ES2614932T3

ES2614932T3 - Derivados de fosforoamidatos de nucleósidos

Info

Publication number: ES2614932T3
Application number: ES10765608.4T
Authority: ES
Inventors: Tim Hugo Maria Jonckers; Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson; Koen Vandyck; Michael Pelcman; Bengt Christian Sund; Horst Jürgen WÄHLING; Pedro Manuel Passos Pinho; Anna Winqvist; Karl Magnus Nilsson
Original assignee: Medivir AB; Janssen Products LP
Current assignee: Medivir AB; Janssen Products LP
Priority date: 2009-09-29
Filing date: 2010-09-29
Publication date: 2017-06-02
Anticipated expiration: 2030-09-29
Also published as: CN102686599A; US8552021B2; AU2010302971B2; AU2010302971A1; WO2011039221A3; US20120225839A1; EP2483288A2; RU2012117829A; CA2774754A1; RU2553656C2; EP2483288B1; CA2774754C; BR112012007122A2; CN102686599B; WO2011039221A2

Abstract

Un compuesto de fórmula I:**Fórmula** o una forma estereoisomérica del mismo, en donde: R1 es hidrógeno, -C(>=O)R6 o -C(>=O)CHR7-NH2; R2 es hidrógeno; o alquilo C1-C6 o fenilo, estando este último opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de halo, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alcoxi C1-C6, hidroxi y amino; o R2 es naftilo; o R2 es indolilo; R3 es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; R4 es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; o R3 y R4, junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman cicloalquilo C3-C7; R5 es alquilo C1-C10, opcionalmente sustituido con alcoxi C1-C6; o R5 es cicloalquilo C3-C7; bencilo; o fenilo, opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de hidroxi, alcoxi C1-C6, amino, mono- y di-alquil C1-C6-amino; R6 es alquilo C1-C6; R7 es alquilo C1-C6; R8 es hidrógeno o halógeno; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de fosforoamidatos de nucleosidos Campo de la invencion

Esta invencion se refiere a nuevos compuestos de nucleosidos, que son inhibidores de la polimerasa del virus de la hepatitis C (VHC) y a su uso en el tratamiento o profilaxis del VHC.

Antecedentes de la invencion

El VHC es un virus de ARN de cadena sencilla, de sentido positivo, con un genoma de alrededor de 9600 bases que pertenece a la familia de virus Flaviviridae en el genero Hepacivirus. La region NS5B del poligen de ARN codifica una ARN polimerasa dependiente de ARN 65 kDa (RdRp), que es esencial para la replicacion viral. Despues de la infeccion aguda inicial, una mayona de individuos infectados desarrollan hepatitis cronica debido a que el VHC se replica preferentemente en los hepatocitos, pero no es directamente citopatico. En particular, la falta de una vigorosa respuesta de linfocitos T y la alta propension del virus a mutar parecen fomentar una alta tasa de infeccion cronica. La hepatitis cronica puede progresar a fibrosis hepatica, conduciendo a la cirrosis, enfermedad hepatica en fase terminal, y HCC (carcinoma hepatocelular), haciendola la causa principal de trasplantes de hngado.

Existen seis genotipos principales del VHC y mas de 50 subtipos, que estan distribuidos geograficamente de manera diferente. El genotipo 1 del VHC es el genotipo predominante en Europa y los EE.UU. La extensa heterogeneidad genetica del VHC tiene importantes implicaciones diagnosticas y clmicas, explicando quizas las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a la terapia actual.

La transmision del VHC puede producirse a traves del contacto con sangre o productos de la sangre contaminados, por ejemplo despues de una transfusion de sangre o el uso de farmacos intravenosos. La introduccion de las pruebas de diagnostico utilizadas en los examenes de sangre ha conducido a una tendencia decreciente en la incidencia del VHC post-transfusion. Sin embargo, dada la lenta progresion de la enfermedad hepatica en fase terminal, las infecciones existentes continuaran presentando una carga medica y economica seria durante decadas.

Las actuales terapias para el VHC se basan en interferon alfa (IFN-a) (pegilado) en combinacion con ribavirina. Esta terapia de combinacion produce una respuesta virologica sostenida en mas del 40% de los pacientes infectados por los virus de genotipo 1 y aproximadamente el 80% de los infectados por los genotipos 2 y 3. Ademas de la eficacia limitada sobre el genotipo 1 del VHC, esta terapia de combinacion tiene efectos secundarios significativos y no es bien tolerada en muchos pacientes. Los principales efectos secundarios incluyen smtomas similares a la gripe, anomalfas hematologicas y smtomas neuropsiquiatricos. Por lo tanto, existe la necesidad de tratamientos mas eficaces, convenientes y mejor tolerados.

La experiencia con farmacos para el VIH, en particular con inhibidores de la proteasa del VIH, ha ensenado que la farmacocinetica sub-optima y los regfmenes de dosificacion complejos resultan rapidamente en fallos de cumplimiento inadvertidos. A su vez, esto significa que la concentracion valle de 24 horas (concentracion minima en plasma) para los farmacos respectivos en un regimen de VIH con frecuencia cae por debajo del umbral CI90 o DE90 durante largos momentos del dfa. Se considera que un nivel valle de 24 horas de al menos la CI50, y de forma mas realista, la CI90 o DE90, es esencial para ralentizar el desarrollo de mutantes de escape de farmacos. El logro de la farmacocinetica y el metabolismo de farmacos necesarios para permitir tales niveles valle ofrecen un reto exigente para el diseno de farmacos.

La ARN-polimerasa dependiente de ARN NS5B (RdRp) es absolutamente esencial para la replicacion del genoma de ARN de cadena sencilla, de sentido positivo. Esta enzima ha suscitado un gran interes entre los qmmicos medicos. Ambos son conocidos inhibidores nucleosidos y no nucleosidos de NS5B.

Los inhibidores de nucleosidos pueden actuar ya sea como un terminador de cadena o como un inhibidor competitivo, que interfiere en la union del nucleotido a la polimerasa. Para funcionar como un terminador de cadena el analogo de nucleosido debe ser captado por la celula y convertido in vivo en un trifosfato para competir por el sitio de union de nucleotidos a polimerasa. Esta conversion en el trifosfato es mediada habitualmente por las quinasas celulares que imparten requisitos estructurales adicionales en un potencial inhibidor nucleosido de la polimerasa. Ademas esto limita la evaluacion directa de los nucleosidos como inhibidores de la replicacion del VHC a ensayos basados en celulas capaces de fosforilacion in situ.

Varios grupos de investigacion han intentado desarrollar nucleosidos como inhibidores de la polimerasa del VHC, pero mientras que un punado de compuestos ha entrado en desarrollo clmico, ninguno ha proseguido hasta su registro. Entre los problemas con los que han topado hasta la fecha los nucleosidos que fijan como objetivo el VHC se encuentran la toxicidad, la mutagenicidad, la falta de selectividad, una eficacia deficiente, una biodisponibilidad 5 deficiente, regfmenes de dosificacion suboptimos y la consiguiente alta carga de pfldoras y el costo de los artfculos.

Varias patentes y solicitudes de patentes, asf como publicaciones cientfficas describen analogos de nucleosidos que tienen actividad inhibidora del VHC. El documento WO 2007/020193 describe derivados de fosforamidato de determinados nucleosidos. El documento WO 2008/043704 describe 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-hidroxi-5- hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furano-2-il)-1H-pirimidin-2-ona y derivados de esteres como inhibidores de la 10 polimerasa del VHC. El documento WO 2009/067409 describe nucleosidos 2',4'-sustituidos como agentes antivirales.

Existe una necesidad de inhibidores del VHC que puedan superar las desventajas de la terapia actual del VHC tales como efectos secundarios, eficacia limitada, el surgimiento de la resistencia y fallos de cumplimiento, asf como mejorar la respuesta viral sostenida.

15 La presente invencion concierne a derivados de fosforamidato de 1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-hidroxi-5-hidroximetil- 3-metil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2,4-di-ona que son inhibidores del VHC con propiedades utiles en cuanto a uno o mas de los parametros: eficacia antiviral, perfil favorable de desarrollo de resistencia, falta de toxicidad y genotoxicidad, farmacocinetica y farmacodinamica favorables tales como un aumento de la concentracion de analogos de mono- o tri-fosfato en el tugado, una absorcion incrementada, en particular adsorcion por celulas del 20 tugado y la facilidad de formulacion y administracion.

