ES2583877T3

ES2583877T3 - Moduladores novedosos del sistema inmunitario

Info

Publication number: ES2583877T3
Application number: ES12793946.0T
Authority: ES
Inventors: Grayson B. Lipford; Charles M. Zepp
Original assignee: Janus Biotherapeutics Inc
Current assignee: Janus Biotherapeutics Inc
Priority date: 2011-06-01
Filing date: 2012-06-01
Publication date: 2016-09-22
Anticipated expiration: 2032-06-01
Also published as: EP2713737A4; WO2012167053A1; AU2012262021A1; AU2012262021B2; EP2713737A1; EP2713737B1; CA2837207A1; US9353115B2; US20140107115A1

Abstract

Un compuesto de la Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, **Fórmula** en donde X está ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo; Q es H, (CH2)qNR1R2, NR1(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4; R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el átomo de nitrógeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(>=O)R12, (CH2)pO, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4; R7 es H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4); R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que se unen forman un heterociclo; Y es oxígeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrógeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo; R12 es alquilo, arilo, o heterociclo; L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 átomos de carbono; R5 es hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(>=O)Ra, S(>=O)2Ra, NRbRc, S(>=O)2NRbRc, C(>=O)ORa, C(>=O)Ra, C(>=O)NRbRc, OC(>=O)Ra, OC(>=O)NRbRc, NRbC(>=O)ORa, o NRbC(>=O)Ra; R6 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(>=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4; cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el átomo de nitrógeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Moduladores novedosos del sistema inmunitario.

Campo de la Invencion

En general la invencion se relaciona con el campo de la inmunologfa. Mas particularmente, la invencion se relaciona con composiciones y metodos para alterar la funcion inmunitaria. Mas especfficamente, la invencion se relaciona con composiciones y metodos para afectar la estimulacion inmunitaria a traves de moleculas del receptor tipo Toll (TLR).

Antecedentes de la Invencion

La estimulacion del sistema inmunitario, que incluye la estimulacion de uno o ambas inmunidad innata e inmunidad adaptativa, es un fenomeno complejo que puede resultar en ya sea resultados fisiologicos de proteccion o adversos para el anfitrion. En los ultimos anos ha habido un mayor interes en los mecanismos subyacentes de la inmunidad innata, que se considera inician y apoyan la inmunidad adaptativa. Este interes ha sido impulsado en parte por el reciente descubrimiento de una familia de protefnas del receptor de reconocimiento de patrones altamente conservadas conocidos como receptores tipo Toll (TLR) que se considera estan implicados en la inmunidad innata como receptores de patrones moleculares asociados a patogenos (PAMPs) y patrones moleculares asociados a peligro (DAMPs). Por lo tanto, las composiciones y metodos utiles para la modulacion de la inmunidad innata son de gran interes, ya que pueden afectar los metodos terapeuticos para las afecciones que implican autoinmunidad, inflamacion, aterosclerosis, alergia, asma, rechazo de injertos, enfermedad de injerto contra anfitrion (GvHD), infeccion, cancer, e inmunodeficiencia.

Los receptores tipo Toll (TLR) son una familia de moleculas de reconocimiento de patrones y de senalizacion implicadas en la inmunidad innata. Esta familia incluye por lo menos doce miembros, designados TLR1 a TLR13, para los cuales se conoce la funcion y especificidad para la mayorfa, pero no todos los miembros. Se sabe que determinados de estos TLR se indican en respuesta al encuentro con tipos particulares de moleculas de acido nucleico. Por ejemplo, el TLR9 se indica en respuesta a ADN que contiene CpG, el TLR3 se indica en respuesta a ARN de doble cadena, y TLR7 y TLR8 se indican en respuesta a ciertos ARN de cadena sencilla. Ha habido una serie de informes que describen el efecto inmunoestimulador de ciertos tipos de moleculas de acido nucleico, que incluyen acidos nucleicos CpG y ARN de doble cadena. Cabe decir, que se informo que el receptor 9 tipo Toll (TLR9) reconoce el ADN bacteriano y el ADN CpG, mientras que el TLR 7 y 8 reconocen ARN de cadena sencilla: Hemmi H et al. (2000), Nature 408: 740-5; Bauer S. et al.

(2001) , Proc Natl Acad Sci EE.UU. 98: 9237-42; Heil et al. (2004) Science, 303:1526. Ademas de sus ligandos naturales, se conocen tambien ciertos ligandos sinteticos o artificiales para estos TLR sensibles a acido nucleico. Estos incluyen ciertos oligodesoxirribonucleotidos CpG (ODN CpG), oligorribonucleotidos (ORN) y ciertos analogos de ORN, y ciertas moleculas pequenas que incluyen imiquimod (R-837) y resiquimod (R-848). El imiquimod y resiquimod se clasifican como imidazoaminoquinolina-4-aminas; el anterior se comercializa actualmente como Aldara™ por 3M Pharmaceuticals para tratamiento topico de las verrugas anogenitales asociadas con la infeccion por el virus del papiloma. Adicionalmente a su uso en el tratamiento de ciertas infecciones virales tales como virus del papiloma, se considera que ciertos agonistas de TLR son utiles como adyuvantes, agentes antitumorales y agentes antialergicos. Debido a que se puede tratar un numero de enfermedades y afecciones al mejorar la inmunidad innata, subsiste una necesidad continua de agonistas de TLR adicionales y mejorados.

La Solicitud Estadounidense Publicada 2010/210598A1 (Carson et al.) y la correspondiente Solicitud Internacional WO 2010/093436, por ejemplo, se refieren a moduladores de los receptores TLR para uso como agentes terapeuticos. Tambien se reporto recientemente que los complejos inmunitarios que contienen IgG y acido nucleico pueden estimular el TLR9 y participar en la activacion de celulas B en ciertas enfermedades autoinmunitarias. Leadbetter E. A. et al.

(2002) , Nature 416:595-8. Documentacion similar y adicional de estas afirmaciones se han realizado para TLR7, 8 y 9: revisado en Sun S. et al. (2007) Inflammation and Allergy-Drug Targets 6:223-235.

Resumen de la Invencion

Se describen ahora los nuevos compuestos como moduladores del sistema inmunitario que llevan un nucleo de purina. Las moleculas descritas aquf pueden alterar la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR mediante la inhibicion de la senalizacion de TLR y por lo tanto pueden ser utiles como inhibidores de la estimulacion inmunitaria. Las composiciones y metodos descritos aquf son utiles para inhibir la estimulacion inmunitaria in vitro e in vivo. Por lo tanto, dichas composiciones y metodos son utiles en una serie de aplicaciones clfnicas, que incluyen como agentes farmaceuticos y metodos para el tratamiento de afecciones que implican actividad inmunitaria no deseada, que incluyen trastornos inflamatorios y autoinmunitarios. Tambien se pueden utilizar las composiciones de la invencion en metodos para la preparacion de medicamentos para uso en el tratamiento de afecciones que implican actividad inmunitaria no deseada, que incluye una variedad de trastornos inflamatorios y autoinmunitarios.

En un aspecto, la presente invencion proporciona un compuesto de la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

5

10

15

20

25

imagen1

en donde

X esta ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo;

Q es H, (CH2)qNR1R2, NR1(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R7 es H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En algunas realizaciones, X esta ausente. En otras realizaciones, X es alquilo o alquilamino. En aun otras realizaciones, X es cicloalquilo. En aun otras realizaciones, X es arilo. En aun otras realizaciones, X es heterociclo.

En algunas realizaciones, Y es oxfgeno. En otras realizaciones, Y es azufre. En aun otras realizaciones, Y es NR11.

En algunas realizaciones, L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 4 atomos de carbono.

En algunas realizaciones, el compuesto de la Formula I tiene la estructura de la Formula II:

imagen2

en donde

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, ORi, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, 5 heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R7 es H, alquilo, heteroarilo, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

m es 2-6;

10 Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o

NRbC(=O)Ra;

15 R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc 20 junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En algunas realizaciones, el compuesto de la Formula I tiene la estructura de la Formula III:

imagen3

en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se 5 puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (ChhjpORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

m es 2-6;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o 15 alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

y cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

20 En algunas realizaciones, el compuesto de la Formula I tiene la estructura de la Formula IV:

5

10

15

20

25

imagen4

en donde

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, ORi, SRi, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

n es 2-6;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En algunas realizaciones, Q es H, ORi, o SRi.

En algunas realizaciones, Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4.

En algunas realizaciones, NR1R2, NR3R4, y NRbRc son cada uno independientemente un heterociclo seleccionado de

y

en el que Rd es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, n-Bu, i-Bu, t-Bu, ChhCMea, Ph, ChhPh, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en donde R12 es alquilo, fenilo, o heterociclo; Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno, o alquilo (C1-C4), o Rb y Rc, junto con el atomo de nitrogeno al cual se adhieren, forman un anillo heterocfclico saturado o insaturado que 5 contiene desde tres hasta siete atomos en el anillo, cuyo anillo puede contener opcionalmente otro heteroatomo seleccionado del grupo que consiste de nitrogeno, oxfgeno y azufre y opcionalmente se puede sustituir por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, fenilo y bencilo; y p es 2-4.

En algunas realizaciones, R5 es hidrogeno, halogeno, alquilo (C1-C4), hidroxi, alcoxi (C1-C4), SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, 10 S(=O)2NRbRc, en el que Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo (C1-C4).

En algunas realizaciones, R6 es hidrogeno,

imagen5

imagen6

imagen7

o alquilo (C1-C4).

En algunas realizaciones, el compuesto de la Formula I es uno o mas compuestos seleccionados de los compuestos en 15 las Tablas 1-2.

En otro aspecto, se describe una composicion farmaceutica que comprende por lo menos un compuesto de la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmaceuticamente aceptable,

imagen8

en donde

20 X esta ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo;

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de 25 alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o 5 NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CFhVNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

10 cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En aun otro aspecto, se describe un metodo para tratar una enfermedad inflamatoria o autoinmunitaria en una especie de mamffero en necesidad de este, que comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad 15 terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

imagen9

en donde

20 R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

25 R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

30 R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterocicio, en donde r es 0-4;

5 cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

En algunas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria se selecciona de lupus eritematoso cutaneo y sistemico, diabetes mellitus dependiente de insulina, artritis reumatoide, esclerosis multiple, aterosclerosis, psoriasis, artritis psoriasica, enfermedad inflamatoria del intestino, aterosclerosis, espondilitis anquilosante, anemia hemolftica 10 autoinmunitaria, sfndrome de Behget, sfndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, sfndrome de Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, trombocitopenia idiopatica, io miastenia gravis, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, polimiositis/dermatomiositis, esclerosis biliar primaria, sarcoidosis, colangitis esclerosante, sfndrome de Sjogren, esclerosis sistemica (escleroderma y sfndrome de CREST), arteritis de Takayasu, arteritis temporal, y granulomatosis de Wegener. En algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es lupus eritematoso sistemico. En 15 algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es diabetes mellitus dependiente de insulina. En algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es artritis reumatoide. En algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es esclerosis multiple. En algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es sfndrome de Sjogren. En algunas realizaciones especfficas, la enfermedad autoinmunitaria es psoriasis.

20 En aun otro aspecto, se describe un metodo para inhibir la inmunoestimulacion mediada por TLR en una especie de mamffero en necesidad de este, que comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

imagen10

en donde

25 X esta ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo;

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de 30 alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

35 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CFhVNRbRc, o 5 alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

10 En aun otro aspecto, se describe un metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR, que comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

imagen11

en donde

15 X esta ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de 20 alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

25 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

30 R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Descripcion Adicional de la Invencion

Definiciones

Lo siguiente son definiciones de los terminos utilizados en la presente especificacion. La definicion inicial proporcionada para un grupo o termino aquf se aplica a ese grupo o termino a lo largo de la presente especificacion individualmente descriptiva o como parte de otro grupo, a menos que se indique lo contrario. A menos que se defina lo contrario, todos los terminos tecnicos y cientfficos utilizados aquf tienen el mismo significado que se entiende comunmente por un experto comun en la tecnica.

Los terminos "alquilo" y "alq" se refieren a un radical alcano de cadena recta o ramificada (hidrocarburo) que contiene desde 1 hasta l2 atomos de carbono, preferiblemente 1 a 6 atomos de carbono. Grupos "alquilo” de ejemplo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4- trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, y similares. El termino "alquilo (C1-C4)” se refiere a un radical alcano de cadena recta o ramificada (hidrocarburo) que contiene desde 1 hasta 4 atomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, y isobutilo. "Alquilo sustituido” se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Los sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCb), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), OF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re,

S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe,

NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. En los sustituyentes de ejemplo mencionados anteriormente, grupos tales como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "alquenilo” se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene desde 2 hasta 12 atomos de carbono y por lo menos un enlace doble carbono a carbono. Dichos grupos de ejemplo incluyen etenilo o alilo. El termino "alquenilo C2-C6” se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene desde 2 hasta 6 atomos de carbono y por lo menos un enlace doble carbono a carbono, tal como etilenilo, propenilo, 2-propenilo, (E)-but-2-enilo, (Z)-but-2-enilo, 2-meti(E)-but-2- enilo, 2-meti(Z)-but-2-enilo, 2,3-dimeti-but-2-enilo, (Z)-pent-2-enilo, (E)- pent-1-enilo, (Z)-hex-1-enilo, (E)-pent-2-enilo, (Z)-hex-2-enilo, (E)-hex-2-enilo, (Z)-hex-1-enilo, (E)-hex-1-enilo,, (Z)-hex- 3-enilo, (E)-hex-3-enilo, y (E)-hex-1,3-dienilo. "Alquenilo sustituido” se refiere a un grupo alquenilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCh), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re,

NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "alquinilo” se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene desde 2 hasta 12 atomos de carbono y por lo menos un enlace triple carbono a carbono. Dichos grupos de ejemplo incluyen etinilo. El termino " alquinilo C2-C6” se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene desde 2 hasta 6 atomos de carbono y por lo menos un enlace triple carbono a carbono, tal como etinilo, prop-1-inilo, prop-2-inilo, but-1- inilo, but-2-inilo, pent-1-inilo, pent-2-inilo, hex-1-inilo, hex-2-inilo, hex-3-inilo. "Alquinilo sustituido” se refiere a un grupo alquinilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCb), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "cicloalquilo” se refiere a un grupo hidrocarburo cfclico completamente saturado que contiene desde 1 hasta 4 anillos y 3 a 8 carbonos por anillo. "Cicloalquilo C3-C7” se refiere a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, o cicloheptilo. "Cicloalquilo sustituido” se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCl3), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc,

P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes de ejemplo tambien incluyen sustituyentes cfclicos fusionados o adheridos a espiro, especialmente cicloalquilo adherido a espiro, cicloalquenilo adherido a espiro, heterociclo adherido a espiro (excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, donde los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "cicloalquenilo” se refiere a un grupo hidrocarburo cfclico parcialmente insaturado que contiene 1 a 4 anillos y 3 a 8 carbonos por anillo. Dichos grupos de ejemplo incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, etc. "Cicloalquenilo sustituido” se refiere a un grupo cicloalquenilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCh), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes de ejemplo tambien incluyen sustituyentes cfclicos fusionados o adheridos a espiro, especialmente cicloalquilo adherido a espiro, cicloalquenilo adherido a espiro, heterociclo adherido a espiro excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, donde los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden en sf mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "arilo” se refiere a grupos hidrocarburos cfclicos, aromaticos que tienen 1 a 5 anillos aromaticos, especialmente grupos monocfclico y bicfclico tales como fenilo, bifenilo o naftilo. Cuando contienen dos o mas anillos aromaticos (bicfclico, etc.), los anillos aromaticos del grupo arilo se pueden unir a un unico punto (por ejemplo, bifenilo), o fusionar (por ejemplo, naftilo, fenantrenilo y similares). "Arilo sustituido” se refiere a un grupo arilo sustituido por uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 3 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCh), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe,

NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=ONRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en sf mismos ser opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes de ejemplo tambien incluyen grupos cfclicos fusionados, especialmente cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, donde los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden en sf mismos ser opcionalmente sustituidos.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

El termino "carbociclo" se refiere a un grupo hidrocarburo cfclico completamente saturado o parcialmente saturado que contiene desde 1 hasta 4 anillos y 3 a 8 carbonos por anillo, o grupos hidrocarburos cfclicos, aromaticos que tienen 1 a 5 anillos aromaticos, especialmente grupos monocfclico y bicfclico tales como fenilo, bifenilo o naftilo. El termino "carbociclo" abarca cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquinilo y arilo como se definio aquf anteriormente. El termino "carbociclo sustituido" se refiere a grupos carbociclo o carbocfclico sustituidos con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a, aquellos descritos anteriormente para cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo sustituido, cicloalquinilo sustituido y arilo sustituido. Sustituyentes de ejemplo tambien incluyen sustituyentes cfclicos fusionados o adheridos a espiroen cualquier punto de adhesion disponible, especialmente cicloalquilo adherido a espiro, cicloalquenilo adherido a espiro, heterociclo adherido a espiro (excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, donde los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden en si mismos ser opcionalmente sustituidos.

Los terminos "heterociclo" y "heterocfclico" se refieren a grupos cfclicos completamente saturados, parcial o completamente insaturados, que incluyen aromaticos (es decir, "heteroarilo”) (por ejemplo, sistemas de anillo monocfclico de 4 a 7 miembros, bicfclico de 7 a 11 miembros, o tricfclico de 8 a 16 miembros) que tienen por lo menos un heteroatomo en por lo menos un anillo que contiene atomo de carbono. Cada anillo del grupo heterocfclico que contiene un heteroatomo puede tener 1, 2, 3, o 4 heteroatomos seleccionados de atomos de nitrogeno, atomos de oxfgeno y/o atomos de azufre, donde los heteroatomos de nitrogeno y azufre opcionalmente se pueden oxidar y los heteroatomos nitrogeno opcionalmente se pueden cuaternizar. (El termino "heteroarilio" se refiere a un grupo heteroarilo que tiene un atomo de nitrogeno cuaternario y de esta manera una carga positiva). El grupo heterocfclico se puede adherir al resto de la molecula en cualquier heteroatomo o atomo de carbono del anillo o sistema de anillos. Grupos heterocfclico monocfclico de ejemplo incluyen azetidinilo, pirrrolidinilo, pirrrolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2- oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrrolodinilo, 2-oxoazepinilo, azepinilo, hexahidrodiazepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo, tetrazolilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilo sulfoxido, tiamorfolinilo sulfona, 1,3-dioxolano y tetrahidro- 1,1 -dioxotienilo, y similares. Grupos heterocfclicos bicfclicos de ejemplo incluyen indolilo, isoindolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotienilo, benzo[d] [1,3]dioxolilo, 2,3-dihidrobenzo[b] [1,4]dioxinilo, quinuclidinilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, benzofurazanilo, chromonilo, coumarinilo, benzopiranilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3- c] piridinilo, furo[3,2-b] piridinilo] o furo[2,3-b] piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4- oxo-quinazolinilo), triazinilazepinilo, tetrahidroquinolinilo y similares. Grupos heterocfclicos tricfclicos de ejemplo incluyen carbazolilo, benzidolilo, fenantrolinilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo y similares.

"Heterociclo sustituido" y "heterocfclico sustituido" (tal como "heteroarilo sustituido”) se refieren a grupos heterociclo o heterocfclico sustituidos con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de adhesion disponible. Sustituyentes de ejemplo incluyen pero no se limitan a uno o mas de los siguientes grupos: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un sustituyente de halogeno unico o multiples sustituyentes de halogeno, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que tiene CCh), ciano, nitro, oxo (es decir, =O), CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O^Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en donde cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; cada ocurrencia de Rb, Rc y Rd es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el N al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo; y cada ocurrencia de Re es independientemente alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. Los sustituyentes de ejemplo pueden en sf mismos ser opcionalmente sustituidos. Sustituyentes de ejemplo tambien incluyen sustituyentes cfclicos fusionados o adheridos a espiro en cualquier punto de adhesion disponible, especialmente cicloalquilo adherido a espiro, cicloalquenilo adherido a espiro, heterociclo adherido a espiro excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, donde los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden en sf mismos ser opcionalmente sustituidos.

El termino "alquilamino" se refiere a un grupo que tiene la estructura -NHR', en donde R' es hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, como se define aquf. Ejemplos de grupos alquilamino incluyen pero no se limitan a, metilamino, etilamino, n-propilamino, iso-propilamino, ciclopropilamino, n-butilamino, tert-butilamino, neopentilamino, n-pentilamino, hexilamino, ciclohexilamino, y similares.

El termino "dialquilamino" se refiere a un grupo que tiene la estructura -NRR', en donde R y R' son cada uno independientemente alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o ciclolalquenilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclilo o heterociclilo sustituido, como se define aquf. R y R' pueden ser los mismos o diferentes en una unidad estructural dialquiamino. Ejemplos de grupos dialquilamino incluyen pero no se limitan a, dimetilamino, metilo etilamino, dietilamino, metilpropilamino, di(n-propil)amino, di(iso-propil)amino, di(ciclopropil)amino, di(n-butil)amino, di(tert-butil)amino, di(neopentil)amino, di(n-pentil)amino, di(hexil)amino,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

di(ciclohexil)amino, y similares. En ciertas realizaciones, R y R' se unen para formar una estructura cfclica. La estructura cfclica resultante puese ser aromatica o no aromatica. Ejemplos de grupos diaminoalquilo cfclicos incluyen pero no se limitan a, aziridinilo, pirrrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, pirrrolilo, imidazolilo, 1,3,4-trianolilo, y tetrazolilo.

Los terminos "halogeno" o "halo" se refieren a cloro, bromo, fluor o yodo.

A menos que se indique lo contrario, se asume que cualquier heteroatomo con valencias no satisfechas tiene atomos de hidrogeno suficientes para satisfacer las valencias.

Los compuestos de la presente invencion pueden formar sales que tambien estan dentro del alcance de esta invencion. Se entiende que la referencia a un compuesto de la presente invencion incluye referencia a sus sales, a menos que se indique lo contrario. El termino "sal (s)", como se emplea aquf, denota sales acidas y/o basicas formadas con acidos y bases inorganicos y/u organicos. Adicionalmente, cuando un compuesto de la presente invencion contiene una unidad estructural basica, tal como, pero no limitada a piridina o imidazol, y una unidad estructural de acido tal como, pero no limitado a un acido carboxflico, se pueden formar iones bipolares ("sales internas") y se incluyen dentro del termino "sal (s)" como se utiliza aquf. Se prefieren las sales farmaceuticamente aceptables (es decir, no toxicas, fisiologicamente aceptables), aunque otras sales tambien son utiles, por ejemplo, en etapas de aislamiento o purificacion que se pueden emplear durante la preparacion. Las sales de los compuestos de la presente invencion se pueden formar, por ejemplo, al hacer reaccionar un compuesto I con una cantidad de acido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el que se precipite la sal o en un medio acuoso seguido por liofilizacion.

Los compuestos de la presente invencion que contienen una unidad estructural basica, tal como, pero no limitada a una amina o un anillo de piridina o imidazol, pueden formar sales con una variedad de acidos organicos e inorganicos. Las sales de adicion de acido de ejemplo incluyen acetatos (tales como los formados con acido acetico o acido trihaloacetico, por ejemplo, acido trifluoroacetico), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, hidroxietanosulfonatos (por ejemplo, 2-hidroxietanosulfonatos), lactatos, maleatos, metanosulfonatos, naftalenosulfonatos (por ejemplo, 2-naftalenosulfonatos), nicotinatos , nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenilpropionatos (por ejemplo, 3-fenilpropionatos), fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como aquellos formados con acido sulfurico), sulfonatos, tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos tales como tosilatos, undecanoatos, y similares.

Los compuestos de la presente invencion que contienen una unidad estructural de acido, tal como pero no limitado a un acido carboxflico, pueden formar sales con una variedad de bases organicas e inorganicas. Las sales basicas de ejemplo incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinoterreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases organicas (por ejemplo, aminas organicas) tales como benzatinas, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,N-bis (deshidroabietil) etilendiamina), N-metil-D- glucaminas, N-metil-D-glicamidas, t-butil aminas, y sales con aminoacidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos basicos que contienen nitrogeno se pueden cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bencilo y fenetilo bromuros), y otros.

