burbujeo gas nitrogeno a traves durante 10 minutos. Bajo atmosfera de nitrogeno se anadieron carbonato de cesio (1,14 g, 3,49 mmol), acetato de paladio(II) (13,2 mg, 0,0582 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (33,4 mg, 0,0931 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. El producto se extrajo con diclorometano y se reunieron las capas organicas, se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de silice (elucion en gradiente, 5 a 100% acetato de etilo en heptano) resultando el compuesto 13 (59 mg) en forma de un polvo blanco.
Metodo A; Rt: 1,17 min. m/z : 441,5 (M+H)+ Masa exacta: 440,2
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Compuesto 14
PoPd (582 mg, 1,16 mmol) se anadio a una mezcla agitada y purgada con N2 de 2-(1-cloroetiliden)malonato de dietilo (3,00 g, 13,6 mmol), acido 3-cloro-4-fluorofenilboronico (3,55 g, 20,4 mmol) y carbonato de potasio (5,64 g, 40,8 mmol) en tetrahidrofurano (16 mL) y agua (3 mL) en un tubo de microondas y se sello con un septo de silicio. La mezcla de reaccion se sometio a irradiacion de microondas durante 30 minutos a 100°C. Se dejo que el recipiente de reaccion alcanzara la temperatura ambiente y se diluyo con diclorometano (150 mL) y se lavo con agua, carbonato de sodio acuoso saturado y agua (3 x 40 mL), se seco (Na2SO4) y los disolventes se separaron. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (elucion en gradiente, 0 a 15% acetato de etilo en heptano) resultando el compuesto 14 (1,89 g).
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2,98 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (470 mg, 2,98 mmol), N,N-dimetilformamida seca (23,1 mL, 298 mmol) y terc.-butoxido de potasio (670 mg, 5,97 mmol). La mezcla de reaction se agito a 60°C durante 45 horas, se dejo que alcanzara la temperatura ambiente y se vertio en agua con hielo. La emulsion se neutralizo (pH = 7) con acido clorhidrico acuoso (1M) (verification con papel de pH) y se extrajo con diclorometano. Las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad. N,N-dimetilformamida se separo azeotropicamente con tolueno para proporcionar un aceite de color amarillo palido, que se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (10-40% acetato de etilo en heptano) resultando el compuesto 15 (681 mg) que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo E; Rt: 1,15 y 1,17 min. m/z : 390,1 (M+H)+ Masa exacta:
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Al compuesto 15 (650 mg, 1,67 mmol) se anadio oxicloruro de fosforo (2,14 mL, 23,0 mmol) en un vial cerrado. La mezcla de reaccion se agito y se calento a reflujo durante 30 minutos, se enfrio a temperatura ambiente y se concentro a sequedad. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio (3 x 10 mL) se seco sobre un isolute HMN y se concentro hasta sequedad, resultando el compuesto 16 (724 mg) en forma de una espuma amarilla que se utilizo como tal en las siguientes etapas. Metodo E; Rt: 1,23 min. m/z : 408,1 (M+H)+ Masa exacta: 407,1
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Un tubo de microondas 10 mL se cargo con una varilla de agitation, metiltrifluoroborato de potasio (389 mg, 3,18 mmol) compuesto 16 (250 mg, 0,612 mmol), carbonato de cesio (2,39 g, 7,35 mmol), agua destilada (500 ^L, 27,7 mmol) y tolueno (5 mL, 47,0 mmol) y gas nitrogeno se hizo burbujear a traves durante 10 minutos. Bajo una
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atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(II) (27,7 mg, 0,122 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (70,3 mg, 0,196 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 125°C durante 10 horas en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se calento mas convencionalmente a 120°C durante 24 horas, se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con CH2Cl2 (40 mL) y se lavo con carbonato de sodio saturado acuoso (2 x 5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho isolute HMN y se concentro hasta sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color pardo que se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de elucion, 0-5% de metanol: en diclorometano) dando como resultado el compuesto 17 (94 mg). Metodo A; Rt: 1,27 min. m/z : 388,3 (M+H)+ Masa exacta 387,1
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Compuesto 18
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (159 mg, 0,767 mmol), compuesto 16 (222 mg, 0,511 mmol), carbonato de cesio (500 mg, 1,53 mmol), agua (417 |jl,
23,1 mmol) y tolueno (3 mL) y se purgo con nitrogeno durante 5 minutos. Bajo atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio (II) (11,6 mg, 0,051 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (29,3 mg, 0,082 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 115°C durante 1 hora bajo una atmosfera de nitrogeno. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron mas acetato de paladio(II) (11,6 mg, 0,051 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (29,3 mg, 0,082 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 110°C durante 9 horas y despues se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con diclorometano (30 mL) y se lavo con carbonato de sodio saturado acuoso (2 x5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho isolute HMN y se concentro hasta sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color pardo, que se purifico utilizando cromatograffa en columna (MeOH al 0-2% en CH2Cl2) y (gradiente de elucion con 10-100% de acetato de etilo en heptano). Las fracciones del producto se reunieron, se concentraron y se secaron en un horno de vado a 50°C durante la noche, resultando el compuesto 18 (71 mg) en forma de un aceite pegajoso de color amarillo claro. Metodo A; Rt: 1,33 min. m/z : 473,4 (M+H)+ Masa exacta: 472,2; 1H RMN (400 MHz,86,7 °C, DMSO-d6) ppm 1,01 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 1,81 (s, 3 H), 2,51 (m., 4 H), 3,53 - 3,75 (m, 6 H), 3,93 (q, J=7,0 Hz, 2 H), 7,20 - 7,30 (m, 1 H), 7,33 - 7,43 (m, 1 H), 7,45 - 7,58 (m, 2 H), 7,89 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,08 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,65 (d, J=4,3 Hz, 1 H), 9,85 (s ancho, 1 H)
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Compuesto 19
En un tubo de presion sellado se cargo bajo una atmosfera de nitrogeno una varilla de agitacion compuesto 14 (952 mg, 3,297 mmol), hidrocloruro de 2-tiazolocarboximidamida (539 mg, 3,30 mmol), N,N-dimetilformamida seca (25 mL) y ferc.-butoxido de potasio (740 mg, 6,59 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 60°C durante 112 horas y se vertio en agua y la emulsion se neutralizo (pH = 5-6) con acido clorlddrico acuoso (1M) (verificacion con papel de pH) y se extrajo con diclorometano. Las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad y N,N-dimetilformamida se separo azeotropicamente con tolueno para proporcionar un aceite de color amarillo palido que se purifico utilizando cromatograffa en columna (acetato de etilo:heptano 10 a 40%) para
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proporcionar el compuesto 19 (379 mg) en forma de un polvo de color amarillo claro que se utilizo como tal en la siguiente reaccion.
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Compuesto 20
Al compuesto 19 (335 mg, 0,846 mmol) se anadio oxicloruro de fosforo (1,10 mL, 11,8 mmol) y la mezcla de reaccion agitada se calento a reflujo durante 30 minutos y se dejo enfriar a temperatura ambiente y se concentro a sequedad bajo un flujo de nitrogeno. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado y agua y se seco sobre un cartucho isolute HMN y se concentro a sequedad para proporcionar el compuesto 20 en forma de una espuma de color amarillo que se utilizo como tal en las siguientes etapas.
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Despues se anadio compuesto 20 (100 mg) seguido por carbonato de cesio (944 mg, 2,9 mmol) y metiltrifluoroborato de potasio (153 mg, 1,26 mmol) y la mezcla de reaccion se purgo durante otros dos minutos. A continuation se anadieron acetato de paladio(Il) (10.9 mg, 0,048 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (27.7 mg, 0.077 mmol) y la mezcla de reaccion se purgo durante otros dos minutos. El vial de microondas se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiation de microondas a 140°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se vertio en diclorometano-agua (50 mL-50 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano (2 x 50 mL). Los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado. El filtrado se concentro y se purifico por cromatograffa en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con EtOAc al 10% a 100% en heptanos y se purifico adicionalmente mediante HPLC preparativa (Uptisphere C18 ODB - 10 ^m, 200 g, 5 cm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN), resultando el compuesto 21 (4,6 mg).
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Compuesto 22
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Un tubo de presion se cargo con una varilla de agitacion, malonato de dietilo (15,4 g, 96,1 mmol), 4- fluorofenilacetileno (15,0 g, 125 mmol), cloruro de indio(IM) (1,06 g, 4,80 mmol) y o-xileno (35 mL) y se lavo con nitrogeno y se cerro. La mezcla de reaccion se agito en un bano de aceite a 135°C durante 17 horas y se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se utilizo como tal en la siguiente etapa.
Un tubo de presion se cargo con 3,5-fluoro-piridina-2-carboximidamida (2,91 g, 15,0 mmol), NMP (16,6 mL, 173 mmol) y ferc.-butoxido de potasio (3,06 g, 27,3 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos. Despues, se anadio parte de la mezcla de reaccion arriba obtenida en o-xileno (13,6 mmol, 5 mL de mezcla de reaccion en o-xileno) y la mezcla de reaccion se calento y se agito en un bano de aceite a 80°C durante 3 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro en vado para separar o-xileno. A continuation, se vertio en agua enfriada con hielo y se neutralizo (pH = 7) utilizando acido clorddrico acuoso (1M) (verification con papel de pH). La mezcla se agito durante 30 minutos y despues se extrajo con eter diisopropflico (3 x 50 mL). Los extractos organicos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se concentraron en vado y se secaron a lo largo del fin de semana en un horno de vado a 50°C. El aceite de color pardo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (40-100% diclorometano en heptano).Las fracciones deseadas se concentraron en vado, dando como resultado el compuesto 22 (740 mg) en forma de un polvo blanco.
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Compuesto 23
A un tubo con una varilla de agitacion se anadieron el compuesto 22 (740 mg, 1,86 mmol) y oxicloruro de fosforo (1,34 mL, 18,6 mmol) y el tubo se cerro con una tapa de Teflon. La mezcla de reaccion se calento a 120°C durante 30 minutos y se concentro a sequedad utilizando un flujo de nitrogeno a 40°C. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad, resultando el compuesto 23 (750 mg) en forma de un aceite pegajoso de color pardo oscuro que se utilizo como tal en la etapa siguiente.
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Compuesto 24
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)-metiltrifluoroborato de potasio (189 mg, 0,869 mmol), compuesto 23 (250 mg, 0,58 mmol), agua destilada (314 ^l, 17,4 mmol) y se burbujeo a traves 1,2-dimetoxietano (3 mL) y gas nitrogeno durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron carbonato de cesio (944 mg, 2,90 mmol), acetato de paladio(II) (13,1 mg, 0,058 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (33,2 mg, 0,0927 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas. El producto se extrajo con diclorometano, las capas organicas se reunieron, se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron a sequedad y se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de elucion con 5-80% acetato de etilo en heptano) resultando el compuesto 24 (65 mg) en forma de un polvo blanco que se seco durante la noche en un horno de vado a 50°C. Metodo A; Rt: 1,21 min. m/z : 475,5 (M+H)+ Masa exacta: 474,2; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ppm 0,95 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 1,79 (s, 3 H), 2,37 - 2,48 (m, 4 H), 3,52 (d, J=15,6 Hz, 1 H), 3,57 - 3,69 (m, 5 H), 3,79 - 3,96 (m, 2 H), 7,09 (t, J=8,9 Hz, 2 H), 7,36 - 7,46 (m, 2 H), 8,05 (ddd, J=10,9, 9,0, 2,3 Hz, 1 H), 8,65 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,61 (s, 1 H)
Compuesto 25
Un tubo de microondas se cargo con una varilla de agitacion, malonato de dimetilo (0,712 g, 5,39 mmol), 3-cloro-5- fluorofenilacetileno (1,00 g, 6,47 mmol), cloruro de indio(IN) (71,5 mg, 0,324 mmol), xileno (3 mL) y se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se agito entonces a 135°C durante 17 horas y se dejo enfriar a 5 temperatura ambiente. Se anadio cloruro de indio(III) (71,5 mg, 0,324 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 135°C durante 17 horas y, a continuation, se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se utilizo como tal.
A un tubo de presion cargado con 3,5-fluoro-piridina-2-carboximidamida (1,15 g, 5,93 mmol), N-metilpirrolidona (6,57 mL, 68,2 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno se anadio terc.-butoxido de potasio (1,21 g, 10,8 mmol). La mezcla 10 de reaccion se agito durante 30 minutos. Despues, se anadio parte de la mezcla de reaccion anterior en xileno (5,39 mmol, 3 mL de disolucion en xileno) y el tubo de presion se calento y se agito en un bano de aceite a 80°C durante 4 horas. La mezcla de reaccion se vertio en agua con hielo y se neutralizo (pH = 7) con acido clorhldrico acuoso (1M) (verification con papel de pH). La mezcla se agito durante 30 minutos y luego se extrajo con eter diisopropllico (3 x 50 mL). Los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron en 15 vaclo y el residuo se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente de elucion 40-100% de diclorometano en heptano). Las fracciones deseadas se concentraron en vaclo, resultando el compuesto 25 (400 mg) en forma de un aceite pegajoso de color pardo.
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Compuesto 26
Un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 25 (400 mg, 0,826 mmol), oxicloruro de fosforo (1,19 mL, 20 16,5 mmol) y se calento a 120°C durante 45 minutos. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad utilizando un
flujo de nitrogeno durante la noche a 40°C. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso, salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad, resultando el compuesto 26 (239 mg) en forma de un aceite pardo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente etapa.
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Compuesto 27
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (182 mg, 0,833 mmol), compuesto 26 (239 mg, 0,556 mmol), agua destilada (301 ^l, 16,7 mmol) y se burbujeo a traves 1,2-dimetoxietano (2,88 mL) y gas nitrogeno durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron carbonato de cesio (905 mg, 2,78 mmol), acetato de paladio(II) (12,6 mg, 0,0556 mmol) y butildi-1 - adamantilfosfina (31,9 mg, 0,0889 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. El producto se extrajo con diclorometano y las capas organicas se reunieron, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron a sequedad. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (5 a 70% acetato de etilo en heptano) para proporcionar el compuesto 27 (19 mg) en forma de un polvo de color amarillo-blanco. Metodo A; Rt: 1,26 min. m/z : 495,5 (M+H)+ Masa exacta: 494,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,89 (s, 3 H), 2,48 - 2,65 (m, 4 H), 3,53 (s, 3 H), 3,67 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,72 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,78 (t, J=4,6 Hz, 4 H), 6,90 (dt, J=8,3, 2,1 Hz, 1 H), 7,24-7,27 (m, 1 H), 7,30 (ddd, J=10,0, 7,9, 2,4 Hz, 1 H), 8,35 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,69 (s, 1 H)
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Compuesto 28
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con malonato de dimetilo (1,21 g, 9,17 mmol), 3-cloro-5- fluorofenilacetileno (1,70 g, 11,0 mmol), tricloruro de indio(III) (243 mg, 1,10 mmol), xileno (6 mL) y se lavo con nitrogeno y se cerro. La mezcla de reaccion se agito a 135°C durante 40 horas, se dejo enfriar a temperatura ambiente y se utilizo como tal en la siguiente etapa. Un matraz de 50 mL de fondo redondo se cargo con hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (1,52 g, 9,62 mmol), dimetilformamida (8,98 mL) y carbonato de sodio (2,91 g, 27,5 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuation, se anadio la mezcla de reaccion en xileno obtenida anteriormente (9,17 mmol) y la mezcla obtenida se calento y se agito a 60°C durante la noche. La mezcla se vertio en agua con hielo y se agito durante 30 minutos y se extrajo con eter diisopropflico (3 x 50 mL). Los extractos organicos reunidos se secaron (Na2SO4), se concentraron a presion reducida y el residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de elucion 30 a 100% diclorometano: en heptano). Las fracciones deseadas se concentraron en vado, resultando el compuesto 28 (1,14 g) en forma de un aceite pardo.
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Compuesto 29
Bajo una atmosfera de nitrogeno un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 28 (1,14 g, 3,03 mmol) y oxicloruro de fosforo (4,37 mL, 60,7 mmol) y se calento a 120°C durante 45 minutos. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad utilizando un flujo de nitrogeno durante la noche a 40°C. El residuo se disolvio en 5 diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad para proporcionar un residuo que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Un tubo de microondas de 20 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (1,03 g, 4,72 mmol), el residuo obtenido anteriormente (969 mg, 2,36 mmol), agua destilada (1,28 mL, 70,9 mmol) y 1,2-dimetoxietano (12,3 mL, 118 mmol). Se burbujeo gas nitrogeno a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadieron 10 carbonato de cesio (4,62 g, 14.2mmol), acetato de paladio(II) (53,5 mg, 0,236 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (135 mg, 0,378 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 10 minutos en un horno de microondas bajo una atmosfera de nitrogeno. La capa de agua se extrajo con diclorometano, las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sHice (elucion en gradiente 5 a 50% acetato de etilo en 15 heptano) resultando el compuesto 29 (453 mg). Metodo A; Rt: 1,30 min. m/z : 459,5 (M+H)+ Masa exacta: 458,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,87 (s, 3 H), 2,52 - 2,69 (m, 4 H), 3,50 (s, 3 H), 3,69 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,76 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,82 (t, J=4,5 Hz, 4 H), 6,90 (dt, J=8,3, 2,0 Hz, 1 H), 7,07 (dt, J=10,1, 1,9 Hz, 1 H), 7,24 (t, J= 1,8 Hz, 1 H), 7,38 (ddd, J=7,5, 5,0, 0,9 Hz, 1 H), 7,75 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,18 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,60 (d, J=4,8 Hz, 1 H), 10,14 (s, 1 H).
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Compuesto 30
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Compuesto 29 (175 mg, 0,378 mmol) y acetato de potasio (148 mg, 1,51 mmol) se disolvieron en metanol (50 mL) y la mezcla de reaccion se agito y se purgo con gas nitrogeno durante 5 minutos. Se anadio paladio sobre carbono (10%, 201 mg, 0,189 mmol) a la disolucion que se agito bajo atmosfera de hidrogeno durante 2 horas. La mezcla de reaccion se filtro sobre dicalite bajo una atmosfera de nitrogeno y los solidos se lavaron con metanol. El filtrado se concentro a sequedad y el residuo obtenido se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (elucion en gradiente 5-65% acetato de etilo en heptanos;) resultando compuesto 30 (66 mg) y compuesto 31 (13 mg). Compuesto 30: Metodo A; Rt: 1,18 min. m/z : 425,5 (M+H)+ Masa exacta: 424,2;1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,90 (s, 3 H), 2,51 - 2,68 (m, 4 H), 3,47 (s, 3 H), 3,67 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,74 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,81 (t, J=4,5 Hz, 4 H), 6,79 - 6,91 (m, 1 H), 7,13 - 7,20 (m, 1 H), 7,21 - 7,26 (m, 2 H), 7,36 (ddd, J=7,5, 5,0, 1,1 Hz, 1 H), 7,73 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,19 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,59 (ddd, J=4,8, 1,8, 0,8 Hz, 1 H), 10,05 (s, 1 H) Compuesto 31: Metodo A; Rt: 1,12 min. m/z : 340,4 (M+H)+ Masa exacta: 339,1
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THF (300 mL) se anadio lentamente a TiCU (1 M en diclorometano; 20,3 mL 184,0 mmol) en un bano de hielo. Se anadio CCU (4 mL). Luego se anadio una mezcla de 2,2,2,4-tetrafluoro-acetofenona (18,9 g, 98,1 mmol) y malonato de dietilo (15,7 g, 98,1 mmol) a una temperatura entre 0-5°C. El recipiente se enjuago con CCU (1 mL). La mezcla de reaccion se agito durante 90 minutos a temperatura ambiente. Luego se anadio gota a gota piridina (30,7 mL) durante 5 minutos. La mezcla de reaccion se agito durante 90 minutos a temperatura ambiente. Se anadio agua hasta que el precipitado blanco se disolvio por completo. La mezcla se extrajo dos veces con eter diefilico (250 mL). La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice utilizando una elucion en gradiente desde 0 hasta 10% EtOAc en heptano. Las fracciones puras se reunieron y se concentraron, resultando 2-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluorofenil)etilideno)malonato de dietilo en forma de un lfquido transparente (5,35 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ppm 0,88 (t, J=1,0 Hz, 3 H), 1,27 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 3,99 (q, J=7,2 Hz, 2 H), 4,33 (q, J=7,1 Hz, 2 H), 7,28 - 7,37 (m, 2 H), 7,37 - 7,45 (m, 2 H).
2-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluorofenil)etilideno)malonato de dietilo (15,4 mmol), (2,43 g, 15,4 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida, acetato de potasio (2,27 g; 23.1 mmol ) en DMF (23 mL) se agito y se calento a 110°C durante 2 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vado. El residuo se recogio en agua (50 mL) y diclorometano (50 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de isolute HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice utilizando un gradiente de 1 hasta 10% de metanol. Las fracciones de producto se recogieron y se concentraron. Las fracciones impuras se cristalizaron en mezclas de heptano/acetato de etilo 90/10. Los polvos blancos se separaron por filtracion y se secaron en vado durante la noche a 50°C, resultando el compuesto 32 (2,33 g). Los filtrados se reunieron y se concentraron, resultando un residuo oleoso (2,06 g) que se purifico adicionalmente por HPLC Prep en (RP Vydac Denali C18- 10 pm, 200 g, 5 cm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN), se recogieron las fracciones deseadas, se evaporaron, se disolvieron en MeOH y se evaporaron de nuevo, resultando mas compuesto 32 (1,48 g) en forma de un polvo blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) ppm 0,74 (t, J=7,0 Hz, 2 H), 1,14 (t, J=7,2 Hz, 1 H), 3,68 -3,83 (m, 1 H), 4,07 - 4,19 (m, 1 H), 4,57 - 4,65 (m, 1 H), 7,20 - 7,37 (m, 2 H), 7,61 - 7,81 (m, 2 H), 8,00 (dd, J=8,8, 5,5 Hz, 1 H), 8,05 -8,14 (m, 1 H), 8,37 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,47 (dt, J=7,8, 1,0 Hz, 1 H), 8,68 -8,78 (m, 1 H), 11,25 (s, 1 H), 11,42 (s, 1 H)
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Compuesto 33
Compuesto 32 (2,29 g, 5.48 mmol) disuelto en oxicloruro de fosforo (30 mL) se calento a reflujo durante la noche. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se disolvio en CH2Cl2 (50 mL) y se vertio en disolucion de NaHCO3. La mezcla se agito vigorosamente durante 5 minutos. La capa organica se seco sobre un cartucho de isolute HM-N y se 5 concentro. El residuo se disolvio en una pequena cantidad de CH2Cl2 y se sometio a cromatograffa en columna de gel de s^lice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc. Las fracciones de producto se recogieron y se concentraron, resultando el compuesto 33, que se utilizo como tal en la siguiente reaccion.
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Compuesto 34
Enantiomeros del compuesto racemico 34: compuesto 34a y compuesto 34b
10 Se burbujeo nitrogeno a traves de una mezcla de compuesto 33 (0,48 g, 1,04 mmol), (morfolin-4- il)metiltrifluoroborato de potasio (0,34 g, 1,56 mmol), carbonato de potasio (0,216 g, 1,56 mmol), dioxano (47 mL) y agua destilada (9 mL). Se anadio bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (0,16 g, 0,31 mmol) y la mezcla de reaccion se calento en un microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se concentro, se disolvio en agua y CH2Cl2. La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante 15 cromatograffa en columna, proporcionando el compuesto 34 (320 mg) que se utilizo para la separacion de
enantiomeros en SFC. Parte del residuo (253 mg) se separo en enantiomeros mediante SFC preparativa (Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en MeOH y se evaporaron de nuevo, resultando el compuesto 34a (98,5 mg) y el compuesto 34b (89 mg) 1H RMN (400 MHz, CDCla-d) ppm 1,00 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 2,51 -2,65 (m, 4 H), 3,70 (s, 2 H), 3,81 (t, J=4,5 Hz, 4 H), 20 3,95 (dddd, J=18,3, 11,1, 7,2, 3,6 Hz, 2 H), 6,95 -7,04 (m, 2 H), 7,42 (ddd, J=7,5, 4,9, 1,1 Hz, 1 H), 7,50 (dd, J=8,3,
5,3 Hz, 2 H), 7,79 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,29 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,62 (d, J=4,8 Hz, 1 H), 10,39 (s ancho, 1 H). Metodo E; Rt: 1,26 min. m/z : 493,2 (M+H)+ Masa exacta: 492,2; SFC: OJ-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: MeOH al 5% (que contema 0,2% de iPrNH2) mantener 15,00 min; Temperatura de la columna: 30°C 34a: 2,57 min; 34b: 3,55 min.
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Compuesto 35
Se burbujeo nitrogeno a traves de una disolucion de compuesto 33 (145 mg, 0,314 mmol), y SnMe4 (112 mg, 0,628 mmol) en DMF (2 mL) durante 10 minutos. Luego se anadio bis(tri-t-butMfosfina)paladio(0) (80,3 mg, 0,157 mmol) y la mezcla de reaccion se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo obtenido se disolvio en CH2Cl2 (25 mL), se lavo con agua (2 veces), se seco sobre un cartucho de isolute HM-N y se concentro. El residuo se disolvio en diclorometano, se filtro y se concentro a sequedad en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando elucion en gradiente de 10 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se recogieron y concentraron a sequedad. El residuo se purifico de nuevo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando CH2Ch como eluyente. Las fracciones de producto se recogieron y concentraron. El residuo resultante se purifico mediante HPLC Prep en (RP SunFire Prep C18 OBD-10 |jm, 30x150mm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN), resultando el compuesto 35 (36 mg). Metodo E; Rt: 1,19 min. m/z : 408,2 (M+H)+ Masa exacta: 407,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) ppm 1,00 (t, J=7,2 Hz, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 3,87 -4,02 (m, 2 H), 7,12 -7,23 (m, 2 H), 7,53 (dd, J=8,5, 5,5 Hz, 2 H), 7,59 - 7,66 (m, 1 H), 7,94 - 8,01 (m, 1 H), 8,13 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,65 - 8,74 (m, 1 H), 10,10 (s, 1 H)
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Compuesto 36
5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (20 g, 133 mmol) y malonato de dietilo (13,5 g, 146 mmol) se disolvieron en THF seco (560 mL). TiCl4 (29,3 g, 266 mmol) en CH2Ch seco (260 mL) se anadio gota a gota a 0°C bajo N2. Despues de la adicion, se anadio piridina (56 mL) gota a gota a 0°C bajo N2. La mezcla se agito durante una noche a 20°C. El solido se separo mediante filtracion. El filtrado se concentro en vado y se anadio acetato de etilo (400 mL). El precipitado resultante se separo mediante filtracion. El filtrado se lavo con salmuera (2 x 200 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en alto vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (gradiente de eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo: de 100:0 a 10:1) resultando un residuo (9,8 g). El producto obtenido se purifico adicionalmente mediante cromatograffa lfquida de alta resolucion (C18, eluyente: CH3CN/H2O desde 15/85 a 45/55 con HCl al 0,1% como tampon). Las fracciones puras se recogieron y la mezcla se basifico con NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volatiles se separaron en vado. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 mL). La capa organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado, resultando el compuesto 36 (5 g).
