ES2623837T3 - Proceso de producción de una preparación alimentaria para animales de compañía que contiene microorganismos probióticos - Google Patents

Proceso de producción de una preparación alimentaria para animales de compañía que contiene microorganismos probióticos Download PDF

Info

Publication number
ES2623837T3
ES2623837T3 ES11781488.9T ES11781488T ES2623837T3 ES 2623837 T3 ES2623837 T3 ES 2623837T3 ES 11781488 T ES11781488 T ES 11781488T ES 2623837 T3 ES2623837 T3 ES 2623837T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
lactobacillus
bifidobacterium
replicative
cncm
dry weight
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES11781488.9T
Other languages
English (en)
Inventor
Annick Mercenier
Guénolée Prioult
Sophie Nutten
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nestec SA
Original Assignee
Nestec SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44022861&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2623837(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Nestec SA filed Critical Nestec SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2623837T3 publication Critical patent/ES2623837T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Un método para preparar una composición de un alimento para animales de compañía que comprende microorganismos probióticos no replicativos en una cantidad correspondiente a de 106 a 1012 cfu por ración, en el que dicho método comprende tratar los microorganismos probióticos con un tratamiento de alta temperatura a 120- 150 °C durante 1-120 segundos y, así, hacer que los microorganismos probióticos no sean replicativos.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCION
Proceso de produccion de una preparacion alimentaria para animales de comparMa que contiene microorganismos probioticos
La presente invencion se refiere al campo de los alimentos para animales de comparMa. En particular, la presente invencion proporciona un metodo para preparar composiciones alimentarias para animales de comparua que comprenden microorganismos probioticos no replicativos. Estos microorganismos probioticos no replicativos son microorganismos probioticos bioactivos tratados con calor.
Los beneficios para la salud de los probioticos son aceptados en la tecnica y se resumen, por ejemplo, en Blum et al. en Curr. Issues Intest. Microbiol., septiembre 2003, 4(2):53-60. A menudo los probioticos se administran junto con prebioticos en formulaciones simbioticas que pueden tener beneficios para la salud potenciados aun mayores.
El bienestar de los animales domesticos esta muy relacionado con su alimentacion. Una alimentacion correcta debena dar como resultado un animal de comparMa sano y en forma. Ademas de proporcionar un valor nutricional, la composicion de la alimentacion influye en el equilibrio de la microflora intestinal y puede conducir a trastornos gastrointestinales o, por el contrario, a su prevencion. Por tanto, el conocimiento de los procesos de la digestion y del tracto gastrointestinal es esencial para la comprension de una costumbre alimentaria practica.
A menudo, los trastornos gastrointestinales caninos y felinos estan relacionados con un sobrecrecimiento bacteriano y con la produccion de enterotoxinas producidas por bacterias patogenas.
Durante los ultimos anos, las investigaciones se han centrado en algunas cepas valiosas de bacterias de acido lactico y su uso potencial como agentes probioticos. Los probioticos se consideran preparaciones microbianas viables que estimulan la salud en mairnferos conservando la microflora natural en el intestino. Se cree que los probioticos se unen a la mucosa intestinal, colonizan el tracto intestinal y, con ello, evitan la union de microorganismos perjudiciales. Un prerrequisito para su accion reside en el hecho de que deben alcanzar la mucosa del intestino en una forma adecuada y viable y, en especial, en que no sean destruidos por la influencia del pH bajo que predomina en el estomago. En particular, la fisiologfa del tracto digestivo de gatos y perros se diferencia de la de los seres humanos. Por ejemplo, el pH promedio en el estomago es de 3,4 en perros y 4,2 en gatos.
La patente de EE. UU. 7189390 describe nuevos microorganismos bacterianos de acido lactico que se han aislado y seleccionado por su potencial probiotico, y su uso para la preparacion de composiciones alimentarias para animales de comparMa previstas para mejorar la salud de los animales de comparMa.
El documento US 2005/180962 describe formulaciones que comprenden bacterias probioticas inactivadas y metodos de tratamiento que emplean las formulaciones, en las que se ha descubierto que las bacterias probioticas inactivadas por irradiacion son eficaces para tratar enfermedades infecciosas.
El documento US 2005/175598 describe el uso de una bifidobacteria probiotica para la preparacion de composiciones previstas para mantener o mejorar la salud de los animales de comparMa.
El documento US 2009/274661 describe el uso de una cepa probiotica espedfica de B. longum, concretamente Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, para el tratamiento o la prevencion o la reduccion de la inflamacion en un mai^ero.
Puesto que hasta 70% del sistema inmunologico esta contenido dentro del tracto digestivo de los animales, los probioticos no solo ayudan a la salud digestiva del animal, sino al sistema inmunologico completo de un animal de comparMa.
Se sabe que las bacterias probioticas son capaces de adherirse a las celulas intestinales y excluir a las bacterias patogenas de las celulas intestinales. Para poder ejercer esta actividad, las bacterias probioticas deben mantenerse viables en el producto hasta que este sea consumido. La adicion de bacterias vivas a granulos para animales de comparMa, de modo que se mantengan viables hasta que el producto se consuma y las bacterias lleguen viables al tracto intestinal, sigue siendo desaffo, y para lograrlo es necesario un esfuerzo tecnico significativo.
Resultana deseable disponer de una composicion de un alimento para animales de comparMa que pueda ofrecer beneficios probioticos incluso despues de estar almacenada durante mucho tiempo bajo condiciones cnticas para los probioticos, al mismo tiempo que sea sencilla de preparar. Se prefiere que esto se logre empleando ingredientes naturales que sean seguros de administrar y no tengan efectos secundarios y que sean faciles de incorporar en composiciones alimentarias para animales de comparMa empleando tecnicas industriales que se emplean en la actualidad.
Tambien sena deseable mejorar aun mas el efecto reforzador inmunologico de los probioticos en dichas preparaciones.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Tambien sena deseable mejorar aun mas el efecto antiinflamatorio de los probioticos en dichas preparaciones.
Los presentes inventores han abordado estas necesidades. Por tanto, el objetivo de la presente invencion es mejorar el estado actual de la tecnica y proporciona un metodo para preparar composiciones alimentarias para animales de comparna que satisfagan las necesidades expresadas anteriormente.
Los presentes inventores se sorprendieron cuando comprobaron que podfan alcanzar este objetivo por medio del contenido de la reivindicacion independiente. Las reivindicaciones dependientes desarrollan mas a fondo la idea de la presente invencion.
Por consiguiente, los presentes inventores proponen un metodo para proporcionar una composicion de un alimento para animales de comparna que comprende microorganismos probioticos no replicativos.
La invencion se dirige a un metodo para preparar una composicion de un alimento para animales de comparna que comprende microorganismos probioticos no replicativos en una cantidad correspondiente a 106 a 1012 cfu por racion, y dicho metodo comprende tratar los microorganismos probioticos con un tratamiento a alta temperatura/corta duracion ("high temperature/short time", HTST) a una temperatura de 120 a 140 °C durante 1 a 30 segundos o un tratamiento a temperatura ultra-alta ("ultra-high temperature", UHT) a una temperatura que supera 135 °C durante 1 a 10 segundos, lo cual provoca que al menos el 90% de los microorganismos se transformen en no replicativos.
En una realizacion del metodo, dicha composicion de un alimento para animales de comparna comprende del 4 al 40% en peso seco de grasas, del 12 al 70% en peso seco de hidratos de carbono y del 12 al 50% en peso seco de protemas.
En una realizacion del metodo, dicha composicion de un alimento para animales de comparna comprende del 10 al 20% en peso seco de grasas, del 30 al 60% en peso seco de hidratos de carbono y del 20 al 35% en peso seco de protemas.
En una realizacion del metodo, dicha composicion de un alimento para animales de comparna comprende ademas del 0,5 al 40% en peso seco, preferiblemente del 0,5 al 30% en peso seco, mas preferiblemente del 1 al 20% en peso seco, y lo mas preferiblemente del 1 al 10% en peso seco de fibra dietetica.
En una realizacion del metodo, la composicion de un alimento para animales de comparna se selecciona del grupo que consiste en alimentos para animales de comparna, dietas nutricionales para animales de comparna, complementos para animales de comparna, recompensas para animales de comparna y juguetes comestibles para animales de comparna, tales como juguetes que se pueden morder y comer.
En una realizacion del metodo, dicha composicion de un alimento para animales de comparna comprende ademas prebioticos, por ejemplo, oligofructosa e inulina.
En una realizacion del metodo, el tratamiento con calor de dicha composicion de un alimento para animales de comparna es un tratamiento a temperatura ultra-alta (UHT) que implica calentar la composicion durante un corto periodo de tiempo de 1 a 10 segundos a una temperatura que supera 135 °C.
En una realizacion del metodo, en dicha composicion de un alimento para animales de comparna al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, preferiblemente al menos 98%, mas preferiblemente al menos 99%, lo mas preferiblemente al menos 99,5% y del modo mas ideal todos los probioticos no son replicativos.
