ES2587139T3

ES2587139T3 - Derivados fluorados de aminotriazol

Info

Publication number: ES2587139T3
Application number: ES10725500.2T
Authority: ES
Inventors: Daniel Bur; Olivier Corminboeuf; Sylvaine Cren; Corinna Grisostomi; Xavier Leroy; Sylvia Richard-Bildstein
Original assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2009-06-09
Filing date: 2010-06-07
Publication date: 2016-10-20
Anticipated expiration: 2030-06-07
Also published as: NZ597453A; CA2760588C; JP5095035B2; CN102414207A; MX342440B; TW201102383A; AU2010258334A1; KR20120089380A; BRPI1010738A8; RU2544862C2; CN102414207B; CA2760588A1; IL216792A0; SG175363A1; MA33420B1; ZA201200127B; US20120101138A1; CL2011003097A1; AU2010258334B2; BRPI1010738A2

Abstract

Un compuesto de fórmula (I),**Fórmula** en la que A representa un grupo heteroarilo, en el que los dos puntos de unión de dicho grupo heteroarilo están en una disposición 1,3; R1 representa fenilo que está no sustituido, mono- o di-sustituido, en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente del grupo que consiste en halógeno, metilo, metoxi, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino; y R2 representa hidrógeno, metilo, etilo o ciclopropilo; o una sal de dicho compuesto.

Description

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N-(2-((2-(1,1-difluoroetil)oxazol-4-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)-2-metil-5-(m-tolil)oxazol-4-carboxamida; {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-fenil-oxazol-4-carboxílico; {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-dimetilamino-fenil)-oxazol-4carboxílico; {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-dimetilamino-4-fluoro-fenil)oxazol-4-carboxílico; y {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-dimetilamino-4-fluoro-fenil)-2metil-oxazol-4-carboxílico;

o las sales (en particular las sales farmacéuticamente aceptables) de tales compuestos.

31) Un compuesto más preferido de fórmula (I) como se define en la realización 1) es:

{2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-m-tolil-oxazol-4-carboxílico;

: o una sal (en particular una de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos).

La presente invención incluye también compuestos marcados isotópicamente, especialmente compuestos de fórmula (I) marcados con 2H (deuterio), compuestos que son idénticos a los compuestos de fórmula (I) excepto porque uno o más átomos se han reemplazado cada uno por un átomo que tiene el mismo número atómico, pero una masa atómica diferente a la masa atómica que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los compuestos de fórmula (I) y sus sales marcados isotópicamente, especialmente marcados con 2H (deuterio) y las sales de los mismos están dentro del ámbito de la presente invención. La sustitución del hidrógeno con el isótopo más pesado 2H (deuterio) puede dar lugar a una mayor estabilidad metabólica, dando como resultado, por ejemplo, una mayor vida media in-vivo o una reducción de los requerimientos de dosificación, o puede dar lugar a una reducción de la inhibición de las enzimas del citocromo P450, dando como resultado, por ejemplo, un perfil de seguridad mejorado. En una realización de la presente invención, los compuestos de fórmula (I) no están marcados isotópicamente, o están marcados solamente con uno o más átomos de deuterio. En una sub-realización, los compuestos de fórmula

(I): no están marcados en absoluto isotópicamente. Los compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente pueden prepararse en analogía a los procedimientos descritos más adelante, pero usando la variación isotópica apropiada de los reactivos o los materiales de partida adecuados.

La frase "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales de adición de ácidos y/o bases no-tóxicas, inorgánicas u orgánicas, por ejemplo la bibliografía "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201

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Donde se usa la forma plural para compuestos, sales, composiciones farmacéuticas, enfermedades y similares, se entiende que significa también un solo compuesto, sal, o similares.

Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para usarse como medicamentos. En particular, los compuestos de fórmula (I) modulan el receptor ALX, es decir, actúan como agonistas del receptor ALX y son útiles para la prevención o el tratamiento de enfermedades que responden a la activación del receptor ALX tales como enfermedades inflamatorias, enfermedades obstructivas de las vías respiratorias, afecciones alérgicas, infecciones retrovirales mediadas por VIH, trastornos cardiovasculares, neuroinflamación, trastornos neurológicos, dolor, enfermedades mediadas por priones y trastornos mediados por amiloides (especialmente enfermedad de Alzheimer); además ellos son útiles para la modulación de respuestas inmunes (especialmente aquellas producidas por vacunación). Especialmente, los compuestos de fórmula (I) son útiles para la prevención o el tratamiento de enfermedades tales como las enfermedades inflamatorias, enfermedades obstructivas de las vías respiratorias, afecciones alérgicas, trastornos cardiovasculares, neuroinflamación, trastornos neurológicos, dolor, enfermedades mediadas por priones y trastornos mediados por amiloides (especialmente la enfermedad de Alzheimer).

En particular, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para la prevención o el tratamiento de enfermedades seleccionadas de enfermedades inflamatorias, enfermedades obstructivas de las vías respiratorias y afecciones alérgicas.

Las enfermedades inflamatorias, las enfermedades obstructivas de las vías respiratorias y las afecciones alérgicas incluyen, pero no se limitan a uno, a varios o a todos los siguientes grupos de enfermedades y trastornos:

1) Lesión pulmonar aguda (LPA); síndrome de distrés respiratorio agudo/del adulto (SDRA); enfermedad pulmonar, de las vías respiratorias o de los pulmones obstructiva crónica (EPOC, OCRV), incluyendo bronquitis crónica o disnea asociada a los mismos; enfisema; así como también exacerbación de hiperreactividad de las vías respiratorias como consecuencia de otra terapia farmacológica, en particular otra terapia con inhalación de fármacos. Especialmente, las enfermedades inflamatorias, las enfermedades obstructivas de las vías respiratorias y las afecciones alérgicas incluyen EPOC y OCRV. 2) Enfermedades inflamatorias adicionales, enfermedades obstructivas de las vías respiratorias y afecciones alérgicas incluyen bronquitis de cualquier tipo o génesis. 3) Enfermedades inflamatorias adicionales, enfermedades obstructivas de las vías respiratorias y afecciones

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arterias renales, las arterias ilíacas, las arterias femorales y las arterias popliteales; trastornos tóxicos, inducidos por fármacos y metabólicos (incluyendo hipertensivos y/o diabéticos) de vasos sanguíneos menores (enfermedad microvascular) tales como las arteriolas retinianas, las arteriolas glomerulares, los vasa nervorum, las arteriolas cardíacas y lechos capilares asociados del ojo, el riñón, el corazón y los sistemas nerviosos central y periférico; y, ruptura de la placa de lesiones ateromatosas de los vasos sanguíneos principales tales como la aorta, las arterias coronarias, las arterias carótidas, las arterias cerebrovasculares, las arterias renales, las arterias ilíacas, las arterias femorales y las arterias popliteales.