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Compuesto 37
Una mezcla del compuesto 36 (7 g, 23,9 mmol), piridina-2-carboximidamida (5,7 g) y Na2CO3 (7,6 g, 71,8 mmol) en DMF (70 mL) se agito durante la noche a 60°C bajo N2. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se suspendio en diclorometano (100 mL) y el precipitado se separo mediante filtracion. El filtrado se concentro y se 5 purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice. (Gradiente de eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo: desde 100:0 a 60:40) resultando el compuesto 37 (1,78 g). Metodo B; Rt: 1,12 min. m/z : 368,1 (M+H)+ Masa exacta: 367,1
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Compuesto 38
Compuesto 37 (1,58 g, 4,3 mmol) en POCl3 (7,9 mL, 86 mmol) se agito durante 2 horas a 120°C. La mezcla de 10 reaccion se concentro a sequedad. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano (50 mL). La capa organica se lavo con disolucion saturada de NaHCO3 acuosa (3x 20 mL) y salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo: desde 100:0 a 70:30), resultando el compuesto 38 (1,1 g). Metodo B; Rt: 1,19 min. m/z : 386,1 (M+H)+ Masa exacta: 385,1
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Una mezcla del compuesto 38 (0,1 g, 0,26 mmol), trifluoro(morfolinometil)borato de potasio (0,11 g, 0,52 mmol), Pd(OAc)2 (0,006 g, 0,026 mmol), butildi-1-adamantilfosfina (0,015 g, 0,042 mmol) y Cs2CO3 (0,51 g, 1,55 mmol) en DME (1,4 mL) y H2O (0,14 mL) se agito bajo irradiacion de microondas durante 20 minutos a 140°C bajo N2. Se anadieron agua (5 mL) y diclorometano (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con agua (2 x 5 mL). La capa 20 organica se lavo con HCl 1 N (5 mL). La capa acuosa se lavo con diclorometano (2 x 5 mL) y se basifico con NaHCO3 a pH = 7 ~ 8. La mezcla se extrajo con diclorometano (15 mL). La capa organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado, resultando el compuesto 39 (0,1 g). Metodo C; Rt: 3,24 min. m/z : 451,2 (M+H)+ Masa exacta: 450,2
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1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 9,99 (s ancho, 1 H) 8,49 - 8,69 (m, 1 H) 8,16 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H) 7,71 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H) 7,35 (ddd, J=7,5, 5,0, 1,1 Hz, 1 H) 7,04 (dd, J=8,3, 5,5 Hz, 1 H) 6,86 -6,96 (m, 1 H) 6,73 - 6,86 (m, 1 H) 3,88 (q, J=7,3 Hz, 2 H) 3,80 - 3,85 (m, 4 H) 3,81 (d, J=16,6 Hz, 1 H) 3,71 (d, J=16,6 Hz, 1 H) 3,16 - 3,27 (m, 1 H) 2,92 - 3,03 (m, 1 H) 2,64 - 2,71 (m, 1 H) 2,57 - 2,63 (m, 4 H) 2,28 - 2,38 (m, 1 H) 0,89 (t, J=7,2 Hz, 3 H)
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Compuesto 40
Una mezcla de compuesto 38 (0,2 g, 0,52 mmol), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano (0,13 g, 1,04 mmol), catalizador PEPPSI(TM)-IPr (0,035 g, 0,052 mmol) y K2CO3 (0,21 g, 1,55 mmol) en THF seco (4 mL) se agito bajo irradiacion de microondas durante 5 minutos a 150°C bajo atmosfera de N2. La mezcla se filtro. El filtrado se concentro a sequedad y se purifico mediante cromatografia en capa fina (eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo = 2:1). El producto obtenido se purifico adicionalmente mediante cromatografia fiquida de alta resolucion (C18, eluyente: CH3CN/H2O desde 15/85 a 45/55 con HCl al 0,1% como tampon). Las fracciones puras se recogieron y la mezcla se evaporo a sequedad, resultando el compuesto 40 (como una sal de HCl) (60 mg). Metodo C; Rt: 3,05 min. m/z : 366,1 (M+H)+ Masa exacta: 365,2
Compuesto 41
POPd (126 mg, 0,250 mmol) y carbonato de potasio (2,08 g, 15,0 mmol) se anadieron a una mezcla en agitacion purgada con nitrogeno de 2-(1-cloroetiliden)malonato de dietilo (1,10 g, 5,00 mmol), acido 2-cloro-4- fluorofenilboronico (1,57 g, 9,00 mmol), tetrahidrofurano (10,0 mL) y agua (1,0 mL) en un tubo de microondas. La mezcla de reaccion se sello con un septo de silicio y se sometio a irradiacion de microondas durante 60 minutos a 100°C. La reaccion se repitio un total de 5 veces, los recipientes de reaccion separados se dejaron enfriar a temperatura ambiente, las mezclas de reaccion se combinaron, se diluyeron con heptano (600 mL) y se lavaron con carbonato de sodio (2 x 100 mL), agua (1 x 50 mL) y salmuera (50 mL). Despues de secar (MgsO4) los disolventes se separaron en vado. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con acetato de etilo 0 a 6% en heptano, resultando 2-(1-(2-cloro-4-fluorofenil)etilideno)malonato de dietilo en forma de un fiquido (860 mg). Un tubo de presion con una varilla de agitacion magnetica, hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (0,594 g, 3,77 mmol) y N-metil-2-pirrolidona (10 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno se enfrio a 0°C. Se anadio terc.-butoxido de potasio (0,564 g, 5,03 mmol) bajo una atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se anadio 2-(1-(2-cloro-4- fluorofenil)etilideno)malonato de dietilo (860 mg, 2,51 mmol) en N-metil-2-pirrolidona (5 mL) y el tubo de presion se calento y se agito en un bano de aceite a 88°C durante 44 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua (200 mL) y se anadio acido clorddrico (1N, 4 mL). La mezcla se agito durante 5 minutos y se extrajo con eter diisopropflico (3 x 100 mL). Los extractos organicos reunidos se secaron (Na2SO4) y se concentraron a presion reducida. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con 30 a 100% diclorometano en heptanos. Las fracciones deseadas se concentraron en vado, resultando 4-(2-cloro-4-fluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(piridin-2-il)-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5- carboxilato de etilo (311 mg). Bajo una atmosfera de nitrogeno, 4-(2-cloro-4-fluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(piridin-2-il)-
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1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxMato de etilo (311 mg, 0,798 mmol) y oxicloruro de fosforo (1,48 mL, 16,0 mmol) se agitaron y calentaron a 110°C durante 30 minutos. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se concentro a sequedad en vado. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano (50 mL), se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (2 x 20 mL) y salmuera (20 mL). Despues de secar (Na2SO4), los compuestos volatiles se separaron en vado, resultando un residuo (260 mg) que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Un tubo de microondas (10 mL) se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (128 mg, 0,588 mmol), el residuo arriba obtenido (260 mg, 0,452 mmol), agua (245 ^l, 13,6 mmol) y 1,2-dimetoxietano (2,35 mL) y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron bis(tri-terc.- butilfosfina)paladio(0) (23,1 mg, 0,0452 mmol) y carbonato de potasio (281 mg, 2,04 mmol) y la mezcla de reaccion se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos. Despues de enfriar, se hizo burbujear gas nitrogeno a traves de la mezcla de reaccion y se anadio mas butildi-1-adamantilfosfina (24,3 mg, 0,0678 mmol) y acetato de paladio(II) (10,2 mg, 0,0452 mmol). La mezcla de reaccion se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos bajo una atmosfera de nitrogeno. La capa de agua se extrajo con diclorometano, las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con acetato de etilo 5% a 50% en heptano, resultando el compuesto 41 (73 mg). Metodo D; Rt: 1,22 min. m/z : 473,1 (M+H)+ Masa exacta: 472,2 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 0,92 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 1,92 (s, 3 H), 2,53 - 2,67 (m, 4 H), 3,67 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,77 - 3,90 (m, 7 H), 6,97 (td, J=8,4, 2,8 Hz, 1 H), 7,04 (dd, J=8,8, 2,8 Hz, 1 H), 7,36 (ddd, J=7,5, 5,0, 1,1 Hz, 1 H), 7,61 (dd, J=9,0, 6,3 Hz, 1 H), 7,72 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,13 (d ancho, J=7,8 Hz, 1 H), 8,61 (d ancho, J=4,5 Hz, 1 H), 10,19 (s, 1 H)
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de dietilo (3,00 g, 13,6 mmol), acido 2,4-difluorofenilboronico (3,22 g, 20,4 mmol), carbonato potasico (5,64 g, 40,8 mmol), tetrahidrofurano (16,0 mL) y agua (3,00 mL) en un tubo de microondas. La mezcla de reaccion se sello y se sometio a irradiacion de microondas durante 1 hora a 100°C. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se diluyo con diclorometano (150 mL), se lavo con agua, carbonato de sodio saturado acuoso y agua (3 x 40 mL), se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con acetato de etilo 0 a 15% en heptano, resultando 2-(1-(2,4- difluorofenil) etilideno)malonato de dietilo en forma de un aceite (1,06 g).
Bajo una atmosfera de nitrogeno, un tubo de presion se cargo con una varilla de agitacion magnetica, hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (268 mg, 1,70 mmol), N,N-dimetil-formamida (13,2 mL), terc.-butoxido de potasio (382 mg, 3,41 mmol) y 2-(1-(2,4-difluorofenil)etilideno) malonato de dietilo (508 mg, 1,70 mmol). La mezcla de reaccion se sello y se agito a 60°C durante 45 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua con hielo (200 mL) y la emulsion resultante (pH = 7) se neutralizo con acido clorddrico (1N). La mezcla se extrajo con diclorometano. Los extractos organicos reunidos se secaron (Na2SO4) y se concentraron a presion reducida. N,N-dimetilformamida se co-evaporo utilizando tolueno y el aceite amarillo resultante se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 10 a 40%. Las fracciones deseadas se concentraron en vado, proporcionando 4-(2,4-difluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(piridin-2-il)- 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxilato de etilo (203 mg). Bajo una atmosfera de nitrogeno, un tubo se cargo con una varilla de agitacion, 4-(2,4-difluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(piridin-2-il)-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxilato de etilo (137 mg, 0,367 mmol) y oxicloruro de fosforo (0,509 mL, 5,48 mmol). La mezcla se agito y se calento a reflujo durante 30 minutos. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro a sequedad. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (3x10 mL), se seco (isolute HM-N) y se evaporo, resultando 6-cloro-4-(2,4-difluorofenil)-4-metil-2-(piridin-2-il)-1,4-dihidropirimidina- 5-carboxilato de etilo (154 mg) en forma de un polvo amarillo que se utilizo como tal en la siguiente etapa.
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, (morfolin-4-il)-metiltrifluoroborato de potasio (381 mg, 1,84 mmol), 6-cloro-4-(2,4-difluorofenil)-4-metil-2-(piridin-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5-carboxilato de etilo (154 mg, 0,354 mmol), carbonato de cesio (1,38 g, 4,25 mmol), agua destilada (300 ^L) y tolueno (3 mL). Se
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burbujeo gas nitrogeno a traves durante 5 minutos y bajo una atmosfera de nitrogeno se anadieron acetato de paladio(M) (16,0 mg, 0,0708 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (40,6 mg, 0,113 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 120°C durante 18 horas bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con diclorometano (50 mL). La mezcla se lavo con carbonato de sodio saturado acuoso (2 x 5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro a sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color pardo. Este residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice mediante elucion en gradiente con 0 a 2% de metanol (amomaco 7N) en diclorometano y de nuevo mediante gradiente de elucion con 0 a 2% de metanol en diclorometano, resultando el compuesto 42 (81 mg) despues de secar durante la noche en estufa de vado a 50°C. Metodo A; Rt: 1,23 min. m/z : 457,4 (M+H)+ Masa exacta:456,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d): ppm 1,00 (t, J=7,2 Hz, 3 H), 1,91 (s, 3 H), 2,54 - 2,65 (m, 4 H), 3,65 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,77 - 3,85 (m, 5 H), 3,92 (m, 2 H), 6,69 (ddd, J=11,7, 9,0, 2,6 Hz, 1 H), 6,78-6,86 (m, 1 H), 7,36 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,44 (td, J=9,0, 6,5 Hz, 1 H), 7,72 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,14 (dt, J=7,8, 1,1 Hz, 1 H), 8,60 (ddd, J=4,8, 1,5, 0,8 Hz, 1 H), 10,10 (s ancho, 1 H)
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Compuesto 43a
Procedimiento C:
Una mezcla de HOAc (3,82 mL, 66,74 mmol), 4,4-dimetil-3,4-dihidro-2H-naftalen-1-ona (5 g, 28,7 mmol), cianoacetato de etilo (3,37 mL, 31,6 mmol), benceno (19 mL), beta-alanina (0,639 g, 7,17 mmol) se calento a reflujo en un aparato Dean Stark durante ~ 65 horas. La mezcla de reaccion se vertio lentamente en H2O (100 mL) que contema NaHCO3 (12,6 g) y se agito durante 20 minutos. La capa acuosa resultante se extrajo con tolueno. Los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron en vado, resultando el compuesto 43a en forma de un aceite que se utilizo como tal.
Otros compuestos obtenidos utilizando condiciones similares a las descritas en el procedimiento C:
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Compuesto 43b utilizando 7-fluoro-3,4-dihidronaftalen-1(2H)-ona como material de partida
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Compuesto 43c utilizando 6-fluoro-3,4-dihidronaftalen-1(2H)-ona como material de partida
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Compuesto 43d utilizando 3,4-dihidronaftalen-1(2H)-ona como material de partida y 17 horas de tiempo de reaccion.
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Compuesto 43e utilizando 5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona como material de partida
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Compuesto 43f utilizando 2,3-dihidro-1H-inden-1-ona como material de partida
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Compuesto 43g utilizando croman-4-ona como material de partida y 20 horas de tiempo de reaccion
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Compuesto 44
10 Compuesto 43a (mezcla en bruto, 3 g, 11,14 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (1,93 g, 12,25 mmol), Na2CO3 (1,77 g, 16,7 mmol) y DMF (13,6 mL) se calentaron en un tubo de presion en un bano de aceite a 75°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion resultante se enfrio a temperatura ambiente y se concentro en vado. El residuo de resultante se recogio en agua-CH2Ch (150 mL/150 mL) y la capa acuosa se extrajo con CH2Ch (2 x 100 mL). Los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), filtraron y concentraron en vado. El 15 residuo obtenido se cromatografio mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (C^Chisocratico).
Las fracciones deseadas se concentraron en vado, proporcionando el compuesto 44, que se utilizo como tal. Metodo A; Rt: 1,09 min. m/z : 345,4 (M+H)+ Masa exacta: 344,2;
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Compuesto 45
Procedimiento D:
Compuesto 43b (9,4 g, 36,3 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (6,86 g, 43,5 mmol), KOAc (5,34 g,
54,4 mmol) y DMF (87 mL) se calentaron en un tubo de presion a 110°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion 5 resultante se enfrio a temperatura ambiente y se concentro en vado. El residuo de se recogio en agua-CH2Cl2 (150 mL-150 mL). La capa acuosa se extrajo dos veces (CH2Cl2, 2 x 100 mL) y los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado, proporcionando un aceite de color pardo. Este aceite se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice en columna (gradiente de elucion: EtOAc-heptano 1:9 a 3:7) proporcionando el compuesto 45 (4,7 g) que se utilizo como tal. Metodo E; Rt: 0,95 min. m/z : 335,1 (M+H)+ 10 Masa exacta: 334,1;
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Compuesto 46
Preparado de acuerdo con el procedimiento D, partiendo del compuesto 43c, purification mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de elucion: CH2Cl2-MeOH 100:0 -> 98:2). Metodo A; Rt: 0,99 min. m/z : 335,3 (M+H)+ Masa exacta: 334,1;
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Compuesto 47
Preparado de acuerdo con el procedimiento D, partiendo del compuesto 43d Metodo A; Rt: 0,97 min. m/z : 317,3 (M+H)+ Masa exacta: 316,1;
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Compuesto 48
Procedimiento E:
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EtOH (30 mL) se saturo con HCl (se burbujeo gas a traves del mismo) durante 90 minutos. Se anadio compuesto 44 (0,5 g, 1,45 mmol) y la mezcla de reaccion se agito durante 20 horas en un bano de aceite a 60°C. La mezcla de reaccion resultante se concentro en vado y se recogio en CH2CI2 (50 mL)/H2O (50 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con CH2G2 (2 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado proporcionando el compuesto 48 (560 mg) en forma de un aceite que se utilizo como tal. Metodo A; Rt: 1,24 min. m/z : 392,5 (M+H)+ Masa exacta: 391,2;
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Compuesto 49
Compuesto 45 (1 g, 2,991 mmol) en EtOH (10 mL) en un tubo de presion se enfrio en un bano de hielo bajo una corriente suave de nitrogeno. La mezcla se trato gota a gota con H2SO4 concentrado (3,2 mL, 59,8 mmol) y el vial se tapo. La mezcla de reaccion resultante se calento en un bano de aceite a 40°C durante 20 horas. La mezcla de reaccion resultante se enfrio a temperatura ambiente y se anadio H2O (20 mL). NaHCO3 (10,05 g, 119,6 mmol) se anadio en porciones con agitacion. Se extrajo la capa acuosa (3 x 100 mL) y los extractos reunidos se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado. El residuo obtenido se cromatografio utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (CH2Ch-MeOH 98:2 isocratico). Las fracciones deseadas se concentraron en vado, proporcionando el compuesto 49, que se utilizo como tal.
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Compuesto 50
Procedimiento F:
Compuesto 48 (560 mg) se trato con POCl3 (5 mL, 53,8 mmol) y esto se agito en un bano de aceite a 105-110°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion resultante se concentro en vado. El residuo se trato con hielo-agua y despues se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre MgSO4 y se concentraron en vado. Se purifico el residuo mediante cromatografia en columna de gel de sflice (CH2Cl2 isocratico), proporcionando el compuesto 50 (359 mg) en forma de un solido amarillo que se utilizo como tal. Metodo E; Rt: 1,34 min. m/z : 410,2 (M+H)+ Masa exacta: 409,2;
Preparados de forma similar a como se describe en el procedimiento F:
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(M+H)+ Masa exacta: 399,1;
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Procedimiento G:
Un vial de microondas se cargo con compuesto 50 (0,1 g, 0,244 mmol), CS2CO3 (0,477 g, 1,464 mmol), (morfolin-4- il)metMtrifluoroborato de potasio (0,101 g, 0,488 mmol), agua (0,13 mL, 7,32 mmol) y DME (1,3 mL, 12,2 mmol). Esta mezcla se purgo con nitrogeno durante 5 minutos. A continuation, se anadio acetato de paladio(II) (0,0055 g, 0,0244
mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (0,014 g, 0,039 mmol) y la mezcla de reaccion se purgo durante otros 2 minutos. El vial se tapo y se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla de reaccion resultante se concentro en vacfo y el residuo se recogio en H2O-CH2Q2 (50 mL/50 mL) y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con CH2Ch (2 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4) y se concentraron en vacio. El 5 residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de elucion de EtOAc-heptano 10:90 -> 50:50). Las fracciones deseadas se concentraron en vacfo proporcionando el compuesto 56 en forma de un polvo amarillo (44,7 mg). Metodo A; Rt: 1,34 min. m/z : 475,3 (M+H)+ Masa exacta:474,3;
1H RMN (600 MHz, CLOROFORMO-d): ppm 0,70 (t, J=7,1 Hz, 3 H), 1,35 (s, 3 H), 1,39 - 1,43 (m, 1 H), 1,44 (s, 3 H), 1,90 - 1,99 (m, 1 H), 2,45 -2,55 (m, 2 H), 2,57 -2,68 (m, 4 H), 3,68 -3,74 (m, 1 H), 3,71 (d, J=16,5 Hz, 1 H), 3,83 10 (t, J=4,6 Hz, 4 H), 3,85 - 3,91 (m, 1 H), 3,88 (d, J=16,4 Hz, 1 H), 7,05 (ddd, J=7,6, 7,2, 1,4 Hz, 1 H), 7,13 (ddd,
J=7,9, 7,1, 1,5 Hz, 1 H), 7,17 (dd, J=7,8, 1,5 Hz, 1 H), 7,32 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,2 Hz, 1 H), 7,35 (dd, J=7,9, 1,4 Hz, 1 H), 7,68 (td, J=7,7, 1,7 Hz, 1 H), 8,18 (dt, J=8,0, 1,1 Hz, 1 H), 8,57 (ddd, J=4,8, 1,7, 0,9 Hz, 1 H), 10,01 (s, 1 H)
Preparados de acuerdo con el procedimiento G:
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15 Compuesto 57 partiendo del compuesto 51. Metodo F; Rt: 6,63 min. m/z : 428,2 (M+H)+ Masa exacta: 427,2;
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Compuesto 58 partiendo del compuesto 52
Se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice con CH2Ch-MeOH 100:0 -> 98:2), se trituro con heptano/eter diisopropilico. Metodo A; Rt: 1,20 min. m/z : 418,5 (M+H)+ Masa exacta: 417,2;
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Compuesto 59 partiendo de compuesto 53; 1H RMN (600 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 0,83 (t, J=7,1 Hz, 3 H), 1,71 - 1,78 (m, 1 H), 2,02 - 2,09 (m, 1 H), 2,23 - 2,30 (m, 1 H), 2,30 - 2,36 (m, 1 H), 2,56 - 2,68 (m, 4 H), 2,74 - 2,88 (m,
2 H), 3,74 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,80 - 3,86 (m, 6 H), 3,90 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 6,77 (td, J=8,4, 2,8 Hz, 1 H), 6,89 (dd, J=10,3, 2,7 Hz, 1 H), 7,03 (dd, J=8,4, 5,8 Hz, 1 H), 7,34 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,2 Hz, 1 H), 7,70 (td, J=7,7, 1,7 Hz, 1 H), 8,16 (dt, J=8,0, 1,1 Hz, 1 H), 8,58 (ddd, J=4,8, 1,7, 1,0 Hz, 1 H), 10,09 (s, 1 H); Metodo A; Rt: 1,38 min. m/z : 465,2 (M+H)+ Masa exacta: 464,2;
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Compuesto 60 partiendo del compuesto 54
Se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sHice mediante elucion en gradiente con EtOAc-heptano
10:90 a 50:50. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,93 -2,29 (m, 4 H), 2,54-2,61 (m, 4 H), 2,83 -2,95 (m, 2 H), 3,52 (d, Jab=15,1 Hz, 1 H), 3,56 (d, Jab=15,1 Hz, 1 H), 3,77-3,82 (m, 4 H), 6,80 - 6,91 (m, 2 H), 7,24 (dd, 10 J=8,7, 5,9 Hz, 1 H), 7,37 - 7,41 (m, 1 H), 7,75 (td, J=7,8, 1,5 Hz, 1 H), 8,20 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,59 (d, J=4,8 Hz, 1 H), 9,70 (s, 1 H). Metodo A; Rt: 1,19 min. m/z : 418,5 (M+H)+ Masa exacta: 417,2;
La mezcla racemica se separo en enantiomeros 60a y 60b mediante SFC preparativa sobre Chiralpak Diacel AD (30 x 250 mm). Fase movil (CO2, iPrOH con iPrNH2 al 0,2%), proporcionando compuesto 60a y compuesto 60b, ambos en forma de polvos amarillos. SFC: Columna: AD-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: iPrOH al 10% 15 (que contiene iPrNH2 al 0,2%) en CO2, mantener 15,00 min, Temperatura: 30°C, Rt: Compuesto 60a: 5,62 min, 60b: 8,72 min
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Compuesto 61 partiendo del compuesto 55; se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice mediante elucion en gradiente con EtOAc-heptano 10:90 a 50:50. Precipito en eter diisopropflico-CH3CN. Metodo A; 20 Rt: 1,17 min. m/z : 400,5 (M+H)+ Masa exacta: 399,2;
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Una disolucion de 4-fluoro-1-indanona (10 g, 66,6 mmol), malonato de dietilo (11,734 g, 73,3 mmol) en tetrahidrofurano (278 mL) se enfrio a 0°C bajo una atmosfera de nitrogeno. Tetracloruro de titanio (140 mL, 140 mmol, 1 M en diclorometano) se anadio gota a gota seguido de piridina (27,8 mL, 345 mmol). La mezcla resultante
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se agito durante la noche a temperatura ambiente. Despues de la filtracion, el filtrado se diluyo con acetato de etilo (300 mL). La capa organica se lavo con salmuera (3 x 200 mL), se seco (Na2SO4) y se evaporo. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 0 a 10%. Todas las fracciones deseadas se reunieron y se evaporaron hasta obtener un volumen de ~ 200 mL. Se anadio mas heptano y el precipitado naranja formado se filtro y se lavo con heptano. El filtrado obtenido se concentro a sequedad en vacio, resultando el compuesto 62 (8,81 g) en forma de un aceite naranja que solidifico al reposar.
