ES2613841T3

ES2613841T3 - Anticuerpo anti-CLCP1 humano y uso del mismo

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Publication number: ES2613841T3
Application number: ES09797975.1T
Authority: ES
Inventors: Ken-Ichiro Ono; Takashi Takahashi
Original assignee: Medical and Biological Laboratories Co Ltd; Oncomics Co Ltd
Current assignee: Medical and Biological Laboratories Co Ltd; Oncomics Co Ltd
Priority date: 2008-07-16
Filing date: 2009-07-16
Publication date: 2017-05-26
Anticipated expiration: 2029-07-16
Also published as: JP2019068805A; US8993728B2; WO2010008051A1; JP6128344B2; JP6491633B2; JPWO2010008051A1; US20110293618A1; JP2017086081A; EP2322610A4; JP5773650B2; EP2322610B1; JP2015133960A; EP2322610A1

Abstract

Un anticuerpo aislado que reconoce el dominio extracelular de CLCP1 humano que consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2 y que reconoce un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos de las posiciones 456 a 470 en la SEQ ID NO: 2.

Description

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[28] el agente farmacéutico de [27] para su uso en el tratamiento o prevención de cáncer que expresa CLCP1, que tiene al menos un efecto inhibidor seleccionado entre inhibición de la migración, inhibición de la invasión, inhibición de la metástasis, e inhibición del crecimiento;

[29] un agente farmacéutico para su uso en la detección inmunológica de la expresión de CLCP1 en una célula o tejido, que comprende un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

[30] un kit para su uso en la detección inmunológica de la expresión de CLCP1 en una célula o tejido, que comprende un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

[31] agente de diagnóstico para pronóstico de cáncer, que comprende un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

[32] un kit de diagnóstico para pronóstico de cáncer, que comprende un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

[33] un método inmunológico que comprende las etapas de:

(a): poner en contacto una célula o tejido aislado con un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano; y

(b): detectar la expresión de CLCP1 en la célula o tejido;

[34] un método para diagnosticar cáncer, que comprende las etapas de poner en contacto un tejido patológico aislado con un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano, y detectar de forma inmunológica la expresión de CLCP1 en una célula del tejido patológico;

[35] un método de diagnóstico para pronóstico de cáncer, que comprende las etapas de poner en contacto un tejido patológico aislado con un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano, y detectar de forma inmunológica la expresión de CLCP1 en una célula del tejido patológico;

[36] un método para cribar una sustancia candidata que inhibe el crecimiento, invasión, migración, o metástasis de células cancerosas, o una sustancia candidata que tiene citotoxicidad frente a una célula cancerosa, que comprende las etapas de:

(a): poner en contacto una sustancia de ensayo con un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

(b): detectar la unión entre una sustancia de ensayo y el dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano; y

(c): seleccionar una sustancia de ensayo que se une al dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano;

[37] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para inhibir una migración de una célula cancerosa que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición de la migración de una célula cancerosa que expresa CLCP1;

[38] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para inhibir una invasión de una célula cancerosa que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición de la invasión de la célula cancerosa que expresa CLCP1;

[39] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para inhibir una metástasis de una célula cancerosa que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición de la metástasis de la célula cancerosa que expresa CLCP1;

[40] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para inhibir un crecimiento de una célula cancerosa que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y tiene la actividad de inhibir el crecimiento de la célula cancerosa que expresa CLCP1;

[41] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para dañar una célula cancerosa que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y tiene citotoxicidad frente a la célula cancerosa que expresa CLCP1;

[42] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para tratar o prevenir un tumor que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce el dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y tiene la actividad de inhibir el crecimiento de una célula cancerosa que expresa CLCP1;

[43] aunque no está de acuerdo con la presente invención, se desvela un método para tratar o prevenir un cáncer que expresa CLCP1, que comprende la etapa de administrar a un sujeto un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición del crecimiento de una célula cancerosa que expresa CLCP1;

