ES2586384T3 - Cepas de levadura y sus usos en la producción de lípidos - Google Patents

Abstract

Un microorganismo aislado seleccionado de la lista que incluye el microorganismo depositado con el N.º de acceso de ATCC PTA-11615, el microorganismo depositado con el N.º de acceso de ATCC PTA-11616 y el microorganismo depositado con el N.º de acceso de ATCC PTA-11617.

Description

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Las células de los microorganismos o biomasas pueden secarse antes de uso en una composición por métodos que incluyen, pero no se limitan a, liofilización, secado por aire, secado por pulverización, secado en túnel, secado a vacío (liofilización), o un proceso similar. Alternativamente, una biomasa recogida y lavada puede usarse directamente en una composición sin secar.

Los aceites microbianos de la invención pueden usarse como material de partida para producir más eficazmente un producto enriquecido en un ácido graso. Por ejemplo, los aceites microbianos de la invención pueden someterse a diversas técnicas de purificación conocidas en la técnica, tales como destilación o aducción de urea, para producir un producto de mayor potencia con mayores concentraciones de un ácido graso particular. Los aceites microbianos de la invención también pueden usarse en reacciones químicas para producir compuestos derivados de ácidos grasos en los aceites, tales como ésteres y sales de un ácido graso.

Una composición de la invención puede incluir uno o más excipientes. Como se usa en el presente documento, “excipiente” se refiere a un componente, o mezcla de componentes, que se usa en una composición de la presente invención para dar características deseables a la composición, que incluye alimentos, además de composiciones farmacéuticas, cosméticas e industriales. Un excipiente de la presente invención puede describirse como un excipiente “farmacéuticamente aceptable” cuando se añade a una composición farmacéutica, que significa que el excipiente es un compuesto, material, composición, sal y/o forma de dosificación que está dentro del alcance del criterio médico sensato, adecuado para el contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otras complicaciones problemáticas durante la duración deseada del contacto proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable. En algunas realizaciones, el término “farmacéuticamente aceptable” significa autorizado por una agencia reguladora del gobierno federal o uno estatal o enumerado en la farmacopea de los EE.UU. u otra farmacopea internacional generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos. Pueden usarse diversos excipientes. En algunas realizaciones, el excipiente puede ser, pero no se limita a, un agente alcalino, un estabilizador, un antioxidante, un agente de adhesión, un agente de separación, un agente de recubrimiento, un componente de fase exterior, un componente de liberación controlada, un disolvente, un tensioactivo, un humectante, un agente de tamponamiento, una carga, un emoliente, o combinaciones de los mismos. Excipientes, además de aquellos tratados en el presente documento, pueden incluir excipientes enumerados en, aunque no se limitan a, Remington: The Science and Practice of Pharmarcy, 21st ed. (2005). Está previsto que la inclusión de un excipiente en una clasificación particular en el presente documento (por ejemplo, “disolvente”) ilustre en vez de limite la función del excipiente. Un excipiente particular puede entrar dentro de múltiples clasificaciones.

Las composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, productos alimenticios, composiciones farmacéuticas, cosméticos y composiciones industriales.

En algunas realizaciones, la composición es un producto alimenticio. Un producto alimenticio es cualquier alimento para consumo animal o humano, e incluye composiciones tanto sólidas como líquidas. Un producto alimenticio puede ser un aditivo para alimentos animales o humanos. Los alimentos incluyen, pero no se limitan a, alimentos comunes; productos líquidos, que incluyen leches, bebidas, bebidas terapéuticas y bebidas nutricionales; alimentos funcionales; suplementos; nutracéuticos; leches de inicio, que incluyen leches de inicio para prematuros; alimentos para mujeres embarazadas o lactantes; alimentos para adultos; alimentos geriátricos; y alimentos para animales.

En algunas realizaciones, un microorganismo aislado, biomasa o aceite microbiano de la invención puede usarse directamente como o incluirse como un aditivo dentro de uno o más de: un aceite, grasa, untable, otro componente graso, bebida, salsa, alimento basado en lácteo o basado en soja (tal como leche, yogurt, queso y helado), un alimento horneado, un producto nutricional, por ejemplo, como un suplemento nutricional (en forma de cápsula o de comprimido), un suplemento vitamínico, un suplemento dietético, una bebida en polvo, un producto alimenticio en polvo acabado o semi-acabado, y combinaciones de los mismos.

