ES2592963T3 - Soporte sólido y método para aumentar la recuperación de material biológico del mismo - Google Patents

Soporte sólido y método para aumentar la recuperación de material biológico del mismo Download PDF

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Abstract

Un método de recuperación de un material biológico de un soporte sólido que tiene al menos una superficie revestida con un producto químico seleccionado del grupo que consiste en polivinil pirrolidona (PVP), poli-2-etil.2-oxazolina (PEOX), albúmina y caseína, que comprende las etapas de: i) poner en contacto una superficie de un soporte sólido con una muestra que contiene un material biológico; ii) secar dicha muestra sobre dicha superficie de dicho soporte; iii) almacenar el soporte; y iv) extraer dicho material biológico de la superficie.

Description

Soporte sólido y método para aumentar la recuperación de material biológico del mismo
Campo de la invención
La presente invención se refiere a soportes sólidos, y se ocupa en particular de los soportes sólidos que se pueden usar en el almacenam iento, la recuperación y el procesamiento posterior de materiales biológicos, tales como fármacos biofarmacéuticos.
Antecedentes de la invención
El uso de soportes sólidos, tales como papel de fillro, para la recogida y el análisis de sangre humana se remonta a comienzos de la década de 1960, cuando el Dr. Robert Guthrie usó muestras de manchas de sangre seca (DBS) para medir la fenilalanina en recién nacidos para la detección de la fenilcetonuria (Mei, J., et al., 2001; Joumal of Nutrition, 131 :1631S-1636S). Esta aplicación nueva para la recogida de sangre condujo al cribado de la población de recién nacidos para la detección de enfermedades metabólicas hereditarias tratables. La DBS se ha usado a lo largo de 40 años para cribar en busca de una gran variedad de trastomos metabólicos neonatales
Las muestras de DBS se recogen transfiriendo sangre completa a un soporte sólido, tal como una membrana, fibra de vidrio o papel, de sangre venosa o directamente de un pinchazo en un dedo o talón, lo que hace que este método sea especialmente adecuado para el envío de muestras desde clínicas periféricas a laboratorios centrales. Además, las DBS envasadas en bolsas de plástico con cierre hermético con un desecante se pueden almacenar y enviar a temperatura ambiente, por lo que se evita la necesidad del i) almacenamiento con cadena de fria y ii) transporte especializado rápido. Las DBS recogidas aplicando una gota de sangre sobre un material absorbente, tal como papel Whatman 903 Neonatal STO, no están sometidas al Reglamento de Materiales Peligrosos de la lATA (Apéndice 11 , marzo de 2005).
Los soportes sólidos de papel adicionales que se usan para la recogida, ellransporte y el almacenamiento de DBS y otros fluidos corporales para fines de cribado neonatal y de recién nacidos incluyen:
Ahlstrom 226
2. Munktell TFN (marcado CE)
3 Toyo Roshi grado 545 Advantec Toyo, Tokio (véase Elvers L et al 2007; J Inherit Medtab Dis 3D, 4, 609).
Todos estos papeles, como el papel Whatman 903 Neonatal STO, consisten en fibras de algodón. Los papeles Whatman 903 Neonatal STO y Ahlstrom 226 están clasificados como dispositivos médicos de clase 11. Los soportes sólidos de papel que tienen la posibilidad de transformarse en dispositivos para fines de cribado neonatal y de recién nacidos incluyen los fabricados por Macherey Nagel (p.ej. MN818), Reeve Angel (p.ej. Double Ring) y Hahnemuhle Grado 2292.