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Compuesto 63
Bajo una atmosfera de nitrogeno, un matraz de fondo redondo se cargo con una varilla de agitacion magnetica, hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (9,50 g, 60,3 mmol), N,N-dimetil-formamida (120 mL) y carbonato de sodio (12,8 g, 121 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se anadio compuesto 62 (8,81 g, 30,1 mmol) y la mezcla de reaccion se sello con un septo de caucho y se calento a 70°C durante 17 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua con hielo (300 mL) y se extrajo con eter diisopropilico (3 x 200 mL). Los extractos organicos reunidos se secaron (Na2SO4) y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 0 a 100%. Las fracciones deseadas se concentraron en vacio y el residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice con acetato de etilo en heptano al 30%. Las fracciones deseadas se concentraron en vacio y el residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice con diclorometano 100%, resultando el compuesto 63 (430 mg)
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Compuesto 64
Un matraz de 100 mL de fondo redondo se cargo con compuesto 63 (430 mg, 1,17 mmol), metanol (14,9 mL) y KOtBu (197 mg, 1,76 mmol). La mezcla de reaccion se agito y se calento a 80°C durante 17 horas. La mezcla se concentro en vacio y el residuo obtenido se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano (3 x 100 mL). Los extractos reunidos se secaron (Na2SO4), se concentraron y se secaron, resultando el compuesto 64 (300 mg) en forma de una espuma solida que se utilizo como tal.
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Compuesto 65
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Bajo una atmosfera de nitrogeno, un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 64 (300 mg, 0,841 mmol) y oxicloruro de fosforo (1,17 mL, 12,6 mmol). La mezcla se agito y se calento a 120°C durante 30 minutos. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro a sequedad. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad en vado, resultando el compuesto 65 (311 mg) en forma de una espuma de color amarillo pardo que se utilizo como tal en la siguiente etapa.
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Compuesto 66
Enantiomeros del compuesto racemico 66: Compuesto 66a y Compuesto66b
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, sal interna (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato (287 mg, 1,61 mmol), compuesto 65 (300 mg, 0,807 mmol), carbonato de cesio (1,57 g, 4,84 mmol), agua (0,44 jL) y
1,2-dimetoxietano (4 mL) y se burbujeo nitrogeno gas a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadieron juntos acetato de paladio(II) (18,3 mg, 0,0807 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (46,3 mg, 0,129 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C en un horno de microondas. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio saturado acuoso (2 x 5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 5 a 100%, resultando el compuesto 66 (250 mg). Compuesto 66 (200 mg) se purifico adicionalmente mediante Prep SFC en (Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, metanol con iPrNH2 al 0,2%), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando el compuesto 66a (70 mg) y el compuesto 66b (80 mg) despues de secar durante la noche en un horno de vacfo a 50°C. Metodo A; Rt: 1,23 min. m/z : 437,5 (M+H)+ Masa exacta:436,2;
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 2,35 (ddd, J=13,1, 9,1, 3,9 Hz, 1 H), 2,56 -2,68 (m, 5 H), 2,96-3,12 (m, 1 H), 3,14 - 3,32 (m, 1 H), 3,42 (s, 3 H), 3,71 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,79 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,83 (t, J=4,5 Hz, 4 H), 6,80 -6,93 (m, 2 H), 7,12 (td, J=7,8, 5,0 Hz, 1 H), 7,34 (ddd, J=7,4, 4,9, 1,0 Hz, 1 H), 7,70 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,15 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,58 (d ancho, J=4,3 Hz, 1 H), 10,03 (s ancho, 1 H); SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: 5% EtOH (que contiene iPrNH2 al 0,2%) en CO2, mantener 15,00 min, Temperatura: 30°C, Rt: Compuesto 66a: 5,26 min, 66b: 8,34 min
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Compuesto 67
Partiendo del Compuesto 43e utilizando el procedimiento D, utilizando Na2CO3 en lugar de KOAc, calentamiento a 70°C durante 1 hora en lugar de 110°C durante 1 hora. La purificacion se realizo utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice con CH2O2 como eluyente.
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Compuesto 68
Preparado a partir del compuesto 67 utilizando el procedimiento F, calentamiento durante 1,5 horas a 100°C.
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Compuesto 69
Preparado de acuerdo con el procedimiento G. El compuesto se purifico utilizando cromatografia en columna de gel 5 de sflice (gradiente de elucion: CH2Cl2-MeOH 100:0 a 98:2).
Metodo A; Rt: 1,14 min. m/z : 404,2 (M+H)+ Masa exacta:403,2;
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 2,45 (ddd, J=13,2, 8,5, 5,8 Hz, 1 H), 2,50 - 2,67 (m, 5 H), 3,04 - 3,22 (m, 2 H), 3,52 (s, 2 H), 3,79 (t, J=4,8 Hz, 4 H), 6,88 (td, J=8,7, 2,3 Hz, 1 H), 6,95 (dd, J=8,8, 2,3 Hz, 1 H), 7,10 (dd, J=8,4, 5,1 Hz, 1 H), 7,39 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,0 Hz, 1 H), 7,75 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,19 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,57 - 10 8,62 (m, 1 H), 9,67 (s ancho, 1 H)
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Compuesto 70
Preparado de acuerdo con el procedimiento E, partiendo de compuesto 44, utilizando MeOH en lugar de EtOH. El residuo obtenido se utilizo sin purificacion adicional.
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Preparado de acuerdo con el Procedimiento G partiendo del compuesto 71, purificado mediante cromatografia en columna de gel de sflice utilizando gradiente de EtOAc-heptano 0:100 a 50:50 de elucion. Metodo A; Rt: 1,39 min. m/z : 461,2 (M+H)+ Masa exacta: 460,3; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 1,34 (s, 3 H), 1,40 - 1,47 (m, 1 H), 1,44 (s, 3 H), 1,90 -1,97 (m, 1 H), 2,44 -2,57 (m, 2 H), 2,57 -2,68 (m, 4 H), 3,29 (s, 3 H), 3,55 -3,98 (d, J=16,6
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Preparado de acuerdo con el procedimiento F, seguido del procedimiento G, partiendo del compuesto 73, purificado por cromatografia en columna de gel de sflice utilizando gradiente de elucion con CH2Cl2-MeOH 100:0 a 98:2). Metodo A; Rt: 1,27 min. m/z : 451,2 (M+H)+ Masa exacta: 450,2;
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d): ppm 1,72 - 1,82 (m, 1 H), 2,03 -2,10 (m, 1 H), 2,25 -2,38 (m, 2 H), 2,59 - 5 2,67 (m, 4 H), 2,83 - 2,90 (m, 2 H), 3,38(s, 3 H), 3,73 (d, J= 16,6 Hz, 1 H), 3,80 - 3,87 (m, 5 H), 6,74 - 6,83 (m, 2 H),
7,14-7,19 (m, 1 H), 7,32-7,37 (m, 1 H), 7,71 (td, J=7,8, 1,5 Hz, 1 H), 8,18 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,57-8,61 (m, 1 H), 9,99 (s, 1 H)
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Compuesto 75
Preparado partiendo del Compuesto 43f de acuerdo con el procedimiento D, utilizando Na2CO3 en lugar de KOAc, 10 calentamiento a 75°C durante 2 horas en lugar de 110°C durante 1 hora. La purification se realizo utilizando cromatografia en columna de gel de sflice con CH2Ch como eluyente.
Compuesto 76
Preparado de acuerdo con el procedimiento F, seguido del procedimiento G, partiendo del compuesto 75, purificado por cromatografia en columna de gel de sflice utilizando gradiente de elucion con CH2Cl2-MeOH 100:0 a 98:2). 15 Metodo A; Rt: 1,11 min. m/z : 386,2 (M+H)+ Masa exacta:385,2;
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 2,37 - 2,49 (m, 1 H), 2,50 - 2,61 (m, 5 H), 3,02 - 3,25 (m, 2 H), 3,52 (s, 2 H), 3,79 (t, J=4,8 Hz, 4 H), 7,12 -7,34 (m, 4 H), 7,38 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,0 Hz, 1 H), 7,74 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,20 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,59 (d, J=4,8 Hz, 1 H), 9,64 (s ancho, 1 H)
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Compuesto 77
20 Compuesto 43c (1000 mg, 3,86 mmol), 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida (727 mg, 4,63 mmol) y 1,4-dioxano (30 mL) se calentaron en un tubo de presion a 40°C durante 17 horas. La mezcla de reaction se enfrio a temperatura ambiente y se concentro en vado. El residuo obtenido se cromatografio mediante cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de acetato de etilo-heptano 1:9 a 10:0) proporcionando el compuesto 77 (670
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mg) en forma de un solido blanco que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo A; Rt: 0,98 min. m/z : 371,1 (M+H)+ Masa exacta:370,1.
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Compuesto 78
Un tubo de presion se cargo con metanol (25 mL). La mezcla se enfrio en un bano de hielo-agua. A continuacion, se hizo burbujear a traves HCl gas durante 30 minutos, mientras se continuaba el enfriamiento. Se anadio el compuesto 77 (670 mg) y agua (destilada, 78 |jL, 4,3 mmol) y el tubo de presion se cerro y se agito mientras se continuaba el enfriamiento durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se agito en un bano de aceite a 40°C durante el fin de semana. La mezcla de reaccion se concentro en vado, se recogio en CH2Ch- agua (50 mL/50 mL). La capa acuosa se extrajo dos veces mas (2 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron en vado, proporcionando el compuesto impuro 78 en forma de un aceite de color pardo que se utilizo como tal en la siguiente etapa.
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Compuesto 79
Compuesto 78 (693 mg) se disolvio en oxicloruro de fosforo (5 mL, 53,8 mmol) y esta mezcla se sometio a reflujo durante 1 hora en un bano de aceite a 110°C. La mezcla de reaccion de color pardo oscuro se concentro en vado, se trato con hielo-agua (50 mL) y la mezcla obtenida se agito durante 15 minutos. La capa acuosa obtenida se extrajo con CH2Ch (3 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron en vado. El residuo de color pardo oscuro se cromatografio mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (CH2Cl2 isocratico) proporcionando el compuesto 79 (180 mg) en forma de un solido amarillo. Metodo A; Rt: 1,17 min. m/z : 422,1 (M+H)+ Masa exacta:421,1;
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Compuesto 81
Compuesto 79 (0,18 g) se disolvio en DMF (2,6 mL) en un vial de microondas y esto se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. A continuacion, se anadio tetrametilestano (0,084 mL, 0,61 mmol) seguido por bis(tri-t- butilfosfina)paladio (0,021 g, 0,041 mmol) y el vial se purgo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se 5 calento bajo irradiacion con microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro en vado y se co-evaporo con tolueno (2 x 5 mL). El residuo obtenido se recogio en agua-CH2Cl2 (30 mL-30 mL) y la capa acuosa se extrajo con CH2O2 (2 x 30 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vado. El producto bruto obtenido se purifico mediante HPLC preparativa en (RP SunFire Prep C18 OBD-10 pm, 30x150mm).Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN) proporcionando el 10 compuesto 80 (69 mg) y el compuesto 81 (4,6 mg). Compuesto 80: Metodo A; Rt: 1,16 min. m/z : 402,1 (M+H)+ Masa exacta:401,1; 1H RMN (600 MHz, CLOROFORMO-d): mezcla tautomerica 70/30 (ambas se describen): ppm 1,70 - 1,78 (m, 1 H), 1,80 - 1,86 (m, 2 H), 2,06 -2,14 (m, 1 H), 2,34 (s, 7 H), 2,39 (s, 3 H), 2,76 -2,81 (m, 2 H), 2,81 -2,88 (m, 2 H), 3,38 (s, 3 H), 3,41 (s, 3 H), 6,75 - 6,81 (m, 3 H), 6,87 (td, J=8,5, 2,7 Hz, 1 H), 7,19 - 7,23 (m, 1 H), 7,24 (ddd, J=10,0, 8,0, 2,3 Hz, 1 H), 7,32 (ddd, J=10,3, 8,0, 2,3 Hz, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,55 (dd, J=8,7, 5,9 Hz, 1 H), 7,89 15 (s, 1 H), 8,24 (d, J=2,2 Hz, 1 H), 8,27 (d, J=2,2 Hz, 1 H); Compuesto 81: Metodo A; Rt: 1,27 min. m/z : 398,2 (M+H)+
Masa exacta: 397,2;
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Compuesto 82
Preparado de acuerdo con el procedimiento D, calentando a 70°C durante 3 horas utilizando bicarbonato de sodio (6 equiv) en lugar de KOAc, partiendo del compuesto 43g, purificacion mediante cromatograffa en columna de gel de 20 silice (gradiente de elucion: CH2Cl2-MeOH 100:0 - > 98:2). Metodo A; Rt: 0,86 min. m/z : 319,1 (M+H)+ Masa exacta: 318,1;
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Compuesto 83
Un tubo de presion se cargo con metanol (30 mL) y se enfrio en un bano de agua helada. A continuacion, se burbujeo a traves HCl gas durante 40 minutos mientras se continuaba el enfriamiento. Compuesto 82 (1 g) se anadio 25 a la mezcla, el tubo se cerro y la mezcla de reaccion se agito durante 40 minutos en el bano de hielo-agua. Seguidamente, la mezcla de reaccion se agito en un bano de aceite a 40°C durante la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro en vado. El residuo se recogio en H2O-CH2Ch (50 mL-50 mL) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo utilizando CH2Cl2 (2 x 100 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado, proporcionando el compuesto 83 impuro (890 mg) en forma de un 30 aceite ligeramente pardo que se utilizo como tal en la siguiente reaccion.
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Compuesto 84
Preparado de acuerdo con el procedimiento F, partiendo del compuesto 83. Metodo A; Rt: 1,12 min. m/z : 370,1 (M+H)+ Masa exacta:369,1;
Compuesto 85
Compuesto 84 (220 mg) se disolvio en N,N-dimetilformamida (3,4 mL) en un vial de microondas y esto se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Luego se anadio tetrametilestano (111 ^L, 0,8 mmol) seguido por bis(tri-t- butilfosfina)paladio (82 mg, 0,16 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion con microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro en vado y se co- evaporo con tolueno (2 x 5 mL). Despues se recogio en H2O-CH2Cl2 (30 mL-30 mL) y la capa acuosa se extrajo dos veces mas con CH2O2 (2 x 30 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vado. El residuo se cromatografio mediante cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de CH2O2- metanol 100:0 a 98:2), se concentraron las fracciones que conteman el compuesto y se volvio a purificar mediante cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de acetato de etilo-heptano 0:100 - 15:85). Las fracciones que conteman el compuesto se concentraron y el residuo obtenido se purifico mediante HPLC Prep en (RP SunFire Prep C18 OBD-10 ^m, 30x150 mm). Fase movil (disolucion de NH4HcO3 al 0,25% en agua, CH3CN). El residuo obtenido se co-evaporo con metanol (2 x 15 mL) y se seco en vado, dando como resultado el compuesto 85 (5 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo E; Rt: 1,05 min. m/z : 350,2 (M+H)+ Masa exacta:349,1;
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Compuesto 86
Preparado de acuerdo con el procedimiento G, partiendo del compuesto 84, purificado mediante cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente de CH2Ch-metanol 100:0 a 98:2) Las fracciones deseadas se concentraron en vado y el polvo obtenido se seco en vado. Metodo A; Rt: 1,18 min. m/z : 435,2 (M+H)+ Masa exacta:434,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-a) 5 ppm 1,97 (dt, J=13,5, 2,5 Hz, 1 H), 2,50 -2,68 (m, 4 H), 2,73 (ddd, J=13,5, 12,5, 4,0 Hz, 1 H), 3,37 (s, 3 H), 3,73 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,78 - 3,93 (m, 5 H), 4,24 (ddd, J=10,5, 4,0, 2,5 Hz, 1 H), 4,76 (ddd, J=12,5, 10,5, 2,5 Hz, 1 H), 6,76 -6,91 (m, 2 H), 7,08 (ddd, J=8,3, 7,3, 1,5 Hz, 1 H), 7,15 (dd, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H),
7,35 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,0 Hz, 1 H), 7,71 (td, J=7,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,19 (m, J=8,0 Hz, 1 H), 8,58 (m, J=4,5 Hz, 1 H),
10,10 (s, 1 H).
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Compuesto 87
Un tubo de presion se cargo con metanol y esto se enfrio en un bano de agua helada. Despues se burbujeo a traves gas HCl durante 30 minutos mientras se continuaba el enfriamiento. Despues se anadio compuesto 75 (1 g, 3,31 mmol) y el tubo de presion se cerro y se agito mientras se continuaba con el enfriamiento durante 30 minutos. A continuacion, la mezcla de reaccion se agito en un bano de aceite a 40°C durante 7 horas. Se anadio agua (0,15 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 17 horas en un bano de aceite a 40°C. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro en vado. El residuo se recogio en CH2Ch-H2O (50 mL-50 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo (CH2Ch-2 x 100 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron en vado proporcionando el compuesto 87 (750 mg) en forma de un aceite pardo que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo A; Rt: 0,99 y 1,01 min. m/z : 336,2 (M+H)+ Masa exacta: 335,1;
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Compuesto 88
Compuesto 87 (0,75 g) se disolvio en oxicloruro de fosforo (5 mL, 53,81 mmol) y esta mezcla se sometio a reflujo durante 1 hora en un bano de aceite a 110°C. La mezcla de reaccion de color pardo oscuro se concentro en vado y se trato con hielo-agua (100 mL). La capa acuosa obtenida se extrajo utilizando CH2Cl2 (3 x 50 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron en vado. El residuo de color pardo oscuro se cromatografio mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (CH2Cl2 isocratico) proporcionando el compuesto 88 (460 mg) en forma de un aceite de color amarillo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo A; Rt: 1,15 min. m/z : 354,1 (M+H)+ Masa exacta: 353,1;
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Compuesto 89
Un vial de microondas se cargo con compuesto 88 (0,3 g, 0,81 mmol), carbonato de cesio (1,57 g, 4,83 mmol), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (0,33 g, 1,61 mmol), agua (destilada, 0,44 mL) y 1,2-dimetoxietano (4,2 mL). Esta mezcla se purgo con nitrogeno durante 5 minutos. A continuacion se anadieron acetato de paladio(II) (0,018 g, 0,081 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (0,046 g, 0,13 mmol) y la mezcla de reaccion se purgo durante otros 2 minutos. El vial se tapo y se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se recogio en CH2Ch-H2O (50 mL-50 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces (CH2Ch 2 x 100 mL). Los extractos reunidos se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron en vado. El residuo se cromatografio mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de CH2Cl2-metanol 100:0 a 98:2). Las fracciones deseadas se concentraron en vado y se seco
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adicionalmente en vaclo, resultando el compuesto 89 (230 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo A; Rt: 1,20 min. m/z : 419,2 (M+H)+ Masa exacta: 418,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,33 (ddd, J=13,2, 9,0, 4,0 Hz, 1 H), 2,56 -2,85 (m, 5 H), 3,01 (ddd, J=15,8, 9,5, 4,0 Hz, 1 H), 3,24 (ddd, J=15,8, 9,0, 7,0 Hz, 1 H), 3,40 (s, 3 H), 3,71 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,78 (d, J=16,6 Hz, 1 H), 3,80-3,86 (m, 4 H), 7,05 - 7,20 (m, 3 H), 7,21 - 7,25 (m, 1 H), 7,34 (ddd, J=7,5, 5,0, 1,1 Hz, 1 H), 7,70 (td, J=7,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,17 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,59 (m, 1 H), 9,97 (s ancho, 1 H)
Compuesto 90
Compuesto 88 (160 mg, 0,43 mmol) se disolvio en N,N-dimetilformamida (2,8 mL) en un vial de microondas y esto se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (89,3 pl, 0,64 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio (0,066 g, 0,13 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro en vaclo y se co-evaporo con tolueno (2 x 5 mL). La mezcla se recogio en agua-CH2Cl2 (30 mL-30 mL) y la capa acuosa se extrajo otras dos veces con CH2Cl2 (2 x 30 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vaclo. El residuo se cromatografio mediante cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente de CH2Cl2- metanol 100:0 a 98:2). Las fracciones que contenlan el compuesto se concentraron y se purificaron mediante cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente: acetato de etilo - heptano 0:100 a 15:85). Las fracciones relevantes se concentraron y se purificaron de nuevo por HPLC preparativa (Rp SunFire Prep C18 OBD- 10 pm, 30x150mm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, metanol) y adicionalmente mediante HpLc preparativa en (RP SunFire Prep C18 OBD-10 pm, 30x150mm). Fase movil (disolucion de TFA al 0,1% en agua + CH3CN al 5%, CH3CN). Las fracciones obtenidas se disolvieron en CH2Cl2 (15 mL) y despues se trataron con hidroxido de sodio (1 M aq/10 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces utilizando CH2Cl2 (2 X 15 mL). Los extractos reunidos se secaron, se filtraron y se concentraron en vaclo. El residuo de obtenido se cromatografio mediante cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente de CH2Cl2-metanol 100:0 a 98:2), proporcionando el compuesto 90 (3,2 mg) en forma de un aceite amarillo puro. Metodo A; Rt: 1,14 min. m/z : 334,1 (M+H)+ Masa exacta: 333,2
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Compuesto 91
Un tubo se cargo con una varilla de agitacion, 2-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1H-inden-1-iliden)malonato de dimetilo (2,50 g, 9,11 mmol; Preparado a partir de 3,3-dimetilindan-1 ona y malonato de dimetilo, similar a como se ejemplifica para el compuesto 62. Los cristales formados despues de la elaboracion y la evaporation del disolvente se filtraron y se lavaron con eter de petroleo, 3,5-difluoropiridina-2-carboxamidina (1,72 g, 10,9 mmol) y 1,4-dioxano (100 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno y la mezcla de reaccion se calento a 50°C durante 24 horas y a 60°C durante 5 horas. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (diclorometano en heptano en un gradiente de 20 a 100%) para proporcionar el compuesto 91 (380 mg). Metodo A; Rt: 1,11 y 1,14 min. m/z : 400,2 (M+H)+ Masa exacta: 399,1
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Compuesto 92
Un tubo se cargo con una varilla de agitacion, se anadieron compuesto 91 (380 mg) y oxicloruro de fosforo (1,3 mL,
14,3 mmol) y el tubo se cerro con una tapa de Teflon. La mezcla de reaccion se calento a 120°C durante 30 minutos y se concentro a sequedad utilizando un flujo de nitrogeno a 40°C. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo hasta sequedad resultando el compuesto 92 (270 mg) en forma de un aceite pegajoso amarillo pardo que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Metodo A; Rt: 1,24. m/z : 418,1 (M+H)+ Masa exacta: 417,1
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compuesto 93
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, sal interna (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato (230 mg, 1,29 mmol), compuesto 92 (270 mg), carbonato de cesio (1,26 g, 3,88 mmol), agua (350 ^L, 19,4 mmol) y
1,2-dimetoxietano (3,4 mL, 32,3 mmol) y gas nitrogeno se burbujeo a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadieron juntos acetato de paladio(II) (14,6 mg, 0,065 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (37,1 mg, 0,103 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C en un horno de microondas durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 mL) y las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 5 a 50%, resultando, despues de la concentracion a sequedad y del secado en vado, el compuesto 93 (169 mg) en forma de un polvo blanquecino. Metodo A; Rt: 1,36 m/z : 483,2 (M+H)+ Masa exacta: 482,2
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compuesto 94
Una mezcla de 2-(6-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-iliden)malonato de dimetilo (2 g, 7,57 mmol; preparada a partir de 6-fluoro-1-indanona y malonato de dimetilo de manera similar a como se ejemplifica para el compuesto 62), hidrocloruro de piridina-2-carboxamidina (1,63 g, 10,3 mmol) y Na2CO3 (2,17 g, 20,5 mmol) en DMF (20 mL) se agito durante la noche a 60°C bajo una atmosfera de nitrogeno. El disolvente se separo en vado. El residuo se suspendio en diclorometano (100 mL) y el precipitado formado se separo mediante filtracion. El filtrado, despues de la concentracion en vado, se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice dos veces. (Gradiente: acetato de etilo en heptano de 0 a 40%) y despues metanol en CH2Cl2 de 0 a 2%) para proporcionar el compuesto 94 (254 mg) que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Metodo A; Rt: 1,00 m/z : 354,1 (M+H)+ Masa exacta: 353,1
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compuesto 95
Bajo una atmosfera de nitrogeno, un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 94 (254 mg) y oxicloruro de fosforo (0,952 mL, 10,2 mmol) y se cerro con una tapa de Teflon. La mezcla se agito y se calento a 120°C durante 30 minutos. Despues de alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro a sequedad bajo una corriente de nitrogeno. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad en vacio, resultando el compuesto 95 (230 mg) en forma de un aceite pegajoso de color pardo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Metodo A; Rt: 1,14 m/z : 372,1 (M+H)+ Masa exacta: 371,1
compuesto 96
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, sal interna de (morfolin-4- il)metiltrifluoroborato (220 mg, 1,24 mmol), compuesto 95 (230 mg, 0,619 mmol), carbonato de cesio (1209 mg, 3,71 mmol), agua (335 |jL, 18,6 mmol) y 1,2-dimetoxietano (3,2 mL) y se burbujeo a traves gas nitrogeno durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadieron juntos acetato de paladio(II) (14,0 mg, 0,062 mmol) y butildi- 1-adamantilfosfina (35,5 mg, 0,099 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C en un horno de microondas durante 10 minutos. Se dejo que la mezcla de reaccion alcanzara la temperatura ambiente. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 mL) y las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 5 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice con acetato de etilo en heptano en un gradiente de 5 a 50%, resultando el compuesto 96 (216 mg) en forma de un polvo que se seco en vacio. Metodo A; Rt: 1,21 m/z : 437,2 (M+H)+ Masa exacta: 436,2. 1H RMN"(400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,34 (ddd, J=13,1, 9,1, 4,1 Hz, 1 H), 2,58 -2,68 (m, 5 H), 2,90 - 3,01 (m, 1 H), 3,12-3,22 (m, 1 H), 3,45 (s, 3 H), 3,71 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,80 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,82 - 3,87 (m, 4 H), 6,79 (dd, J=8,9, 2,4 Hz, 1 H), 6,87 (td, J=8,7, 2,5 Hz, 1 H), 7,16 (dd, J=8,3, 5,0 Hz, 1 H), 7,36 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,71 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,16 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,59 (d ancho, J=4,3 Hz, 1 H), 10,04 (s ancho, 1 H). El compuesto 96 se purifico mediante SFC preparativa en (Chiralcel Diacel OD 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, metanol con iPrNH2 al 0,2%), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando compuesto 96a y compuesto 96b en forma de un polvo de color amarillo claro. SFC: OD-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: MeOH al 5% (que contenia iPrNH2al 0,2%), mantener 17,00 min, MeOH al 5-50% (que contenia iPrNH2al 0,2%) a una tasa del 10% y mantener 3,10 minutos a 50%; Temperatura: 30°C. Rt (96a): 10,8 min; Rt (96b): 11,9 min
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compuesto 97
Una disolucion de 4,5-difluoro-1-indanona (15 g, 89,2 mmol) y malonato de dimetilo (11,2 mL, 98,1 mmol) en tetrahidrofurano (500 mL) se enfrio a 0°C bajo una atmosfera de nitrogeno y se anadio gota a gota tetracloruro de titanio (20,6 mL, 187 mmol) en diclorometano (50 mL). Finalmente, se anadio piridina (37,4 mL, 462 mmol). La mezcla resultante se agito durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaction se filtro sobre decalite y se anadio acetato de etilo (500 mL) en el filtrado. La capa organica se lavo con salmuera (3 x 200 mL). Las capas acuosas reunidas se acidificaron con acido clorhidrico 1 N (100 mL) y se extrajeron con acetato de etilo (200 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron (Na2SO4) y se evaporaron. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente de diclorometano en heptano de 0 a 50%). Las fracciones deseadas se reunieron y se concentraron hasta un volumen de 200 mL. Los solidos formados se filtraron y se lavaron con heptano. El filtrado se evaporo a sequedad, resultando el compuesto 97 (3,74 g) en forme de un polvo de color pardo. Metodo A; Rt: 1,10 m/z : 300,1 (M+NH4)+ Masa exacta: 282,1
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compuesto 98
Un tubo se cargo con una varilla de agitation, compuesto 97 (3,00 g, 10,6 mmol), 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida (3,34 g, 21,3 mmol) y 1,4-dioxano (30 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se calento a 50°C durante 4 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad y el residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano gradiente de 10 a 50%) para proporcionar el compuesto 98 (500 mg) en forma de un polvo de color pardo. Metodo A; Rt: 1,06 (dos isomeros) m/z : 408,1 (M+H)+ Masa exacta: 407,1
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Compuesto 99
Bajo una atmosfera de nitrogeno, un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 98 (500 mg) y oxicloruro de fosforo (1,0 mL, 11 mmol). La mezcla se agito y se calento a 120°C durante 30 minutos. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro a sequedad bajo una corriente de nitrogeno. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano y se lavo con disolucion de bicarbonato de sodio saturada acuosa, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad en vacio. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (diclorometano isocratico) para proporcionar el compuesto 99 (130 mg) en forma de un polvo de color pardo. Metodo A; Rt: 1,12 m/z : 426,1 (M+H)+ Masa exacta: 425,1
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Compuesto 100
Compuesto 99 (100 mg), se disolvio en 1,2-dimetoxietano (1,60 mL, 15,4 mmol) en un vial de microondas y la disolucion se desoxigeno por burbujeo a traves de gas nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (0,039 mL, 0,28 mmol), seguido de bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (36,0 mg, 0,071 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos y se deja que alcanzara la temperatura ambiente. Se burbujeo gas nitrogeno a traves durante 10 minutos. Despues se anadio mas tetrametilestano (0,039 mL, 0,282 mmol) seguido de bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (36,0 mg, 0,071 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 20 minutos. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad. El residuo se purifico mediante HPLC preparativa (RP preparativa SunFire C18 OBD-10 pm, 30x150 mm). Fase movil (disolucion de TFA al 0,1% en agua + acetonitrilo al 5%, acetonitrilo). Las fracciones deseadas se reunieron y se concentraron a sequedad. El residuo se neutralizo con bicarbonato de sodio saturado acuoso y se extrajo con diclorometano (2 x 20 mL). Las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad en vacio. El residuo obtenido se co-evaporo con metanol (2 x 5 mL) y se seco en vacio, resultando el compuesto 100 (21 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo A; Rt: 1,12 m/z : 406,1 (M+H)+ Masa exacta: 405,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d): ppm 2,25 - 2,46 (m, 4 H), 2,61 - 2,82 (m, 1 H), 2,96 - 3,10 (m, 1 H), 3,12 - 3,30 (m, 1 H), 3,47 (s, 3 H), 6,71 - 7,12 (m, 2 H), 7,17 - 7,39 (m, 1 H), 7,98 (s ancho, 1 H), 8,27 (d, J=2,0 Hz, 1 H).