Tambien se contemplan aquf los profarmacos y solvatos de los compuestos de la invencion. El termino "profarmaco" como se emplea aquf denota un compuesto que, luego de administracion a un sujeto, experimenta una conversion qufmica por procesos metabolicos o qufmicos para dar un compuesto de la presente invencion, o una sal y/o solvato del mismo. Los solvatos de los compuestos de la presente invencion incluyen, por ejemplo, hidratos.

Los compuestos de la presente invencion, y sales o solvatos de los mismos, pueden existir en su forma tautomerica (por ejemplo, como un eter de amida o imino). Se contemplan aquf todas dichas formas tautomericas como parte de la presente invencion.

Se contemplan dentro del alcance de esta invencion todos los estereoisomeros de los presentes compuestos (por ejemplo, aquellos que pueden existir debido a carbonos asimetricos sobre diversos sustituyentes), que incluyen formas enantiomericas y formas diastereomericas. Los estereoisomeros individuales de los compuestos de la invencion pueden, por ejemplo, estar sustancialmente libres de otros isomeros (por ejemplo, como un isomero optico puro o sustancialmente puro que tiene una actividad especificada), o se pueden mezclar, por ejemplo, como racematos o con todos los demas, u otros estereoisomeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invencion pueden tener la configuracion S o R como se define por Recomendaciones de la Union Internacional de Qufmica Pura y Aplicada (IUPAC) 1974. Las formas racemicas se pueden resolver por metodos ffsicos, tales como, por ejemplo, cristalizacion fraccionada, separacion o cristalizacion de derivados diastereomericos o separacion mediante cromatograffa en columna quiral. Los isomeros opticos individuales se pueden obtener a partir de los racematos mediante cualquier metodo adecuado, que incluye, sin limitacion, metodos convencionales, tales como, por ejemplo, formacion de sal con un acido opticamente activo seguido de cristalizacion.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Los compuestos de la presente invencion, posteriormente a su preparacion, preferiblemente se afslan y purifican para obtener una composicion que contiene una cantidad en peso igual o mayor de 90%, por ejemplo, igual a mayor de 95%, igual o mayor del 99% de los compuestos (compuestos "sustancialmente puros"), que luego se utiliza o formula como se describe aquf. Dichos compuestos "sustancialmente puros" de la presente invencion tambien se contemplan aquf como parte de la presente invencion.

Se contemplan todos los isomeros configuracionales de los compuestos de la presente invencion, ya sea en mezcla o en forma pura o sustancialmente pura. La definicion de los compuestos de la presente invencion abarca tanto isomeros de alqueno cis (Z) y trans (E), asf como isomeros cis y trans de hidrocarburo cfclicos o anillos heterocfclicos.

A lo largo de la especificacion, se pueden elegir grupos y sustituyentes de los mismos para proporcionar unidades estructurales y compuestos estables.

Las definiciones de grupos funcionales y terminos qufmicos especfficos se describen con mas detalle a continuacion. Para propositos de esta invencion, los elementos qufmicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periodica de Elementos version, CAS, Handbook of Chemistry and Physics, ed 75a., Cubierta interior, y los grupos funcionales especfficos se definen generalmente como se describe allf. Adicionalmente, los principios generales de la qufmica organica, asf como las unidades estructurales funcionales especfficas y reactividad, se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito (1999).

Ciertos compuestos de la presente invencion pueden existir, en formas geometricas o estereoisomericas particulares. La presente invencion contempla todos dichos compuestos que incluyen isomeros cis y trans, enantiomeros R y S, diastereomeros, isomeros (D), isomeros (L), las mezclas racemicas de los mismos, y otras mezclas de los mismos, que caen dentro del alcance de la invencion. Pueden estar presentes atomos de carbono asimetricos adicionales en un sustituyente tal como un grupo alquilo. Todos dichos isomeros, asf como mezclas de los mismos, estan destinados a ser incluidos en esta invencion.

Se pueden utilizar las mezclas isomericas que contienen cualquiera de una variedad de relaciones de isomeros de acuerdo con la presente invencion. Por ejemplo, cuando se combinan solo dos isomeros, las mezclas que contienen relaciones de isomeros 50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 90:10, 95:5, 96:4, 97:3, 98:2, 99:1, o 100:0 se contemplan por la presente invencion. Aquellos expertos comunes en la tecnica apreciaran facilmente que se contemplan relaciones analogas para mezclas de isomeros mas complejas.

La presente invencion tambien incluye compuestos marcados isotopicamente, que son identicos a los compuestos descritos aquf, pero por el hecho de que uno o mas atomos son reemplazados por un atomo que tiene una masa atomica o numero masico diferente de la masa atomica o numero masico normalmente encontrado en la naturaleza. Ejemplos de isotopos que se pueden incorporar en los compuestos de la presente invencion incluyen isotopos de hidrogeno carbono, nitrogeno, oxfgeno, fosforo, azufre, fluor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 11C, 14C, 15C, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Los compuestos de la presente invencion, o un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal farmaceuticamente aceptable o solvato del mismo, que contienen los isotopos mencionados anteriormente y/u otros isotopos de otros atomos estan dentro del alcance de esta invencion. Ciertos compuestos isotopicamente marcados de la presente invencion, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isotopos radiactivos tales como 3H y 14C, son utiles en ensayos de distribucion de farmaco y/o tejido de sustrato. Particularmente se prefieren los isotopos tritiados, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, por su facilidad de preparacion y detectabilidad. Adicionalmente, la sustitucion con isotopos mas pesados tales como deuterio, es decir, 2H, pueden proporcionar ciertas ventajas terapeuticas que resultan de una mayor estabilidad metabolica, por ejemplo aumento en la semivida in vivo o requisitos de dosificacion reducidos y, por lo tanto, se puede preferir en algunas circunstancias. En general, se pueden preparar compuestos isotopicamente marcados al llevar a cabo los procedimientos descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos adelante, al sustituir un reactivo marcado isotopicamente facilmente disponible por un reactivo no marcado isotopicamente.

Si, por ejemplo, se desea un enantiomero particular de un compuesto de la presente invencion, se puede preparar mediante sfntesis asimetrica, o mediante derivacion con un auxiliar quiral, donde se separa la mezcla diastereomerica resultante y el grupo auxiliar se divide para proporcionar los enantiomeros puros deseados. Alternativamente, cuando la molecula contiene un grupo funcional basico, tal como amino, o un grupo funcional acido, tal como carboxilo, se forman sales diastereomericas con un acido o base opticamente activo apropiado, seguido por resolucion de los diastereomeros formados de esta manera mediante cristalizacion fraccionada o medios de cromatograffa bien conocidos en la tecnica, y posterior recuperacion de los enantiomeros puros.

Se apreciara que los compuestos, como se describe aquf, se pueden sustituir con cualquier numero de sustituyentes o unidades estructurales funcionales. En general, el termino "sustituido", ya sea precedido por el termino "opcionalmente" o no, y los sustituyentes contenidos en las formulas de esta invencion, se refieren a la sustitucion de radicales de hidrogeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente especificado. Cuando se puede sustituir mas de una posicion en cualquier estructura dada con mas de un sustituyente seleccionado entre un grupo especificado, el sustituyente puede ser el mismo o diferente en cada posicion. Como se utiliza aquf, se contempla que el termino

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

"sustituido" incluye todos los sustituyentes permisibles de compuestos organicos. En un aspecto amplio, los sustituyentes permisibles incluyen sustituyentes de compuestos organicos adclicos y dclicos, ramificados y no ramificados, carbodclicos y heterodclicos, aromaticos y no aromaticos. Para los propositos de esta invencion, los heteroatomos tales como nitrogeno pueden tener sustituyentes de hidrogeno y/o cualesquiera sustituyentes permisibles de los compuestos organicos descritos aqrn que satisfagan las valencias de los heteroatomos. Adicionalmente, no se pretende que esta invencion se limite de ninguna forma por los sustituyentes permisibles de compuestos organicos. Las combinaciones de sustituyentes y variables previstas por esta invencion son preferiblemente aquellas que resultan en la formacion de compuestos estables utiles en el tratamiento, por ejemplo, de enfermedades infecciosas o trastornos proliferativos. El termino "estable", como se utiliza aqrn, se refiere preferiblemente a compuestos que poseen estabilidad suficiente para permitir la fabricacion y que mantienen la integridad del compuesto durante un penodo de tiempo suficiente para ser detectado y preferiblemente durante un periodo de tiempo suficiente para ser util para los propositos detallados aqrn.

Como se utiliza aqrn, el termino "respuesta inmunitaria adaptativa" se refiere a cualquier tipo de respuesta inmunitaria espedfica a antfgeno. La respuesta inmunitaria adaptativa, que tambien se conoce en la tecnica como espedficas, implican linfocitos que tambien se caracterizan por memoria inmunologica, por lo que la respuesta a una segunda o posterior exposicion al antfgeno es mas vigorosa que la respuesta a una primera exposicion al antfgeno. El termino respuesta inmunitaria adaptativa abarca la inmunidad humoral (anticuerpos) y la inmunidad mediada por celulas (celular).

Como se utiliza aqrn, "alergia" se refiere a hipersensibilidad adquirida a una sustancia (alergeno). Las afecciones alergicas incluyen eccema, rinitis alergica o coriza, fiebre del heno, asma, urticaria (ronchas) y alergias a los alimentos, y otras afecciones atopicas.

Como se utiliza aqrn, el termino "sustancia antigenica" se refiere a cualquier sustancia que induce una respuesta inmunitaria adaptativa (espedfica). Un antfgeno normalmente es cualquier sustancia que se puede unir espedficamente por un receptor de antfgeno de celulas T, anticuerpo, o receptor de antfgeno de celulas B. Las sustancias antigenicas incluyen, sin limitacion, peptidos, protemas, carbohidratos, lfpidos, fosfolfpidos, acidos nucleicos, autacoides y hormonas. Las sustancias antigenicas mas espedficamente incluyen antfgenos que se clasifican como alergenos, antfgenos de cancer, y antfgenos microbianos.

Como se utiliza aqrn, "asma" se refiere a un trastorno del sistema respiratorio caracterizado por inflamacion, estrechamiento de las vfas respiratorias y aumento de la reactividad de las vfas respiratorias a agentes inhalados. El asma con frecuencia, aunque no exclusivamente se asocia con smtomas atopicos o alergicos. Por ejemplo, se puede precipitar el asma puede por la exposicion a un alergeno, exposicion al aire fno, infeccion respiratoria, y esfuerzo excesivo.

Como se utiliza aqrn, los terminos "enfermedad autoinmunitaria" y, equivalentemente, "trastorno autoinmunitario" y "autoinmunidad", se refieren a una lesion aguda o cronica mediada inmunologicamente a un tejido u organo derivado del anfitrion. Los terminos abarcan fenomenos autoinmunitarios celulares y mediados por anticuerpos, asf como autoinmunidad espedfica a organos y no espedfica a organos. Las enfermedades autoinmunitarias incluyen diabetes mellitus dependiente de insulina, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistemico, esclerosis multiple, aterosclerosis, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino. Las enfermedades autoinmunitarias tambien incluyen, sin limitacion, espondilitis anquilosante, anemia hemolftica autoinmunitaria, Beget's syndrome, smdrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, smdrome de Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, trombocitopenia idiopatica, myastenia gravis, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, polimiositis/dermatomiositis, esclerosis biliar primaria, sarcoidosis, colangitis esclerosante, smdrome de Sjogren, esclerosis sistemica (escleroderma y smdrome de CREST), arteritis de Takayasu, arteritis temporal, y granulomatosis de Wegener. Las enfermedades autoinmunitarias tambien incluyen ciertas enfermedades asociadas a complejos inmunitarios.

Como se utiliza aqrn, los terminos "cancer" y, equivalentemente, "tumor" se refieren a una afeccion en la que las celulas que se replican anormalmente del origen del anfitrion estan presentes en una cantidad detectable en un sujeto. El cancer puede ser un cancer maligno o no maligno. Los canceres o tumores incluyen, pero no se limitan a cancer del tracto biliar; cancer de cerebro; cancer de mama; cancer de cuello uterino; coriocarcinoma; cancer de colon; cancer endometrial; cancer de esofago; cancer gastrico(estomago); neoplasmas intraepiteliales; leucemias; linfomas; cancer de Idgado; cancer de pulmon (por ejemplo, de celulas microdticas y de celulas no pequenas); melanoma; neuroblastomas; cancer oral; cancer de ovarios; cancer de pancreas; cancer de prostata; cancer de recto; cancer renal (rinon); sarcomas; cancer de piel; cancer de testmulos; cancer de tiroides; asf como otros carcinomas y sarcomas. El cancer puede ser primario o metastasico.

Como se utiliza aqrn, el termino "ADN CpG" se refiere a un acido nucleico inmunoestimulador que contiene un dinucleotido de citosina- guanina (CG), cuyo residuo C es no metilado. Los efectos de los acidos nucleicos con CpG sobre la modulacion inmunitaria se han descrito ampliamente en las patentes Estadounidenses tales como Patentes Estadounidenses Nos. 6,194,388; 6,207,646; 6,239,116; y 6,218,371, y solicitudes de patentes internacionales publicadas, tales como WO98/37919, WO98/40100, WO98/52581, y WO99/56755. Todos los contenidos completos de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

cada una de estas patentes y solicitudes de patente publicada se incorporan como referenda. El acido nucleico inmunoestimulador completo puede ser no metilado o porciones pueden ser no metiladas pero por lo menos la C de 5'- CG-3 'debe ser no metilada.

En una realizacion, el ADN CpG es un ODN CpG que tiene una secuencia de bases proporcionada por 5'- TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'(ODN 2006; SEQ ID NO: 1). El ODN CpG se ha clasificado adicionalmente por la estructura y funcion en por lo menos las siguientes tres clases o tipos, todos los cuales estan destinados a ser abarcados dentro del ADN CpG como se utiliza aquf: ODN CpG clase B tal como ODN 2006 incluye el ODN CpG inmunoestimulador descrito originalmente y celulas B caracterfsticamente activas y celulas NK, pero no inducen o solo inducen debilmente la expresion de interferon tipo I (por ejemplo, IFN-a). Un ODN CpG clase A, descrito en la solicitud internacional PCT publicada WO 01/22990, incorpora un motivo CpG, incluye una estructura principal de fosfodiester/fosforotioato quimerica, y celulas NK caracterfsticamente activas e induce celulas dendrfticas plasmocitoides para expresar grandes cantidades de IFN-a, pero no activan o solo activan debilmente las celulas B. Un ejemplo de ODN CpG clase A es 5'-G*G*GGGACGATCGTCG*G*G*G*G*G-3' (ODN 2216, SEQ ID NO: 2), en donde "*"

representa fosforotioato y...representa fosfodiester. El ODN CpG clase C incorpora una CpG, incluye una cadena

principal de fosforotioato completamente, incluye una region palindromica o casi palindromica rica en GC, y son capaces de activar celulas B e inducir la expresion de IFN-a. El ODN CpG clase C se ha descrito, por ejemplo, en la solicitud de patente Estadounidense publicada 2003/0148976. Un ejemplo de un ODN CpG clase C es 5'- TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG-3' (ODN 2395; SEQ ID NO: 3). Para una revision de las diversas clases de CpG ODN, vease tambien Vollmer J et al. (2004) Eur J Immunol 34: 251-62.

Como se utiliza aquf, "citoquina" se refiere a cualquiera de una serie de protefnas solubles o glicoprotefnas que actuan sobre las celulas inmunitarias a traves de receptores especfficos para afectar el estado de activacion y la funcion de las celulas inmunitarias. Las citoquinas incluyen interferones, interleuquinas, factor de necrosis tumoral, factor beta de crecimiento de transformacion, factores estimulantes de colonias (CSFs), quimioquinas, asf como otros. Varias citoquinas afectan la inmunidad innata, inmunidad adquirida, o ambas. Las citoquinas incluyen especfficamente, sin limitacion, IFN-a, IFN-p, IFN-y, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, TNF-a, TGF-U, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) y factor estimulante de colonias de macrofagos y granulocitos (GMCSF). Las quimioquinas incluyen especfficamente, sin limitacion, IL-8, IP-10, I-TAC, RANTES, MIP-la, MIP-1p, GRO-a, Gro, Gro-y, MCP-1, MCP-2, y MCP -3.

Se pueden clasificar las celulas colaboradoras T CD4+ mas maduras en subgrupos, asociados con citoquinas, reguladores cruzados o fenotipos: Th1, Th2, Th17, o Treg. Las celulas Th1 se asocian con IL-2, IL-3, IFN, GM-CSF y niveles elevados de TNF-a. Las celulas Th2 se asocian con IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, GM-CSF y bajos niveles de TNF-a. El subgrupo Th1 promueve la inmunidad mediada por celulas y la inmunidad humoral que se caracteriza por el cambio de clase de inmunoglobulina a IgG2a en ratones. Las respuestas Th1 tambien se pueden asociar con hipersensibilidad de tipo retardado y enfermedad autoinmunitaria. El subgrupo Th2 principalmente induce inmunidad humoral e induce el cambio de clase de inmunoglobulina a IgE y IgGI en ratones. Los isotipos de anticuerpos asociados con las respuestas Th1 generalmente tienen buenas capacidades de neutralizacion y de opsonizacion, mientras que aquellos asociados con las respuestas Th2 se asocian mas con respuestas alergicas.

Se ha mostrado que diversos factores influyen con compromiso en los perfiles Th1 o Th2. Los mejores reguladores caracterizados son citoquinas. IL-12 e IFN-y son reguladores Th1 positivos y reguladores Th2 negativos. El IL-12 promueve la produccion de IFN-y, el IFN-y proporciona retroalimentacion positiva para IL-12. IL-4 e IL-10 parecen ser necesarios para el establecimiento del perfil de citoquinas Th2 y para regular por disminucion la produccion de citoquinas Th1; los efectos de IL-4 son en algunos casos dominantes sobre aquellos de IL-12. Se mostro que IL-13 inhibe la expresion de citoquinas inflamatorias, que incluyen IL-12 y TNF-a por monocitos inducidos por LPS, de una manera similar a IL-4.

Como se utiliza aquf, "cantidad efectiva" se refiere a cualquier cantidad que sea necesaria o suficiente para lograr o promover un resultado deseado. En algunos casos, una cantidad efectiva es una cantidad terapeuticamente efectiva. Una cantidad terapeuticamente efectiva es cualquier cantidad que sea necesaria o suficiente para promover o lograr una respuesta biologica deseada en un sujeto. La cantidad efectiva para cualquier aplicacion particular puede variar dependiendo de dichos factores como la enfermedad o afeccion que se va a tratar, el agente particular que se administra, el tamano del sujeto, o la gravedad de la enfermedad o afeccion. Un experto comun en la tecnica puede determinar empfricamente la cantidad efectiva de un agente particular sin necesidad de experimentacion indebida.

Como se utiliza aquf, " rechazo del injerto" se refiere a lesion hiperaguda, aguda o cronica mediada inmunologicamente para un tejido u organo derivado de una fuente diferente al anfitrion. De esta manera, el termino abarca tanto el rechazo celular como el rechazo mediado por anticuerpo, asf como el rechazo de aloinjertos y xenoinjertos.

Como se utiliza aquf, el termino "celula inmunitaria" se refiere a una celula que pertenece al sistema inmunitario. Las celulas inmunitarias incluyen linfocitos T (celulas T), linfocitos B (celulas B), celulas asesinas naturales (NK), granulocitos, neutrofilos, macrofagos, monocitos, celulas dendrfticas, y formas especializadas de cualquiera de los anteriores, por ejemplo, celulas dendrfticas plasmacitoides, celulas de plasma, nKt, colaboradoras T y linfocitos T

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

citotoxicos (CTL).

Como se utiliza aquf, el termino "complejo inmunitario" se refiere a cualquier conjugado que incluye un anticuerpo y un antfgeno unido especfficamente por el anticuerpo. En una realizacion, el antfgeno es un autoantfgeno.

Como se utiliza aquf, el termino "complejo inmunitario que comprende un acido nucleico" se refiere a cualquier conjugado que incluye un anticuerpo y un antfgeno que contiene acido nucleico unido especfficamente por el anticuerpo. El antfgeno que contiene acido nucleico puede incluir cromatina, ribosomas, pequenas protefnas nucleares, histonas, nucleosomas, ADN, ARN, o cualquier combinacion de los mismos. El anticuerpo puede, pero no necesita necesariamente unirse especfficamente a un componente de acido nucleico del antfgeno que contiene acido nucleico. En algunas realizaciones, el termino "complejo inmunitario que comprende un acido nucleico" se refiere tambien a complejos no anticuerpos, tales como HMGB1, LL-37, y otras protefnas de union a acido nucleico tales como histonas, factores de transcripcion y enzimas que forman con acidos nucleicos.

Como se utiliza aquf, el termino "enfermedad asociada a complejo inmunitario" se refiere a cualquier enfermedad caracterizada por la produccion y/o deposito de tejido de complejos inmunitarios, que incluyen, pero no se limitan a lupus eritematoso sistemico (SLE) y enfermedades de tejido conjuntivo relacionadas, artritis reumatoide, enfermedad de complejo inmunitario relacionada con hepatitis C y hepatitis B (por ejemplo, crioglobulinemia), sfndrome de Beget, glomerulonefritis autoinmunitarias, y vasculopatfa asociada con la presencia de complejos inmunitarios de LDL/ anti- LDL.

Como se utiliza aquf, "inmunodeficiencia" se refiere a una enfermedad o trastorno en el que el sistema inmunitario del sujeto no esta funcionando en capacidad normal o en el que serfa util reforzar la respuesta inmunitaria del sujeto, por ejemplo, para eliminar un tumor o cancer (por ejemplo, tumores del cerebro, pulmon (por ejemplo, de celulas microcfticas y de celulas no pequenas), ovario, mama, prostata, colon, asf como otros carcinomas y sarcomas) o una infeccion en un sujeto. La inmunodeficiencia se puede adquirir o puede ser congenita.

Como se utiliza aquf, " respuesta asociada a acido nucleico inmunoestimulador en un sujeto" se refiere a una respuesta medible en un sujeto asociado con la administracion al sujeto de un acido nucleico inmunoestimulador. Dichas respuestas incluyen, sin limitacion, elaboracion de citoquinas, quimioquinas, factores de crecimiento, o inmunoglobulina; expresion de marcadores de activacion de superficie celular inmunitaria; sesgo Th1/Th2; y actividad de enfermedad clfnica.

Como se utiliza aquf, los terminos "infeccion" y, equivalentemente, "enfermedad infecciosa" se refieren a una afeccion en la que esta presente un organismo o agente infeccioso en una cantidad detectable en la sangre o en un tejido normalmente esteril o un compartimento normalmente esteril de un sujeto. Los organismos y agentes infecciosos incluyen virus, bacterias, hongos y parasitos. Los terminos abarcan tanto infecciones agudas como cronicas, asf como sepsis.

Como se utiliza aquf, el termino "respuesta inmunitaria innata" se refiere a cualquier tipo de respuesta inmunitaria a ciertos patrones moleculares asociados con patogenos (PAMPs) o patrones moleculares asociados con peligro (DAMPs). La inmunidad innata, que tambien se conoce en la tecnica como inmunidad natural o nativa, implica principalmente neutrofilos, granulocitos, fagocitos mononucleares, celulas dendrfticas, celulas NKT y celulas NK. Las respuestas inmunitarias innatas pueden incluir, sin limitacion, produccion de interferon tipo I (por ejemplo, IFN-a), activacion de neutrofilos, activacion de macrofagos, fagocitosis, opsonizacion, activacion del complemento, y cualquier combinacion de los mismos.

Como se utiliza aquf, el termino "auto-DNA" se refiere a cualquier ADN derivado del genoma de un sujeto anfitrion. En una realizacion, el auto-ADN incluye ADN complementario (cADN) derivado de un sujeto anfitrion. El auto-ADN incluye ADN intacto y degradado.

Como se utiliza aquf, el termino "auto-ARN" se refiere a cualquier ARN derivado del genoma de un sujeto anfitrion. En una realizacion de auto-ARN es un ARN mensajero (mARN) derivado de un sujeto anfitrion. En otra realizacion el auto- ARN es un ARN regulador tal como ARN micros. En una realizacion el auto-ARN incluye ARN ribosomal (rARN) derivada de un sujeto anfitrion. El auto-ARN incluye ARN intacto y degradado.