[44] uso de un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición de la migración de una célula cancerosa que expresa CLCP1, para producir un agente para inhibir la migración de la célula cancerosa que expresa CLCP1;

[45] uso de un anticuerpo que reconoce un dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano y que tiene una actividad de inhibición de la invasión de una célula cancerosa que expresa CLCP1, para producir un agente para inhibir la invasión de la célula cancerosa que expresa CLCP1;

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(reactividad) del anticuerpo FA19-1 a antígenos parciales se evaluó mediante ELISA. Fig. 29 muestra en diagrama y gráficos resultados obtenidos mediante la reducción del epítopo del que se predijo que era reconocido por un nuevo anticuerpo (reactividad con respecto a un antígeno parcial expresado). La unión (reactividad) del anticuerpo 6AA_17-2 a antígenos parciales se evaluó mediante ELISA. Fig. 30 muestra en diagrama y gráficos resultados obtenidos mediante la reducción del epítopo del que se predijo que era reconocido por un nuevo anticuerpo (reactividad con respecto a un antígeno parcial expresado). La unión (reactividad) del anticuerpo EC6-8 a antígenos parciales se evaluó mediante ELISA. Fig. 31 muestra en gráficos formación de mapas de epítopos de los nuevos anticuerpos. Predicción basada en experimentos de inhibición competitiva con FCM. (A) ensayo de inhibición de 2AA_197-3: el único anticuerpo que compite es el propio 2AA_197-3, y por lo tanto se demostró que el epítopo era único y diferente de los epítopos reconocidos por los otros anticuerpos. (B) ensayo de inhibición de 2AA_171-1: el único anticuerpo que compite es el propio 2AA_171-1, y por lo tanto se demostró que el epítopo era único y diferente de los epítopos reconocidos por los otros anticuerpos. (C) ensayo de inhibición de 6AA_17-2: 6AA_17-2 competía con EC6-8 y FA19-1, y por lo tanto llegó a quedar claro que reconoce un epítopo adyacente a los epítopos reconocidos por los otros dos clones. Fig. 32 muestra la especulación de los epítopos basándose en sumarios de los resultados de ELISA mostrados en las Figs. 27 a 30, y ensayos de inhibición competitiva de FCM en las Figs. 3 y 31. Se reveló que 6AA_17-2, EC6-8, y FA19-1 reconocían epítopos adyacentes entre sí. Se identificó cada secuencia de epítopo. El epítopo reconocido por EC6-8 está marcado con líneas discontinuas. Fig. 33 muestra el resultado de la formación de grupos de epítopo basándose en sumarios de los resultados de inhibición competitiva de FCM. Los que se encuentran en la misma caja competían entre sí en el ensayo de inhibición competitiva de FCM. Fig. 34 muestra en diagramas análisis de citometría de flujo después de exposición a los nuevos anticuerpos. Las células LNM35 se expusieron a los nuevos anticuerpos a las concentraciones indicadas durante 24 horas. Después de lavado con PBS, el análisis de citometría de flujo se realizó usando un anticuerpo biotinilado. El resultado sugería que los anticuerpos 2AA_171-1, 6AA_17-2, y 2AA_197-3 inducían fuertemente la degradación de CLCP1 (internalización). Fig. 35 muestra en una fotografía la transferencia de Western para CLCP1 en LNM35 después de exposición a anticuerpo. Como anticuerpo de control se usó IgG1 de ratón. Después de 24 horas de exposición a cada anticuerpo a una concentración de 5 µg/ml, se evaluaron cantidades equivalentes de lisados celulares mediante análisis de transferencia de Western usando FA19-1. El resultado sugería que al igual que para FA17-9 y FA191, los anticuerpos 2AA_171-1, 