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compuesto 101
Un tubo de microondas de 10 mL se cargo con una varilla de agitacion, sal interna (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato (22,6 mg, 0,127 mmol), compuesto 99 (30 mg, 0,0705 mmol), agua (34,3 pL, 1,90 mmol) y 1,2-dimetoxietano (1,5 mL). Se burbujeo gas nitrogeno a traves durante 10 minutos. Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadieron juntos carbonato de cesio (124 mg, 0,38 mmol), acetato de paladio(II) (1,60 mg, 0,00705 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (4,04 mg, 0,0113 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 140°C en el horno de microondas durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) y las capas organicas se reunieron y se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 5 mL) y salmuera (5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano en un gradiente de 5 a 50%), resultando el compuesto 101 (3,2 mg) en forma de un polvo amarillo despues de la concentracion y secado en vacio. Metodo A; Rt: 1,21 m/z : 491,1 (M+H)+ Masa exacta: 490,2
^H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 2,40 (ddd, J=13,0, 9,0, 3,8 Hz, 1 H), 2,55 - 2,71 (m, 5 H), 2,98 - 3,10 (m, 1 H), 3,14 - 3,28 (m, 1 H), 3,45 (s, 3 H), 3,67 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,73 - 3,84 (m, 5 H), 6,79 (dd, J=8,3, 4,0 Hz, 1 H), 6,93 (dt, J=10,4, 7,7 Hz, 1 H), 7,20 -7,33 (m, 1 H), 8,34 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,61 (s ancho, 1 H).
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A 2-bromofenol (8,6 g, 49,7 mmol) en DMF (100 mL) a temperatura ambiente, se anadio K2CO3 (34,4 g, 248 mmol). Despues de 5 minutos, se anadio 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (12,1 g; 59,65 mmol). La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante una noche. Despues se anadio NH4Cl saturado (200 mL) y la mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 veces). Las capas organicas reunidas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante elucion en gradiente de cromatograffa en columna de gel de silice con heptano/EtOAc, resultando 2-(2-bromofenoxi)-2,2-difluoroacetato de etilo (7,78 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) ppm 1,27 (t, J=7,2 Hz, 3 H), 4,40' (q, J=7,1 Hz, 2 H), 7,30 (td, J=7,7, 1,8 Hz, 1 H), 7,36 - 7,45 (m, 1 H), 7,45 - 7,54 (m, 1 H), 7,78 (dd, J=8,0, 1,5 Hz, 1 H). Metodo A; Rt: 1,19. A 2-(2-bromofenoxi)-2,2-difluoroacetato (3 g, 10,2 mmol) en THF/H2O (50 mL/50 mL) se anadio LiOH (320 mg, 13,4 mmol) y la mezcla se agito a 40°C. Despues de 2,5 horas, la mezcla se enfrio a temperatura ambiente, se acidifico con HCl 1 N y THF se separo en vado. La capa acuosa se extrajo con CH2Ch, la capa organica reunida se seco con Na2SO4, se filtro y el disolvente se separo en vado, resultando acido 2-(2-bromofenoxi)-2,2-difluoroacetico en forma de un aceite incoloro (3011 mg, que contiene THF al 14% en peso de acuerdo con 1H-rMn). Metodo A; RT: 1,21 m/z: 266,9 (MH)- Masa exacta: 267,9. A acido 2-(2- bromofenoxi)-2,2-difluoroacetico (6,04 g), preparado como se ha descrito anteriormente)) en THF seco (150 mL) a - 10°C bajo una atmosfera de argon, se anadio gota a gota BuLi (2,5 M en hexano; 24,2 mL; 60,4 mmol). La mezcla se agito durante 10 minutos y despues se vertio en HCl 1N (200 mL), se extrajo con CH2Cl2 (3 veces), se seco sobre Na2SO4 y se filtro. El disolvente se separo (40°C, hasta 100 mbar) dando como resultado 5,5 g de un residuo oleoso que contema el compuesto 102, que se utilizo un tal en la siguiente reaction. Metodo D; Rt: 0,99; 19 F RMN (377 MHz, DMSO-d6 ) ppm -92,77. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ppm 7,43 (td, J=7,7, 0,7 Hz, 1 H), 7,50 (dt, J=8,5, 0,7 Hz, 1 H), 7,91 (ddd, J=7,7, 1,5, 0,7 Hz, 1 H), 7,98 (ddd, J=8,5, 7,5, 1,5 Hz, 1 H).
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compuesto 103
Se anadio cloruro de titanio (IV) gota a gota a una disolucion de 2,2-difluoroindan-1-ona (compuesto 102; 3,18 g) y malonato de dimetilo (2,5 mL, 21,8 mmol) en THF (60 mL) se enfrio en un bano de hielo (0°C). A continuation, se anadio gota a gota piridina (5,8 mL, 73 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 2,5 horas y despues a temperatura ambiente durante 64 horas. Se anadio agua (100 mL) a la mezcla de reaccion, seguido de una extraction con CH2Cl2 (2 x 300 mL). Las capas organicas se reunieron y se secaron (Na2SO4). Despues de la filtration y concentration, el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano de 0 a 10%), proporcionando el compuesto 103 (2,6 g) en forma de un ffquido incoloro. Metodo A; Rt:
1,10 m/z : 302,1 (M+NH4)+ Masa exacta: 284,1
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compuesto 104
Un tubo se cargo con una varilla de agitation, compuesto 103 (1,00 g, 3,52 mmol), 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida (693 mg, 3,56 mmol) y 1,4-dioxano (5 mL) y se cerro con una tapa de Teflon. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 12 horas y se calento a 40°C durante 1,5 horas. Se anadio mas 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida (315 mg, 1,62 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 40°C durante 4 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo, resultando un residuo
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oleoso ligeramente anaranjado que contema el compuesto 104, el cual se utilizo como tal en la siguiente reaction. Metodo A; Rt: 1,02 m/z : 410,1 (M+H)+ Masa exacta: 409,1
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compuesto 105
Un tubo se cargo con una varilla de agitation, compuesto 104 (1,32 g, 3,24 mmol), oxicloruro de fosforo (4,56 mL,
49,1 mmol) y se cerro con una tapa de Teflon. La mezcla de reaccion se agito a 90°C durante 4 horas. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad y se co-evaporo con tolueno. El residuo de color pardo-negro se disolvio en CH2Cl2 y se agito con bicarbonato de sodio saturado acuoso a temperatura ambiente durante 30 minutos. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y, despues de la filtration, se evaporo a sequedad. El residuo alquitranado negro se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (diclorometano). Todas las fracciones deseadas se reunieron y se evaporaron a sequedad para proporcionar el compuesto 105 (580 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo A; Rt: 1,11 m/z : 428,0 (M+H)+ Masa exacta: 427,0
compuesto 106
Una disolucion de compuesto 105 (580 mg, 1,36 mmol) en DMF (5 mL) en un vial de microondas se agito y se hizo burbujear a traves nitrogeno durante 10 minutos. A continuation, se anadio tetrametilestano (0,28 mL, 2,0 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio (0) (69,3 mg, 0,136 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiation de microondas a 140°C durante 30 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se evaporo a sequedad. El residuo se mezclo con metanol (40 mL), se filtro y el filtrado se evaporo a sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color naranja (635 mg). 540 mg del residuo se purificaron utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente acetato de etilo en heptano de 5 a 30%). Las fracciones deseadas se reunieron y se evaporaron para mantener 100 mL del disolvente. Los solidos se filtraron y se lavaron con heptano y se secaron en un horno de vacio a 50°C durante 2 horas para proporcionar el compuesto 106 (32 mg) en forma de un polvo de color amarillo claro. Metodo E; RT: 1,00 m/z: 408,1 (M + H)+ Masa exacta: 407,1. El filtrado se evaporo a sequedad para proporcionar un polvo amarillo que se purifico mediante SFC preparativa en Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm. Fase movil (CO2, isopropanol), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando el compuesto 106a (111 mg) y el compuesto 106b. SFC: Columnas: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: iPrOH al 5% (que contema iPrNH2al 0,2%) mantener 15,0 min Temperatura: 23°C; Rt (106a): 8,37 min; Rt (106b): 9,95 min.
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compuesto 107
TiCl4 (9,8 mL) disuelto en diclorometano (30 mL) se anadio gota a gota durante 10 minutos a una disolucion de 2,2- difluoroindan-1-ona (8,0 g; 47,6 mmol) y malonato de dimetilo (6,3 g; 47,6 mmol) disuelto en THF (125 mL), mientras se enfriaba en un bano de hielo. La mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos. A continuacion, se anadio
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piridina (14,9 mL; 185 mmol) y se dejo que la mezcla de reaction alcanzara la temperatura ambiente mientras se agitaba durante la noche. La mezcla se inactivo con agua (100 mL) y se diluyo con diclorometano (300 mL). La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice por gradiente de elucion de 2 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se reunieron y se concentraron, proporcionando el compuesto 107 (7,51 g) que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo A; Rt: 1,01 m/z : 300,1 (M+NH4)+ Masa exacta: 282,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 3,50 (t, J=13,4 Hz, 2 H), 3,88 (s, 3 H), 3,91 (s, 3 H), 7,27 - 7,35 (m, 2 H), 7,39 - 7,47 (m, 1 H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1 H).
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compuesto 108
Una mezcla de compuesto 107 (6,8 g), cloruro de 2-amidinopiridinio (3,35 g; 21,3 mmol) y bicarbonato de sodio (7,15 g)) en dioxano (100 mL) se agito y se calento durante 5 horas a 120°C. La mezcla de reaccion se filtro mientras todavia estaba caliente y el filtrado se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice utilizando un gradiente de elucion de 5 a 100% EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se reunieron, se concentraron y se secaron durante la noche en vado, proporcionando el compuesto 108 (mezcla de diastereoisomeros; 3,83 g) en forma de un polvo blanco. Metodo A; Rt: 1,00 y 1,03 m/z : 372,1 (M+H)+ Masa exacta: 371,1.
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compuesto 109
Compuesto 108 (1,05 g) se disolvio en oxicloruro de fosforo (25 mL) y se calento durante 210 minutos a 100°C. La mezcla de reaccion se concentro en vado. El residuo se disolvio en diclorometano (100 mL) y se inactivo vertiendo la mezcla en disolucion de NaHCO3 saturada (200 mL) mientras se agitaba. La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro, proporcionando una resina bruta de color amarillo (1,05 g) que se utilizo como tal en la siguiente etapa. Metodo A; Rt: 1,15 m/z : 390,1 (M+H)+ Masa exacta: 389,1.
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Compuesto 110
Se burbujeo nitrogeno a traves de una mezcla de compuesto 109 (681 mg), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (345,5 mg; 1,67 mmol), K2CO3 (319,3 mg; 2,31 mmol), etilenglicol-dimetil-eter (5 mL) y agua (1 mL). Despues se anadio (164 mg; 0,32 mmol) de bis(tri-terc-butilfosfina)paladio(0) y la mezcla de reaccion se agito bajo irradiation de microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla se concentro y el residuo se recogio en agua (50 mL) y diclorometano (50 mL). La capa organica se separo, se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 a 100% de EtOAc
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en heptano. Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron y se secaron en vacfo, proporcionando una resina de color amarillo (214 mg). Metodo A; Rt: 1,14 m/z : 455,1 (M+H)+ Masa exacta:454,2. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,57 - 2,69 (m, 4 H), 3,36 (s, 3 H), 3,41 - 3,58 (m, 1 H), 3,59 - 3,71 (m, 1 H), 3,75 - 3,88 (m, 6 H), 7,08 - 7,16 (m, 1 H), 7,20 - 7,26 (m, 3 H), 7,37 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,71 (td, J=7,7, 1,6 Hz, 1 H), 8,19 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1 H), 8,56 - 8,64 (m, 1 H), 10,35 (s, 1 H)
compuesto 111
Se burbujeo nitrogeno a traves de una mezcla de compuesto 109 (365 mg), tetrametilestano (185 mg; 1,03 mmol), etilenglicol-dimetileter (5 mL) y DMF (1 mL) durante 5 minutos. Despues se anadio (105,5 mg, 0,21 mmol) bis(tri- terc.-butilfosfina)paladio(0) y la mezcla de reaction se agito bajo irradiation de microondas a 140°C durante 15 minutos. Se anadio otro tetrametilestano (100 mg) y se burbujeo nitrogeno a traves durante 5 minutos. Despues, se anadio mas bis(tri-terc-butilfosfina)paladio(0) (100 mg) y se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo y el residuo obtenido se recogio en CH2Ch (50 mL) y agua (50 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 a 100% de EtOAc en heptano. El procedimiento se repitio en las fracciones de producto concentradas con un gradiente de 0 hasta 10% de metanol en diclorometano. Las fracciones de producto se reunieron, se concentraron y se secaron en vacfo, proporcionando el compuesto 111 (54 mg). Metodo E; Rt: 1,05 m/z : 370,2 (M+H)+ Masa exacta:369,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,35 (s, 3 H), 3,27 (s, 3 H), 3,38 - 3,64 (m, 2 H), 7,03 - 7,11 (m, 1 H), 7,18 - 7,30 (m, 3 H), 7,57 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,88 (td, J=7,7, 1,8 Hz, 1 H), 7,94 - 8,00 (m, 1 H), 8,64 - 8,70 (m, 1 H), 9,83 (s, 1 H)
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Compuesto 110 (106 mg), NaOH 1 M (2 mL, 2 mmol) y metanol (4 mL) se calentaron a 140°C bajo irradiacion de microondas durante 3 minutos, seguido de 3 minutos mas a 140°C. El metanol se separo por destilacion en vacfo y el aceite se extrajo de la capa acuosa con diclorometano (50 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna utilizando un gradiente de 5 a 15% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se concentraron y se secaron en vacio, resultando el compuesto 112 (18,5 mg). Metodo E; Rt: 1,09 m/z : 435,2 (M+H)+ Masa exacta: 434,2; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,61-2,68 (m, 4 H), 3,39 (s, 3 H), 3,81 - 3,88 (m, 6 H), 5,96 (s, 1 H), 7,04 - 7,10 (m, 1 H), 7,12 - 7,23 (m, 3 H),
7.36 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,71 (td, J=7,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,18 (dt, J=7,9, 1,0 Hz, 1 H), 8,56 - 8,63 (m, 1 H),
10.36 (s ancho, 1 H)
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Compuesto 107 (850 mg), 3,5-difluoropiridina-2-carboxamidina (627 mg; 3,99 mmol), NaHCO3 (894 mg) en dioxano (30 mL) se agito y se calento a 60°C durante 3 horas. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se recogio en CH2CI2 (50 mL). Esta disolucion se lavo con agua, se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se sometio a cromatograffa en columna sobre sflice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc. Las fracciones de producto se reunieron, se concentraron y se secaron en vado, resultando el compuesto 113 en forma de un polvo blanco (494 mg) como una mezcla diastereomerica en la relacion de ~ 8 a 2. Metodo E; Rt: 0,93 y 0,95 m/z : 408,2 (M+H)+ Masa exacta: 407,1
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compuesto 114
Compuesto 113 (459 mg) se disolvio en oxicloruro de fosforo y se calento durante 1 hora a 120°C. La mezcla de reaccion se concentro en vado y el residuo obtenido se recogio en CH2G2 (50 mL) y se inactivo con disolucion de NaHCO3 saturada (150 mL). Esta mezcla se agito vigorosamente durante 15 minutos. La capa organica se separo, se seco sobre un cartucho de isolute HM-N y se concentro, proporcionando el compuesto 114 (375 mg) en forma de un polvo de color pardo crudo que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo E; Rt: 1,05 m/z : 426,1 (M+H)+ Masa exacta:425,1
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compuesto 115
Se burbujeo nitrogeno a traves de una disolucion de compuesto 114 (375 mg)) y tetrametilestano (187 mg) disuelto en DMF (7 mL) durante 10 minutos. Se anadio bis (tri-terc.-butilfosfina) paladio (0) (107 mg) y la reaccion se agito bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 15 minutos. Se burbujeo nitrogeno a traves de nuevo durante 5 minutos, se anadieron mas bis(tri-terc.-butilfosfina)paladio(0) (100 mg) y tetrametilestano (185 mg) y la mezcla de reaccion se agito bajo irradiacion de microondas durante 30 minutos a 140°C. La mezcla de reaccion se filtro y se concentro. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (50 mL), se lavo con agua, se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice, utilizando un gradiente desde 2,5% hasta 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron, se concentraron y se secaron en vado, proporcionando el compuesto 115 (71,7 mg) en forma de una resina de color amarillo. Metodo A; Rt: 1,07 m/z : 406,1 (M+H)+ Masa exacta:405,1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6; tautomero principal descrito) ppm 2,27 (s, 3 H), 3,27 (s, 3 H), 3,37 -3,55 (m, 2 H), 7,02 -7,13 (m, 1 H), 7,16 - 7,31 (m, 3 H), 8,04 (ddd, J=10,3, 9,1,2,4 Hz, 1 H),
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6-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-indol-2,3-diona (1751 mg, 9,78 mmol), urea (587 mg, 9,78 mmol), acetoacetato de metilo (1,14 g, 9,78 mmol), p-TSA (84,2 mg; 0,49 mmol) en acetonitrilo (150 mL) se calento a reflujo durante 4 dias.
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La mezcla de reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente y se agito durante la noche. El producto cristalizo y los cristales de color amarillo claro se filtraron y se secaron en vado, resultando el compuesto 116 (602 mg). Metodo D; Rt: 0,71 m/z : 337,1 (M+NH4)+ Masa exacta: 319,1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 ppm 2,24 (s, 3 H),3,09 (s, 3 H), 3,30 (s, 3 H), 6,75 (ddd, J=10,0, 8,0, 2,3 Hz, 1 H), 6,93 (dd, J=9,5, 2,3 Hz, 1 H), 7,18 (dd, J=8,3, 5,5 Hz, 1 H), 7,77 (d, J=1,3 Hz, 1 H), 9,49 (m, 1 H)
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compuesto 117
Compuesto 116 (580 mg 1,82 mmol) en POCl3 (25 mL) se calento a 95°C durante 6 horas. La mezcla de reaccion se concentro. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (100 mL) y se vertio en disolucion de NaHCO3 saturada (100 mL). Esta mezcla se agito vigorosamente durante 20 minutos, la capa organica se separo, se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro, proporcionando el compuesto 117 en forma de un polvo de color pardo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo E; Rt: 0,73 m/z : 338,2 (M+H)+ Masa exacta: 337,1
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mg, 1,79 mmol) disuelto en DMF (7 mL). A continuacion, se anadio bis(tri-terc.-butilfosfina)paladio(0) (159 mg, 0,31 mmol) y la mezcla se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro y se purifico mediante HPLC Prep en (RP Vydac Denali C18 -10 pm, 200 g, 5 cm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en MeOH y se evaporaron de nuevo, y finalmente se secaron en vado, resultando el compuesto 118 (21 mg). Metodo E; Rt: 0,85 m/z : 417,1 (M+H)+ Masa exacta: 416,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 2,37 (s, 3 H), 3,13 (s, 3 H), 3,35 (s, 3 H), 6,67 -6,80 (m, 1 H), 6,92 (dd, J=9,7, 2,4 Hz, 1 H), 7,15 (dd, J=8,2, 5,6 Hz, 1 H), 7,93 -8,15 (m, 1 H), 8,60 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 9,13 - 10,47 (s ancho, 1 H).
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6-fluoroindolina-2,3-diona (15,05 g, 91.1mmol), urea (5,47 g, 91.1mmol), p-TSA (7,85 g, 45,57 mmol) y acetoacetato de metilo (10,6 g, 91,1 mmol) en acetonitrilo (500 mL) se calento a reflujo a lo largo del fin de semana. La mezcla de
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reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente. El precipitado se separo mediante filtracion. El precipitado se recogio en CH2Cl2 (1 L) y disolucion de NaHCO3 saturada (500 mL). La mezcla se agito vigorosamente durante 15 minutos. El precipitado se separo mediante filtracion y se seco en vado, resultando el compuesto 119 en forma de un polvo beis (9,25 g). Metodo A; Rt: 0,61 m/z : 323,1 '(M+NH0+ Masa exacta: 305,1;1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 2,24 (s, 3 H), 3,32 (s, 3 H), 6,57 (dd, J=9,4, 2,3 Hz, 1 H), 6,63 - 6,75 (m, 1 H), 7,13 (dd, J=8,0, 5,6 Hz, 1 H), 7,81 (s, 1 H), 8,31 -11,56 (m, 2 H).