En una realizacion del metodo, los microorganismos probioticos se seleccionan del grupo que consiste en bifidobacterias, lactobacilos, propionibacterias o sus combinaciones, por ejemplo, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescents, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilics, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli y/o sus mezclas.
En una realizacion del metodo, los microorganismos probioticos se seleccionan del grupo que consiste en Bifidobacterium longum NCC 3001 (ATCC BAA-999), Bifidobacterium longum NCC 2705 (CNCM I-2618), Bifidobacterium breve NCC 2950 (CnCm I-3865), Bifidobacterium lactis NCC 2818 (CNCM I-3446), Lactobacillus johnsonii La 1 (CNCM I-1225), Lactobacillus paracasei NCC 2461 (CNCM I-2116), Lactobacillus rhamnosus NCC 4007 (CGMCC 1.3274), Lactobacillus reuteri DSM17983, Lactobacillus reuteri ATCC 55730, Streptococcus thermophilus NCC 2059 (CNCM I-4153), Lactobacillus casei NCC 1825 (ACA-DC 6002), Escherichia coli Nissle (DSM 6601), Lactobacillus bulgaricus NCC 15 (CNCM I-1198), Lactococcus lactis NCC 2287 (CNCM I-4154), o sus combinaciones.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En una realizacion del metodo, dicha composicion alimentaria para animales de comparMa contiene de 0,005 mg a 1000 mg de microorganismos no replicativos por dosis diaria.
Las composiciones alimentarias para animales de comparMa comprenden una diversidad de composiciones, por ejemplo, alimentos, dietas nutricionales, complementos, recompensas y juguetes comestibles, tales como juguetes que se pueden morder y comer.
Los animales de comparMa incluyen animales domesticos, tales como perros, gatos, pajaros, conejos, cobayas, cabras, vacas, caballos, cerdos, por ejemplo.
Las composiciones pueden ser alimentos con cualquier forma adecuada, por ejemplo, alimentos lfquidos o solidos. Cuando los alimentos son alimentos lfquidos, los microorganismos probioticos no replicativos pueden mezclarse con los alimentos. Cuando los alimentos son alimentos solidos, los microorganismos probioticos no replicativos pueden revestirse sobre los alimentos, incorporarse a los alimentos, o ambos. Cuando se revisten o se incorporan en los alimentos, los microorganismos probioticos no replicativos pueden dispersarse de modo homogeneo o no homogeneo dentro de los alimentos o sobre ellos.
Las composiciones alimentarias para animales de comparMa generalmente contienen una fraccion de hidratos de carbono, una fraccion de protemas y una fraccion de grasas.
Los porcentajes, a menos que se indique lo contrario, son porcentajes en peso sobre una base de material seca.
La composicion alimentaria para animales de comparMa comprende preferiblemente del 12% al 70%, preferiblemente del 16% al 65%, mas preferiblemente del 20% al 60%, lo mas preferiblemente del 30% al 60% de una fraccion de hidratos de carbono ; del 12% al 50%, preferiblemente del 16% al 45%, mas preferiblemente del 18% al 40%, lo mas preferiblemente del 20% al 35% de una fraccion de protemas; y del 4% al 40%, preferiblemente del 6% al 30%, mas preferiblemente del 8% al 25%, lo mas preferiblemente del 10% al 20% de una fraccion de grasas.
Para algunas composiciones alimentarias para animales de comparMa, por ejemplo, recompensas para animales de comparMa, las composiciones pueden contener del 1 al 12% de grasas, generalmente en forma de un revestimiento para potenciar la palatabilidad.
La composicion alimentaria para animales de comparMa tambien puede comprender fibra dietetica del 0,5% al 40%, preferiblemente del 0,5% al 30%, mas preferiblemente del 1% al 20%, y lo mas preferiblemente del 1% al 10%
Pueden anadirse agentes de equilibrio nutricional (es decir, vitaminas, minerales, oligoelementos y sus combinaciones). Generalmente, dichos agentes de equilibrio nutricional pueden ariadirse en una cantidad del 0,01% al 15%, preferiblemente del 0,05% al 10%, mas preferiblemente del 1% al 5%, y lo mas preferiblemente del 1% al 3%
Las cantidades adecuadas espedficas para cada ingrediente en una composicion dependeran de una diversidad de factores, tales como la especie del animal que consume la composicion; los ingredientes concretos incluidos en la composicion; la edad, el peso, la salud general, el sexo y la dieta del animal; la velocidad de consumo del animal; y similares. Asf, las cantidades de los ingredientes pueden variar mucho e incluso pueden desviarse de las proporciones indicadas en la presente. La seleccion de dichos componentes y cantidades de los componentes esta dentro del conocimiento de los expertos en la tecnica. Para algunos animales de comparMa, tales como perros y gatos, American Feed Control Officials (AAFCO) proporciona unas cantidades recomendadas de dichos ingredientes.
La fuente de protemas del alimento puede obtenerse a partir de una diversidad de fuentes, tales como plantas, animales o ambos. La protema animal incluye carne, productos carnicos, lacteos y huevos. Las carnes incluyen, carne de ave, de pescado y de animales, tales como, ganado vacuno, porcino, ovino, caprino y similar. Los productos carnicos incluyen pulmones, ririones, cerebro, hMgado, estomago e intestinos. El ingrediente de protemas del alimento tambien puede contener aminoacidos libres y/o peptidos. Preferiblemente, el ingrediente de protemas del alimento comprende carne, productos carnicos, lacteos o huevos.
La fuente de grasas y de hidratos de carbono del alimento puede obtenerse a partir de una diversidad de fuentes, tales como grasa animal, aceite de pescado, aceite vegetal, carne, productos carnicos, cereales, otras fuentes animales o vegetales, y sus mezclas. Los cereales incluyen trigo, mafz, cebada y arroz.
El ingrediente de fibra del alimento puede obtenerse a partir de una diversidad de fuentes, tales como fuentes de fibra vegetal, por ejemplo, celulosa, pulpa de remolacha, cascaras de cacahuete y fibra de soja.
En concreto, cuando la composicion es un alimento para animales, las vitaminas y los minerales preferiblemente se incluyen en las cantidades necesarias para evitar deficiencias y mantener la salud. Estas cantidades pueden
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
consultarse en la tecnica. El National Research Council (NRC) proporciona cantidades recomendadas de dichos ingredientes para animales de granja. Vease, por ejemplo, Nutrient Requirements of Swine (10a edicion revisada, Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 1998), Nutrient Requirements of Poultry (9a edicion revisada, Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 1994), Nutrient Requirements of Horses (5a edicion revisada, Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 1989), etc. American Feed Control Officials (AAFCO) proporciona unas cantidades recomendadas de dichos ingredientes para perros y gatos. Vease American Feed Control Officials, Inc., publicacion oficial, pp. 126-140 (2003). Las vitaminas que, en general, son utiles como aditivos alimentarios incluyen vitamina A, vitamina B1, vitamina B2, vitamina b6, vitamina B12, vitamina C, vitamina D, vitamina E, vitamina H (biotina), vitamina K, acido folico, inositol, niacina, y acido pantotenico. Los minerales y oligoelementos que, en general, son utiles como aditivos alimentarios incluyen calcio, fosforo, sodio, potasio, magnesio, cobre, cinc, colina y hierro.
Las composiciones pueden contener ingredientes adicionales, tales como vitaminas, minerales, cargas, potenciadores de la palatabilidad, agentes aglutinantes, aromatizantes, estabilizantes, emulgentes, edulcorantes, colorantes, tampones, sales, revestimientos y similares conocidos por los expertos en la tecnica. Los estabilizantes incluyen sustancias que tienden a aumentar la caducidad de la composicion, tales como conservantes, sinergicos y secuestrantes, gases de envasado, estabilizantes, emulgentes, espesantes, agentes gelificantes, y humectantes. Los ejemplos de emulgentes y/o agentes espesantes incluyen gelatina, eteres de celulosa, almidon, esteres de almidon, eteres de almidon y almidones modificados. Las cantidades espedficas para cada componente de la composicion, ingrediente alimentario y otros ingredientes dependeran de una diversidad de factores, tales como los componentes e ingredientes concretos incluidos en la composicion; la especie del paciente; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; la velocidad de consumo del paciente; el tipo de enfermedad que se esta tratando (si existe); y similares. Por tanto, las cantidades de los ingredientes pueden variar mucho e incluso pueden desviarse de las proporciones preferidas indicadas en la presente. La cantidad de dichos aditivos en una composicion generalmente es hasta del 5% en peso.
Las composiciones pueden ser o pueden contener ingredientes adicionales previstos para mantener o mejorar la salud del animal, por ejemplo, complementos, medicaciones, hierbas, composiciones y farmacos holfsticos y similares.