Los costes consumibles para DBS son menores de 1 dólar de EE.UU. por ensayo, y los costes de transporte se reducen notablemente en comparación con el plasma, que requiere un formato líquido y condiciones de transporte especializado (Johannessen, A., et al., 2009; J Antimicrobial Chemotherapy, 64, 1126-1129). Aunque los costes de ensayo reales permanecen inalterados, y la extracción de los analitos de DBS implica cierto tiempo extra de manipulación en un laboratorio centralizado, el uso de DBS y de manera especifica los soportes sólidos de papel se usan cada vez más en el almacenamiento y/o el análisis de materiales biológicos tales como ácidos nucleicos, proteínas etc. Además, también se ha utilizado DBS durante el proceso de descubrimiento de fármacos, en el que se han introducido compuestos farmacológicos candidatos de peso molecular bajo en animales de ensayo y se han monitorizado las concentraciones en la sangre
En años recientes, las proteínas recombinantes obtenidas mediante biotecnologia, los péptidos y los fármacos basados en anticuerpos, así como los oligonucleótidos inversos y el ADN para terapia génica se han transformado en agentes terapéuticos convencionales, y actualmente constituyen una porción sustancial de los compuestos en desarrollo clínico Estos agentes se denominan habitualmente "fármacos biotecnológicos" o "fármacos biofarmacéuticos", para diferenciarlos de los compuestos farmacológicos de peso molecular bajo
El análisis metabólico y farmacocinético de fármacos (DMPK) de los fármacos biotecnolágicos y de los compuestos farmacológicos de peso molecular bajo es importante, ya que el análisis DMPK es vital para el descubrimi91to de fármacos ya que permite comprender cómo los candidatos farmacológicos pueden ser absorbidos, metabolizados y excretados por el cuerpo. Los análisis se llevan a cabo de manera rutinaria en la etapa de descubrimiento del fármaco, e implican administrar a los animales el compuesto de interés, y medir la concentración del fármaco (o meta bolito) en los fluidos biológicos en función del tiempo. Esto genera una información valiosa, tal como el aclaramiento del fármaco, la biodisponibilidad, etc., pero exige una cantidad significativa de tiempo y recursos (Beaudette, P., et al., 2004; J. of Chromatography B 809, 153-158).
Los problemas principales asociados al análisis DMPK, llevado a cabo en general en programas de cribado de 2
fármacos, son la carencia aparente de un medio de almacenamiento adecuado para mantener la estabilidad e integridad en las muestras de sangre antes del análisis. Las metodologías actuales usan plasma o sangre completa recogida en los momentos designados de los animales a los que se administraron dosis. Sin embargo, este método tiene varias desventajas, que incluyen la implicación de procedimientos que consumen mucho tiempo, que crean un obstáculo en el proceso de análisis. Además, el sangrado múltiple de animales individuales para experim entos a lo largo del tiempo es rest rictivo. Esto impone una limitación sobre el rendimiento e incrementa el uso de animales, lo que da como resultado que se puedan adelantar menos compuestos principales
El pequeño volumen de sangre necesario para DBS permite la toma de muestras de sangre en serie de un animal en vez de sangrados compuestos de varios animales, lo que mejora significativamente la calidad de los datos y estudios DMPK Y toxicocinéticos. Los beneficios éticos del volumen reducido de sangre (en general 15-20 ~I por mancha) necesario para la DBS con respecto a las "3 Rs~ (reducción, refinamiento y reemplazo) son evidentes en el desarrollo preclínico de fármacos. El número de animales de ensayo se puede reducir significativamente. Además, es posible la toma de muestras de sangre no terminal en estudios de toxicidad juvenil, que soo cada vez más demandados por las autoridades como parte de la evaluación de la segu ridad de los fármacos para uso pediátrico otra ventaja para los estudios de toxicologia regulatoria/animal es el incremento de la calidad de los datos
Por lo tanto, debido a la necesidad creciente del análisis rápido de grandes cantidades de muestras de sangre en la investigación farmacocinética, la DBS se ha convertido en una opción atractiva. Para que el papel actúe como soporte sólido para DBS, es deseable que el papel combine propiedades mecánicas satisfactorias con la capacidad de mantener el material biológico de interés en una condición estable, de tal manera que se pueda someter a un procesamiento y/o análisis adicional tras el almacenamiento. Los ejemplos de tales papeles usados para los análisis DMPK son los conocidos como los papeles de recogida de muestras 903 Neonatal y también los papeles conocidos como FTA y FTA Elute descritos, por ejemplo, en los números de patentes de EE.UU. 5.75.126 Y 5.939.259.
Los soportes sólidos de papel adicionales usados para los análisis DMPK incluyen los siguientes
1 Papel Ahlstrom grado 226·
Use of Dried Plasma Spots in the Determination of Pharmacokinetics in Clinical Studies: Validation of a Quantitative Bioanalytical Method.
Barfield, M., et al., (2011), Anal., Chem., 83, 118-124
2. Papel de filtro estandarizado:
Drug monitoring of lamotrigine and oxcarbazepine combination during pregnancy.
Wegner, l., el al., (2010), Epilepsia, 51, 2500-2502.
3. Whatman 903, sustratos HA (DMPK-A) Y HA Elute (DMPK-B):
Effect of storage conditions on the weight and appearance of dried blood spot samples on various cellulose-based substrates
Denniff, P., et al ., (2010 ), Bioanalysis, 2, 11,1817-22.
4. Whatman DMPK-A, -B, -C:
Application of DBS for quantitative assessment of the peptide Exendin-4; comparison of plasma and DBS method by UHPLC-MSfMS .
