ES2617351T3

ES2617351T3 - Vacuna contra el virus de Schmallenberg (SBV), métodos de producción y sus usos

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Publication number: ES2617351T3
Application number: ES13728288.5T
Authority: ES
Inventors: Veljko NIKOLIN; Konrad Stadler; Axel Lischewski; Alexander BRIX; Jeffrey P. Knittel; Katharina Hedwig TOEPFER
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Priority date: 2012-06-01
Filing date: 2013-05-29
Publication date: 2017-06-16
Anticipated expiration: 2033-05-29
Also published as: AR091240A1; EA034543B1; MX2014014521A; AU2013267453C1; JP6250649B2; IN2014DN08927A; JP2015519367A; BR112014029515A2; CN104350066A; SG11201407619SA; CN104350066B; AU2013267453B2; EP2855513A1; US20130323277A1; US20160250317A1; DK2855513T3; EA201401352A1; EP2855513B1; US9370562B2; CA2872961A1

Abstract

Una composición inmunogénica, que comprende el virus de Schmallenberg (SBV) inactivado.

Description

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Tal como se usa en la presente memoria, el término “viremia” se entiende en particular como una condición en la que las partículas de virus de Schmallenberg se reproducen y circulan por el torrente sanguíneo de un animal, en particular de un mamífero o de un insecto.

El término “animal”, tal como se usa en la presente memoria, se refiere en particular a un mamífero o a un insecto.

Preferiblemente, el mamífero tal como se menciona en la presente memoria es un rumiante. Más preferiblemente el rumiante tal como se menciona en la presente memoria se selecciona del grupo que consiste en vacas, ovejas, cabras, ciervos, alces, jirafas, bisontes, alces americanos, yaks, búfalos, camellos, alpacas, llamas, antílopes, antílopes americanos y nilgós. Lo más preferiblemente, el mamífero o rumiante tal como se menciona en la presente memoria se selecciona del grupo que consiste en vacas, ovejas y cabras.

El insecto, tal como se menciona en la presente memoria, se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en insectos diminutos, en particular Culicoides spp., moscas mordedoras y mosquitos.

Además, la invención proporciona una composición de vacuna para el tratamiento o prevención de la infección por SBV o para la prevención o la reducción de la viremia o las malformaciones inducidas por el SBV y/o para la prevención o la reducción de la transmisión del SBV, en el que la vacuna comprende la composición inmunogénica de la invención.

En particular, la invención proporciona una composición de vacuna, que comprende la composición inmunogénica de la invención, para su uso en un método para inducir una respuesta inmunitaria contra el SBV en un rumiante y/o insecto y/o para prevenir o reducir la viremia en un rumiante y/o insecto y/o para prevenir o reducir malformaciones inducidas por el SBV en un feto o recién nacido rumiante y/o para prevenir o reducir la transmisión del SBV por vectores artrópodos preferiblemente insectos.

El término “malformaciones”, tal como se usa en la presente memoria, en particular se refiere a una malformación seleccionada de malformación congénita de la columna vertebral (cifosis, lordosis, escoliosis, tortícolis) y/o del cerebro (macrocefalia, braquignatia inferior), malformaciones variables del cerebro (hidracefalia, porencefalia, hipoplasia cerebelar, hapoplasia del tronco cerebral) y de la médula espinal, malformaciones y/o rigidez de las patas traseras y/o delanteras. Más en particular, el término “malformaciones” se refiere a malformaciones en corderos, cabritos y terneros.

La divulgación también proporciona un método para la producción de SBV infeccioso, que comprende las etapas de

 infectar células, preferiblemente células de mamífero o de insectos, con un SBV,  cultivar las células infectadas,  cosechar el SBV producido por dichas células.

El término “infección”, tal como se usa en la presente memoria, en particular se refiere al proceso de poner en contacto las células con el SBV, tal como por inoculación.