Una lista parcial de composiciones alimenticias que pueden incluir un aceite microbiano de la invención incluye, pero no se limita a, productos basados en soja (leches, helados, yogures, bebidas, cremas, untables, cremas); sopas y mezclas de sopa; masas, pastas para rebozar y artículos alimenticios horneados que incluyen, por ejemplo, productos de panadería fina, cereales para el desayuno, pasteles, tartas de queso, tartas, magdalenas, galletas, barras, panes, rollos, galletitas, muffins, tortas, scones, picatostes, galletas saladas, productos dulces, bizcochos para picar, pasteles, barritas de granola/de picoteo, y pasteles para tostadora; dulces; confitería dura; chocolate y otros dulces; chicle; productos alimenticios líquidos, por ejemplo, leches, bebidas energéticas, leche de inicio, bebidas carbonatadas, tés, comidas líquidas, zumos de frutas, bebidas basadas en frutas, bebidas basadas en verduras; jarabes multivitamínicos, sustitutos de comidas, alimentos medicinales y jarabes; mezclas de bebida en polvo; pasta; productos de pescado procesados; productos cárnicos procesados; productos de ave de corral procesados; salsas espesas y salsas; condimentos (kétchup, mayonesa, etc.); untables basados en aceite vegetal; productos lácteos; yogurt; mantequillas; productos lácteos congelados; helados; postres congelados; yogures congelados; productos alimenticios semisólidos tales como alimentos infantiles; pudin y postres de gelatina; queso procesado y sin procesar; mezclas para tortitas; barritas alimenticias que incluyen barritas energéticas; mezclas para gofres; aderezos para ensalada; mezclas de sustitución de huevos; untables de frutos secos y basados en frutos secos; aperitivos salados tales como patatas fritas y otros fritos o crujientes, fritos de maíz, nachos, tentempiés

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extruidos, palomitas, pretzels, crujientes de patata, y frutos secos; especialmente tentempiés tales como salsas para mojar, tentempiés de frutos secos, tentempiés de carne, cortezas de cerdo, barritas dietéticas y tortas de arroz/maíz.

En algunas realizaciones, un aceite microbiano de la invención puede usarse para suplementar una leche de inicio. La leche de inicio puede estar complementada con un aceite microbiano de la invención solo o en combinación con un aceite físicamente refinado derivado de un microorganismo productor de ácido araquidónico (ARA).

En algunas realizaciones, la composición es un pienso para animales. Un “animal” significa cualquier organismo no humano que pertenece al reino Animalia e incluye, sin limitación, animales acuáticos y animales terrestres. El término “pienso para animales” o “alimento para animales” se refiere a cualquier alimento previsto para animales no humanos, tanto para peces; peces comerciales; peces ornamentales; larvas de peces; bivalvos; moluscos; crustáceos; marisco; gamba; larva de gamba; artemia; rotíferos; gamba de salmuera; filtradores; anfibios; reptiles; mamíferos; animales domésticos; animales de granja; animales de zoológico; animales para deportes; ganado para cría; animales para carreras; animales de exhibición; animales de reliquia; animales raros o en peligro de extinción; animales de compañía; animales de mascota tales como perros, gatos, cobayas, conejos, ratas, ratones o caballos; primates tales como monos (por ejemplo, cebus, rhesus, verde africano, patas, cinomolgo y cercopithecus), simios, orangutanes, babuinos, gibones y chimpancés; cánidos tales como perros y lobos; félidos tales como gatos, leones y tigres; équidos tales como caballos, burros y cebras; animales de uso alimentario tales como vacas, ganado vacuno, cerdos y ovejas; ungulados tales como ciervo y jirafas; roedores tales como ratones, ratas, hámsteres y cobayas; etc. Un pienso para animales incluye, pero no se limita a, un pienso para acuicultura, un pienso para animales domésticos que incluye pienso para mascotas, un pienso para animales de zoológico, un pienso para animales de trabajo, un pienso para ganado, o una combinación de los mismos

En algunas realizaciones, la composición es un pienso o suplemento para pienso para cualquier animal cuya carne o productos vayan a ser consumidos por los seres humanos, tales como cualquier animal del que se deriva carne, huevos o leche para consumo humano. Cuando se alimenta a tales animales, nutrientes tales como ciertos ácidos grasos pueden incorporarse en la carne, leche, huevos u otros productos de tales animales para aumentar su contenido de estos nutrientes.