Kehler, R. , et al., (2010), Bioanalysis, 2, 8, 1461-1468
5. Papel Ahlstrom grado 237·
Application of a Liquid Extraction Based Sea ling Surface Sampling Probe far Mass Spectrometric Analysis of DBS & Mouse Whole-Body Thin Tissue Sections
Van Berkel, G., et al., (2009), Anal., Chem., 2009, 81, 21, 9146-9152
6. Tarjetas de manchas de sangre Whatman FTA:
Dried blood spots as a sample collection technique for Ihe determination of pharmacokinetics in clinical studies· considerations for the validation of a quantitative bioanalytical method.
Spooner, N., et al., (2009), Anal Chem. 81, 1557 -63
7. Microlarjela Whalman FTA Elule:
Sludy of dried blood spots lechnique for the determination of dextromethorphan and ils metabolite dextrorphan in human whole bload by LC-MS/MS.
liang, X., et al., (2009), J. Chrom B, Anal Tech Biomed & life Sci, 877, 799-806
8. Tarjetas de papel de filtro Whatman:
A liquid chromatographyfTandem mass spectrometry methad for determination of 25-hydroxy vitamin D2 and 25hydroxy vitamin D3 in dried blood spots: a potential adjunct to diabetes and cardiometabolic risk screening. Newman, M., et al., (2009), J Diabetes Sci and Tech. 3, 156-162
9.
Papel de filtro Toyo Roshi N° 545 (Advantec Toyo, Tokio)·
Simultaneous determination of 17a-hydroxypregnenolone and 17a-hydroxyprogesterone in DBS from low birth weight infants using LC-MS/MS. Higashi, T., et al., (2008), J. Pharm and Biomedical Analysis, 48, 1, 177-182.
10.
Papel de recogida de muestras Whatman BFC 180· Determinatioo of morphine & 6-acetylmorphine in blood with use of dried blood spots. Garcia-Boy, R., et al., (2008), Therapeutic Drug MonitOfing, 30, 6, 733-739.
11 Papel de filtro Whatman (nO de catálogo 10535097)· Quantificalion of cationic anli-malaria agenl methylene blue in different human biological matrices using calion exchange chromatography coupled to tandem mass spectrometry. Burhenne, J., et al., (2008), J Chrom B, Anal. Tech Biomed & Life Sci, 863, 273-282
12.
Whalman 3MM: Use of filter paper tor sample collection and transport in steroid pharmacology. Howe, C., et al., (1997), Clin Chem. 43, 1408-15
13.
Whatman HA, FTA Elute, DMPK-A, B, C, Ahlstrom 226 -
Determination of TamiflU® and active metabolite in dried bload spots using the SCAPTM DBS system and columnswitching LC-MS/MS.
Heinig, K., et al., F. Hoffmann-La Rache, Basilea, Suiza.
(véase: http://www.research.co.uklpages/products/applications/1725/Determination%200f%20Tamiflu%C2%AE% 20and%20active%20metabolite%20in%20dried%20blood%20spots%20using%2Othe%20SCAPTM%20DBS%20syst em.pdf)
Los soportes sólidos de papel que tienen la posibilidad de transformarse en dispositivos para fines de DMPK incluyen Munktell grado TFN, Toyo Roshi grado 545, Macherey Nagel (p.ej. MN818), Reeve Angel (p.ej. Double Ring) y Hahnemuhle Grado 2292).
Para el procesamiento y análisis posteriores eficaces, el analito de interés (tal como protelnas endógenas o fármacos biotecnológicos) se debe extraer fácilmente del soporte sólido de papel mediante el uso de técnicas relativamente simples que son adaptables a un formato de alto rendimiento.
Se ha descrito la combinación de DBS y la detección de una proteína endógena en la bibliografia cientifica. Por ejemplo, el biomarcador de fibrosis quística (Fa) tripsina inmunorreactiva (TI), el primer uso informado de TI endógena de DBS para el cribado de FQ fue publicado por Ryley et al., en 1981 (J. Clin. Pathol. 34, 906-910). Desde entonces, se ha usado TI de manera rutinaria como indicador de Fa mediante el uso de DBS de neonatos. Varias organizaciones comerciales suministran kits de inmunoensayos aprobados por la FDA para esta aplicación. Muchos usan simplemente una aproximación ~en papel~, en la que una perforación de papel que contiene la DBS se aplica directamente en el inmunoensayo y el analito de interes se extrae in situ. Recientemente (lindau-Shepard y Pass, 2010, Clinical Chem. 56, 445-450) demostraron que la TI existe en dos isoformas diferentes. Estos autores informaron del desarrollo de un inmunoensayo basado en una matriz en suspensión (o en papel) para el diagnóstico de Fa mediante el uso de las dos isoformas diferentes de TI. Todos estos estudios basados en proteínas se llevaron a cabo con tarjetas de Guthrie sin revestir (papel Whatman 903).