Descripcion de la invencion

De acuerdo con la presente invencion, se proporciona inhibidores de polimerasa del VHC, que se pueden representar por la formula I:

imagen1

25 incluyendo cualesquiera estereoisomeros posibles de los mismos, en donde:

R1 es hidrogeno, -C(=O)R6o -C(=O)CHR7-NH2;

R2 es hidrogeno; o alquilo C1-C6 o fenilo, estando este ultimo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de halo, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alcoxi C1-C6, hidroxi y amino; o R2es naftilo; o R2es indolilo;

30 R3es hidrogeno, alquilo C1-C6, bencilo;

R4 es hidrogeno, alquilo C1-C6, bencilo; o

R3y R4, junto con el atomo de carbono al que estan unidos, forman cicloalquilo C3-C7;

R5 es alquilo C1-C10, opcionalmente sustituido con alcoxi C1-C6; o R5 es cicloalquilo C3-C7; bencilo; o fenilo, opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de hidroxi, alcoxi 35 C1-C6, amino, mono-y di-alquil C1-C6-amino;

R6es alquilo C1-C6;

R7 es alquilo C1-C6;

R8es hidrogeno o halogeno;

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

40 Un aspecto adicional de la invencion proporciona un compuesto de formula I o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento o la profilaxis de la infeccion por el VHC. O se proporciona el uso de un compuesto de formula I o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de la infeccion por VHC. Genotipos

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del VHC representativos en el contexto del tratamiento o la profilaxis de acuerdo con la invencion incluyen el genotipo 1b (predominante en Europa) o 1a (predominante en America del Norte). En otro aspecto, se describe un metodo para el tratamiento o la profilaxis de la infeccion por el VHC, en particular del genotipo 1a o 1b, comprendiendo dicho metodo la administracion de una cantidad eficaz para tratar el VHC o para proporcionar profilaxis contra el VHC.

Descripcion Adicional de la invencion

Un subgrupo de compuestos comprende compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R1 es hidrogeno. Otro subgrupo comprende compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en este documento, en donde R1 es un grupo acilo C2-C6 tal como acetilo, pivaloilo o, preferiblemente, isobutirilo. Otro subgrupo comprende compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R1 es un grupo a-aminoacilo, procedente de un L-aminoacido tal como L-alanina, L-leucina, L-isoleucina o L-valina.

Otro subgrupo de compuestos comprende los compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R2 es fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo C1-C6 y alquenilo C2-C4, o en donde R2 es naftilo. De interes son compuestos de formula I o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R2 es fenilo, naftilo o fenilo sustituido con metilo, isopropilo y cloro, siendo este ultimo, mas en particular, 3-metil-4-cloro-6- isopropil-fenilo. Otro subgrupo de compuestos comprende compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R2es hidrogeno.

En los compuestos de formula I, o en cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, el grupo -NH-C(R3)(R4)-CO- forma un residuo aminoacido, que incluye residuos aminoacidos naturales y no naturales. De particular interes son aquellos residuos aminoacidos en donde R3 es hidrogeno. Cuando en este ultimo caso R4 es distinto de hidrogeno, la configuracion en el atomo de carbono asimetrico que porta R3y R4es preferiblemente la de un L-aminoacido. Ejemplos de -NH-C(R3)(R4)-CO- son residuos glicina (Gly), alanina (Ala), 1,1-dimetilglicina, valina (Val), isoleucina (Ile) y fenilalanina (Phe), en particular, la forma L tal como L-Ala, L-Val, L-Ile y L-Phe. Un ejemplo de un residuo aminoacido en donde R3 y R4, junto con el atomo de carbono al que estan unidos, forman cicloalquilo C3-C7, es el 1,1-ciclopropilaminoacido.

Un subgrupo de compuestos comprende compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde R3 es hidrogeno o alquilo C1-C6, y R4 es hidrogeno o alquilo C1-C6; o en donde R3es hidrogeno o alquilo C1-C4, y R4es hidrogeno o alquilo C1-C4; o en donde R3es hidrogeno o alquilo C1- C4, y R4 es hidrogeno. Un subgrupo particular entre el anterior es aquel en donde R4 es hidrogeno y en donde carbono que porta R3y R4se encuentra en configuracion L. En una realizacion, en los compuestos de formula I, o en cualquiera de los subgrupos de los compuestos de formula I, R3 es metilo o un alquilo C1-C6 ramificado tal como isopropilo o isobutilo, y R4 es hidrogeno, o en donde R3 es metilo y R4 es hidrogeno, o en donde R3 es metilo y R4 es metilo. Tambien de interes son los compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos mencionados en esta memoria, en donde el grupo -NH-C(R3)(R4)-CO- forma -NH-CH2-CO-(Gly) , el isomero L de NH-CH(CH3)-CO-(L-Ala), o -NH-C(CH3)2-CO-(a,a-dimetilglicilo); en particular L-Ala o a,a-dimetilglicilo, mas en particular L-Ala.

Una realizacion se refiere a los compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos I mencionados en esta memoria, en donde R5 es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-C4, o R5 es cicloalquilo C3-C7 (en particular, cicloalquilo C5-C6), o bencilo, en particular, en donde R5es metilo, etilo, n-propilo, 2- butil-pentilo, ciclopentilo, ciclohexilo o bencilo. De interes son grupos R5, en donde un resto alquilo C1-C6 tal como metilo o etilo esta sustituido con un grupo alcoxi tal como metoxi o etoxi, por ejemplo R5es CH3-O-CH2-CH2-.

Una realizacion se refiere a los compuestos de formula I, o cualquiera de los subgrupos de compuestos I mencionados en esta memoria, en donde R6es alquilo C1-C4, o en donde R6es isopropilo.

Una realizacion se refiere a compuestos de formula I o a cualquiera de los subgrupos de compuestos I mencionados en esta memoria, en donde R7es alquilo C1-C4, o en donde R7es metilo; un subgrupo adicional de compuestos se refiere a aquellos en donde R7 es como se especifica en esta memoria y el grupo -C(=O)CHR7-NH2 tiene la configuracion L.

Una realizacion se refiere a compuestos de formula I o cualquiera de los subgrupos de compuestos I mencionados en esta memoria, en donde R8es hidrogeno o yodo; o R8es hidrogeno.

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Un subgrupo particular de compuestos de formula I son aquellos en donde:

R1 es hidrogeno;

R2es fenilo sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente de alquilo C1-C6, halo y

alquenilo C2-C4; -NH-C(R3)(R4)-CO- forma L-Ala o a,a-dimetilglicilo;

R5es alquilo C1-C10, alquilo C1-C6 sustituido con alcoxi C1-C6; cicloalquilo C3-C7 o bencilo;

R8es hidrogeno o yodo.

Otro subgrupo particular de compuestos de formula I son aquellos en donde:

R1 es hidrogeno;

R2 es fenilo, fenilo sustituido con dos alquilos C1-C4 y con halo, o naftilo; -NH-C(R3)(R4)-CO- forma L-Ala o a,a-

dimetilglicilo;

R5 es alquilo C1-C10, alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C4; cicloalquilo C5-C6 o bencilo;

R8 es hidrogeno.

Un subgrupo particular de compuestos de formula I son aquellos en donde:

R1 es hidrogeno; R2 es hidrogeno; -NH-C(R3)(R4)-CO-forma L-Ala o a,a-dimetilglicilo; R5 es alquilo C1-C8, alquilo Ci- C4 sustituido con alcoxi C1-C4; ciclopentilo, ciclohexilo o bencilo; R8 es hidrogeno.

Un subgrupo particular de compuestos de formula I son aquellos en donde:

R1 es hidrogeno; R2 es hidrogeno; -NH-C(R3)(R4)-CO- forma L-Ala; R5 es alquilo C1-C8, ciclopentilo, ciclohexilo o bencilo; R8 es hidrogeno.