Además, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para la prevención o el tratamiento de la neuroinflamación. Neuroinflamación se refiere a una producción de moléculas señalizadoras de células, activación de glías o rutas y respuestas de activación glial, citoquinas o quimiocinas proinflamatorias, activación de astrocitos o activación de rutas y respuestas de activación de astrocitos, activación de microglía o rutas y respuestas de activación microglial, respuestas relacionadas con estrés oxidativo tales como producción de óxido nítrico sintetasa y acumulación de óxido nítrico, proteínas de fase aguda, pérdida de sinaptofisina y Proteína de la Densidad Postsináptica 95 (PSD-95), componentes de la cascada del complemento, pérdida o reducción de la función sináptica, actividad de proteína quinasa (por ejemplo, actividad de proteína quinasa asociada a la muerte), déficits conductuales, daño celular (por ejemplo, daño de células neuronales), muerte celular (por ejemplo, muerte de células neuronales) y/o depósitos de β amiloide de placas amiloides.

Además, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para la prevención o el tratamiento de trastornos neurológicos.

En particular, los trastornos neurológicos incluyen, pero no se limitan a, epilepsia, ictus, isquemia cerebral, parálisis cerebral, esclerosis múltiple recidivante remitente, esclerosis múltiple progresiva, neuromielitis óptica, síndrome aislado clínicamente, enfermedad de Alpers, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), demencia senil, demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Rett, traumatismo de la médula espinal, lesión cerebral traumática, neuralgia del trigémino, polineuropatía inflamatoria crónica desmielinizante, síndrome de Guillain-Barré, neuralgia glosofaríngea, parálisis de Bell, miastenia gravis, distrofia muscular, atrofia muscular progresiva, atrofia muscular bulbar heredada progresiva, síndromes de disco vertebral herniado, roto o prolapsado, espondilosis cervical, trastornos del plexo, síndromes de destrucción de salida torácica, neuropatías periféricas, deterioro cognitivo leve, deterioro cognitivo, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y corea de Huntington (y especialmente epilepsia, ictus, isquemia cerebral, parálisis cerebral, esclerosis múltiple recidivante remitente, esclerosis múltiple progresiva, enfermedad de Alpers, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), demencia senil, demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Rett, traumatismo de la médula espinal, lesión cerebral traumática, neuralgia del trigémino, neuralgia glosofaríngea, parálisis de Bell, miastenia gravis, distrofia muscular, atrofia muscular progresiva, atrofia muscular bulbar progresiva heredada, síndromes de disco vertebral herniado, roto o prolapsado, espondilosis cervical, trastornos del plexo, síndromes de destrucción de salida torácica, neuropatías periféricas, deterioro cognitivo leve, deterioro cognitivo, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y corea de Huntington).

Además, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para la prevención o el tratamiento del dolor. El término dolor incluye, pero no se limita a dolor neuropático, dolor ejemplificado por afecciones tales como neuropatía diabética, neuralgia post herpética, neuralgia del trigémino, polineuropatía diabética dolorosa, dolor posterior a un ictus, dolor posterior a una amputación, dolor mielopático o radiculopático, dolor facial atípico y síndromes semejantes a causalgia.

Además, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para la prevención o el tratamiento de enfermedades mediadas por priones. Las enfermedades mediadas por priones, conocidas también como encefalopatías espongiformes transmisibles (EET) incluyen, pero no se limitan a kuru, síndrome de Gertsmann-Sträussler-Scheinker (GSS), Insomnio Familiar Fatal (IFF) y Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ).

Además, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 31), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son adecuados para el tratamiento de trastornos mediados por amiloides. Los trastornos mediados por amiloides se definen como enfermedades y trastornos, que están causados por o asociados a proteínas amiloides o semejantes a amiloides. Las enfermedades y trastornos causados por, o asociados a proteínas amiloides o semejantes a amiloides incluyen, pero no se limitan a la enfermedad de Alzheimer (EA), incluyendo enfermedades o condiciones caracterizadas por una pérdida de capacidad cognitiva de la memoria tal como, por ejemplo, deterioro cognitivo leve (DCL); demencia con cuerpos de Lewi; síndrome de Down; hemorragia cerebral con amiloidosis. En otra realización, las enfermedades y trastornos causados por o asociados a proteínas amiloides o semejantes a amiloides incluyen parálisis supranuclear progresiva, amiloidosis de cadenas ligeras de amiloide, neuropatías amiloides familiares, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld-Jakob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA), miositis con cuerpos de inclusión (MCI), diabetes de aparición adulta y amiloidosis cardíaca senil (y especialmente parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld-Jakob, enfermedad de Parkinson, demencia

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representa un grupo protector sililo apropiado tal como TMS, TIPS, TBDMS o TBDPS, preferentemente TBDMS.

Las reacciones de alcoholes con cloruro de metansulfonilo pueden dar como resultado la formación del respectivo cloruro o el respectivo derivado de mesilato dependiendo de las condiciones de reacción utilizadas; se sabe bien en la técnica que cambios ya pequeños en tales condiciones de reacción pueden tener influencia en el resultado de dichas reacciones; debe entenderse que normalmente ambos reactivos, el cloruro y el mesilato, podrían ser útiles como electrófilos en reacciones analizadas más adelante.

En algunos casos, los grupos genéricos A, R1 y R2 podrían ser incompatibles con el conjunto ilustrado en los esquemas presentados más adelante y por lo tanto requerirán el uso de grupos protectores (GP). El uso de grupos protectores se conoce bien en la técnica (ver, por ejemplo, “Protective Groups in Organic Synthesis", T.W. Greene,

P.G.M.: Wuts, Wiley-Interscience, 1999). Para los fines de la presente divulgación, se supondrá que tales grupos protectores están en su lugar apropiado cuando sea necesario.

