ES2612237T3 - Exopolisacárido para el tratamiento y/o cuidado de la piel, membranas de mucosas y/o uñas - Google Patents

Abstract

Exopolisacárido de la cepa la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239, para su uso en el tratamiento y o prevención de dolor, inflamación, prurito o hiperhidrosis de la piel y/o membranas de mucosas, en el que el exopolisacárido comprende de un 30 a un 55 % en peso de ácido glucurónico, de un 30 a un 60 % en peso de N-acetilglucosamina y de un 5 a un 20 % en peso de N-acetilgalactosamina.

Description

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una realización preferida, los tejidos, materiales textiles-no-tejidos o dispositivos médicos que contienen el exopolisacárido se emplean para el tratamiento de aquellas afecciones, trastornos y/o enfermedades que mejoran o se evitan por medio de la inhibición de la exocitosis neuronal, por estimulación de la proliferación de fibroblastos o por cicatrización y/o reepitelización de la piel y/o membranas de mucosas.

Los ejemplos de tejidos, materiales textiles-no-tejidos, prendas, dispositivos médicos y medios de inmovilización de los compuestos a ellos, entre los que se encuentran los sistemas de administración y/o los sistemas de liberación regulada/sostenida descritos anteriormente, pueden encontrarse descritos en la bibliografía y se conocen en la técnica anterior [Schaab C.K. (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., “Application of microencapsulation in textiles”, Int.

J. Pharm., 2002, 242(1-2), 55-62; Hipler U.C. y Elsner P., “Biofunctional Textiles and the Skin”, Curr. Probl. Dermatol., 2006, v.33, , eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcolm R.K. et al., ”Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial“, 2004, J. Cont. Release., 97(2), 313-320]. Los tejidos, materiales textiles no-tejidos, prendas y dispositivos médicos preferidos son vendas, gasas, camisetas, calcetines, medias, ropa interior, fajas, guantes, pañales, compresas, apósitos, cubrecamas, toallitas, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos, parches microeléctricos y/o mascarillas faciales.

Las composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas que contienen el exopolisacárido de la presente invención pueden emplearse en distintos tipos de composiciones de aplicación tópica o transdérmica, que opcionalmente incluyen los excipientes cosmética o dermofarmacéuticamente aceptables necesarios para la formulación de la forma de administración deseada.

Las composiciones de aplicación tópica o transdérmica pueden presentarse en cualquier formulación sólida, líquida

o semisólida, como por ejemplo y sin sentido restrictivo, emulsiones múltiples, tales como y sin sentido restrictivo, cremas, emulsiones múltiples tales como por ejemplo, sin restricción, emulsiones de aceite y/o silicona en agua, emulsiones de agua en aceite y/o silicona, emulsiones del tipo agua/aceite/agua o agua/silicona/agua y emulsiones del tipo aceite/agua/aceite o silicona/agua/silicona, cristales líquidos, composiciones anhidras, dispersiones acuosas, aceites, leches, bálsamos, espumas, lociones, geles, geles en crema, soluciones hidroalcóholicas, soluciones hidroglicólicas, hidrogeles, linimentos, sueros, jabones, champús, acondicionadores, sueros, películas de polisacáridos, ungüentos, mousses, pomadas, polvos, barras, lápices y pulverizaciones o aerosoles (pulverizaciones), incluyendo las formulaciones permanentes o de aclarado. Estas formulaciones de aplicación tópica o transdérmica pueden incorporarse mediante las técnicas conocidas por los expertos en la técnica a distintos tipos de accesorios sólidos tales como por ejemplo, y sin sentido restrictivo, vendas, gasas, camisetas, calcetines, medias, ropa interior, fajas, guantes, pañales, compresas, apósitos, cubrecamas, toallitas, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos, parches microeléctricos o mascarillas faciales, o pueden incorporarse a distintos productos de maquillaje tales como fondos de maquillaje, como por ejemplo fondos de maquillaje fluidos y fondos de maquillaje compactos, lociones desmaquilladoras, leches desmaquilladoras, correctores de ojeras, sombras de ojos, barras de labios, protectores labiales, brillos labiales y polvos entre otros.