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Compuesto 119 (1225mg; 4,0 mmol), cloruro de 4-metoxibencilo (660 mg; 4,2 mmol) y carbonato de potasio (693 mg) en acetonitrilo (30 mL) se agito y se sometio a reflujo durante la noche. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se disolvio en CH2Cl2 (100 mL) y agua (100 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice utilizando un gradiente de 2 a 10% de CH3OH en CH2Cl2. Las fracciones del producto se reunieron, se concentraron y se secaron durante una noche en vado, resultando el compuesto 120 en forma de un polvo blanco (818 mg). Metodo A; Rt: 0,91 m/z : 443,1 (M+NH4)+ Masa exacta:425,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,24 (s, 3 H),3,07 (s, 3 H), 3,73 (s, 3 H), 4,69 (d, J=15,4 Hz, 1 H), 4,81 (d, J=15,4 Hz, 1 H), 6,68 - 6,81 (m, 2 H), 6,86 - 6,95 (m, J=8,8 Hz 2 H), 7,20 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1 H), 7,39-7,45 (m, J=8,8 Hz, 2 H), 7,92 (d, J=1,3 Hz, 1 H), 9,51 (s ancho, 1 H)
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compuesto 121
Compuesto 120 (758 mg; 1,78 mmol) en POCh (30 mL) se agito a 100°C durante 1 hora. A continuacion, la mezcla de reaccion se calento adicionalmente a 110°C durante 110 min. La mezcla de reaccion se concentro. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (50 mL), se vertio en disolucion de NaHCO3 saturada (100 mL) y se agito vigorosamente durante 15 minutos. La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro, proporcionando un polvo de color pardo oscuro que se utilizo como tal en la siguiente reaccion. Metodo A; Rt: 1,03 m/z : 444,0 (M+H)+ Masa exacta:443,1
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Se burbujeo nitrogeno a traves de una mezcla de compuesto 121 (513 mg, 1,16 mmol), 3,5-difluoro-2- tributilestannilpiridina (700 mg; 1,73 mmol) y DMF (7 mL) durante 5 minutos. Se anadio bis(tri-terc.- butilfosfina)paladio(O) (59 mg, 0.116 mmol) y la mezcla de reaccion se agito bajo irradiacion de microondas durante 10 minutos a 140°C. La mezcla de reaccion se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice utilizando un gradiente de 0 hasta 10% de CH3OH en CH2Cl2. Las fracciones de producto se concentraron y se secaron en vado, resultando el compuesto 122, proporcionando un polvo de color beis (50 mg). Metodo E; Rt: '1,07 m/z : 523,2 (M+H)+ Masa exacta:522,2
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compuesto 123
Se anadio acido trifuorometanosulfonico (0,1 mL) a una disolucion de compuesto 122 (23 mg) en diclorometano (10 mL) y se agito a temperatura ambiente durante 150 minutos. Se anadio una disolucion de NaHCO3 saturada (30 mL) y la mezcla se agito vigorosamente durante 10 minutos. La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice utilizando un gradiente de 0,5 hasta 10% de CH3OH en diclorometano. Las fracciones de producto se concentraron y se secaron en vado, resultando el compuesto 123 en forma de un polvo (10,4 mg). Metodo E; Rt: 0,80 m/z : 403,2 (M+H)+ Masa exacta: 402,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,49 (s, 3 H), 3,51 (s, 3 H), 6,59 (dd, J=8,8, 2,2 Hz, 1 H), 6,61 - 6,68 (m, 1 H), 7,09-7,14 (m, 1 H), 7,23 - 7,30 (m, 1 H), 7,34 (s ancho, 1 H), 8,29 (m, 2 H)
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compuesto 124
Compuesto 103 (245 mg; 0,761 mmol), cloruro de 2-amidinopiridinio (240 mg; 1,52 mmol), bicarbonato de sodio (340 mg, 4,05 mmol) en DMF se agito y calento durante 2 horas a 80°C. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con Et2O y H2O y se extrajo con Et2O. Las fases organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4. Despues de la
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filtracion y la evaporacion del disolvente, el residuo obtenido (239 mg) se agito a 90°C durante 2,5 horas en POCI3 (5 mL). Los componentes volatiles se separaron en vado, el residuo obtenido se disolvio en CH2Cl2 y se agito con NaHCO3 saturado durante 30 minutos. La mezcla se extrajo con CH2Cl2, se seco sobre Na2SO4, y despues de la filtracion se separo el disolvente. El residuo de color negro se disolvio en CH2Cl2 y se filtro en una almohadilla de s^lice. Despues de enjuagar con CH2Cl2 el disolvente se separo, resultando un residuo ligeramente amarillo. Este residuo se agito en una mezcla de etilenglicol-dimetileter (5 mL), agua (0,26 mL), sal interna (morfolin-4- il)metiltrifluoroborato (70 mg, 0,41 mmol) y K2CO3 (79 mg; 0,57 mmol). Se burbujeo nitrogeno a traves de la mezcla durante 10 minutos y, a continuacion, se anadio bis(tri-f-butilfosfina)paladio(0) (40,7 mg, 0,08 mmol). La mezcla se calento bajo irradiation de microondas durante 15 minutos a 140°C. Se anadio CH2Ch, la mezcla se lavo con H2O, y la capa acuosa se extrajo con CH2Cl2. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna con heptano a heptano/EtOAc 50/50, resultando el compuesto 124 (35 mg).
Metodo E; Rt: 1,13 m/z : 457,2 (M+H)+ Masa exacta:456,2
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compuesto 125
Un tubo se cargo con una varilla de agitation, malonato de dimetilo (9,56 mL, 83,2 mmol), 4-fluorofenilacetileno (10 g, 83,2 mmol) y cloruro de indio (III) (550 mg, 2,49 mmol) y se cerro. La mezcla de reaction se agito en un bano de aceite a 130°C durante 18 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion obtenida se utilizo como tal en la siguiente etapa.
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compuesto 126
Una mezcla de compuesto 125 (5 g de la mezcla de reaccion obtenida anteriormente), 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida sal acetato (6,46 g, 29,7 mmol) y bicarbonato de sodio (3,33 g, 39,6) en 1,4-dioxano (100 mL) se agito y se calento a 60°C durante 1 hora. Se anadio DMF (30 mL) y la mezcla de reaccion se agito adicionalmente a 60°C durante 18 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vado y el residuo se vertio en agua. Los compuestos organicos se extrajeron con eter dietflico (3 x 200 mL) y las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y despues de la filtracion, se concentraron a sequedad. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano de 10 a 50%), resultando el compuesto 126 (200 mg). Metodo A; Rt: 0,97 y '1,02 m/z : 378,1 (M+H)+ Masa exacta: 377,1.
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compuesto 127
Compuesto 126 (200 mg) se suspendio en oxicloruro de fosforo (1 mL, 10,8 mmol) y se calento a 120°C durante 30 minutos. La mezcla de reaction se concentro a sequedad. El residuo se agito en disolucion de bicarbonato de sodio acuosa saturada fria durante 10 minutos y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 5 mL). Las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel 5 de silice (diclorometano isocratico) para proporcionar compuesto 127 (90 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo A; Rt: 1,07 m/z : 396,0 (M+H)+ Masa exacta:395,1
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Compuesto 127 (90 mg) se disolvio en DME seco (3 mL) en un vial de microondas y se burbujeo nitrogeno a traves durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (270 ^L, 0,195 mmol) seguido por bis(tri-t- 10 butilfosfina)paladio(0) (19,9 mg, 0,0389 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiation de microondas a 140°C durante 20 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. Luego se anadio tetrametilestano (270 ^L, 0,195 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (19,9 mg, 0,0389 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 20 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se 15 evaporo y el residuo se purifico mediante HPLC preparativa en (RP SunFire Prep C18 OBD-10 ^m, 30x150 mm). Fase movil (disolucion de TFA al 0,1% en agua + 5% de acetonitrilo, metanol). Las fracciones deseadas se reunieron y se concentraron a sequedad. El residuo se neutralizo con bicarbonato de sodio saturado acuoso y se extrajo con diclorometano (2 x 20 mL). Las capas organicas reunidas se secaron (Na2SO4) y se concentraron a sequedad. El residuo se co evaporo con metanol (2 x 5 mL). Tras secar en vatio, se obtuvo el compuesto 128 (14 mg) en forma 20 de un solido amarillo. Metodo A; Rt: 1,04 m/z : 376,1 (M+H)+ Masa exacta: 375,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 1,92 (s, 3 H), 2,29 (s, 3 H), 3,49 (s, 3 H), 6,91-7,04 (m, 2 H), 7,20 - 7,37 (m, 1 H), 7,38 - 7,62 (m, 2 H), 7,93 (s ancho, 1 H), 8,27 (d, J=2,0 Hz, 1 H).
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compuesto 129
Un tubo se cargo con una varilla de agitation, malonato de dimetilo (8,32 mL, 72,4 mmol), 3,4-fluorofenilacetileno 25 (10,0 g, 72,4 mmol) y cloruro de indio (III) (479 mg, 2,16 mmol) y se cerro. La mezcla de reaccion se agito entonces
a 130°C durante 18 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion en bruto se utilizo como tal en la siguiente reaccion.
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compuesto 130
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Compuesto 129 (15 g de la mezcla de reaccion obtenida anteriormente), 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida (11,3 g, 72 mmol) en DMF (100 mL) en un matraz de fondo redondo (250 mL) se agito a 40°C durante 20 horas. La disolucion se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se vertio en agua (800 mL). Los solidos se separaron mediante filtracion y se lavaron con agua para proporcionar una goma pegajosa de color naranja claro. La goma se disolvio en diclorometano, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad completa, resultando una mezcla bruta que contenla el compuesto 130 (15,6 g). Metodo A; Rt: 1,04 y 1,08 m/z : 396,0 (M+H)+ Masa exacta: 395,1;
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compuesto 131
Enantiomeros de 131:131a y 131b
Un tubo se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 130 (8,64 g) y oxicloruro de fosforo (30 mL, 323 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 110°C durante 2,5 horas y a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, se anadio tolueno y la mezcla se evaporo para proporcionar un residuo de color pardo oscuro. El residuo se disolvio en diclorometano (200 mL) y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (150 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 200 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron a sequedad para proporcionar un aceite de color pardo oscuro. El aceite se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (diclorometano isocratico), resultando el compuesto 131 (4,30 g). Metodo A; Rt: 1,11 m/z: 414,0 (M + H)+ Masa exacta: 413,1; la mezcla racemica 131 se separo en sus enantiomeros 131a y 131b mediante SFC preparativa (fase estacionaria: Chiralcel Diacel OD 20 x 250 mm), fase movil: CO2, etanol), proporcionando el compuesto 131a (634 mg) y el compuesto 131b (661 mg). OD- H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 3% (que contenla iPrNH al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C; Compuesto 131a: Rt: 11,2 min; compuesto 131b: Rt: 12,1 min.
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compuesto 132 Enantiomeros de la mezcla racemica 132: 132a, 132b
Una disolucion de compuesto 131 (1500 mg) en DMF (10 mL) en un vial de microondas se agito y se hizo burbujear a traves nitrogeno durante 10 minutos. A continuation, se anadio tetrametilestano (0,753 mL, 5,44 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (185 mg, 0,363 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiation de microondas a 140°C durante 30 minutos y se deja que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro en vaclo. El residuo se mezclo con metanol (40 mL) y se filtro. El filtrado se evaporo a sequedad para proporcionar un residuo pegajoso de color naranja que se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente acetato de etilo en heptano de 5 a 30% y diclorometano isocratico) resultando el compuesto 132 (546 mg) en forma de un solido amarillo. Metodo A; Rt: 1,09 m/z : 394,1 (M+H)+ Masa exacta: 393,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d,); relation tautomerica ~9 a 1; tautomero principal descrito) 5 ppm 1,89 (s, 3 H), 2,30 (s, 3 H), 3,52 (s, 3 H), 7,05 (dt, J=10,2, 8,4 Hz, 1 H), 7,20-7,24
(m, 1 H), 7,27 - 7,35 (m, 2 H), 7,98 (s ancho, 1 H), 8,29 (d, J=1,8 Hz, 1 H). La mezcla racemica de 132 (230 mg) se separo en sus enantiomeros 132a y 132b, mediante SFC preparativa (Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, etanol con iPrNH2 al 0,2%), proporcionando el compuesto 132a (79 mg) y el compuesto 132b (83 mg) como resinas pegajosas. Columnas: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 3% (que conterna 5 iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C; Compuesto 132a Rt: 7,2 min; Compuesto 132b Rt: 8,7 min. Compuesto 132a: [a]20D -19,7° (c 0,47% en p/v, DMF). Compuesto 132b: [a]20D +20,3° (c 0,37% p/v, DMF)
Sal mesilato del compuesto 132b
Compuesto 132b (3,01 g, 7,66 mmol), preparado de manera similar a como se describe anteriormente, se disolvio en isopropanol (20 mL) y se anadio gota a gota acido metanosulfonico (0,488 mL, 7,51 mmol) en isopropanol (5 mL). 10 La disolucion se calento a reflujo mientras se anadia eter diisopropflico (250 mL) hasta el punto de saturacion. Se anadio el compuesto cristalizado de la disolucion a reflujo e isopropanol (150 mL). La disolucion se sometio a reflujo durante 30 minutos y despues se enfrio a temperatura ambiente. El precipitado formado se separo mediante filtracion y se lavo con eter diisopropnico (10 mL), resultando el compuesto 132b. MsOH en forma de un solido blanco se seco en un horno de vado a 50°C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 ppm 2,03 (s ancho, 3 H), 2,27 (s, 3 H), 15 2,29 (s, 3 H), 3,50 (s, 3 H), 7,40 - 7,46 (m, 1 H), 7,46-7,57 (m, 1 H), 7,61 - 7,81 (m, 1 H), 8,37 (t ancho, J=9,0 Hz, 1
H), 8,79 -8,86 (m, 1 H), 11,92 (s ancho, NH). Punto de fusion (DSC; de 30 a 300°C a 10°C/min): 196°C
Compuesto 132b. acido (-)-canfanico
Una disolucion de compuesto 131b (600 mg, 1,45 mmol) en DMF (5 mL) en un vial de microondas se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. A continuacion, se anadio tetrametilestano (0,301 mL, 2,18 mmol) seguido 20 por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (148 mg, 0,29 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento a 140°C mediante irradiacion por microondas durante 30 minutos y despues se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en eter dietflico, se lavo con agua y salmuera, se seco (Na2SO4) y se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico dos veces utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (acetato de etilo en heptano de 10 a 30%) (acetato de 25 etilo en heptano de 10 a 25%). Las fracciones deseadas se concentraron a ~ 50 mL, los solidos se separaron
mediante filtracion y el filtrado se evaporo a sequedad para proporcionar el compuesto 132b (287 mg) en forma de un aceite pegajoso. Compuesto 132b (287 mg, 0,73 mmol) y acido (-)-canfanico (145 mg, 0,73 mmol) se disolvieron en etanol hirviendo (10 mL). Despues de enfriar a temperatura ambiente, se evaporo el etanol, el solido se recristalizo en eter diisopropHico caliente (12 mL) y la mezcla se enfrio durante la noche a temperatura ambiente. Los 30 solidos se filtraron y se lavaron con eter diisopropHico frio. Los cristales se secaron a 50°C en vado, resultando el
compuesto 132b acido (-)-canfanico (221mg) en forma de un solido amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 0,84 (s, 3 H), 1,00 (s, 6 H), 1,44 - 1,60 (m, 1 H), 1,76 (s, 3 H), 1,84 - 2,03 (m, 2 H), 2,18 (s, 3 H), 2,27 - 2,41 (m, 1 H), 3,43 (s, 3 H), 7,17 - 7,43 (m, 3 H), 8,05 (ddd, J=10,5, 9,0, 2,5 Hz, 1 H), 8,58 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 9,55 (s ancho, 1 H), 13,52 (s ancho , 1H)
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compuesto 133
Compuesto 132 (88,5 mg, 0,22 mmol), acetato de potasio (84,8 mg; 0,87 mmol) y Pd sobre carbono (al 10%; 100 mg) disuelto en metanol (50 mL) se agitaron bajo una atmosfera de hidrogeno durante 105 minutos. La mezcla de reaccion se filtro y se concentro. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (20 mL), se lavo con agua, se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre sflice utilizando un gradiente del 10 al 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se concentraron y el residuo obtenido se seco en vado, resultando el compuesto 133 en forma de una resina de color amarillo (24,5 mg). Metodo D; Rt; 1,21 m/z: 376,11 (M*H)+ Masa exacta: 375,1 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, mezcla tautomerica ~9 a 1
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observada, tautomero principal descrito) ppm 1,77 (s, 3 H), 2,25 (s, 3 H), 3,42 (s, 3 H), 7,16 - 7,24 (m, 1 H), 7,27
7,10 (m, 2 H), 7,81 (td, J=8,8, 2,9 Hz, 1 H), 8,09 (dd, J=8,9, 4,7 Hz, 1 H), 8,58 - 8,66 (m, 1 H), 9,47 (s, 1 H).
compuesto 134
Un vial de microondas se cargo con una varilla de agitacion, compuesto 92 (80 mg, 0,191 mmol) y DMF (seca) (1,22 mL, 15,7 mmol). Se burbujeo nitrogeno a traves durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (39,8 pL, 0,287 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (29,4 mg, 0,0574 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos y se deja que alcanzara la temperatura ambiente. Se burbujeo nitrogeno a traves durante 10 minutos. A continuacion, se anadio tetrametilestano (39,8 pL, 0,287 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (29,4 mg, 0,0574 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 20 minutos. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico (50 mL) y se lavo con agua (3 x 5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad. El residuo se purifico dos veces utilizando cromatografia en columna de gel de silice (primera purificacion: acetato de etilo en heptano de 5 a 50%; segunda CH2Cb) y se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa (Chiralpak Diacel AD 30 x 250 mm). Fase movil (CO2, isopropanol con isopropilamina al 0,2%), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando 134a (5,6 mg) y 134b (5 mg). SFC: Columna: AD-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: iPrOH al 10% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) en CO2, mantener 15,00 min, Temperatura: 30°C, Rt: Compuesto 134a: 6,4 min, 134b: 8,4 min
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O
Compuesto 135
5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (40 g, 266,4 mmol) y malonato de dimetilo (42,2 g, 319,4 mmol) se disolvieron en THF seco (1400 mL). TiCU (101 g, 532,5 mmol) en CH2Cl2 seco (400 mL) se anadio gota a gota a -20°C ~ -10°C bajo N2. Despues de la adicion, se anadio piridina (200 mL) gota a gota a -20°C ~ -10°C bajo N2. La mezcla se agito durante la noche a 20°C. El solido se separo mediante filtracion. La torta se disolvio en acetato de etilo (800 mL), la suspension se agito durante 5 min y se filtro. El filtrado se concentro en vacio y se anadio acetato de etilo (800 mL). El precipitado se separo mediante filtracion. El filtrado se lavo con salmuera (200 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en alto vacio. El residuo se disolvio en DMSO (400 mL), se filtro sobre papel de filtro y a continuacion en una membrana de filtro (0,45 um). El filtrado obtenido se purifico mediante cromatografia liquida de alta resolucion (C18, eluyente: CH3CN/H2O de 15/85 a 45/55 con HCl al 0,1% como tampon). Las fracciones puras se concentraron en vacio. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 400 mL). La capa organica se lavo con salmuera (200 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vacio, resultando el compuesto 135 (24 g).
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compuesto 136
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Una mezcla de compuesto 135 (6 g, 22,7 mmol), cloruro de 2-amidinopiridinio (5,3 g, 33,6 mmol) y Na2CO3 (7,2 g, 67,9 mmol) en DMF (60 mL) se agito durante una noche a 60°C bajo N2. El disolvente se separo en vaclo. El residuo se suspendio en diclorometano (100 mL). El precipitado se separo mediante filtracion. El disolvente se separo en 5 vaclo. El residuo se purifico mediante cromatografla en columna de gel de sllice. (Gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 60:40), resultando el compuesto 136 (2,5 g) Metodo B; Rt: 1,04 m/z : 353,9 (M+H)+ Masa exacta: 353,1.
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compuesto 137
Compuesto 136 (2,5 g, 7,1 mmol) se agito durante 2 horas en POCh; (20 mL, 217 mmol) a 120°C. La mezcla de 10 reaccion se concentro a sequedad en vaclo. El residuo se disolvio en diclorometano (60 mL). La capa organica se lavo con NaHCO3 saturado acuoso (3 x 30 mL) y salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vaclo. El residuo se purifico mediante cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 70:30), resultando el compuesto 137 (1,4 g). Metodo B; Rt: 1,20 m/z : 372,0 (M+H)+ Masa exacta: 371,1
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compuesto 138
CrO3 (34 mg, 0,34 mmol) y t-BuOOH acuoso al 70% (3,02 mL) se disolvieron en CH2Cl2 seco (4 mL). Compuesto 137 (385 mg, 1,03 mmol) en CH2Cl2 seco (4 mL) se anadio gota a gota a temperatura ambiente bajo N2. Despues de la adicion, la mezcla se agito durante la noche a 20°C. El solido se separo mediante filtracion. El filtrado se concentro en vaclo y se anadio acetato de etilo (15 mL). El precipitado resultante se separo mediante filtracion. El 20 filtrado se lavo con salmuera (2 x 10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vaclo. El residuo se purifico mediante cromatografla en columna de gel de sllice (gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 10:1), resultando el compuesto 138 (110 mg). Metodo B; Rt: 1,05 m/z : 385,9 (M+H)+ Masa exacta: 385,1
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compuesto 139
Una mezcla de compuesto 138 (0,1 g, 0,26 mmol), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (0,11 g, 0,53 mmol), Pd(OAc)2 (0,006 g, 0,027 mmol), butildi-1-adamantilfosfina (CAS:321921-71-5; 0,015 g, 0,042 mmol) y Cs2CO3 (0,51 g, 1,56 mmol) en DME (1,4 mL) y H2O (0,14 mL) se agito bajo irradiacion de microondas durante 20 min a 140°C 5 bajo N2. Se anadieron agua (5 mL) y diclorometano (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con agua (2 x 5 mL). La capa organica se lavo con HCl 1 N (5 mL). La capa acuosa se lavo con diclorometano (2 x 5 mL) y se basifico con NaHCO3a pH = 7 ~ 8. La mezcla se extrajo con diclorometano (15 mL). La capa organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. El residuo se purifico mediante cromatograffa Kquida de alto rendimiento preparativa sobre RP-18 (eluyente: CH3CN en H2O (TFA al 0,1%) de 20% a 60%, v/v). Las fracciones puras se 10 recogieron y el disolvente se separo en vado, resultando el compuesto 139 en forma de una sal de TFA (55 mg). Metodo G; Rt: 3,75 m/z : 451,2 (M+H)+ Masa exacta: 4502.
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compuesto 140
Un vial se cargo sucesivamente con compuesto 131 (2,80 g, 5,96 mmol), acetonitrilo (25 mL, 481 mmol), 4- dimetilaminopiridina (72,8 mg, 0,596 mmol) y di-ferc.-dicarbonato de butilo (3,90 g, 17,9 mmol) y se cerro con una 15 tapa de Teflon. La mezcla de reaccion se agito durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (acetato de etilo en heptano de 10% a 20%) para proporcionar el compuesto 140 (2,73 g). Metodo A; Rt: 1,32 m/z : 514,1 (M+H)+ Masa exacta: 513,1.
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20 Compuesto 141
Un tubo se cargo con compuesto 140 (335 mg, 0,652 mmol), 1,4-dioxano (10 mL) y disolucion de carbonato potasico acuoso saturado (5 mL). La mezcla de reaccion se purgo con gas nitrogeno durante 10 minutos y se anadieron la sal
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ciclopropilo trifluoroborato de potasio (144 mg, 0,978 mmol) y aducto de dicloro[1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio II diclorometano (26,6 mg, 0,0326 mmol). La mezcla de reaccion se lavo con gas nitrogeno y el tubo se cerro, se calento a 80°C durante 20 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. Se anadio diclorometano (50 mL) a la mezcla de reaccion. La capa organica separada se lavo con disolucion de carbonato de sodio saturada acuosa (2 x 10 mL), agua (5 mL) y salmuera (5 mL). La disolucion organica se seco (Na2SO4) y se evaporo. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (acetato de etilo en heptano de 0% a 15%) para proporcionar el compuesto 141 (270 mg). Metodo A; Rt: 1,35 m/z : 520,1 (M+H)+ Masa exacta: 519,2.
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Compuesto 142
Compuesto 141 (270 mg) se disolvio en HCl (3 M en metanol) (20 mL, 60 mmol) y se anadio una varilla de agitacion, resultando una disolucion burbujeante. Parte de la mezcla de reaccion (~ 1/4) se agito a 45°C durante 1,5 horas en un tubo cerrado. La disolucion se evaporo hasta sequedad, resultando un residuo pegajoso. Se anadio eter dietilico y se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en diclorometano (30 mL) y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (10 mL) y agua (5 mL). La capa organica se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad para proporcionar el compuesto 142 (50,5 mg). Metodo A; Rt: 1,24 m/z : 420,1 (M+H)+ Masa exacta: 419,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d que contiene una gota de TFA) d ppm 0,76 - 0,94 (m, 2 H), 1,07 - 1,23 (m, 2 H), 2,17 (s, 3 H), 2,31 (tt, J=8,6, 5,6 Hz, 1 H), 3,63 (s, 3 H), 7,15 - 7,29 (m, 2 H), 7,33 (ddd, J=10,9, 7,2, 2,3 Hz, 1 H), 7,58 (ddd, J=10,9, 7,1,2,2 Hz, 1 H), 8,51 (d, J=2,0 Hz, 1 H).
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Compuesto 143
Una mezcla de compuesto 137 (150 mg, 0,403 mmol), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (167 mg, 0,806 mmol), butildi-1-adamant-1-fosfina (23 mg, 0,064 mmol), Pd(OAc)2 (9 mg, 0,040 mmol) y Cs2CO3 (0,787 g, 2,418 mmol) en agua (0,21 mL) y DME (2,1 mL) se calento por irradiacion de microondas durante 20 minutos a 140°C bajo una atmosfera de N2. Se anadieron agua (10 mL) y diclorometano (10 mL). La capa organica se separo y se lavo con agua (10 mL). La capa organica se extrajo con HCl 1N (5 mL). La capa acuosa se lavo con diclorometano (2 x 10 mL) y se basifico a pH = 7-8 con NaHCO3. La mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 10 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se lavo con eter de petroleo (2 mL), resultando el compuesto 143 (120 mg). Metodo H; Rt: 3,28 m/z : 437,2 (M+H)+ Masa exacta: 436,2.