A.: Síntesis de productos finales

La Sección A) en lo sucesivo en el presente documento describe procedimientos generales para preparar compuestos de fórmula (I).

A) Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse de aminas de estructura 1 por reacción con el cloruro de ácido carboxílico apropiado a una temperatura aproximadamente temperatura ambiente en un disolvente adecuado tal como CH2Cl2 en presencia de una base tal como Et3N o DIPEA. El cloruro de ácido carboxílico apropiado puede prepararse a una temperatura aproximadamente temperatura ambiente del ácido carboxílico correspondiente de estructura 7 por reacción con un reactivo tal como cloruro de oxalilo en presencia de DMF en un disolvente adecuado tal como tolueno. Alternativamente, las aminas de estructura 1 pueden acoplarse con el ácido carboxílico apropiado de estructura 7 usando condiciones convencionales de acoplamiento de amida tales como EDC / HOBt / DMAP, TBTU, HBTU o PyBOP, en presencia de una base tal como DIPEA o Et3N a una temperatura aproximadamente temperatura ambiente en un disolvente adecuado tal como CH2Cl2 para dar compuestos de fórmula (I).

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Los compuestos de estructura 1 pueden obtenerse a partir de compuestos de estructura 2 por reducción del grupo nitro bien por hidrogenación en presencia de un catalizador metálico tal como Pd/C, Pt/C o PtO2 a una temperatura aproximadamente temperatura ambiente en un disolvente adecuado tal como MeOH o EtOH o bien por reducción con un metal tal como hierro en una mezcla de disolventes tal como H2O / EtOH en presencia de cloruro de amonio a una temperatura que varía desde ta hasta 95 °C.

B. Síntesis de intermedios

Los compuestos de estructura 2 pueden prepararse a partir de compuestos de estructura 3 por fluoración con un agente de fluoración tal como trifluoruro de (dietilamino)azufre o trifluoruro de (bis(2-metoxietil)amino)azufre en presencia de una cantidad catalítica de un alcohol tal como EtOH en un disolvente tal como tolueno a una temperatura de aproximadamente 60 °C.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 2 pueden prepararse haciendo reaccionar Ms-O-CH2-A-CF2-CH3 o Cl-CH2-A-CF2-CH3 con 4-nitro-2H-[1,2,3]triazol (T. E. Eagles y col., Organic preparations and procedures 2 (2), 117119, 1970; P. N. Neuman, J. Heterocycl. Chem. 8, 51-56, 1971) en presencia de una base tal como K2CO3 o Cs2CO3 en un disolvente tal como acetona o AcCN a una temperatura aproximadamente ta o a 80 °C (con o sin adición de bromuro de tetrabutilamonio) usando en el caso que A represente oxazol-2,4-diilo un derivado de oxazol tal como metansulfonato de (2-(1,1-difluoroetil)oxazol-4-il)metilo u otro reactivo apropiado de fórmula Ms-O-CH2-A-CF2-CH3 o Cl-CH2-A-CF2-CH3. Alternativamente, la reacción puede realizarse en presencia de una base tal como DIPEA en un disolvente tal como DMF, acetona o una mezcla de ambas a una temperatura aproximadamente ta o a 50 °C.

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Los compuestos de estructura 3 pueden prepararse haciendo reaccionar Ms-O-CH2-A-C(O)-CH3 o Cl-CH2-A-C(O)-CH3 con 4-nitro-2H-[1,2,3]triazol (T. E. Eagles y col., Organic preparations and procedures 2 (2), 117-119, 1970; P.

N. Neuman, J. Heterocycl. Chem. 8, 51-56, 1971) en presencia de una base tal como K2CO3 o Cs2CO3 en un disolvente tal como acetona o AcCN a una temperatura aproximadamente ta o a 80 °C (con o sin adición de bromuro de tetrabutilamonio) usando en el caso que A represente furan-2,5-diilo un derivado de furano tal como 1(5-clorometil-furan-2-il)-etanonao en el caso que A represente oxazol-2,4-diilo un derivado de oxazol tal como éster 4-acetil-oxazol-2-ilmetílico de ácido metansulfónico o en el caso que A represente isoxazol-2,4-diilo un derivado de isoxazol tal como 1-(5-clorometil-isoxazol-3-il)-etanona u otro reactivo apropiado de fórmula Ms-O-CH2-A-C(O)-CH3 o Cl-CH2-A-C(O)-CH3. Alternativamente, la reacción puede realizarse en presencia de una base tal como DIPEA en un disolvente tal como DMF, acetona o una mezcla de ambos a una temperatura aproximadamente ta o a 50 °C.

Alternativamente, los compuestos de estructura 3 pueden prepararse mediante desprotección de un cetal de estructura 4 usando condiciones convencionales como:

▪: usar un ácido tal como HCl acuoso diluido en un disolvente tal como THF a una temperatura aproximadamente ta; o

▪: usar gel de sílice SCX en un disolvente tal como MeOH; o

▪: usar un ácido unido al gel de sílice tal como ácido tósico en un disolvente tal como MeOH; o

▪: usar un ácido tal como ácido fórmico en un disolvente tal como agua a una temperatura que varía de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 50 °C.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 3 pueden prepararse a partir de los respectivos compuestos de estructura 5 por la siguiente secuencia:

▪: Reducción de un éster de estructura 5 al correspondiente alcohol en condiciones de reducción convencionales usando un reactivo tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura aproximadamente ta o, alternativamente, un reactivo tal como DiBAL en un disolvente tal como THF a una temperatura que varía desde aproximadamente -78 °C hasta ta;

▪: Oxidación del alcohol al correspondiente aldehído en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos tales como MnO2, clorocromato de piridinio o NMO / TPAP en un disolvente tal como AcCN o CH2Cl2 a una temperatura aproximadamente ta;

▪: Adición de un reactivo de Grignard alquílico a una temperatura por debajo de ta (de preferencia aproximadamente -78 °C) en un disolvente tal como THF, o alternativamente, adición de un reactivo de trialquilaluminio a una temperatura de aproximadamente 0 °C en un disolvente tal como CH2Cl2, proporcionando el alcohol secundario correspondiente; y