Las composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas de la invención pueden incluir agentes que aumenten la absorción percutánea de los compuestos de la invención, como por ejemplo, y sin sentido restrictivo, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, dimetilformamida, tensioactivos, azona (1-dodecilazacicloheptan-2-ona), alcohol, urea, etoxidiglicol, acetona, propilenglicol o polietilenglicol entre otros. Asimismo, las composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas objeto de la presente invención se pueden aplicar en las áreas locales a tratar por iontoforesis, sonoforesis, electroporación, parches microeléctricos, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, cura oclusiva, microinyecciones o inyecciones sin agujas mediante presión, como por ejemplo inyecciones por presión de oxígeno, o cualquier combinación de ellas, para conseguir una mayor penetración del compuesto de la invención. La zona de aplicación vendrá determinada por la naturaleza de la afección, trastorno o enfermedad a tratar y/o cuidar.

Entre los excipientes, adyuvantes y/o ingredientes cosmética o dermofarmacéuticamente aceptables presentes en las composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas descritas en la presente invención se encuentran los ingredientes adicionales comúnmente utilizados en composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas, tales como por ejemplo, y sin sentido restrictivo, otros inhibidores de la exocitosis neuronal, otros agentes anticolinérgicos, otros agentes inhibidores de la contracción muscular, otros agentes antienvejecimiento, otros agentes antiarrugas, otros agentes antitranspirantes, otros agentes antiinflamatorios y/o analgésicos, otros agentes antiprurito, agentes calmantes, agentes anestésicos, agentes inhibidores de la agregación de los receptores de acetilcolina, agentes inhibidores de la acetilcolinesterasa, agentes dermorrelajantes, agentes estimuladores o inhibidores de la síntesis de melanina, agentes blanqueantes o despigmentantes, agentes propigmentantes, agentes autobronceadores, agentes inhibidores de la NO-sintasa, agentes inhibidores de la 5α-reductasa, agentes inhibidores de lisil-y/o prolilhidroxilasa, agentes antioxidantes, agentes neutralizantes de radicales libres y/o anticontaminación atmosférica, agentes neutralizantes de especies reactivas de carbonilo, agentes antiglicación, agentes antihistamínicos, agentes antivíricos, agentes antiparasitarios, emulsionantes, emolientes, disolventes orgánicos, propelentes líquidos, acondicionadores de la piel, humectantes, sustancias que retienen la humedad, alfahidroxiácidos, betahidroxiácidos, hidratantes, enzimas epidérmicas hidrolíticas, vitaminas, aminoácidos, proteínas, pigmentos o colorantes, tintes, biopolímeros, polímeros gelificantes, espesantes, tensioactivos, agentes suavizantes, emulsionantes, agentes aglutinantes, conservantes, agentes capaces de disminuir o tratar las bolsas bajo los ojos, agentes exfoliantes, agentes de descamación, agentes queratolíticos, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes estimuladores de la síntesis de