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Compuesto 144
NaBH4 (12,6 mg, 0,333 mmol) se anadio a compuesto 139 (50 mg) en MeOH (2 mL) y la mezcla resultante se agito durante 10 minutos a 20°C. El disolvente se separo en vado. Se anadio diclorometano (10 mL) y la mezcla se lavo con agua (2 x 10 mL). La capa organica se extrajo con HCl 1N (2 x 10 mL). Las capas acuosas reunidas se lavaron con diclorometano (2 x 10 mL) y se ajustaron a pH = 7-8 con NaHCO3 solido. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 10 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa lfquida de alto rendimiento preparativa sobre RP-18 (eluyente: CH3CN en H2O (TFA al 0,1%) de 15% a 25%, v/v). Las fracciones puras se recogieron y los componentes volatiles se separaron en vado. La capa acuosa se ajusto a pH = 7 con resina de intercambio de aniones Amberlite IRA-900 (OH) y la resina se separo mediante filtracion. La capa acuosa se liofilizo a sequedad, resultando el compuesto 144 (20 mg). Metodo I Rt: 3,80 m/z; 453,3 (M+H)+ Masa exacta: 452,2.
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Una mezcla de compuesto 135 (12,5 g, 47,3 mmol), NBS (9,3 g, 52,3 mmol) y peroxido de benzoilo (12 mg, 0,05 mmol) en CCU (120 mL) se agito durante la noche a 80°C bajo N2. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 200:1 a 100:1), resultando un derivado monobromado de compuesto 135 (7,2 g). Una mezcla de derivado monobromado obtenido anteriormente de compuesto 135 (3,6 g, 10,5 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (2,5 g, 16,0 mmol) y Na2CO3 (3,38 g, 31,9 mmol) en DMF (60 mL) se agito durante 4 horas a 90°C bajo N2. El disolvente se separo en vado. El residuo se suspendio en diclorometano (100 mL). El precipitado se filtro y el filtrado obtenido se concentro en vado. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice. (Gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 50:1 a 1:5), resultando 5-fluoro-6'-oxo-2'-(piridin-2-il)-5',6’-dihidro- 1'H-espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (0,4 g). 5-fluoro-6'-oxo-2'-(piridin-2-il)-5',6'-dihidro-1'H- espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (0,6 g, 1,71 mmol) en POCl3 (10 mL, 105,7 mmol) se agito durante 2 horas a 120°C. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad. El residuo se disolvio en diclorometano (10 mL). La capa organica se lavo con NaHCO3 saturado acuoso (3 x 30 mL) y salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente de eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 70:30) resultando 6'-cloro-5-fluoro-2'-(piridin -2-il)- 1'H-espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (0,07 g). Una mezcla de 6'-cloro-5-fluoro-2'-(piridin-2-il)- 1'H-espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (75 mg, 0,2 mmol ), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (84 mg, 0,41 mmol), Pd(OAc)2 (45 mg, 0,2 mmol), butildi-1-adamantil-fosfina (11 mg, 0,033 mmol) y Cs2CO3 (390 mg, 1,20 mmol) en DME (1,4 mL) y H2O (0,14 mL) se calento por irradiacion de microondas durante 20 minutos a 140°C bajo una atmosfera de N2. Se anadieron agua (5 mL) y diclorometano (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con agua (2 x 5 mL). La capa organica se extrajo con HCl 1N (5 mL). La capa acuosa se lavo con diclorometano (2 x 5 mL) y se basifico con NaHCO3 a pH = 7~8. La mezcla se extrajo con diclorometano (15 mL). La
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capa organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vaclo, resultando el compuesto 145 (12 mg). Metodo H; J Rt: 3,29 m/z; 435,2 (M+H)+ Masa exacta: 434,2. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 10,22 (1 H, s ancho), 8,61 (1 H, d, J=4,5 Hz), 8,14 (1 H, d, J=8,0 Hz), 7,71 (1 H, td, J=7,5, 1,5 Hz), 7,36 (1 H, ddd, J=7,5, 5,0, 1,5 Hz), 7,19 (1 H, dd, J=8,0, 5,5 Hz), 6,97 (1 H, dd, J=8,8, 2,5 Hz), 6,81 (1 H, ddd, J=10,0, 8,0, 2,0 Hz), 6,65 (1 H, d, J=5,5 Hz), 6,54 (1 H, d, J=5,5 Hz), 3,82 - 3,89 (4 H, m), 3,81 (1 H, d, J=16,5 Hz), 3,73 (1 H, d, J=16,5 Hz), 3,33 (3 H, s), 2,57 - 2,71 (4 H, m).
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A la disolucion de 5-fluoro-3-metil-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (24 g, 146 mmol) y malonato de dimetilo (57,9 g, 439 mmol) en CH2Cl2 (500 mL) y THF (500 mL) se anadio gota a gota a -40°C TiCl4 (54,7 g, 292 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a -40°C. Se anadio piridina (57 g, 731 mmol) gota a gota a -40°C. La mezcla de reaccion se agito durante 12 horas a temperatura ambiente. El solido se separo mediante filtracion y el filtrado se concentro en vaclo. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografla en columna en gel de sllice (hexano: acetato de etilo = 5:1), resultando 2-(5-fluoro-3-metil-2,3-dihidro-1H-inden-1-iliden)malonato de dimetilo (9,5 g). La mezcla de 2-(5-fluoro-3-metil-2,3-dihidro-1H-inden-1-iliden)malonato de dimetilo (9,2 g, 33,09 mmol), piridina-2- carboximidamida (12 g, 99,2 mmol), Na2CO3 (10,5 g, 99,2 mmol) y tamices moleculares 4A (10 g) en ClCH2CH2Cl (50 mL) se agito durante 12 horas a 80°C bajo una atmosfera de nitrogeno. El disolvente se separo en vaclo y el residuo obtenido se purifico mediante cromatografla en columna de gel de sllice (hexano:acetato de etilo = 1:1), resultando 5-fluoro-3-metil-6’-oxo-2’-(piridin-2-il)-2,3,5’,6’-tetrahidro-1’H-espiro[indeno-1,4’-pirimidina]-5’-carbocxilato de metilo (1,5 g). La mezcla de 5-fluoro-3-metil-6’-oxo-2’-(piridin-2-il)-2,3,5’,6’-tetrahidro-1’H-espiro[indeno-1,4’- pirimidina]-5’-carbocxilato de metilo (1 g, 2,74 mmol) y POCl3 (10 mL) se agito durante 5 horas a reflujo. Cuando se completo la reaccion, la mezcla se vertio en hielo-agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las capas reunidas se secaron y se concentraron a sequedad. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografla en gel de sllice (hexano:acetato de etilo = 1:1), resultando 6’-cloro-5-fluoro-3-metil-2'-(piridin-2-il)-2,3-dihidro-1lH- espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (0,42 g). La mezcla de 6’-cloro-5-fluoro-3-metil-2'-(piridin-2-il)-
2,3-dihidro-1'H-espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (400 mg, 1,03 mmol), Pd(OAc)2 (22 mg, 0,10 mmol), butildi-1-adamantilfosfina (35,8 mg, 0,103 mmol), (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (256 mg, 1,23 mmol), Cs2CO3 (669 mg, 2,06 mmol), DME (10 mL) y H2O (1 mL) se agito durante 50 minutos bajo irradiacion de microondas a 140°C. La mezcla de reaccion se concentro en vaclo y el residuo obtenido se disolvio en acetato de etilo y se lavo con salmuera (2 x 10 mL). La capa organica se concentro a sequedad. El producto bruto se purifico mediante cromatografla de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 80/20, CF3COOH al 0,1%). Se recogio la fraccion deseada y el valor del pH de la disolucion se ajusto a aproximadamente 8 con K2CO3. Despues, el disolvente organico se separo a presion reducida. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). Las capas organicas se reunieron y se secaron sobre Na2SO4. La disolucion se evaporo y el producto puro se seco en vaclo, resultando el compuesto 146 (60 mg, mezcla de diastereoisomeros 7/3). Metodo J; Rt: 6,44 m/z; 451,2 (M+H)+ Masa exacta: 450,2.
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compuesto 147
Se burbujeo nitrogeno a traves de una disolucion de compuesto 140 (130 mg, 0,24 mmol) y una disolucion saturada de carbonato potasico (2,5 mL) en dioxano (4 mL) durante 10 minutos. Se anadieron trans-3-metoxi-1- propeniltrifluoroborato de potasio (64 mg, 0,36 mmol) y aducto de dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio(N) y diclorometano (9,8 mg, 0,012 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 80°C en un tubo cerrado durante 2 horas. La mezcla de reaccion se concentro. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (30 mL) y agua (20 mL). La capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografla en columna sobre sllice (eluyente 5 a 100% EtOAc en heptano). Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron, proporcionando 4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-6-(3-metoxiprop-1-enil)-4-metilpirimidina-1,5(4H)- dicarboxilato de (E)-1-terc.-butil-5-metilo en forma de un aceite transparente (94 mg). HCl en dioxano (1 mL, 4 M) se anadio a una disolucion del compuesto anterior (94 mg) en metanol (5 mL) y se agito durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro y se seco en vaclo durante la noche. El residuo obtenido se disolvio en CH2Cl2 (5 mL), se lavo con NaHCO3 saturado (5 mL), la capa organica se seco sobre un cartucho de HM-N y se concentro en vaclo. El residuo obtenido se seco durante una noche en vaclo a 50°C, proporcionando compuesto147 (61 mg) en forma de una resina amarilla. Metodo K; Rt: 2,20 m/z; 450,2 (M+H)+ Masa exacta: 449,1.
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compuesto 148
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Un vial se cargo con 3-cloro-4-fluorofenilacetileno (6 g, 38,8 mmol), malonato de dimetilo (4,4 mL, 38,8 mmol) y cloruro de indio(III) (257 mg, 1,16 mmol). La mezcla se agito a 130°C durante 18 horas, se dejo que alcanzara la temperatura ambiente y se utilizo como tal. Parte de esta mezcla de reaccion (4,21 g de mezcla en bruto) y 3,5- difluoropicolinimidamida (3,46 g, 22 mmol) en 1,4-dioxano (63 mL) se agito y se calento a 40°C durante 90 minutos. La mezcla de reaccion resultante se concentro bajo presion reducida, se anadio oxicloruro de fosforo (27,3 mL, 293,81 mmol) y esta mezcla se calento y se agito en un bano de aceite a 110°C durante 7 horas. La mezcla
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resultante se concentro bajo presion reducida. El residuo obtenido se trato con bicarbonato de sodio (ac. sat. 150 mL) y se agito durante 30 minutos. Esto se extrajo con diclorometano (3 x 100 mL). Los componentes organicos reunidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El producto bruto se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de sflice (gradiente: heptano - diclorometano 60:40 a 40:60). Las fracciones deseadas se concentraron bajo presion reducida. El producto bruto obtenido se purifico de nuevo utilizando cromatografia en columna de sflice (gradiente: heptano-acetato de etilo 100:0 a 90:10) proporcionando 6- cloro-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-4-metil-1,4-dihidropirimidina-5-carboxilato de metilo (774 mg) en forma de un solido amarillo. Este compuesto (500 mg, 1,16 mmol) se disolvio en N,N-dimetilformamida (5 mL) y la disolucion se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (322 pl, 2,32 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (59,4 mg, 0,12 mmol), el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla se calento mediante irradiacion por microondas a 140°C durante 60 minutos. La mezcla se evaporo a sequedad a vado. El residuo obtenido se disolvio en eter dietflico y la capa organica se lavo con agua destilada (3 x 10 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro a presion reducida. El producto bruto se purifico mediante HPLC Prep (Hypersyl C18 BDS-3 pm, 100 x 4,6 mm) Fase movil (NH4OAc 0,5% en agua, ACN). Se recogieron las fracciones deseadas, el disolvente organico se separo en vado y la capa acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas organicas se reunieron y se concentraron a presion reducida, proporcionando compuesto 148 (211 mg) y compuesto 149 (29 mg) en forma de un solido amarillo.
Compuesto 148 Metodo A; Rt: 1,13 m/z; 410,1 (M+H)+ Masa exacta: 409,1.
Compuesto 149 Metodo A; Rt: 1,09 m/z; 390,1 (M+H)+ Masa exacta: 389,1.
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Un vial para microondas se cargo con 6-cloro-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-4-metil-1,4- dihidropirimidina-5-carboxilato de metilo (478 mg, 1,11 mmol), carbonato de cesio (2,18 g, 6,68 mmol), (morfolin-4- il)metiltrifluoroborato de potasio (276,5 mg, 1,34 mmol), agua destilada (1 mL) y 1,2-dimetoxietano (3 mL). La mezcla se purgo con nitrogeno durante 5 minutos. A continuacion se anadieron acetato de paladio(II) (50,4 mg, 0,22 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (63,8 mg, 0,18 mmol) y la mezcla se purgo con nitrogeno durante otros 2 minutos. El vial se tapo y se calento mediante irradiacion por microondas a 100°C durante 25 minutos. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se recogio en diclorometano (5 mL) y agua (5 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 5 mL). Los extractos reunidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El producto bruto obtenido se purifico por HPLC Prep (Hypersyl C18 BDS-3 pm, 100 x 4,6 mm) Fase movil (NH4OAc al 0,5% en agua/acetonitrilo). Se recogieron las fracciones deseadas, el disolvente organico se separo en vado y el agua obtenida se extrajo con diclorometano (2 x 10 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida, proporcionando el compuesto 150. Metodo A; Rt: 1,22 m/z; 495,1 (M+H)+ Masa exacta: 494,1.
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Compuesto 151 Enantiomeros de la mezcla racemica 151: 151a y 151b
Se anadio tetracloruro de titanio (11,4 mL, 104,1 mmol) en diclorometano (28 mL) gota a gota a un matraz que contema tetrahidrofurano (205 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno, se enfrio en bano de hielo. A continuacion se anadieron 1-(3,4-difluorofenil) -2,2-difluoro-etanona (10 g, 52 mmol) y malonato de dimetilo (5,93 mL, 52 mmol), ambos a la vez. La mezcla resultante se agito bajo una atmosfera de nitrogeno durante 60 minutos mientras se continuaba el enfriamiento. Despues, se anadio piridina (16,8 mL, 208 mmol) en tetrahidrofurano (37 mL) a la mezcla y se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante la noche. Seguidamente, se anadieron agua destilada (40 mL) y eter dietflico (40 mL) a la mezcla. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con eter dietnico (2 x 40 mL). Los componentes organicos reunidos se lavaron con salmuera (60 mL), NaHCO3 (60 mL) (ac / sat) y de nuevo con salmuera (60 mL). La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro a presion reducida, proporcionando 2-(1-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoroetiliden)malonato de dimetilo (15,6 g) en forma de un aceite transparente. 2-(1-(3,4-difluorofenil)-2,2-difluoroetiliden)malonato de dimetilo (5 g) se disolvio en 1,4-dioxano (25 mL) y se trato con 3,5-difluoropiridina-2-carboximidamida (3,1 g, 19,6 mmol). La mezcla resultante se agito a 40°C durante la noche. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (acetato de etilo - heptano 0:100 a 50:50) proporcionando 4- (difluorometil)-4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-6-oxo-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxilato de metilo (5,45 g) en forma de un solido amarillo que se utilizo como tal. 4-(difluorometil)-4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5- difluoropiridin-2-il)-6-oxo-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxilato de metilo se trato con oxicloruro de fosforo (10 mL, 107,6 mmol) y la mezcla se agito a reflujo durante 2 horas.
La mezcla se concentro a presion reducida, proporcionando un alquitran negro, que se trato con hielo-agua (50 mL). Esto se extrajo con diclorometano (3 x 30 mL). Los extractos reunidos se lavaron con salmuera (30 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El producto bruto obtenido se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice utilizando gradiente de elucion (heptanos - diclorometano 100:0 a 25:75) proporcionando 6-cloro-4-(difluorometil)-4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5-
carboxilato de metilo (1,95 g) en forma de un solido ligeramente amarillo que se utilizo como tal. 6-cloro-4- (difluorometil)-4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5-carboxilato de metilo (450 mg, 1 mmol) se disolvio en N,N-dimetilformamida (6,4 mL) en un vial de microondas y esto se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. A continuacion, se anadio tetrametilestano (0,21 mL, 1,5 mmol) seguido por bis(tri-t- butilfosfina)paladio(0) (51 mg, 0,1 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla se calento por irradiacion de microondas a 140°C durante 10 minutos. La mezcla se concentro en vado y se co-evaporo con tolueno (2 x 20 mL). El residuo obtenido se recogio en agua-diclorometano (30 mL-30 mL) y la capa acuosa se extrajo otras dos veces (2 x 30 mL de diclorometano). El extracto reunido se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC Prep (Hypersyl C-is BDS-3pm, 100 x 4,6 mm) Fase movil (NaHCO3 al 0,5% en agua, CH3CN). Las fracciones deseadas se concentraron y se co-evaporaron con metanol (2 x 10 mL). El residuo obtenido se seco en vacfo, proporcionando el compuesto 151 en forma de un aceite amarillo. La mezcla racemica 151 se separo en enantiomeros 151a y 151b utilizando SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm / fase movil: CO2, EtOH con iPrNH2 al 0,2%) proporcionando compuesto 151a (93 mg) en forma de un solido pegajoso de color amarillo y compuesto 151b (100 mg) en forma de un solido pegajoso de color amarillo. Compuesto 151: Metodo A; Rt: 1,11 m/z; 430,0 (M+H)+ Masa exacta: 429,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, mezcla tautomerica, isomero principal descrito) 6 ppm 2,36 (s, 3 H), 3,69 (s, 3 H), 6,71 (t, J=56 Hz, 1 H), 7,07 (dt, J=10,0, 8,5 Hz, 1 H), 7,26 - 7,31 (m, 1 H), 7,32 - 7,43 (m, 2 H), 8,29 (d, J= 2,0 Hz, 1 H), 8,34 (s ancho, 1 H). SFC: columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 5% (que contema iPrNH2 al 0,2%) mantener 15.00 min, Temperatura: 30°C: Compuesto 151a Rt: 3,9 min; Compuesto 151b Rt: 4,4 min)
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Una disolucion de compuesto 131 (180 mg, 0,435 mmol) en DMF (2 mL) en un vial de microondas se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tributil(metoximetil)estannano (219 mg, 0,653 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (44,5 mg, 0,087 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento por irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro en vacio para proporcionar un aceite pegajoso. Este aceite se purifico mediante HPLC prep. (Hypersyl C18 BDS-3pm, 100 x 4,6 mm; Fase movil (NH4HCO3 al 0,2% en agua, acetonitrilo). Las fracciones deseadas se reunieron y se evaporaron para formar un precipitado en el disolvente restante (agua). Los solidos se filtraron y lavaron con agua, resultando el compuesto 152 (23 mg) en forma de solido de color blanquecino despues de secar en vacio a 50°C. Metodo A; Rt: 1,18 m/z; 424,1 (M+H)+ Masa exacta: 423,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 1,92 (s, 3 H), 3,49 (s, 3 H), 3,51 (s, 3 H), 4,61 (d, J=16,0 Hz, 1 H), 4,67 (d, J=16,0 Hz, 1 H), 7,06 (dt, J=10,0, 8,5 Hz, 1 H), 7,15 - 7,22 (m, 1 H), 7,24 - 7,33 (m, 2 H), 8,33 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,04 (s ancho, 1 H).
Compuesto 153
Un tubo se cargo con compuesto 140 (150 mg, 0,277 mmol), 1,4-dioxano (4 mL) y disolucion de carbonato potasico acuoso saturado (3 mL). La mezcla de reaccion se purgo con gas nitrogeno durante 10 minutos y se anadieron viniltrifluoroborato de potasio (55,7 mg, 0,416 mmol) y aducto de dicloro[1,1-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio II diclorometano (11,3 mg, 0,0139 mmol). La mezcla de reaccion se lavo con gas nitrogeno y el tubo se cerro y se calento a 80°C durante 20 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. Se anadio diclorometano (25 mL) a la mezcla de reaccion. La capa organica separada se lavo con disolucion de carbonato de sodio saturada acuosa (2 x 5 mL), agua (5 mL) y salmuera (5 mL). La disolucion organica se seco (Na2SO4) y se evaporo. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano de 0% a 15%) para proporcionar 4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-4-metil-6-vinilpirimidina-1,5(4H)-dicarboxilato de 1-terc.- butil-5-metilo (60 mg) en forma de un aceite pegajoso de color amarillo que se seco en horno de vacio a 40°C durante una noche y se utilizo como tal en la siguiente etapa. Metodo A; Rt: 1,30 m/z; 506,1 (M+H)+ Masa exacta: 505,2. 4-(3,4-difluorofenil)-2-(3,5-difluoropiridin-2-il)-4-metil-6-vinilpirimidina-1,5(4H)-dicarboxilato de 1-terc.-butil-5- metilo (60 mg, 0,119 mmol), HCl (4 M en dioxano) (4,00 mL, 16,0 mmol) y metanol (2 mL) se agitaron a 50°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad para proporcionar un residuo pegajoso amarillo que se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (diclorometano en heptano de 40 a 100%) para proporcionar el compuesto 153 (41 mg) despues de secar en vacio. Metodo A; Rt: 1,18 m/z; 406,1 (M+H)+ Masa exacta: 405,1.
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Una disolucion de compuesto 132 (75 mg, 0,183 mmol) en DMF (1 mL) en un vial de microondas se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (38,0 pL, 0,275 mmol) seguido por bis(tri-t- butilfosfina)paladio(0) (18,7 mg, 0,0366 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento por irradiacion de microondas a 140°C durante 1 hora y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro en vaclo para proporcionar una resina oscura. El producto se mezclo con metanol (10 mL) y se filtro. El filtrado se evaporo a sequedad para proporcionar un residuo oleoso oscuro. El aceite se disolvio en diclorometano (30 mL), se lavo con agua (2 x 10 mL), salmuera (5 mL), se seco (Na2SO4 se filtro y se evaporo para proporcionar un aceite pardo. Se purifico el aceite utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (acetato de etilo en heptano de 5 a 30%) Todas las fracciones que contenlan el producto deseado se reunieron y se concentraron en vaclo para proporcionar el compuesto 154 en forma de un aceite pegajoso amarillo Metodo A; Rt: 1,17 m/z; 390,1 (M+H)+ Masa exacta: 389,1. 1H-RMN (600 MHz, benceno-d6); mezcla tautomerica (-9/1), isomero principal descrito; ppm 1,90 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H), 2,34 (t, J=0,6 Hz, 3 H), 3,18 (s, 3 H), 6,52 (ddd, J=9,1,2,8, 0,7 Hz, 1 H), 6,81 (dt, J=10,2, 8,5 Hz, 1 H), 7,14 -7,18 (m, 1 H), 7,50 (ddd, J=12,2, 7,8, 2,3 Hz, 1 H), 7,91 (d, J=2,8 Hz, 1 H), 8,21 (s ancho, 1 H)
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Enantiomeros de la mezcla racemica 155: 155a y 155b
Una mezcla del compuesto 129 (2 g, 6,29 mmol) y 2-tiazolcarboximidamida (1,04 g, 8,18 mmol) en DMF (10 mL) se agito y se calento a 60°C durante 6 horas. La mezcla de reaccion se vertio en agua y el precipitado se filtro y se disolvio en diclorometano. El disolvente organico se seco (Na2SO4) y se concentro a sequedad a vaclo, resultando una mezcla bruta que contenla 4-(3,4-difluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(tiazol-2-il)-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5- carboxilato de metilo (1,91 g). Metodo A; RT: 1,04 m/z; 366,0 (M + H)+ Masa exacta: 365,1. Una mezcla de 4-(3,4- difluorofenil)-4-metil-6-oxo-2-(tiazol-2-il)-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-5-carboxilato de metilo (1,91 g bruto) y POCl3 (7 mL, 78 mmol) en un tubo cerrado se agito a 120°C durante 75 minutos. La mezcla de reaccion se concentro bajo un flujo de nitrogeno a 50°C. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano (50 mL) y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (50 mL). La fase organica se seco (Na2SO4) y se concentro en vaclo para proporcionar un residuo pardo oscuro. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (diclorometano isocratico), resultando metil 6-cloro-4-(3,4-difluorofenil)-4-metil-2-(tiazol-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5- carboxilato de metilo (721 mg bruto). Metodo A; RT: 1,10 m/z;384,0 (M + H)+ Masa exacta: 383,0. Una disolucion de 6-cloro-4-(3,4-difluorofenil)-4-metil-2-(tiazol-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5-carboxilato de metilo (356 mg, 0,751 mmol) en DMF (2 mL) en un vial de microondas se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Se anadio tetrametilestano (156 pL, 1,13 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (76,8 mg, 0,15 mmol), el vial se purgo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento por irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en diclorometano y se lavo con agua y salmuera, se seco (Na2SO4) y se evaporo a sequedad para
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proporcionar un aceite de color pardo. El producto bruto obtenido se purifico utilizando cromatografla en columna de gel de sllice (acetato de etilo en heptano de 10 a 30%) para proporcionar el compuesto 155 (153 mg). Metodo A; RT: 1,12 m/z; 364,1 (M + H)+ Masa exacta:.363,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, mezcla tautomerica (~8/2), isomero principal descrito) 5 ppm 1,87 (s, 3 H), 2,29 (s, 3 H), 3,49 (s, 3 H), 7,06 (dt, J=10,0, 8,5 Hz, 1 H), 7,13-7,20 (m, 1 H), 7,23 - 7,32 (m, 1 H), 7,44 (d, J=3,0 Hz, 1 H), 7,73 (s ancho, 1 H), 7,82 (d, J=3,0 Hz, 1 H). La mezcla racemica 155 se separo en enantiomeros 155a y 155b mediante SFC Prep (Fase estacionaria: Chiralpak Diacel AD 30 x 250 mm), Fase movil: CO2, etanol), proporcionando compuesto 155a (54 mg) y compuesto 155B (50 mg). Columnas: aD-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 5% (que contenla iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C compuesto 155a Rt (4,0 min) compuesto 155b Rt (4,9 min).