▪: Oxidación del alcohol en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos tales como TPAP / NMO o MnO2 en un disolvente tal como CH2Cl2 o AcCN a una temperatura aproximadamente ta para proporcionar el compuesto de estructura 3.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 3 pueden prepararse a partir de los respectivos compuestos de estructura 6 (Ru representa metilo) por la siguiente secuencia

▪: Desprotección del derivado de éter de sililo usando un agente fluorado tal como TBAF en un disolvente tal como THF a una temperatura aproximadamente ta; y

▪: Oxidación del alcohol a la cetona correspondiente en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos tales como MnO2, clorocromato de piridinio o NMO / TPAP en un disolvente tal como AcCN o CH2Cl2 a una temperatura aproximadamente ta;

Alternativamente, los compuestos de estructura 3 pueden prepararse a partir de los respectivos compuestos de la estructura 6 (Ru representa hidrógeno) por la siguiente secuencia:

▪ desprotección del derivado de éter de sililo usando un agente fluorado tal como TBAF en un disolvente tal como THF a una temperatura aproximadamente ta;

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▪: Adición de un reactivo de Grignard alquilo a una temperatura por debajo de ta (de preferencia aproximadamente -78 °C) en un disolvente tal como THF, o alternativamente, adición de un reactivo de trialquilaluminio a una temperatura de aproximadamente 0 °C en un disolvente tal como CH2Cl2 proporcionando el alcohol secundario correspondiente; y

▪: Oxidación del alcohol en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos tales como TPAP / NMO o MnO2 en un disolvente tal como CH2Cl2 o AcCN a una temperatura aproximadamente ta para proporcionar el compuesto de la estructura 3.

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Los compuestos de estructura 4 pueden prepararse haciendo reaccionar Ms-O-CH2-A-C(ORx)2-CH3 o Cl-CH2-AC(ORx)2-CH3 con 4-nitro-2H-[1,2,3]triazol en presencia de una base tal como K2CO3 o Cs2CO3 en un disolvente tal como acetona o AcCN a una temperatura aproximadamente ta o a 80 °C (con o sin adición de bromuro de tetrabutilamonio) usando, en el caso que A represente furan-2,5-diilo, un derivado de furano protegido apropiado tal como 2-(5-clorometil-furan-2-il)-2-metil-[1,3]dioxolano o, en el caso que A represente tiofen-2,5-diilo, un derivado de tiofeno protegido apropiado tal como 2-(5-clorometil-tiofen-2-il)-2-metil-[1,3]-dioxolano o en el caso que A represente tiazol-2,4-diilo, un derivado tiazol protegido apropiado tal como éster 4-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol-2-ilmetólico de ácido metansulfónico o 4-clorometil-2-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol o, en el caso que A represente tiofen-2,4diilo, un derivado de tiofeno protegido apropiado tal como 2-(4-clorometil-tiofen-2-il)-2-metil-[1,3]dioxolano o 2-(5clorometil-tiofen-3-il)-2-metil-[1,3]dioxolano o, en el caso que A represente tiazol-2,5-diilo, un derivado de tiazol protegido apropiado tal como éster 5-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol-2-ilmetílico de ácido metansulfónico o 5clorometil-2-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol o, en el caso que A represente oxazol-2,5-diilo, un derivado de oxazol protegido apropiado tal como 2-clorometil-5-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-oxazol, u otro reactivo apropiado de fórmula Ms-O-CH2-A-C(ORx)2-CH3 o Cl-CH2-A-C(ORx)2-CH3. Alternativamente, la reacción puede realizarse en presencia de una base tal como DIPEA en un disolvente tal como DMF, acetona o una mezcla de ambos a una temperatura aproximadamente ta o a 50 °C.

Los compuestos de estructura 5 pueden prepararse haciendo reaccionar Ms-O-CH2-A-C(O)-O-R o Cl-CH2-A-C(O)-O-R con 4-nitro-2H-[1,2,3]triazol en analogía a aquellos de estructura 4 usando, por ejemplo, un éster metílico de ácido 5-clorometil-furan-2-carboxílico disponible en el mercado (A representa furan-2,5-diilo), o éster etílico de ácido 4clorometil-tiazol-2-carboxílico (A representa tiazol-2,4-diilo).

Los compuestos de estructura 6 pueden prepararse haciendo reaccionar Ms-O-CH2-A-CH(OSiGP)-Ru o Cl-CH2-A-CH(OSiPG)-Ru con 4-nitro-2H-[1,2,3]triazol disponible en el mercado en analogía a aquellos de estructura 4 usando, en el caso que A represente oxazol-2,5-diilo, un derivado de oxazol tal como 2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-5clorometil-oxazol o, en el caso que A represente oxazol-2,4-diilo, un derivado de oxazol protegido apropiado tal como éster 2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-oxazol-4-ilmetílico de ácido metansulfónico, u otro reactivo apropiado de fórmula Ms-O-CH2-A-CH(OSiPG)-Ru o Cl-CH2-A-CH(OSiPG)-Ru.

Puede prepararse 1-(5-clorometil-furan-2-il)-etanona usando la siguiente secuencia: a) protección de 5-hidroximetil2-furaldehído disponible en el mercado usando 3,4-dihidro-2H-pirano en presencia de tolueno-4-sulfonato de piridinio en un disolvente tal como CH2Cl2; b) metilación del aldehído usando por ejemplo cloruro de metilmagnesio en un disolvente tal como THF a una temperatura de aproximadamente 0°C; c) oxidación del alcohol secundario resultante usando un agente de oxidación tal como MnO2 en un disolvente tal como CH2Cl2 a una temperatura de aproximadamente 45 °C; d) extracción del grupo protector usando un ácido tal como Amberlyst 15 en un disolvente adecuado tal como MeOH a una temperatura de aproximadamente 35 °C; y e) cloración del alcohol usando, por ejemplo, Ms-Cl en presencia de una base tal como Et3N y DMAP en un disolvente tal como CH2Cl2 a una temperatura que varía desde 0 °C hasta la ta.