Dicha infección de las células con un SBV en particular incluye la unión del virus con una célula, la entrada del virus en la célula, el desprendimiento del virión en el citoplasma, la replicación y transcripción del genoma viral, la expresión de las proteínas virales y en ensamblaje y liberación de nuevas partículas virales infecciosas.

El término “cultivo”, tal como se usa en la presente memoria, se refiere en particular al mantenimiento y preferiblemente al crecimiento celular en condiciones apropiadas.

El término “cosecha”, tal como se usa en la presente memoria, se refiere en particular a la absorción de sobrenadantes celulares que contienen partículas virales, tales como por centrifugación de un recipiente que contiene un cultivo de células infectadas con virus y posterior decantación del sobrenadante celular.

Sorprendentemente, se halló que el SBV sigue siendo infeccioso y, por lo tanto, sigue manteniendo su potencial antigénico cuando pasa alternativamente entre células de insecto y células de mamífero.

Así, la divulgación en particular se refiere a un método para la producción preferiblemente de SBV infeccioso, en particular el método antes mencionado, en el que el SBV se pasa alternativamente entre células de insecto y células de mamífero.

Por consiguiente, el método para la producción de SBV infeccioso de acuerdo con la invención en particular comprende las etapas de:

(a): infectar células de insecto con un SBV,

(b): cultivar las células infectadas de la etapa (a),

(c): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (b),

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(d): infectar células de mamífero con el SBV cosechado en la etapa (c)

(e): cultivar las células infectadas de la etapa (d) y

(f): cosechar el SBV producido por dichas células de la etapa (e)

o comprende las etapas de

(d): infectar células de mamífero con un SBV,

(e): cultivar las células infectadas de la etapa (d),

(f): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (e)

(g): infectar células de insecto con el SBV cosechado en la etapa (f),

(h): cultivar las células infectadas de la etapa (g) y

(i): cosechar el SBV producido por las células en la etapa (h).

En este sentido, la numeración de las etapas (d)-(i) es equivalente a la numeración (a')-(f') y se seleccionó por razones de claridad en vista de las otras etapas descritas en la presente memoria (a partir de la etapa “(j)”).

Preferiblemente, el método para la producción de SBV de la divulgación comprende las etapas de:

(a): infectar células de insecto con un SBV,

(b): cultivar las células infectadas de la etapa (a),

(c): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (b)

(d): infectar células de mamífero con el SBV cosechado en la etapa (c),

(e): cultivar las células infectadas de la etapa (d),

(f): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (e)

(g): infectar células de insecto con el SBV cosechado en la etapa (f)

(h): cultivar las células infectadas de la etapa (g), y

(i): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (h).

Más preferiblemente el método para la producción de SBV infeccioso de acuerdo con la divulgación también comprende las etapas de:

(j): infectar células de mamífero con el SBV cosechado en la etapa (i),

(k): cultivar las células infectadas de la etapa (j) y

(l): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (k) y opcionalmente

(m): infectar células de insecto con el SBV cosechado en la etapa (l),

(n): cultivar las células infectadas de la etapa (m) y

(o): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (n).

Así, en un aspecto, el método para la producción de SBV infeccioso de acuerdo con la divulgación comprende las etapas de:

(a): infectar células de insecto con un SBV,

(b): cultivar las células infectadas de la etapa (a),

(c): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (b)

(d): infectar células de mamífero con el SBV cosechado en la etapa (c),

(e): cultivar las células infectadas de la etapa (d),

(f): cosechar el SBV producido por las células en la etapa (e),

(g): infectar células de insecto con el SBV cosechado en la etapa (f),

(h): cultivar las células infectadas de la etapa (g),

(i): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (h)

(j): infectar células de mamífero con el SBV cosechado en la etapa (i),

(k): cultivar las células infectadas de la etapa (j),

(l): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (k),

y opcionalmente

(m): infectar células de insecto con el SBV cosechado en la etapa (l),

(n): cultivar las células infectadas de la etapa (m) y

(o): cosechar el SBV producido por dichas células en la etapa (n).

