ES2614615T3 - Composición en partículas y composición medicinal que comprende la misma - Google Patents
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Abstract
Una composición en partículas para encapsular un fármaco en este, que comprende: una unidad de copolímero de bloques que tiene un segmento de la cadena de polímeros hidrófobos y un segmento de la cadena de polímeros hidrófilos, una pluralidad de unidades de copolímero de bloques estando dispuesta radialmente con los segmentos de la cadena de polímeros hidrófobos radialmente dentro y los segmentos de la cadena de polímeros hidrófilos radialmente afuera; y un lípido cargado que lleva una carga opuesta a la carga del fármaco que se va a encapsular en la composición de modo que el fármaco se retenga dentro de la partícula por medio de la unión electrostática con el lípido cargado, que está atrayendo el lípido cargado al segmento de la cadena de polímeros hidrófobos, con lo cual se evita que la superficie externa de la partícula se cargue para atraer una sustancia que tiene una carga opuesta a la carga del lípido cargado, en donde la composición en partículas se aplica a un fármaco seleccionado entre péptidos, proteínas, cadenas de azúcares y ácidos nucleicos; y en donde los lípidos cargados no están dispuestos contiguamente entre sí a lo largo de la circunferencia de la composición en partículas, sino que están dispuestos para intervenir entre las unidades de copolímero de bloques adyacentes a lo largo de la circunferencia de la composición en partículas, con lo cual los lípidos cargados adyacentes a lo largo de la circunferencia de la composición en partículas se separan por las unidades de copolímero de bloques y se les impide estar en contacto entre sí.
Description
- Ejemplo 1-1
- 1 PEG-PBLG:DOTAP=10:1 64.7
- Ejemplo 1-2
- 2 PEG-PBLG:PA=10:1 73.2
- Ejemplo 1-3
- 3 PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=10:1:1 88.7
- Ejemplo 1-4
- 4 PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=5:1:1 90.3
- Ejemplo 1-5
- 5 PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=3.3:1:1 87.7
- Ejemplo 1-6
- 6 PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=2.5:1:1 88.1
- Ejemplo 1-7
- 7 PEG-pGlu(C8):DOTAP:DOPE=2.5:1:1 167.7
- Ejemplo 1-8
- 8 PEG-pGlu(C8):DOTAP:DOPE=1.25:1:1 158.1
- Ejemplo 1-9
- 9 PEG-pGlu(Bn):DOTAP:DOPE=2.5:1:1 137.1
- Ejemplo 1-10
- 10 PEG-pGlu(Bn):DOTAP:DOPE=1.25:1:1 158.1
- Ejemplo comparativo 1-1
- C1 - 94.2
- Ejemplo comparativo 1-2
- C2 PEG-PBLG:DOPE=10:1 87.3
- Ejemplo comparativo 1-3
- C3 DOTAP:DOPE-1:1 61.7
[Evaluación 1b]
A las composiciones en partículas 3 a 10 y la composición C3 en partículas comparativas, se le adicionó solución reguladora HEPES 10 mM (pH 7.4) para preparar muestras que tenían una concentración de lípidos cargada de 0.1 mg/mL. Utilizando el analizador de dispersión de luz Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments), se determinó el potencial zeta para cada muestra (800 µL). Se utilizaron células capilares desechables (DTS1060, Malvern Instruments) para la medición, y la temperatura durante la medición se fijó a 25ºC.