Desde el comienzo del cribado anónimo de la inmunodeficiencia humana (VIH), se han llevado a cabo más de 1,2
millones de ensayos de DBS para la detección serológica de los anticuerpos endógenos anti-VIH en la sangre de mujeres gestantes.
Estos estudios han demostrado que i) las preocupaciones sobre el almacenamiento a largo plazo de la sangre y de cualquier proteína asociada de interés han demostrado ser infundadas y ii) la presencia de hemo en la DBS no interfiere con el rendimiento del ensayo.
Por lo tanto, es deseable producir soportes sólidos que proporcionen un medio de almacenamiento simple y estable para los materiales biológicos, que incluyen i) restos endógenos y ii) fármacos biofarmacéuticos o biotecnológicos, que proporcionen un rendimiento o recuperación elevada del material biológico en el procesamiento posterior. La presente invención aborda estas necesidades y proporciona métodos que aumentan los niveles de recuperación de materiales biológicos tales como fármacos biofarmacéuticos de muestras biológicas almacenadas en forma de DBS en soportes sólidos, en particular soportes sólidos de papel.
Definiciones
La expresión "material biológico", tal como se usa en la presente memoria, significará cualquier "biomolécula", "biomolécula obtenida de manera sintética", "fármaco biofarmacéutico" o "componente celular", como se define más adelante:
i) Una biomolécula es cualquier molécula orgánica que es producida por un organismo vivo, que incluye moléculas poliméricas grandes tales como proteinas, polisacáridos y ácidos nucleicos, así como moléculas pequeñas de peso molecular bajo tales como metabolitos primarios, metabolitos secundarios, y productos naturales.
ii) Una biomolécula obtenida de manera sintética es una "biomolécula" como se definió en i) anteriormente que se genera mediante el uso de tecnologías de AON recombinante o se sintetiza químicamente mediante otros métodos in vi/ro sin organismos vivos.
iii) Un fármaco biofarmacéutico (o "fármaco biotecnolágico") es una proteína recombinante obtenida de manera biotecnológica, péptido o fármaco basado en anticuerpos, o un oligooucleótido inverso, ácido peptidonucleico (APN)
o ácido desoxirribonucleico (ADN) para terapia génica
iv) Un componente celular es una sustancia o sustancias únicas sumamente organizadas de las cuales están compuestas las células, y por tanto los organismos vivos. Los ejemplos incluyen membranas, orgánulos, proteínas y ácidos nucleicos. Aunque la mayoría de los componentes celulares están localizados dentro de la propia célula, algunos pueden existir en las áreas extracelulares de un organismo
Sumario de la invención
Según un primer aspecto de la presente invenciÓfl, se proporciona un soporte sólido que tiene al menos una superficie revestida con un producto químico que aumenta la recuperación de un material biológico de dicha superficie, en el que el producto quimico se selecciona del grupo que consiste en un polímero de vinilo, polímero sintético no iónico y proteína.
En un aspecto, el soporte sólido se selecciona del grupo que consiste en papel, microfibra de vidrio y una membrana.
En otro aspecto, el papel es un papel de celulosa. Preferiblemente, el papel es una tarjeta 903 Neonatal STO o DMPK-C
En un aspecto adiciooal, la membrana se selecciona del grupo que consiste en poliéster, poliéter sulfona (PES), poliamida (Na ilon), polipropileno, politetrafiuoroetileno (PTFE), policarbonato, nitrato de celulosa, acetato de celulosa y óxido de aluminio
En otro aspecto, el polímero de vinilo es polivinil pirrolidona (PVP)
En un aspecto adicional, el polímero sintético no iónico es poli-2-etil-2-oxazolina (PEOX).
En un aspecto, la proteína se selecciona del grupo que consiste en albúmina y caseína.
Según un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un método de recuperación de un material biológico de un soporte sólido que comprende las etapas de
i) poner en contacto una superficie de un soporte sólido como se describió anteriormente en la presente memoria con una muestra que contiene un material biológico;
ii) secar la muestra sobre la superficie del soporte;
iii) almacenar el soporte; y
iv) extraer el material biológico de la super1icie
En un aspecto, la etapa iii) comprende almacenar el soporte de papel a una temperatura en el intervalo de 15 a 40 "C. Preferiblemente, la temperatura está en el intervalo de 20 a 30 "C. En otro aspecto, el soporte de papel se almacena a una temperatura inferior dependiendo de la estabilidad térmica del material biológico.