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Preparado a traves de una ruta similar a la descrita para el compuesto 148 y 149, partiendo de 1-cloro-4-etinil-2- fluoro-benceno en lugar de 3-cloro-4-fluorofenilacetileno. La reaccion de 2-(1-(3-cloro-4-fluorofenil)etilideno)malonato de dimetilo con 3,5-difluoropicolinimidamida en 1,4-dioxano se realizo a 40°C durante 18 horas.
Compuesto 156: Metodo A; Rt: 1,13 m/z; 410,1 (M+H)+ Masa exacta: 409,1; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, que contiene una gota de TFA) 5 ppm 2,22 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H), 3,60 (s, 3 H), 7,28 (ddd, J=8,4, 2,4, 0,7 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J=9,7, 2,2 Hz, 1 H), 7,47 (dd, J=8,4, 7,5 Hz, 1 H), 7,57 (ddd, J=10,8, 7,0, 2,2 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,2 Hz, 1 H)
Compuesto 156. MsOH: preparado de manera similar al compuesto 132b, partiendo del compuesto 156 en lugar de 132b
Compuesto 157 Metodo A; Rt: 1,09 m/z; 390,1 (M+H)+ Masa exacta: 389,1
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, que contiene una gota de TFA) 5 ppm 2,20 (s, 3 H), 2,29 (d, J=1,8 Hz, 3 H), 2,48 (s, 3 H), 3,58 (s, 3 H), 7,13 - 7,21 (m, 2 H), 7,22 - 7,29 (m, 1 H), 7,56 (ddd, J=10,8, 7,2, 2,2 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,0 Hz, 1 H)
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Enantiomeros de la mezcla racemica 158: 158a y 158b
Compuesto 158 se preparo a traves de una ruta similar a la descrita para el compuesto 132 a partir del compuesto 129, utilizando 3-fluoro-2-piridina carboximidamida en lugar de 3,5-difluoro-2-piridina carboximidamida. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, mezcla tautomerica (~9/1), isomero principal descrito) 6 ppm 1,90 (s, 3 H), 2,30 (s, 3 H), 3,52 (s, 3 H), 7,05 (dt, d=10,0, 8,0 Hz, 1 H), 7,20-7,26 (m, 1 H), 7,33 (ddd, J=12,0, 8,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,41 (ddd, d=8,0, 4,5, 3,5 Hz, 1 H), 7,50 (ddd, d=10,0, 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 8,16 (s ancho, 1 H), 8,38 (dt, d=4,6, 1,3 Hz, 1 H). La mezcla racemica 158 (135 mg) se separo en enantiomeros 158a y 158b mediante SFC Prep en (Chiralpak Diacel AD 30 x 250 mm). Fase movil (CO2, etanol), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando compuesto 158a y compuesto 158b. Columnas: AD-H 250 mm x 4,6 mm, Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 3% (que contema iPrNH2 al 0,2%) mantener 17,5 min; Temperatura: 30°C; compuesto 158a Rt (7,2 min; 376,1 (M + H)+), compuesto 158b Rt (8,6 min; 376,1 (M + H)+).
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Compuesto 159
Enantiomeros de la mezcla racemica 159: 159a y 159b
Una mezcla del compuesto 129 (4 g bruto), 2-pirimidinacarboximidamida (2,35 g, 19,2 mmol) y 1,4-dioxano (25 mL) se agito a 40°C durante 72 horas y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad para proporcionar un residuo de color pardo. Este residuo y oxicloruro de fosforo (20,9 mL, 225 mmol) se agitaron a 120°C durante 45 minutos en un matraz de fondo redondo. La mezcla de reaccion se concentro en vado a 50°C y se co evaporo con tolueno (2 x 100 mL). El residuo se disolvio en diclorometano (250 mL) y se lavo con bicarbonato de sodio saturado acuoso (100 mL), se seco (Na2SO4) y se evaporo para proporcionar un residuo de color pardo oscuro. Este residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice (diclorometano en heptano de 50 a 100%) a 6-cloro-4-(3,4-difluorofenil)-4-metil-2-(pirimidin-2-il)-1,4-dihidropirimidina- 5-carboxilato de metilo (1800 mg) en forma de un solido de color amarillo claro. Una disolucion de 6-cloro-4-(3,4- difluorofenil)-4-metil-2-(pirimidin-2-il)-1,4-dihidropirimidina-5-carboxilato de metilo (900 mg) en 1,4- dioxano (10 mL) en un vial de microondas se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos. Despues se anadio tetrametilestano (494 |jL, 3,56 mmol) seguido por bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (243 mg, 0,475 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento bajo irradiacion de microondas a 140°C durante 30 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito y se purgo con nitrogeno durante 10 minutos, se anadio bis(tri-t-butilfosfina)paladio(0) (121 mg, 0,238 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla de reaccion se calento por irradiacion de microondas a 145°C durante 30 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo. El residuo obtenido se mezclo con diclorometano (100 mL) y el precipitado de color naranja se separo mediante filtracion. El filtrado se lavo con agua (2 x 20 mL), se seco (Na2SO4) y se concentro en vacfo. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en
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columna de gel de s^lice (acetato de etilo en heptano de 20 a 100%) para proporcionar el compuesto 159 en forma de un aceite pegajoso de color amarillo. Metodo A; Rt: 0,86 m/z; 359,2 (M+H)+ Masa exacta: 358,1.La mezcla racemica 159 se purifico mediante SFC Prep (Fase estacionaria: Chiralpak Diacel AD 30 x 250 mm), Fase movil: CO2, etanol), proporcionando los compuestos 159a y 159b en forma de polvos de color amarillo. Columnas: AD-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 10% (que contenia iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C; compuesto 159a: Rt. (3,2 min), compuesto 159b Rt (4,5 min). 1H RMN (360 MHz, CLOROFORMO-d, mezcla tautomerica (~9/1), isomero principal descrito) 5 ppm 1,96 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 3,49 (s, 3 H), 7,04 (dt, J=10,0, 8,0 Hz, 1 H), 7,19 -7,24 (m, 1 H), 7,30 (ddd, J=12,0, 8,0, 3,0 Hz, 1 H), 7,40 (t, J=5,0 Hz, 1 H), 8,41 (s ancho, 1 H), 8,86 (d, J=5,0 Hz, 2 H).
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Enantiomeros de 160: 160a y 160b
Un tubo de alta presion se cargo con acetoacetato de metilo (54,6 mL, 507 mmol), 3,4-fluorofenilacetileno (70,0 g, 507 mmol) y cloruro de indio(III) (5,61 g, 25,3 mmol) y se cerro. La mezcla de reaccion se agito a 130°C durante 18 horas y seguidamente se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion que contenia 2-acetil-3-(3,4- difluorofenil)but-2-enoato de metilo se utilizo como tal en la siguiente etapa. Bajo una atmosfera de nitrogeno, una mezcla de hemisulfato de S-metilisotiourea (85,2 g, 305,9 mmol), 2-acetil-3-(3,4-difluorofenil)but-2-enoato de metilo bruto (128,9 g), bicarbonato de sodio (170,3 g, 2,03 mol) y N,N-dimetilformamida seca (900 mL) se calento a 50°C durante 20 horas. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se purgo con nitrogeno durante 45 minutos y se anadio agua (600 mL). La mezcla acuosa se extrajo con eter dietilico (4 x 300 mL). Los extractos organicos reunidos se lavaron con agua (300 mL) y salmuera (300 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida. El residuo se co-evaporo con tolueno (2 x 200 mL), resultando un aceite de color pardo. Este se disolvio en diclorometano (150 mL). Despues de 3 horas se recogieron los cristales en un filtro y se lavaron con diclorometano (2 x 30 mL) para proporcionar el compuesto 160 en forma de cristales blancos (25,8 g). Metodo A; Rt:
1,04 m/z; 327,1 (M+H)+ Masa exacta: 326,1. 1H-RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, que contiene una gota de TFA) 5 ppm 2,04 (s, 3 H), 2,31 (s, 3 H), 2,65 (s, 3 H), 3,54 (s, 3 H), 7,10 -7,33 (m, 3 H). La mezcla racemica 160 (20 g) se separo en sus enantiomeros 160a y 160b mediante SFC Prep (Fase estacionaria: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm), Fase movil: CO2, iPrOH), proporcionando el compuesto 160a (9,1 g) y 160 B (8,6 g despues de purification adicional utilizando cromatografia de columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano 15%)). SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: iPrOH al 5% (que contenia iPrNH2 al 0,2%) mantener 15.00 min, Temperatura: 30°C Compuesto 160a: Rt (6,2-7,0 min); Compuesto 160b: Rt (min 7,4-8,2 min)
Sintesis alternativa del compuesto 155b
Un vial de microondas se cargo con compuesto 160b (200 mg, 0,613 mmol), bromuro de cobre(I)-sulfuro de dimetilo (504 mg, 2,45 mmol), 2-(tributilestannil)tiazol (688 mg, 1,8 mmol) y 1,2- dimetoxietano (6 mL). La mezcla de reaccion se purgo con nitrogeno y se agito durante 10 minutos y se anadieron acetato de paladio(II) (7 mg, 0,0306 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (22,0 mg, 0,0613 mmol). El vial se lavo con nitrogeno y se tapo. La mezcla se agito y se calento mediante radiation por microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla se diluyo con CH2O2 (50 mL) y se lavo con amoniaco (2 x 50 mL; 25%) y salmuera (50 mL). A continuation, se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro a presion reducida. El residuo se purifico utilizando cromatografia en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano 15%) para proporcionar el compuesto 155b en forma de un solido amarillo.TH RMN ghache_915_1 (400 MHz, DMSO-d6, que contiene una gota de TFA) 5 ppm 1,99 (s, 3 H), 2,28 (s, 3 H), 3,46 (s, 3 H), 7,31-7,51 (m, 2 H), 7,58-7,71 (m, 1 H), 8,19-8,25 (m, 1 H), 8,25-8,34 (m, 1 H).
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Un vial de microondas se cargo con 1,2-dimetoxietano (9 mL), compuesto 160 (295 mg, 0,9 mmol), 2- (tributilestannil)pirazina (854 ^L, 2,71 mmol), bromuro de cobre(I)-sulfuro de dimetilo ( 743 mg, 3,61 mmol) y esto se purgo con nitrogeno y se agito durante 10 minutos. A continuation se anadieron acetato de paladio(II) (10 mg, 0,045 mmol) y butildi-1-adamantilfosfina (32 mg, 0,09 mmol) y el vial se lavo con nitrogeno y se tapo. Esta mezcla se agito y se calento por irradiation de microondas a 140°C durante 30 minutos. La mezcla se diluyo con eter dietflico (100 mL) y se lavo con amoniaco (2 x 100 m, 25%) y salmuera (100 mL). Despues esto se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo obtenido se purifico utilizando HPLC de fase inversa (metanol - NH4HCO3 / columna: Hypersil C18 BDS_3 micrometros). Las fracciones deseadas se concentraron a presion reducida y se co-evaporaron con metanol (2 x 50 mL). El residuo se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de sflice mediante elucion con gradiente (heptano - acetato de etilo 100:0 a 70:30). Las fracciones obtenidas se concentraron a presion reducida y se secaron en vacfo a 55°C, proporcionando el compuesto 161 en forma de un polvo ligeramente amarillo (46 mg). Metodo A; Rt: 1,00 m/z; 359,1 (M+H)+ Masa exacta: 358,1.
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Compuesto 160 (250 mg, 0,77 mmol), 1-metil-2-(tributilestannil)imidazol (0,54 mL, 1,69 mmol) y bromuro de cobre(i)- sulfuro de dimetilo (346 mg, 1,69 mmol) se anadieron a tetrahidrofurano (12,5 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno. Esta disolucion se agito a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego se anadio tetraquis(trifenilfosfina)paladio (44,26 mg, 0,038 mmol). La mezcla resultante se sometio a reflujo durante 24 horas. Esta mezcla se filtro sobre dicalite y esto se lavo con acetato de etilo (50 mL). El residuo se concentro a presion reducida. El producto bruto obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente de elucion: diclorometano-metanol: 100:0 a 99:1). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a presion reducida, proporcionando un aceite amarillo. Este aceite se purifico mediante HPLC Prep en (RP SunFire Prep C18 OBD-10^m, 30x150mm). Fase movil (disolucion de NH4HCO3 al 0,25% en agua, MeOH). Las fracciones recogidas se concentraron a presion reducida y se co-evaporaron con metanol (2 x 20 mL). El residuo obtenido se seco en vacfo a 55°C proporcionando el compuesto 162 en forma de un aceite amarillo (21 mg). ). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 1,85 (s, 3 H), 2,29 (s, 3 H), 3,49 (s, 3 H), 3,91 (s, 3 H), 6,92 (s, '1 H), 7,00 (s, 1 H), 7,01 -
7,10 (m, 1 H), 7,12 -7,20 (m, 1 H), 7,22 -7,31 (m, 1 H), 7,92 (s ancho, 1 H).
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Enantiomeros del compuesto racemico 163: 163a, 163b
Compuesto 131 (500 mg, 1,21 mmol), 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (0,203 g, 1,81 mmol), cianuro de tetrabutilamonio (0,487 g, 1,81 mmol) y acetonitrilo seco (10 mL) y tamices moleculares se agitaron y se calentaron a 100°C en un tubo de microondas cerrado durante 90 minutos y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reaction se concentro en vatio. El residuo se disolvio en diclorometano (50 mL) y se lavo con agua (50 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 50 mL) y las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron en vatio. El residuo obtenido se purifico utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (diclorometano isocratico). Las fracciones deseadas se concentraron en vatio y se purificaron adicionalmente mediante SFC Prep en (Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, etanol con isopropilamina al 0,2%), proporcionando los enantiomeros separados que se purificaron adicionalmente utilizando cromatograffa en columna de gel de silice (acetato de etilo en heptano de 0 a 95%) para proporcionar compuesto 163a (24 mg) y compuesto 163b (25 mg) en forma de polvos de color amarillo que se secaron durante la noche en un horno de vatio a 50°C. . 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d que contema una gota de TFA) d ppm 2,33 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H), 7,21 - 7,33 (m, 2 H), 7,39 (ddd, J=10,5, 7,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,58 (ddd, J=10,5, 7,0, 2,0 Hz, 1 H), 8,51 (d, J=2,0 Hz, 1 H). Metodo E; Rt: 1,05 m/z; 405,1 (M+H)+ Masa exacta: 404,1. SFC: Columnas: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 10% (que contema iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C; Compuesto 163a Rt (4,5 min); Compuesto 163b Rt (5,4 min)
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A una mezcla de polvo de zinc (704 mg, 10,8 mmol) en THF seco (50 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadio 1,2-dibromoetano (0,016 mL, 0,181 mmol) seguido por trimetilclorosilano (114 mg, 1,05 mmol). Se anadio una disolucion de 2-bromo-5-fluoro-benzaldehido (2,13 g 10,50 mmol) y bromodifluoroacetato de etilo (2,13 g, 10,50 mmol) en THF (25 mL) y la mezcla de reaccion se sometio a reflujo durante la noche. La mezcla se enfrio y se vertio en hielo/agua (250 mL). Se anadio HCl 1M (100 mL) mientras se agitaba. La mezcla se agito durante 1 hora y se extrajo con t-butilmetileter (200 mL). La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se reunieron y se concentraron en vatio, proporcionando 3-(2-bromo-5-fluorofenil)-2,2-difluoro-3-hidroxipropanoato de etilo (1096 mg). ). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 1,35 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 4,37 (q, J=7,0 Hz, 2 H), 5,72 (ddd, J=15,7, 6,1, 1,0 Hz, 1 H), 6,99 (ddd, J=8,8, 7,7, 3,1 Hz, 1 H), 7,39 (ddd, J=9,5, 3,1, 1,0 Hz, 1 H), 7,54 (dd, J=8,8, 5,3 Hz, 1 H). El procedimiento se repitio a una escala mayor de 2-bromo-5-fluoro-benzaldehido (71,2 g, 351 mmol), proporcionando 3-(2-bromo-5- fluoro-fenil)-2,2-difluoro-3-hidroxi-propanoato de etilo (86 g). DASt (48,3 mL, 394,4 mmol) se anadio gota a gota a una disolucion de 3-(2-bromo-5-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-3-hidroxi-propanoato de etilo (86 g) en diclorometano (500 mL) durante 15 minutos en un bano de hielo. La mezcla de reaccion se agito y se dejo que alcanzara la temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se anadio lentamente a una disolucion agitada vigorosamente saturada de NaHCO3 (1,5 L) a lo largo de 15 minutos. La mezcla se agito durante 30 minutos mas. La capa organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro, proporcionando 3-(2-bromo-5-fluorofenil)-2,2,3- trifluoropropanoato de etilo (78,0 g) en forma de un aceite de color pardo claro que se utilizo como tal. . 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 1,38 (t, J=7,2 Hz, 3 H), 4,37-4,44 (m, 2 H), 6,19 - 6,41 (m, 1 H), 7,01 - 7,10 (m, 1 H), 7,29 - 7,37 (m, 1 H), 7,58 (ddd, J=8,9, 5,1, 1,2 Hz, 1 H). 3-(2-bromo-5-fluoro-fenil)-2,2,3-trifluoro-propanoato de
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etilo (55,4 g 163,5 mmol), hidroxido de litio (3,92 g, 163,5 mmol), THF (100 mL) y agua destilada (200 mL) se agitaron durante 5 minutos a temperatura ambiente, resultando una disolucion transparente (1 capa). La mezcla de reaction se acidifico con HCl 1M (164 mL). La emulsion resultante se extrajo con CH2Ch (500 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro, proporcionando un aceite de color pardo claro (58,7 g). A parte de este aceite (52,5 g) en diclorometano (2,6 L) y DMF (7 mmol), se anadio cloruro de oxalilo (89,3 g) durante 15 minutos y la mezcla se agito durante la noche. La mezcla de reaccion se concentro, proporcionando un aceite de color pardo claro que se utilizo como tal. A este aceite en diclorometano (1000 mL) se anadieron hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina (16,07 g, 149,8 mmol) y carbonato de sodio (17,46 g, 164,8 mmol) y la mezcla se agito durante 90 minutos. Se anadio agua (500 mL) y la mezcla se agito durante 5 minutos. La capa organica se separo, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice utilizando un gradiente de 0 hasta 10% de CH3OH en CH2Ch. Las fracciones del producto se reunieron y se concentraron, resultando 3- (2-bromo-5-fluorofenil)-2,2,3-trifluoro-N-metoxi-N-metilpropanamida (37,1 g). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 3,32 (s, 3 H), 3,82 (s, 3 H), 6,41 - 6,64 (m, 1 H), 7,01-7,07 (m, 1 H), 7,34 - 7,41 (m, 1 H), 7,56 (ddd, J=8,9, 5,2, 1,1 Hz, 1 H). Se anadio butil-litio (49,5 mL, 1,6 M en hexanos) durante 30 minutos a - 70°C a una disolucion de 3-(2-bromo-5-fluoro-fenil)-2,2,3-trifluoro-N-metoxi-N-metil-propanamida (25,9 g, 75,4 mmol) en THF seco (225 mL). La mezcla se agito durante 30 minutos y despues se dejo que alcanzara la temperatura ambiente durante 90 minutos. La mezcla de reaccion se inactivo con HCl (1M, 100 mL) y se diluyo con eter diisopropilico (250 mL). La capa acuosa se extrajo dos veces con CH2Ch (250 mL) .Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se concentraron, proporcionando el compuesto 164 (12,6 g) en forma de un aceite. Metodo L; Rt: 1,69 m/z; 202,8 (M- H)- Masa exacta: 204,0. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 5,80 - 6,01 (m, 1 H), 7,42 (tt, J=8,6, 1,8 Hz, 1 H), 7,47 - 7,54 (m, 1 H), 8,00 (ddd, J=8,6, 5,1, 1,3 Hz, 1 H).
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Tetracloruro de titanio (16,29 mL), disuelto en CH2Cl2 (25 mL), se anadio gota a gota, a lo largo de 10 minutos, a una disolucion de compuesto 164 (2,2,3,5-tetrafluoroindan-1-ona; 12,6 g, 61,5 mmol) y malonato de dimetilo (12,2 g, 92,3 mmol) en THF seco (100 mL) y diclorometano (100 mL) en un bano de hielo. La mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos. Despues se anadio piridina (21,8 mL) durante 5 minutos y se dejo que la mezcla de reaccion alcanzara la temperatura ambiente durante la noche con agitation. La mezcla de reaccion se inactivo con agua (400 mL) y se diluyo con CH2Ch (500 mL). La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice con un gradiente del 10 al 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto puro se reunieron y se concentraron, dando como resultado el compuesto 165 (21,0 g, que contema malonato de dimetilo al 28% p/p). Metodo L; Rt: 1,86 m/z; 318,9 (M+H)+ Masa exacta: 318,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 3,90 (s, 3 H), 3,91 (s, 3 H), 5,75 (ddd, J=53,9, 10,6, 2,9 Hz, 1 H), 7,18 - 7,26 (m, 1 H), 7,30 (dt, J=7,5, 2,0 Hz, 1 H), 7,87 (ddd, J=8,9, 4,9, 1,4 Hz, 1 H).
Compuesto 166
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Enantiomeros del compuesto racemico 166: 166a y 166b
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Compuesto 165 (5,0 g, 11,3 mmol), hidrocloruro de 2-tiazolcarboxamidina (2,78 g; 17,0 mmol), bicarbonato de sodio (3,33 g) en dioxano (100 mL) se agito durante la noche a 50°C. La mezcla de reaccion se agito a continuacion durante 2 horas a 60°C, 2 horas a 70°C y 4 horas a 80°C, anadiendo cada vez mas tiazolcarboxamidina (500 mg). La mezcla se enfrio a continuacion, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se recogieron y se concentraron, proporcionando un aceite que contema 2,2,3,5-tetrafluoro-6-oxo-2'-(tiazol-2-il)- 2,3,5',6-tetrahidro-1'H-espiro[indeno-1,4-pirimidina]-5-carboxilato de metilo pegajoso de color amarillo claro (2,33 g). Este residuo oleoso (2,33 g) se agito en POCh (10 mL) a 120°C durante 5 horas. La mezcla de reaccion se concentro. El residuo obtenido se disolvio en CH2Cl2 (100 mL) y se vertio en disolucion saturada de NaHCO3 (200 mL). Esta mezcla se agito vigorosamente durante 15 minutos. La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se concentraron en vado, proporcionando 6-cloro-2,2,3,5-tetrafluoro-2-(tiazol-2-il)-2,3-dihidro-1'H-espiro[indeno-1,4-pirimidina]-5- carboxilato de metilo en forma de un polvo amarillo (799 mg). Metodo L; Rt: 1,89 y 1,99 (relacion 4/6) m/z; 431,9 (M+H)+ Masa exacta: 431,0. Se burbujeo nitrogeno a traves de una disolucion de 6'-cloro-2,2,3,5-tetrafluoro-2- (tiazol-2-il)-2,3-dihidro-1'H-espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (799 mg) en DMF (7 mL). A continuacion, se anadieron tetrametilestano (331 mg, 1,85 mmol) y bis(tri-terc-butilfosfina)paladio(0) (95 mg, 0,185 mmol) y la mezcla de reaccion se calento en un microondas Biotage a 140°C durante 1 hora. La mezcla se filtro y se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando un gradiente del 10 al 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones del producto se concentraron y se secaron en vado, proporcionando 2,2,3,5-tetrafluoro-6-metil-2-(tiazol-2-il)-2,3-dihidro-1'H-espiro[indeno-1,4-pirimidina]-5-carboxilato de metilo en forma de una resina de color amarillo claro (577 mg). Metodo L; Rt: 1,91 m/z; 412,3 (M+H)+ Masa exacta: 411,1. Se burbujeo nitrogeno a traves de 2,2,3,5-tetrafluoro-6'-metil-2'-(tiazol-2-il)-2,3-dihidro-1'H- espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo (565 mg) disuelto en THF seco (50 mL) durante 10 minutos. Se anadio bis(trimetilsilil)amida de potasio (11 mL; 0,5 M en tolueno, 5,5 mmol), y la mezcla de reaccion se agito bajo un flujo de nitrogeno durante 30 minutos. La mezcla se inactivo con agua (10 mL) y se concentro parcialmente. El resto se extrajo con CH2Cl2 (50 mL) y agua (30 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice utilizando un gradiente del 10 al 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron, se concentraron y el residuo obtenido se seco en vado a 50°C, resultando compuesto 166 en forma de un polvo amarillo (272 mg). Metodo L; Rt: 2,10 m/z; 392,3 (M+H)+ Masa exacta: 391,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,44 (s, 3 H), 3,40 (s, 3 H), 6,86 (ddd, J=10,0, 8,0, 2,5 Hz, 1 H), 7,00 (dd, J=8,0, 2,5 Hz, 1 H), 7,15 (ddd, J=8,0, 5,0, 2,5 Hz, 1 H), 7,48 (d, J=3,0 Hz, 1 H), 7,85 (d, J=3,0 Hz, 1 H), 8,01 (s ancho, 1 H). La mezcla racemica 166 se separo en enantiomeros mediante SFC Prep (Fase estacionaria: Chiralcel Diacel OD 20 x 250 mm), Fase movil: CO2, isopropanol), las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en MeOH y se evaporaron otra vez, resultando compuesto 166a (103 mg) y compuesto 166b (96 mg) en forma de aceites amarillos. Columna: OD-H 250 mm x 4.6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: iPrOH al 5% (que contema iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min; Temperatura: 30°C; Compuesto 166a Rt (9,9 min) Compuesto 166b Rt (11,0 min).