Como se utiliza aquf, el termino "sujeto" se refiere a un animal vertebrado. En una realizacion, el sujeto es un mamffero. En una realizacion, el sujeto es un humano. En otras realizaciones, el sujeto es un animal no humano vertebrado, que incluye, sin limitacion, primates no humanos, animales de laboratorio, animales de granja, animales domesticos y animales no domesticados.

Como se utiliza aquf, "sujeto que tiene o esta en riesgo de desarrollar inmunoestimulacion mediada por TLR" se refiere a un sujeto expuesto a, o en riesgo de exposicion a un PAMP, DAMP u otro ligando TLR.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Como se utiliza aquf, los terminos "receptor tipo Toll " y, lo que es equivalente, "TLR" se refiere a cualquier miembro de una familia de por lo menos trece protefnas de receptor de reconocimiento de patron altamente conservadas (TLR1- TLR13) que reconocen PAMPs, DAMPs y actuan como elementos de senalizacion clave en la inmunidad innata. Los polipeptidos de TLR comparten una estructura caracterfstica que incluye un dominio extracelular (extracitoplasmico) que tiene repeticiones ricas en leucina, un dominio transmembrana, y un dominio intracelular (citoplasmico) que esta implicado en la senalizacion de TLR. Los TLR incluyen, pero no se limitan a TLR humanos.

Las secuencias de acidos nucleicos y aminoacidos para los diez TLR humanos conocidos en la actualidad estan disponibles en bases de datos publicas tales como GenBank. Del mismo modo, las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para diversos TLR de numerosas especies no humanas tambien estan disponibles en bases de datos publicas que incluyen GenBank. Por ejemplo, las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR9 humano (hTLR9) se pueden encontrar como numeros de acceso GenBank AF245704 (nucleotidos que abarcan la region de codificacion 145-3243) y AAF78037, respectivamente. Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR9 de murino (mTLR9) se pueden encontrar como numeros de acceso GenBank AF348140 (nucleotidos que abarcan la region de codificacion 40-3138) y AAK29625, respectivamente. La protefna de TLR9 humana deducida contiene 1,032 aminoacidos y comparte una identidad de aminoacidos completa del 75.5% con el TLR9 de raton. Al igual que otras protefnas de TLR, el TLR9 humano contiene repeticiones extracelulares ricas en leucina (LRRs) y un dominio Toll/interleuquina-1R (TIR) citoplasmatico. Tambien tiene un peptido de senal (residuos 1-25) y un dominio de transmembrana (residuos 819-836).

Las secuencias de acidos nucleicos y aminoacidos para TLR8 humana (hTLR8) se puede encontrar como numeros de acceso GenBank AF245703 (nucleotidos que abarcan la region de codificacion 49-3174) y AAF78036, respectivamente. Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR8 de murino (mTLR8) se pueden encontrar como numeros de acceso GenBank AY035890 (region de codificacion que abarca los nucleotidos 59-3157) y AAK62677, respectivamente.

Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR7 humano (hTLR7) se puede encontrar como numeros de acceso GenBank AF240467 (nucleotidos que abarcan la region de codificacion 135-3285) y AAF60188, respectivamente. Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR7 de murino (mTLR7) se pueden encontrar como numeros de acceso GenBank AY035889 (region de codificacion que abarca los nucleotidos 49-3201) y AAK62676, respectivamente.

Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR3 humano (hTLR3) se puede encontrar como numeros de acceso GenBank NM003265 (nucleotidos que abarcan la region de codificacion 102-2816) y NP003256, respectivamente. Las secuencias de acidos nucleicos y de aminoacidos para TLR3 de murino (hTLR3) se pueden encontrar como numeros de acceso GenBank AF355152 (region de codificacion que abarca los nucleotidos 44-2761) y AAK26117, respectivamente.

Mientras que hTLR1 se expresa de forma ubicua, hTLR2, hTLR4 y hTLR5 estan presentes en monocitos, fagocitos polimorfonucleares y celulas dendrfticas. Muzio M et al. (2000) J Leukoc Biol 67: 450-6. Las publicaciones recientes reportaron que el hTLR1, hTLR6, hTLR7, hTLR9 y hTLR10 estan presentes en las celulas B humanas. El TLR7 y hTLR9 humano estan presentes en celulas dendrfticas plasmacitoides (pDC), mientras que las celulas dendrfticas mieloides expresan hTLR7 y hTLR8 pero no hTLR9. Sin embargo, parece que no se expresa el TLR8 humano en pDC.

Como miembros de la familia del receptor de interleuquina-1 proinflamatoria (IL-1R), los TLR comparten homologfas en sus dominios citoplasmaticos denominados dominios de homologfa Toll/IL-1 R (TIR). Vease solicitudes publicadas PCT PCT/LTS98/08979 y PCT/LTS01/16766. Los mecanismos de senalizacion intracelular mediados por TLR parecen generalmente similares, se considera que el MyD88 y el factor 6 asociado con receptor del factor de necrosis tumoral (TRAF6) desempenan funciones crfticas. Wesche H et al. (1997) Immunity 7: 837-47; Medzhitov R et al. (1998) Mol Cell 2: 253-8; Adachi O et al. (1998) Immunity 9: 143-50; Kawai T et al. (1999) Immunity 11: 115-22); Cao Z et al. (1996) Nature 383: 443-6; Lomaga MA et al. (1999) Genes Dev 13: 1015-24. Se conoce que la transduccion de senales entre MyD88 y TRAF6 involucra miembros de la familia de quinasa asociada con el receptor IL-1 de serina- treonina quinasa (iRaK), que incluyen por lo menos IRAK-1 e IRAK-2. Muzio M et al. (1997) Science 278: 1612-5.

En resumen, se considera que el MyD88 actua como una molecula adaptadora entre el dominio TIR de un TLR o IL-1R e IRAK (que incluye por lo menos uno cualquiera de IRAK-1, IRAK-2, IRAK-4, y IRAK- M). El MyD88 incluye un dominio de homologfa Toll de terminal C y un dominio de muerte de terminal N. El dominio de homologfa Toll de MyD88 se une al dominio TIR de TLR o IL-1R, y el dominio de muerte de MyD88 se une al dominio de muerte de serina quinasa IRAK, el IRAK interacciona con TRAF6, que actua como una entrada en por lo menos dos rutas, una que conduce a la activacion del factor de transcripcion NF-KB y otra que conduce a la activacion de Jun y Fos, miembros de la familia del factor de transcripcion de protefna-1 activadora (AP-1). La activacion de NF-KB implica la activacion de TAK-1, un miembro de la familia quinasas MAP 3 (MAPK), y quinasas IKB. Las quinasas loB fosforilan las IKB, que conducen a su degradacion y la translocacion de NF-KB en el nucleo. Se considera que la activacion de Jun y Fos implica quinasas de quinasa MAP (MAPKKs) y quinasas ERK MAP, p38, JNK y/SAPK. El NF-KB y AP-1 estan implicados en el control de transcripcion de un numero de genes de respuesta inmunitaria claves, que incluyen genes de diversas citoquinas y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

moleculas coestimuladoras. Vease Aderem A et al. (2000), Nature 406: 782-7; Hacker H et al. (1999) EMBO J 18: 697382.

Como se utiliza aqrn, los terminos "ligando TLR" y, equivalentemente, "ligando para un TLR" y "agonistas de senalizacion de TLR", se refieren a una molecula, distinta de una molecula pequena de acuerdo con la Formula I descrita aqrn que interactua, directamente o indirectamente, con un TLR a traves de un dominio de TLR diferente de un dominio TIR e induce senalizacion mediada por TLR. En una realizacion, un ligando de TLR es un ligando natural, es decir un ligando de TLR que se encuentra en la naturaleza. En una realizacion un ligando de TLR se refiere a una molecula diferente de un ligando natural de un TLR, por ejemplo, una molecula preparada por actividad humana. En una realizacion, el TLR es TLR9 y el agonista de senal de TLR es un acido nucleico CpG.

Se han descrito los ligandos para muchos, pero no para todos los TLR. Por ejemplo, se ha reportado las senales de TLR2 en respuesta a peptidoglicano y lipopeptidos. Yoshimura A et al. (1999) JImmunol 163: 1-5 ; Brightbill HD et al. (1999) Science 285: 732-6; Aliprantis aO et al. (1999) Science 285: 736-9; Takeuchi O et al. (1999) Immunity 11: 44351; Underhill DM et al. (1999) Nature 401: 811-5. Se ha reportado que el TLR4 se senala en respuesta a lipopolisacarido (LPS). Vease Hoshino K et al. (1999) Immunol 162: 3749-52; Poltorak A et al. (1998) Science 282: 2085-8; Medzhitov R et al. (1997) Nature 388: 394-7. Se ha reportado que la flagelina bacteriana es un ligando natural para TLR5. Vease Hayashi F et al. (2001), Nature 410: 1099 1103. Se ha reportado que el TLR6, junto con TLR2, se senala en respuesta a proteoglicano. Vease Ozinsky A et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97: 13766-71; Takeuchi O et al. (2001) Int Immunol 13: 933-40.

Recientemente se reporto que el TLR9 es un receptor para el ADN CpG. Hemmi H et al. (2000) Nature 408: 740-5; Bauer S et al. (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98: 9237-42. El ADN CpG, que incluye el AdN bacteriano y el ADN sintetico con dinucleotidos CG en los que la citosina no esta metilada, se describe con mayor detalle en otra parte aqrn. Marshak-Rothstein y colegas tambien reportaron recientemente que su hallazgo de que la senalizacion de tLR9 puede ocurrir en ciertas enfermedades autoinmunitarias en respuesta a los complejos inmunitarios que contienen IgG y cromatina. Leadbetter EA et al. (2002), Nature 416: 595-8. Por lo tanto, en un sentido mas amplio, parece que TLR9 puede ser una senal en respuesta a auto o no auto-acido nucleico, ya sea ADN o ARN, cuando el acido nucleico se presenta en un contexto adecuado, por ejemplo, como parte de un complejo inmunitario.

Recientemente se reporto que ciertos compuestos de imidazoquinolina que tienen actividad antiviral son ligandos de TLR7 y TLR8. Hemmi H et al. (2002) Nat Immunol 3: 196-200; Jurk M et al. (2002) Nat Immunol 3: 499. Las imidazoquinolinas son activadores sinteticos potentes de las celulas inmunitarias con propiedades antivirales y antitumorales. El uso de macrofagos de tipo silvestre y de ratones deficientes en MyD88, Hemmi et al. Recientemente informaron que dos imidazoquinolinas, imiquimod y resiquimod (R848), induce el factor de necrosis tumoral (TNF) e interleuquina-12 (IL-12) y activa NF-KB solo en celulas de tipo silvestre, de conformidad con la activacion a traves de un TLR. Hemmi H et al. (2002) Nat Immunol 3: 196-200. Los macrofagos de los ratones deficientes en TLR7 pero no otros TLRs produjeron citoquinas no detectables en respuesta a estas imidazoquinolinas. Ademas, las imidazoquinolinas inducen la proliferacion dependiente de dosis de las celulas B esplenicas y la activacion de cascadas de senalizacion intracelular en las celulas de tipo silvestre, pero no en ratones TLR7 -/-. El analisis de luciferasa establecio que la expresion de TLR7 humano, pero no TLR2 ni TLR4, en celulas de rinon embrionarias humanas resulta en la activacion de NF-KB en respuesta a resiquimod. De esta manera, los hallazgos de Hemmi et al., sugieren que estos compuestos de imidazoquinolina son ligandos no naturales de TLR7 que pueden inducir la senalizacion a traves de TLR7. Recientemente se reporto que el R848 es tambien un ligando para el TLR8 humano. Vease Jurk M et al. (2002) Nat Immunol 3:499. Nat Immunol 3:499. Tambien se ha reportado que el ssARN es el ligando natural y que la estimulacion aberrante de TLR7 y o TLR8 por los complejos: ARN: esta implicada en la autoinmunidad.

Se informo recientemente que los ligandos de TLR3 incluyen poli (I:C) y el ARN de doble cadena (dsARN). Para propositos de esta invencion, poli (I:C) y el ARN de doble cadena (dsARN) se clasifican como moleculas de oligonucleotidos. Mediante la estimulacion de celulas de rinon que expresan uno de un rango de TLRs con poli (I: C), Alexopoulou et al. reportaron que solo las celulas que expresan TLR3 responden al activar NF-aB. Vease Alexopoulou L et al. (2001), Nature 413: 732-8.

Alexopoulou et al. tambien reportaron que las celulas de tipo silvestre estimuladas con poli (I: C) activan NF-KB y producen citoquinas inflamatorias IL-6, IL-12 y TNF-a, mientras que las respuestas correspondientes de celulas TLR3 -/- fueron significativamente afectadas. Por el contrario, las celulas TLR3 -/- respondieron de manera equivalente a las celulas de tipo silvestre en respuesta a dinucleotidos de lipopolisacarido, peptidoglicano, y CpG. El analisis de celulas MyD88 -/- indica que esta protema adaptadora esta involucrada en la produccion inducida por dsARN de citoquinas y respuestas proliferativas, aunque no se ve afectada la activacion de quinasas NF-KB y MAP, lo que indica vfas distintas para estas respuestas celulares. Alexopoulou et al. proponen que TLR3 puede tener una funcion en la defensa del anfitrion frente a virus.

Como se utiliza aqrn, una "celula que expresa un TLR" se refiere a cualquier celula que expresa, ya sea natural o artificialmente, un TLR funcional. Un TLR funcional es una protema de TLR de longitud completa o un fragmento de la misma capaz de inducir una senal en respuesta a la interaccion con su ligando.

En general, el TLR funcional incluira por lo menos un fragmento de union a ligando de TLR del dominio extracelular del TLR de longitud completa y por lo menos un fragmento de un dominio TIR capaz de interactuar con otro polipeptido que contiene dominio de homologfa Toll, por ejemplo, MyD88. En diversas realizaciones el TLR funcional es un TLR de longitud completa seleccionado de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9 y TLR10.

5 Compuestos

En un aspecto, se describen compuestos de purina novedosos. Los solicitantes han descubierto, sorprendentemente los compuestos de purina como moduladores del sistema inmunitario. Es inesperado que los compuestos de purina como se describen aquf sean utiles en metodos para inhibir una respuesta inmunitaria, tanto in vitro como in vivo, que incluyen metodos para el tratamiento de enfermedades asociadas con el complejo inmunitario y trastornos autoinmunitarios. En 10 otro aspecto, la invencion proporciona composiciones de purina novedosas. Como se describe mas adelante, se ha descubierto que estas composiciones y otras composiciones de purina son utiles en metodos para inhibir una respuesta inmunitaria, tanto in vitro como in vivo, que incluyen los metodos para tratar enfermedades asociadas con el complejo inmunitario y trastornos autoinmunitarios. Tambien se considera que las composiciones de purina novedosas como se describe aquf se pueden utilizar para la prevencion y tratamiento de la malaria, asf como para el tratamiento de otras 15 enfermedades.

En un aspecto, se describe un compuesto de la Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

imagen12

en donde

20 Q es H, (CH2)qNR1R2, NR1(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

25 R7 es H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

30 L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o 35 alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo,

heterociclo, o arilo; y

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

5 En ciertas realizaciones, X esta ausente. En otras realizaciones, X se selecciona del grupo que consiste de alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, y heterociclo. En algunas realizaciones, X es -(CH2)m-, en donde m es 2-4. En otras realizaciones, X es arilo. Ejemplos no limitantes de arilo incluyen fenilo opcionalmente sustituido y naftilo. En aun otras realizaciones, X es un heterociclo. En algunas realizaciones, X es un heterociclo saturado. Ejemplos no limitantes de heterociclo saturado incluye piperizina. En otras realizaciones, X es un heterociclo insaturado. Ejemplos no limitantes de 10 heterociclo no saturado incluye piridina, pirazina, pirimidina, y piridazina.

En ciertas realizaciones, Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4. Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de 15 alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)R12, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4. En algunas realizaciones, Q es H, OR1, SR1, o CHR1R2. En otras realizaciones, Q es - (CH2)qNR1R2. En algunas realizaciones especfficas, Q es - (CH2)2NR1R2. En algunas realizaciones especfficas, Q es

imagen13

En otras realizaciones, Q es

20

imagen14

en donde R12 es alquilo, arilo, o heterociclo. En algunas realizaciones, C(=O)R12 es

imagen15

En aun otras realizaciones, Q es NH(CH2)pNRbRc. En algunas realizaciones especfficas, Q es NH(CH2)2N(CH3)2, NH(CH2)2N(CH2CH3)2, o NH(CH2)2N(CH3)(CH2CH3). En aun otras realizaciones, Q es alquilo. Ejemplos no limitantes de 25 alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, sec-butilo, y tert-butilo.

En algunas realizaciones, X es un grupo fenilo. En estas realizaciones, Q se adhiere a grupo fenilo en la posicion orto, meta, o para relativa al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, Q es

En algunas realizaciones especfficas, Q es

imagen16

se adhiere al grupo fenilo en la posicion para relativa al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, R7 es 5 NR3R4 y R3 y R4 se combinan con el atomo de nitrogeno como un grupo morfolino. En otras realizaciones especfficas,

R7 es NR3R4 y R3 y R4 son cada uno grupo alquilo tal como metilo. En algunas realizaciones especfficas, cada uno de R5 y R6 es un hidrogeno.

En algunas realizaciones especfficas, R5 es halogeno tal como F, Cl, o Br.

En algunas realizaciones, X es un grupo fenilo. En estas realizaciones, Q se adhiere a grupo fenilo en la posicion orto, 10 meta o para relativa al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, Q es

imagen17

En algunas realizaciones especfficas, Q es

imagen18

Se adhiere al grupo fenilo en la posicion para con relacion al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, R7 15 es NR3R4 y R3 y R4 se combinan con el atomo de nitrogeno como un grupo morfolino. En otras realizaciones especfficas, R7 es R3R4 y R3 y R4 son cada uno un grupo alquilo tal como metilo. En algunas realizaciones especfficas, cada uno de R5 y R6 es un hidrogeno.

En algunas realizaciones, X es un grupo fenilo. En estas realizaciones, Q esta unido al grupo fenilo en la posicion orto, meta, o para con relacion al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, Q es

imagen19

En algunas realizaciones especfficas, Q es

5

10

15

20

25

imagen20

■'CH2CH2N(CH;,>2

se adhiere al grupo fenilo en la posicion orto relativa al nucleo de purina. En algunas realizaciones especfficas, R7 es NR3R4 y R3 y R4 se combinan con el atomo de nitrogeno como un grupo morfolino. En otras realizaciones especfficas, R7 es NR3R4 y R3 y R4 son cada uno grupo alquilo tal como metilo. En algunas realizaciones especfficas, cada uno de R5 y R6 es un hidrogeno. En algunas realizaciones especfficas, R5 es halogeno tal como F, Cl, o Br.

En algunas realizaciones, Y es oxfgeno. En otras realizaciones, Y es azufre. En aun otras realizaciones, Y es NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo. En algunas realizaciones, L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 4 atomos de carbono.

En otras realizaciones, X es un grupo fenilo y Q es hidrogeno. En algunas realizaciones especfficas, Y es NH. En algunas realizaciones especfficas, L es -(CH2)2-. En algunas realizaciones especfficas, R7 es NR3R4. En aun algunas realizaciones especfficas, R3 y R4 se combinan como un grupo morfolino. En algunas realizaciones especfficas, R6 es bencilo o

imagen21

En algunas realizaciones especfficas, R5 es hidrogeno. En otras realizaciones especfficas, R5 es halogeno.

En ciertas realizaciones, R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra,

OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o NRbC(=O)Ra. En ciertas realizaciones especfficas, R5 es hidrogeno, halogeno, alquilo (C1-C4), hidroxi, alcoxi (C1-C4), SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, S(=O)2NRbRc, en el que Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo (C1-C4). En algunas realizaciones, R5 es un halogeno tal como F, Cl, Br, o I. En otras realizaciones, R5 es OH o SH. En aun otras realizaciones, R5 es S-alquilo o SO2-alquilo. En aun otras realizaciones, R5 es alquilo. En aun otras realizaciones, R5 es

imagen22

En algunas realizaciones especfficas, -X-Q es

imagen23

En otras realizaciones especfficas, -X-Q es

En aun otras realizaciones especfficas

imagen24

-X-Q es

En aun otras realizaciones especfficas

imagen25

-X-Q

es

10

15

20

imagen26

En estas realizaciones, Y es NH, S, o O y L es -(CH2)m- en donde m es 2-6. Otros grupos sustituyentes son como se describe aqrn.

En algunas realizaciones, R7 es H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4) y R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo. En algunas realizaciones espedficas, R7 es NR3R4. En algunas realizaciones espedficas, R3 y R4 son grupos alquilo. En algunas realizaciones espedficas, R7 es N(CH3)2. En otras realizaciones espedficas, R7 es grupo morfolino. En aun otras realizaciones espedficas, R7 es

o

En otras realizaciones espedficas, R7 es alquilo. En aun otras realizaciones espedficas, R7 es arilo o heteroarilo. Ejemplos no limitantes de grupo arilo y heteroarilo para R7 incluyen

imagen27

imagen28

En algunas realizaciones, R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4) arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4. En algunas realizaciones espedficas, R6 es bencilo o

imagen29

En otras realizaciones, R6 es hidrogeno,

imagen30

o alquilo.

En otras realizaciones, el compuesto de la Formula (I) tiene la estructura de la Formula (II):

imagen31

en donde

m es 2-6;

10 Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R1 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En aun otras realizaciones, el compuesto de la Formula (I) tiene la estructura de la Formula (III):

imagen32

en donde

m es 2-6;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

NRbC(=O)Ra;

20 En aun otras realizaciones, el compuesto de la Formula (I) tiene la estructura de la Formula (IV):

5

10

15

20

25

imagen33

en donde

n es 2-6;

NRbC(=O)Ra;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

En algunas realizaciones, Q es H, ORi, o SRi. En algunas realizaciones, Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4.

En algunas realizaciones, NR1R2, NR3P4, y NRbRc son cada uno independientemente un heterociclo seleccionado de

imagen34

en el que Rd es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, n-Bu, i-Bu, t-Bu, ChhCMea, Ph, ChhPh, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en donde R12 es alquilo, fenilo, o heterociclo; Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno, o alquilo (C1-C4), o Rb y Rc, junto con el atomo de nitrogeno al cual se adhieren, forman un anillo heterocfclico saturado o insaturado que contiene desde tres hasta siete atomos en el anillo, cuyo anillo puede contener opcionalmente otro heteroatomo 5 seleccionado del grupo que consiste de nitrogeno, oxfgeno y azufre y opcionalmente se puede sustituir por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, fenilo y bencilo; y p es 2-4.

En un aspecto, la presente invencion proporciona un compuesto seleccionado de los Ejemplos 1 a 55 como se describe en las Tablas 1 y 2. Los compuestos enumerados en las Tablas 1 y 2 son compuestos de purina representativos y no 10 limitantes de la invencion.

Tabla 1. Composiciones de purina seleccionadas, en las que R7=NR3R4

Ejemplo

No.