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macromoléculas dérmicas o epidérmicas y/o capaces de inhibir o prevenir su degradación, agentes estimuladores de la síntesis de colágeno, agentes estimuladores de la síntesis de elastina, agentes estimuladores de la síntesis de decorina, agentes estimuladores de la síntesis de laminina, agentes estimuladores de la síntesis de defensina, agentes estimuladores de la síntesis de chaperonas, agentes estimuladores de la síntesis de cAMP, agentes moduladores de AQP-3, agentes moduladores de la síntesis de acuaporina, proteínas de la familia de las acuaporina, agentes estimuladores de la síntesis de ácido hialurónico, agentes estimuladores de la síntesis de glicosaminoglicanos, agentes estimuladores de la síntesis de fibronectina, agentes estimuladores de la síntesis de sirtuína, agentes activadores de sirtuína, proteínas de choque térmico, agentes estimuladores de la síntesis de proteína de choque térmico, agentes estimuladores de la síntesis de lípidos y componentes del estrato córneo, ceramidas, ácidos grasos, agentes inhibidores de la degradación de colágeno, agentes inhibidores de las metaloproteasas de matriz, agentes inhibidores de la degradación de elastina, agentes inhibidores de proteasas de serina como calicreínas, leucocito elastasa o catepsina G, agentes estimuladores de la proliferación de fibroblastos, agentes estimuladores de la proliferación de queratinocitos, agentes estimuladores de la proliferación de adipocitos, agentes estimuladores de la proliferación de melanocitos, agentes estimuladores de la diferenciación de queratinocitos, agentes aceleradores o retardadores de la diferenciación de adipocitos, agentes antihiperqueratosis, agentes comedolíticos, agentes antisoriasis, agentes reparadores del ADN, agentes protectores del ADN, agentes protectores de hemocitoblastos, estabilizantes, agentes para el tratamiento y/o cuidado de pieles sensibles, agentes reafirmantes, agentes antiestrías, agentes aglutinantes, agentes reguladores de la producción de sebo, agentes lipolíticos o estimuladores de la lipólisis, agentes adipogénicos, agentes moduladores de la expresión de PGC-1α, agentes moduladores de PPARγ, agentes que incrementan o reducen el contenido de triglicéridos de los adipocitos, agentes anticelulíticos, agentes inhibidores de la actividad de PAR-2, agentes estimuladores de la cicatrización, agentes coadyuvantes de la cicatrización, agentes estimuladores de la reepitelización, agentes coadyuvantes de la reepitelización, citoquinas, factores de crecimiento, agentes que actúan sobre la circulación capilar y/o la microcirculación, agentes estimuladores de la angiogénesis, agentes inhibidores de la permeabilidad vascular, agentes venotónicos, agentes que actúan sobre el metabolismo de las células, agentes destinados a mejorar la unión dermis-epidermis, agentes inductores del crecimiento del cabello, agentes inhibidores o retardadores del crecimiento del cabello, agentes retardadores de la caída del cabello, perfumes, desodorantes cosméticos y/o absorbentes y/o enmascarantes del olor corporal, agentes quelantes, extractos vegetales, aceites esenciales, extractos marinos, agentes provenientes de un procedimiento biotecnológico, sales minerales, extractos celulares, filtros solares y agentes fotoprotectores de naturaleza orgánica o mineral activos contra los rayos ultravioleta A y/o B y/o los rayos infrarrojos A, o mezclas de ellos, entre otros, siempre que sean física y químicamente compatibles con el resto de componentes de la composición y en especial con el exopolisacárido de la invención. Asimismo, la naturaleza de dichos ingredientes adicionales no debe alterar de manera inaceptable los beneficios del exopolisacárido de la presente invención. La naturaleza de dichos ingredientes adicionales puede ser sintética o de origen natural, como por ejemplo extractos vegetales, o provenir de un procedimiento biotecnológico o de una combinación de un procedimiento sintético y un procedimiento biotecnológico. Ejemplos adicionales pueden encontrarse descritos en CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008). En el contexto de la presente invención, se entiende por procedimiento biotecnológico cualquier procedimiento que produzca el principio activo, o parte del mismo, en un organismo, o en una parte del mismo.