Los complementos incluyen un alimento empleado con otro alimento para mejorar el equilibrio nutritivo o la actuacion del total. Los complementos incluyen composiciones que se suministran no diluidas como un complemento para otros alimentos, que se ofrecen como eleccion con otras partes de la racion de un animal que estan disponibles por separado, o diluidas y mezcladas con el alimento normal de un animal para producir un alimento completo. AAFCO proporciona un analisis sobre los complementos en American Feed Control Officials, Inc. publicacion oficial, p. 220 (2003). Los complementos pueden tener formas variadas, que incluyen polvos, lfquidos, jarabes, pfldoras, composiciones encapsuladas y similares.
Las recompensas incluyen composiciones que se ofrecen a un animal para tentar al animal a que coma durante un momento que no corresponde al momento de comer, por ejemplo, huesos para perros para animales caninos. Las recompensas pueden ser nutricionales, en las que la composicion comprende uno o mas nutrientes, y pueden tener una composicion como la descrita anteriormente para los alimentos. Las recompensas no nutricionales incluyen cualquier otra recompensa que no sea toxica. Los microorganismos probioticos no replicativos pueden revestirse sobre las recompensas, incorporarse a las recompensas, o ambos.
Los juguetes incluyen juguetes masticables, tales como huesos artificiales. Los microorganismos probioticos no replicativos pueden formar un revestimiento sobre la superficie del juguete o sobre la superficie de un componente del juguete, para ser incorporados parcial o totalmente a traves del juguete, o ambos. Los microorganismos probioticos no replicativos son accesibles por via oral al usuario previsto. Existe una amplia gama de juguetes adecuados que se comercializan en la actualidad, por ejemplo, patente de EE. UU. n.° 5.339.771, patente de EE. UU. n.° 5.419.283, y las referencias descritas en estos documentos. Se describen juguetes parcialmente comestibles, por ejemplo, juguetes que comprenden componentes plasticos, y juguetes totalmente comestibles, por ejemplo, cuero y diversos huesos artificiales. Ademas, se describen juguetes para uso humano y no humano, en particular para el uso por animales de comparua, de granja y de zoologico, y en particular para el uso por perros, gatos o pajaros.
En la preparacion de las composiciones, los componentes se ajustan de modo que los microorganismos probioticos no replicativos estan presentes en la composicion a una concentracion de al menos 0,01%, preferiblemente del 0,01% al 4%, lo mas preferiblemente del 0,5% al 2% en peso de la composicion. Los microorganismos probioticos no replicativos pueden incorporarse a la composicion durante el procesamiento de la formulacion, tal como durante y/o despues de mezclar los otros componentes de la composicion. La distribucion de estos componentes en la composicion se logra mediante de medios convencionales.
Las composiciones (en particular los alimentos) pueden prepararse en forma seca empleando procesos convencionales. Los ingredientes secos, que incluyen las fuentes de protema animal, las fuentes de protema vegetal, los cereales, etc., pueden triturarse y mezclarse. Despues se anaden los ingredientes humedos o ifquidos, que incluyen grasas, aceites, fuentes de protema animal, agua, etc., y se mezclan con la mezcla seca. La mezcla
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
despues se procesa en granulos o trozos secos similares. Los granulos a menudo se forman empleando un proceso de extrusion, en el que la mezcla de los ingredientes secos y humedos se somete a un procesamiento mecanico a alta presion y temperatura, y se obliga a pasar a traves de pequenas aberturas y se corta en granulos por medio de un cuchillo rotante. Los granulos humedos despues se secan y opcionalmente se revisten con uno o mas revestimientos topicos que pueden incluir aromatizantes, grasas, aceites, polvos y similares. Los granulos tambien pueden fabricarse a partir de una masa empleando un proceso de coccion, en lugar de extrusion, en la que la masa se coloca en un molde antes de un procesamiento con calor seco.
Los microorganismos probioticos no replicativos pueden anadirse a la composicion de un alimento para animales de compama en su procedimiento de preparacion normal, tal como mezclado, extrusion, coccion y similares, o preferiblemente se anaden despues de preparacion por extrusion, tal como mediante pulverizacion o revestimiento de la superficie del alimento. Esto resulta particularmente deseable para alimentos secos, en los que las hebras extrusionadas se ponen en contacto con los microorganismos probioticos no replicativos (o una disolucion que comprende los microorganismos probioticos no replicativos) mediante pulverizacion o revestimiento de las hebras extrusionadas antes de que las hebras se corten en granulos, o los granulos se ponen en contacto con los microorganismos probioticos no replicativos (o una disolucion que comprende los microorganismos probioticos no replicativos) mediante pulverizacion, revestimiento o inmersion de los granulos per se.
Para la aplicacion topica a un alimento, los microorganismos probioticos no replicativos se mezclan con una composicion de vetuculo para facilitar la aplicacion a la superficie de la composicion alimentaria. Por ejemplo, puede utilizarse un lfquido, una suspension, un gel ligero o un solido acuoso como vetuculo para el compuesto o compuestos de esta composicion. Se emplea un aparato de pulverizacion o inmersion convencional para aplicar el compuesto o compuestos sobre la superficie de la composicion alimentaria. Un ejemplo de dicho vetuculo es un subproducto animal triturado finamente y tratado con proteasas junto con aminoacidos, uno o mas azucares reductores y tiamina. El vetuculo despues se mezcla con los microorganismos probioticos no replicativos y se reviste sobre un granulo, preparando con ello un alimento seco aceptable y muy sabroso. Los microorganismos probioticos no replicativos sencillamente pueden mezclarse con un potenciador del sabor lfquido comercial u otra composicion aromatizante para crear un nuevo producto sabroso que despues puede aplicarse topicamente a la composicion. Los potenciadores de la palatabilidad lfquidos adecuados del mercado para su uso con los microorganismos probioticos no replicativos incluyen cualquier potenciador de la palatabilidad lfquido conocido o disponible en el mercado que puede adquirirse en suministradores de potenciadores del sabor para animales de compama u otros suministradores de aromatizantes conocidos por los expertos en la tecnica.
Las composiciones (en particular, alimentos) pueden prepararse en una forma enlatada o humeda empleando procesos alimentarios para animales de compama convencionales. Pueden mezclarse tejidos proteicos de animales (por ejemplo, mamfferos, aves de corral, pescado y/o marisco) triturados con los otros ingredientes, que incluyen aceites de pescado, granos de cereales, otros ingredientes de equilibrio nutricional, aditivos con objetivos espedficos (por ejemplo mezclas de vitaminas y minerales, sales inorganicas, celulosa y pulpa de remolacha, agentes de carga, y similares). Tambien puede anadirse agua suficiente para el procesamiento. Los ingredientes en forma humeda generalmente se mezclan en un recipiente adecuado para calentar mientras se mezclan los componentes. El calentamiento de la mezcla puede realizarse de cualquiera manera adecuada, tal como mediante inyeccion directa de vapor o empleando un recipiente equipado con un intercambiador de calor. Despues de la adicion del ultimo ingrediente, la mezcla se calienta hasta un intervalo de temperatura de 10 °C a 100 °C (de 50 °F a 212 °F). Las temperaturas fuera de este intervalo son aceptables, pero pueden ser poco practicas desde el punto de vista comercial sin el uso de otros adyuvantes del procesamiento. Cuando se calienta hasta la temperatura apropiada, el material generalmente estara en forma de un lfquido espeso. El lfquido espeso se introduce en latas. Se aplica una tapa y el recipiente se sella hermeticamente. La lata sellada despues se introduce en un equipo convencional disenado para esterilizar los contenidos. Esto habitualmente se logra calentando hasta unas temperaturas mayores que 110 °C (230 °F) durante un tiempo apropiado, que depende de la temperatura empleada y de la composicion.
Para los alimentos humedos, los microorganismos probioticos no replicativos pueden incorporarse a la composicion alimentaria humeda junto con un vehfculo, tal como una composicion de alcohol (concretamente, propilenglicol o dipropilenglicol), una ciclodextrina, una maltodextrina, o un almidon. Como alternativa, los microorganismos probioticos no replicativos pueden mezclarse con los materiales secos antes de formar la composicion alimentaria humeda.
Las recompensas pueden prepararse mediante un proceso de extrusion o coccion similar a los descritos anteriormente para el alimento seco. Tambien pueden emplearse otros procesos para revestir la composicion aromatizante sobre el exterior de una forma de recompensa existente o inyectarla a una forma de recompensa existente.
Los juguetes para animales generalmente se preparan revistiendo un juguete existente con una composicion aromatizante que contiene en su interior los microorganismos probioticos no replicativos mezclados.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La cantidad de microorganismos probioticos no replicativos en el metodo para preparar una composicion de un alimento para animales de comparMa se corresponde de 106 a 1012 cfu por racion.