En algunas realizaciones, la composición es un material secado por pulverización que puede desmenuzarse para formar partículas de un tamaño apropiado para consumo por zooplancton, artemia, rotíferos y filtradores. En algunas realizaciones, el zooplancton, artemia o rotíferos alimentados por la composición son a su vez alimentados a larvas de pez, peces, moluscos, bivalvos o crustáceos.

En algunas realizaciones, la composición es una composición farmacéutica. Composiciones farmacéuticas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, una composición antiinflamatoria, un fármaco para el tratamiento de enfermedad cardíaca coronaria, un fármaco para el tratamiento de arteriosclerosis, un agente quimioterapéutico, un excipiente activo, un fármaco para la osteoporosis, un antidepresivo, un anticonvulsivo, un fármaco anti-Helicobacter pilori, un fármaco para el tratamiento de enfermedad neurodegenerativa, un fármaco para el tratamiento de enfermedad hepática degenerativa, un antibiótico, una composición hipocolesterolemiante y una composición reductora de triglicéridos. En algunas realizaciones, la composición es un alimento médico. Un alimento médico incluye un alimento que está en una composición que va a consumirse o administrarse externamente bajo la supervisión de un médico y que está prevista para el tratamiento dietético específico de una afección, para la que se establecen requisitos nutricionales distintivos, basándose en los principios científicos reconocidos, por evaluación médica.

En algunas realizaciones, el aceite microbiano puede formularse en una forma de dosificación. Las formas de dosificación pueden incluir, pero no se limitan a, comprimidos, cápsulas, sellos, pellas, píldoras, polvos y gránulos, y formas de dosificación parenteral, que incluyen, pero no se limitan a, solución, suspensiones, emulsiones y polvos secos que comprenden una cantidad eficaz del aceite microbiano. También se conoce en la técnica que tales formulaciones también pueden contener diluyentes, cargas, disgregantes, aglutinantes, lubricantes, tensioactivos, vehículos hidrófobos, vehículos solubles en agua, emulsionantes, tampones, humectantes, hidratantes, solubilizantes, conservantes farmacéuticamente aceptables y similares. Las formas de administración pueden incluir, pero no se limitan a, comprimidos, comprimidos recubiertos de azúcar, cápsulas, comprimidos oblongos y píldoras, que contienen el aceite microbiano y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados.

Para administración por vía oral, el aceite microbiano puede combinarse con vehículos farmacéuticamente aceptables muy conocidos en la técnica. Tal vehículo permite que los aceites microbianos de la invención se formulen como comprimidos, píldoras, comprimidos recubiertos de azúcar, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, lechadas, suspensión y similares, para ingestión oral por un sujeto que va a tratarse. En algunas realizaciones, la forma de dosificación es un comprimido, píldora o comprimido oblongo. Preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse añadiendo un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de comprimidos recubiertos de azúcar. Excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, cargas tales como azúcar, que incluyen, pero no se limitan a, lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, pero no se limitan a, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma tragacanto,

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metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregantes, tales como, pero no se limitan a, la polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato de sodio. Preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen, pero no se limitan a, cápsulas duras hechas de gelatina, además de cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol, o sorbitol.

En algunas realizaciones, la composición es un cosmético. Los cosméticos incluyen, pero no se limitan a, emulsiones, cremas, lociones, máscaras, jabones, champús, lavados, cremas faciales, acondicionadores, maquillajes, agentes de baño y líquidos en dispersión. Los agentes cosméticos pueden ser medicinales o no medicinales.

En algunas realizaciones, la composición es una composición industrial. En algunas realizaciones, la composición es un material de partida para una o más fabricaciones. Una fabricación incluye, pero no se limita a, un polímero; un material fotográfico fotosensible; un detergente; un aceite industrial; o un detergente industrial. Por ejemplo, la patente de EE.UU. N.º 7.259.006 describe el uso de grasa y aceite que contiene DHA para la producción de ácido behénico y la producción de materiales sensibles fotográficos usando ácido behénico.

En algunas realizaciones, la composición es un biocombustible basado en lípidos fabricado convirtiendo el aceite biológico de la invención en el biocombustible basado en lípidos mediante medios conocidos en la materia, tales como mediante transesterificación del aceite biológico para producir el biodiésel. Los diferentes usos de los aceites biológicos de la presente invención para fines de biocombustible basado en lípidos incluyen, pero no se limitan a, usos como agente de calefacción, biodiésel para transporte, combustible para aviones, aditivos de combustible, combustibles de especialidad y lubricantes. En algunas realizaciones, la conversión de aceites biológicos en biocombustibles basados en lípidos implica procesos químicos y técnicas de refinado conocidas en el campo técnico, que también pueden producir o usarse para producir compuestos químicos de especialidad similares a los destilados de petróleo.