X

Q

R3

R4

R5

Ra

XX

imagen35

NH

-(CH2)2-

imagen36

imagen37

imagen38

NH

-(CH2)2-

CH3

XX

O

NH

-(CH2)2-

CH3

imagen39

O'

NH

-(CH2)2-

CH3

-(CH2)3-

O'

-(CH2)2-

CH3

XX

O'

NH

-(CH2)2-

CH3

imagen40

CH3

imagen41

imagen42

O

-(CH2)2-

imagen43

OH

XX

imagen44

NH

-(CH2)2-

imagen45

SH

Y

L

1

H

2

H

3

H

4

H

5

S

6

7

H

8

H

Ejemplo No.: X Q Y L R3 R4 R5 R6

9: XX cr NH -(CH2)2- 0 N NRsR4= 1 Br H

10: XX Jo NH -(CH2)2- 0 N nr3r1= 1 Cl H

11: -(CH2)4- Jo NH -(CH2)2- 0 N nr3r1= 1 SCH3 H

12: XX JO NH -(CH2)2- 0 N NR3Ri= 1 SO2CH3 H

13: XX JO NH -(CH2)2- 0 N NR3FU = 1 OCH3 H

14: XX NH -(CH2)2- CH3 CH3 OH cr

15: 7 rf' NH -(CH2)2- 0 N NR3FU = 1 H o0

16: XX \ o \ o _JL NH -(CH2)2- 0 N NRSFU = 1 CH3 H

17: xr \ o \ o NH -(CH2)3- 0 N NR3R4= 1 H CH3

18: ^jI'Xhi,c4jm(ch NH -(CH2)2- 0 N NRSFU = 1 H H

19: NH -(CH2)2- 0 N NR3FU = 1 H CH3

20: ^jI'Xhi,c4jm(ch NH -(CH2)2- CH3 CH3 H H

21: xxx ^,CH Ass NH -(CH2)3- CH3 CH3 H H

22: rfH1 NH -(CH2)3- CH3 CH3 CH3 CH3

23: JJ rrCHi NH -(CH2)3- CH3 CH3 H CH3

24: JJ r/CH5 S -(CH2)2- CH3 CH3 H H

Tabla 2. Composiciones adicionales de purina seleccionados de la Invencion

Ejemplo No.: X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

25: rf' XX O (CH2) 2- H H n-C4Hg

26: rf' jy u S (CH2) 3- ( nr3r4 = H H X

Ejemplo No.: X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

27: rr jy° NH (CH2) 2- H CH3 n-C4H9

28: rr,H NH (CH2) 5- CH3 CH3 H H NR3R4

29: NH (CH2) 2- CH3 CH3 H CH3 NR3R4

30: rr,H x ^ NH (CH2) 2- H H XX

31: ry” NH (CH2) 4- H n-C5Hn

32: 1/. NH (CH2) 2- CH2CH3 CH3 H H NR3R4

33: m. 11- is i;. NH (CH2) 2- CH3 CH3 CH3 CH3 NR3R4

34: I V S (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

35: xro.,.. NH (CH2) 3- CH3 CH3 H H NR3R4

36: rr NH (CH2) 4- c NRjRj = CH3 CH3 NR3R4

Ejemplo No.: X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

37: rf"' xr* NH (CH2)4- CH3 CH3 H £>

38: nr JXJ S (CH2)2- CH3 H T> H

39: XX N(CH3) (CH2)2- H H n N XH3

40: XO NH (CH2)2- CH3 CH3 / p H NR3R4

41: jO NH (CH2)2- CH3 CH3 o / H NR3R4

42: XT' NH (CH2)2- CH3 CH3 H NR3R4

43: XT NH (CH2)2- CH3 CH3 "st> H NR3R4

44: XLC„, NH (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

45: °X) NH (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

46: xy? NH (CH2) 2- ct N NR3R4= 1 H H NR3R4

47: xyS1 NH (CH2) 2- CH3 H H H NR3R4

Ejemplo No.: X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

48: J0 NCH3 (CH2) 3- CH2CH 3 CH2CH 3 YX W'S*, H NR3R4

49: Y"i NH (CH2) 2- P H H H NR3R4

Ejemplo No.: X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

50: ,0 NH -(CH2)3- r® H H H NR3R4

51: > NH -(CH2)2- r® H H H NR3R4

52: rr^ NH -(CH2)2- r® CH3 H H NR3R4

53: rO NH NCH3 -(CH2)2- CH3 H H H NR3R4

54: H2 |^n'c'ch5 XT® NH -(CH2)2- NRjRj = 9 H H NR3R4

55: O O NH -(CH2)2- NRjRa = 9 H Po^CH3 NR3R4

56: JO NH -(CH2)2- 0 N NR3R4 = OH 0 NR3R4

57

imagen46

NH

-(CH2)2-

imagen47

OH

imagen48

NR3R4

58

NH

-(CH2)2-

imagen49

OH

imagen50

NR3R4

59

imagen51

NH

-(CH2)2-

imagen52

imagen53

NR3R4

60

imagen54

NH

-(CH2)2-

imagen55

imagen56

NR3R4

61

imagen57

NH

-(CH2)2-

imagen58

imagen59

NR3R4

62

imagen60

NH

-(CH2)2-

imagen61

imagen62

NR3R4

63

imagen63

NH

-(CH2)2-

imagen64

OH

imagen65

NR3R4

H

En otro aspecto, la presente invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende por lo menos un compuesto de las formulas I, II, III, y IV como se describe aquf y un portador o diluyente farmaceuticamente aceptable.

5

10

15

20

25

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para tratar una enfermedad autoinmunitaria en una especie de mairnfero en necesidad de este, el metodo comprende administrar a la especie de mairnfero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

imagen66

en donde

es 2-4;

alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CFhjpORa, y (CFhjpNRbRc, en el que p es 2-4;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R1 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para tratar una enfermedad autoinmunitaria en una especie de mairnfero en necesidad de este, el metodo comprende administrar a la especie de mairnfero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula II,

Q es H, (CH2)qNR1R2, NR1(CH2)pNRbRc, OR1, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo,

imagen67

en donde

m es 2-6;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

NRbC(=O)Ra;

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc 20 junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para tratar una enfermedad autoinmunitaria en una especie de mamffero en necesidad de este, el metodo comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula III,

imagen68

en donde

m es 2-6;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

20 En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para tratar una enfermedad autoinmunitaria en una especie de mamffero en necesidad de este, el metodo comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula IV,

5

10

15

20

25

30

imagen69

en donde

n es 2-6;

NRbC(=O)Ra;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

En ciertas realizaciones, la composicion de purina esta en la forma de un hidrato o sal farmaceuticamente aceptable. La composicion de purina se puede administrar al sujeto por cualquier ruta de administracion adecuada, que incluye, sin limitacion, oral y parenteral. Las rutas parenterales de administracion son como se describio anteriormente con respecto a purinas amino 4-primarias sustituidas.

En ciertas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria se selecciona de lupus eritematoso cutaneo y sistemico, diabetes mellitus dependiente de insulina, artritis reumatoide, esclerosis multiple, aterosclerosis, psoriasis, artritis psoriasica, enfermedad inflamatoria del intestino, espondilitis anquilosante, anemia hemolftica autoinmunitaria, sfndrome de Behget, sfndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, sfndrome de Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, trombocitopenia idiopatica, io miastenia gravis, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, polimiositis/dermatomiositis, esclerosis biliar primaria, sarcoidosis, colangitis esclerosante, sfndrome de Sjogren, esclerosis sistemica (escleroderma y sfndrome de CREST), arteritis de Takayasu, arteritis temporal, y granulomatosis de Wegener.

En algunas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste de lupus eritematoso sistemico, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, sfndrome de Sjogren, polimiositis,

5

10

15

20

25

30

35

vasculitis, granulomatosis de Wegener, sarcoidosis, espondilitis anquilosante, sfndrome Reiter, artritis psoriasica, y sfndrome de Behyet. En una realizacion particular, la enfermedad autoinmunitaria es lupus eritematoso sistemico. En otra realizacion particular, la enfermedad autoinmunitaria es artritis reumatoide. En una realizacion particular la enfermedad autoinmunitaria es psoriasis. En aun otra realizacion particular, la enfermedad autoinmunitaria es sfndrome de Sjogren. En una realizacion, el sujeto es un humano. En una realizacion el trastorno autoinmunitario es una enfermedada asociada con complejo inmunitario, como se describio anteriormente.

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir inmunoestimulacion mediada por TLR en una especie de mamffero en necesidad de este, que comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

imagen70

en donde

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir inmunoestimulacion mediada por TLR en una especie de mamffero en necesidad de este, que comprende administrar a la especie de mamffero una cantidad terapeuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula II,

imagen71

en donde

m es 2-6;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

NRbC(=O)Ra;

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR, que comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula III,

imagen72

en donde

m es 2-6;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

20 En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR, que comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula IV,

5

10

15

20

25

imagen73

en donde

n es 2-6;

NRbC(=O)Ra;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde Ri es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

En algunas realizaciones, el metodo para afectar la inmunoestimulacion mediada por TLR en un sujeto comprende administrar a un sujeto que tiene o esta en riesgo de desarrollar inmunoestimulacion mediada por TLR una cantidad efectiva de un compuesto de las Formulas I-IV, como se proporciona aquf, para inhibir inmunoestimulacion mediada por TLR en el sujeto.

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR, que comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula I,

5

10

15

20

25

imagen74

en donde

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR, que comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de la Formula II,

imagen75

en donde

m es 2-6;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

NRbC(=O)Ra;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo;

y cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc 20 junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

imagen76

en donde

m es 2-6;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

5

10

15

20

25

30

imagen77

en donde

n es 2-6;

NRbC(=O)Ra;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

En algunas realizaciones, el metodo para inhibir senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR comprende poner en contacto una celula que expresa un TLR con una cantidad efectiva de un compuesto de las Formulas I-IV, como se proporciono anteriormente, para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR en respuesta a un ligando para el TLR.

En algunas realizaciones, el metodo para inhibir la senalizacion de inmunoestimulador mediada por TLR comprende poner en contacto una celula inmunitaria que expresa un TLR funcional con

(a) una cantidad efectiva de un agonista de senal de TLR para estimular la senalizacion por el TLR en ausencia de una composicion de purina, y

(b) una cantidad efectiva de una composicion de purina que tiene la Formula estructural I, II, III, o IV, como se describe aquf, para inhibir la senalizacion por el TLR en respuesta al agonista de senal de TLR

en comparacion con la senalizacion por el TLR en respuesta al agonista de senal de TLR en ausencia de la composicion

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

En algunas realizaciones especfficas, la composicion de purina utilizada para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR tiene una estructura de Formula IV. En algunas realizaciones especfficas, la composicion de purina esta en la forma de un hidrato o sal farmaceuticamente aceptable. En algunas realizaciones especfficas, el metodo para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR se realiza in vitro o in vivo.

En algunas realizaciones, el TLR es TLR9 y el agonista de senal de TLR es un agonista de la senal de TLR9. En estas realizaciones, el metodo es un metodo para inhibir la senalizacion intracelular por TLR9 en respuesta a un agonista de senal de TLR9. El agonista de senal de TLR en una realizacion es el ADN CpG, que puede ser un oligodesoxinucleotido (ODN). En algunas realizaciones, el ODN CpG es el ODN de 2006. En otras realizaciones, los ODN CpG pertenece a cualquier clase de ODN CpG, que incluyen una clase A (por ejemplo, ODN 2216), Clase B (por ejemplo, ODN 2006), o clase C (por ejemplo, ODN 2395).

En algunas realizaciones, en una realizacion, el agonista de senal de TLR es un complejo inmunitario que incluye un acido nucleico.

En algunas realizaciones, el metodo como se describe aquf es util para la alteracion de la senalizacion mediada por TLR. Los metodos se utilizan para alterar la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado o agonista de senalizacion de TLR. Por ejemplo, se pueden utilizar los metodos para tratar cualquier de la variedad de condiciones que implican autoinmunidad, inflamacion, alergia, asma, rechazo de injertos, enfermedad de injerto contra anfitrion (GvHD), infeccion, sepsis, cancer, y inmunodeficiencia. En general, los metodos utiles en el tratamiento de afecciones que implican autoinmunidad, inflamacion, alergia, asma, rechazo de injertos, y GvHD emplearan pequenas moleculas que aumentan la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado o agonista de senalizacion de TLR. En general, los metodos utiles en el tratamiento de afecciones que implican infeccion, cancer, e inmunodeficiencia emplearan pequenas moleculas que aumentan la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado. En algunas realizaciones, se utilizan metodos para inhibir o promover la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR o agonista de senalizacion de TLR. En algunas realizaciones, los metodos se utilizan para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR o agonista de senalizacion de TLR. En algunas realizaciones, los metodos se utilizan para inhibir o promover la inmunoestimulacion mediada por TLR en un sujeto. En algunas realizaciones, los metodos se utilizan para inhibir la inmunoestimulacion mediada por TLR en un sujeto. En algunas realizaciones, los metodos se utilizan para inhibir una respuesta asociada al acido nucleico inmunoestimulador en un sujeto.

En algunas realizaciones, el metodo util para alterar la senalizacion mediada por TLR utiliza composiciones de moleculas pequenas de compuestos de Formulas I-IV. Se utilizan las composiciones de la invencion para alterar la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado o agonista de la senalizacion de TLR. Por ejemplo, se pueden utilizar moleculas pequenas en metodos para el tratamiento de cualquiera de una variedad de afecciones que implican autoinmunidad, inflamacion, alergia, asma, rechazo de injerto, GvHD, infeccion, sepsis, cancer, e inmunodeficiencia. En general, los metodos utiles en el tratamiento de afecciones que implican autoinmunidad, inflamacion, alergia, asma, rechazo de injertos, y GvHD emplearan pequenas moleculas que inhiben la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado o agonista de senalizacion por TLR. En general, los metodos utiles en el tratamiento de afecciones que implican infeccion, cancer, e inmunodeficiencia emplearan pequenas moleculas que aumentan la senalizacion mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR adecuado. En algunos casos, se pueden utilizar las moleculas en un metodo para inhibir o promover senalizacion mediada por en respuesta a un ligando de TLR o agonista de senalizacion de TLR. En algunos casos, se pueden utilizar moleculas pequenas en un metodo para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR en respuesta a un ligando de TLR o agonista de senalizacion de TLR. En algunas realizaciones, se utilizan moleculas pequenas en un metodo para inhibir o promover la inmunoestimulacion mediada por TLR en un sujeto. En algunas realizaciones, se utilizan las moleculas pequenas en un metodo para inhibir la inmunoestimulacion mediada por TLR en un sujeto. En algunas realizaciones, se utilizan las moleculas pequenas para inhibir una respuesta asociada al acido nucleico inmunoestimulador en un sujeto.

Adicionalmente, los metodos como se describe aquf se pueden combinar con la administracion de agentes adicionales para lograr el efecto sinergico sobre la inmunoestimulacion mediada por TLR. Mas especfficamente, mientras que se han descubierto los agentes descritos aquf para afectar los TLR directamente y por lo tanto afectan directamente a las celulas que llevan TLR, por ejemplo, celulas que presentan antfgeno (APC), se pueden utilizar dichos agentes en conjunto con agentes adicionales que afectan celulas inmunes no APC, por ejemplo, linfocitos T (celulas T). Dicho metodo introduce efectivamente una intervencion inmunomoduladora en dos niveles: inmunidad innata e inmunidad adquirida. Dado que se considera que la inmunidad innata inicia y apoya la inmunidad adquirida, la intervencion de combinacion es sinergica.

En aun otro aspecto, se proporciona un metodo para inhibir una respuesta asociada al acido nucleico inmunoestimulador en un sujeto. El metodo comprende administrar a un sujeto en necesidad de dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de las Formulas I-IV, como se proporciono anteriormente, para inhibir una respuesta asociada al acido nucleico inmunoestimulador en el sujeto.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

En algunas realizaciones, el sujeto que se va a tratar con los compuestos de purina como se describe aquf tiene sfntomas que indican una enfermedad del sistema inmunitario. En otras realizaciones, el sujeto que esta siendo tratado con los compuestos de purina como se describe aquf esta libre de cualesquier sfntomas que indican una enfermedad del sistema inmunitario.

En algunas realizaciones, el TLR es TLR9. En algunas realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un acido nucleico inmunoestimulador. En otras realizaciones especfficas, el acido nucleico inmunoestimulador es un acido nucleico CpG. En todavfa otras realizaciones especfficas, el acido nucleico inmunoestimulador es un ADN que contiene complejo inmunitario.

En algunas realizaciones, el TLR es TLR8. En algunas realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un ligando natural para TLR8. En otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es ARN. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un acido nucleico inmunoestimulador. En todavfa otras realizaciones especfficas, el acido nucleico inmunoestimulador es un ARN que contiene el complejo inmunitario. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es una imidazoquinolina inmunoestimulante. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es resiquimod (R848).

En algunas realizaciones, el TLR es TLR7. En algunas realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un ligando natural para TLR7. En otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un acido nucleico inmunoestimulador. En una realizacion, el ligando para el TLR es un ARN. En todavfa otras realizaciones especfficas, el acido nucleico inmunoestimulador es un ARN que contiene el complejo inmunitario. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es una imidazoquinolina inmunoestimuladora. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es R848.

En algunas realizaciones, el TLR es TLR3. En algunas realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es un ARN de doble cadena. En otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es el complejo inmunitario como se describio aquf. En todavfa otras realizaciones especfficas, el ligando para el TLR es poli(I: C). En todavfa otras realizaciones especfficas, el TLR es TLR9 y el agonista de senal de TLR es un agonista de senal de TLR9. En todavfa otras realizaciones especfficas, el agonista de senal de TLR es ADN CpG, que puede ser un oligodesoxinucleotido (ODN).

En algunas realizaciones, el agonista de senal de TLR es un complejo inmunitario que comprende un acido nucleico.

En aun otro aspecto, se proporciona un metodo para inhibir una respuesta inmunitaria a una sustancia antigenica. El metodo comprende poner en contacto una celula inmunitaria que expresa un receptor tipo Toll funcional con:

(a) una cantidad efectiva de una sustancia antigenica para estimular una respuesta inmunitaria a la sustancia antigenica en ausencia de una composicion de purina, y

(b) una cantidad efectiva de una composicion de purina que tiene Formulas I-IV estructurales, como se definio anteriormente, para inhibir una respuesta inmunitaria a la sustancia antigenica en comparacion con la respuesta inmunitaria a la sustancia antigenica en ausencia de la composicion de purina.

En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria es una respuesta inmunitaria innata. En otras realizaciones, la respuesta inmunitaria incluye una respuesta inmunitaria adaptativa. En algunas realizaciones especfficas, la composicion de purina esta en la forma de un hidrato o sal farmaceuticamente aceptable. En algunas realizaciones especfficas, el metodo para inhibir una respuesta inmunitaria a una sustancia antigenica se realiza in vitro o in vivo.

En algunas realizaciones, la sustancia antigenica es un alergeno. En otras realizaciones, la sustancia antigenica es un antfgeno que es o se deriva de un agente microbiano, que incluye una bacteria, un virus, un hongo, o un parasito. En todavfa otras realizaciones, la sustancia antigenica es un antfgeno de cancer.

En ciertas realizaciones, el TLR funcional se expresa de forma natural por una celula. Ejemplos no limitantes de celulas que expresan TLR incluyen la estirpe celular RPMI 8226.

En una realizacion, la celula expresa de forma natural TLR funcional y es una celula aislada de la estirpe celular de mieloma multiple humano RPMI 8226 (ATCC CCL-155; American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA). Esta estirpe celular se establecio de la sangre periferica de un hombre de 61 anos de edad en el momento del diagnostico de mieloma multiple (IgG tipo lambda). Matsuoka Y et al. (1967) Proc Soc Exp Biol Med 125: 1246-1250. Se reporto previamente el RPMI 8226 como sensible a los acidos nucleicos con CpG como se evidencia por la induccion de protefna IL-6 y mARN IL-12p40. Takeshita F et al. (2000) Eur J Immunol 30: 108-16; Takeshita F et al. (2000) Eur J Immunol 30: 1967-76. Takeshita et al. utilizan la estirpe celular unicamente para estudiar construcciones del promotor con el fin de identificar sitios de union del factor de transcripcion importantes para la senalizacion de acido nucleico CpG vinculante. Ahora se sabe que las celulas RPMI 8226 segregan una serie de otras quimioquinas y citoquinas, que incluyen IL-8, IL-10 e IP-10 en respuesta a acidos nucleicos inmunoestimuladores. Debido a que esta estirpe celular

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

expresa TLR9, a traves de los cuales los acidos nucleicos inmunoestimuladores tales como por ejemplo acidos nucleicos CpG median sus efectos, es una estirpe celular adecuada para uso en los metodos de la invencion que se relacionan con los acidos nucleicos con CpG como compuestos de referencia y de prueba, asf como a otros ligandos de TLR9.

Similar a las celulas mononucleares de sangre periferica (PBMCs), se ha observado que la estirpe celular RPMI 8226 regula por disminucion su expresion de superficie celular de marcadores tales como CD71, CD86 y HLA-DR en respuesta a exposicion al acido nucleico de CpG. Esto se ha observado mediante analisis de citometrfa de flujo de la estirpe celular. De acuerdo con lo anterior, los metodos proporcionados aquf pueden ser estructurados para utilizar la expresion de marcadores de superficie celular seleccionados apropiadamente como una lectura, adicionalmente a o en lugar de quimioquina o la produccion de citoquinas u otras lecturas descritas aquf.

Tambien se ha encontrado que la estirpe celular RPMI 8226 responde a ciertas moleculas pequenas que incluyen compuestos de imidazoquinolina. Por ejemplo, la incubacion de celulas RPMI 8226 con el compuesto de imidazoquinolina R848 (resiquimod) induce la produccion de IL-8, IL-10, y IP-10. Recientemente se ha reportado que el R848 media sus efectos inmunoestimuladores a traves de TLR7 y TLR8. La capacidad de RPMI 8226 para responder a R848 sugiere que la estirpe celular RPMI 8226 tambien expresa TLR7, como se informo anteriormente para las celulas B humanas normales.

Se puede utilizar la estirpe celular RPMI en forma no modificada o en una forma modificada. En una realizacion, la celula RPMI 8226 se transfecta con una construccion indicadora. Preferiblemente, la celula se transfecta de forma estable con la construccion indicadora. La construccion indicadora incluye generalmente una senal promotora, una secuencia de codificacion y senal de poliadenilacion. La secuencia de codificacion puede incluir una secuencia indicadora seleccionada del grupo que consiste de una enzima (por ejemplo, luciferasa, fosfatasa alcalina, beta- galactosidasa, cloranfenicol acetiltransferasa (CAT), fosfatasa alcalina secretada, etc.), un marcador de bioluminiscencia (por ejemplo, protefna fluorescente verde (GFP, Patente Estadounidense No. 5,491,084), etc.), una molecula expresada en superficie (por ejemplo, CD25), una molecula secretada (por ejemplo, IL-8, IL-12 p40, TNF-a, etc.), y otros productos de protefna detectables conocidos por aquellos expertos en la tecnica. Preferiblemente, la secuencia de codificacion codifica una protefna que tiene un nivel o una actividad que es cuantificable.

En ciertas realizaciones, el TLR funcional se expresa artificialmente (que incluyen sobre-expresada) por una celula, por ejemplo, mediante introduccion en la celula de un vector de expresion que lleva una secuencia de codificacion para el TLR funcional en donde la secuencia de codificacion se liga operativamente a una secuencia de expresion genica. Como se utiliza aquf, se dice que una secuencia de codificacion y la secuencia de expresion genica se unen de forma operativa cuando se unen covalentemente de una manera tal como para colocar la expresion o transcripcion y/o traduccion de la secuencia de codificacion bajo la influencia o control del gen secuencia de expresion. Se dice que dos secuencias de ADN se unen operativamente si la induccion de un promotor en la secuencia de expresion de gene de 5' resulta en la transcripcion de la secuencia de codificacion y si la naturaleza del enlace entre las dos secuencias de ADN no (1) resulta en la introduccion de una mutacion de cambio de marco, (2) interfiere con la capacidad de la region promotora para dirigir la transcripcion de la secuencia de codificacion, o (3) interfiere con la capacidad del transcrito de ARN correspondiente se traduce en una protefna. Por lo tanto, una secuencia de expresion genica estarfa operativamente ligada a una secuencia de codificacion si la secuencia de expresion genica fuera capaz de efectuar la transcripcion de esa secuencia de codificacion de tal manera que el transcrito resultante se traduzca en la protefna o polipeptido deseado.

En algunas realizaciones, una secuencia de codificacion se refiere a una secuencia de acido nucleico que codifica para un TLR funcional. En algunas realizaciones, una secuencia de codificacion se refiere a una secuencia de acido nucleico que codifica para un indicador.

Una celula que expresa artificialmente un TLR funcional puede ser una celula que no expresa el TLR funcional pero para el vector de expresion de TLR. Por ejemplo, los fibroblastos 293 humanos (ATCC cRL-1573) no expresan TLR3, TLR7, TLR8 o TLR9. Como se describe en los ejemplos adelante, dichas celulas se pueden transfectar transitoria o establemente con el vector de expresion adecuado (o vectores) para dar celulas que expresan TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, o cualquier combinacion de los mismos. Alternativamente, una celula que expresa artificialmente un TLR funcional puede ser una celula que expresa el TLR funcional a un nivel significativamente mayor con el vector de expresion de TLR que lo hace sin el vector de expresion de TLR.