Un subgrupo particular de compuestos de formula I son los compuestos I-1 a I-35 enumerados en la Tabla 1 que figura mas adelante, incluyendo las sales y los solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Los compuestos de formula I tienen varios centros quirales y se representan en esta memoria como un estereoisomero espedfico. Esto tambien se aplica a algunos de los compuestos intermedios utilizados en la preparacion de los compuestos de la formula I, compuestos intermedios que pueden contener uno o mas centros quirales. Sin embargo, los compuestos de formula I, o cualquiera de los compuestos intermedios utilizados en su preparacion que tienen al menos un centro quiral, pueden contener pequenas cantidades de los otros estereoisomeros, es decir, estereoisomeros con diferente quiralidad en uno o mas de los centros asimetricos. La cantidad total de los otros estereoisomeros, en particular, no excede de 25%, o 20%, o 10%, o 5%, o 2%, o 1%, o 0,5%, o 0,1% en peso.

La quiralidad tambien puede estar presente en los sustituyentes tales como, por ejemplo, la quiralidad provocada por

imagen2

los sustituyentes en O p. ej., los R3y R4que portan carbono (en que R3y R4son diferentes), 0

el atomo de fosforo. El centro de fosforo puede estar presente como Rp o Sp, o una mezcla de tales estereoisomeros, incluyendo los racematos. Pueden existir tambien los diastereoisomeros resultantes del centro quiral de fosforo y un atomo de carbono quiral.

La configuracion absoluta en cada uno de los centros quirales se puede determinar utilizando metodos conocidos en la tecnica tales como, por ejemplo, difraccion de rayos X o RMN y/o implicando a materiales de partida de estereoqmmica conocida. Las formas estereoisomeras puras de los compuestos y compuestos intermedios de esta invencion se pueden obtener mediante la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los enantiomeros pueden separarse unos de otros mediante la cristalizacion selectiva de sus sales diastereomericas con acidos o bases opticamente activos. Ejemplos de los mismos son acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canfosulfonico. Alternativamente, los enantiomeros pueden separarse por tecnicas cromatograficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoqmmicamente isomericas puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoqmmicamente isomericas puras de los materiales de partida apropiados, con la condicion de que la reaccion se produzca de forma estereoespedfica. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero espedfico, dicho compuesto se sintetiza por metodos de preparacion estereoespedficos. Estos metodos emplearan ventajosamente materiales de partida enantiomericamente puros.

Los racematos diastereomericos de los compuestos de formula I pueden obtenerse por separado por metodos convencionales. Metodos de separacion ffsica apropiados que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalizacion selectiva y cromatograffa, p. ej., cromatograffa en columna.

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Las sales por adicion farmaceuticamente aceptables comprenden las formas de sal por adicion de acidos y bases no toxicas terapeuticamente activas de los compuestos de formula I. Las sales por adicion de acidos farmaceuticamente aceptables pueden obtenerse convenientemente tratando la forma de base con un acido apropiado. Acidos apropiados comprenden, por ejemplo, acidos inorganicos tales como hidracidos halogenados, p. ej., acido clortndrico o bromtndrico, sulfurico, n^trico, fosforico y acidos similares; o acidos organicos tales como, por ejemplo, acetico, propanoico, hidroxiacetico, lactico, piruvico, oxalico (es decir, etanodioico), malonico, succmico (es decir, acido butanodioico), maleico, fumarico, malico (es decir, acido hidroxilo-butanodioico), tartarico, citrico, metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, ciclamico, salicilico, p-aminosalidlico, pamoico y acidos similares. Inversamente, dichas formas de sal pueden convertirse, por tratamiento con una base apropiada, en la forma de base libre.

Los compuestos de formula I que contienen un proton de caracter acido tambien se pueden convertir en sus formas de sal por adicion de metales o aminas no toxicas mediante tratamiento con bases organicas e inorganicas apropiadas. Formas de sales basicas apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinoterreos, p. ej., las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases organicas, p. ej., las sales de benzatina, W-metil-D-glucamina, sales de hidrabamina, y sales con aminoacidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.

El termino "solvatos" se refiere cualesquiera solvatos que pueden formar los compuestos de formula I asf como las sales de los mismos. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, p. ej., etanolatos, propanolatos, incluyendo n-propanolatos e isopropanolatos, y similares.

Algunos de los compuestos de formula I tambien pueden existir en su forma tautomerica. La base de uridina es un ejemplo de una de estas formas. Aunque no se indica explfcitamente en la formula anterior, formas de este tipo estan destinadas a ser incluidas dentro del alcance de la presente invencion.

Tal como se usa en esta memoria, 'alquilo 'C1-C4, como un grupo o parte de un grupo, define radicales hidrocarbonados saturados, de cadena lineal o ramificada, que tienen de 1 a 4 atomos de carbono tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo.'alquilo C1-C5' abarca radicales alquilo C1-C4 y los homologos superiores de los mismos que tienen 5 atomos de carbono tales como, por ejemplo, 1-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metil-1 -butilo, y similares. 'Alquilo C1-C6' abarca radicales alquilo C1-C4 y los homologos superiores de los mismos que tienen 5 o 6 atomos de carbono tales como, por ejemplo, 1-pentilo, 2- pentilo, 3-pentilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 2-metil-1-butilo, 2-metil-1-pentilo, 2-etil-1 -butilo, 3-metil-2-pentilo, y similares. De interes entre alquilo C1-C6 es alquilo C1-C4.

Alquilo C1-C10 abarca radicales alquilo C1-C6 y los homologos superiores de los mismos que tienen 7-10 atomos de carbono, principalmente homologos ramificados tales como 2-propilpentilo. De interes entre alquilo C1-C10 es alquilo C1-C8 (que abarca radicales alquilo C1-C6 y los homologos superiores de los mismos que tienen 7-8 atomos de carbono) o alquilo C1-C6.

'Alquenilo C2-C6' como un grupo o parte de un grupo define radicales hidrocarbonados saturados, de cadena lineal o ramificada, que tienen de 1 a 6 atomos de carbono y un doble enlace tales como, por ejemplo, etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-1-propenilo, 2-metil-2-propenilo, 4-pentenilo, 3-pentenilo, 5- hexenilo, 4-hexenilo, 3-hexenilo, y similares. Un subgrupo de alquenilo C2-C6 incluye los radicales alquenilo C2-C6 en los que esta saturado el carbono con el que el grupo esta enlazado al resto de la molecula. Otro subgrupo son los alquenilos C2-C4, que son radicales alquenilo con dos a cuatro atomos de carbono. Otros subgrupos de alquenilo C2- C6 incluyen el alquenilo C2-C6 o los grupos alquenilo C2-C4 en los que esta saturado el carbono con el que el grupo esta unido al resto de la molecula.

'Alcoxi C1-C4' se refiere a un radical -O-alquilo C1-C4, en donde alquilo C1-C4 es como se ha definido anteriormente. Radicales alcoxi C1-C4 de interes incluyen, pero no estan limitados a metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi.

"Cicloalquilo C3-C7" incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. De interes son ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

“Acilo C2-C6“ como un grupo o parte de un grupo define un grupo alquilo C1-C5 que esta unido a un grupo carbonilo con un enlace sencillo, e incluye, por ejemplo, acetilo, propanoilo, butanoilo, isobutanoilo, pentanoilo, hexanoilo, pivanoflo, y similares. La nomenclatura de los restos acilo C2-C6 mencionados anteriormente puede ser diferente tal como, por ejemplo, isobutanoilo tambien se puede designar como isobutirilo.

El termino "halo" es generico para fluor, cloro, bromo y yodo.

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Tal como se utiliza en esta memoria, el termino “(= O)" u "oxo" forma un resto carbonilo cuando esta unido a un atomo de carbono. Cabe senalar que un atomo solo puede estar sustituido con un grupo oxo cuando la Valencia de ese atomo asf lo permita.

Debe tenerse en cuenta que las posiciones de los radicales en cualquier resto molecular utilizado en las definiciones pueden estar en cualquier parte de un resto siempre que sea qmmicamente estable. Cuando cualquier variable aparezca mas de una vez en cualquier resto, cada una de las definiciones es independiente.