Kits que comprenden las composiciones

La invención se refiere adicionalmente a kits o envases que contienen una o más unidades de una composición de la invención. Los kits o envases pueden incluir unidades de un producto alimenticio, composición farmacéutica, cosmético o composición industrial que comprende el microorganismo aislado, biomasa o aceite microbiano de la invención, o combinaciones de los mismos. Los kits o envases también pueden incluir un aditivo que comprende el microorganismo aislado, biomasa o aceite microbiano de la invención, o combinaciones de los mismos, para la preparación de un alimento, cosmético, composición farmacéutica o composición industrial.

En algunas realizaciones, el kit o envase contiene una o más unidades de una composición farmacéutica que va a administrarse según los métodos de la presente invención. El kit o envase puede contener una unidad de dosificación, o más de una unidad de dosificación (es decir, múltiples unidades de dosificación). Si están presentes múltiples unidades de dosificación en el kit o envase, las múltiples unidades de dosificación pueden estar opcionalmente dispuestas para administración secuencial.

Los kits de la presente invención pueden contener opcionalmente instrucciones asociadas a las unidades o formas de dosificación de los kits. Tales instrucciones pueden estar en una forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos, aviso que refleja la autorización por la agencia de la fabricación, uso o venta para administración humana para tratar una afección o trastorno. Las instrucciones pueden estar en cualquier forma que exprese información sobre el uso de las unidades o formas de dosificación en el kit según los métodos de la invención. Por ejemplo, las instrucciones pueden estar en forma de material impreso,

o en forma de un dispositivo multimedia previamente grabado.

En el transcurso del examen de un paciente, un profesional médico puede determinar que la administración de uno de los métodos de la presente invención es apropiada para el paciente, o el médico puede determinar que la afección del paciente puede mejorarse por la administración de uno de los métodos de la presente invención. Antes de recetar cualquier pauta, el médico puede aconsejar al paciente, por ejemplo, sobre los diversos riesgos y beneficios asociados a la pauta. El paciente puede proveerse de la divulgación completa de todos los riesgos conocidos y la sospecha de riesgos asociados a la pauta. Tal asesoramiento puede proporcionarse verbalmente, además de en forma escrita. En algunas realizaciones, el médico puede proveer al paciente de materiales bibliográficos sobre la pauta, tal como información del producto, materiales educacionales y similares.

La presente invención también se refiere a métodos de educar a los consumidores sobre los métodos de tratamiento, comprendiendo el método distribuir las formas de dosificación con información para el consumidor en el punto de venta. En algunas realizaciones, la distribución se producirá en un punto de venta que tiene un farmacéutico o proveedor de servicios médicos.

El término “información para el consumidor” puede incluir, pero no se limita a, un texto en inglés, texto no en inglés, imagen visual, diagrama, grabación telefónica, página web y acceso a un representante del servicio de atención al

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0,1 g/l de penicilina G 0,1 g/l de sulfato de estreptomicina

* La mezcla de vitaminas contiene 100 mg/l de tiamina, 0,5 mg/l de biotina, 0,5 g/l de cianocobalamina ** La mezcla de metal traza PII contiene:

5 6,0 g/l de EDTA de Na2 0,29 g/l de FeCl3 6H2O 6,84 g/l de H3BO3 0,86 g/l de MnCl2 4H2O 0,06 g/l de ZnCl2

10 0,026 g/l de CoCl2 6H2O 0,052 g/l de NiSO4 6H2O 0,002 g/l de CuSO4 5H2O 0,005 g/l de Na2MoO4 2H2O

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Tabla 2

Medios Microorganismo Azúcar Temperatura (ºC) Biomasa g/l Microorganismo Azúcar pH % de 08:0 % de 09:0 % de 10:0 % de 11:0 % de 11:1 % de 12:0 % de 12:1 % de 13:0 % de 13:1 % de 14:0 % de 14:1 % de 15:1 % de 16:0 % de 16:1 % de 16:2 % de 16:3 % de 17:0 % de 18:0 % de 18:1 n-9 % de 18:1 n-7 % de 18:2 % de 18:3 n-6 % de 18:3 n-3 % de 18:4 n-3 % de 20:0 % de 20:1 n-9 % de 20:2 % de 20:3 n-9 % de 20:3 n-6 20:3 n-3 % de 20:4 ARA % de 20:5 n-3 EPA % de 22:0 % de 22:1 % de 22:2 % de 22:3 % de 22:4 n-6 % de 22:5 n-6 % de 22:5 n-3 % de 22:6 n-3 DHA % de 24:0 % de 24:1 % de grasa % de desconocido 08:0 09:0 10:0 11:0