En una realización particular, el agente antiarrugas y/o agente antienvejecimiento se selecciona, por ejemplo y sin sentido restrictivo, entre el grupo formado por los extractos o hidrolizados de extractos de Vitis vinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Theobroma cacao, Ginkgo biloba, Leontopodium alpinum o Dunaliella salina entre otros, Matrixyl® [INCI: Palmitoyl Pentapéptido-4], Matrixyl® 3000® [INCI: Palmitoil Tetrapéptido-7, Palmitoil Oligopéptido], Matrixyl® Synthe’6™ [INCI: Glicerina, Agua, Hydroxipropil Ciclodextrina, Palmitoil Tripéptido-38], Essenskin™ [INCI: hidroximetionina de calcio], Renovage [INCI: teprenona], Resistem™ [INCI: Fermento de Globularia Cordifoliat] o Dermaxyl® [INCI: Palmitoil Oligopéptido] comercializados por Sederma/Croda, Vialox® [INCI: Pentapéptido-3], Syn®-Ake® [INCI: Dipéptido Diacetato de Diaminobutiroil Bencilamida], Syn®-Coll [INCI: Palmitoil Tripétido-5], Fitaluronato [INCI: Algarrobo (Ceratonia siliqua) Gum] o Preregen® [INCI: Proteína Glycine soja (soja), Oxido Reductasas] comercializados por Pentapharm/DSM, Myoxinol™ [INCI: Extracto de Hibiscus esculentus hidrolizado], Syniorage™ [INCI: Acetil Tetrapéptido-11], Dermican™ [INCI: Acetil Tetrapéptido-9] o DN AGE™ LS [INCI: Extracto de hoja de Cassia alata] comercializados por Laboratoires Sérobiologiques/Cognis/BASF, Algisum C® [INCI: Manuronato de Metilsilanol] o Hidroxyprolisilano CN® [INCI: Aspartato de Metilsilanol e Hidroxyprolina] comercializados por Exsymol, Argireline® [INCI: Acetil Hexapéptido-8], SNAP-7 [INCI: Acetil Heptapéptido-4], SNAP-8 [INCI: Acetil Octapéptido-3], Leuphasyl® [INCI: Pentapéptido-18], Inyline™ [INCI: Acetil Hexapéptido-30], Aldenine® [INCI: Proteína de Trigeo Hidrolizada, Proteína de Soja Hidrolizada, Tripéptido-1], Preventhelia™ [INCI: Diaminopropionoil Tripéptido-33], Decorinyl® [INCI: Tripéptido-10 Citrullina], Decorinol® [INCI: Tripéptido-9 Citrullina], Trylagen® [INCI: Extracto de Fermento de Pseudoalteromonas, Proteína de Trigo Hidrolizada, Proteína de Soja Hidrolizada, Tripéptide-10 Citrulina, Tripéptido-1], Eyeseryl® [INCI: Acetil Tetrapéptido-5], Péptido AC29 [INCI: Acetil Tripéptido-30 Citrulina], Relistase™ [INCI: Acetilarginiltriptofil Difenilglicina], Thermostressine® [INCI: Acetil Tetrapéptido-22], Lipochroman™ [INCI: Dimetilmethoxi Cromanol], Chromabright™ [INCI: Palmitato de Dimetilmetoxi Cromanilo], Antarcticine® [INCI: Extracto de Fermento de Pseudoalteromonas], dGlyage™ [INCI: Lisina HCl, Lecitina, Tripéptido-9 Citrulina], Vilastene™ [INCI: Lisine HCo, Lecitina, Tripéptido-10 Citrulina], Hyadisine™ [INCI: Extracto de Fermento de Pseudoalteromonas], Hyanify™ [INCI: Isomerato de sacárido], Diffuporine™[INCI: Acetil Hexapéptido-37], Silusyne™ [INCI: Aceite de Soja (Glicina Soja), Sesquioleato de Sorbitán, Isohexadecano, Hialuronato de sodio, Proteína de Soja Hidrolizada de Laurildimonio e Hidroxipropilo, Acetil Hexapéptido-39] o Adifyline™[INCI: Acetil

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dermofarmacéuticamente eficaz del exopolisacárido de la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239. En particular, el tratamiento y/o cuidado se refiere al tratamiento y/o prevención de dolor, inflamación, prurito o hiperhidrosis, tratamiento reepitelizante y/o cicatrizante de la piel y/o membranas de mucosas, tratamiento y/o prevención del envejecimiento, tratamiento y/o prevención de las arrugas de la piel, preferentemente arrugas de expresión, para el tratamiento y/o prevención de la pérdida de firmeza de la piel, tratamiento y/o prevención de la hiperhidrosis o sudoración, tratamiento y/o cuidado de trastornos de la piel seleccionados entre el grupo formado por verrugas, callos, tratamiento estimulador del crecimiento del cabello y/o prevención de la caída del cabello.