6AA_17-2, y 2AA_197-3 inducían degradación (internalización) de CLCP1. Fig. 36 muestra en un diagrama el efecto de los nuevos anticuerpos en la internalización. El efecto de internalización se muestra como porcentaje de actividad cuando se toma la actividad de internalización de la muestra de anticuerpo de control como un 100 %. El efecto de internalización de FA19-1 en NCI-H460-LNM35 y A549 se indica con flecha. La cantidad de antígeno CLCP1 humano en la superficie celular se redujo por reacción de las células con los anticuerpos. Se puede suponer que la internalización del CLCP1 humano en las células se indujo mediante unión a anticuerpo. Esta tendencia se puede observar con otros tipos de células. Fig. 37 muestra en un gráfico y fotografías la predicción del pronóstico mediante tinción histológica. (A) Las muestras de ensayo de cáncer de pulmón se tiñeron usando el anticuerpo FA19-1 con el método de tinción que se ha descrito anteriormente. Basándose en la tinción de la membrana celular, las muestras de ensayo se agruparon en casos fuertemente positivos: 11, casos débilmente positivos: 7, y casos negativos: 52. El grupo de casos fuertemente positivos se comparó con los grupos de casos débilmente positivos/negativos mediante análisis de Kaplan-Meier. El pronóstico en los casos fuertemente positivos fue p = 0,012 en el ensayo de rango logarítmico, lo que muestra que la tasa de supervivencia era baja de forma estadísticamente significativa. La barra vertical indica casos que no podían alcanzar el "punto final = muerte" durante los periodos de observación (casos de supervivencia) (es decir, "caso censurado"). (B) muestra la diferencia de tinción entre casos fuertemente positivos y casos débilmente positivos. Las reactividades inmunohistológicas del anticuerpo se agruparon en tres grupos: fuertemente positivo (+), débilmente positivo (±), y negativo (-). De forma específica los casos en los que la membrana celular está claramente teñida en el contorno como se muestra en el panel superior se definen como fuertemente positivos; los casos en los que la membrana celular sólo está ligeramente teñida como se muestra en el panel inferior se definen como débilmente positivos; y los casos en los que la membrana celular no está tenida se definen como negativos (los datos no se muestran). Fig. 38 muestra en diagramas las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de regiones variables del anticuerpo 6AA_17-2. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de la cadena pesada (región variable) se muestran en las SEQ ID NOs: 58 y 59, respectivamente. Las regiones encerradas en cajas corresponden a la secuencia señal, CDR1 (SEQ ID NO: 60), CDR2 (SEQ ID NO: 61), y CDR3 (SEQ ID NO: 62) de la parte superior. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de la cadena ligera (región variable) (SEQ ID NOs: 63 y 64), respectivamente. Las regiones encerradas en cajas corresponden a la secuencia señal, CDR1 (SEQ ID NO: 65), CDR2 (SEQ ID NO: 66), y CDR3 (SEQ ID NO: 67) de la parte superior. Fig. 39 muestra en un gráfico el resultado de la determinación de la constante de disociación de cada anticuerpo medida mediante ensayo de Biacore. Fig. 40 muestra en diagramas el proceso de humanización de una cadena pesada. A muestra FA19RHA (humanizado) y la secuencia del anticuerpo humano seleccionado. U00570 es la secuencia del anticuerpo humano seleccionado. Las porciones de CDR se convirtieron en las de FA19-1. B muestra el % identidad del aminoácido en el armazón. El anticuerpo humanizado construido y FA19-1 tienen una identidad de aminoácidos