1/4 BFGM Rhodotorula ingeniosa Sacarosa Xilosa 27 27 9,506 5,338 Rhodotorula ingeniosa Sacarosa Xilosa 6,9 6,78 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,17 0,18 0,00 0,00 0,58 0,73 0,00 0,00 0,00 0,00 18,14 19,62 0,64 0,69 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,88 4,13 61,79 59,54 0,43 0,19 8,83 9,76 0,06 0,00 2,71 2,54 0,00 0,00 1,18 0,92 0,29 0,30 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,14 0,00 0,00 0,54 0,55 0,00 0,00 0,17 0,21 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,21 0,20 0,00 0,00 55,19 45,79 0,38 0,31 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Sporidiobolus pararoseus Sacarosa 22,5 8,79 Sporidiobolus Sacarosa 6,68 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 16,02 0,29 0,00 0,00 0,11 4,86 60,78 0,00 9,75 0,00 4,72 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 65,17 3,46 0 0 0 0 Medio 2 Pseudozyma aphidis/rugulosa Glucosa 30 °C Pseudozyma aphidis/rugulosa Glucosa 0,8 Traza (<1,0 %) 21,9 6,6 2,1 40,4 24,7 0,8 0,5 1,1 1,1

Medios

1/4 BFGM Medio 2

Microorganismo

Rhodotorula ingeniosa Sporidiobolus pararoseus Pseudozyma aphidis/rugulosa

11:1

0,00 0,00

12:0

0,00 0,00 0

12:1

0

13:0

6,04 5,70 0

13:1

0,00 0,00 0

14:0

20,92 22,93 0

14:1

0,00 0,00 0

15:0 INT STD

681,22 684,35 112753

15:1

0,00 0,00 0

16:0

654,11 617,77 110650

16:1

23,02 21,84 2025

16:2

16:3

17:0

0,00 0,00 759

18:0

140,00 129,99 33583

18:1 n-9

2227,57 1874,95 419870

18:1 n-7

15,60 6,08 0

18:2

318,37 307,24 67375

18:3 n-6

2,23 0,00 0

18:3 n-3

97,78 79,91 32596

18:4 n-3

20:0

42,43 28,86 0

20:1 n-9

10,38 9,59 0

20:2

0,00 0,00 0

20:3 n-9

20:3 n-6

0,00 0,00 0

20:3 n-3

0,00 0,00 0

20:4 ARA

0,00 4,40 0

20:5 n-3 EPA

0,00 0,00 0

22:0

19,48 17,18 0

22:1

0,00 0,00 0

22:2

6,08 6,67 0

22:3

0,00 0,00 0

22:4 n-6

0,00 0,00 0

22:5 n-6

0-00 0,00 0

22:5 n-3

0,00 0-00 0

22:6 n-3 DHA

0,00 0,00 0

23:0 INT STD

0,00 0,00 0

24:0

7,55 6,45 0

24:1

0,00 0,00 0

Área total

4286,43 3833,56 803514

Total

3605,22 3149,22 690761

Ejemplo 3

Se cultivaron microorganismos aislados que tienen secuencias de ADN coincidentes con las del N.º de acceso de

5 ATCC PTA-11615 (Pseudozyma aphidis/rugulosa; cepa 28428), N.º de acceso de ATCC PTA-11616 (Sporidiobolus pararoseus; cepa 29404) y N.º de acceso de ATCC PTA-11617 (Rhodotorula ingeniosa; cepa 29794) y se determinaron la grasa total (ácidos grasos totales) y los perfiles de ácidos grasos. Los resultados se muestran en las Tablas 3 y 4.

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Tabla 4

Pseudozyma aphidis/rugulosa Cepa N.º: Cepa 28426 Medio: Medio 2 Azúcar: Glucosa Ácido graso

% de ácidos grasos totales (% en área)

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14:1

16:0 27,4

16:1 1,4

18:0 9,6 18,1 31,5

18:2 28,0

20:0 0,4

20:1 1,6

22:0 0,2

24:0

Claims (1)

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