[Tabla 2]
- Composición en partículas
- Relación de peso de polímero y lípido Potencial zeta (mV)
- 3
- PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=10:1:1 2.04
- 4
- PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=5:1:1 5.38
- 5
- PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=3.3:1:1 7.80
- 6
- PEG-PBLG:DOTAP:DOPE=2.5:1:1 11.0
- 7
- PEG-pGlu(C8):DOTAP:DOPE=2.5:1:1 1.63
- 8
- PEG-pGlu(C8):DOTAP:DOPE=1.25:1:1 1.09
- 9
- PEG-pGlu(Bn):DOTAP:DOPE=2.5:1:1 0.26
- 10
- PEG-pGlu(Bn):DOTAP:DOPE=1.25:1:1 2.06
- C3
- DOTAP:DOPE=1:1 60.7
10 Como se muestra en la Tabla 2, las composiciones en partículas 3 a 10 tenían valores absolutos más bajos del potencial zeta comparado con la composición C3 en partículas comparativa que no contenía unidades de copolímero de bloques. En las composiciones en partículas 3 a 10, los valores absolutos del potencial zeta se hicieron más bajos a medida que la relación en peso de las unidades de copolímero de bloques con el lípido cargado se hicieron más altos. Este resultado significa que se evitó que la superficie externa de las composiciones en partículas 3 a 10 lleven cargas
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La Figura 6 es un gráfico que muestra las absorbancias de la muestra de medición A (con FBS) y la muestra de medición B (sin FBS) para la composición en partículas tratada con encapsulación que utilizó la composición 4 en partículas y la composición en partículas tratada con encapsulación que utilizó la composición C3 en partículas comparativa. Como se muestra en la figura 6, el tratamiento con FBS provocó un aumento significativo de la absorbancia en la composición en partículas tratada con encapsulación que usó la composición C3 en partículas comparativa. Esto indica la ocurrencia de agregabilidad debido a interacciones con componentes sanguíneos. En la composición en partículas tratada con encapsulación (composición en partículas encapsulada en ARNsi) que utilizó la composición 4 en partículas, casi no se observó aumento en la absorbancia debido al tratamiento con FBS.
El gráfico de la figura 7 y la tabla 8 muestra la relación entre los valores absolutos de potencial zeta de las composiciones en partículas tratadas con encapsulación medidas en la evaluación 5b y la agregabilidad en la sangre de las composiciones en partículas tratadas con encapsulación medidas en la evaluación 5d.
[Tabla 8]
- Composición en partículas utilizada
- Agregación en sangre Potencial zeta (mV)
- Ninguno
- 0.118 -
- 3
- 0.092 1.93
- 4
- 0.132 2.63
- 5
- 0.142 4.67
- 6
- 0.153 6.17
- 7
- 0 0.37
- 8
- 0 0.95
- 9
- 0 0.57
- 10
- 0 0.96
- C3
- 0.292 55.1
Como se muestra en la figura 7 y la Tabla 8, las composiciones en partículas tratadas con encapsulación tenían una agregabilidad en sangre marcadamente baja cuando los valores absolutos del potencial zeta de los mismos eran 5mV o más bajos, 3mV o más bajos, además 2mV o más bajos y específicamente 1mV o más bajos.
[Evaluación 5e: Evaluación de la tasa restante en sangre]
En la evaluación 5e, se utilizaron las composiciones en partículas 3 a 10 como composición en partículas y FARNsi(Luc) como ARNsi y se sometieron al tratamiento de encapsulación de ARNsi para obtener la relación de carga de 8 en el método descrito en el Ejemplo 5. Para la composición 4 en partículas, se llevó a cabo también el tratamiento con encapsulación de ARNsi con el fin de obtener la relación de carga de 1, 2 y 4. A las composiciones en partículas encapsuladas en ARNsi así preparadas, se les adicionó una solución acuosa de cloruro de sodio 3M a una relación en volumen de 1/20 para preparar una solución isotónica (muestra de composición en partículas tratada con encapsulación de ARNsi) que contiene cloruro de sodio 150 mM. Como control, a una solución de ARNsi 10 µM preparada disolviendo F-ARNsi(Luc) en una solución reguladora HEPES 10 mM (pH 7.4), se le adicionó una solución acuosa 3M de cloruro de sodio a una relación en volumen de 1/20 para preparar una solución isotónica (muestra única de ARNsi) que contiene 150 mM de cloruro de sodio. Las muestras de la composición en partículas encapsuladas en ARNsi y la única muestra de ARNsi se administraron a ratones Balb/c (preparados a partir de Charles River Laboratories Japan, Inc.) a través de la vena de la cola y se recogieron 200 µµL de sangre a través de la vena cava inferior una hora después. La dosificación de cada muestra para cada ratón se determinó de manera que la relación de F-ARNsi con el peso del ratón fuera de 1 mg/kg.
La sangre recogida de cada uno de los individuos que recibieron una muestra derivada de las composiciones en partículas 3 a 6 se centrifugó con 2000xg a 4ºC, durante 10 minutos y se recogieron 80 µL de plasma del sobrenadante. El plasma se midió para la intensidad de fluorescencia utilizando un lector de placas (POWERSCAN HT, fabricado por
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