Compuesto 167
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Diastereoisomeros separados de mezcla diastereoisomerica 167: 167A y 167B
Compuesto 165 (10,2 g, 23,1 mmol), hidrocloruro de piridina-2-carboximidamida (6.37g, 40,4 mmol), bicarbonato de sodio (7,76 g, 92,4 mmol) y dioxano (200 mL) se calentaron y se agito a 60°C durante 6 horas y se agito adicionalmente durante la noche a 40°C. La mezcla de reaccion se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sflice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron, proporcionando 2,2,3,5-tetrafluoro-6'-oxo-2'-(piridin-2-il)- 2,3,5',6'-tetrahidro-1'H-espiro[indeno-1,4'-porimidina]-5'-carboxilato de metilo (6,1 g) en forma de un polvo amorfo de color amarillo claro. Una disolucion de 2',2',3',5'-tetrafluoro-6-oxo-2-(2-piridil)espiro[1,5-dihidropirimidina-4,1'-indano]-
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5-carboxilato de metilo en oxicloruro de fosforo (50 g) equipada con un tubo de secado de CaCl2 se calento a 110°C durante 210 minutos. La mezcla de reaccion se concentro, el residuo se disolvio en CH2Ch (200 mL), se vertio en disolucion de NaHCO3 saturada (200 mL) y se agito durante 30 minutos. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc en heptano. 6l-cloro-2,2,3,5-tetrafluoro-2'-(piridin-2-il)-2,3-dihidro-1lH- espiro[indeno-1,4'-pirimidina]-5'-carboxilato de metilo se aislo como dos diastereoisomeros separados: y compuesto 167A (1046 mg despues de la segunda purificacion) y compuesto 167B (1705 mg).
Compuesto 167A: Metodo L; Rt: 1,94 m/z; 425,9 (M+H)+ Masa exacta: 425,1.
Compuesto 167B: Metodo L; Rt: 2,06 m/z; 425,9 (M+H)+ Masa exacta: 425,1.
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Compuesto 168
Diastereoisomeros separados de mezcla diastereoisomerica 168: 168A y 168B
Nitrogeno se lavo a traves de una mezcla de compuesto 167B (1705 mg) (morfolin-4-il)metiltrifluoroborato de potasio (1658 mg, 8,0 mmol), carbonato de potasio (1384 mg, 10 mmol) en eter dimetilico de etilenglicol (5 mL) y agua (2,3 mL) durante 10 minutos. Luego se anadio bis(tri-terc-butilfosfina)paladio(0) (1614 mg, 0,20 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 140°C durante 45 minutos en un microondas Biotage La mezcla se concentro y el residuo se recogio en agua (50 mL) y CH2Cl2 (50 mL). La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre silice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se concentraron y se secaron en vacio, proporcionando compuesto 168B (923 mg) en forma de un polvo amarillo. Metodo L; Rt: 2,07 m/z; 491,1 (M+H)+ Masa exacta: 490,2. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6ppm 2,51 -2,73 (m, 4 H), 3,43 (s, 3 H), 3,71 -3,93 (m, 6 H), 5,96 (ddd, J=55,0, 10,1, 3,7 Hz, 1 H), 7,05 -7,24 (m, 3 H), 7,41 (ddd, J=8,0, 4,8, 1,3 Hz, 1 H), 7,75 (td, J=8,0, 1,8 Hz, 1 H), 8,23 (dt, J=8,0, 1,1 Hz, 1 H), 8,56 - 8,68 (m, 1 H), 10,55 (s, 1 H). Compuesto 167A se convirtio en el Compuesto 168A de manera similar a la descrita para el compuesto 168B, resultando el compuesto 168A (470 mg) en forma de un solido amarillo. Metodo L; Rt: 2,08 m/z; 491,1 (M+H)+ Masa exacta: 490,2. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 2,61-2,68 (m, 4 H), 3,39 (s, 3 H), 3,77 - 3,92 (m, 6 H), 6,12 (dt, J=54,6, 8,1 Hz, 1 H), 7,06-7,14 (m, 1 H), 7,15 - 7,24 (m, 2 H), 7,39 (ddd, J=7,6, 4,8, 1,2 Hz, 1 H), 7,73 (td, J=7,8, 1,7 Hz, 1 H), 8,07 (dt, J=8,0, 1,1 Hz, 1 H), 8,57 -8,65 (m, 1 H), 10,50 (s, 1 H).
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Compuesto 169
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Bis(trimetilsilil)amida de litio (4,0 mL, 1M en THF) se anadio a una disolucion de compuesto 168A (0,811 mmol, 398 mg) en THF seco (50 mL) y se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se inactivo con agua (30 mL) y se extrajo dos veces con CH2CI2 (50 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre silice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc. Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron en vacio a 50°C, proporcionando compuesto 169 en forma de un polvo amarillo (329 mg). Metodo L; Rt: 2,16 m/z; 471,1 (M+H)+ Masa exacta: 470,2. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 2,55 - 2,71 (m, 4 H), 3,40 (s, 3 H), 3,78 - 3,92 (m, 6 H), 6,84 (ddd, J=9,7, 8,1, 2,4 Hz, 1 H), 7,00 (dd, J=8,4, 2,4 Hz, 1 H), 7,11 (ddd, J=8,1, 4,8, 2,1 Hz, 1 H), 7,39 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,1 Hz, 1 H), 7,74 (td, J=7,8, 1,7 Hz, 1 H), 8,15 (dt, J=8,0, 0,9 Hz, 1 H), 8,56 -8,66 (m, 1 H), 10,47 (s, 1 H). Compuesto 169 se puede preparar partiendo de compuesto 168B de una forma similar a la descrita a partir de168A.
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TFA (4,6 mL, 59,8 mmol) se anadio a una disolucion de 4,5-difluoro-1-indanona (50,3 g, 299,2 mmol) y butilamina (26,3 g, 359 mmol) en ciclohexano (500 mL) y la mezcla se sometio a reflujo durante la noche en un aparato de Dean Stark. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se disolvio en eter diisopropilico (300 mL). La disolucion se lavo con disolucion de NaHCO3 saturada, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro, proporcionando un liquido de color rojo oscuro que solidifico en reposo. Este producto bruto obtenido (61,4 g) se utilizo como tal. N-butil-4,5-difluoro-indan-1-imina (28,2 g, parte de la mezcla en bruto anterior) se disolvio en acetonitrilo seco (500 mL). Se anadio sulfato de sodio (8,46 g, 59,6 mmol) seguido por bis(tetrafluoroborato) de 1- clorometil-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo[2.2.2]octano (60,1 g, 169,7 mmol). La mezcla de reaccion se sometio a reflujo y se agito durante 3 horas. La mezcla de reaccion se dejo enfriar 5 minutos y luego se anadio en porciones HCl al 37% (45 mL) mientras se agitaba. La mezcla se agito durante 10 minutos y despues se concentro en vacio. El residuo obtenido se extrajo con eter diisopropilico (800 mL) durante la noche, se decanto, se filtro y se concentro. El residuo se suspendio en agua y se extrajo con eter diisopropilico (500 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de silice utilizando gradiente de elucion de 5 hasta 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron en vacio, proporcionando compuesto 170 (6,98 g). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 3,61 (t, J=12,3 Hz, 2 H), 7,28 - 7,40 (m, 1 H), 7,65 - 7,76 (m, 1 H).
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Tetracloruro de titanio (7,94 g, 68,4 mmol) disuelto en CH2CI2 (25 mL) se anadio gota a gota durante 10 minutos a una disolucion de 2,2,4,5-tetrafluoroindan-1-ona (11 mL, 99 mmol) y acetoacetato de metilo (6,98 g, 34,2 mmol) en THF (150 mL) y diclorometano (150 mL) en un bano de hielo. La mezcla de reaction se agito durante 10 minutos. A 5 continuation, se anadio piridina (13,5 mL, 167,5 mmol) durante 5 minutos. Se dejo que la mezcla de reaccion
alcanzara la temperatura ambiente mientras se agitaba y se agito adicionalmente durante 5 dias. La mezcla de reaccion se inactivo con agua (100 mL) y se extrajo con diclorometano (200 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre silice, utilizando un gradiente de 5 hasta 100% de EtOAc. Las fracciones de producto se concentraron, resultando el 10 compuesto 171 en forma de una resina de color pardo (mezcla E/Z, 6.17 g). ). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO- d) mezcla E/Z o Z/E 85/15, isomero principal descrito: 5 ppm 2,50 (s, 3 H), 3,55 (t, J=13,2 Hz, 2 H), 3,89 (s, 3 H),
7,04 - 7,19 (m, 1 H), 7,26-7,31 (m, 1 H).
Compuesto 172
imagen193
Compuesto 171 (5,86 g, 19,39 mmol), sulfato de 2-metil-2-tiopseudourea (4,05 g 14,5 mmol) y bicarbonato de sodio 15 (6,0 g, 116,3 mmol) en DMF (100 mL) se agito a 50°C durante la noche. La mezcla de reaccion se vertio en agua
(800 mL) y se extrajo 3 veces con eter diefflico (400 mL). La capa acuosa se extrajo tambien dos veces con diclorometano (500 mL). Ambas capas organicas se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron juntos. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice utilizando un gradiente de 10 al 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron y se concentraron en vatio, 20 proporcionando compuesto 172 en forma de un solido de color pardo (5,89 g). Metodo L; Rt: 1,97 m/z; 375,3 (M+H)+ Masa exacta: 374,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, -4°C) : mezcla tautomericas ~4/1, isomero principal descrito: ppm 2,27 (s, 3 H), 2,33 (s, 3 H), 3,43 (s, 3 H), 3,54 (dd, J=17,3, 9,3 Hz, 2 H), 6,71 (s ancho, 1 H), 6,84 (dd, J=8,3, 4,0 Hz, 1 H), 7,02 - 7,11 (m, 1 H).
imagen194
10
15
20
25
30
Se burbujeo nitrogeno a traves de una mezcla de compuesto 172 (2,83 g, 7,56 mmol) 2-(tributilestannil)tiazol (8,5 g 22,8 mmol), bromuro de cobre(I)-sulfuro de dimetilo (6,2 g 30,24 mmol) en DME (25 mL) durante 10 minutos divididos en 3 viales de microondas). Se anadio (bis(tri-terc-butilfosfina)paladio(0) (290 mg, 0,257 mmol) y la mezcla de reaccion se irradio en el microondas a 140°C durante 30 minutos. Las mezclas se vertieron en amoniaco en agua (500 mL, 25%) y se extrajeron 3 veces con eter (250 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se sometio a cromatograffa en columna sobre sHice, utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se concentraron en vado, proporcionando un solido amarillo (127 mg). ). Metodo L; Rt: 2,03 m/z; 412,3 (M+H)+ Masa exacta: 411,1. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d); mezcla tautomerica (~8/2), isomero principal descrito; 5 ppm 2,41 (s, 3 H), 3,44 (s, 3 H), 3,52 - 3,78 (m, 2 H), 6,88 (dd, 1 H, J= 4,2, 8,6 Hz), 7,01 - 7,17 (m, 1 H), 7,47 (d, J= 3,1 Hz, 1 H), 7,84 (d, J= 3,1 Hz, 1 H), 8,03 (s ancho, 1 H).
imagen195
Enantiomeros de compuesto racemico 174: 174a y 174b
(1,11 g, 2,7 mmol), metilato de sodio (874 mg, 16,2 mmol) en metanol (7 mL) se calento en un microondas Biotage a 140°C durante 10 minutos. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se disolvio en CH2Ch (50 mL) y agua (50 mL). La capa acuosa se extrajo de nuevo con CH2Ch (50 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna sobre sHice utilizando un gradiente de 10 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se concentraron y se secaron, proporcionando un polvo de color amarillo.(778 mg). ) Metodo L; Rt: 1,93 m/z; 392,2 (M+H)+ Masa exacta:
391,1
1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2,44 (s, 3 H), 3,43 (s, 3 H), 6,09 (s, 1 H), 6,78 - 6,93 (m, 2 H), 7,47 (d, J=3,3 Hz, 1 H), 7,84 (d, J=3,3 Hz, 1 H), 7,98 (s ancho, 1 H). Compuesto 174 (205 mg) se separo en enantiomeros mediante SFC Prep (Fase estacionaria: Chiralcel Diacel ID 20 x 250 mm), Fase movil: CO2, EtOH con iPrNH2 al 0,2%), las fracciones deseadas se recogieron, se concentraron en vado, se disolvieron en MeOH, se evaporaron de nuevo y se secaron durante la noche en vado a 50°C, resultando compuesto 174a (68 mg) y compuesto 174b (74 mg). SFC: Columna: ID-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase movil: EtOH al 5% (que conteda iPrNH2 al 0,2%) mantener 15,00 min Temperatura: 30°C; compuesto 174a Rt (~6,2 min); compuesto 174b Rt (~7,0 min) Compuesto 175 (un diastereoisomero principal tal como se representa, mezcla racemica)
imagen196
Una mezcla de compuesto 169 (840 mg, 1,79 mmol) y Pd/C al 10% (203 mg) en metanol (200 mL) se agito durante 3 horas bajo una atmosfera de hidrogeno y se deja el fin de semana sin agitacion. La mezcla de reaccion se agito durante 45 minutos mas y la mezcla se filtro. Se anadio K2CO3 (1 g) al filtrado y luego se concentro. El residuo obtenido se disolvio en CH2Ch (100 mL) y agua (50 mL). La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice utilizando gradiente de elucion con 5 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones de producto se reunieron, se concentraron y se secaron, proporcionando compuesto 175 (75 mg) en forma de un polvo de color amarillo claro.
Metodo L; Rt: 2,04 m/z; 455,1 (M+H)+ Masa exacta: 454,2. 1H RMN (600 MHz, ACETONA-da) 8 ppm 2,53 - 2,66 (m, 4 H), 3,22 (ddd, J=25,7, 17,2, 4,4 Hz, 1 H), 3,39 (s, 3 H), 3,53 (td, J=16,0, 7,7 Hz, 1 H), 3,72 (s, 2 H), 3,73 - 3,80 (m, 4 H), 5,15 (ddd, J=53,6, 7,5, 4,7 Hz, 1 H), 6,93 (ddd, J=9,2, 8,5, 2,5 Hz, 1 H), 6,99 (m, J=9,2 Hz, 1 H), 7,16 (dd, J=8,4, 5,3 Hz, 1 H), 7,55 (ddd, J=7,5, 4,8, 1,2 Hz, 1 H), 7,90 (td, J=7,7, 1,7 Hz, 1 H), 8,11 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 8,71 5 (ddd, J=4,8, 1,6, 0,9 Hz, 1 H), 10,14 (s ancho, 1 H).
Ejemplos biologicos - actividad anti-VHB de compuestos de formula I
La actividad anti-HBV se midio utilizando una lmea celular transfectadas estable, HepG2.2.15. Se describio que esta lmea celular secreta altos niveles relativamente consistentes de partmulas de virion de VHB, que se han demostrado provoca tanto la infeccion como la enfermedad aguda y cronica en chimpances.
10 Para el antiviral, las celulas de ensayo se trataron dos veces durante tres dfas con compuesto diluido en serie en placas de 96 pocillos en duplicado. Despues de 6 dfas de tratamiento, se determino la actividad antiviral por cuantificacion de ADN del VHB purificado a partir de viriones secretados utilizando PCR en tiempo real y un conjunto de cebadores espedficos para el VHB y sonda.
La citotoxicidad de los compuestos se ensayo en celulas HepG2 utilizando CellTiter-Blue, con el mismo penodo de 15 incubacion e intervalo de dosis que en el ensayo de HepG2.2.15. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
La actividad anti-VHB tambien se midio utilizando la lmea celular HepG2.117, una lmea celular productora de VHB inducible, estable, que replica HBV en ausencia de doxiciclina (sistema Tet-off). Para el ensayo antiviral, se indujo la replicacion del VHB, seguido de un tratamiento con el compuesto diluido en serie en placas de 96 pocillos por duplicado. Despues de 3 dfas de tratamiento, la actividad antiviral se determino mediante cuantificacion de ADN de 20 VHB intracelular utilizando la PCR en tiempo real y un conjunto de cebadores espedficos para el VHB y sonda.
La citotoxicidad de los compuestos se ensayo utilizando celulas HepG2, incubadas durante 4 dfas en presencia de compuestos. La viabilidad de las celulas se evaluo mediante un ensayo de resazurina. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1: Actividad anti-VHB de compuestos de formula I
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
.F o W/ . .11. V " O N . II . N '-f •'- N H N [ "J o
2 0,669 >100 0,25 >50
F 0 . w ■ °" ]l ' . [•" N ■■■T," ' ■■•■' ... N... H N.... ;> " O
4 1,92 51,1 0,66 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
4a >100 92,0
4b 0,643 92,4 0,76 >50
F 0 \:i;, " " ' 'O’" '■ ' N n": h N , : ■
5 >100 >100
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6 >25 >25
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7 >100 13,4
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8 14,8 54,3 3,3 >50
9 >100 62,4
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
.F o . V- •.. O ..IM r n "n" - N H N...,,
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11 >100 >100
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13 9,34 >100 3,9 >100
Cl, ^ o W-„ 'N' H N...,.,
17 >50 39,9 21,0 >25
18 3,92 36,5 1,6 >50
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
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24 0,319 37,9 0,16 >25
F O V- .""Cl .. U V 0 ■■■ N 1 J [I. ... N ■ ' N H N . . . c ; " F o
27 1,83 >100 0,63 >25
F o \;- 1 Cl . 11. "" O' n J LI - N N... H N
29 6,32 47,4 3,0 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
F 0 Q ^°Y|N 0"^
30 0,941 >100 0,29 >25
F o W , 11 V O 'j ‘ N ' " ’N’ " H N •
31 72,4 >100 40,6 >50
F o f3c W/ ... L v ' 0 "N J IJ, .. O' N.. N., 1. O
34 16,2 20
34a >100 30,9
34b 8,23 41,6
F df3cC3 N H M J
35 >100 68,1
39 0,405 62,9 0,41 >100
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
F o r 0"'"' "’..N . N... • >J -""i .,.N, H o'
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40 14,0 77,0
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41 7,39 >50 4,5 >25
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42 3,07 57,7 1,29 >50
O [ |' 1 ° 1 r N H N 1 O
56 35,2 36,4 52,6 >100
00 K 0‘8U 1.9
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V'lQ 00 K 19 o N H N N l l XX) "N
(lAlri) 0SOO sejp Z9d3H
(lAlri) 0530 III ZOdaH (lAlri) osoo sejp 9 zodan (lAlri) 0530 SI-ZZOdaH-AaH 0u ojsandiuoo vamonaisa
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
N,, CO ’ll" I , ' N' ' ■ N H N.J O
F O / ■ 0 N 'J “IJ N , H L J O
66 0,207 89,3 0,17 >25
66a <0,391 >100 0,066 >100
66b 35,1 >100 48,9 >100
F N::;. ' . ' ■'-i ' "n l| , N H 'o'
69 2,21 >100 1,65 >100
O [ Ij ? 1 ? r" 'n' "'"i■■■' "r 1.. H N,...,1 O
72 54,0 71,1 72,0 >100
74 2,06 78,3 1,33 >100
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6fr'S 00 K fr9'8 98
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00 K 00 K S8 Pi h nI-PP-°\ 0
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(lAlri) 0SOO sejp ZOd3H
(lAlri) 0530 III ZOdaH (lAlri) osoo SBJP 9 zodaH (lAlri) 0530 SI-ZZOdaH-AaH 0u ojsandiuoo vamonaisa
HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM)
HepG2 6 dias CC50 (pM)
HepG2 117 CE50 (pM)
HepG2 4 dias CC50 (pM)
imagen197
imagen198
89
0,604
>100
0,470
>100
imagen199
90
5,82
>50
22,7
>50
imagen200
93
53,4
41,5
81,2
>100
imagen201
96
0,954
>100
0,94
97,0
n
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
96a 0,650 >100 0,30 >100
96b 30,3 >100 18,7 >100
F ^Nfil H iULf
100 0,546 >100 0,506 >100
F lOtf x°ayx'n f 1, H 1, \\ 0
101 <0,098 >25 0,073 >50
LL /"Y^O O V z:x LL / \ 0 \ X O /
106 98,4 >100 >25 >25
106a >100 >100 >50 >50
106b 29,4 >100 >25 >25
110 10,7 >100 6,14 >50
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
(to rA H M
111 81,8 >100 >50 >50
L h T1 0
112 0,624 >100 0,410 >50
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115 >100 >100 >25 >25
F N V. O 0 ? 11 N ...0 1 n" hN , H 1 F " F
118 40,7 >100 >50 >50
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
F „ HN—(\\ '° ll I H xaf
123 >100 >25 >25
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124 13,0 48,4 2,41 >25
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128 9,10 63,8 2,47 >50
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132 2,03 0,88 >25
132a >100 >25 21,1
132b 0,784 0,474 >25
132b.MsOH 0,694 0,803 >25
HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM)
HepG2 6 dias CC50 (pM)
HepG2 117 CE50 (pM)
HepG2 4 dias CC50 (pM)
132b acido (-)- canfanico
0,489
imagen202
133
17,3
4,33
>25
imagen203
134
134a
91,2
53,0
>50
>50
134b
41,9
35,8
>50
>50
imagen204
139 TFA
0,99
0,707
>25
142
11,5
3,37
>25
n
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
^°^ll r ^ hfIAf
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143 0,222 >25
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144 4,94 >10
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145 0,360 0,620 >25
146 1,36 2,62 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
F 0 / \=._ ■ ii 0 N 1.' 'I... ,N.. 1 H T N ■■■ i ; 0
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148 >25 17,2
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149 23,8 3,26 >25
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150 1,35 0,694 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
■l F F F V V\ o ■ / O N F " '"'N' H 1 N . k. F
151
151a >100 >25 >25
151b 4,25 3,68 >25
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152 3,38 2,88 >25
V°”|l |N F H 1 1 N^p
153 12,9 3,31 >25
H 1 1 n^f
154 27,5 17,6 >25
155 0,744 14,0 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
F -O
155a 0,983 17,1 >25
155b >100 >25 >25
\ja n^Af
156 1,11 0,669 >25
156 .MsOH 1,93 1,09 >25
F ^°llx ^ifT^ n^Af
157 9,52 3,06 >25
\f "A^M N^J
158 4,56 >25
158a 2,44 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
158b >100 >25 >25
/ o \ /=° ^roc {_/ '
159
159a 37,5 25,0 >25
159b >100 >25 >25
nAjXT 1 I ■^X'N'>VS/ H
160 0,717 23,7 >25
160a >50 >25 >25
160b 0,451 10,5 >25
/ o \ / ° iz Vf ci~ ■"
161 >25
162 >25 >25 >25
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
/ o \ )=0 ~rCc
F 0 . ' 'O'" Y " 'N F J 1. . ' N ' ) N H N. • F
163
163a 69,5 >25 >25
163b >100 >25 >25
F °F vTT' H II /) N^7
166 0,24 14,2 >25
166a >50 >25 >25
166b 0,197 15,5 >25
F oF^>^PY'F i^oo o
168
ESTRUCTURA
Compuesto n° HBV-HepG2 2.15 CE50 (pM) HepG2 6 dias CC50 (pM) HepG2 117 CE50 (pM) HepG2 4 dias CC50 (pM)
168A 9,64 3,51 >25
168B 5,73 1,49 >25
F °F x^T^T"11 0° O
169 0,137 >25
F oNqV Av% H ll /) N-^7
174 13,4 >25
174a 8,97 >25
174b >25 >25
N"xJxY:::r^ oH ° o
175 <0,195 0,146 >25

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    1. Un compuesto de Formula I
    imagen1
    incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas del mismo, en donde:
    B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
    Z se selecciona de H o halogeno;
    o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, OH y halogeno;
    Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
    R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, Cen, ciclopropilo y CF3;
    R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi Ci-C3-carbonilo y CeN;
    R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H, metilo y halogeno;
    R6 es alcano Ci -C3-diilo, alqueno C2-C3-diilo, ambos opcionalmente sustituidos con uno o mas fluoro;
    R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo, alcoxi C1-C3 y CF3; o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde B se selecciona del grupo que comprende alquilo C1- C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
    Z se selecciona de H o halogeno;
    o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en donde el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo y halogeno; y Ri se selecciona entre el grupo que comprende heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de halogeno.
  3. 3. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo y halogeno.
  4. 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes CH3.
  5. 5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R1 se selecciona de piridinilo, opcionalmente sustituida con uno o dos fluoro, o tiazolilo.
  6. 6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R3 es alcoxi Ci- o C2-carbonilo.
    5
    10
    15
    20
    25
    30
  7. 7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R6 es CH2 y R7 se selecciona de morfolinilo o piperidinilo.
  8. 8. Un compuesto de acuerdo con la revindication 1 y que tiene la siguiente estructura de formula (la)
    imagen2
    , en donde B, Z, Ri, R2, R3, R4 y R5 se definen de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
  9. 9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo H y fluoro.
  10. 10. Una composition farmaceutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y un soporte farmaceuticamente aceptable.
  11. 11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 10, para uso como un medicamento.
  12. 12. Un compuesto de acuerdo con la Formula (I)
    imagen3
    incluyendo cualesquiera posibles estereoisomeros o formas tautomericas del mismo, en donde:
    B se selecciona entre el grupo que comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno o mas atomos de fluor;
    Z se selecciona de H o halogeno;
    o B y Z, junto con los carbonos a los que estan unidos, forman un anillo de 4-7 miembros, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos, en el que el anillo de 4-7 miembros opcionalmente esta sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende alquilo C1-C3, oxo, OH y halogeno;
    R1 se selecciona entre el grupo que comprende S-metilo, heteroarilo y fenilo, opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes seleccionados del grupo que comprende halogeno y alquilo C1-C3;
    R2 se selecciona del grupo que comprende -R6-R7, CeN, ciclopropilo y CF3;
    R3 se selecciona entre el grupo que comprende alcoxi C1-C3-carbonilo y CeN;
    R4 y R5 se seleccionan, independientemente, del grupo que comprende H, metilo y halogeno;
    R6 es alcano C1 -C3-diilo o alqueno C2-C3-diilo, ambos opcionalmente sustituidos con uno o mas fluoro;
    R7 se selecciona del grupo que comprende hidrogeno, un heterocicloalquilo C3-7, ciclopropilo, alcoxi C1-C3 y CF3; o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo,
    o una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 10, para uso en la prevention o el tratamiento de una infection por el VHB en un mamifero.
  13. 13. Un producto que contiene (a) un compuesto de formula I segun se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y (b) otro inhibidor del VHB, en forma de una preparacion combinada para el uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHB.
  14. 14. Un compuesto de acuerdo con la formula V
    5
    imagen4
  15. 15. Uso de un compuesto de formula V de acuerdo con la reivindicacion 14, en la smtesis de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9.
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