Para uso en los metodos de la presente invencion, una celula que expresa artificialmente un TLR funcional es preferiblemente una celula transfectada de forma estable que expresa el TLR funcional. Dicha celula tambien se puede transfectar de forma estable con una construccion indicadora adecuado.

Ensayos para Efectividad

Se pueden evaluar los metodos de la invencion utilizando cualquiera de una serie de posibles sistemas de lectura con

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

base en una ruta de transduccion de senales de TLR/IL-1R. En algunas realizaciones, la lectura para el metodo se basa en el uso de genes nativos o, alternativamente, transfectados o de otra manera introduce artificialmente construcciones de genes indicadores que son sensibles a la ruta de transduccion de senales de TLR/IL-1R que implica MyD88, TRAF, p38, y/o ERK. Hacker H et al. (1999) EMBO J 18: 6973-82. Estas rutas activan las quinasas incluyendo el de complejo quinasa kB y quinasas de terminal N c-Jun. De esta manera, los genes indicadores y el gen indicador construyen particularmente util para los ensayos incluyen, por ejemplo, un gen indicador asociado operativamente a un promotor sensible a NF-kB. Ejemplos de dichos promotores incluyen, sin limitacion, aquellos para NF-kB, IL-1p, IL-6, IL-8, IL-12 p40, IP-10, CD80, CD86, y TNF-a. El gen indicador operativamente unido al promotor sensible a TLR puede incluir, sin limitacion, una enzima (por ejemplo, luciferasa, fosfatasa alcalina, p-galactosidasa, cloranfenicol acetiltransferasa (CAT), etc.), un marcador de bioluminiscencia (por ejemplo, protefna fluorescente verde (GFP, por ejemplo, Patente Estadounidense No. 5,491,084), protefna fluorescente azul (BFP, por ejemplo, Patente Estadounidense No. 6,486,382), etc.), una molecula expresada en la superficie (por ejemplo, CD25, CD80, CD86), y una molecula secretada (por ejemplo, IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 p40, TNF-a). En ciertas realizaciones, el indicador se selecciona a partir de IL-8, TNF-a, NF-KB-luciferasa (NF-KB-luc; Hacker H et al (1999) EMBO J. 18: 6973-82), IL-12 p40- luc (Murphy TL et al. (1995) Mol Cell Biol 15: 5258-67), y TNF-luc (Hacker H et al (1999) EMBO J. 18: 6973-82). En los ensayos que dependen de la lectura de actividad enzimatica, el sustrato se puede suministrar como parte del ensayo, y la deteccion puede implicar la medicion de quimioluminiscencia, fluorescencia, desarrollo del color, la incorporacion de marcador radiactivo, resistencia a farmaco, u otro marcador de la actividad enzimatica. Para los ensayos que dependen de la expresion de superficie de una molecula, se puede realizar deteccion utilizando analisis de citometrfa de flujo (FACS) o ensayos funcionales. Las moleculas secretadas se pueden ensayar utilizando un ensayo de inmunoabsorcion ligado a enzimas (ELISA) o bioensayos. Muchos de estos y otros sistemas de lectura adecuados son bien conocidos en la tecnica y estan disponibles comercialmente.

Construcciones reportadas

Una celula que expresa un TLR funcional y util para los metodos de la invencion tiene, en algunas realizaciones, un vector de expresion que incluye un acido nucleico aislado que codifica una construccion indicadora util para detectar senalizacion de TLR. El vector de expresion que incluye un acido nucleico aislado que codifica una construccion indicadora util para detectar la senalizacion de TLR puede incluir un gen indicador bajo el control de un elemento de respuesta promotora (elemento potenciador). En algunas realizaciones, el elemento de respuesta promotor se asocia con un promotor mfnimo en respuesta a un factor de transcripcion por el solicitante cree que se va a activar como una consecuencia de la senalizacion de TLR. Ejemplos de dichos promotores mfnimos incluyen, sin limitacion, los promotores de los siguientes genes: AP-1, NF-kB, ATF2, IRF3, y IRF7. Estos promotores mfnimos contienen elementos de respuesta correspondientes promotores sensibles a la AP-1, NF-kB, ATF2, IRF3, y IRF7, respectivamente. En otras realizaciones, el vector de expresion que incluye un acido nucleico aislado que codifica una construccion indicadora util para detectar senalizacion de TLR puede incluir un gen bajo el control de un elemento de respuesta promotora seleccionada de los elementos de respuesta sensible a IL-6, IL-8, subunidad IL-12 p40, un IFN tipo I, RANTES, TNF, IP- 10, I-TAC, y el elemento de respuesta estimulada por interferon (ISRE). El elemento de respuesta promotora generalmente estara presente en multiples copias, por ejemplo, como repeticiones en tandem. Por ejemplo, en una construccion indicadora, la secuencia de codificacion para la luciferasa esta bajo el control de una repeticion en tandem 6X en direccion 5' de elemento de respuesta a NF-kB. En algunas realizaciones, una construccion indicadora de ISRE- luciferasa util en la invencion esta disponible de Stratagene (catalogo No. 219092) e incluye una repeticion en tandem 5x ISRE se unido a un cuadro TATA en direccion 5' de un gen indicador de luciferasa. Como se describe aquf, el indicador en sf mismo puede ser cualquier producto adecuado para la deteccion de genes por metodos reconocidos en la tecnica. Dichos metodos de deteccion pueden incluir, por ejemplo, la medicion de emision de luz espontanea o estimulada, actividad enzimatica, expresion de una molecula soluble, la expresion de una molecula de superficie celular, etc.

Las lecturas normalmente incluyen elementos usuales de senalizacion de Toll/IL-1 R, por ejemplo, moleculas MyD88, TRAF, e IRAK, aunque en el caso de TLR3 la funcion de MyD88 es menos clara que para los otros miembros de la familia TLR. Como se describe aquf, dichas respuestas incluyen la induccion de un gen bajo el control de un promotor especffico tal como un promotor de NF-kB, aumentos en los niveles de citoquinas particulares, aumento de los niveles de quimioquinas particulares, etc. El gen bajo el control del promotor NF-kB puede ser un gen que incluye naturalmente un promotor de NF-kB o puede ser un gen en una construccion en la que se ha insertado un promotor de NF-kB. Los genes y construcciones que incluyen el promotor de NF-kB incluyen, pero no se limitan a IL-8, IL-12 p40, NF-KB-luc, IL- 12 p40-luc, y TNF-luc.

Los aumentos en los niveles de citoquinas pueden resultar del aumento de la produccion, el aumento de estabilidad, aumento de la secrecion, o cualquier combinacion de los anteriores, de la citoquina en respuesta a la senalizacion mediada por TLR. Las citoquinas incluyen generalmente, sin limitacion, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IFN-a, IFN-p, IFN-y, TNF-a, GM-CSF, G-CSF, M-CSF. Las citoquinas Th1 incluyen, pero no se limitan a IL-2, IFN-y, y IL-12. Citoquinas Th2 incluyen, pero no se limitan a IL-4, IL-5, y IL-10.

Los aumentos en los niveles de quimioquinas puede ser resultado del aumento de la produccion, aumento de estabilidad, aumento de secrecion, o cualquier combinacion de los anteriores, de la quimioquina en respuesta a la

5

10

15

20

25

30

senalizacion mediada por TLR. Las quimioquinas de particular importancia en la invencion incluyen, pero no se limitan a CCL5 (RANTES), CXCL9 (Mig), CXCL10 (IP-10), y CXCL11 (I-TAC), IL-8 y MCP-1.

Abreviaturas

ACN Acetonitrilo

EA Acetato de etilo

DMF Dimetil formamida

PE Eter de petroleo

DCM Diclorometano

THF Tetrahidrofurano

HOBT 1-Hidroxibenzotriazol

EDCI 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

HBTU hexafluorofosfato de 2-(1H-Benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

HATU hexafluorofosfato de N-[(dimetilamino)(3H-1,2,3-triazolelo(4,4-b)piridin-3-iloxi)metileno]-N-metilmetanoaminio

PyBOP hexafluorofosfato de 1H-Benzotriazol-1 -iloxitripirrrolidinofosfonio

BOPCl cloruro de Bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosffnico

BOP hexafluorofosfato de Benzotriazol-1-iloxitris(dietilamino)fosfonio

TEA Trietilamina

DIPEA Diisopropiletilamina

DMAP 4-Dimetilaminopiridina

PCC clorocromato de piridinio

PDC Dicromato de piridinio

NBS N-bromosuccinimida

NCS N-clorosuccinimida

NIS N-yodosuccinimida

9-BBN 9-Borabiciclo[3.3.1]nonato

TsOH acido p-Toluenosulfonico

TFA Trifluoroacetamida

CDI carbonildiimidazol

Metodos de Preparacion

A continuacion se presentan esquemas de sfntesis generales para fabricar los compuestos de la presente invencion. Estos esquemas son ilustrativos y no pretenden limitar las posibles tecnicas de los expertos en la tecnica cualquier uso para la fabricacion de los compuestos descritos aquf. Seran evidentes diferentes metodos para aquellos expertos en la tecnica. Adicionalmente, las diversas etapas en la sfntesis se pueden realizar en una secuencia u orden alternativo para

dar el compuesto (s) deseado. Todos los documentos citados aquf se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Por ejemplo, las siguientes reacciones son ilustraciones pero no limitaciones de la preparacion de algunos de los materiales de partida y ejemplos utilizados aquf.

Los Esquemas 1-6 describen diversos metodos para la sfntesis de intermedios que se pueden utilizar para preparar 5 compuestos de la presente invencion. Se pueden prever diversas modificaciones a estos metodos por aquellos expertos en la tecnica para alcanzar los resultados similares a aquellos de los inventores adelante.

Se puede preparar el compuesto V' de purina como se muestra en el Esquema 1.

Esquema 1

imagen78

10 Etapa 1

La Amida I' puede experimentar la reaccion de condensacion con aldehfdo II', en la presencia de agentes de oxidacion tales como Cloranilo o bisulfito para dar hidroxilpurina III'. El solvente adecuado para esta reaccion incluye cloruro de metileno, Dimetilacetamida, DMF, metanol, y acetonitrilo.

Etapa 2

15 La reaccion de hidroxilpurina III' con agente de clorinacion tal como oxicloruro de fosforo o cloruro de tionilo proporciona cloropurina IV'. El solvente adecuado para esta reaccion incluye cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Etapa 3

La reaccion de cloropurina IV' con HYLR7 nucleofilo proporciona el compuesto de Purina V'. El solvente adecuado para esta reaccion incluye cloruro de metileno, acetonitrilo, cloroformo, butanol, isopropilo alcohol, y tetrahidrofurano.

20 Se pueden preparar los compuestos de Purina IX' y X' como se muestra en el Esquema 2.

Esquema 2

imagen79

Etapa 1

Se puede hacer reaccionar dicloropurina VI' con RaBr electrofilo para dar dicloropurina N-R6 VII', en la presencia de una base tal como trietilamina, fluoruro de tetrabutilamonio, y diisopropiletilamina. Otros electrofilos adecuados incluyen 5 RaCl, Rai, RaOTf, y RaOTs. En general, se pueden utilizar aquf RaOLG donde LG es un buen grupo saliente. Los

solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Etapa 2

La reaccion de dicloropurina VII' con HYLR7 nucleofilo, en la presencia de una base tal como K2CO3, trietilamina, o diisopropiletilamina, proporciona purina VIII'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloruro de metileno, 10 acetonitrilo, acetona, cloroformo, tolueno, y tetrahidrofurano.

Etapas 3 y 4

La reaccion de purina VIII' con QH o QB(OH)2 nucleofilo proporciona purina IX'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloruro de metileno, acetonitrilo, tolueno, y tetrahidrofurano. Alternativamente, la reaccion de purina VIII' con QXB(OH)2, en la presencia de catalizador tal como Pd(0), proporciona compuesto de purina X'.

15 Se pueden preparar los compuestos de purina XIV' y XV' como se muestra en el Esquema 3.

Esquema 3

5

10

15

20

25

imagen80

Etapa 1

Se puede preparar dicloro-nitropirimidina XI' con nucleofilos R7L1NH2 y R7al_2YH secuencialmente para dar pirimidina XII' sustituida, en la presencia de base tal como trietilamina y diisopropiletilamina. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloruro de metileno, acetonitrilo, cloroformo, y tetrahidrofurano. R7 y R7a son cada uno independientemente H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1- C4); L1 y L2 son cada uno independientemente alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono; en donde ese R7L1 de compuestos de purina XlV' y XXVII' es alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo y ese R7aL2 de compuesto de purina XV es alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo.

Etapa 2

La reduccion de pirimidina XII' sustituida utilizando el agente de reduccion tal como H2, hidrosulfito, o SnCh, proporciona amino pirimidina XIII'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen acetonitrilo, etanol, metanol, y tetrahidrofurano.

Etapa 3

En el caso de que Y no sea nitrogeno, la condensacion de amino pirimidina XIII' con nucleofilo que lleva R5 en la presencia de una base tal como trietilamina y diisopropiletilamina proporciona purina XIV'. Los nucleofilos incluyen R5COCL El R5CHO tambien se puede utilizar como nucleofilo seguido por oxidacion utilizando oxidante tal como cloranilo o yodo. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloruro de metileno, acetonitrilo, cloroformo, y tetrahidrofurano.

Etapa 4

En el caso de que Y sea nitrogeno y R7L1 y R7aL2 no se an los mismos, la condensacion de amino pirimidina XIII' con nucleofilo que lleva R5 en la presencia de una base tal como trietilamina y diisopropiletilamina proporciona una mezcla de compuestos de purina XXVII' y XV'. Los nucleofilos adecuados incluyen R5COCL El R5CHO tambien se puede utilizar como nucleofilo seguido por oxidacion utilizando oxidante tal como cloranilo o yodo. Los solventes adecuados para esta

Se pueden preparar los compuestos de Purina XXV y XXVI' como se muestra en el Esquema 4. Esquema 4

5

imagen81

La reaccion de dihidroxi-pirimidina XVI' con bencenodiazonio proporciona diazeno XVII'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen agua y acetona acuosa.

Etapa 2

La clorinacion de diazeno XVII' con agentes de clorinacion tal como oxicloruro de fosforo o cloruro de tionilo proporciona 10 dicloropirimidina fenildiazeno XVIII'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen metileno Cloroformo, tolueno.

Etapa 3

La reaccion de dicloropirimidina fenildiazeno XVIII' con nucleofilos R7L1NH2 y R7aL2NH2 proporciona secuencialmente pirimidina fenildiazeno XIX' sustituido. R7 y R7a son cada uno independientemente H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4); Li y L2 son cada uno independientemente alquilo o 15 alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono; siempre que el R7L1 del compuesto de purina XXVI' sea alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo y ese R7aL2 de compuesto de purina XXV' sea alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo.

Etapa 4

La reduccion de pirimidina fenildiazeno XIX' sustituido con hidrogeno o hidrosulfito proporciona aminopirimidina XX'. Los

5

10

15

20

25

30

Etapa 5

La condensacion de amino pirimidina XX' con nucleofilo que lleva R5 en la presencia de una base tal como trietilamina y diisopropiletilamina proporciona una mezcla de compuestos de purina XXI' y XXII'. Los nucleofilos adecuados incluyen R5COCL El R5CHO tambien se puede utilizar como nucleofilo seguido por oxidacion utilizando oxidante tal como cloranilo o yodo. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloroformo, cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Etapa 6

La oxidacion de compuestos de purina XXI' y XXII' utilizando agentes de oxidacion proporciona compuestos de metilsulfonil purina XXIII' y XXIV'. Los agentes de oxidacion adecuados incluyen peracidos, permanganato, y peroxido de hidrogeno.

Etapa 7

La reaccion de compuestos de metilsulfonil purina XXIII' y XXIV' con nucleofilo QXH proporciona una mezcla de compuestos de puridina XXV' y XXVI'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloroformo, etanol, cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Se pueden preparar compuestos de Purina XXXII' como se muestra en el Esquema 5.

Esquema 5

imagen82

La reaccion de dihidroxi-pirimidina XXXV' con bencenodiazonio proporciona diazeno XXVIII'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen agua y acetona acuosa.

Etapa 2

La clorinacion de diazeno XXVIII' con agentes de clorinacion tales como oxicloruro de fosforo o cloruro de tionilo proporciona dicloropirimidina fenildiazeno XXIX'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen metileno cloroformo, tolueno.

Etapa 3

La reaccion de dicloropirimidina fenildiazeno XXIX' con nucleofilos R7L1NH2 y R7aL2NH2 proporciona secuencialmente pirimidina fenildiazeno XXX' disustituido. R7 y R7a pueden ser los mismos o diferentes y son cada uno independientemente H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (Ci- C4); Li y L2 son cada uno independientemente alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono; siempre que R7L1 del compuesto de purina XXX' sea alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo y que R7aL2 del compuesto de purina xXx' sea alquilo, alquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo, o alquilheterociclo.

Etapa 4

La reduccion de pirimidina fenildiazeno XXX' disustituido con hidrogeno, formato de amonio, Na2S2O4, o hidrosulfito proporciona aminopirimidina XXXI'. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen tetrahidrofurano, etanol, metanol, y agua.

5 Etapa 5

La condensacion de amino pirimidina XXXI' con nucleofilo que lleva R5 o un precursor del mismo proporciona compuestos XXXII'. Se pueden utilizar bases para esta reaccion. Las bases adecuadas incluyen trietilamina y diisopropiletilamina. Los nucleofilos adecuados incluyen R5COCl, trimetilortoformato (en donde R5 es H), o carbonildiimidazol (en donde R5 es OH). R5CHO tambien se puede utilizar como nucleofilo seguido por oxidacion 10 utilizando oxidante tal como cloranilo o yodo. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloroformo, cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Se pueden preparr compuestos de Purina XXXIV' como se muestra en el Esquema 6.

Esquema 6

imagen83

15 Etapa 1

La ciclizacion de amino pirimidina XXXIII' proporciona compuestos XXXIV'. Se pueden utilizar bases para esta reaccion. Las bases adecuadas incluyen trietilamina y diisopropiletilamina. Se puede utilizar trimetilorthoformato en esta reaccion. Los solventes adecuados para esta reaccion incluyen cloroformo, cloruro de metileno, acetonitrilo, y tetrahidrofurano.

Adicionalmente, se pueden preparar otros compuestos de las formulas I-IV mediante los procedimientos conocidos en 20 general por aquellos expertos en la tecnica. En particular, los siguientes ejemplos proporcionan metodos adicionales para preparar los compuestos de esta invencion.

La invencion se describira ahora adicionalmente mediante los ejemplos de trabajo como adelante, que son realizaciones preferidas de la invencion. Estos ejemplos se ilustran en lugar de limitar, y se debe entender que pueden existir otras realizaciones que caen dentro del espfritu y alcance de la invencion como se define por las reivindicaciones adjuntas a 25 esta.

Composiciones Farmaceuticas

Esta invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende por lo menos uno de los compuestos como se describe aquf o una sal farmaceuticamente aceptable o solvato del mismo, y un portador farmaceuticamente aceptable.

30 En aun otro aspecto, se describe una composicion farmaceutica que comprende por lo menos un compuesto de la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmaceuticamente aceptable,

imagen84

en donde

5 R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

10 R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

15 R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o

NRbC(=O)Ra;

20 cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo;

y cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.

25 La frase "portador farmaceuticamente aceptable" como se utiliza aquf significa un material, composicion o vehfculo farmaceuticamente aceptable, tal como un relleno lfquido o solido, diluyente, excipiente, disolvente o material

encapsulante, implicado en llevar o transportar el agente farmaceutico objeto desde un organo, o porcion del cuerpo, hasta otro organo, o porcion del cuerpo. Cada portador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulacion y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir 30 como portadores farmaceuticamente aceptables incluyen: azucares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidon de mafz y almidon de papa; celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de cartamo, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja; glicoles, tales como butilenglicol; polioles, tales como 35 glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; esteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes de regulacion, tales como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; acido algfnico; agua libre de pirogenos; solucion salina isotonica; solucion de Ringer; alcohol etflico; soluciones reguladoras de fosfato; y otras sustancias compatibles no

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

toxicas empleadas en formulaciones farmaceuticas. El termino "portador" denota un ingrediente organico o inorganico, natural o sintetico, con el que se combina el ingrediente activo para facilitar la aplicacion. Los componentes de las composiciones farmaceuticas tambien son capaces de ser mezclados con los compuestos de la presente invencion, y entre si, de tal manera que no existe interaccion que perjudique sustancialmente la eficiencia farmaceutica deseada.

Como se ha indicado anteriormente, ciertas realizaciones de los presentes agentes farmaceuticos se proporcionar en forma de sales farmaceuticamente aceptables. El termino "sal farmaceuticamente aceptable", a este respecto, se refiere a las sales de adicion de acido relativamente no toxicas, inorganicas y organicas de compuestos de la presente invencion. Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y purificacion final de los compuestos de la invencion, o al hacer reaccionar por separado un compuesto purificado de la invencion en su forma de base libre con un acido organico o inorganico adecuado, y aislar la sal asf formada. Las sales representativas incluyen sales de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato, y laurilsulfonato y similares. (Vease, por ejemplo, Berge et al., (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19)

Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos objeto incluyen las sales convencionales no toxicas o sales de amonio cuaternario de los compuestos, por ejemplo, de acidos organicos o inorganicos no toxicos. Por ejemplo, dichas sales no toxicas convencionales incluyen aquellas derivadas de acidos inorganicos tales como clorhfdrico, bromhfdrico, sulfurico, sulfamico, fosforico, nftrico, y similares; y las sales preparadas a partir de acidos organicos tales como acetico, butionic, succfnico, glicolico, estearico, lactico, malico, tartarico, cftrico, ascorbico, palmftico, maleico, hidroximaleico, fenilacetico, glutamico, benzoico, salicflico, sulfanflico, 2-acetoxibenzoico, fumarico, toluenosulfonico, metanosulfonico, etano disulfonico, oxalico, isotionico, y similares.

En otros casos, los compuestos de la presente invencion pueden contener uno o mas grupos funcionales acidos y, por tanto, son capaces de formar sales farmaceuticamente aceptables con bases farmaceuticamente aceptables. El termino "sales farmaceuticamente aceptables" en estos casos se refiere a las sales de adicion de base relativamente no toxicas, inorganicas y organicas de compuestos de la presente invencion. Asimismo se pueden preparar estas sales in situ durante el aislamiento y purificacion final de los compuestos, o al hacer reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de acido libre con una base adecuada, tal como hidroxido, carbonato o bicarbonato de un cation metalico farmaceuticamente aceptable, con amonfaco, o con una amina primario, secundaria o terciaria organica farmaceuticamente aceptable. Las sales alcalinas o alcalinoterreas representativas incluyen sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, y aluminio y similares. Las aminas organicas representativas utiles para la formacion de sales de adicion de bases incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina y similares. (Vease, por ejemplo, Berge et al., Supra).

Tambien pueden estar presentes agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como lauril sulfato de sodio, estearato de magnesio, y copolfmero de oxido de butileno - oxido de polietileno, asf como agentes colorantes, agentes de liberacion, agentes de recubrimiento, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes en las composiciones.

Las formulaciones de la presente invencion incluyen aquellas adecuadas para administracion oral, nasal, topica (que incluyen bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificacion unitaria y se pueden preparar por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para dar una forma de dosificacion unica variara dependiendo del anfitrion que se esta tratando, el modo particular de administracion. La cantidad de ingrediente activo, que se puede combinar con un material portador para dar una unica forma de dosificacion generalmente sera aquella cantidad del compuesto que produce un efecto terapeutico. En general, de 100%, esta cantidad variara de aproximadamente 1% a aproximadamente 99% de ingrediente activo, preferiblemente de aproximadamente 5% a aproximadamente 70%, mas preferiblemente de aproximadamente 10% a aproximadamente 30%.

Los metodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de poner en asociacion un compuesto de la presente invencion con el portador y, opcionalmente, uno o mas ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan al poner uniforme e fntimamente en asociacion un compuesto de la presente invencion con portadores lfquidos o portadores solidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, dar forma al producto.