Puede prepararse 2-(5-clorometil-furan-2-il)-2-metil-[1,3]dioxolano usando la siguiente secuencia: a) protección de 1furan-2-il-etanona disponible en el mercado en presencia de ortoformiato de trimetilo y un catalizador tal como LiBF4 en un disolvente, tal como etilenglicol, a una temperatura de aproximadamente 95 °C; b) litiación con un reactivo de organolitio, tal como n-butil litio en un disolvente tal como THF a una temperatura de aproximadamente -78 °C y posterior adición de DMF; c) reducción con un agente reductor tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura de aproximadamente 0 °C; y d) cloración del alcohol usando, por ejemplo, cloruro de

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metansulfonilo en presencia de una base tal como Et3N y DMAP en un disolvente tal como CH2Cl2 a una temperatura de aproximadamente 0 °C.

Puede prepararse 1-(5-clorometil-isoxazol-3-il)-etanona usando la siguiente secuencia: a) protección de éster etílico de ácido 5-hidroximetil-isoxazol-3-carboxílico usando, por ejemplo, cloruro de terc-butildimetilsililo en presencia de una base tal como imidazol en un disolvente tal como THF; b) reducción con un agente reductor tal como DiBAL en un disolvente tal como THF a una temperatura por debajo de la ta; c) oxidación del alcohol en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos, tal como MnO2, en un disolvente tal como AcCN a una temperatura aproximadamente ta; d) adición de trimetilaluminio a una temperatura de aproximadamente 0 °C en un disolvente tal como CH2Cl2; e) oxidación del alcohol en condiciones oxidantes convencionales usando reactivos, tales como MnO2, en un disolvente tal como AcCN a una temperatura aproximada a la ta; f) desprotección del derivado de éter de sililo usando un agente fluorado tal como TBAF en un disolvente tal como THF a una temperatura aproximada a ta; y g) cloración del alcohol usando, por ejemplo, cloruro de metansulfonilo en presencia de una base tal como Et3N y DMAP en un disolvente tal como CH2Cl2 a una temperatura de aproximadamente 0 °C.

Puede prepararse 2-(5-Clorometil-tiofen-2-il)-2-metil-[1,3]dioxolano usando la siguiente secuencia: a) litiación de 2metil-2-tiofen-2-il-[1,3]dioxolano disponible en el mercado con un reactivo de organolitio tal como n-butil litio en presencia de N,N,N',N'-tetrametil-etilendiamina en un disolvente tal como THF a una temperatura de aproximadamente -78 °C y la posterior adición de DMF; b) reducción con un agente reductor tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura de aproximadamente 0 °C; y c) cloración del alcohol usando, por ejemplo, cloruro de metansulfonilo en presencia de una base tal como Et3N y DMAP en un disolvente tal como CH2Cl2 a una temperatura de aproximadamente 0 °C.

Puede prepararse éster 4-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol-2-ilmetílico de ácido metansulfónico usando la siguiente secuencia: a) reacción de 2,4-dibromo-tiazol disponible en el mercado con un reactivo de organolitio tal como n-butil litio en un disolvente tal como éter a una temperatura de aproximadamente -78 °C y la posterior formilación con N,N-dimetil-formamida a una temperatura que varía desde -78 °C hasta ta; b) reducción con un agente reductor tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura aproximada a ta; c) protección del alcohol usando cloruro de terc-butildimetilsililo en presencia de una base tal como imidazol en un disolvente tal como diclorometano; d) reacción del alcohol protegido con un reactivo de organolitio tal como n-butil litio en un disolvente tal como éter a una temperatura de aproximadamente -78 °C y posterior acetilación con N,N-dimetilacetamida a una temperatura que varía desde -78 °C hasta la ta; e) formación de cetal en presencia de ortoformiato de trimetilo y un catalizador tal como LiBF4 en un disolvente tal como etilenglicol a una temperatura de aproximadamente 95 °C; f) desprotección del grupo protector sililo en condiciones convencionales como TBAF en un disolvente tal como THF a una temperatura aproximada a ta o a 0 °C; y g) mesilación usando un reactivo tal como cloruro de metansulfonilo en un disolvente tal como CH2Cl2 en presencia de una base tal como Et3N y DMAP a una temperatura de aproximadamente 0 °C.

Puede prepararse 2-(4-clorometil-tiofen-2-il)-2-metil-[1,3]dioxolano como se describe para 2-(5-clorometil-furan-2-il)2-metil-[1,3]dioxolano pero a partir de 1-(4-bromo-2-tienil)-etan-1-ona disponible en el mercado.

Puede prepararse éster etílico de ácido 4-clorometil-tiazol-2-carboxílico usando la siguiente secuencia: a) reacción de éster etílico de ácido oxalámico disponible en el mercado con reactivo de Lawesson en un disolvente tal como tolueno a una temperatura de aproximadamente 80 °C; y b) ciclación con 1,3-dicloroacetona en un disolvente tal como tolueno a una temperatura de aproximadamente 110 °C.

Puede prepararse 4-clorometil-2-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol de éster etílico de ácido 4-cloro-metil-tiazol-2carboxílico por la secuencia descrita para la síntesis de compuestos de estructura 3 a partir de compuestos de estructura 5, seguido de la formación de cetal en presencia de ortoformiato de trimetilo y un catalizador tal como LiBF4 en un disolvente tal como etilenglicol a una temperatura de aproximadamente 90 °C.

Puede prepararse éster 5-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol-2-ilmetílico de ácido metansulfónico por la siguiente secuencia: a) reacción de 2-bromo-tiazol-5-carbaldehído disponible en el mercado con trimetil aluminio en un disolvente tal como diclorometano a una temperatura de aproximadamente 0°C; b) oxidación con un agente oxidante tal como MnO2 en un disolvente tal como acetonitrilo a una temperatura aproximada a ta; c) formación de cetal en presencia de ortoformiato de trimetilo y un catalizador tal como LiBF4 en un disolvente tal como etilenglicol a una temperatura de aproximadamente 95°C; d) litiación con un reactivo de organolitio tal como n-butil litio en un disolvente tal como éter a una temperatura de aproximadamente -78 °C y la posterior formilación con N,Ndimetilformamida; e) reducción con un agente reductor tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura aproximadamente ta; y f) mesilación usando un reactivo tal como cloruro de metansulfonilo en un disolvente tal como CH2Cl2 en presencia de una base tal como Et3N y DMAP a una temperatura de aproximadamente 0 °C.