La presente invencion tambien incluye compuestos marcados con isotopos de formula I o cualquier subgrupo de formula I, en donde uno o mas de los atomos esta reemplazado por un isotopo que difiere del o de los que normalmente se encuentran en la naturaleza. Ejemplos de isotopos de este tipo incluyen isotopos de hidrogeno tales como H y H; de carbono tales como C, C y C; nitrogeno tales como N y N; oxfgeno tales como O, O y

i A J Ai AO J oc ^ 1 o J J

O; fosforo tales como P y P, azufre, tales como S; fluor, tales como F; cloro, tales como Cl; bromo tales

~7C QO J OO 'l O/ 'I OA i Ai

como Br, Br, Br y Br; y yodo tales como I, I, I y I. Los compuestos marcados con isotopos de la invencion se pueden preparar por procedimientos analogos a los descritos en esta memoria utilizando los reactivos marcados con isotopos o materiales de partida apropiados, o por tecnicas conocidas en la tecnica. La eleccion del isotopo incluido en un compuesto marcado isotopicamente depende de la aplicacion espedfica de ese compuesto. Por ejemplo, para ensayos de distribucion tisular, se incorpora un isotopo radiactivo tal como 3H o 14C. Para las aplicaciones de formacion de radio-imagenes, sera util un isotopo emisor de positrones tal como 11C, 18C, 13N o 15O. La incorporacion de deuterio puede proporcionar una mayor estabilidad metabolica, resultando, p. ej., en una semi- vida in vivo incrementada del compuesto o menores requisitos de dosificacion.

Siempre que se utilice en esta memoria, las expresiones "compuestos de formula I", o "los presentes compuestos" o "subgrupos de compuestos de formula I", o terminos similares, pretenden incluir los compuestos de formula I, o subgrupos de los mismos, asf como sus sales y solvatos.

Los compuestos de formula I se pueden preparar haciendo reaccionar un derivado de nucleosido (1b) con un clorofosforoamidato (1a) tal como se indica en el Esquema 1.

imagen3

La condensacion del derivado de nucleosido (1b) con un clorofosforoamidato (1a), llevada a cabo en un disolvente inerte en la reaccion tal como un eter, p. ej., dietil-eter, THF o MeTHF, o un hidrocarburo halogenado, p. ej., diclorometano, en presencia de una base tal como W-metilimidazol o similares, proporciona un fosforoamidato de la

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formula (I). Alternativamente, un reactivo de Grignard, p. ej., f-BuMgCl se puede utilizar como la base, en este caso la reaccion se realiza convenientemente en un disolvente eter, p. ej., THF o MeTHF.

Derivados de nucleosidos 1b, en donde R1 es distinto de hidrogeno, se pueden preparar tal como se ilustra en el esquema 2.

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el diester de (2a) (preparado, p. ej., tal como se describe en el documento WO 2008/043704) utilizando un metodo de hidrolisis del ester, por ejemplo por tratamiento con amoniaco en etanol. Derivados de nucleosidos (1b) que portan un sustituyente en la posicion 3' es decir, en donde R1 es -C(=O)R6o -C(=O)CR7-NH2, en donde R6y R7son como se definen anteriormente, pueden prepararse a partir del nucleosido diol (2b) mediante una secuencia de proteccion-acilacion-desproteccion. Por ejemplo, la proteccion selectiva del grupo hidroxi primario con un grupo tritilo o monometoxi-tritilo (mMt), o similar, mediante tratamiento con un agente de introduccion de tritilo, por ejemplo el haluro tal como el cloruro, en presencia de una base tal como piridina, seguido de la acilacion del grupo 3'-hidroxi utilizando las condiciones de acilacion apropiadas proporciona los derivados 3'-acilados. Nucleosidos (2c) que llevan un grupo ester en la posicion 3', es decir, R1 en la formula (1a) es -C(=O)R6, se obtienen convenientemente por reaccion del nucleosido protegido en 5' con un antndrido de alquilo de formula (R6CO)2O en presencia de una base tal como piridina o similares. Nucleosidos (2d) que llevan un aminoacido en la posicion 3', es decir, R1 en la formula (1a) es -C(=O)CR7-NH2, se pueden obtener por reaccion del nucleosido protegido en 5' con un aminoacido alifatico N-protegido en presencia de un reactivo de acoplamiento de peptidos adecuado tal como EDAC o similares. La separacion finalmente del grupo protector 5'-O, y en caso de que R1 se introduzca como un aminoacido N-protegido, el grupo protector de N, utilizando las condiciones apropiadas de acuerdo con el grupo protector utilizado tal como tratamiento de caracter acido en el caso de un grupo protector de tritilo o monometoxi-tritilo, proporciona entonces los derivados 3'-acilados (2c) y (2d). Los compuestos de formula I, en donde R1 es -C(=O)R6 o -C(=O)CR7-NH2 se pueden preparar, alternativamente, condensando primero el clorofosforoamidato (1a) con el compuesto dihidroxi (2b) e introduciendo despues el deseado sustituyente 3'.

Los clorofosforoamidatos (1a) se pueden preparar mediante una secuencia de dos etapas a partir de oxicloruro de fosforo, tal como se ilustra en el Esquema 3, en donde R2atiene el mismo significado que R2, pero es distinto de hidrogeno, y R3, R4y R5son como se definido anteriormente.

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La condensacion de POChcon un alcohol R2aOH en un disolvente inerte en la reaccion tal como Et2O proporciona el alquiloxi- o ariloxi-fosforodicloridato (3a). La subsiguiente reaccion con un derivado de aminoacido (3b), en donde R5 es como se define anteriormente, o R5 puede ser un grupo protector de acido carboxflico que se separa y reemplaza por el grupo R5 deseado, proporciona el clorofosforoamidato (1a). Estas reacciones se llevan a cabo en un disolvente inerte en la reaccion tal como los disolventes mencionados anteriormente en relacion con la preparacion de los compuestos de formula I.

En un aspecto adicional, la presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I, tal como se especifica en esta memoria, y un soporte farmaceuticamente aceptable. Una cantidad terapeuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para actuar de una manera profilactica contra, para estabilizar o para reducir una infeccion viral y, en particular, en la infeccion viral del VHC en sujetos infectados o sujetos en riesgo de ser infectados. En todavfa un aspecto adicional, esta invencion se refiere a un procedimiento de preparacion de una composicion farmaceutica tal como se especifica en esta memoria, que comprende mezclar mtimamente un soporte farmaceuticamente aceptable con una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I, tal como se especifica en esta memoria.

Para preparar las composiciones farmaceuticas de esta invencion, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de la sal por adicion o complejo metalico tal como el ingrediente activo se combina en mezcla mtima con un soporte farmaceuticamente aceptable, soporte que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas son deseables en forma de dosificacion unitaria adecuada, particularmente para la administracion por via oral, rectal, percutanea, o por inyeccion parenteral. Por ejemplo, en la preparacion de las composiciones en forma de dosificacion oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmaceuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y disoluciones; o soportes solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente soportes farmaceuticos solidos. Para las composiciones parenterales, el soporte comprendera normalmente agua esteril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Se pueden preparar disoluciones inyectables, por ejemplo, en donde el soporte comprende disolucion salina, disolucion de glucosa o una mezcla de disolucion salina y disolucion de glucosa. Tambien se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear soportes lfquidos, agentes de suspension y similares apropiados. Tambien se incluyen preparaciones en forma solida destinadas a ser convertidas, poco antes de su uso, en preparaciones en forma lfquida. En las composiciones adecuadas para administracion percutanea, el soporte comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetracion y/o un agente humectante adecuado, combinado opcionalmente con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos que no introducen un efecto deletereo significativo en la piel.

Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar tambien por inhalacion oral o insuflacion por medio de metodos y formulaciones empleados en la tecnica para administracion por esta via. Asf, en general, los compuestos de la presente invencion se pueden administrar a los pulmones en forma de una disolucion, una suspension o un polvo seco, prefiriendose una disolucion. Cualquier sistema desarrollado para el suministro de disoluciones, suspensiones o polvos secos por inhalacion oral o insuflacion es adecuado para la administracion de los presentes compuestos.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmaceuticas mencionadas anteriormente en forma de dosificacion unitaria para facilitar la administracion y uniformidad de dosificacion. Forma de dosificacion unitaria, tal

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como se utiliza en esta memoria, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada una de las unidades una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el soporte farmaceutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificacion unitaria son comprimidos (incluyendo comprimidos con muesca o recubiertos), capsulas, pfldoras, supositorios, paquetes de polvos, obleas, disoluciones o suspensiones inyectables y similares, y multiplos segregados de los mismos. Los compuestos de formula I muestran propiedades antivirales. Las infecciones virales y sus enfermedades asociadas que pueden tratarse utilizando los compuestos descritos en esta memoria incluyen aquellas infecciones provocadas por el VHC y otros flavivirus patogenos tales como la fiebre amarilla, la fiebre del dengue (tipos 1-4), encefalitis de St. Louis, encefalitis japonesa, encefalitis del valle del Murray, el virus del oeste del Nilo y el virus Kunjin. Las enfermedades asociadas con el VHC incluyen fibrosis progresiva del tugado, inflamacion y necrosis que conduce a cirrosis, enfermedad hepatica en fase terminal y HCC; y para los otros flavivirus patogenos las enfermedades incluyen fiebre amarilla, fiebre del dengue, fiebre hemorragica y encefalitis. Ademas, se cree que un numero de los compuestos de esta invencion son activos contra cepas mutadas del VHC.

Adicionalmente, muchos de los compuestos de esta invencion muestran un perfil farmacocinetico favorable y tienen propiedades atractivas en terminos de biodisponibilidad, incluyendo una semi-vida, AUC (area bajo la curva) y valores pico aceptables y que carecen de fenomenos desfavorables tales como un comienzo rapido insuficiente y retencion de tejido.

La actividad antiviral in vitro contra el VHC de los compuestos de formula I se puede someter a ensayo en un sistema de replicon del VHC celular basado en Lohmann et al. (1999) Science 285:110-113, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624, que se ejemplifica adicionalmente en la seccion de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infeccion completa para el VHC, es ampliamente aceptado como el modelo mas robusto y eficiente de la replicacion autonoma del ARN del VHC actualmente disponible. Los compuestos que exhiben actividad anti-HCV en este modelo celular se consideran candidatos para desarrollo ulterior en el tratamiento de infecciones por el HCV en los mairnferos. Se apreciara que es importante distinguir entre compuestos que interfieren espedficamente con las funciones del VHC de los que ejercen efectos citotoxicos o citostaticos en el modelo de replicon del VHC y, como consecuencia, provocan una disminucion en la concentracion de ARN del VHC o de la enzima informadora enlazada. Los ensayos son conocidos en el campo para la evaluacion de la citotoxicidad celular basados, por ejemplo, en la actividad de enzimas mitocondriales utilizando colorantes redox fluorogenos tales como resazurina. Ademas, existen rastreos de contador celulares para la evaluacion de la inhibicion no selectiva de la actividad del gen informador enlazado tales como luciferasa de luciernaga. Tipos de celulas apropiados pueden equiparse mediante transfeccion estable con un gen informador de luciferasa, cuya expresion es dependiente de un promotor del gen constitutivamente activo, y tales celulas pueden utilizarse como un contra-rastreo para eliminar inhibidores no selectivos.

Debido a sus propiedades antivirales, particularmente sus propiedades anti-HCV, los compuestos de formula I y las sales o solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos son utiles en el tratamiento de individuos infectados con un virus, particularmente un virus que es el VHC, y para la profilaxis de las infecciones virales, en particular infecciones por el VHC. En general, los compuestos de la presente invencion pueden ser utiles en el tratamiento de animales de homeotermos infectados con virus, en particular flavivirus tales como el VHC.

Por tanto, los compuestos de la presente invencion se pueden utilizar como una medicina. La presente invencion tambien se refiere al uso de los compuestos de la presente invencion en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de una infeccion viral, en particular la infeccion por el VHC.

Se descrine, ademas de ello, un metodo de tratamiento de un animal homeotermo infectado por un virus o que esta en riesgo de ser infectado por un virus, en particular por el VHC, comprendiendo dicho metodo la administracion de una cantidad anti-viralmente eficaz de un compuesto de formula I, tal como se especifica en esta memoria. Dicho uso como medicamento o metodo de tratamiento comprende la administracion sistemica a sujetos infectados por virus o a sujetos susceptibles a infecciones virales de una cantidad eficaz para combatir las afecciones asociadas con la infeccion viral, en particular la infeccion por el VHC.

En general, se contempla que una cantidad diaria eficaz antiviral sena de 0,01 mg/kg a 500 mg/kg de peso corporal, o de 0,1 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, o de 0,5 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o mas sub-dosis a intervalos apropiados a lo largo del dfa. Dichas sub-dosis pueden formularse como formas de dosificacion unitaria, por ejemplo, que contienen de 1 a 1000 mg y, en particular de 5 a 200 mg de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria.

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La invencion tambien se refiere a una combinacion de un compuesto de formula I, una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, y otro compuesto antiviral, en particular, otro compuesto anti-VHC. El termino "combinacion" puede referirse a un producto que contiene (a) un compuesto de formula I tal como se especifica anteriormente y (b), opcionalmente, otro compuesto anti-VHC tal como una preparacion combinada para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.

Compuestos anti-VHC que se pueden utilizar en este tipo de combinaciones incluyen inhibidores nucleosido o no nucleosidos de la polimerasa del VHC, inhibidores de proteasa del VHC, inhibidores de helicasa del VHC o inhibidores de la fusion del VHC. Otros agentes que se pueden utilizar en tales combinaciones incluyen interferon-a (IFN-a), interferon-a pegilado y ribavirina.

Cualquiera de las combinaciones mencionadas anteriormente se pueden formular en forma de una composicion farmaceutica que incluye los ingredientes activos descritos anteriormente y un soporte tal como se describe anteriormente. Cada uno de los ingredientes activos se puede formular por separado y las formulaciones pueden administrarse conjuntamente, o puede proporcionarse una formulacion que contiene ambos y, si se desea, ingredientes activos adicionales. En el primer caso, las combinaciones se pueden formular tambien como una preparacion combinada para uso simultaneo, separado o secuencial en la terapia del VHC. Dicha composicion puede adoptar cualquiera de las formas descritas anteriormente. En una realizacion, ambos ingredientes se formulan en una forma de dosificacion tal como una combinacion de dosis fija.

Los componentes individuales de las combinaciones anteriores se pueden administrar por separado en diferentes momentos durante el curso de la terapia o concurrentemente en formas de combinacion divididas o individuales. Preferiblemente, las formas de dosificacion separadas se administran simultaneamente.

Los compuestos de formula I, o las combinaciones descritas en esta memoria, incluyendo aquellos con otros agentes anti-VHC, tambien se pueden combinar con un agente que tiene un efecto positivo sobre el metabolismo del farmaco y/o la farmacocinetica que mejoran la biodisponibilidad, p. ej., ritonavir o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. El ritonavir se puede utilizar como formulacion separada, o se puede co-formular con uno o mas de los agentes activos de las combinaciones de la presente invencion. La relacion ponderal del compuesto de

formula I de ritonavir puede estar en el intervalo de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1:10, o de

aproximadamente 6:1 a aproximadamente 1:6, o de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10:1, o de

aproximadamente 1:1 a aproximadamente 6:1, o de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 4:1, o de

aproximadamente 1:1 a aproximadamente 3:1, o de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 2:1.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invencion y no limitar su alcance a los mismos. El sfmbolo Bn representa bencilo.