Las células de insecto usadas en el método para la producción de SBV de la divulgación son preferiblemente células KC.

Como células de mamífero, se usan preferiblemente células BHK, en particular células BHK-21, en el método para la producción de SBV de acuerdo con la invención.

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Lo más preferiblemente, en el método para la producción de SBV de acuerdo con la divulgación, las células de insecto son células KC y las células de mamífero son células BHK, en particular células BHK-21.

Además, la divulgación también comprende el SBV obtenible por el método para la producción de SBV de acuerdo con la invención.

La divulgación también proporciona un método para la producción de SBV inactivado o de una composición inmunogénica de la divulgación que comprende las etapas de:

(A): infectar células con un SBV, en el que las células son en particular células de riñón de mono preferiblemente células Ma104 o células Ma104-AK o en el que las células son células BHK, preferiblemente células BHK-21,

(B): cultivar las células infectadas,

(C): cosechar el SBV producido por dichas células e

(D): inactivar dicho SBV por tratamiento térmico o con un agente inactivador de virus.

Si preferiblemente se usan células Ma104 o células Ma104-AK en el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, esto tiene la ventaja de que las reacciones adversas, en particular las reacciones alérgicas, se pueden reducir o minimizar si el SBV inactivado o la composición inmunogénica producidos por dicho método se administran a un animal.

En particular, se prefiere si en la etapa (A) del método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, las células están infectadas con un SBV obtenible por el método para la producción de SBV de la invención.

La divulgación también proporciona, así, la combinación de (i) el método de producción de un SBV infeccioso de la divulgación y (ii) el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, en el que dichos métodos se realizan posteriormente.

Preferiblemente, en el método para la producción de SBV infeccioso de la divulgación y/o en el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de acuerdo con la invención, las células están infectadas con SBV a un MOI de 0,00001 – 0,01 preferiblemente a un MOI de 0,0001 – 0,001.

En particular, se prefiere si en el método para la producción de SBV de acuerdo con la divulgación y/o en el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, las células se cultivan en un medio que contiene 1-10 % de FCS, más preferiblemente que contiene 2-6 % de FCS y/o si las células se cultivan a una temperatura de 25-38 °C preferiblemente de 36-38 °C, más preferiblemente de aproximadamente 37 °C. También es posible cultivar las células en ausencia de FCS.

Además, la divulgación comprende SBV obtenible por el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, y, además, la divulgación también proporciona SBV inactivado obtenible por la combinación de (i) el método de producción de un SBV infeccioso de la invención y (ii) el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, en el que dichos métodos se realizan posteriormente.

En otro aspecto, se prefiere si, en el método para la producción de SBV infeccioso de la divulgación y/o en el método para la producción de SBV inactivado o de la composición inmunogénica de la divulgación, el SBV comprende:

 un segmento de ARN pequeño (S) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 97,8 %, preferiblemente al menos el 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:7,

 un segmento de ARN medio (M) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 82,2 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:2 y/o

 un segmento de ARN grande (L) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 93 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:3

y/o en la que dicho SBV comprende

 un segmento S de ARN, caracterizado por que el segmento S de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 97,8 %, preferiblemente al menos el 99 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO:8,  un segmento M de ARN, caracterizado por que el segmento M de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 82,2 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:5 y/o  un segmento L de ARN, caracterizado por que el segmento L de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 93 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:6,

La divulgación también proporciona un SBV, preferiblemente un SBV aislado, que comprende

 un segmento de ARN pequeño (S) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 97,8 %, preferiblemente al menos el 99 % de identidad de 5 secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:7,

 un segmento de ARN grande (L) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia 10 de ácido nucleico que tiene al menos el 93 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:3.