Puede prepararse 5-Clorometil-2-(2-metil-[1,3]dioxolan-2-il)-tiazol por la siguiente secuencia: a) reducción de 2bromo-tiazol-5-carbaldehído disponible en el mercado con un agente reductor tal como NaBH4 en un disolvente tal como MeOH a una temperatura aproximadamente ta; b) protección del alcohol usando cloruro de tercbutildimetilsililo en un disolvente tal como CH2Cl2 en presencia de una base tal como imidazol; c) litiación con un reactivo de organolitio tal como n-butil litio en un disolvente tal como éter a una temperatura de aproximadamente

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Los ácidos de estructura 7 están disponibles en el mercado, se conocen bien en la técnica o se preparan de acuerdo con los procedimientos descritos a continuación.

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Los compuestos de estructura 7 en la que R2 representa Me pueden prepararse como se describe en el Esquema 1

5 haciendo reaccionar derivados de éster de ácido 3-oxo-propiónico con una solución acuosa de nitrito de sodio en presencia de un ácido tal como ácido acético glacial. La transformación posterior de la oxima con anhídrido acético en presencia de un ácido tal como ácido acético glacial y cantidades catalíticas de cloruros metálicos tales como cloruro de mercurio o cloruro de zinc y zinc en polvo, seguida de la ciclación en condiciones deshidratantes tal como cloruro de tionilo en cloroformo, seguido de la saponificación de la función éster usando procedimientos conocidos

10 en la especialidad como el tratamiento con una base tal como NaOH en un disolvente o una mezcla de disolventes tales como etanol/agua o THF proporcionó el derivado de ácido deseado. Los respectivos derivados de éster del ácido 3-oxo-propiónico están disponibles en el mercado o se conocen bien en la técnica.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 7 pueden prepararse como se describe en el Esquema 2 haciendo

15 reaccionar derivados de éster de ácido 3-oxo-propiónico con una solución de azida de 4-acetamido-bencenosulfonilo y una base tal como Et3N. El tratamiento posterior con un derivado de carboxamida y un catalizador tal como dihidrato de tetraquis(acetato)dirrodio(II) seguido de la ciclación usando trifenilfosfina y yodo en presencia de una base tal como Et3N dio el respectivo derivado éster. La saponificación de la función éster usando procedimientos conocidos en la técnica, como el tratamiento con una base tal como NaOH en un disolvente o una mezcla de

20 disolventes tales como etanol/agua o THF dio el derivado de ácido deseado. Los respectivos derivados de éster de ácido 3-oxo-propiónico están disponibles en el mercado o se conocen bien en la especialidad.

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Alternativamente, los compuestos de la estructura 7 en los que R2 representa hidrógeno pueden prepararse como se describe en el Esquema 2b haciendo reaccionar una solución de un derivado de ácido de fórmula R1COOH con 25 isocianoacetato de metilo en presencia de una base tal como sesquihidrato de carbonato potásico o DIPEA y DPPA

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en un disolvente tal como DMF. La saponificación de la función éster usando procedimientos conocidos en la técnica como el tratamiento con una base tal como NaOH en un disolvente o una mezcla de disolventes tal como etanol/agua o THF, dio el respectivo derivado de ácido. Los respectivos ácidos R1COOH están disponibles en el mercado o se conocen bien en la especialidad.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 7 pueden prepararse como se describe en el Esquema 3 por esterificación de un derivado de 3-fenilserina usando un reactivo tal como cloruro de tionilo en un disolvente tal como MeOH a una temperatura de aproximadamente 0 °C, seguido del acoplamiento con un derivado de ácido carboxílico R2-COOH usando condiciones convencionales tales como HOBt, DCC, N-metilmorfolina en un disolvente tal como

10 CH2Cl2 a una temperatura de aproximadamente 0 °C. La oxidación del alcohol con un reactivo oxidante tal como peryodinano de Dess-Martin en un disolvente tal como CH2Cl, seguido de la ciclación usando trifenilfosfina y yodo en presencia de una base tal como Et3N dio el respectivo derivado de oxazol. Los derivados de ácido deseados pueden obtenerse saponificando la función éster usando procedimientos conocidos en la técnica, como el tratamiento con una base tal como LiOH acuoso en un disolvente tal como dioxano.

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Alternativamente, los compuestos de estructura 7 pueden prepararse como se describe en el Esquema 4 usando la siguiente secuencia: a) formación de cloruro ácido por tratamiento de un ácido adecuado de fórmula R1COOH con cloruro de oxalilo y DMF catalítico en un disolvente tal como 1,2-dicloroetano a una temperatura aproximadamente ta; b) ciclación del cloruro de ácido resultante en un disolvente tal como THF usando isocianoacetato de etilo en 20 presencia de una base tal como Et3N y DMAP a una temperatura de aproximadamente 75 °C; c) apertura del oxazol resultante usando cloruro de acetilo en un disolvente tal como EtOH a una temperatura entre 10 y 85 °C; d) reacción de la amina con un anhídrido de fórmula R2C(O)-O-C(O)R2 en presencia de una base tal como acetato de sodio en un disolvente tal como agua. Alternativamente, puede hacerse reaccionar la amina con un cloruro ácido apropiado de fórmula R2C(O)Cl en presencia de una base tal como trietilamina; e) ciclación con la adición de un ácido tal como

25 ácido sulfúrico conc. a una temperatura aproximadamente ta; y f) saponificación de la función éster usando procedimientos conocidos en la especialidad como el tratamiento con una base tal como NaOH ac. en un disolvente tal como THF.