En una realización preferida, el dolor se selecciona entre dolor asociado con afecciones, trastornos y/o enfermedades, como por ejemplo y sin sentido restrictivo, seleccionadas entre el grupo formado por sensibilidad al tacto, sensibilidad al frío, sensibilidad al calor, irritación cutánea, irritación cutánea post-depilación, irritación cutánea post-afeitado, soriasis, pieles sensibles, dermatitis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, dermatitis del pañal, dermatitis seborreica, eczema, liquen plano, quemaduras, quemaduras solares, artritis, artritis reumática, osteoartritis, artritis soriásica, hipersensibilidad, dolor cutáneo o irritación después de la cirugía, después del tratamiento de luz pulsada intensa (IPL), después del tratamiento con luz pulsada monocromática (láser), tras un tratamiento con agentes químicos de descamación o tras una sobreexposición a agentes externos agresivos, entre otros.

En otra realización preferente, la inflamación se selecciona, por ejemplo y sin sentido restrictivo, entre el grupo formado por soriasis, piel sensible, dermatitis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, dermatitis del pañal, dermatitis seborreica, eczema, rosácea, acné, enfermedad hiperproliferativa de la piel, quemaduras, quemaduras solares, paroniquia, inflamación cutánea tras una intervención quirúrgica, tras un tratamiento con terapia de luz pulsada (IPL), tras un tratamiento con terapia de luz pulsada monocromática (láser), tras un tratamiento con agentes químicos de descamación o tras una sobreexposición a agentes externos agresivos, inflamación de las membranas de mucosas vaginales, inflamación de las membranas de mucosas orales, gingivitis, periodontitis, rinitis, rinitis alérgica, entre otras.

En otra realización preferente, el prurito se selecciona entre prurito asociado con afecciones, trastornos y/o enfermedades, como por ejemplo y sin sentido restrictivo, seleccionadas entre el grupo formado por dermatitis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, dermatitis del pañal, dermatitis herpetiforme, fotodermatosis, fotosensibilidad, dermatosis relacionadas con el embarazo, dermatosis relacionadas con la menopausia, eczema, piel sensible, soriasis, varicela, herpes, herpes zóster, síndrome de Netherton, síndrome de piel decidual, liquen plano, acne, caspa, seborrea, dermatitis seborreica, alopecia, pie de atleta, candidiasis, hemorroides, prurito vaginal, prurito perianal, prurito anogenital, quemaduras solares, urticaria, otitis prurítica, picor de ojos, prurito senil, prurito acuagénico, prurigo nodular, prurigo plano, pitiriasis rosada, xerosis y piel seca, reacciones alérgicas, alergias a medicamentos, alergias a alimentos, alergias a productos químicos, exposición a plantas venenosas, y exposición a picaduras de insectos, entre otros.

Preferentemente, el tratamiento y/o prevención de la hiperhidrosis o sudoración, es un tratamiento y/o prevención de la hiperhidrosis o sudoración axilar, facial, genital, palmar o plantar. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de inhibición de la exocitosis neuronal que comprende la administración de una cantidad cosmética o dermofarmacéuticamente eficaz del exopolisacárido de la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de estimulación de la proliferación de fibroblastos que comprende la administración de una cantidad cosmética o dermofarmacéuticamente eficaz del exopolisacárido de la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239.

La administración del exopolisacárido de la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239 se lleva a cabo por vía tópica o transdérmica. En un aspecto más particular la aplicación tópica o transdérmica se lleva a cabo por medio de iontoforesis, sonoforesis, electroporación, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, cura oclusiva, microinyecciones, inyecciones sin aguja por medio de presión, parches microeléctricos, mascarillas faciales o cualquiera de sus combinaciones.