Obviamente, los microorganismos probioticos no replicativos no forman colonias y, por consiguiente, este termino debe entenderse como la cantidad de microorganismos no replicativos que se obtiene a partir de 104 y 1012 cfu/g de bacterias replicativas. Esto incluye microorganismos que estan inactivados, no son viables o estan muertos o estan presentes en forma de fragmentos, tales como ADN o paredes celulares o compuestos citoplasmicos. En otras palabras, la cantidad de microorganismos que contiene la composicion se expresa en terminos de la capacidad formadora de colonias ("colony forming ability', cfu) de esa cantidad de microorganismos si todos los microorganismos estuvieran vivos, independientemente de que, de hecho, no sean replicativos, tales como que esten inactivados o muertos, sean fragmentos o una mezcla de cualquiera o de todos estos estados.
La composicion de un alimento para animales de comparMa tambien puede comprender prebioticos.
Un "prebiotico" significa una sustancia alimentaria que estimula el crecimiento de probioticos en el intestino. No se degradada en el estomago y/o el intestino superior ni se absorbe en el tracto GI de la persona que lo ingiere, sino que se fermenta gracias a la microflora gastrointestinal y/o por los probioticos. Los prebioticos se definen, por ejemplo, en Glenn R. Gibson y Marcel B. Roberfroid, Dietary Modulation of the Human Colonic Microbiota: Introducing the Concept of Prebiotics, J. Nutr., 1995, 125:1401-1412.
Los prebioticos que pueden emplearse no estan particularmente limitados e incluyen todas las sustancias alimentarias que estimulan el crecimiento de probioticos en el intestino. Preferiblemente, pueden seleccionarse del grupo que consiste en oligosacaridos, que contienen opcionalmente fructosa, galactosa, manosa; fibras dieteticas, en particular fibras solubles, fibras de soja; inulina; o sus mezclas. Los prebioticos preferidos son fructo- oligosacaridos (FOS), galacto-oligosacaridos (IOS), isomalto-oligosacaridos, xilo-oligosacaridos, oligosacaridos de soja, glicosilsacarosa (GS), lactosacarosa (LS), lactulosa (LA), palatinosa-oligosacaridos (PAO), malto- oligosacaridos (MOS), gomas y/o sus hidrolizados, pectinas y/o sus hidrolizados.
Los ejemplos tfpicos de prebioticos son la oligofructosa y la inulina.
La cantidad de prebioticos en la composicion de un alimento para animales de comparMa depende de su capacidad para estimular el desarrollo de bacterias de acido lactico. Como regla general, la composicion puede contener del 0,1 al 20 % de dichos prebioticos (en peso con relacion al contenido en materia seca).
Se describe una composicion de un alimento para animales de comparMa que comprende una cantidad de probioticos no replicativos que se corresponde con una cantidad de al menos 103 cfu por g de prebiotico, preferiblemente de 104 a 107 cfu/g de prebiotico, por ejemplo.
Los inventores se sorprendieron al constatar que, por ejemplo, en terminos de un efecto de refuerzo inmunologico y/o en terminos de un efecto antiinflamatorio, los microorganismos probioticos no replicativos pueden ser aun mas eficaces que los microorganismos probioticos replicativos.
Esto resulta sorprendente, puesto que los probioticos a menudo se definen como "microorganismos vivos que cuando se administran en cantidades adecuadas confieren beneficios para la salud al receptor" (directrices de FAO/OMS). La inmensa mayona de la bibliograffa publicada trata de probioticos vivos. Ademas, varios estudios investigaron los beneficios para la salud otorgados por bacterias no replicativas y, la mayona de ellos, indican que la inactivacion de los probioticos, por ejemplo, mediante un tratamiento con calor, conduce a la perdida de su pretendido beneficio para la salud (Rachmilewitz, D., et al., 2004, Gastroenterology 126:520-528; Castagliuolo, et al., 2005, FEMS Immunol. Med. Microbiol., 43:197-204; Gill, H. S. y K. J. Rutherfurd, 2001, Br. J. Nutr., 86:285-289; Kaila, M., et al., 1995, Arch. Dis. Child, 72:51-53). Algunos estudios demuestran que los probioticos muertos pueden conservar algunos efectos para la salud (Rachmilewitz, D., et al., 2004, Gastroenterology 126:520-528; Gill, H. S. y K. J. Rutherfurd, 2001, Br. J. Nutr., 86:285-289), pero, evidentemente, en la tecnica se han considerado los probioticos vivos como mucho mas eficaces.
Los microorganismos probioticos "no replicativos" incluyen bacterias probioticas que han sido tratadas con calor. Estas incluyen microorganismos que estan inactivados, estan muertos, no son viables y/o estan presentes como fragmentos, tales como ADN, metabolitos, compuestos citoplasmicos y/o materiales de la pared celular.
"No replicativo" significa que las celulas viables y/o las unidades formadoras de colonias pueden ser detectadas por medio de los metodos de cultivo en placa clasicos. Estos metodos de cultivo en placa clasicos se resumen en el libro de microbiologfa: James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden, 2005, Modern food microbiology, 7a edicion, Springer Science, Nueva York, N.Y., 790 p. Generalmente, la ausencia de celulas viables puede demostrarse como sigue: no se forman colonias visibles sobre placas de agar o la turbidez no aumenta en un medio de cultivo lfquido despues de una inoculacion con diferentes concentraciones de preparaciones bacterianas (muestras "no replicativas") y una incubacion bajo condiciones apropiadas (atmosfera aerobia y/o anaerobia durante al menos 24 h).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Los probioticos se definen como "preparaciones de celulas microbianas o componentes de celulas microbianas con un efecto beneficioso sobre la salud o el bienestar del receptor" (Salminen S., Ouwehand A. Benno Y. et al., "Probiotics: how should they be defined", Trends Food Sci. Technol., 1999:10, 107-10).
Las composiciones pueden comprender microorganismos probioticos y/o microorganismos probioticos no replicativos en una cantidad suficiente para producir al menos parcialmente un beneficio para la salud. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como "una dosis terapeuticamente eficaz". Las cantidades eficaces para este fin dependeran de una diversidad de factores conocidos por los expertos en la tecnica, tales como el peso y el estado de salud general del animal, y del efecto de la matriz alimentaria.
En aplicaciones profilacticas, las composiciones se administran a un consumidor susceptible o que, por lo demas, este en riesgo de padecer un trastorno, en una cantidad que es suficiente para al menos reducir parcialmente el riesgo de desarrollar ese trastorno. Esta cantidad se define como "una dosis profilacticamente eficaz". De nuevo, las cantidades precisas dependeran de una serie de factores, tales como el peso y el estado de saludo general del animal, y del efecto de la matriz alimentaria.
Los expertos en la tecnica podran ajustar la dosis terapeuticamente eficaz y/o la dosis profilacticamente eficaz de modo apropiado.
En general, la composicion puede contener microorganismos probioticos no replicativos en una dosis terapeuticamente eficaz y/o en una dosis profilacticamente eficaz.
Por ejemplo, la dosis terapeuticamente eficaz y/o la dosis profilacticamente eficaz, puede estar en el intervalo de 0,005 mg a 1000 mg de microorganismos probioticos no replicativos por dosis diaria.
Se indica que los microorganismos no replicativos pueden estar presentes en una cantidad equivalente a entre 104 y 109 cfu/g de composicion seca, aun mas preferiblemente en una cantidad equivalente a entre 105 y 109 cfu/g de composicion seca.
Puede hacerse que los probioticos no sean replicativos mediante cualquier metodo que sea conocido en la tecnica.
Las tecnologfas disponibles en la actualidad para hacer que cepas probioticas no sean replicativas son normalmente un tratamiento con calor, irradiacion con rayos y, luz UV o el uso de agentes qmmicos (formaldehido, paraformaldetndo).
En terminos de cantidades numericas, por ejemplo, pueden estar presentes microorganismos no replicativos tratados a "una temperatura alta durante un corto periodo de tiempo" en una cantidad que se corresponde a entre 104 y 1012 equivalentes de cfu/g de la composicion seca.
Para hacer que los probioticos no sean replicativos se prefiere utilizar una tecnica que sea relativamente sencilla de aplicar en circunstancias industriales en la industria alimentaria.
La mayona de los productos comercializados en la actualidad que contienen probioticos se tratan con calor durante su produccion. Por tanto, sena conveniente poder tratar con calor a los probioticos junto con el producto producido o al menos de una manera similar, al mismo tiempo que los probioticos conserven o mejoren sus propiedades beneficiosas o incluso consigan una nueva propiedad beneficiosa para el consumidor.
Sin embargo, la inactivacion de los microorganismos probioticos mediante tratamientos con calor, esta asociada en la bibliograffa, en general, a una perdida al menos parcial de la actividad probiotica.
Los presentes inventores han descubierto, de modo sorprendente, que hacer que los microorganismos probioticos no sean replicativos, por ejemplo, mediante un tratamiento con calor, no produce la perdida de beneficios probioticos para la salud, sino que, por el contrario, puede potenciar los beneficios para la salud existentes e incluso generar nuevos beneficios para la salud.