La naturaleza de la muestra dependerá de la fuente del material biológico. Por ejemplo, la fuente puede ser de una variedad de organismos biológicos que incluyen, pero sin limitación, virus, bacterias, vegetales y animales. Preferiblemente, la fuente será un mamífero o un sujeto humano. Para fuentes mamíferas y humanas, la muestra se puede seleccionar del grupo que consiste en un tejido, célula, sangre, plasma, saliva y orina
En otro aspecto, el material biológico se selecciona del grupo que consiste en una biomolécula, biomolécula obtenida de manera sintética, componente celular y fármaco biofarmacéutico.
En un aspecto adicional, el material biológico es un fármaco biofarmacéutico
En un aspecto, el soporte es un papel. Preferiblemente, el papel es un papel de celulosa. Más preferiblemente, el papel es una ta~eta 903 Neonatal STO o OMPK-C
Según un tercer aspecto de la presente invención, se proporciona un método para fabricar un soporte sólido como se describió anteriormente en la presente memoria, que comprende revestir al menos una super1icie de un soporte sólido con una disolución de un produclo químico que aumenta la recuperación de un material biológico de dicha super1icie, en el que el producto químico se selecciona del grupo que consiste en un polímero de vinilo, polímero sintético no iónico y proteina.
En un aspecto, el producto químico se selecciona del grupo que consiste en polivinil pirrolidona (PVP), poli-2-etil-2oxazolina (PEOX), albúmina y caseína.
En otro aspecto, el soporte sólido es un papel. Preferiblemente, el papel es un papel de celulosa. Más preferiblemente, el papel de celulosa es una ta~eta 903 Neonatal STO o OMPK-C.
Segun un cuarto aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de un soporte sólido como se describió anteriormente en la presente memoria para aumentar la recuperación de un material biológico de una super1icie del mismo.
En un aspecto, el material biológico es un fármaco biofarmacéutico
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 presenta la recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a diversas matrices de pa pel.
La Figura 2 presenta la recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a papeles 903 Neonatal STO revestidos con diversos productos químicos.
La Figura 3 presenta la recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a papeles OMPK-C revestidos con diversos productos quimicos
Descripción detallada de la invención
La IL-2 recombinante ± vehículo (R & O Systems; Cat. 202-IL-CF-10jJg; lote AE4309112, y Cat. 202-IL-10jJg; lote AE4309081, respectivamente) se disolvió en PBS de Dulbecco sin calcio ni magnesio (PAA; Cal. H15-002, lote H00208-0673), sangre humana, de conejo o de caballo anti-coagulada con EOTA (TCS Biosciences) a 50 pg o 100 pgfjJl.
Se aplicaron alícuotas (1 jJl que contenía O, 50 o 100 pg de IL-2) a los siguientes papeles de filtro de GE Healthcare; tarjeta 903 Neonatal STO, Cat. 10538069, lote 6833909 W082; tarjeta OMPK-A, Cal. WB129241 , lote FT6847509; ta~eta OMPK-B, Cal. WB129242, Lote FE6847609 y ta~eta DMPK-C, Cal. WB129243, Lote FE6847009. Las muestras se dejaron secar durante la noche a la temperatura y humedad ambientales.
Se extrajeron perforaciones (3 mm de diámetro) de cada tipo de papel mediante el uso del perforador Harris Unf-COfe del tamaño adecuado (Sigma, Cato Z708860-25ea, lote 3110). Se colocaron las perforaciones individuales en pocillos individuales de la microplaca de IL-2 obtenida del Ouantikine ELlSA de IL-2 humana (R & D Systems, Cal. D0250, lote 273275). Estas placas están revestidas con un anticuerpo monoclonal de ratón hacia IL-2. La proteina IL-2 se eluyó de la perforación de papel mediante el uso del tampón de ensayo (100 ..,1) suministrado con el kit Ouantikine. Todas las etapas posteriores se llevaron a cabo según las instrucciones suministradas con el kit Ouantikine mediante el uso de un método ~en paper (las perforaciones de papel se colocan directamente en el tampón de ensayo y el ana lito se eluye directamente in situ). Tras la finalización del ensayo, se monitorizó la densidad óptica de la microplaca a 450 nm mediante el uso de un aparato Multiskan Aseent de Thermo Electron
Corporation. Se determinó la recuperación de IL-2 comparando los valores con una curva patrón de concentraciones
conocidas de IL-2. Se preparó una curva patrón nueva de IL-2 para cada experimento individua l. Los experimentos adicionales implicaron la adición de sangre con IL-2 añadida a las tarjetas 903 Neonatal STD y DMPK-C después de haber sumergido completamente las ta~etas en varias disoluciones de productos químicos (como se describe a continuación).