La frecuencia de la aplicación puede variar ampliamente, dependiendo de las necesidades de cada sujeto, sugiriéndose un rango de aplicación de una vez al mes hasta diez veces al día, preferentemente de una vez a la semana hasta cuatro veces al día, más preferentemente de tres veces por semana hasta dos veces al día, aún más preferentemente una vez al día.

Esta invención se comprenderá mejor con la ayuda de los siguientes ejemplos, no limitativos e incluidos solamente con fines ilustrativos, que describen la preparación y caracterización del exopolisacárido y las composiciones que lo contienen de acuerdo con la invención.

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Ejemplos

Ejemplo 1: Preparación y aislamiento del exopolisacárido excretado por la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239.

a) Procedimiento de cultivo de la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239.

La cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239 se cultivó en un fermentador, a 29 ºC y a un pH de 7,5, cuyo caldo contenía un medio 2216E (ZoBell C.E. J. Mar. Res., 1941, 4:42.) enriquecido con glucosa (20 g/l). Se preparó un inóculo con un 10 % (v/v) de un precultivo y la duración de la fermentación se amplió hasta las 72 horas. La velocidad de aireación y de agitación fue de 2 vvm y 250 rpm, respectivamente.

a) Purificación del exopolisacárido.

Las bacterias se separaron del caldo por centrifugación a 12.000 g durante 45 min. El polisacárido se purificó con agua destilada mediante ultrafiltración con una membrana de poliétersulfona para polisacáridos de más de 100 KDa de peso molecular. El peso molecular medio del polisacárido resultante fue de 1,8 millones de Da.

Ejemplo 2: Caracterización fisicoquímica del exopolisacárido producido por la cepa de la especie Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239.

Se determinó el contenido de monosacáridos neutros y ácidos del exopolisacárido obtenido de acuerdo con el ejemplo 1 mediante hidrólisis y cromatografía de gases según el procedimiento descrito por Kamerling et al. Biochem. J.,1975 151:491-495, y modificado por Montreuil et al. en 1986, Glycoproteins. In Carbohydrate analysis: a practical approach. Eds Chaplin et Kennedy, I.R.L Press, Oxford, Washington D.C., pp143-204. La relación porcentual de azúcares obtenida fue de un 47,7 % de N-acetilglucosamina, un 11,4 % de N-acetilgalactosamina y un 40,9 % de ácido glucurónico.

Ejemplo 3: Ensayo de cicatrización in-vitro con queratinocitos humanos.

A partir de un cultivo de queratinocitos humanos sometidos a crecimiento hasta confluencia, se realizó un tratamiento con tripsina y se resembraron de 48 pocillos a 5 x104 células/pocillo. Después de 48 horas de incubación a 37 ºC, 5 % de CO2, con atmósfera humidificada, se creó un área libre de células mediante un raspado con una punta de pipeta. Seguidamente se añadió a las células el medio de cultivo con el exopolisacárido producido por la cepa de la especie de Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239 a la concentración de 0,5 mg/ml. Se utilizaron células no tratadas con producto alguno como control negativo, mientras que células tratadas con DMEM (Medio de Eagle Modificado de Dulbecco’s) y suero bovino fetal se utilizaron como controles positivos. En ese momento, las áreas libres de células se fotografiaron con un microscopio Zeiss Axiovert 40 CFL y una cámara AxioCam MRC5. A continuación se incubaron (nuevamente a 37 ºC, 5 % de CO2, con atmósfera humidificada) durante 48 horas los cultivos para permitir que las células migrasen hacia la zona libre de células. Después de este período, se tomaron nuevamente fotografías de los cultivos, pudiéndose calcular el porcentaje de cicatrización respecto al tiempo cero, con el incremento de área ocupada por las células respecto el área ocupada inicialmente.

La Tabla 1 presenta el incremento de cicatrización respecto al observado en los controles negativos.

Tabla 1

Productos sometidos a ensayo

Incremento de cicatrización respecto el controlnegativo (%)

Control negativo

0 %

Control positivo

115 %

Exopolisacárido excretado por la cepa CNCM I-4239

92 %

Ejemplo 4: Ensayo de proliferación in vitro en fibroblastos dérmicos humanos.