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anticuerpo aislado (3) que reconoce un epítopo en aa 456 -aa 465 de la SEQ ID NO: 2. Dado que el segundo anticuerpo reconoce un epítopo que es idéntico al epítopo reconocido por el clon 6AA_17-2 o 2AA_62-4 del anticuerpo, la competencia se confirma cuando se añade un anticuerpo de ensayo al CLCP1 humano en la reacción al mismo tiempo que el segundo anticuerpo y el clon 6AA_17-2 o 2AA_62-4 del anticuerpo. La competencia del 5 segundo anticuerpo se puede confirmar como un anticuerpo competitivo mediante excrementos de competición con el clon 2AA_62-4 o 6AA_17-2 del anticuerpo que es particularmente preferente. La competencia del segundo anticuerpo también se puede evaluar basándose en la reactividad cruzada entre péptidos parciales. La competencia se puede confirmar mediante la evaluación de sí un compuesto aislado se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de las posiciones 456 a 465 en la SEQ ID NO: 2, pero no se une a un péptido que

10 consiste en la secuencia de aminoácidos de las posiciones 451 a 460 en la SEQ ID NO: 2, y un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de las posiciones 461 a 470 en la SEQ ID NO: 2.

Por otro lado, como resultado del análisis de las secuencias de aminoácidos de los anticuerpos, los presentes inventores identificaron de forma satisfactoria no solamente las secuencias de aminoácidos de las respectivas

15 regiones determinantes de la complementariedad de la región variable de cadena pesada (VH CDR1, VH CDR2, y VH CDR3) y las respectivas regiones determinantes de la complementariedad de la región variable de cadena ligera (VL CDR1, VL CDR2, y VL CDR3) sino también las secuencias de aminoácidos toda la región variable de cadena pesada (VH) y toda la región variable de cadena ligera (VL). Cada secuencia de aminoácidos identificada se describe a continuación.

20 Anticuerpo 1: FA17-9

(1) VH CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7;

(2): VH CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; 25 (3) VH CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9;

(4): VL CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12;

(5): VL CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56;

(6): VL CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13;

(7): VH: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de 30 aminoácidos es la SEQ ID NO: 5); y

(8) VL: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 10);

Anticuerpo 2: FA19-1 35

(1): VH CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16;

(2): VH CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17;

(3): VH CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18;

(4): VL CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 21; 40 (5) VL CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57;

(6): VL CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22;

(7): VH: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 14); y

(8): VL: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia 45 de aminoácidos es la SEQ ID NO: 19); y

Anticuerpo 3: 6AA_17-2

(1): VH CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60; 50 (2) VH CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61;

(3): VH CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 62;

(4): VL CDR1: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65;

(5): VL CDR2: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66;

(6): VL CDR3: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67;

55 (7) VH: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 58); y

(8) VL: la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64 (la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 63).

60 Los anticuerpos de la presente invención se pueden caracterizar adicionalmente basándose en el resultado que se ha descrito anteriormente. Por lo tanto, en una realización, un anticuerpo de la presente invención está especificado por las respectivas secuencias de CDR. Por ejemplo, tales anticuerpos son anticuerpos aislados que reconocen el dominio extracelular de antígeno de CLCP1 humano, en el que las secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y VL CDR3) se

65 seleccionan de (A) a (C) que siguen a continuación:

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de manera positiva. Sin embargo, la tinción era ligeramente menos uniforme. En esta tinción había células de cáncer negativas. En el área no cancerosa circundante (denominada área estromal), solamente una pequeña población de células estromales se tiñeron excepcionalmente de manera positiva, mientras que la mayor parte de la área no cancerosa circundante se tiñó de manera negativa.

5 Panel derecho de la Fig. 8(C): el aria de tejido de pulmón normal alejada del cáncer se tiñó de manera negativa. La aparición similar a puntos de color oscuro representa depósitos de grano de hierro.

Como se ha descrito anteriormente, los tejidos de cáncer y sin cáncer también se tiñeron de forma distinguible en la 10 muestra de ensayo 2. Este resultado es coherente con el área de cáncer identificada por vía patológica.

El resultado descrito anteriormente demuestra que FA19-1 se puede usar en inmunohistoquímica de muestras de ensayo embebidas en parafina. Cuando la intensidad de la tinción en un tejido patológico es más fuerte que la de un área no cancerosa en las muestras de ensayo de tejido de pulmón mostradas en la Fig. 8, se diagnostica que el

15 tejido patológico está afectado potencialmente con cáncer de pulmón. Las áreas teñidas de manera positiva con el anticuerpo de la presente invención eran coherentes con aquéllas de las que se sospechaba por vía patomorfológica que eran cáncer de pulmón. Las áreas teñidas de manera negativa con el anticuerpo de la presente invención son coherentes con las que se supone que son normales. El resultado está generalmente de acuerdo con el hallazgo patológico basándose en observación microscópica.