Por tanto, se describe una composicion de un alimento para animales de comparMa, en la que los microorganismos probioticos no replicativos se hacen no replicativos mediante un tratamiento con calor.
Este tratamiento con calor puede realizarse a una temperatura de 120 a 150 °C durante 1 a 120 segundos.
En la presente invencion pueden emplearse tratamientos con calor de corta duracion.
A la escala industrial, habitualmente se prefieren tratamientos con calor de corta duracion, tales como tratamientos con calor de tipo UHT. Este tipo de tratamientos con calor reduce las cargas bacterianas y reduce el tiempo de procesamiento, reduciendo, con ello, el deterioro de los nutrientes.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Los inventores demuestran, por primera vez, que los microorganismos probioticos tratados con calor a altas temperatures durante cortos periodos de tiempo, muestran unos perfiles inmunologicos antiinflamatorios independientemente de sus propiedades iniciales. En particular, se desarrolla un nuevo perfil antiinflamatorio o bien un perfil antiinflamatorio existente resulta potenciado por este tratamiento con calor.
Por tanto, ahora es posible generar microorganismos probioticos no replicativos con perfiles antiinflamatorios empleando parametros de tratamiento con calor espedficos que se corresponden con los tratamientos con calor aplicables a escala industrial tfpicos, incluso si sus homologos vivos son cepas no antiinflamatorias.
El tratamiento a alta temperatura puede ser un tratamiento a alta temperatura/corta duracion (HTST) o un tratamiento a temperatura ultra-alta (UHT).
Los microorganismos pueden someterse a un tratamiento a alta temperatura a 120-150 °C, durante un periodo de tiempo corto de 1-120 segundos.
Este tratamiento a alta temperatura hace que los microorganismos sean, al menos en parte, no replicativos.
El tratamiento a alta temperatura puede realizarse a presion atmosferica normal, pero tambien puede realizarse a alta presion. El intervalo de presion tfpico es de 1 a 50 bares, preferiblemente de 1-10 bares, aun mas preferiblemente de 2 a 5 bares. Obviamente, se prefiere que los probioticos se traten con calor en un medio que sea ifquido o solido, cuando se aplica el calor. Por tanto, la presion ideal que se va a aplicar dependera de la naturaleza de la composicion en la que se proporcionan los microorganismos y de la temperatura utilizada.
El tratamiento a alta temperatura puede realizarse en el intervalo de temperatura de 120-140 °C.
El tratamiento a alta temperatura puede realizarse durante un periodo de tiempo corto de 1-30 segundos, preferiblemente de 5-15 segundos.
Este marco de tiempo indicado se refiere al periodo de tiempo durante el cual los microorganismos probioticos se someten a la temperatura concreta. Notese que, dependiendo de la naturaleza y la cantidad de la composicion, de los microorganismos proporcionados y de la arquitectura del aparato calentador empleado, el periodo de tiempo de aplicacion de calor puede diferir.
La composicion y/o los microorganismos se tratan mediante un tratamiento a temperatura ultra-alta (UHT).
Un tratamiento UHT generalmente es un procesamiento a temperatura ultra-alta o un tratamiento de ultra-calor (ambos se abrevian como UHT) que implica una esterilizacion al menos parcial de una composicion mediante su calentamiento durante un periodo corto de tiempo, aproximadamente 1-10 segundos, a una temperatura mayor que 135 °C (275 °F), que es la temperatura necesaria para matar a las esporas bacterianas en la leche. Por ejemplo, el procesamiento de la leche de este modo, empleando unas temperaturas mayores que 135 °C, permite disminuir la carga bacteriana en un tiempo de mantenimiento necesario (durante 2-5 s), lo cual permite un funcionamiento en flujo continuo.
Existen dos tipos principales de sistemas UHT: el sistema directo e indirecto. En el sistema directo, los productos se tratan mediante una inyeccion de vapor o una infusion de vapor, mientras que en el sistema indirecto, los productos se tratan con calor empleando un intercambiador de calor de placa, un intercambiador de calor tubular o un intercambiador de calor de superficie rayada. Pueden aplicarse combinaciones de sistemas UHT en cualquier etapa o en multiples etapas en el proceso de la preparacion del producto.
Como comparacion, un tratamiento HTST se define generalmente de la siguiente manera (temperatura alta/corta duracion): un metodo de pasteurizacion disenado para lograr una reduccion de 5 logantmica, que elimina el 99,9999% de los microorganismos viables en la leche. Esto se considera adecuado para destruir casi todas las levaduras, mohos y bacterias de la descomposicion habituales y tambien para asegurar la destruccion adecuada de los organismos termorresistentes patogenos habituales. En el proceso HTST, la leche habitualmente se calienta hasta 71,7 °C (161 °F) durante 15-20 segundos.
Tambien se indica que una pasteurizacion rapida (flash) es un metodo de pasteurizacion por calor de bebidas perecederas, tales como zumos de fruta y verdura, cerveza y productos lacteos. Se realiza antes de rellenar los recipientes para matar a los microorganismos de la descomposicion, para hacer que los productos sean mas seguros y extender su caducidad. El lfquido se mueve en un flujo continuo controlado al mismo tiempo que se somete a unas temperaturas de 71,5 °C (160 °F) a 74 °C (165 °F) durante 15 a 30 segundos.
Para el fin de la presente invencion, la expresion "tratamiento a alta temperatura y corta duracion" incluye los tratamientos UHT.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Puesto que dicho tratamiento con calor proporciona probioticos no replicativos con un mejor perfil antiinflamatorio, la composicion puede emplearse para la prevencion o el tratamiento de trastornos inflamatorios.
Los trastornos inflamatorios que pueden tratarse o prevenirse por medio de la composicion no estan limitados en concreto. Por ejemplo, pueden seleccionarse del grupo que consiste en inflamaciones agudas, tales como sepsis; quemaduras; e inflamacion cronica, tal como enfermedad inflamatoria del intestino, por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, bursitis; enterocolitis necrotizante; inflamacion de la piel, tal como inflamacion de la piel inducida por UV o productos qmmicos, eccema, piel reactiva; smdrome del intestino irritable; inflamacion ocular; alergia, asma; y sus combinaciones.
Ademas se describen tratamientos con calor que hacen que los microorganismos probioticos no sean replicativos, tales como un tratamiento con calor que puede realizarse en un intervalo de temperatura de 70-150 °C durante 3 minutos-2 horas, preferiblemente en el intervalo de 80-140 °C durante 5 minutos-40 minutos.
Aunque la tecnica anterior en general indica que las bacterias que se hacen no replicativas por medio de tratamientos con calor a largo plazo normalmente son menos eficaces que las celulas vivas, en terminos de ejercer sus propiedades probioticas, se ha demostrado que los probioticos tratados con calor a largo plazo son mejores para estimular el sistema inmunologico, comparados con sus homologos vivos.
Tambien se describe una composicion que comprende microorganismos probioticos que se han hecho no replicativos mediante un tratamiento con calor de al menos 70 °C durante al menos 3 minutos.
Los efectos de refuerzo inmunologico de los probioticos no replicativos se confirmaron mediante la determinacion de inmunoperfiles in vitro. El modelo in vitro emplea la determinacion de los perfiles de citoquinas en celulas mononucleares de sangre periferica ("Peripheral Blood Mononuclear Cells", PBMC) humanas y es un modelo convencional aceptado en la tecnica para ensayos de compuestos inmunomoduladores (Schultz et al., 2003, Journal of Dairy Research 70, 165-173; Taylor et al., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235; Kekkonen et al., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203).
El ensayo de PBMC in vitro ha sido empleado por diversos autores/equipos de investigacion, por ejemplo, para clasificar a los probioticos segun su perfil inmunologico, concretamente sus caractensticas anti- o proinflamatorias (Kekkonen et al., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203). Por ejemplo, se ha demostrado que este ensayo permite la prediccion del efecto antiinflamatorio de probioticos candidates en modelos de raton de colitis intestinal (Foligne, B., et al., 2007, World J. Gastroenterol., 13:236-243). Ademas, este ensayo se emplea habitualmente en ensayos clmicos y se ha demostrado que conduce a resultados coherentes con los resultados clmicos (Schultz et al., 2003, Journal of Dairy Research, 70, 165-173; Taylor et al., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235).
Las enfermedades alergicas han ido aumentando a lo largo de las ultimas decadas y, en la actualidad, son consideradas epidemicas por la OMS. De un modo general, la alergia se considera el resultado de un desequilibrio en las respuestas de Th1 y Th2 del sistema inmunologico, que conduce a un sesgo potente hacia la produccion de mediadores de Th2. Por tanto, la alergia puede mitigarse, infrarregularse o prevenirse restableciendo un equilibrio apropiado entre los brazos de Th1 y Th2 del sistema inmunologico. Esto implica la necesidad de reducir las respuestas de Th2 o potenciar, al menos de una manera transitoria, las respuestas de Th1. Esto ultimo sena una caractenstica de una respuesta de refuerzo inmunologico, que a menudo viene acompanada de un aumento en los niveles de IFNy, TNF-a e IL-12 (Kekkonen et al., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203; Viljanen M. et al., 2005, Allergy, 60, 494-500).