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EtOH: etanol

FA: ácido fórmico

ADF: autosómica dominante familiar

FC: cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice

5: FLIPR lector de placas de imágenes por fluorescencia

FPRL1: receptor formil peptídico tipo 1

FPRL2: receptor formil peptídico tipo 2

GSH: glutatión

h: hora u horas

HATU: hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

HBTU: hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio

HBSS: solución salina equilibrada de Hank

hept: heptano

VIH: virus de la inmunodeficiencia humana

15: HLM microsomas de hígado humano

HOBt: hidroxibenzotriazol

HOAt: 7-aza-1-hidroxibenzotriazol

HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento

IU: unidades internacionales

LC-EM: cromatografía líquida -espectrometría de masas

lem: longitud de onda de emisión

lex: longitud de onda de excitación

LPS: lipopolisacárido

m-CPBA: ácido meta-cloroperbenzoico

25: Me metilo

MeOH: metanol

min: minuto o minutos

mM: milimolar

µM: micromolar

ARNm: ácido ribonucleico mensajero

MPLC: cromatografía líquida de presión media

EM: espectrometría de masas

Ms: metansulfonilo

NADPH: nicotinamida adenina dinucleótido fosfato

35: nm nanómetro

nM: nanomolar

NMO: N-metil-morfolina-N-óxido

OAc: acetato

org.: orgánico

p: para

p-TsOH: ácido para-toluen sulfónico

GP: grupo protector

PL-Deta: dietilentriamina soportada en poliestireno

PL-HCO3: carbonato de hidrógeno soportado en poliestireno versión MP (macroporoso)

45: PTFE politetrafluoroetileno

Sal de Rochelle: tartrato de potasio y sodio

PyBOP: benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio-hexafluoro-fosfato

RCP: pureza radioquímica

RMN: resonancia magnética nuclear

rpm: rotación por minuto

ta: temperatura ambiente

sat.: saturado

SCX: intercambiador catiónico fuerte

SDS: dodecil sulfato sódico

55: Si-DCC sílice unida a DCC de Silicycle

sol.: solución

TBA: tetra-n-butilamonio

TBAF: fluoruro de tetra-n-butilamonio

TBME: éster metílico de terc-butilo

TBDMS: terc-butil-dimetil-sililo

TBDPS: terc-butil-difenil-sililo

TBTU: tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio

tBu: terc-butilo, butilo terciario

TFA: ácido trifluoroacético

65: THF tetrahidrofurano

TIPS: tri-isopropil-sililo

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10

15

20

25

30

35

40

45

50

TLC: cromatografía de capa fina

TMS: trimetil-sililo

TPAP: perrutenato de tetrapropilamonio

tR: tiempo de retención

TsOH: ácido p-tolueno sulfónico monohidrato

UV: ultravioleta

Vis: visible

I Química

Generalidades: Todas las temperaturas se indican en grados Celsius (°C). A menos que se indique lo contrario, las reacciones tienen lugar a temperatura ambiente.

Como material de SCX se utilizó SCX SiliaBond® de Silicycle.

Como DCC soportada en polímero, se utilizó PL-DCC de Polymer Laboratories.

La cromatografía analítica en capa fina (TLC) se realizó con placas de 0,2 mm: Merck, gel de sílice 60 F254. La cromatografía preparativa en capa fina (TLC) se realizó con placas de 0,2 o 0,5 mm: Merck, Gel de sílice 60 F254. La detección se realizó con UV o con una solución de KMnO4 (3 g), K2CO3 (20 g), NaOH al 5 % (3 ml) y H2O (300 ml) con calentamiento posterior.

La cromatografía en Columna ultrarrápida (FC) y la filtración se realizaron usando gel de sílice 60 Merck (0,0630,200 mm) o gel de sílice Macherey-Nagel (0,063-0,200 mm); elución con EA, hept, CH2Cl2, CHCl3, MeOH o mezclas de los mismos.

Las MPLC se realizaron usando Columnas Flash SI II, Isolute SPE de International Sorbent Technology, elución con EA, Et2O, hept, hexano, CH2Cl2, CHCl3, MeOH, NH4OH o mezclas de los mismos.

Condiciones de LC-EM 01 (si no se indica de otra manera): Analíticas: MS: Thermo Finnigan MSQ Surveyor MS con Bomba Binaria 1100 Agilent y DAD. Columna: Zorbax SB-AQ 5 m, 4,6x50 mm ID de Agilent Technologies. Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,04 %; B: AcCN; Gradiente: 5 % de B  95 % de B durante 1 min. Flujo: 4,50 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, el tR se da en min.

Condiciones de LC-EM 02 (si no se indica de otra manera): Analíticas: MS: Thermo Finnigan MSQ Plus con Bomba Binaria 1100 Agilent y DAD. Columna: Zorbax SB-AQ 5 m, 4,6x50 mm ID de Agilent Technologies. Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,04 %; B: AcCN; Gradiente: 5 % de B  95 % de B durante 1 min. Flujo: 4,50 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, el tR se da en min.

Condiciones de LC-EM 05c (si no se indica de otra manera): Analíticas: Bomba Binaria 3200Dionex GHP, EM: Thermo MSQ Plus, DAD: Dionex PDA 3000, ELSD: Sedere Sedex 85. Columna: Zorbax SB-AQ 1,8 m, 4,6x20 mm ID de Agilent Technologies, con termostato en el compartimento de la Dionex TCC-3200. Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,04 %; B: AcCN. Procedimiento: Gradiente: 5 % de B  95 % de B durante 1 min. Flujo: 4,5 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, el tR se da en min.

Condiciones de LC-EM 06 (si no se indica de otra manera): Analíticas: Bomba Binaria Dionex HGP-3000, EM: Thermo MSQ MS, DAD:, Dionex PDA 3000, ELSD: PolymerLab ELS 2100. Columna: Asentis C18 2,7 m, 3x30 mm ID de Sigma-Aldrich, con termostato en el compartimento de la Dionex TCC-3000. Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,05 %; B: AcCN. Procedimiento: Gradiente: 5 % de B  95 % de B durante 2,40 min. Flujo: 3,0 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, el tR se da en min.

Condiciones de LC-EM 07 (si no se indica de otra manera): Analíticas: Bomba Binaria Dionex HGP-3200RS, MS: Thermo MSQ Plus, DAD: Dionex DAD-3000RS, ELSD: Sedere Sedex 85. Columna: Zorbax SB-AQ 3,5 m, 4,6x50 mm ID de Agilent Technologies con termostato en el compartimiento de la Dionex TCC-3200 (40 °C). Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,04 %; B: AcCN. Procedimiento: Gradiente: 5 % de B  95 % de B a lo largo de 1 min. Flujo: 4,5 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, el tR se da en min.

