ES2586247T3 - Composición vacunal para controlar las infestaciones por ectoparásitos - Google Patents
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Abstract
La presente invención se relaciona con el uso de un péptido de la proteína ribosomal PO en la fabricación de una composición vacunal para el control de las infestaciones por ectoparásitos y, por consiguiente, de la transmisión de sus patógenos asociados. Dicho péptido se localiza entre los aminoácidos 267 y 301 de la proteína PO, y puede ser obtenido por vía recombinante o mediante síntesis química. Dicho péptido puede ser fusionado a una proteína o péptido portador, o a un inmunopotenciador y ser incluido en una formulación oleosa. Las formulaciones vacunales que comprenden dicho péptido confieren protección contra las garrapatas y los ectoparásitos conocidos como "piojos de mar", sin que ocurra generación de autoinmunidad en el organismo hospedante. Entre dichas garrapatas se pueden mencionar las especies Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus e Ixodes scapularis, y entre los piojos de mar se encuentran aquellos de los géneros Caligus y Lepeophtheirus.
Description
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relativa y un fotoperíodo de 12:12 h (luz: oscuridad). Las teleoginas hembras ingurgitadas se mantuvieron en placas de plástico individuales inmovilizadas hasta la oviposición en las mismas condiciones.
No se observó cambio en el comportamiento normal, ni fiebre en ninguno de los animales. La respuesta humoral generada contra cada uno de los inmunógenos se evaluó mediante ELISA indirecto similar al descrito anteriormente, recubriendo las placas con 1 µg por pocillo de cada antígeno. En este caso se usó un anticuerpo anti-lgG de conejo conjugado a peroxidada (SIGMA) en diluciones 1:10000. Las medias de los títulos de anticuerpos se determinaron a partir de los valores individuales en cada grupo. Sólo se obtuvieron los títulos específicos contra Bm86 en los animales del grupo 3 inmunizados con Bm 86. Los títulos específicos contra el péptido de P0 (pP0) se obtuvieron solamente en el grupo 1 donde los animales se inmunizaron con el conjugado pP0-KLH y los títulos específicos contra KLH se obtuvieron en los grupos 1 y 2 inmunizados con el conjugado pP0-KLH y con KLH sola respectivamente (Figura 4).
Para estudiar el efecto de los inmunógenos sobre las garrapatas R. sanguineus se analizó el comportamiento de varios parámetros biológicos de las mismas. El tiempo promedio de alimentación y de recuperación se analizó en las larvas, ninfas y adultos. En el caso de larvas y ninfas se analizó además la muda y la capacidad del estadio posterior obtenido para infestar un animal virgen. En el caso de adultos se estudió además el peso de la hembra ingurgitada, el peso del aove y el porcentaje de eclosión. El índice de eficiencia de conversión a huevos se calculó según se describió previamente (GF Bennett y otros; Acarologia 1974, 16: 52-61), como el porcentaje de peso de la hembra convertido en huevos. En general, la alimentación de larvas, ninfas y adultos sobre los conejos inmunizados con Bm86 tomó más tiempo en alimentarse que los mismos estadios alimentados sobre los animales controles y vacunados con el péptido P0. Los valores de recuperación de larvas, ninfas y adultos entre los tres grupos se compararon mediante un ANOVA y la prueba de comparaciones múltiples de Bonferroni (p <0,01). En el caso de las larvas y ninfas se analizó la supervivencia o viabilidad como la cantidad final del estadio siguiente que fue capaz de infestar animales vírgenes con respecto a la cantidad de larvas y ninfas mudadas. Para los adultos, la viabilidad se midió como el número final de garrapatas capaces de sobrevivir después de la incubación y con capacidad de ovipositar. La media de la recuperación de larvas no mostró diferencias estadísticamente significativas entre los grupos experimentales. En el caso de la recuperación de ninfas, a pesar de una tendencia a recuperar menos ninfas alimentadas en los grupos inmunizados con pP0-KLH y con Bm86 que las ninfas alimentadas sobre el grupo control inmunizado con KLH, no existieron diferencias estadísticamente significativas respecto al grupo control inmunizado con KLH. En el caso de los adultos, la recuperación mostró diferencias estadísticamente significativas para el grupo vacunado con el antígeno pP0 con relación a los grupos control negativo y vacunados con Bm86 (Figura 5).
Hubo serios efectos en la viabilidad y apariencia de las ninfas recién mudadas de las larvas alimentadas en los grupos vacunados con los dos antígenos (pP0-KLH y Bm86) en comparación con el grupo control recolectado. El grupo vacunado con el pP0-KLH mostró una alta mortalidad de las ninfas recién mudadas con una clara participación de la morfología. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la viabilidad entre los grupos vacunados con la pP0-KLH y Bm86 en comparación con el grupo control negativo. Existen además diferencias significativas en la viabilidad entre el grupo vacunado con Bm86 y el grupo vacunado con pP0-KLH (Figura 6). La Tabla 1 muestra los porcentajes de mortalidad en cada grupo experimental.
Tabla 1. Porcentaje de mortalidad de las ninfas recién mudadas de las larvas alimentadas en los tres grupos experimentales. Las letras diferentes significan diferencias estadísticamente significativas obtenidas por un ANOVA seguido de una prueba de comparaciones múltiples de Bonferroni (P <0,001) de los datos transformados.
- Estadios
- Mortalidad (%)
- pP0-KLH
- 77,70b
- KLH
- 13,45a
- Bm86
- 44,70c
La capacidad de las ninfas y adultos recién mudados y de las larvas recién eclosionadas de los grupos experimentales para infestar un nuevo animal se determinó mediante la infestación de perros vírgenes con los ejemplares recuperados, mudados y viables para cada grupo experimental. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas para este parámetro entre los grupos experimentales.
El análisis estadístico de los datos de peso de la teleogina y del aove se realizó mediante un ANOVA y una prueba de comparaciones múltiples de Bonferroni (p <0,05). No se encontraron diferencias significativas para ambos parámetros entre los grupos experimentales. El índice de eficiencia de conversión a huevos no fue significativamente diferente entre los grupos vacunados y el grupo control. En este punto se aprecia que el 10 % de los adultos alimentados sobre los conejos inmunizados con pP0-KLH no pusieron huevos; aproximadamente 3 % en el grupo control inmunizado con KLH y 6 % no puso huevos en el grupo alimentado en los conejos inmunizados con Bm86. Se observaron diferencias estadísticamente significativas (p <0,01) en el % de eclosión de los huevos en el grupo inmunizado con pP0-KLH respecto al grupo control inmunizado con KLH (Figura 7). Aunque la oviposición por las teleoginas alimentadas en el grupo inmunizado con Bm86 tuvieron un por ciento de eclosión menor que en el grupo control negativo, estas
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