La divulgación también proporciona un SBV preferiblemente aislado, en particular, el SBV antes mencionado, que comprende 15  un segmento S de ARN, caracterizado por que el segmento S de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 97,8 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO:8,  un segmento M de ARN, caracterizado por que el segmento M de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 82,2 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:5 y/o 20  un segmento L de ARN, caracterizado por que el segmento L de ARN tiene una secuencia que tiene al menos el 93 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:6.

Además, la divulgación comprende una composición química obtenible por medio de cualquiera de los métodos antes mencionados, en la que la composición es preferiblemente una composición inmunogénica, en particular una

25 vacuna.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la composición inmunogénica de la invención para la preparación de un medicamento para tratar o prevenir el SBV y/o tratar o prevenir la viremia o malformaciones inducidas por el SBV y/o prevenir o reducir la transmisión del SBV en un animal que necesita de dicho tratamiento.

30 Además, la invención proporciona un método para generar una respuesta inmunitaria al SBV en un animal que comprende administrar a dicho animal la composición inmunogénica de la invención.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar o prevenir la infección por SBV o tratar o prevenir la

35 viremia o malformaciones inducidas por el SBV en un animal que necesita de dicho tratamiento, que comprende administrar a dicho animal una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición de vacuna de la invención.

La invención también proporciona un método para inducir una respuesta inmunitaria contra el SBV y/o prevenir o reducir la viremia o malformaciones inducidas por el SBV y/o prevenir o reducir la transmisión del SBV en un animal

40 o en una manada de animales que comprende la etapa de administrar la composición inmunogénica de la invención a un animal que lo necesita.

En los métodos antes mencionados, la composición inmunogénica de la invención o la vacuna de la invención, respectivamente, se administra preferiblemente en una dosis individual o más preferiblemente en dos dosis.

45 Ejemplo 1

Detalles de un primer aislamiento del SBV

50 Se usaron extensivamente células BHK-21 para el crecimiento de orthobinyavirus. A continuación, se aisló el virus SBV exitosamente por primera vez usando esta línea celular, por investigadores del FLI en noviembre de 2011. Excepto las BHK, se usaron células de larvas de Culicoides variipennis (mencionadas como células KC de la Collection of Cell Lines in Veterinary Medicine, Friedrich-Loeffler-Institut, Greifswald-Insel Riems, Alemania). Se incubaron las células KC durante 10 días con sangre alterada por vía ultrasónica diluida en medio de Schneider. Las

55 células se lisaron luego por congelamiento y descongelamiento. Se inoculó una monocapa de células de riñón de hámster bebé 21 (BHK, clon 13) con el lisado. Los inóculos se eliminaron después de 1 hora y se reemplazaron por medio esencial mínimo de Eagle (EMEM). Después de 5 días, era visible un efecto citopático y el sobrenadante de cultivo dio positivo para el nuevo virus, con un valor Cq de aproximadamente 14 en la cRT-qPCR específica (aislado 2) y 3x106 de TCID50 por ml.

60 Proceso de fabricación: Descripción general

El proceso de fabricación, tal como se describe más abajo, se lleva a cabo según los métodos de fabricación estándar, por ejemplo, en condiciones de esterilidad y después de la verificación de las condiciones de operación

65 correctas como la filtración de aire.

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Descripción del proceso de fabricación

1.: Producción de MSV (solución madre del virus)

El aislado de SBV 2 se usó para la producción de MSV solución madre del virus). Se infectaron botellas de cultivo rotatorias sembradas con células BHK-21 (5x107 células) a MOI 0,0001. Después de 54 h de incubación, las botellas de cultivo rotatorias se congelaron a -20 °C, se descongelaron y se centrifugaron a 2.000 g durante 5 min. Se recolectó el sobrenadante y se almacenaron alícuotas de 1 ml a -80 °C hasta su posterior procesamiento.