Las formulaciones de la invencion adecuadas para administracion oral pueden estar en forma de capsulas, sellos, pfldoras, comprimidos, pastillas (que utilizan una base aromatizada, normalmente sacarosa y goma arabiga o tragacanto), polvos, granulos, o como una solucion o una suspension en un lfquido acuoso o no acuoso, o como una emulsion lfquida aceite en agua o agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (que utilizan una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) y/o como enjuagues bucales y similares, que contiene cada uno una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invencion como ingrediente activo. Un compuesto de la presente invencion tambien se puede administrar como un bolo, electuario o pasta.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

En las formas de dosificacion solidas de la invencion para administracion oral (capsulas, comprimidos, pfldoras, grageas, polvos, granulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o mas portadores farmaceuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato de dicalcio, y/o cualquiera de los siguientes: rellenos o extendedores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y/o acido silfcico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidon de papa o tapioca, acido algfnico, ciertos sflicetos, carbonato de sodio, y glicolato de almidon sodio; solucion de agentes de retardo, tales como parafina; aceleradores de absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetflico, monoestearato de glicerol, y copolfmero de oxido de butileno- oxido de polietileno; absorbentes, tales como caolfn y arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, lauril sulfato de sodio, y sus mezclas; y agentes colorantes. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, las composiciones farmaceuticas tambien pueden comprender agentes de regulacion. Tambien se pueden emplear composiciones solidas de un tipo similar como rellenos en capsulas de gelatina llenas blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azucares de leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

Se puede fabricar un comprimido mediante compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes accesorios. Se pueden preparar tabletas comprimidas utilizando aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxibutilmetil celulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, desintegrante (por ejemplo, glicolato de almidon sodio o carboximetil celulosa de sodio entrecruzada), agente de superficie activa o agente dispersante. Los comprimidos moldeados, pueden ser, elaborados mediante moldeo en una maquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente lfquido inerte.

Los comprimidos, y otras formas de dosificacion solidas de las composiciones farmaceuticas de la presente invencion, tales como grageas, capsulas, pfldoras y granulos, opcionalmente se pueden calsificar o preparar con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entericos y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de formulacion farmaceutica. Tambien se pueden formular de tal manera que proporcionen una liberacion lenta o controlada del ingrediente activo allf utilizando, por ejemplo, hidroxibutilmetil celulosa en diferentes porciones para proporcionar el perfil de liberacion deseado, otras matrices polimericas, liposomas y/o microesferas. Se pueden esterilizar mediante, por ejemplo, filtracion a traves de un filtro de retencion de bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles, que se pueden disolver en agua esteril, o algun otro medio inyectable esteril inmediatamente antes de uso. Estas composiciones tambien pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composicion tal que liberen solo el ingrediente activo (s), o preferentemente, en una cierta porcion del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una manera retardada. Ejemplos de composiciones de inclusion que se pueden utilizar incluyen sustancias polimericas y ceras. El ingrediente activo tambien puede estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o mas de los excipientes descritos anteriormente.

Las formas de dosificacion lfquidas para administracion oral de los compuestos de la invencion incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elfxires farmaceuticamente aceptables. Ademas del ingrediente activo, las formas de dosificacion lfquidas pueden contener diluyentes inertes comunmente utilizados en la tecnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etflico, alcohol de isobutilo, carbonato de etilo, acetato de etilo , alcohol bencflico, benzoato de bencilo, butilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceite de semilla de algodon, cacahuete, mafz, germen, oliva, ricino y sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitan, y mezclas de los mismos. Adicionalmente, ciclodextrinas, por ejemplo, se puede utilizar hidroxibutil-beta-ciclodextrina, para solubilizar compuestos.

Ademas de los diluyentes inertes, las composiciones orales tambien pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspension, edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y agentes conservantes.

Las suspensiones, ademas de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspension como, por ejemplo, alcoholes etoxilados de isoestearilo, sorbitol de polioxietileno y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina, metahidroxido de aluminio, bentonita, agar - agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las formulaciones de las composiciones farmaceuticas de la invencion para administracion rectal o vaginal se pueden presentar como un supositorio, que se puede preparar al mezclar uno o mas compuestos de la invencion con uno o mas excipientes adecuados no irritantes o portadores que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera de supositorio o un salicilato, y que es solido a temperatura ambiente, pero lfquido a la temperatura corporal y, por lo tanto, se fundira en el recto o cavidad vaginal y liberara los agentes farmaceuticos activos de la invencion.

Las formulaciones de la presente invencion que son adecuadas para administracion vaginal tambien incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverizacion que contienen dichos portadores como son conocidos en la tecnica por ser apropiados.

Las formas de dosificacion para administracion topica o transdermica de un compuesto de esta invencion incluyen

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

polvos, pulverizadores, unguentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo se puede mezclar en condiciones esteriles con un portador farmaceuticamente aceptable, y con cualquier conservante, regulador, o propulsor que pueda ser necesario.

Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden contener, adicionalmente un compuesto activo de esta invencion, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidon, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, acido silfcico, talco y oxido de zinc, o mezclas de los mismos.

Los polvos y pulverizaciones pueden contener, ademas de un compuesto de esta invencion, excipientes tales como lactosa, talco, acido silfcico, hidroxido de aluminio, sflicetos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Las pulverizaciones pueden contener adicionalmente propulsores habituales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volatiles no sustituidos, tales como butano y butano.

Los parches transdermicos tienen la ventaja agregada de proporcionar suministro controlado de un compuesto de la presente invencion al cuerpo. Dichas formas de dosificacion se pueden hacer al disolver, o dispersar los agentes farmaceuticos en el medio regulador. Tambien se pueden utilizar potenciadores de absorcion para aumentar el flujo de los agentes farmaceuticos de la invencion a traves de la piel. La tasa de dicho flujo se puede controlar, ya sea al proporcionar una membrana controladora de velocidad o dispersar el compuesto en una matriz polimerica o gel.

Las formulaciones oftalmicas, pomadas oculares, polvos, soluciones y similares, tambien se contemplan como dentro del alcance de esta invencion.

Las composiciones farmaceuticas de esta invencion adecuadas para administracion parenteral comprenden uno o mas compuestos de la invencion en combinacion con una o mas soluciones acuosas o no acuosas isotonicas farmaceuticamente aceptables esteriles, dispersiones, suspensiones o emulsiones, o polvos esteriles que se pueden reconstituir en soluciones o dispersiones esteriles inyectables justo antes de uso, que pueden contener antioxidantes, reguladores, bacteriostaticos, solutos que hacen la formulacion isotonica con la sangre del receptor deseado o agentes de suspension o espesantes.

En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto de un farmaco, es deseable ralentizar la absorcion del farmaco desde la inyeccion subcutanea o intramuscular. Esto se puede lograr por el uso de una suspension lfquida de material cristalino o amorfo que tiene poca solubilidad en agua. La tasa de absorcion del farmaco depende entonces de su tasa de disolucion, que, a su vez, puede depender del tamano del cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorcion retardada de una forma de farmaco administrada parenteralmente se logra al disolver o suspender el farmaco en un vehfculo oleoso. Una estrategia para inyecciones de deposito incluye el uso de copolfmeros de oxido de polibutileno - oxido de polietileno en donde el vehfculo es lfquido a temperatura ambiente y se solidifica a temperatura corporal.

Las formas de deposito inyectables se preparan al formar matrices microencapsuladas de los compuestos objeto en polfmeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolido. Dependiendo de la relacion de farmaco a polfmero y la naturaleza del polfmero particular empleado, se puede controlar la tasa de liberacion del farmaco. Ejemplos de otros polfmeros biodegradables incluyen poli(ortoesteres) y poli(anhfdridos). Las formulaciones inyectables de deposito tambien se preparan al atrapar el farmaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con el tejido corporal.

Cuando los compuestos de la presente invencion se administran como productos farmaceuticos, a humanos y animales, se pueden proiporcionar per se o como una composicion farmaceutica que contiene, por ejemplo, 0.1% a 99.5% (mas preferiblemente, 0.5% a 90%) de ingrediente activo en combinacion con un portador farmaceuticamente aceptable.

Se pueden emplear los compuestos y composiciones farmaceuticas de la presente invencion en terapias de combinacion, es decir, los compuestos y composiciones farmaceuticas se pueden administrar simultaneamente con, antes de, o posteriormente a, uno o mas de otros agentes terapeuticos o procedimientos medicos deseados. La combinacion particular de terapias (agentes terapeuticos o procedimientos) a emplear en un regimen de combinacion tendra en cuenta la compatibilidad de los agentes terapeuticos deseados y/o procedimientos y el efecto terapeutico deseado que se va a alcanzar. Se apreciara tambien que las terapias empleadas pueden lograr un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, el compuesto de la presente invencion se puede administrar simultaneamente con otro agente anti-inflamatorio o immunosupresor); tales como, pero no limitado a los NSAIDS, DMARDS, esteroides, o biologicos, tales como terapias de anticuerpos) o pueden conseguir diferentes efectos (por ejemplo, control de cualesquier efectos adversos).

Se pueden administrar los compuestos de la invencion por via intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutanea, topica, oral, o por otros medios aceptables. Los compuestos se pueden utiliza rpara tratar afecciones artrfticas en los mamfferos (es decir, humanos, animales de granja, y animales domesticos), aves, lagartos, y cualquier otro organismo, que pueda tolerar los compuestos.

La invencion tambien proporciona un paquete o equipo farmaceutico que comprende uno o mas recipientes llenos con

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

uno o mas de los ingredientes de las composiciones farmaceuticas de la invencion. Opcionalmente asociado a dicho contenedor (s) puede haber una nota en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricacion, uso o venta de productos farmaceuticos o biologicos, cuya nota refleja la aprobacion por la agencia de la fabricacion, uso o venta para administracion humana.

Administracion a un sujeto

Algunos aspectos de la invencion implican administrar una cantidad efectiva de una composicion a un sujeto para conseguir un resultado especffico. Por lo tanto se pueden formular composiciones de molecula pequena utiles de acuerdo con los metodos de la presente invencion en cualquier forma adecuada para uso farmaceutico.

Las formulaciones de la invencion se administran en soluciones farmaceuticamente aceptables, que pueden contener rutinariamente concentraciones farmaceuticamente aceptables de sal, agentes reguladores, conservantes, portadores compatibles, adyuvantes, y opcionalmente otros ingredientes terapeuticos.

Para uso en terapia, una cantidad efectiva del compuesto se puede administrar a un sujeto por cualquier modo que permite que el compuesto sea absorbido por las celulas objetivo apropiadas. "Administrar" la composicion farmaceutica de la presente invencion se puede lograr mediante cualquier medio conocido por el experto comun en la tecnica. Las rutas especfficas de administracion incluyen pero no se limitan a oral, transdermica (por ejemplo, mediante un parche), inyeccion parenteral (subcutanea, intradermica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, intratecal, etc.), o de mucosa (intranasal, intratraqueal, inhalacion, intrarrectal, intravaginal, etc.). Una inyeccion puede ser en un bolo o una infusion continua.

Por ejemplo, las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la invencion a menudo se administran por via intravenosa, intramuscular, o por otros medios parenterales, o por aplicacion de “pistola de gen” biolfstica a la epidermis. Tambien se pueden administrar mediante aplicacion intranasal, inhalacion, por via topica, por via oral, o como implantes, e incluso es posible el uso rectal o vaginal. Las formas de preparacion farmaceutica lfquidas o solidas adecuadas son, por ejemplo, soluciones acuosas o salinas para inyeccion o inhalacion, microencapsuladas, encocleadas, recubiertas sobre partfculas de oro microscopicas, contenidas en liposomas, nebulizados, aerosoles, granulos para implante en la piel, o se secan sobre un objeto afilado con el que se va a rascar piel. Las composiciones farmaceuticas tambien incluyen granulos, polvos, comprimidos, comprimidos recubiertos, (micro)capsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, cremas, gotas o preparaciones con liberacion prolongada de compuestos activos, en cuya preparacion se utilizan habitualmente excipientes y aditivos y/o auxiliares tales como disgregantes, aglutinantes, agentes de recubrimiento, agentes de hinchamiento, lubricantes, aromatizantes, edulcorantes o solubilizantes como se describio anteriormente. Las composiciones farmaceuticas son adecuadas para uso en una variedad de sistemas de suministro de farmacos. Para una breve revision de los metodos actuales para administracion de farmacos, vease Langer R (1990) Science 249: 1527-1533.

La concentracion de compuestos incluidos en las composiciones utilizadas en los metodos de la invencion puede variar desde aproximadamente 1 nM hasta aproximadamente 100 pM. Se considera que las dosis efectivas varfan desde aproximadamente 10 picomoles/kg a aproximadamente 100 micromol/kg.

Las composiciones farmaceuticas preferiblemente se preparan y se administran en unidades de dosis. Las unidades de dosis lfquidas son frascos o ampollas para inyeccion u otra administracion parenteral. Las unidades de dosis solidas son comprimidos, capsulas, polvos y supositorios. Para el tratamiento de un paciente, dependiendo de la actividad del compuesto, manera de administracion, proposito de administracion (es decir, profilactica o terapeutica), naturaleza y gravedad del trastorno, edad y peso corporal del paciente, pueden ser necesarias diferentes dosis. La administracion de una dosis dada se puede llevar a cabo mediante administracion unica en forma de una unidad de dosis individual o ademas varias unidades de dosis mas pequenas. Tambien se contempla la administracion repetida y de multiples dosis a intervalos especfficos de dfas, semanas o meses de diferencia por la invencion.

Las composiciones se pueden administrar per se (puras) o en forma de una sal farmaceuticamente aceptable. Cuando se utiliza en medicina, las sales deben ser farmaceuticamente aceptables, pero se pueden utilizar sales no farmaceuticamente aceptables convenientemente para preparar sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Dichas sales incluyen, pero no se limitan a, aquellas preparadas a partir de los siguientes acidos: clorhfdrico, bromhfdrico, sulfurico, nftrico, fosforico, maleico, acetico, salicflico, p-tolueno sulfonico, tartarico, cftrico, metanosulfonico, formico, malonico, succfnico, naftaleno-2-sulfonico, y bencenosulfonico. Tambien, dichas sales se pueden preparar como sales de metales alcalinoterreos o alcalinos, tales como sales de sodio, potasio o calcio del grupo de acido carboxflico.

Los agentes reguladores adecuados incluyen: acido acetico y una sal (1-2% p/v); acido cftrico y una sal (1-3% p/v); acido borico y una sal (0.5 a 2.5% p/v); y acido fosforico y una sal (0.8 a 2% p/v). Los conservantes adecuados incluyen cloruro de benzalconio (0.003 hasta 0.03% p/v); clorobutanol (0.3 a 0.9% p/v); parabenos (0.01 a 0.25% p/v) y timerosal (0.004 a 0.02% p/v).

5

10

15

20

25

30

35

40

Las composiciones adecuadas para administracion parenteral incluyen convenientemente preparaciones acuosas esteriles, que pueden ser isotonicas con la sangre del receptor. Entre los vehfculos y disolventes aceptables estan agua, solucion de Ringer, solucion salina regulada con fosfato, y solucion isotonica de cloruro de sodio. Ademas, los aceites fijos, esteriles son convencionalmente empleados como medio disolvente o de suspension. Para este proposito se puede emplear cualquier mineral fijo blando o aceites no minerales que incluyen mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, los acidos grasos tales como acido oleico encuentran uso en la preparacion de inyectables. Las formulaciones portadoras adecuadas para administracion subcutanea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, etc. se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA.

Los compuestos utiles en la invencion se pueden suministrar en mezclas de mas de dos de dichos compuestos. Una mezcla puede incluir adicionalmente uno o mas adyuvantes, ademas de la combinacion de compuestos.

Una variedad de rutas de administracion esta disponible. El modo particular seleccionado dependera, por supuesto, del compuesto particular seleccionado, edad y estado de salud general del sujeto, la afeccion particular que se va a tratar, y la dosificacion requerida para la eficacia terapeutica. Los metodos de esta invencion, generalmente hablando, se pueden practicar utilizando cualquier modo de administracion que sea medicamente aceptable, lo que significa cualquier modo que produzca niveles de respuesta efectivos sin provocar efectos adversos clmicamente inaceptables. Los modos de administracion preferidos se discutieron anteriormente.

Las composiciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificacion unitaria y se pueden preparar por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de farmacia. Todos los metodos incluyen la etapa de poner los compuestos en asociacion con un portador que constituye uno o mas ingredientes accesorios. En general, las composiciones se preparan al asociar uniforme e mtimamente los compuestos en asociacion con un portador lfquido, un portador solido finamente dividido, o ambos, y luego, si es necesario, dar forma al producto.

Otros sistemas de administracion pueden incluir sistemas de suministro de liberacion en tiempo, liberacion retardada o liberacion sostenida. Dichos sistemas pueden evitar administraciones repetidas de los compuestos, aumentando la conveniencia para el sujeto y el medico. Muchos tipos de sistemas de liberacion estan disponibles y son conocidos por aquellos expertos comunes en la tecnica. Incluyen sistemas a base de polfmeros tales como poli(lactida-glicolido), copolioxalatos, policaprolactonas, poliesteramidas, poliortoesteres, acido polihidroxibutmco, y poliantndridos. Las microcapsulas de los polfmeros anteriores que contienen farmacos se describen en, por ejemplo, la Patente Estadounidense No. 5,075,109. Los sistemas de suministro tambien incluyen sistemas no polimericos que son: lfpidos que incluyen esteroles tales como colesterol, esteres de colesterol y acidos grasos o grasas neutras tales como mono, di y tri-gliceridos; sistemas de liberacion de hidrogel; sistemas silasticos; sistemas basados en peptidos; recubrimientos de cera; tabletas comprimidas que utilizan aglutinantes y excipientes convencionales; implantes parcialmente fusionados; y similares. Ejemplos espedficos incluyen, pero no se limitan a: (a) sistemas de erosion en los que un agente de la invencion esta contenido en una forma dentro de una matriz tales como aquellos descritos en las Patentes Estadounidense Nos. 4,452,775, 4,675,189, y 5,736,152,, y (b) sistemas de difusion en los que un componente activo se permea a una tasa controlada desde un polfmero tal como se describe en las Patentes Estadounidenses Nos. 3,854,480, 5,133,974 y 5,407,686. Ademas, se pueden utilizar sistemas de suministro de hardware con base en bomba, algunos de los cuales se adaptan para implante.

Equivalentes

Los ejemplos representativos que siguen estan destinados a ilustrar la invencion y no pretenden, ni se deben interpretar, que limitan el alcance de la invencion. Contienen informacion adicional importante, ejemplificacion y orientacion que se puede adaptar a la practica de esta invencion en sus diversas realizaciones y equivalentes de las mismas.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

imagen85

Una mezcla de 5-aminoimidazol-4-carboxamida (12.6 gm, 0.10 moles), N-metil-N'- (4-formilfenil)piperazina (20.4 gm, 0.10 moles), metabisulfito de sodio (14.3 gm, 0.075 moles) y agua (1.4 mL) en dimetilacetamida (150 mL) se calienta a 150°C con agitacion durante 2 horas, El calor se retira y se agrega con cautela agua (300 mL). La solucion marron 5 resultante luego se enfrfa en un bano de hielo con agitacion. El solido que se separa se afsla mediante filtracion, se lava con agua y se seca. La TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra la presencia de dos productos; un compuesto amarillo brillante con rf = 0.42 y un compuesto fluorescente azul, incoloro con rf = 0.20. El rendimiento total fue 5.0 gm.

El producto crudo se disuelve en metanol al 30% en cloroformo (200 mL) y se agrega gel de sflice (75 gm). Esta mezcla 10 se despoja del solvente bajo vacfo para dar la mezcla de producto absorbida en sflice Este material se deposita sobre la parte superior de una columna de sflice (18 in x 2 in). La columna luego se desarrolla utilizando metanol al 30% en cloroformo que utiliza 5 psi de nitrogeno para acelerar el proceso. Los dos compuestos se separan claramente con el compuesto amarillo que se eluye primero. Las fracciones que contienen los compuestos separados se evaporan para dar el compuesto amarillo en un rendimiento de 2.45 gm y el compuesto incoloro en un rendimiento de 2.49 gm. La 15 RMN del ultimo compuesto fue consistente con la estructura de quinazolinona.

imagen86

Ejemplo 1

El compuesto anterior (1.35 gm, 4.3 X 10-3 moles) se suspende en clorobenceno (10 mL) y se agrega oxicloruro de fosforo (10 mL) seguido por diisopropiletilamina (1.1 gm, 1.5 mL, 8.6 X 10-3 moles). Esta mezcla se agita a 130°C bajo

20 argon durante 5 horas. El exceso de oxicloruro de fosforo se elimina mediante destilacion y, despues de enfriamiento, la mezcla de clorobenceno se agita con diclorometano (250 mL) y solucion de bicarbonato de sodio al 5% (200 mL) hasta que se ha disuelto todo el solido en el diclorometano (aproximadamente 2 horas). La solucion de diclorometano se afsla, se seca sobre sulfato de magnesio y luego se filtra y se evapora bajo vacfo. El residuo marron luego se disuelve en n- butanol (10 mL) y se agrega N-2-aminoetilmorfolina (2.0 mL). Esta solucion luego se calienta a reflujo durante la noche.

25 Despues de enfriamiento, la reaccion se diluye con diclorometano (100 mL). Esta solucion se extrae con solucion de acido clorhfdrico al 5% (2 X 50 mL). Los extractos acidos combinados se lavan con diclorometano (50 mL) y luego se hacen basicos mediante la adicion de carbonato de sodio solido. Esta mezcla se extrae con diclorometano (2 X 50 mL).

Los extractos combinados se secan sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el agente de secado, los extractos se evaporan bajo vado. El solido restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 20% en cloroformo como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para proporcionar el compuesto deseado en un rendimiento de 123 mg. (6.8% del compuesto hidroxi). La RMN fue 5 consistente con la estructura. LC/MS: M+1 = 423.31.

Formacion de sal de clorhidrato: La adenina (100 mg, 2.4 X 10-4 moles) se disuelve en etanol en ebullicion (4 mL). A esta solucion se agrega acido clortudrico concentrado (60 pL). La solucion se enfna lo que provoca que la sal de tris- clorhidrato se cristalice como solido. Esta se afsla mediante filtracion y se lava con etanol seguido por eter de dietilo. La sal solida se seca bajo vado. Rendimiento = 87.3 mg, Mw = 531.9.

10 Ejemplo 54

imagen87

Una mezcla de 5-aminoimidazol-4-carboxamida (6.3 gm, 0.05 moles), N-etil-N'-(4-formilfenil)piperazina (10.9 gm, 0,05 moles), metabisulfito de sodio (7.13 gm, 0.037 moles) y agua (675 pL) en dimetilacetamida (75 mL) se calienta a 150°C con agitacion durante 90 minutos. El calor se retira y se agrega con cautela agua (150 mL). La solucion marron 15 resultante luego se enfna en un bano de hielo con agitacion. El solido que se separa se afsla mediante filtracion, se lava con agua y se seca. La TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra la presencia de dos productos; un compuesto amarillo brillante con rf = 0.48 y un compuesto fluorescente azul, incoloro con rf = 0.25. El rendimiento total fue 2.4 gm.

El producto crudo se disuelve en metanol al 20% en cloroformo (200 mL) y se agrega gel de silice (25 gm). Esta mezcla 20 se despoja de solvente bajo vado para dar la mezcla de producto absorbida en silice. Este material se deposita sobre la parte superior de una columna de silice (18 in X 2 in). La columna luego se desarrolla utilizando metanol al 20% en cloroformo que utiliza 5 psi de nitrogeno para acelerar el proceso. Los dos compuestos se separan claramente con el compuesto amarillo que se eluye primero. Las fracciones que contienen los compuestos separados se evaporan para dar el compuesto amarillo en un rendimiento de 0.77 gm y el compuesto incoloro en un rendimiento de 0.90 gm. La 25 RMN del ultimo compuesto fue consistente con la estructura de quinazolinona.

imagen88

El compuesto anterior (0.90 gm, 2.77 X 10-3 moles) se suspende en clorobenceno (20 mL) y se agrega oxicloruro de fosforo (1.0 mL). Esta mezcla se agita a 130°C bajo argon durante 9 horas. Despues de enfriamiento el clorobenceno se decanta del solido marron oscuro. El solido se agita con diclorometano (250 mL) y solucion de bicarbonato de sodio al 5 5% (200 mL) hasta que se ha disuelto todo el solido en el diclorometano (aproximadamente 2 horas). La solucion de

diclorometano se afsla, se seca sobre sulfato de magnesio y luego se filtra y se evapora bajo vacfo. El residuo marron luego se disuelve en n-butanol y se agrega N-2-aminoetilmorfolina (2.0 mL). Esta solucion luego se calienta a reflujo durante 3 horas. Despues de enfriamiento, la reaccion se filtra para eliminar algun material insoluble y luego se diluye con eter de dietilo (200 mL). Esta solucion se extrae con solucion de acido clorhfdrico al 5% (2 X 50 mL). Los extractos 10 acidos combinados se lavan con eter de dietilo (100 mL) y luego se hacen basicos mediante la adicion de carbonato de sodio solido. Esta mezcla se extrae con diclorometano (2 X 50 mL). Los extractos combinados se secan sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el agente de secado, los extractos se evaporan bajo vacfo. El solido restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 20% en cloroformo como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para proporcionar el compuesto deseado en un 15 rendimiento de 90 mg. (7.4% del compuesto hidroxilo). La RMN fue consistente con la estructura.