Productos químicos usados Se propOfciona una lista de los productos quimicos y sus fuentes a continuación Poli-etil-enemina, 50% en agua (Fluka; Cat. P3143, lote 29k1492). Poli-vinil-pirrolidona, 1% en agua (Sigma; Cal. PVP40-100 mg, lote 11pk0097). Inulina, 1% en agua (Sigma; Cat. 12255-1009, lote 079F7110). Poli-2-etil-2-oxazolina, 1 % en agua (Aldrich, Cal. 372846, lote 30498PJ) Albúmina, 1% en agua (Sigma, Cal. A2153-10 g, lote 049k1586) Caseína de leche de vaca, 1% en agua (Sigma, Cal. C5890-500 g, lote 089k0179). Poli-etiten glicol1000, 1% en agua (Biochemika, Cato 81189, lote 1198969). Poli-etilen glicoI200, 1% en a9ua (Fluka, Cat 81150, lote 1384550) Resultados Experimentales Cuando se disolvió IL-2 en sangre anti-coagulada con EDTA, las ta~etas 903 y DMPK-C faci litaron la recuperación
de un 45 -55% de la citocina, mientras se recuperó solamente un 2 -3 % de las ta~etas DMPK-A y B (véase la Tabla 1 y la Figura 1). Las ta~elas 903 y DMPK-C son los papeles base básicos, y no se han sumergido o revestido con ningún producto químico, mientras las tarjetas DMPK-A y B están revestidas con una mezcla patentada de productos químicos que facilitan la desnaturalización e inactivación de las proteínas, microorganismos y células, respectivamente. Estas ta~etas se han diseñado para facilitar el transporte y el almacenamiento prolongado de ácidos nucleicos. Por lo tanlo, los bajos niveles de recuperación de IL-2 observados al usar las tarjetas DMPK-A y B pueden ser en realidad un reflejo de la presencia de estos reactivos desnaturalizantes y del sistema usado de detección de anticuerpos basado en ELlSA. El sistema de detección medianle EUSA requiere que la IL-2 eluida exhiba una estructura nativa intacta
Tipo de papel
Recuperación de IL-2 (%) Valor de p
903; sin vehículo
46,9 ± 13,3 > 0,05
903; con vehícu lo
50,7 ± 5,8
DMPK A; sin vehículo
2,0 ± 0,0 > 0, 05
DMPK A; con veh ículo
2,0 ± 0,0
DMPK B; sin vehículo
2,0 ± 0,0 >0,05
DMPK B; con veh ículo
2,0 ± 0,0
DMPK C; sin vehículo
53,9 ± 4,8 > 0,05
DMPK C; con vehículo
45,2 ± 5,4
Tabla 1 -Recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a diversos tipos de papel. El valor de p compara ± vehículo para cada tipo de papel. La presencia del vehículo no tuvo un efecto significativo sobre la recuperación de IL-2 (valor de p > 0,05).
No se observó recuperación de IL-2 cuando se disolvió la citocina en PBS, independientemente del tipo de papel usado (datos no mostrados). Los niveles de recuperación de IL-2 observados en ausencia de IL-2 añadida fueron básicamente equivalentes a los niveles de fondo, lo que indica que la sangre anti--coagulada con EDTA contiene cantidades insignificantes de IL-2 endógena (datos no mostrados).
Se usaron varios productos químicos para sumergir completamente las tarjetas 903 Neonatal STO y OMPK-C, algunos de los cua les parecieron facilitar la recuperación de niveles elevados de IL-2 en comparación con los papeles sin sumergir (valor de p < 0,05). Para las dos tarjetas 903 Neonalal STO y OMPK-C (Tablas 2 y 3; Figuras 2 y 3), los productos químicos tales como poli -vinil-pirrolidona, poli-2-etil-2-oxazolina, albúmina y caseína facilitaron un
5 incremento significativo de los niveles de recuperación de IL-2 (media> 55 % en comparación con el -45% observado para el papel sin sumergir correspondiente).
Producto químico
Recuperación de IL-2 (%) Valor de p
Sin sumergir
44 ,9 ± 6,5 nla
Pol i-etil-enemina (PE!)