La composicion de un alimento para animales de comparMa permite, por tanto, tratar o prevenir trastornos que estan relacionados con una defensa inmunologica comprometida.
Por consiguiente, los trastornos relacionados con una defensa inmunologica comprometida que pueden tratarse o prevenirse no estan particularmente limitados.
Por ejemplo, pueden seleccionarse del grupo que consiste en infecciones, en particular infecciones bacterianas, vmcas, fungicas y/o parasitarias; deficiencias en fagocitos; niveles de inmunodepresion de bajos a graves, tales como los inducidos por estres o farmacos inmunodepresivos, quimioterapia o radioterapia; estados naturales de sistemas inmunologicos menos inmunocompetentes, tales como los de los neonatos; alergias; y sus combinaciones.
La composicion de un alimento para animales de comparMa tambien permite potenciar la respuesta del animal a las vacunas, en particular a las vacunas orales.
Al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, mas preferiblemente al menos 98%, lo mas preferiblemente al menos 99%, de modo ideal al menos 99,9%, y del modo mas ideal todos los probioticos son no replicativos.
Se describe que todos los microorganismos son no replicativos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Por consiguiente, en la composicion, al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, mas preferiblemente al menos 98%, lo mas preferiblemente al menos 99%, de modo ideal al menos 99,9%, y del modo mas ideal todos los probioticos pueden ser no replicativos.
Todos los microorganismos probioticos pueden utilizarse para los fines de la presente invencion.
Por ejemplo, los microorganismos probioticos se pueden seleccionar del grupo que consiste en bifidobacterias, lactobacilos, propionibacterias o sus combinaciones, por ejemplo, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescents, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli y/o sus mezclas.
La composicion segun la presente puede comprender, por ejemplo, microorganismos probioticos seleccionados del grupo que consiste en Bifidobacterium longum NCC 3001 (ATCC BAA-999), Bifidobacterium longum NCC 2705 (CNCM I-2618), Bifidobacterium breve NCC 2950 (CNCM I-3865), Bifidobacterium lactis NCC 2818 (CNCM I-3446), Lactobacillus johnsonii La 1 (CNCM I-1225), Lactobacillus paracasei NCC 2461 (CNCM I-2116), Lactobacillus rhamnosus NCC 4007 (CGMCC 1.3274), Lactobacillus reuteri DSM17983, Lactobacillus reuteri ATCC 55730, Streptococcus thermophilus NCC 2059 (cNcM 1-4153), Lactobacillus casei NCC 1825 (ACA-DC 6002), Escherichia coli Nissle (DSM 6601), Lactobacillus bulgaricus NCC 15 (CNCM I-1198), Lactococcus lactis NCC 2287 (CNCM I- 4154), o sus combinaciones.
Todas estas cepas estan depositadas bajo el tratado de Budapest y/o estan disponibles en el mercado.
Las cepas se han depositado bajo el tratado de Budapest como sigue:
Bifidobacterium longum NCC 3001: Bifidobacterium longum NCC 2705: Bifidobacterium breve NCC 2950 Bifidobacterium lactis NCC 2818: Lactobacillus paracasei NCC 2461: Lactobacillus rhamnosus NCC 4007: Streptococcus themophilus NCC 2019: Streptococcus themophilus NCC 2059: Lactococcus lactis NCC 2287: Lactobacillus casei NCC 4006:
ATCC BAA-999 CNCM I-2618 CNCM I-3865 CNCM I-3446 CNCM I-2116 CGMCC 1.3724 CNCM I-1422 CNCM I-4153 CNCM I-4154 CNCM I-1518
Lactobacillus casei NCC 1825: Lactobacillus acidophilus NCC 3009: Lactobacillus bulgaricus NCC 15: Lactobacillus johnsonii La1: Lactobacillus reuteri DSM17983: Lactobacillus reuteri ATCC55730: Escherichia coli Nissle 1917:
ACA-DC 6002 ATCC 700396 CNCM I-1198 CNCM I-1225 DSM17983 ATCC55730 DSM 6601
Las cepas denominadas ATCC se depositaron en ATCC Patent Depository, 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110, EE. UU.
Las cepas denominadas CNCM se depositaron en COLLECTION NATIONALE DE CULTURES DE MICROORGANISMES (CNCM), 25 rue du Docteur Roux, F-75724 PARfS Cedex 15, Francia.
Las cepas denominadas CGMCC se depositaron en China General Microbiological Culture Collection Center, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Zhongguancun, P.O.Box2714, Pekin 100080, China.
Las cepas denominadas ACA-DC se depositaron en Greek Coordinated Collections of Microorganisms, Dairy Laboratory, Department of Food Science and Technology, Agricultural University of Athens, 75, Iera odos, Botanikos, Atenas, 118 55, Grecia.
Las cepas denominadas DSM se depositaron en DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr. 7 BA, 38124 Braunschweig, ALEMANIA.
Los expertos en la tecnica comprenderan que pueden combinar libremente todas las caractensticas de la presente invencion descrita en la presente.
Otras ventajas y caractensticas seran evidentes a partir de los siguientes ejemplos y figuras.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Las figuras 1A y B muestran la potenciacion de los perfiles inmunologicos antiinflamatorios de probioticos tratados con "temperaturas altas y corta duracion”.
La figura 2 muestra cepas probioticas no antiinflamatorias que se convirtieron en antiinflamatorias, es decir, mostraron unos pronunciados perfiles inmunologicos antiinflamatorios in vitro despues de ser tratadas con "temperaturas altas y corta duracion".
Las figuras 3A y B muestran cepas probioticos en uso en productos disponibles en el mercado que muestran perfiles inmunologicos antiinflamatorios nuevos o potenciados in vitro despues de ser tratadas con "temperaturas altas y corta duracion".
Las figuras 4A y B muestran cepas iniciadoras lacteas (concretamente, cepas iniciadoras Lc1) que muestran perfiles inmunologicos antiinflamatorios nuevos o potenciados in vitro despues de un tratamiento con calor a altas temperaturas.
La figura 5 muestra una cepa probiotica no antiinflamatoria que muestra unos perfiles inmunologicos antiinflamatorios in vitro despues de ser tratada con tratamientos HTST.
La figura 6 es un analisis de componentes principales de datos de PBMC (IL-12p40, IFN-y, TNF-a, IL-10) generados con cepas probioticas e iniciadores lacteos en sus formas vivas y tratadas con calor (140 °C durante 15 segundos). Cada punto representa una cepa viva o tratada con calor identificada por su nombre o numero NCC.
La figura 7 muestra las proporciones de IL-12p40/IL-10 de cepas vivas y tratadas con calor (85 °C, 20 min). De modo global, el tratamiento con calor a 85 °C durante 20 min conduce a un aumento en las proporciones de IL- 12p40/IL-10, en oposicion a los tratamientos de "alta temperatura y corta duracion" de la presente invencion (figuras 1,2, 3, 4 y 5).
La figura 8 muestra la potenciacion de la secrecion de citoquinas in vitro de PBMC humanas estimuladas con bacterias tratadas con calor.
La figura 9 muestra el porcentaje de intensidad de diarrea observada en ratones sensibilizados con OVA expuestos a disolucion salina (control negativo), ratones sensibilizados con OVA expuestos a OVA (control positivo) y ratones sensibilizados con OVA expuestos a OVA y tratados con Bifidobacterium breve NCC2950 vivo o tratado con calor. Los resultados se muestran como el porcentaje de intensidad de la diarrea (promedio + MEE calculado a partir de 4 experimentos independientes), correspondiendose 100% de intensidad de diarrea con los smtomas desarrollados en el grupo de control positivo (sensibilizados y expuestos al alergeno).
Ejemplo 1
Metodologfa
Preparaciones bacterianas:
Los beneficios para la salud ofrecidos por los probioticos vivos en el sistema inmunologico del hospedante se consideran, en general, espedficos de cepa. Se ha demostrado que los probioticos que inducen unos niveles altos de IL-10 y/o que inducen unos niveles bajos de citoquinas proinflamatorias in vitro (ensayo de PBMC) son potentes cepas antiinflamatorias in vivo (Foligne, B., et al., 2007, World J. Gastroenterol., 13:236-243).
Se emplearon varias cepas probioticas para investigar las propiedades antiinflamatorias de probioticos tratados con calor. Estas fueron Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825), y Escherichia coli Nissle. Tambien se ensayaron varias cepas de cultivos iniciadores que incluyen algunas cepas disponibles en el mercado para producir los productos fermentados Nestle Lc1: Streptococcus thermophilus nCc 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus bulgaricus NCC 15 y Lactococcus lactis NCC 2287.