Ejemplo 1

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3 g de 1-naftol se cargaron en un matraz de 3 bocas y se disolvieron en Et2O (60 mL) bajo N2. A la disolucion se anadio POCl3(1 eq.) y la disolucion resultante se enfrio a -78°C. A la disolucion fria se anadio gota a gota (a lo largo de aprox. 15 min.) Et3N (1 eq.). Se dejo que la reaccion alcanzara la temperatura ambiente durante la noche y luego el solido blanco se separo por filtracion, se lavo con Et2O, evitando el contacto con la humedad. Las fases en eter reunidas se concentraron en vacfo y el residuo se volvio a disolver en CH2Cl2 (120 mL) bajo N2. A esta disolucion se anadio hidrocloruro de ester bendlico de L-alanina (1 eq.) y la mezcla se enfrio a -78°C. A esto se anadio gota a gota a continuacion (a lo largo de aprox. 45 min) Et3N (1 eq.). Se dejo que la reaccion alcanzara la temperatura

ambiente durante la noche. El disolvente se separo en vado, evitando el contacto con la humedad y el residuo se hizo pasar a traves de gel de s^lice seco eluyendo con EtOAc/heptano: 7/3. Las fracciones que conteman el producto se concentraron en vado evitando el contacto con la humedad y el residuo se disolvio en THF seco para obtener una disolucion estandar de concentracion aproximada utilizada como tal en la siguiente reaccion.

5 Ejemplo 2: Preparacion de fosforocloridatos

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A una disolucion agitada de sal hidrocloruro de ester etilico de L-alanina (5 g, 32,5 mmol, secada en vado durante 48 h) en diclorometano (50 mL) a aprox -78°C, se anadio gota a gota una disolucion de diclorofosfato de fenilo (5,7 g, 27 mmol, 4,05 ml) en diclorometano (20 ml) a lo largo de 5 minutos. A la disolucion resultante se anadio una 10 disolucion de trietilamina (8,2 g, 81 mmol, 11,3 mL) en diclorometano (20 mL) durante 30 min. Se dejo que el solido obtenido alcanzara lentamente la temperatura a lo largo de 2 h y despues la mezcla de reaccion se aplico directamente en la columna. La cromatograffa en columna (diam: 7 cm, SiO2: 100 g, eluyente de empaquetamiento: acetato de etilo en /-hexano 20%) del residuo utilizando acetato de etilo en /-hexano (gradiente escalonado 20-30%) dio la separacion de subproductos tales como fosforodiamidatos. Las fracciones apropiadas (seguimiento por TLC: /- 15 Hex-EtOAc 3:2, el producto entra primero como puntos de referencia, seguido de diamidatos que migran en la placa de TLC) se concentraron dando 2-(cloro(fenoxi)fosforilamino)-propanoato de (2S)-etilo, un aceite incoloro (2,16 g, 7,4 mmol, 27%). El producto se diluyo con diclorometano en una disolucion madre 0,25 M y se pudo mantener en el congelador durante hasta un mes. Datos de RMN (400 MHz, 298 K, CDCla): 1H, 8 1,23-1,37 (m, 3 H), 1,52 (2 d, 3 H), 4,08-4,37 (m, 4 H), 7,21-7,29 (m, 3 H), 7,37 (m, 2 H). 31P, 8 7,60 y 7,96 (2 s, sin patron P utilizado).

20 Los compuestos intermedios de fosfocloroamidato de los compuestos de la Tabla 1 se prepararon de forma analoga.

Ejemplo 3

Los compuestos I-1 a I-35 (vease la Tabla 1) se sintetizaron utilizando un metodo como el descrito mas adelante. En la mayona de los casos, despues de la purificacion, los compuestos se obtuvieron como mezclas de diastereomeros con una configuracion racemica en el atomo de fosforo. En caso de que se pudieran separar los diastereomeros, no 25 se realizo asignacion alguna de la configuracion absoluta.

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A una disolucion de 1-(5-azido-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (0,88 g, 3,1 mmol) en diclorometano (17 mL) y N-metil-imidazol (0,76 g, 9,3 mmol, 0,74 ml) a aprox -70°C se anadio gota a gota 2-(cloro(fenoxi)-fosforilamino)-propanoato de (2S)-etilo (16 mL de una disolucion 0.25 M en diclorometano) a lo largo de 35 min mientras se mantema la temperatura entre -70 y -60°C. Despues, se dejo que la mezcla de reaccion 5 se calentara lentamente a 5-10°C y se controlo mediante TLC (9:1 y 95:5 de diclorometano-metanol, deteccion UV). Despues de un total de 130 min, la mezcla de reaccion se concentro sobre silice. El residuo se purifico por cromatograffa en columna (diam: 4 cm, SO2: 70 g, eluyente de empaquetamiento: diclorometano) utilizando un gradiente escalonado de metanol en diclorometano (0-10%). En este caso, primero se eluyo una mezcla de 3'-, 3',5'- y un unico isomero de 5'-fosforamidato, a continuacion una mezcla diastereomerica de 5'-fosforamidatos, seguido de 10 un unico isomero de 5'-fosforamidato y, finalmente, nucleosido sin reaccionar (0,3 g, 1,06 mmol). La purificacion adicional del material utilizando prep-LC (Columna: Phenomex Synergi 10 u, MAX-RP, 80A, tamano: 100 x 30 mm, Caudal: 25 ml/min, Gradiente: 30-60% de acetonitrilo en agua a lo largo de 20 min) dio la separacion de los nucleosidos disustituidos no deseados y 3'-regioisomeros de los deseados 5'-fosforamidatos. Las fracciones apropiadas se concentraron y se liofilizaron a partir de dioxano y luego se dividieron en los siguientes residuos: 15 primera elucion, el diastereomero 5' en forma de un polvo blanco (27 mg, 0,05 mmol, 2%), la mezcla 5'- diastereomerica en forma de un solido blanco (0,35 g, 21%) y segunda elucion, el diastereomero en forma de un solido blanco (33 mg, 2%).

Datos de RMN del diastereomero que eluye primero (400 MHz, 298 K, CDCls): 1H, 8 0,94 (d, 3 H), 1,26 (t, 3 H), 1,38 (d, 3 H), 2,74 (m, 1 H), 3,75 (d, 1 H, NH), 3,84-4,25 (m, 4 H, H-3', a-H, CH3 CHO), 4,37 (dd, 1 H, H-5'), 4,48 (dd, 1 H, 20 H-5'), 5,59 (d, 1 H), 6,40 (s ancho, 1 H, H-1'), 7,17-7,39 (m, 6 H), 9,15 (s, 1 H, NH). 31P, 8 3,44 (s, ningun patron

interno P utilizado) LR-MS:. Calc. para C21H27N6O9P: 539,16 encontrado: 539,12 [M + H]

Datos de RMN del diastereomero que eluye en segundo lugar (400 MHz, 298 K, CDCla): 1H, 8 1,01 (d, 3 H), 1,26 (t, 3 H), 1,38 (d, 3 H), 2,77 (m, 1 H), 3,92-4,24 (m, 5 H, NH, H-3', a-H, CH3CH2O), 4,42 (d, 2 H, H-5' y H-5”), 5,67 (d, 1 H), 6,41 (s ancho, 1 H, H-1'), 7,16-7,43 (m, 6 H). LR-MS: Calc. para C21H27N6O9P: 539,16. Encontrado: 539,12 [M + 25 H].

El diastereomero que eluye primero se designa diastereomero 1 y el diastereomero que eluye en segundo lugar se designa diastereomero 2.