41 ,8±6,O >0,05
Pol i vinil pirrolidona (PVP)
62,0 ± 10,7 <0,05
Inulina
50,4 ± 7,6 >0,05
Pol i-2-etil-2-oxazolina (PeOX)
66,1 ± 12,6 <0,05
Albúmina
73,8 ± 13,6 <0,05
Caseína
55,0 ± 7,8 <0,05
Pol i-etilen glicol1000 (PEG 1000)
42,5± 9,1 >0,05
Pol i etilen glicol 200 (PEG 200)
43,3±11,O >0,05
Tabla 2 -Recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a papeles 903 Neonatal STO revestidos con diversos productos químicos. La tabla se obtiene de 2 experimentos independientes (n 10 = 6). El valor de p compara los valores derivados de los papeles sumergidos con los obtenidos del papel 903 sin sumergir.
Producto químico
Recuperación de IL-2 (%) Valor de p
Sin sumergir
49,0 ± 2,1 nla
Pol i-eti!-enemina (PE!)
55,8± 12,2 > 0,05
Pol i-vinil-pirrolidona (PVP)
74,7 ± 7,8 < 0,05
Inulina
33,6± 15,4 > 0,05
Pol i-2-etil-2-oxazolina (PeOX)
62 ,2 ± 2,0 < 0,05
Albúmina·
63,7 incremento
Caseína
57 ,7±1 ,5 < 0,05
Pol i-etiJen glicol1000 (PEG 1000)
31 ,0 ± 2,8 > 0,05
Pol i etiJen glicol 200 (PEG 200)
33,5 ± 15,7 > 0,05
Tabla 3 -Recuperación de IL-2 añadida de manera exógena de manchas de sangre seca aplicada a OMPK-C revestido con diversos productos químicos (n = 3). El valor de p compara los valores derivados de los papeles 15 sumergidos con los obtenidos del papel DMPK-C sin sumergir. Albúmina" n ;; 1.
Aunque se describen las realizaciones ilustrativas preferidas de la presente invención, un experto en la técnica apreciará que la presente invención se puede poner en práctica mediante realizaciones distintas de las descritas, que se presentan con fines de ilustración solamente, y no a modo de limitación. La presente invención se limita solamente mediante las reivindicaciones siguientes

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES
    Un mélodo de recuperación de un material biológico de un soporte sólido que tiene al menos una superficie revestida con un producto químico seleccionado del grupo que consiste en polivinil pirrolidona (PVP), poli-2-etil-2oxazolina (PEOX), albúmina y caseína, que comprende las etapas de
    5 i) poner en contacto una superficie de un soporte sólido con una muestra que contiene un material biológico;
    ii) secar dicha muestra sobre dicha superficie de dicho soporte; iii} almacenar el soporte; y iv) extraer dicho material biológico de la superficie.
    2 El método de la reivindicación 1, en el que dicho soporte sólido se selecciona del grupo que consiste en papel, 10 microfibra de vidrio y una membrana. 3 El método según la reivindicación 1, en el que el soporte sólido es un papel 4 El método de la reivindicación 3, en el que dicho papel es un papel de celulosa
  2. 5. El método de la reivindicación 2, en el que dicha membrana se selecciona del grupo que consiste en poliéster,
    poliéter sultona (PES), poliamida (Nailon), polipropileno, politetrafluoroetileno (PTFE), policarbonato, nitrato de 15 celulosa, acetato de celulosa y óxido de aluminio.
  3. 6.
    El método según cualquier reivindicación precedente, en el que la etapa iii) comprende almacenar el soporte sólido a una temperatura en el intervalo de 15 a 40 <le.
  4. 7.
    El método según cualquier reivindicación precedente, en el que la muestra se selecciona del grupo que consiste en un tejido, célula, sangre, plasma, saliva y orina.
    20 8. El método según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho material biológico se selecciona del grupo que consiste en una biomolécula, una biomolécula obtenida de manera sintética, un componente celular y un fármaco biofarmacéutico
  5. 9. El metodo según cualquier reivindicación precedente , en el que dicho material biológico es un fármaco biofarmacéutico
    25 10. El uso de un soporte sólido que tiene al menos una superficie revestida con un producto quimico seleccionado del grupo que consiste en polivinil pirrolidona (PVP), poli-2-etil-2-oxazolina (PEOX), albúmina y caseína para facilitar la recuperación de un material biológico del mismo.
    11 El uso de un soporte sólido que tiene al menos una superficie revestida con un producto químico seleccionado del grupo que consiste en polivinil pirrolidona (PVP), poli-2-etil-2-oxazolina (PEOX), albúmina y caseína para facilitar 30 la recuperación de un fármaco biofarmacéutico del mismo.