Las celulas bacterianas se cultivaron en condiciones optimizadas para cada cepa en biorreactores 5-15L. Pueden utilizarse todos los medios de cultivo bacterianos tfpicos. Estos medios son conocidos por los expertos en la tecnica. Cuando el pH se ajusta a 5,5, se anade de modo continuo una disolucion de base al 30% (NaOH o Ca(OH)2). Cuando resulto adecuado, las condiciones anaerobias se mantuvieron introduciendo CO2 en el espacio de la parte superior. Se cultivo E. coli bajo condiciones aerobias convencionales.
Las celulas bacterianas se recolectaron mediante centrifugacion (5.000 x g, 4 °C) y se resuspendieron en disolucion salina tamponada con fosfato ("phosphate buffer saline", PBS) en volumenes adecuados para alcanzar una concentracion final de aproximadamente 109-1010 cfu/ml. Parte de la preparacion se congelo a -80 °C con glicerol al
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
15%. Otra parte de las celulas se trato con calor mediante:
- una temperature ultra-alta: 140 °C durante 15 segundos; mediante inyeccion de vapor indirecta.
- alta temperature y corta duracion tiempo (HTST): 74 °C, 90 °C y 120 °C durante 15 segundos mediante inyeccion de vapor indirecta.
- mucho tiempo y baja temperature (85 °C, 20 min) en agua. Tras el tratamiento con calor, las muestras se mantuvieron congeladas a -80 °C hasta el momento del uso.
Formacion de perfiles inmunologicos in vitro de preparaciones bacterianas:
Se evaluaron los perfiles inmunologicos de preparaciones bacterianas vivas y tratadas con calor (es decir, la capacidad para inducir la secrecion de citoquinas espedficas desde celulas sangurneas humanas in vitro). Se aislaron celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) de filtrados de sangre. Despues de una separacion mediante un gradiente de densidad de celulas, las celulas mononucleares se recolectaron y se lavaron dos veces con disolucion salina equilibrada de Hank. Despues las celulas se resuspendieron en medio de Dulbecco modificado de Iscove (IMDM, Sigma) suplementado con suero de ternero fetal al 10% (Bioconcept, Paris, Francia), L-glutamina al 1% (Sigma), penicilina al 1%/estreptomicina (Sigma) y gentamicina al 0,1% (Sigma). Despues las PBMC (7 x 105 celulas/pocillo) se incubaron con bacterias vivas y tratadas con calor (equivalente a 7 x 106 cfu/pocillo) en placas de 48 pocillos durante 36 h. Se ensayaron los efectos de las bacterias vivas y tratadas con calor sobre las PBMC procedentes de 8 donantes individuales divididas en dos experimentos distintos. Despues de 36 h de incubacion, las placas de cultivo se congelaron y se mantuvieron a -20 °C hasta la medicion de las citoquinas. Se realizaron los perfiles de citoquinas en paralelo (es decir, en el mismo experimento sobre el mismo lote de PBMC) para las bacterias vivas y sus homologas tratadas con calor.
Se determinaron los niveles de citoquinas (IFN-y, IL-12p40, TNF-a e IL-10) en sobrenadantes de cultivos celulares despues de 36 h de incubacion mediante ELISA (R&D DuoSet IL-10 humana, BD OptEIA IL12p40 humana, BD OptEIA TNFa humano, BD OptEIA IFN-y humano) siguiendo las instrucciones del fabricante. IFN-y, IL-12p40 y TNF- a son citoquinas proinflamatorias, mientras que IL-10 es un potente mediador antiinflamatorio. Los resultados se expresan como promedio (pg/ml) +/- MEE de 4 donantes individuales y son representativos de dos experimentos individuales realizados con 4 donantes cada uno. Se calculo la proporcion de IL-12p40/IL-10 para cada cepa como un valor predictivo del efecto antiinflamatorio in vivo (Foligne, B., et al., 2007, World J. Gastroenterol., 13:236-243).
Los valores numericos de las citoquinas (pg/ml) determinados mediante ELISA (vease anteriormente) para cada cepa se trasladaron a un software BioNumerics v5.10 (Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgica). Se realizo un analisis de los componentes principales ("Principal Component Analysis", PCA, una tecnica de dimensionamiento) en este conjunto de datos. En este analisis se incluyo la resta de los promedios con respecto a los caracteres y la division entre las varianzas con respecto a los caracteres.
Resultados
Perfiles antiinflamatorios generados mediante tratamientos similares a temperatura ultra-alta (UHT)/alta temperatura y corta duracion (HTST)
Las cepas probioticas investigadas se sometieron a una serie de tratamientos con calor (temperatura ultra-alta (UHT), alta temperatura y corta duracion (HTST) y 85 °C durante 20 min) y se compararon sus perfiles inmunologicos con los de celulas vivas in vitro. Los microorganismos vivos (probioticos y/o cultivos iniciadores lacteos) indujeron diferentes niveles de produccion de citoquinas cuando se incuban con PBMc humanas (figuras 1, 2, 3, 4 y 5). El tratamiento con calor de estos microorganismos modifica los niveles de citoquinas producidas por las PBMC de una manera dependiente de la temperatura. Los tratamientos a "alta temperatura y corta duracion" (120 °C o 140 °C durante 15 segundos) no generaron bacterias replicativas con perfiles inmunologicos antiinflamatorios (figuras 1, 2, 3 y 4). En efecto, las cepas tratadas con un procedimiento similar a UHT (140 °C, 15 seg) indujeron menos citoquinas proinflamatorias (TNF-a, IFN- y, IL-12p40), al mismo tiempo que mantuvieron o indujeron la produccion adicional de IL-10 (comparado con sus homologas vivas). Las proporciones de IL-12p40/IL-10 resultantes fueron mas bajas para cualquiera de las cepas tratadas con un procedimiento similar a UHT, comparado con las celulas vivas (figuras 1, 2, 3 y 4). Esta observacion tambien fue valida para las bacterias tratadas con tratamientos similares a HTST, es decir, sometidas a 120 °C durante 15 seg (figuras 1, 2, 3 y 4), o 74 °C y 90 °C durante 15 seg (figura 5). Los tratamientos con calor (tratamientos similares a UHT o similares a HTST) producen un efecto similar sobre los perfiles inmunologicos in vitro de cepas probioticas (figuras 1, 2, 3 y 5) y cultivos iniciadores lacteos (figura 4). Los datos del analisis de componentes principales de PBMC generados con probioticos y cepas iniciadoras lacteas vivas y tratadas con calor (140 °C, 15 segundos) revelaron que las cepas vivas se extienden a lo largo del eje x, lo cual indica que las cepas muestran perfiles inmunologicos muy diferentes in vitro, desde inductores bajos (izquierda) a altos (derecha) de citoquinas proinflamatorias. Las cepas tratadas con calor se agrupan en la parte izquierda de la grafica, lo cual demuestra que las citoquinas proinflamatorias son mucho menos inducidas por las cepas tratadas con calor (figura 6). Por contraste, las bacterias tratadas con calor a 85 °C durante 20 min
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
inducen mas citoquinas proinflamatorias y menos IL-10 que las celulas vivas, dando como resultados unas proporciones de IL-12p40/IL-10 mayores (figura 7).
Los perfiles antiinflamatorios son potenciados o generados por tratamientos similares a UHT y similares a HTST.
Las cepas tratadas con UHT y HTST mostraron menos perfiles antiinflamatorios, independientemente de sus respectivos perfiles inmunologicos iniciales (celulas vivas). Se demostro que las cepas probioticas conocidas por ser antiinflamatorias in vivo y por mostrar unos perfiles antiinflamatorios in vitro (B. longum NCC 3001, B. longum NCC 2705, B. breve NCC 2950, B. lactis NCC 2818) mostraban perfiles antiinflamatorios potenciados in vitro despues de los tratamientos a "alta temperatura y corta duracion". Tal como se muestra en la figura 1, las proporciones de IL- 12p40/IL-10 de las cepas de Bifidobacterium tratadas con un procedimiento similar a UHT fueron menores que las de sus homologas vivas, lo cual demuestra unos perfiles antiinflamatorios mejorados de las muestras tratadas con un procedimiento similar a UHT. De forma aun mas sorprendente, la generacion de perfiles antiinflamatorios por los tratamientos con procedimiento similares a UHT y similares a HTST tambien fue confirmado por las cepas vivas no antiinflamatorias. Ambos L. rhamnosus NCC 4007 y L. paracasei NCC 2461 vivos muestran unas proporciones de IL-12p40/IL-10 in vitro (figuras 2 y 5). Se demostro que las dos cepas vivas no protegen frente a la colitis inducida por TNBS en ratones. Las proporciones de IL-12p40/IL-10 inducidas por L. rhamnosus NCC 4007 y L. paracasei NCC 2461 se redujeron notablemente despues de los tratamientos con "alta temperatura y corta duracion" (UHT o HTST), alcanzando unos niveles tan bajos como los obtenidos con cepas de Bifidobacterium. Estas proporciones bajas de IL-12p40/IL-10 son debidas a niveles bajos de produccion de IL-12p40, combinados con la falta de cambios (L. rhamnosus NCC 4007) o una induccion notable de secrecion de IL-10 (L. paracasei NCC 2461) (figura 2).