2.: Producción de antígeno del SBV

Las células BHK-21 (lote celular de trabajo -WCS) se almacenaron congeladas en nitrógeno líquido. El WCS se descongeló y se expandió en matraces de cultivo celular (T160 cm2) usando medio EMEM y gamma FCS 10 % irradiado. Las células se tripsinizaron usando tripsina recombinante (origen no animal). Un matraz T160 se tripsinizó y se resuspendió en 150 ml de medio EMEM que contenía FCS 2 %. Esta suspensión celular se usó para sembrar una botella de cultivo rotatoria (495 cm2). Las botellas de cultivo rotatorias con suspensión celular se colocaron en una incubadora a 37 °C y girando a 0,5 rpm. De 12 a 16 h después de la siembra, las células se sembraron a una densidad de 5x107 por botella. Se usó la infección usando MOI 0,0001. Las células se incubaron de forma continua a 37 °C y girando a 0,5 rpm durante 50-56 h hasta que el efecto citopático (CPE) del SBV específico no alcanzara a aproximadamente el 60-70 % de las células. En este punto temporal, las botellas de cultivo rotatorias completas se congelaron a -20 °C y se descongelaron en baño de agua a 37 °C y se almacenaron a -80 °C hasta su posterior procesamiento.

La titulación viral se lleva a cabo de acuerdo con el siguiente procedimiento:

Materiales necesarios

1.: Células BHK-21 (clon 13)

2.: Matraces T75

3.: Placas de 96 pocillos de fondo plano

4.: Placas de 48 pocillos de fondo plano

5.: Thermo Pipeta de matriz de 8 canales + puntas

6.: Eppendorf Pipeta de 8 canales 50-1250 + puntas

7.: Depósito para pipetas multicanal

8.: Tripsina + edta

9.: Medio ZB5

10.: Pipetas de 5, 10 y 25 ml

11.: Pipetboy

12.: Microscopio invertido

Procedimiento

 Tripsinizar el matraz T75 altamente confluente y resuspender bien las células en 20 ml de medio (FCS 10 %).  Añadir 100 ml de medio (FCS 0 %) y mezclar bien  Verter esta suspensión celular se vierte en el depósito para pipetas multicanal  Usar la pipeta multicanal para llenar 100 μl de suspensión celular en los pocillos de las primeras 8 columnas de

placas de 96 pocillos  Dejar las placas a 37 °C en una incubadora de CO2 durante 6-12 h para la unión  Después de transcurrido este tiempo, preparar una placa de 48 pocillos y llenar 1080 μl de medio libre de suero

en cada pocillo  Inocular en los pocillos de la primera columna 120 μl de material para la titulación  Usar la pipeta de 8 canales Eppendorf con el programa P/M (pipeta 120 μl y mezclar 620 μl cuatro veces),

mezclar primero la primera columna donde se inocula el material  Desechar las puntas  Pipetear de los pocillos de la primera columna (con las nuevas puntas), 120 μl en la segunda y mezclar  Desechar las puntas  Repetir este proceso hasta terminar la última columna  Usando la pipeta de matriz, aspirar 800 μl de la primera fila de la placa de 48 pocillos (que contiene diluciones

seriales de una muestra)  Cuando se fijen las puntas, presionar firmemente, pero no demasiado fuerte porque la función de la matriz no

funcionará  Dispensar 100 μl en 8 filas de la placa de 96 pocillos  Incubar a 37 °C durante un período de 3-4 días  Leer los resultados en el microscopio invertido

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Una vez completado el proceso de inactivación, se añadió una solución de tiosulfato de sodio 1 M en la proporción de 10 ml por litro de antígeno inactivado (concentración final 10 mM), a fin de neutralizar la BEI.