20 [Ejemplo 12] Evaluación del patrón de tinción del anticuerpo (inmunotinción) de tejido normal

Las secciones de los tejidos normales que se describen a continuación se sometieron a ensayo para el patrón de tinción de FA19-1 con el mismo método que se ha descrito en el Ejemplo 11.

25 El resultado mostraba que no había una tinción intensa, específica, excepto en el citoplasma del epitelio folicular.

[Tabla 1]

TINCIÓN DE TEJIDO NORMAL HUMANO USANDO EL ANTICUERPO FA191

TINCIÓN DE LA MEMBRANA CELULAR: TINCIÓN DEL CITOPLASMA NOTAS

CEREBRO: - -

BRONQUIOS: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN EPITELIO CILIADO BRONQUIAL/GLÁNDULA MUCOSAL

CORAZÓN: - -

ESÓFAGO: - -

ESTÓMAGO: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN GLÁNDULAS PILÓRICAS

INTESTINO GRUESO: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN EPITELIO DE LA CRIPTA MUCOSAL

RIÑÓN: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN TÚBULO RENAL

PÁNCREAS: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN PEQUEÑA CANTIDAD DE CÉLULAS DE ORIGEN DESCONOCIDO

HÍGADO: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN CÉLULA Y HEPÁTICA Y CONDUCTO BILIAR

BAZO: - -

GLÁNDULA TIROIDES: - - IMAGEN PSEUDO-POSITIVA TEÑIDA EN EPITELIO FOLICULAR

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continuación un inserto de cultivo celular con poros de 8 µm (Becton Dickinson) se puso se puso en cada pocillo de la placa de 24 pocillos. Se tomaron alícuotas (0,5 ml) de la suspensión de células H460-LNM35 (de 5 x 104 a 2 x 105 células/ml) después de la exposición del anticuerpo en RPMI1640 (FCS al 0,25 %) en cada cámara superior (de 2,5 x 104 a 1 x 105 células/cámara). A continuación, las células se incubaron a 37 ºC en atmósfera de CO2 al 5 %

5 durante 24 horas. Las células restantes se retiraron minuciosamente de las cámaras superiores con hisopos de algodón. Después de fijar con una solución de etanol al 70 %, las células en los pocillos de la parte inferior se tiñeron con una solución de tinción de Giemsa. Se hizo el recuento de las células en los pocillos de la parte inferior bajo un microscopio. El porcentaje de motilidad con respecto al grupo no tratado con anticuerpo se determinó para cada anticuerpo de acuerdo con la fórmula que se muestra a continuación. El resultado se muestra en la Fig. 6(B).

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El resultado que se muestra en la Fig. 6(B) demuestra que los anticuerpos FA17-9 y FA19-1, en particular, tienen una actividad más fuerte de inhibición de la migración de células de la línea H460-LNM35 de células de cáncer de 15 pulmón humano altamente metastásico que el anticuerpo de control (IgG de ratón).

[Ejemplo 16] Análisis de la expresión de CLCP1 en células de líneas de células alta capacidad de metástasis y baja capacidad de metástasis obtenidas a partir de NCI-H460

20 Previamente, los presentes inventores aislaron dos tipos de sublíneas o a partir de la línea precursora NCI-H460 basándose en el grado de actividad metastásica de las células trasplantadas en ratones. La tinción con FA19-1 mostraba que el nivel de expresión de CLCP1 en la superficie celular de NCI-H460-LNM35, una línea de alta capacidad de metástasis, era más elevada que la de NCI-H460-N15, una línea de baja capacidad de metástasis (Fig. 17). La línea precursora NCI-H460 también se tiñó con FA19-1 con el mismo método. El resultado demostraba

25 que las células son una población de células heterogéneas. Por lo tanto, por primera vez, se sugería que CLCP1 expresado en la superficie celular estaba implicado en cierto modo en la actividad metastásica (Fig. 17).