Condiciones de LC-EM 08 (si no se indica lo contrario): Analíticas: Bomba Binaria Dionex HPG-3000, EM: Thermo MSQ MS, DAD: Dionex PDA 3000, ELSD: PolymerLab ELS 2100. Columna: XBridge C18 2,5 m, 2,1x20 mm, con termostato en el compartimiento de la Dionex TCC-3000 (50 °C). Eluyentes: A: H2O + TFA al 0,05 %; B: AcCN. Procedimiento: Gradiente: 5 % de B  95 % de B durante 2,00 min. Flujo: 1,4 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, tR se da en min.

HPLC preparativa: X-Bridge C18 5 m, 50x19 mm ID de Waters. Eluyentes: A: H2O + NH4OH al 0,5 %; B: AcCN; Gradiente: 10 % de B  90 % de B durante 5 min. Flujo: 40,0 ml/min. Detección: UV/Vis y/o ELSD y EM, tR se da en min.

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Procedimiento Experimental:

Mediciones de calcio intracelular:

Las células que expresaban el receptor ALX humano recombinante y la proteína G G16 (HEK293-hALXR-G16) se cultivaron hasta el 80 % de confluencia en Medio de Cultivo (MC). Las células se desprendieron de las placas de 5 cultivo con un tampón de disociación de células (Invitrogen, 13151-014) y ser recolectaron por centrifugación a 1.000 rpm a ta durante 5 min en un Tampón de Análisis (TA) (partes iguales de BSS de Hanks (Gibco, 14065-049) y DMEM sin Rojo Fenol (Gibco, 11880-028)). Después de 60 min de incubación a 37 °C en CO2 al 5 % en TA suplementado con 1 µM Fluo-4 (AM) (Invitrogen, F14202) y HEPES 20 mM (Gibco, 15630-056), las células se lavaron y se resuspendieron en TA. Se sembraron después sobre placas de ensayo FLIPR de 384 pocillos (Greiner, 10 781091) a 50.000 células en 70 µl por pocillo y sedimentadas por centrifugado a 1.000 rpm durante 1 min. Se formaron soluciones madre de los compuestos de prueba a una concentración de 10 mM en DMSO y se diluyeron a TA en forma seriada hasta las concentraciones requeridas para las curvas de respuesta de dosis de activación. Se usó WKYMVm (Phoenix Peptides) como un agonista de referencia. Un instrumento FLIPR Tetra (Molecular Devices) funcionó de acuerdo con las instrucciones estándar del fabricante, añadiendo 4 µl de compuesto de prueba disuelto 15 a 10 mM en DMSO y diluido previamente para el experimento en tampón de análisis para obtener la concentración final deseada. Los cambios en la fluorescencia se monitorizaron antes y después de la adición de los compuestos de prueba a lex=488 nm y lem=540 nm. Los valores máximos de emisión sobre el nivel base después de la adición de los compuestos se exportaron después de sustraer la base de referencia. Los valores se normalizaron al control de alto nivel (compuesto WKYMVm, concentración final 10 nM) después de sustraer el valor de la base de referencia

20 (adición de TA).

Las actividades antagonistas con respecto al receptor ALX (valores EC50) de los compuestos ejemplificados se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1

Compuesto: EC50 [nM]

Ejemplo 1: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-Metil-5-m-tolil-oxazol-4carboxílico: 8,1

Ejemplo 2: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-fenil-oxazol-4-carboxílico: 19

Ejemplo 3: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-m-tolil-oxazol-4carboxílico: 7,7

Ejemplo 4: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-fenil-oxazol-4carboxílico: 0,9

Ejemplo 5: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3,5-difluoro-fenil)-2-metiloxazol-4-carboxílico: 818

Ejemplo 6: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-(3-trifluorometilfenil)-oxazol-4-carboxílico: 14

Ejemplo 7: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 17

Ejemplo 8: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-metoxi-fenil)-oxazol-4carboxílico: 69

Ejemplo 9: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-ciclopropil-5-fenil-oxazol-4carboxílico: 291

Ejemplo 10: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-fenil-oxazol-4carboxílico: 6,3

Ejemplo 11: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-fluoro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 9,9

Ejemplo 12: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 46

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(continuación)

Compuesto: EC50 [nM]

Ejemplo 13: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-fluoro-5-metil-fenil)-2metil-oxazol-4-carboxílico: 1130

Ejemplo 14: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-(3-trifluorometoxifenil)-oxazol-4-carboxílico: 58

Ejemplo 15: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-2-metiloxazol-4-carboxílico: 23

Ejemplo 16: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 46

Ejemplo 17: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-m-tolil-oxazol-4-carboxílico: 11

Ejemplo 18: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3,5-difluoro-fenil)-2-metiloxazol-4-carboxílico: 661

Ejemplo 19: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-dimetilamino-fenil)oxazol-4-carboxílico: 33

Ejemplo 20: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-fluoro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 55

Ejemplo 21: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-metoxi-fenil)-oxazol-4carboxílico: 35

Ejemplo 22: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-dimetilamino-fenil)oxazol-4-carboxílico: 52

Ejemplo 23: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-m-tolil-oxazol-4-carboxílico: 10

Ejemplo 24: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-(3-trifluorometilfenil)-oxazol-4-carboxílico: 2,1

Ejemplo 25: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-oxazol-4carboxílico: 221

Ejemplo 26: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-fluoro-5-metil-fenil)-2metil-oxazol-4-carboxílico: 742

Ejemplo 27: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-(3-trifluorometoxifenil)-oxazol-4-carboxílico: 59

Ejemplo 28: {2-[5-(1,1-difluoro-etil)-furan-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-fenil-oxazol-4-carboxílico: 6,0

Ejemplo 29: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-2-metiloxazol-4-carboxílico: 5,6

Ejemplo 30: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-tiazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-etil-5-fenil-oxazol-4carboxílico: 11

Ejemplo 31: {2-[4-(1,1-difluoro-etil)-oxazol-2-ilmetil]-2H-[1,2,3]triazol-4-il}-amida del ácido 2-metil-5-m-tolil-oxazol-4carboxílico: 2,4

Ejemplo 32: N-(2-((2-(1,1-difluoroetil)oxazol-4-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)-2-metil-5-(m-tolil)oxazol-4-carboxamida: 12

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Claims

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