Ejemplo 55

imagen89

Una solucion de 2,4-dicloropurina (1.0 gm, 5.3 X 10"3 moles) y bromoacetato de etilo (1.67 gm, 1.0 X 10"3 moles) en tetrahidrofurano (5 mL) se trata con una solucion de fluoruro de tetrabutilamonio (10 mL, 1.0M, 1.0 X 10"2 moles). 20 Despues de agitacion durante 30 minutos una TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra que el material de partida (Rf = 0.38) se ha convertido claramente en un producto unico (Rf = 0.74). La reaccion se diluye en eter de dietilo (100 mL) y esta solucion se lava con agua (2 X 50 mL). Despues de secado sobre sulfato de magnesio, la solucion se filtra para eliminar el agente de secado y los filtrados se evaporan bajo vacfo. El residuo blanco solido se recristaliza a partir de acetato de etilo (5 mL) y hexano (20 mL) para dar el producto cristalino en un rendimiento de 0.95 25 gm (65.2%).

imagen90

La carboetoxipurina (0.95 gm, 3.45 X 10"3 moles) y N-2-aminoetilmorfolina (583 mg, 588 pL, 4.48 X 10"3 moles) se combinan en 2-metiltetrahidrofurano (10 mL) y 2-propanol (3 mL). Despues que se calienta a reflujo durante 60 minutos, una TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra que queda un poco de material de partida. Se agrega 30 mas N-2-aminoetilmorfolina (315 mg, 318 pL, 2.42 X 10-3 moles) y se continua el calentamiento durante 15 minutos. Una TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra que el material de partida (Rf = 0.74) se ha convertido claramente en un producto unico (Rf = 0.33). La reaccion se enfrfa y se diluye con cloruro de metileno (100 mL). Esta solucion se lava con bicarbonato de sodio saturado (50 mL) seguido por agua (50 mL) y luego se seca sobre sulfato de magnesio. La solucion se filtra para eliminar el agente de secado y los filtrados se evaporan bajo vacfo para dar un 35 aceite. El aceite se disuelve en eter de dietilo (15 mL) y esta solucion se enfrfa en el refrigerador. El producto se cristaliza como un solido blanco y se afsla mediante filtracion. Despues de lavado con eter de dietilo y secado se obtiene

imagen91

En un matraz de fondo redondo con una barra de agitacion se combinan los siguientes:

1.: El derivado de cloroadenina anterior 0.50 gm 1.36 X 10'3 moles

2.: El ester de acido piperazina boronico 0.45 gm 1.50 X 10'3 moles

3.: Carbonato de potasio 0.11 gm 7.70 X 10'4 moles

4.: Tetrakis trifenilfosfna paladio 34.5 mg 2.99 X 10'b moles

5.: Acetonitrilo 5 mL

6.: Agua 5 mL

5 El matraz se evacua y enjuaga con argon antes de ser calentado a 70°C durante 90 minutos. La TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra la formacion de dos puntos de productos. Un compuesto fluorescente azul (Rf = 0.17) y un compuesto no fluorescente (Rf = 0.15). Parece que se ha consumido la adenina de partida (Rf = 0.33). La reaccion se enfrfa y se somete a particion entre agua (100 mL) y cloruro de metileno (100 mL). La solucion organica se afsla y se seca sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion los solventes se eliminan bajo vacfo y el residuo se

10 purifica mediante cromatograffa sobre sflice y el producto se eluye al cambiar gradualmente el eluyente a metanol al 20% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para dar la purina en un rendimiento de 63 mg. 1H RMN: 1.22 ppm, Triplete, 3H, 2.50 ppm, multiplete, 4H, 2.83 ppm, doblete, 3H, 3.02 ppm, triplete, 2H, 3.18 ppm, multiplete, 4H, 3.58 ppm, multiplete, 8H, 3.95 ppm, doblete, 6H, 4.19 ppm, cuartero, 2H, 5.15 ppm, singlete, 2H, 7.05 ppm, doblete, 2H, 8.15 ppm, singlete, 1H, 8.24 ppm, doblete, 2H.

15 La purina (63 mg, 1.2 X 10-4 moles) se disuelve en metanol (3 mL) y se agrega una solucion de acido sulfurico en metanol (104 pL de una solucion de 233 mg/mL, 2.46 X 10-4 moles). Despues de enfriamiento en el refrigerador, la sal de bisulfato solida se afsla mediante centrifugacion. Despues de lavado (7 mL de 50/50 metanol/ eter de etilo), el solido se seca bajo vacfo para dar la sal de bisulfato (Mw = 704.78) como un solido de color canela. El rendimiento fue 47.1 mg.

20 Ejemplo 56

imagen92

5

10

15

20

25

Clorhidrato de benzamidina (26.0 gm, 0.166 moles) y malonato de dimetilo (21.9 gm, 0.166 moles) se combinan en metanol seco (200 mL). Esta mezcla se agita como metoxido de sodio al 30% en metanol (89.7 gm, 0.498 moles) se agrega. Un precipitado de cloruro de sodio formado y esta mezcla se agita a 55°C. durante 2 horas. La mezcla de la reaccion se diluye con agua (500 mL) para formar una solucion clara. Esta se acidifica mediante la adicion de acido acetico (35 mL) lo que provoca un precipitado blanco que se forma rapidamente. Despues de agitacion durante 30 minutos, el solido se afsla mediante filtracion. La torta de filtro se lava, a su vez con agua, metanol y acetona. Despues de secado, la 2-fenil-4,6-dihidroxipirimidina se obtiene en un rendimiento de 25 gm (80%) como un solido blanco.

imagen93

Una mezcla de 2-fenil-4,6-dihidroxipirimidina (15.6 gm, 8.29 X 10"2 moles) y acido acetico (45 mL) se arremolinan juntos cuando de agrega lentamente acido nftrico al 90% mediante pipeta de pasteurizacion. Una vez se completa la adicion, la solucion roja resultante se agita a 50°C. durante 45 minutos. Luego se agrega agua (150 mL) y la mezcla resultante se agita sobre hielo. Una vez enfriada, el solido se afsla mediante filtracion y se lava con agua. El solido luego se lava con 2- propanol y se seca para proporcionar la nitropirimidina como un solido purpura en un rendimiento de 5.3 gm (27.4%).

imagen94

Una lechada de 2-fenil-4,6-dihidroxi-5- nitropirimidina (5.3 gm, 2.27 X 10-2 moles) en oxicloruro de fosforo (23 mL) se agita cuando se agrega lentamente diisopropiletilamina (7.0 mL). La solucion naranja resultante se calienta a 100°C. durante una hora. El exceso de oxicloruro de fosforo se elimina bajo presion reducida y el material residual se trata con hielo y agua (100 gm). El precipitado amarillo, solido se extrae en acetato de etilo (200 mL) y esta solucion se lava con solucion salina. Despues de secado sobre sulfato de magnesio, la solucion se filtra y se evapora bajo presion reducida. El solido restante se recristaliza a partir de 2-propanol para proporcionar la 2-fenil-4,6-dicloro-5-nitropirimidina como un solido amarillo en un rendimiento de 3.2 gm (52%).

imagen95

2

Una mezcla de 2-fenil-4,6-dicloro-5-nitropirimidina (3.2 gm, 1.18 X 10 moles) y N-2-aminoetilmorfolina (3.39 gm, 3.42 mL, 2.6 X 10-2 moles) con diisopropiletilamina (4.50 mL) en 2-propanol (50 mL) se calienta a ebullicion. Despues de 2 horas a reflujo la solucion caliente se enfrfa sobre hielo. Luego de enfriamiento, el producto se cristaliza como un solido amarillo. Este se afsla mediante filtracion, se lava con 2-propanol y se seca para proporcionar el producto en un rendimiento de 4.6 gm, (85.2%).

5

10

15

20

25

imagen96

La nitro pirimidina (1.83 gm, 4.0 X 10-3 moles) se agita en metanol (20 mL) y THF (10 mL). A esta se agrega formato de amonio (1.3 gm) se disuelve en agua (4 mL) junto con paladio sobre carbono al 10% (200 mg). Despues que se calienta a reflujo durante 3 horas, la TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra consumo del compuesto nitro (Rf = 0.65) con un producto unico (Rf = 0.13). Despues de enfriamiento, el catalizador se elimina mediante filtracion y los filtrados se diluyen con cloruro de metileno (200 mL). La solucion se lava con agua (50 mL) y se seca sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el sulfato de magnesio, los solventes se eliminan bajo presion reducida para proporcionar la triaminopirimidina como un solido roda palido.

imagen97

La triaminopirimidina anterior se agita en cloruro de metileno (30 mL) y se agrega carbonil diimidazol (0.65 gm). Una solucion de color osado palido formada de esta manera se agita durante la noche. Se agrega agua (20 mL) y se continua la agitacion durante 30 minutos. Se agrega cloruro de metileno (100 mL) y la mezcla se lava con agua (50 mL). LA solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio antes de que se filtre y se evapore bajo presion reducida. El solido blanco residual se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 10% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para proporcionar el Ejemplo 56 como un polvo blanco en un rendimiento de 919 mg (51%). LC/MS: M+1 = 454.32. 1H RmN: 2.5 ppm, multiplete, 12H, 3.25 ppm, multiplete, 4H, 3.55 ppm, multiplete, 6H, 4.0 ppm, multiplete, 2H, 7.3 ppm, multiplete, 3H, 8.3 ppm, multiplete, 2H.

Ejemplo 57

imagen98

Solucion 1:

La anilina (9.3 gm, 0.10 moles) se disuelve en agua (200 mL) y hielo (100 gm) contiene acido clorhfdrico concentrado (20 mL). Esta solucion se agita cuando una solucion de nitrito de sodio (6.9 gm, 0.10 moles) disuelta en agua (50 mL) se deja caer. Una vez se completa la adicion la solucion de diazonio se mantiene sobre hielo cuando se prepara la solucion.

5

10

15

20

25

Hidroxido de sodio (24 gm, 0.60 moles) y 2-fenil-4,6-dihidroxipirimidina (18.8 gm, 0.10 moles) se disuelven en agua (200 mL) y una vez se completa la disolucion, se agrega hielo (100 gm).

La solucion 1 se vierte lentamente en la solucion 2 a una temperatura de hielo con agitacion. La solucion naranja brillante resultante se agita y la sal de sodio del compuesto azo se cristaliza formando una lechada espesa. Despues de 30 minutos, la lechada espesa se acidifica con acido clorhfdrico concentrado y despues de agitacion durante 30 minutos, el compuesto azo se afsla mediante filtracion. El solido humedo se lava con agua y se seca para proporcionar la azopirimidina como un solido amarillo en un rendimiento de 12.8 gm (43.7%)

imagen99

La dihidroxifenilazopirimidina (11.7 gm, 0.04 moles) se pulveriza y se mezcla con oxicloruro de fosforo (45 mL). Esta mezcla se agita cuando se agrega lentamente diisopropiletilamina (12.3 mL). La lechada naranja resultante se calienta a reflujo durante 1 hora. Luego de enfriamiento, el exceso de oxicloruro de fosforo se elimina bajo presion reducida. El material residual se trata con hielo y este luego se extrae con cloruro de metileno (300 mL). Los extractos de cloruro de metileno se lavan con agua (2 X 150 mL) antes de que se sequen sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion, el disolvente se elimina bajo presion reducida. El material residual se agita con una mezcla 50/50 de acetato de etilo y hexano (50 mL). El solido resultante se afsla mediante filtracion y se lava con una mezcla 50/50 de acetato de etilo y hexano. Despues de secado, se obtiene 10.5 gm (79.7%) del producto como un solido naranja.

imagen100

La dicloropirimidina (2.30 gm, 6.98 X 10"3 moles) se disuelve en cloruro de metileno y se agrega N-metil-N'-(2- aminoetil)piperazina (1.0 gm, 6.98 X 10-3 moles). Despues de agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora, la TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra algo de material de partida restante (Rf = 0.91) junto con un producto unico (Rf = 0.32). Se agrega diisopropiletilamina (0.902 gm, 1.22 mL, 6.98 X 10-3 moles) y esta solucion se calienta a 45°C. durante 90 minutos. Despues de enfriamiento, el cloruro de metileno se elimina bajo presion reducida y el material restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 15% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para proporcionar 2.1 gm (69%) del producto como un solido naranja.

imagen101

La monocloropirimidina (1.7 gm, 3.9 X 10-3 moles) y N-(2-aminoetil)morfolina (5.08 gm, 3.9 X 10"2 moles) se combinan y se calientan a 150°C. Una solucion naranja oscura formada luego de calentar y despues de calentar durante 15 minutos, la TLC (metanol al 15% en cloruro de metileno) muestra a un unico compuesto (Rf = 0.37). La solucion de enfrfa a 60°C.

5 y se agrega 2-propanol (25 mL). Luego de enfriamiento, el producto se cristaliza como un solido amarillo. Este se afsla mediante filtracion, se lava con 2-propanol y se seca para dar 1.7 gm (82.3%) de la diaminofenilazopirimidina.

imagen102

La azopirimidina (1.7 gm, 3.2 X 10"3 moles) se agita en agua (25 mL) que contiene acido acetico (1.0 mL). Esta mezcla se calienta a 65°C. formando una solucion naranja. A esta solucion agitada se agrega ditionito de sodio (3 gm) en 3 10 porciones iguales durante 5 minutos. Despues de la ultima adicion, se ha formado una solucion incolora. Despues de agitacion a 65°C. durante unos 15 minutos adicionales la solucion se enfrfa y se hace basica mediante la adicion de carbonato de potasio. El aceite que se ha separado se extrae en cloruro de metileno (100 mL) y los extractos se secan sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion, el cloruro de metileno se evapora bajo presion reducida. El material restante se utiliza en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

imagen103

La triaminopirimidina anterior se disuelve en cloruro de metileno (25 mL). A esta solucion se agrega carbonildiimidazol (800 mg, 4.9 X 10-3 moles) y esta solucion se agita a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 12.5%

metanol en cloruro de metileno como eluyente. Para eluir el producto, el eluyente se cambia a metilamina al 1% y metanol al 25% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El aceite resultante se solidifica rapidamente luego de reposo. El solido se tritura en eter de dietilo y luego se afsla mediante filtracion. Esto proporciona una mezcla de isomeros en una relacion 1:1 segun se determina por RMN. El 5 rendimiento fue 730 mg. LC/MS: M+1 = 467.37

Ejemplo 58

imagen104

Acido tiobarbiturico (14.4 gm, 0.10 moles) y bromuro de n-butilo (15.07 gm, 11.84 mL, 0.11 moles) se combinan en metanol (300 mL), agua (100 mL) y metoxido de sodio al 30% en metanol (19.81 gm, 0.11 moles). Esta mezcla se agita 10 y se calienta a reflujo, el calor se elimina y se continua la agitacion cuando la temperatura cae a temperatura ambiente. Se agrega hidroxido de sodio solido (4.4 gm, 0.11 moles) y la solucion turbia resultante se agita a temperatura ambiente durante la noche. La lechada que se ha formado se calienta a reflujo para proporcionar una solucion clara. Se agrega agua caliente (400 mL) seguida por acido acetico (15 mL). Luego de enfriamiento a temperatura ambiente se ha formado una suspension. El solido se afsla mediante filtracion y se lava con agua antes de que se seque para 15 proporcionar 14.5 gm (72%) del producto como un solido blanco.

imagen105

Anilina (6.56 gm, 0.07 moles) se disuelve en agua (200 mL) y hielo (100 gm) que contiene acido clorhfdrico concentrado (14 mL). Esta solucion se agita cuando una solucion de nitrito de sodio (4.9 gm, 0.07 moles) disuelta en agua (50 mL) se 20 deja caer. Una vez se completa la adicion la solucion de diazonio se mantiene sobre hielo cuando se prepara la solucion 2.

Solucion 2:

Hidroxido de sodio (16.9 gm, 0.42 moles) y 2-butiltio-4,6-dihidroxipirimidina (14.1 gm, 0.07 moles) se disuelven en agua (200 mL) y una vez se completa la disolucion, se agrega hielo (100 gm).

25 La solucion 1 se vierte lentamente en la solucion 2 a temperatura de hielo con agitacion. La solucion naranja brillante resultante se agita y la sal de sodio del compuesto azo se cristaliza formando una lechada espesa. Despues de 30 minutos, la lechada espesa se acidifica con acido clorhfdrico concentrado y despues de agitacion durante 30 minutos, el compuesto azo se afsla mediante filtracion. El solido humedo se lava con agua y se seca para proporcionar la azopirimidina como un solido amarillo en un rendimiento de 19.3 gm (90.6 %).

imagen106

10

15

20

La dihidroxibutiltioazopirimidina (18.6 gm, 0.061 moles) se pulveriza y se mezcla con oxicloruro de fosforo (80 mL). Esta mezcla se agita cuando se agrega lentamente diisopropiletilamina (20 mL). La temperatura se eleva a 60°C. La solucion naranja resultante se calienta a reflujo durante 1 hora. Luego de enfriamiento, el exceso de oxicloruro de fosforo se elimina bajo presion reducida. El material residual se trata con hielo y este luego se extrae con cloruro de metileno (250 mL). Los extractos de cloruro de metileno se lavan con agua (200 mL) seguido por bicarbonato de sodio al 5% (200 mL) antes de que se seque sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion, el disolvente se elimina bajo presion reducida para dar 20 gm del producto como un aceite rojo.

imagen107

Una mezcla de 2-butiltio-4,6-dicloro-5-fenilazopirimidina (6.82 gm, 2.0 X 10-2 moles) y N-2-aminoetilmorfolina (10.4 gm, 8.0 X 10-2 moles) en n-butanol (50 mL) se calienta a ebullicion. Despues de 2 horas a reflujo la solucion caliente se diluye con 2-propanol (100 mL) y luego se enfrfa. Luego de enfriamiento, el producto se cristaliza como un solido amarillo. Este se afsla mediante filtracion, se lava con 2-propanol y se seca para proporcionar el producto en un rendimiento de 6.8 gm, (64.3%).

imagen108

clorhfdrico concentrado (1.2 mL). Esta mezcla se calienta a 60°C. formando una solucion naranja. A esta solucion agitada se agrega ditionito de sodio (14 gm) en 4 porciones iguales durante 10 minutos. Despues de la ultima adicion, se ha formado una solucion amarilla palida. Despues de agitacion a 60°C. durante unos 30 minutos adicionales la solucion se enfrfa y se hace basica mediante la adicion de carbonato de potasio. El aceite que se ha separado se extrae en cloruro de metileno (200 mL) y los extractos se secan sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion, el cloruro de metileno se evapora bajo presion reducida. El material restante se utiliza en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

5

10

15

20

25

imagen109

La triaminopirimidina anterior se disuelve en cloruro de metileno (100 mL). A esta solucion se agrega carbonildiimidazol (3.0 gm) y esta solucion se agita a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se disuelve en acetato de etilo (150 mL). La solucion de acetato de etilo se extrae con acido clorhfdrico al 5% (2 X 100 mL) y los extractos combinados se lavan con acetato de etilo (100 mL). Los extractos acuosos acidos se hacen basicos mediante la adicion de carbonato de potasio y el aceite precipitado se extrae en cloruro de metileno (150 mL). Despues de secado sobre sulfato de magnesio la solucion se filtra y los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 10% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El aceite resultante se solidifica rapidamente luego de reposo para dar el producto como un solido blanco. El rendimiento fue 1.25 gm. LC/MS: M+1 = 466.4.

Ejemplo 59

imagen110

La triaminopirimidina anterior se agita en trimetilortoformato (10 mL), y metanol (10 mL). A esta solucion se agrega acido clorhfdrico concentrado (750 pL). El calentamiento proporciona una solucion amarilla palida. Esta solucion se agita a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se agita con solucion de carbonato de potasio al 10% (50 mL) y cloruro de metileno (50 mL). La solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio y la solucion se filtra. Los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 10% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El aceite resultante se disuelve en eter de dietilo provocando que el producto se cristalice. El producto se afsla mediante filtracion, se lava con eter de dietilo y se seca para dar el producto como un solido blanco. El rendimiento fue 200 mg. 1H RMN: 2.6 ppm, triplete, 8H, 2.7 ppm, triplete, 2H, 2.8 ppm, triplete, 2H, 3.7 ppm, triplete, 4H, 3.8 ppm, triplete, 4H, 4.0 ppm, multiplete, 2H, 4.4 ppm, triplete, 2H, 6.5 ppm, triplete, 1H, 7.4 ppm, multiplete, 3H, 7.9 ppm, singlete, 1H, 8.5 ppm, multiplete, 2H. LC/MS: M+1 = 438.4.

Ejemplo 60

imagen111

La dicloropirimidina (3.29 gm, 0.01 moles) se disuelve en n-butanol (30 mL) y se agrega N-metil-N-(2-aminoetil) piperazina (3.0 gm, 2.1 X 10-2 moles). Esta mezcla se calienta a 115°C. formando una solucion naranja oscura. Despues 5 de 2 horas, la TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra algo de material de partida restante junto con un producto unico. Se agrega diisopropiletilamina (02.58 gm, 0.02 moles) junto con N-metil-N'-(2-aminoetil) piperazina adicional (1.0 gm, 7.0 X 10~ moles) y esta solucion se calienta a 115°C. durante unas 2 horas adicionales. Despues de enfriamiento la reaccion se diluye con hexano (100 mL) y esta solucion se extrae con agua (50 mL). La solucion de hexano se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y los solventes se eliminan bajo presion reducida. Se hierve el solido 10 naranja restante en hexano (50 mL) y luego se enfrfa sobre hielo. El solido se afsla mediante filtracion, se lava con hexano y se seca. El rendimiento fue 3.0 gm, (55%).

imagen112

La fenilazopirimidina (3.0 gm, 5.53 X 10-3 moles) se agita en metanol (30 mL) y THF (30 mL). A esta se agrega formato de amonio (3.0 gm) se disuelve en agua (6 mL) junto con paladio sobre carbono al 10% (200 mg). Despues que se 15 calienta a 55°C durante 15 minutos, la TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra el consumo del compuesto azo. Se agrega agua (10 mL) y se continua la agitacion durante 5 minutos. Despues de enfriamiento, el catalizador se elimina mediante filtracion y los filtrados se hacen basicos mediante la adicion de carbonato de potasio (4 gm). Despues de agitacion durante 5 minutos la mezcla se extrae con cloruro de metileno (200 mL). La solucion se seca sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el sulfato de magnesio, los solventes se eliminan bajo 20 presion reducida. Al resto aceitoso se agrega 1:1 eter de dietilo y hexano (100 mL). Despues de agitacion durante 5 minutos los solventes se decantan y la triamina se seca bajo vacfo. Esta se utiliza en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

imagen113

La triaminopirimidina anterior se agita en trimetilortoformata (30 mL), y metanol (30 mL). A esta solucion se agrega acido clorhfdrico concentrado (3.0 mL). Esta solucion se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se agita con solucion de carbonato de potasio al 5% (200 mL) y 5 cloruro de metileno (200 mL). La solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio y la solucion se filtra. Los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se disuelve en etanol (100 mL) y se agrega acido sulfurico (1.08 gm, 1.1 X 10-2 moles) disuelto en etanol (20 mL). La sal de sulfato se precipita y se afsla mediante filtracion. La sal se lava con etanol y luego se lava con eter de dietilo y se seca para dar el producto como un solido. El rendimiento fue 2.7 gm. LC/MS: M+1 = 464.5.