30 El patrón de expresión de CLCP1 en diversas líneas de células de cáncer se evaluó con FCM usando un anticuerpo anti-CLCP1 (FA19-1; 5 µg/ml). Las líneas celulares usadas orígenes se enumeran en las Tablas 2-1 y 2-1.

[Tabla 2-1]

[Ejemplo 17] Patrón de expresión del antígeno CLCP1 en diversas líneas de células de cáncer (FCM)

NOMBRE DE LA CÉLULA: ORIGEN DEL CÁNCER NÚMERO

A549: CÁNCER DE PULMÓN CCL-185

ChaGo-K-1: CÁNCER DE PULMÓN HTB-168

DMS114: CÁNCER DE PULMÓN CRL-2066

NCI-H1299: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5803

NCI-H1373: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5866

NCI-H1793: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5896

NCI-H2170: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5928

NCI-H226: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5826

NCI-H358: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5807

NCI-H460: CÁNCER DE PULMÓN HTB-177

NCI-H520: CÁNCER DE PULMÓN HTB-182

NCI-H522: CÁNCER DE PULMÓN CRL-5810

NCI-H596: CÁNCER DE PULMÓN HTB-178

LC174: CÁNCER DE PULMÓN Centro de Cáncer de Aichi

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LC176: CÁNCER DE PULMÓN Centro de Cáncer de Aichi

LC319: CÁNCER DE PULMÓN Centro de Cáncer de Aichi

PC-14: CÁNCER DE PULMÓN ECACC90071810

SK-LU-1: CÁNCER DE PULMÓN HTB-57

SK-MES-1: CÁNCER DE PULMÓN HTB-58

GCIY: CÁNCER DE ESTÓMAGO RCB0555

HGC-27: CÁNCER DE ESTÓMAGO RCB0500

KATOIII: CÁNCER DE ESTÓMAGO HTB-103

MKN-1: CÁNCER DE ESTÓMAGO JCRB0252

MKN-45: CÁNCER DE ESTÓMAGO JCRB0254

MKN74: CÁNCER DE ESTÓMAGO JCRB0255

OCUM-1: CÁNCER DE ESTÓMAGO JCRB0192

SCH: CÁNCER DE ESTÓMAGO JCRB0251

Caco-2: CÁNCER DE INTESTINO GRUESO HTB-37

LOVO: CÁNCER DE INTESTINO GRUESO CCL-229

SW480: CÁNCER DE INTESTINO GRUESO CCL-228

Caki-1: CÁNCER DE RIÑÓN HTB-46

KLM-1: CÁNCER DE PÁNCREAS RCB2138

MIA Paca-2: CÁNCER DE PÁNCREAS CRL-1420

PANC-1: CÁNCER DE PÁNCREAS CRL-1469

PK1: CÁNCER DE PÁNCREAS RCB1972

[Tabla 2-2]

PK-45p: CÁNCER DE PÁNCREAS RCB2141

PK59: CÁNCER DE PÁNCREAS RCB1901

BT-20: CÁNCER DE MAMA HTB-19

BT-474: CÁNCER DE MAMA HTB-20

BT-549: CÁNCER DE MAMA HTB-122

HCC1395: CÁNCER DE MAMA CRL-2324

HCC1500: CÁNCER DE MAMA CRL-2329

MCF7: CÁNCER DE MAMA HTB-22

SK-BR-3: CÁNCER DE MAMA HTB-30

T-47D: CÁNCER DE MAMA HTB-133

ZR-75-1: CÁNCER DE MAMA CRL-1500

22Rv1: CÁNCER DE PRÓSTATA CRL-2505

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Claims

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