Datos de RMN de otros ejemplos seleccionados:

Compuesto I-2

30 Compuesto enantiomericamente puro

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 ppm 1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3 H) 1,18-1,22 (m, 6 H) 1,43 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 2,28 (s, 3 H) 2,68-2,81 (m, 1 H) 3,17 (spt, J = 6,9 Hz, 1 H) 3,69 (s ancho, 1 H) 3,97 -4,09 (m, 2 H) 4,14 (t, J = 10,8 Hz, 1 H) 4,39 (d, J = 8,6 Hz, 2 H) 5,14 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) 5,17 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) 5,67 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 6,38 (s ancho, 1 H) 7,21-7,39 (m, 8 H) 8,99 (s ancho, 1 H)

35 Compuesto I-6

Mezcla diastereoisomerica

1H-RMN (500 MHz, 298 K, DMSO-de): 1H, 8 0,85 (m, 3 H, 2'P-CHs), 1,21 (d, 3 H, CH3CH-), 1,47-1,75 (m, 8 H, 4 x CH2), 2,63 (m, 1 H, H-2'), 3,79 (m, 1 H, CH3 CH-), 3,98 (s ancho, 1 H , H-3'), 4,38 (m, 2 H, H-5',5"), 5,02 (m, 1 H, (- CH2)2-CH-O), 5,55 (m, 1 H, H-5), 5,92 (m, 1 H, OH-3'), 6,13 (m, 1 H, -NH-P), 6,29 (s ancho, 1 H, H-1'), 7,20 (m, 3 H, 40 Ar-H), 7,36 (m, 2 H, Ar-H), 7,52 (dd, 1 H, H-6), 11,46 (s, 1 H, O = C-NH-C = O)

Compuesto I-13

Mezcla diastereoisomerica (6:4)

1H-RMN (500 MHz, 298 K, CDCh): 8 0,93 (m, 3 H, CH3CH2-), 1,03 (d, 3 H, 2'P-C^), 1,37 (m, 2 H, CH3CH2-), 1,511,69 (m, 8 H, (CH3)2C y -CH2CH2CH2O-), 2,75 (m, 1 H, H-2'), 3,61 (d, -NH-P principal), 3,74 (d, -NH-P secundario), 45 3,88-4,20 (m, 3 H, H-3' y -CH2CH2O-), 4,30-4,51 (m, 2 H, H-5 ',5"), 5,54 (d, H-5 secundario), 5,66 (d, H-5 principal),

6,39 (s ancho, 1 H, H -1'), 7,10-7,47 (m, 6 H, Ar-H y H-6), 8,67 (s ancho, 1 H, O=C-NH-C=O).

Compuesto I-19

Compuesto enantiomericamente puro

1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 0,98 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1.16 - 1,22 (m, 6 H) 1,42 (d, J = 7,2 Hz, 3 H) 2,28 (s, 3 H) 50 2,69-2,81 (m, 1 H) 3,15 (spt, J = 6,9 Hz, 1 H) 3,63 (s ancho, 1 H) 3,87 (t, J = 10,4 Hz, 1 H) 3,97-4,07 (m, 1 H) 4,08 -

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4,18 (m, 1 H) 4,33-4,40 (m, 1 H) 4,43-4,49 (m, 1 H) 5,14 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) 5,19 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) 5,54 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) 6,39 (s ancho, 1 H) 7,07 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) 7,24 (s, 1 H) 7,25 (s, 1 H) 7,30-7,40 (m, 5 H) 8,75 (s ancho, 1 H).

Compuesto I-24

Mezcla diastereoisomerica (6:4)

1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8 ppm 0,99 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H) 1,03 (d, J = 6,8 Hz, 1,8 H) 1,20 -1,24 (m, 6 H) 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3 H) 1,40-1,44 (m, 3 H) 2,30 (s, 1,2 H) 2,31 (s, 1,8 H) 2,71-2,83 (m, 1 H) 3,18 (dq, J = 13.7,7.0 Hz, 1 H) 3,58 (d, J = 6,8 Hz, 0,6 H) 3,69 (d, J = 6,8 Hz, 0,4 H) 3,79 (t, J = 10,5 Hz, 0,4 H) 3,89-4,11 (m, 2,6 H) 4,13-4,27 (m, 2 H) 4,35-4,52 (m, 2 H) 5,55 (d, J = 8,0 Hz, 0,4 H) 5,68 (d, J = 8,2 Hz, 0,6 H) 6,40 (s ancho, 1 H) 7,09 (d, J = 8,2 Hz, 0,6 H) 7,24 (s, 1 H) 7,25 (s, 1 H) 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 0,4 H) 8,60 (s ancho, 1 H)

Compuesto I-25

Mezcla diastereoisomerica

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 0,86 (s ancho, 3 H) 1,27 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 2,55-2,63 (m, 1 H) 3,85-4,19 (m, 4 H) 4,33-4,51 (m, 2 H) 5,02-5,13 (m, 2 H) 6,13 - 6,28 (m, 1 H) 7,13-7,37 (m, 10 H) 7,91 (s ancho, 1 H) 8,40 (s ancho, 1 H)

Compuesto I-35 Mezcla diastereoisomerica

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 0,77-0,96 (m, 6 H), 1,21-1,34 (m, 2 H), 1,39 (d, J = 15,41 Hz, 6 H), 1,45 - 1,58 (m, 2 H), 2,54 - 2,66 (m, 1 H), 3,91 - 4,05 (m, 2 H), 4,15 (s ancho, 1 H), 4,27 - 4,62 (m, 2 H), 5,66-6,04 (m, 2 H), 6,18 (s ancho, 1 H), 7,08 - 7,27 (m, 3 H), 7,35 (m, J = 7,00, 7,00, 7,00 Hz, 2 H), 7,95 (s ancho, 1H), 11,84 (s ancho, 1 H)

Ejemplo 4: Preparacion de compuestos, en donde R2= H.

imagen9

Una disolucion de I-3 (234 mg, 0,38 mmol) y NH4F (235 mg, 6,46 mmol) en isopropanol (9 ml) y agua (9 ml) se calento a 95°C. La HPLC mostro la finalizacion de la reaccion despues de aprox. 1 h. Despues de la evaporacion, el material bruto se purifico con LC-MS preparativa, obteniendose 129 mg (59%) de I-9. Condiciones de LC prep.: Columna: Gemini-Nx, 5 p, C18, 110A Fase movil: MeOH / H2O (10 mmol de NH4Ac): 60/40 a 80/20 en 8 min.

Datos de 1H-RMN (500 MHz, 298 K, DMSO-d6): 8 0,84 (m, 9 H, 2'P-CHay 2 x CH3), 1,18-1,30 (m, 11 H, -CHCH3 y 4 x CH2), 1,61 (m, 1 H, -CH(CH2)3), 2,60 (m, 1 H, H-2'), 3,23 (-NH-P), 3,71 (m , 1H, -CHCH3), 3,85-4,06 (m, 5 H, H-5', 5", H-3', -CHCH2O-), 5,60 (d, 1 H, H-5), 6,18 (s ancho, 1 H, H-1'), 7,68 (d, 1 H, H-6).

Ejemplos Biologicos

Ensayo de replicon

Los compuestos de formula I son examinados en cuanto a la actividad en la inhibicion de la replicacion del ARN del VHC en un ensayo celular. El ensayo demuestra que los compuestos de formula I exhiben actividad contra replicones del VHC funcionales en un cultivo celular. El ensayo celular puede estar basado en una construccion de expresion bicistronica tal como se describe por Lohmann et al. (1999), Science vol. 285 pags. 110-113 con las 5 modificaciones descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75:4614-4624, en una estrategia de rastreo de multiples dianas. Los ensayos de replicon de Bartenschlager estan disponibles comercialmente de ReBLikon GmbH en Mainz, Alemania.

En esencia, el metodo es como sigue.

El ensayo utilizo la lmea celular transfectada de manera estable Huh-7 luc/neo (a la que se alude en lo que sigue 10 como Huh-Luc). Esta lmea celular alberga un ARN que codifica una construccion de expresion bicistronica que comprende las regiones NS3-NS5B tipo salvaje del vHc tipo 1b traducidas desde un sitio de entrada al ribosoma interno (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (EMCV), precedidas por una porcion de informador (FFL-luciferasa) y una porcion de marcador seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construccion esta rodeada por NTRs (regiones no traducidas) 5' y 3' del VHC tipo 1b. El cultivo continuado de las celulas replicon en presencia de 15 G418 (neoR) depende de la replicacion del ARN del VHC. Las celulas de replicon transfectadas de manera estable

que expresan el ARN del VHC, que se replica autonomamente y a niveles altos, que codifican inter alia luciferasa, se utilizan para el rastreo de los compuestos antivirales.