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016099999A1 (en) * 2014-12-18 2016-06-23 Ge Healthcare Uk Limited Analyte detection on a solid support by nucleic acid amplification coupled to an immunoassay
EP3754011B1 (en) 2015-09-09 2022-02-16 Drawbridge Health, Inc. Devices for sample collection, stabilization and preservation
CN115251923A (zh) 2017-01-10 2022-11-01 集联健康有限公司 用于样品收集的装置、系统和方法
EP3521828A1 (en) * 2018-01-31 2019-08-07 Centogene AG Method for the diagnosis of hereditary angioedema
US20250085283A1 (en) * 2022-03-23 2025-03-13 Teijin Limited Method for quantifying nicotinamide adenine dinucleotide (nad+) or nicotinamide mononucleotide (nmn), and kit and filter paper for performing the method
WO2025249073A1 (ja) * 2024-05-30 2025-12-04 国立大学法人大阪大学 目的化合物を選択的に採取するためのデバイス、該デバイスの製造方法、および生体または環境試料から目的化合物を選択的に採取するための方法

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US575126A (en) 1897-01-12 Watch-pocket guard
BE542544A (es) 1954-11-04
US3227075A (en) * 1961-04-04 1966-01-04 Fitchburg Paper Planographic printing plates
JPS5319092A (en) 1976-11-08 1978-02-21 Shionogi Seiyaku Kk Composite for liver desease detection
JPH01291164A (ja) 1988-05-19 1989-11-22 Fujirebio Inc 標準瀘紙用組成物
US5756126A (en) 1991-05-29 1998-05-26 Flinders Technologies Pty. Ltd. Dry solid medium for storage and analysis of genetic material
US5985327A (en) 1988-10-05 1999-11-16 Flinders Technologies Pty. Ltd. Solid medium and method for DNA storage
US5188938A (en) * 1988-12-29 1993-02-23 Microgenics Corporation Enzyme quantitation wicking assay
US5756362A (en) 1993-10-12 1998-05-26 Cornell Research Foundation, Inc. Liposome-enhanced immunoaggregation assay and test device
US6132971A (en) * 1995-06-27 2000-10-17 The University Of North Carolina At Chapel Hill Microelectronic device
US5804684A (en) * 1995-08-24 1998-09-08 The Theobald Smith Research Institute, Inc. Method for isolating nucleic acids
JPH10179722A (ja) 1996-12-25 1998-07-07 Sumitomo Bakelite Co Ltd 表面処理
US5939259A (en) 1997-04-09 1999-08-17 Schleicher & Schuell, Inc. Methods and devices for collecting and storing clinical samples for genetic analysis
US7670768B1 (en) * 1998-02-02 2010-03-02 Qiagen North American Holdings, Inc. Processes for isolating, amplifying and characterizing DNA
US6187540B1 (en) * 1998-11-09 2001-02-13 Identigene, Inc. Method of newborn identification and tracking
ATE399215T1 (de) 1999-03-11 2008-07-15 Whatman Inc Festmedium sowie verfahren zur speicherung und schnellen aufreinigung von nukleinsäuren
EP1423514A2 (en) 2001-09-05 2004-06-02 WHATMAN plc Stable storage of proteins
US20030215358A1 (en) * 2002-01-15 2003-11-20 Schulman Lloyd S. Liquid permeable composition in dry reagent devices
US7156945B2 (en) * 2002-04-24 2007-01-02 Sipix Imaging, Inc. Process for forming a patterned thin film structure for in-mold decoration
US20060094015A1 (en) * 2002-10-04 2006-05-04 Whatman Inc. Methods and materials for using chemical compounds as a tool for nucleic acid storage on media of nucleic acid purification systems
US20110059441A1 (en) * 2007-04-16 2011-03-10 Mcmaster University Methof of producing bioactive paper
US7521021B2 (en) * 2003-11-26 2009-04-21 Leica Biosvstems St. Louis Llc System for in situ processing of a tissue specimen
US7045295B2 (en) 2004-04-02 2006-05-16 Hematologics, Inc. Method for collecting purified cells
ES2360801T3 (es) * 2004-04-09 2011-06-09 Vivebio, Llc Dispositivos y métodos para la recogida, almacenamiento y transporte de muestras biológicas.
US8062901B2 (en) * 2005-04-30 2011-11-22 Alere Switzerland Gmbh Devices and methods for sample collection and analysis
ATE498460T1 (de) * 2005-11-08 2011-03-15 Surmodics Inc Ultradünne photopolymer-beschichtungen und verwendungen davon
CN101892290A (zh) * 2009-05-19 2010-11-24 北京协和洛克生物技术研究开发中心 苯丙氨酸定量检测试剂盒(酶定量法)

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