10 Ejemplo 61

imagen114

La dicloropirimidina (3.29 gm, 0.01 moles) se disuelve en 2-propanol (30 mL) y se agrega N,N,N'trimetiletilenodiamina (1.12 gm, 0.011 moles). Esta lechada se calienta a 60°C. lo que provoca la formacion de una solucion naranja oscura 15 clara. Se continua el calentamiento durante 15 minutos. Despues de enfriamiento sobre hielo se ha separado un solido. Este se afsla mediante filtracion y se lava con 2-propanol, seguido por eter de dietilo. Despues de secado se obtiene 3.7 gm (86%) del producto como la sal de clorhidrato naranja.

imagen115

20 en n-butanol (40 mL) y se calientan a 115°C. Una solucion naranja oscura formada luego de calentar y despues de calentar durante 10 minutos, la TLC (metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra conversion limpia a un compuesto

unico (Rf = 0.63). Despues de enfriamiento, el butanol se elimina bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre s^lice utilizando metanol al 10% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan para dar un aceite que se solidifica luego de reposo. El rendimiento fue 3.5 gm de la diaminofenilazopirimidina.

5

imagen116

La fenilazopirimidina (3.5 gm, 7.2 X 10-3 moles) se agita en metanol (50 mL) y THF (50 mL). A esta se agrega formato de amonio (5.0 gm) se disuelve en agua (10 mL) junto con paladio sobre carbono al 10% (200 mg). Despues que se calienta a 60°C durante 60 minutos, la TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra consumo del compuesto azo. Se agrega agua (20 mL) y la agitacion se continua durante 5 minutos. Despues de enfriamiento, el 10 catalizador se elimina mediante filtracion y los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material acuoso resultante se hace basico mediante la adicion de carbonato de potasio (5 gm). Despues de agitacion durante 5 minutos la mezcla se extrae con cloruro de metileno (200 mL). La solucion se seca sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el sulfato de magnesio, los solventes se eliminan bajo presion reducida. Al resto aceitoso se agrega hexano (100 mL). Despues de agitacion durante 5 minutos los solventes se decantan y la triamina se seca bajo vacfo. Esta se 15 utiliza en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

imagen117

La triaminopirimidina anterior se agita en trimetilortoformato (30 mL), y metanol (30 mL). A esta solucion se agrega acido clorhfdrico concentrado (3.5 mL). Esta solucion se agita a temperatura ambiente durante 90 min. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se agita con solucion de carbonato de potasio al 10% (100 mL) y 20 cloruro de metileno (150 mL). La solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio y la solucion se filtra. Los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre silice utilizando metanol al 15% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El material restante (645 mg) se disuelve en etanol (25 mL) y eter de dietilo (25 mL). A esta solucion se agrega acido sulfurico (307 mg, 3.13 X 10-3 moles) se disuelve en etanol (2 mL). La sal de sulfato se 25 precipita y se afsla mediante filtracion. La sal se lava con eter de dietilo y se seca para dar el producto como un solido. El rendimiento fue 710 mg. LC/MS: M+1 = 410.5.

Ejemplo 62

imagen118

La dicloropirimidina (3.29 gm, 0.01 moles) se agita en 2-propanol con N -(2-aminoetil)morfolina (1.43 gm, 0.011 moles) y diisopropiletilamina (1.29 gm, 0.01 moles). Esta se calienta a reflujo y se agrega n-butanol (15 mL). Despues de calentar a reflujo durante 15 minutos, la TLC (sflice, 50% acetato de etilo en hexano) muestra que se ha formado un producto 5 unico (Rf = 0.53) Despues de enfriamiento, el producto solido se afsla mediante filtracion, se lava con 2-propanol y se seca. El rendimiento fue 3.9 gm (92.2%) del producto como un solido naranja.

imagen119

La fenilazopirimidina (1.0 gm, 2.36 X 10"3 moles) y cloruro de tetrabutilamonio (1.0 gm) se agitan en metanol (15 mL) y THF (35 mL). A esto se agrega formato de amonio (1.0 gm) se disuelve en agua (2 mL) junto con paladio sobre carbono 10 al 10% (250 mg). Despues que se calienta a 60°C durante 150 minutos, la TLC (sflice, metanol al 10% en cloruro de metileno) muestra consumo del compuesto azo. Se agregan acetato de etilo (100 mL) y carbonato de potasio al 5%. La solucion de acetato de etilo se seca sobre sulfato de magnesio. Despues de filtracion para eliminar el sulfato de magnesio, los solventes se eliminan bajo presion reducida. Esta se utiliza en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

imagen120

15 La diamina cruda anterior se agita en trimetilortoformato (30 mL), y metanol (30 mL). A esta solucion se agrega acido clorhfdrico concentrado (3.0 mL). Esta solucion se agita a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se agita con solucion de carbonato de potasio al 10% (100 mL) y cloruro de metileno (100 mL). La solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio y la solucion se filtra. Los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre 20 sflice utilizando metanol al 10% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El material restante se utiliza en la siguiente etapa.

5

10

15

imagen121

La cloropurina anterior se disuelve en n-butanol (15 mL) y se agrega N-metil-N'-(2-aminoetil)piperazina (2.0 gm). Esta solucion se calienta a 100°C durante 1 hora. La TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra formacion de un producto principal en Rf = 0.46. El butanol se elimina bajo presion reducida. El material restante se purifica mediante cromatograffa sobre silice utilizando metanol al 20% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El material restante (144.5 mg) se disuelve en etanol (4 mL) y eter de dietilo (25 mL). A esta solucion se agrega acido sulfurico (62.9 mg, 6.42 X 10-4 moles) se disuelve en etanol (1 mL). La sal de sulfato se precipita y se afsla mediante filtracion. La sal se lava con eter de dietilo y se seca para dar el producto como un solido. El rendimiento fue 165 mg. LC/MS: M+1 = 451.4.

Ejemplo 63

imagen122

THF (35 mL). A esta se agrega formato de amonio (1.0 gm) se disuelve en agua (2 mL) junto con paladio sobre carbono al 10% (250 mg). Despues que se calienta a reflujo durante 5 minutos se ha formado una solucion incolora. La solucion se filtra y los filtrados se evaporan bajo presion reducida. El material restante se somete a particion entre agua (100 mL) y cloruro de metileno (150 mL). La solucion de cloruro de metileno se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se evapora bajo presion reducida. El resto se utiliza sin purificacion adicional para la siguiente etapa.

imagen123

La cloropirimidina anterior se disuelve en cloruro de metileno (25 mL). A esta solucion se agrega carbonildiimidazol (1.49 gm, 9.16 X 10-3 moles) y esta solucion se agita a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se eliminan bajo presion reducida y el material restante se purifica mediante cromatograffa sobre silice utilizando metanol al 15% en cloruro de metileno como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida. El solido color canela resultante se afsla en un rendimiento de 560 mg.

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen124

morfolina (312 mg, 2.4 X 10 moles). Esta solucion se calienta a reflujo durante 2 horas. La TLC (sflice, metanol al 25% en cloruro de metileno) muestra poca conversion de modo que el butanol se evapora a 140°C. El material restante se calienta, puro, a 140°C. durante 30 minutos. Despues de enfriamiento, el aceite marron restante se purifica mediante cromatograffa sobre sflice utilizando metanol al 12.5% metanol en cloruro de metileno como eluyente. Para eluir el producto, el eluyente se cambia a metilamina al 1% y metanol al 25% en cloruro de metileno. Las fracciones que contienen el producto se agrupan y se evaporan bajo presion reducida para dar 124 mg de producto. Este material (124 mg) se disuelve en metanol (10 mL) y a esta solucion se agrega acido sulfurico (52.3 mg, 5.33 X 10-4 moles) disuelto en metanol (1 mL). El metanol se elimina bajo presion reducida y se agrega eter de dietilo (30 mL). La sal de sulfato se precipita y se afsla mediante filtracion. La sal se lava con eter de dietilo y se seca para dar el producto como un solido. El rendimiento fue 123 mg. LC/MS: M+1 = 467.5.

Ensayo de antagonista de TLR9

Se obtuvieron celulas HEK-Blue™ -hTLR9 de InvivoGen Inc. y se utilizan para determinar las respuestas accionadas por el antagonismo del compuesto de prueba de TLR9 humana (hTLR9). Las celulas HEK-Blue™ -hTLR9 se disenan para estudiar la estimulacion de TLR9 humana al monitorizar la activacion de NF-kB. Como se describe por el fabricante, las "celulas HEK-Blue™ -hTLR9 se obtuvieron por co-transfeccion del gen hTLR9 y un gen indicador de fosfatasa alcalina embrionaria optimizada secretada (SEAP) en celulas HEK293. El gen indicador de SEAP se coloca bajo el control del promotor mfnimo de IFN-b fusionado a cinco sitios de union de NF-kB y AP-1. La estimulacion con un ligando de TLR9 activa NF-kB y AP-1, que induce la produccion de SEAP. Los niveles de SEAP se pueden determinar facilmente con QUANTI-Blue™ un medio de deteccion que se vuelve purpura/azul en la presencia de fosfatasa alcalina".

Ensayo de antagonismo de TLR9

Dfa 1:

Se preparo una suspension celular de celulas HEK-Blue™ -hTLR9 en ~450,000 celulas por ml en medio de prueba que contenfa FBS inactivado por calor al 5% (v/v). Se agrego 180 pl de suspension celular (~80,000 celulas) por pozo de una placa de fondo plano de 96 pozos y se coloco en una incubadora a 37°C durante la noche.

Dfa 2

Los compuestos de prueba se diluyeron en serie en medio de ensayo, por lo general partiendo de 10 uM, y diluyendo por 3 veces en una placa maestra de 96 pozos. 20 ul de compuesto de prueba diluido se transfirio utilizando una pipeta de 12 canales de multiples canales a la placa de celulas y se incubo a 37°C durante 1 hora. Luego se agregaron 20 ul de un agonista hTLR9 (tales como ODN 2006, 1 pM) a cada pozo y la placa se incubo a 37°C durante la noche.

Dfa 3

Se preparo QUANTI-Blue™ de Invivogen siguiendo las instrucciones del fabricante. Se agregaron 180 ml de QUANTI- Blue™ resuspendido por pozo de una placa de 96 pozos de fondo plano. Luego, se agregaron 20 pl por pozo de sobrenadante de celulas HEK-Blue™ -hTLR9 inducidas a la placa y la placa se incubo a 37°C durante 1-3 h. Los niveles de SEAP se determinaron utilizando un espectrofotometro a 620 nm.

Calculo de IC50

La inhibicion dependiente de la concentracion de la produccion de SEAP dependiente hTLR9 se expreso como la concentracion de compuesto que produce la mitad del nivel maximo de SEAP inducida por solo el agonista hTLR. El porcentaje de actividad se calculo para cada observacion utilizando la formula: % actividad = ((OD observado - O.D.

antecedente)/(agonista de solo OD - OD antecedente))* 100. El 50% de concentracion inhibidora (IC50) se calculo al utilizar un ajuste de curva sigmoidal de grafica Hill de 4 parcela parametros donde el punto de inflexion de la curva sigmoidal se define como el punto de actividad al 50%. Los resultados se resumen en la Tabla 3.

Tabla 3. Antagonismo de hTLR9

Ejemplos: IC50 (nM)

Ejemplo 54: 142

Ejemplo 1: 72

Ejemplo 55: 5200

Ejemplo 56: 8010

Ejemplo 57: 271

Ejemplo 58: 11150

Ejemplo 59: 7533

Ejemplo 60: 604

Ejemplo 61: 2735

Ejemplo 62: 3293

Ejemplo 63: 497

5 Los efectos de los artfculos de prueba de atenuacion del receptor tipo TOLL (TLR) luego de una unica dosis intraperitoneal a ratones macho C57BI/6.

El efecto de atenuacion del receptor tipo TOLL (TLR) de los artfculos de prueba se evaluo en un raton C57BI/6J. Los criterios de valoracion primarios incluyeron una recoleccion de sangre terminal para el analisis de produccion de citoquinas en respuesta a inyeccion de agonista de TLR9 CpG-ADN. Se utilizaron ratones machos C57BI/6J, de ~8 10 semanas de edad de Jackson Laboratories. Los grupos de prueba fueron 3 ratones por grupo de tratamiento y a los grupos se les administraron artfculo de prueba en una serie de dosis descendente dentro del rango de 400 pg a 10 pg. El tratamiento de artfculo de prueba se dosifico a T = 0 hr mediante inyeccion intraperitoneal. El tratamiento de agonista (ODN CpG1668) se dosifico una hora mas tarde, T = 1 hr mediante inyeccion intraperitoneal. La necropsia se realizo 3 horas despues del tratamiento de agonista, T = 4 horas. Las muestras de sangre se recolectaron en tubos separadores 15 de suero, se dejo coagular a temperatura ambiente durante por lo menos 20 minutos, se centrifugo a temperatura ambiente a 3000 g durante 10 minutos, y se extrajo el suero. Se realizo ELISA para determinar los niveles de IL-12 de murino siguiendo el protocolo del fabricante (BioLegend Inc.). Se calcularon los niveles de IL-12 en suero y se graficaron contra la dosis administrada de antagonista y se determino dosis inhibidora al 50% (ID50). Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4. Antagonismo de TLR In vivo

Ejemplos: pg ID50

Ejemplo 1: 243

Ejemplo 57: 348

Ejemplo 60: 174

Claims

5

10

15

20

25

imagen1

1. Un compuesto de la Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

en donde

X esta ausente o es un alquilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, o heterociclo;

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, ORi, SRi, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pO, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R7 es H, alquilo, heteroarilo o NR3R4, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 10 atomos de carbono;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, bencilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.
2. El compuesto de la reivindicacion 1, en donde X esta ausente; o X es alquilo; o X es cicloalquilo; o X es heterociclo; o

Y es oxfgeno; o Y es azufre; o Y es NR11; o L es alquilo o alquenilo que contiene desde 2 hasta 4 atomos de carbono.
3. El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la estructura de la Formula II:

imagen2

en donde

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, ORi, SR1, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, 5 heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R7 es H, alquilo, heteroarilo, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

m es 2-6;

10 Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o NRbC(=O)Ra;

15 R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc 20 junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.
4. El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la estructura de la Formula III:

imagen3

en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se 5 puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (ChhjpORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

R7 es H, alquilo, heteroarilo, en donde el heteroarilo se sustituye opcionalmente por alquilo (C1-C4);

m es 2-6;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

10 R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o 15 alquilheterociclo, en donderR es 0-4;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo.

20 5. El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la estructura de la Formula IV:

5

10

15

20

25

30

imagen4

en donde

Q es H, (CH2)qNRiR2, NRi(CH2)pNRbRc, ORi, SRi, o CHR1R2, en el que q es 0 o 1 y p es 2-4;

Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4;

n es 2-6;

R3 y R4 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo o alquilarilo, o R3 y R4 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo;

R5 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, heterociclo, ORa, SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, NRbRc, S(=O)2NRbRc, C(=O)ORa, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORa, o

NRbC(=O)Ra;

R6 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, (CH2)rC(=O)Oalquilo (C1-C4), arilo, aralquilo, heterociclo, (CH2)pNRbRc, o alquilheterociclo, en donde r es 0-4;

Y es oxfgeno, azufre, o NR11, donde R11 es hidrogeno, grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, o arilo;

R12 es alquilo, arilo, o heterociclo;

cada ocurrencia de Ra es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; y

cada ocurrencia de Rb, y Rc es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dicho Rb y Rc junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen forman opcionalmente un heterociclo;

siempre que cuando R5 y R6 sean H o alquilo C1-C3, entonces Q no es H.
6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 y 5, en donde Q es H, ORi, o SRi.
7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo, alquilarilo, heterociclo, alquilheterociclo, o Ri y R2 junto con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un heterociclo, que se puede sustituir opcionalmente por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados de alquilo (C1-C4), fenilo, bencilo, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en el que p es 2-4.
8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde NR1R2, NR3R4, y NRbRc son cada uno independientemente un heterociclo seleccionado de

y

en el que Rd es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, n-Bu, i-Bu, t-Bu, ChhCMea, Ph, ChhPh, C(=O)Ri2, (CH2)pORa, y (CH2)pNRbRc, en donde R12 es alquilo, fenilo, o heterociclo; Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno, o alquilo (C1-C4), o Rb y Rc, junto con el atomo de nitrogeno al cual se adhieren, forman un anillo heterocfclico saturado o insaturado que 5 contiene desde tres hasta siete atomos en el anillo, cuyo anillo puede contener opcionalmente otro heteroatomo seleccionado del grupo que consiste de nitrogeno, oxfgeno y azufre y opcionalmente se puede sustituir por de uno a cuatro grupos que pueden ser los mismos o diferentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, fenilo y bencilo; y p es 2-4; o R5 es hidrogeno, halogeno, alquilo (C1-C4), hidroxi, alcoxi (C1-C4), SRa, S(=O)Ra, S(=O)2Ra, S(=O)2NRbRc, en el que Ra, Rb y Rc son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo (C1-C4); o

10 R6 es hidrogeno,

imagen5

imagen6

imagen7

o alquilo (C1-C4).
9. Un compuesto de la reivindicacion 1 seleccionado del grupo que consiste de los Ejemplos 1-63 como se establece en las Tablas 1 y 2 adelante:

15 Tabla 1. Composiciones de purina seleccionadas, en las que Rz=NR3R4

Ejemplo No.

X Q Y L R3 R4 R5 R6

1

XX xCH3 r N 3 Xj NH (CH2)2- [ NR,R- = "l H H

2

XX NH (CH2)2- CH3 CH3 H H

3

XX „CH, O NH (CH2)2- CH3 CH3 H CH3

4

XX O NH (CH2)2- CH3 CH3 CH3 H

5

-(CH2)3- O S (CH2)2- CH3 CH3 CH3 CH3

Ejemplo No.

X Q Y L R3 R4 R5 R6

6

XX I o \ o \ NH (CH2)2- CH3 CH3 a CH3

7

XX XnX O (CH2)2- 0 N nr3fu= 1 OH H

8

XX ^n-ch> NH (CH2)2- 0 N NRsR4= 1 SH H

9

XX rf" NH (CH2)2- 0 N nr3r4= 1 Br H

10

XX NH (CH2)2- 0 N NR3FU = 1 Cl H

11

-(CH2)4- J<x NH (CH2)2- 0 N NRsR4= 1 SCH3 H

12

XX .Xx NH (CH2)2- 0 N nr3r4= 1 SO2CH3 H

13

XX O'™' Xx NH (CH2)2- 0 N NRSFU = 1 OCH3 H

14

XX o^HJ Xx NH (CH2)2- CH3 CH3 OH cr

Ejemplo

No.

X

Q

R3

R4

R5

Ra

15

imagen8

imagen9

NH

-(CH2)2-

imagen10

imagen11

16

imagen12

imagen13

NH

-(CH2)2-

imagen14

CH3

17

jy

imagen15

NH

-(CH2)3-

imagen16

CH3

18

imagen17

NH

-(CH2)2-

imagen18

19

imagen19

'Sh

NH

-(CH2)2-

imagen20

CH3

20

imagen21

'Sh

NH

-(CH2)2-

CH3

CH3

21

£Tia

o

NH

(CH2

)3-

CH3

CH3

22

imagen22

imagen23

NH

(CH2

)3-

CH3

CH3

CH3

CH3

23

imagen24

rp

NH

(CH2

)3-

CH3

CH3

CH3

Y

L

H

H

H

H

H

H

H

H

H

H

H

Ejemplo No.

X Q Y L R3 R4 R5 R6

24

xr rf S (CH2 )2- CH3 CH3 H H

Tabla 2. Composiciones Adicionales de purina Seleccionados de la Invencion

Ejemplo No.

X-Q Y L R3 R4 R5 R6 Ry

25

Cf' O (CH2) 2- H H n-C4H9

26

Cf S (CH2) 3- ( nr3r4 = H H "o

27

Cf xC NH (CH2) 2- H CH3 n-C4H9

28

rf xC NH (CH2) 5- CH3 CH3 H H NR3R4

29

cf NH (CH2) 2- CH3 CH3 H CH3 NR3R4

30

cf xC NH (CH2) 2- H H xx,

31

rf"‘ XXJ NH (CH2) 4- H n-C5Hn

32

NH (CH2) 2- CH2CH3 CH3 H H NR3R4

Ejemplo No.

X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

33

NH (CH2) 2- CH3 CH3 CH3 CH3 NR3R4

34

l.MC'l.: S (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

35

iro.,. NH (CH2) 3- CH3 CH3 H H NR3R4

36

nr NH (CH2) 4- [ WRjRa = 9 CH3 CH3 NR3R4

37

nr £T NH (CH2)4- CH3 CH3 H X>

38

nr Xn S (CH2)2- CH3 H x> N H

39

xn N(CH 3) (CH2)2- H H XI N CH3

40

"CQ NH (CH2)2- CH3 CH3 "a., H NR3R4

41

jO NH (CH2)2- CH3 CH3 o / H NR3R4

42

LL NH (CH2)2- CH3 CH3 X^nN;„, H NR3R4

43

XT NH (CH2)2- CH3 CH3 "et> H NR3R4

Ejemplo No.

X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

44

TX„, NH (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

45

NH (CH2) 2- CH3 CH3 H H NR3R4

46

NH (CH2) 2- NR3R4 = 0 N 1 H H NR3R4

47

xv? NH (CH2) 2- CH3 H H H NR3R4

48

JD NCH3 (CH2) 3- CH2CH3 CH2CH 3 X* / 0 / H NR3R4

49

NH (CH2) 2- P H H H NR3R4
50

.O NH (CH2) 3- rO H H H NR3R4

51

NH (CH2) 2- X> H H H NR3R4

52

rr^ NH (CH2) 2- CH3 H H NR3R4

53

p NH NCH3 (CH2) 2- CH3 H H H NR3R4

Ejemplo No.

X-Q Y L R3 R4 R5 R6 R7

54

h2 r^y'c'cHs NH (CH2) 2- 0 MRjRfl = 1 H H NR3R4

55

rf' NH (CH2) 2- 0 MRjRj = 1 H '-'-A/~'ch3 NR3R4

56

JO NH (CH2) 2- 0 1 NR3R4= 1 OH 0 NR3R4

57

X) NH (CH2) 2- Me i 0 nr3r4= 1 OH 0 NR3R4

58

NH (CH2) 2- 0 T NR3R4= 1 OH 0 NR3R4

59

JO NH (CH2) 2- 0 1 NR3R4= 1 H 0 NR3R4

60

X) NH (CH2) 2- Me i 0 V NR3R4= 1 H o N Me NR3R4

Ejemplo

No.

X-Q

R3

R4

R5

Ra

R7

61

imagen25

NH

(CH2)

2-

imagen26

imagen27

NR3R4

62

imagen28

NH

(CH2)

2-

imagen29

imagen30

NR3R4

63

imagen31

NH

(CH2)

2-

imagen32

OH

imagen33

NR3R4

Y

L

H

H
10. Una composicion farmaceutica que comprende por lo menos un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y un portador o diluyente farmaceuticamente aceptable.
11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para uso en el tratamiento de una 5 enfermedad autoinmunitaria en una especie de mamffero en necesidad de este.
12. Un compuesto para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria en una especie de mamffero de acuerdo con la reivindicacion 11,

en donde la enfermedad autoinmunitaria se selecciona de lupus eritematoso cutaneo y sistemico, diabetes mellitus dependiente de insulina, artritis reumatoide, esclerosis multiple, aterosclerosis, psoriasis, artritis psoriasica, enfermedad 10 inflamatoria del intestino, espondilitis anquilosante, anemia hemolftica autoinmunitaria, sfndrome de Behget, sfndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, sfndrome de Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, trombocitopenia idiopatica, io miastenia gravis, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, polimiositis/dermatomiositis, esclerosis biliar primaria, sarcoidosis, colangitis esclerosante, sfndrome de Sjogren, esclerosis sistemica (escleroderma y sfndrome de CREST), arteritis de Takayasu, arteritis temporal, y granulomatosis de Wegener.

15 13. Un metodo in vitro para inhibir la senalizacion inmunoestimuladora mediada por TLR en una celula que expresa un

TLR, que comprende poner en contacto dicha celula con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9.