Las celulas de replicon se sembraron en placas con pocillos en presencia de los compuestos de ensayo y de control, que se anadieron en diversas concentraciones. Despues de una incubacion de tres dfas, la replicacion del VHC se 20 midio por ensayo de la actividad de luciferasa (utilizando sustratos y reactivos estandares de ensayo de luciferasa y un generador de imagenes de microplacas Perkin Elmer Viewlux™ ultraHTS). Celulas de replicon en los cultivos de control tienen una alta expresion de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto sobre la actividad de luciferasa se controlo en las celulas Huh-Luc, permitiendo una curva de dosis- respuesta para cada uno de los compuestos de ensayo. Se calcularon entonces los valores CE50, valor que 25 representa la cantidad de compuesto requerida para disminuir en un 50% el nivel de actividad de luciferasa detectada o, mas espedficamente, la capacidad de replicarse del ARN del replicon del VHC ligado geneticamente. Cuando un compuesto de formula (I) se ensayo mas de una vez en el ensayo de replicon, la media de todos los resultados del ensayo se da en la Tabla 1.

Tabla 1

30 Los compuestos enumerados en la siguiente tabla son mezclas racemicas de los enantiomeros de fosforo (a los que tambien se puede aludir como “mezcla diastereoisomerica”). En un cierto numero de casos estos enantiomeros se separaron sin determinar la estereoqmmica exacta de los sustituyentes en el atomo de fosforo. A este tipo de compuestos se les indica como diastereomero 1 (para el diastereomero que eluye en primer lugar) o 2 (para el diastereomero que eluye en segundo lugar). En algunos casos se obtuvieron mezclas diastereoisomericas que estan 35 enriquecidas con uno de sus diastereoisomeros.

imagen10

Co. n°.: R2 R3 R4 R5 CE50 1b ET (|jM) CC50 Huh-7 (JM) LC-MS resultado [M+H]+

I-1: fenilo CH3 H bencilo 5,95 > 100 601,1

I-2: 1 ch3 Cl CH3 H bencilo 6,10 29,5 691 + 693

Diastereomero 1

I-3: fenilo CH3 H H3C.. _ _ . ch2 . H3C-, .j 8,06 30,7 623,1

I-4: fenilo CH3 H butilo 9,33 > 98,3 567,1

I-5: fenilo CH3 H pentilo 9,48 > 98,3 581,3

I-6: fenilo CH3 H ciclopentilo 10,47 > 98,3 579,3

I-7: fenilo CH3 H ciclohexilo 11,21 > 98,3 593,1

I-8: fenilo CH3 H etilo 11,95 > 98,3 539,1

Diastereomero 1

I-9: H CH3 H h3c .. ch2.. h3c-....J 15,81 547,2

I-10: fenilo CH3 H propilo 12,87 > 98,3 553,1

I-11: naftilo CH3 H bencilo 13,83 > 100 649 (MH)-

I-12: fenilo CH3 CH3 bencilo 13,92 > 100 615,1

I-13: fenilo CH3 CH3 butilo 13,13 88,5 581,1

I-14: fenilo CH3 H i-propilo 14,86 > 100 553,1

I-15: 4-clorofenil CH3 H h3c ,.ch2... H3C , J 15,33 > 100 657 + 65,9

I-16: fenilo CH3 H etilo 16,38 > 98,3 539,1

Mezcla diastereomerica

I-17 | fenilo: CH3 H etilo 17,30 > 98,3 539,1

Diastereomero 2

I-18: fenilo CH3 H metilo 26,96 > 98,3 525,1

I-19: Cl CH3 H bencilo 27,63 47,2 691-693

Diastereomero 2

I-20: fenilo etilo H butilo 28,01 > 73,9 581,1

I-21: fenilo etilo H bencilo 29,15 81,8 615,1

I-22: Cl CH3 H bencilo 31,73 60,5 691-693

Mezcla diastereomerica

I-23: fenilo CH3 H CH3-O-(CH2)2- 32,10 > 98,3 567,1 [M-H]

I-24: Cl CH3 H etilo 37,67 55,0 629-631

I-26: fenilo etilo H metilo 74,67 > 98,3 539,0

I-27: H etilo H i-propilo > 98,36 491,0

I-28: fenilo CH3 CH3 i-propilo > 98,36 > 98,36 567,1

I-29: H etilo H metilo > 98,36 > 98,36 463,1

I-30: H CH3 H propilo > 98,36 > 98,36 477,1

I-31: fenilo CH3 H t-butilo > 98,36 > 98,36 567,2

I-32: H CH3 CH3 butilo > 98,36 505,1

I-33: H etilo H bencilo > 98,36 539,1

I-34: fenilo etilo H i-propilo > 98,36 > 98,36 567,1

I-35: Fenilo H CH3 butilo 49,89 > 98,3 707

imagen11

hidrogeno, es dedr,

Co. n°.: Estructura CE50 1b ET (mM) CC50 Huh-7 (mM) LC-MS resultado [M + H] +

1-25: O o O 'XX 6 " 57,32 > 98,3 725,1 [M-H]-

5 Ensayo de inhibicion

Los ensayos enzimaticos con diversas construcciones de NS5 del VHC se describen en los documentos EP 842276, EP 858833 y EP1037974. Ensayos de polimerasa tipicamente emplean la polimerasa, una agrupacion de nucleotido trifosfatos y un cebador/molde. Los compuestos de ensayo de nucleosidos generalmente deben ser sinteticamente fosforilados al trifosfato, que es un procedimiento arduo. El documento EP1350276 describe un ensayo de gen 10 informador destinado a evitar que esa desventaja de los ensayos de enzimas aisladas.

Acumulacion de trifosfato

Los compuestos se pueden ensayar en cuanto a la acumulacion intracelular de las especies trifosfato con actividad antiviral, por ejemplo mediante la administracion del compuesto a celulas humanas apropiadas tales como los hepatocitos, la incubacion para permitir que las quinasas celulares intracelulares se trifosforilen en el grupo fosfato y 15 la lisis celular y la extraccion.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de formula I:

imagen1

o una forma estereoisomerica del mismo, en donde:

R1 es hidrogeno, -C(=O)R6 o -C(=O)CHR7-NH2;

R2 es hidrogeno; o alquilo C1-C6 o fenilo, estando este ultimo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de halo, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alcoxi C1-C6, hidroxi y amino; o R2 es naftilo; o R2 es indolilo;

R3 es hidrogeno, alquilo C1-C6, bencilo;

R4 es hidrogeno, alquilo C1-C6, bencilo; o

R3 y R4, junto con el atomo de carbono al que estan unidos, forman cicloalquilo C3-C7;

R5 es alquilo C1-C10, opcionalmente sustituido con alcoxi C1-C6; o R5 es cicloalquilo C3-C7; bencilo; o fenilo, opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de hidroxi, alcoxi C1-C6, amino, mono-y di-alquil C1-C6-amino;

R6 es alquilo C1-C6;

R7 es alquilo C1-C6;

R8 es hidrogeno o halogeno;

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R1 es hidrogeno.
3. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente

de halo, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C4, o en donde R2es naftilo.
4. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde R3 es hidrogeno y R4 es metilo, o en donde R3 es metilo y R4 es hidrogeno, o en donde R3 es y R4 son ambos metilo.
5. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde R5 es alquilo C1-C10, cicloalquilo C3- C7; o bencilo.
6. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde R8 es hidrogeno.
7. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde R3 es hidrogeno o alquilo C1-C6 y R4 es hidrogeno o alquilo C1-C6.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R1 es hidrogeno; R2 es hidrogeno; -NH-C(R3)(R4)-CO- forma L-Ala o a,a-dimetilglicilo; R5 es alquilo C1-C8, alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C4, ciclopentilo, ciclohexilo o bencilo; R8 es hidrogeno.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R1 es hidrogeno; R2 es hidrogeno; -NH-C(R3)(R4)-CO- forma L-Ala; R5 es alquilo C1-C8, ciclopentilo, ciclohexilo o bencilo; R8 es hidrogeno.
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 9, en donde R5 es ciclopentilo o ciclohexilo.
11. Una combinacion de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y otro compuesto anti-VHC en forma de una preparacion combinada para el uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
12. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula I segun se define en cualquiera de las 5 reivindicaciones 1 - 10 y un soporte farmaceuticamente aceptable.
13. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 12, que comprende, ademas, al menos un antiviral del VHC adicional.
14. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una infeccion por el VHC.

10 15. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso como una medicina.
16. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso en el tratamiento o la profilaxis de una infeccion por el VHC.