La proliferación celular se evaluó con un procedimiento de viabilidad celular basado en medidas de fluorescencia. Las células vivas se distinguieron por la presencia de actividad esterasa intracelular, determinada por la conversión enzimática del compuesto no fluorescente de calceína-AM que permeó al interior de las células donde se convirtió en calceína intensamente fluorescente, que se retuvo en el interior de las células, y a las que confirió una elevada intensidad de fluorescencia verde.

Se trataron los fibroblastos dérmicos con tripsina y se sembraron a una densidad de 5 x 103 células/pocillo en placas de 96 pocillos. Después de 24 horas de incubación a 37 ºC, 5 % de CO2, con atmósfera humidificada, se añadió medio de cultivo nuevo en cada pocillo que contenía el exopolisacárido producido por la cepa de la especie de Vibrio sp. con número de depósito CNCM I-4239 en concentraciones de 1 mg/ml, 0,5 mg/ml y 0,25 mg/ml. Se usaron las

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Los ingredientes de la fase B Finsolv-TN [INCI: C12-15 BENZOATO DE ALQUILO], Phytocream 2000 [INCI: ESTEARATO DE GLICERILO, ALCOHOL CETEARÍLICO, PROTEÍNA DE TRIGO HIDROLIZADA DE PALMITOIL POTASIO], Massocare EC [INCI: COCOATO DE ETILHEXILO], fenoxietanol [INCI: FENOXIETANOL] y acetato de vitamina E [INCI:ACETATO DE TOCOFERILO] se disolvieron también a 70-75 ºC. Una vez disueltos, se añadieron poco a poco, en agitación con turbina a los ingredientes de la mezcla de la fase A.

La mezcla se enfrió a 50 ºC y se añadió lentamente Silicona DC 200 [INCI: DIMETICONA], junto con los componentes de la fase C1 sobre la mezcla de ingredientes de A y B

A continuación se añadió en agitación con turbina Sepigel 305 [INCI: AGUA (AQUA), POLIACRILAMIDA, C13-14 ISOPARAFINA, LAURET-7] (fase D) a la emulsión resultante de la mezcla de las diferentes fases. Seguidamente se añadió la fase E, Perfume ocean 12720 [INCI: FRAGANCIA (PERFUME)] en agitación con turbina. Se ajustó el pH a 6,0-6,5 mediante la adición gota a gota con agitación de hidróxido de sodio [INCI: HIDRÓXIDO DE SODIO] (fase F).

La proporción de la composición cosmética obtenida se muestra en la tabla 6:

Tabla 6

INGREDIENTE % en peso

A

AGUA (AQUA) 75,00

A

PENTILEN GLICOL 5,00

A

ALCOHOL BENCÍLICO 1,00

A

CARBÓMERO 0,50

A

CETIL FOSFATO DE POTASIO 0,50

B

BENZOATO DE ALQUILO C12-15 5,00

B

ESTEARATO DE GLICERILO 2,05

B

ALCOHOL CETEARÍLICO 2,05

B

PROTEÍNA DE TRIGO HIDROLIZADA DE PALMITOIL POTASIO 0,90

B

COCOATO DE ETILHEXILO 2,50

B

FENOXIETANOL 0,90

B

ACETATO DE TOCOFERILO 0,50

C

DIMETICONA 1,00

C1

AGUA (AQUA) 1,41

C1

Exopolisacárido de la cepa CNCM I-4239 0,02

C1

FOSFATO DE DISODIO 0,03

C1

FOSFATO DE SODIO 0,02

C1

GOMA DE XANTANO 0,02

C1

PROPANODIOL 0,49

C1

CAPRILATO DE GLICERILO 0,01

D

AGUA (AQUA) 0,34

D

POLIACRILAMIDA 0,40

D

ISOPARAFINA C13-14 0,20

D

LAURET-7 0,06

E

FRAGANCIA (PERFUME) 0,10

F

HIDRÓXIDO DE SODIO AL 20 % c.s.

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Claims (1)

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