EJEMPLO 4

A continuación en la presente memoria se describe una producción alternativa de MSV (solución madre del virus), que asimismo permitió la fabricación (las otras etapas del proceso de fabricación se realizaron de acuerdo con el Ejemplo 1, en el que la inactivación se realizó tal como se describe en el Ejemplo 3) de una vacuna efectiva para una prevención exitosa de la infección por SBV:

5.: Producción de MSV (solución madre de virus)

El aislado 2 de SBV se usó para la producción de MSV (solución madre del virus). Se infectó una botella de cultivo giratoria sembrada con Ma104-Ak (5x107 células) a moi 0,0001. Después de 54 h de incubación, la botella de cultivo giratoria se congela a -20 °C, se descongela y se centrifuga a 2.000 g durante 5 min. El sobrenadante se recolectó y las alícuotas de 1 ml se almacenaron a -80 °C hasta el posterior proceso.

6.: Producción de antígeno del SBV

Las células Ma104-Ak (lote celular de trabajo -WCS) se almacenaron congeladas en nitrógeno líquido. El WCS se descongeló y se expandió en matraces de cultivo celular (T160 cm2) usando medio EMEM y gamma FCS 10 % irradiado. Las células se tripsinizaron usando tripsina recombinante (origen no animal). Un matraz T160 se tripsinizó y se resuspendió en 150 ml de medio EMEM que contenía FCS 2 %. Esta suspensión celular se usó para sembrar una botella de cultivo rotatoria (495 cm2). Las botellas de cultivo rotatorias con suspensión celular se colocaron en una incubadora a 37 °C y girando a 0,5 rpm. De 12 a 16 h después de la siembra, las células se sembraron a una densidad de 5x107 por botella. Se usó la infección usando una moi de 0,0001. Las células infectadas se incubaron de forma continua a 37 °C y girando a 0,5 rpm durante 72-96 h hasta que el efecto citopático (CPE) del SBV específico no alcanzara a aproximadamente el 60-70 % de las células. En este punto temporal, las botellas de cultivo rotatorias completas se congelaron a -20 °C y se descongelaron en baño de agua a 37 °C y se almacenaron a -80 °C hasta su posterior procesamiento.

EN EL LISTADO DE SECUENCIAS:

La SEQ ID NO:1 corresponde a la secuencia genómica completa de un segmento S de un virus Schmallenberg infeccioso (BH80/11-4), La SEQ ID NO:2 corresponde a la secuencia genómica completa de un segmento M de un virus Schmallenberg infeccioso (BH80/11-4), La SEQ ID NO:3 corresponde a la secuencia genómica completa de un segmento L de un virus Schmallenberg infeccioso (BH80/11-4), La SEQ ID NO:4 corresponde a una secuencia de ARN antiparalela (es decir, complementaria e inversa) de SEQ ID NO: 1, La SEQ ID NO:5 corresponde a la secuencia de ARN antiparalela de SEQ ID NO:2, La SEQ ID NO:6 corresponde a la secuencia de ARN antiparalela de SEQ ID NO:3, La SEQ ID NO:7 corresponde a la SEQ ID NO:1, en la que el nucleótido en la posición 9 es “a” en lugar de “g”, y La SEQ ID NO:8 corresponde a la secuencia de ARN antiparalela de SEQ ID NO:7 y por lo tanto corresponde a la SEQ ID NO:4, en la que el nucleótido en la posición 831 es “u” en lugar de “c”.

Las siguientes cláusulas que se han divulgado en la solicitud como se presentó originalmente también se describen en la presente memoria:

1.: Una composición inmunogénica, que comprende uno o más antígenos del virus de Schmallenberg (SBV).

2.: La composición inmunogénica de acuerdo con la cláusula 1, en la que la composición inmunogénica comprende el SBV.

3.: La composición inmunogénica de acuerdo con la cláusula 1, en la que el antígeno del SBV o el SBV está inactivado.

4.: La composición inmunogénica de acuerdo con la cláusula 1, en la que el SBV comprende:

-(a) un segmento de ARN pequeño (S) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 97,8 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:7,

-(b) un segmento de ARN medio (M) que tiene una secuencia que es inversamente complementaria a una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos el 82,2 % de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:2,

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Claims

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