Como consecuencia:
- Los perfiles antiinflamatorios de microorganismos vivos pueden ser potenciados por medio de tratamientos con calor similares a UHT y similares a HTST (por ejemplo, B. longum NCC 2705, B. longum NCC 3001, B. breve NCC 2950, B. lactis NCC 2818).
- Pueden generarse perfiles antiinflamatorios a partir de microorganismos vivos no antiinflamatorios (por ejemplo, L. rhamnosus NCC 4007, L. paracasei NCC 2461, iniciadores lacteos S. thermophilus NCC 2019) por medio de tratamientos con calor similares a UHT y similares a HTST.
- Tambien aparecieron perfiles antinflamatorios en cepas aisladas a partir de productos disponibles en el mercado (figuras 3A y B), que incluyen una cepa probiotica de E. coli.
El impacto de los tratamientos similares a UHT/HTST fue similar para todos los probioticos e iniciadores lacteos ensayados, por ejemplo, lactobacilos, bifidobacterias y estreptococos.
Se aplicaron tratamientos similares a UHT/HTST a varios lactobacilos, bifidobacterias y estreptococos que muestran diferentes perfiles inmunologicos in vitro. Todas las cepas indujeron menos citoquinas proinflamatorias despues de los tratamientos similares a UHT/HTST que sus homologas vivas (figuras 1, 2, 3, 4, 5 y 6), lo cual demuestra que el efecto de los tratamientos similares a UHT/HTST sobre las propiedades inmunologicas de las bacterias no replicativas resultantes puede generalizarse a todos los probioticos, en particular a lactobacilos y bifidobacterias y a cepas espedficas de E. coli y a todos los cultivos iniciadores lacteos, en particular a estreptococos, lactococos y lactobacilos.
Ejemplo 2 (ejemplo comparativo)
Metodologfa
Preparaciones bacterianas:
Se emplearon cinco cepas probioticas para investigar las propiedades de refuerzo inmunologico de probioticos no replicativos: 3 bifidobacterias (B. longum NCC3001, B. lactis NCC2818, B. breve NCC2950) y 2 lactobacilos (L. paracasei NCC2461, L. rhamnosus NCC4007).
Las celulas bacterianas se cultivaron en MRS en una fermentacion discontinua a 37 °C durante 16-18h sin control del pH. Las celulas bacterianas se recolectaron mediante centrifugacion (5.000 x g, 4 °C) y se resuspendieron en disolucion salina tamponada con fosfato antes de diluirse en agua con disolucion salina para alcanzar una concentracion final de aproximadamente 10E10 cfu/ml. B. longum NCC3001, B. lactis NCC2818, L. paracasei NCC2461, L. rhamnosus NCC4007 se trataron con calor a 85 °C durante 20 min en un bano de agua. B. breve NCC2950 se trato con calor a 90 °C durante 30 minutos en un bano de agua. Las suspensiones bacterianas tratadas con calor se dividieron en partes alfcuotas y se mantuvieron congeladas a -80 °C hasta el momento del uso. Las bacterias vivas se conservaron a -80 °C en PBS-glicerol al 15% hasta el momento del uso.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Formacion de perfiles inmunologicos in vitro de preparaciones bacterianas
Se evaluaron los perfiles inmunologicos de preparaciones bacterianas vivas y tratadas con calor (es dedr, la capacidad para inducir la secrecion de citoquinas espedficas desde celulas sangumeas humanas in vitro). Se aislaron celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) de filtrados de sangre. Despues de una separacion mediante un gradiente de densidad de celulas, las celulas mononucleares se recolectaron y se lavaron dos veces con disolucion salina equilibrada de Hank. Despues las celulas se resuspendieron en medio de Dulbecco modificado de Iscove (IMDM, Sigma) suplementado con suero de ternero fetal al l0% (Bioconcept, Paris, Francia), L-glutamina al 1% (Sigma), penicilina al 1%/estreptomicina (Sigma) y gentamicina al 0,1% (Sigma). Despues las PBMC (7 x 105 celulas/pocillo) se incubaron con bacterias vivas y tratadas con calor (equivalente a 7 x 106 cfu/pocillo) en placas de 48 pocillos durante 36 h. Se ensayaron los efectos de las bacterias vivas y tratadas con calor sobre las PBMC procedentes de 8 donantes individuales divididas en dos experimentos distintos. Despues de 36 h de incubacion, las placas de cultivo se congelaron y se mantuvieron a -20 °C hasta la medicion de las citoquinas. Se realizaron los perfiles de citoquinas en paralelo (es decir, en el mismo experimento sobre el mismo lote de PBMC) para las bacterias vivas y sus homologas tratadas con calor.
Se determinaron los niveles de citoquinas (IFN-y, IL-12p40, TNF-a e IL-10) en sobrenadantes de cultivos celulares despues de 36 h de incubacion mediante ELISA (R&D DuoSet IL-10 humana, BD OptEIA IL12p40 humana, BD OptEIA TNFa humano, BD OptEIA IFN-y humano) siguiendo las instrucciones del fabricante. IFN-y, IL-12p40 y TNF- a son citoquinas proinflamatorias, mientras que IL-10 es un potente mediador antiinflamatorio. Los resultados se expresan como promedio (pg/ml) +/- MEE de 4 donantes individuales y son representativos de dos experimentos individuales realizados con 4 donantes cada uno.
Efecto in vivo de Bifidobacterium breve NCC2950 vivo y tratado con calor para la prevencion de la diarrea alergica
Se empleo un modelo de raton de diarrea alergica para ensayar el efecto estimulante de Th1 de B. breve NCC2950 (Brandt E.B et al., JCI, 2003, 112(11):1666-1667). Despues de la sensibilizacion (2 inyecciones intraperitoneales de ovoalbumina (OVA) y sulfato de aluminio y potasio en un intervalo de 14 dfas; dfas 0 y 4), ratones Balb/c macho fueron expuestos por via oral a OVA seis veces (dfas 27, 29, 32, 34, 36, 39), lo cual produjo la aparicion de smtomas clmicos transitorios (diarrea) y cambios en los parametros inmunologicos (concentracion plasmatica de IgE total, IgE espedfica de OVA, proteasa 1 de celulas cebadas de raton ("mouse mast cell protease 1", MMCP-1)). Se administro Bifidobacterium breve NCC2950 vivo o tratado con calor a 90 °C durante 30 min mediante sonda oral 4 dfas antes de la sensibilizacion con OVA (dfas -3, -2, -1, 0 y dfas 11, 12, 13 y 14) y durante el periodo de exposicion (dfas 23 a 39). Se empleo una dosis bacteriana diaria de aproximadamente 109 unidades formadoras de colonias (cfu) o equivalentes de cfu/raton.
Resultados
Induccion de la secrecion de citoquinas "proinflamatorias" despues del tratamiento con calor
Se evaluo la capacidad de cepas bacterianas tratadas con calor para estimular la secrecion de citoquinas por celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) humanas in vitro. Se compararon los perfiles inmunologicos de cuatro citoquinas tras la estimulacion de las PBMC por bacterias tratadas con calor, con los de las inducidas por celulas bacterianas vivas en el mismo ensayo in vitro.
Las preparaciones tratadas con calor se cultivaron en placa y se evaluaron para la ausencia de recuentos viables. Las preparaciones bacterianas tratadas con calor no produjeron colonias despues del cultivo en placa.
Los probioticos vivos indujeron diferentes niveles, dependientes de la cepa, de produccion de citoquinas cuando se incuban con PBMC humanas (figura 8). El tratamiento con calor de los probioticos modifico los niveles de citoquinas producidas por las PBMC, comparado con sus homologos vivos. Las bacterias tratadas con calor indujeron mas citoquinas proinflamatorias (TNF-a, IFN-y, IL-12p40) que sus homologas vivas. Por contraste, las bacterias tratadas con calor indujeron unas cantidades similares o menores de IL-10, comparado con las celulas vivas (figura 8). Estos datos demuestran que las bacterias tratadas con calor son mas capaces de estimular el sistema inmunologico que sus homologas vivas y, por tanto, son mas capaces de reforzar las defensas inmunologicas debilitadas. En otras palabras, los datos in vitro indican un efecto de refuerzo inmunologico potenciado de las cepas bacterianas despues de un tratamiento con calor.
Para ilustrar el efecto potenciado de B. breve NCC2950 tratado con calor (comparado con las celulas vivas) sobre el sistema inmunologico, se ensayaron B. breve NCC2950 (cepa A) vivas y tratadas con calor en un modelo animal de diarrea alergica.
Comparado con el grupo de control positivo, la intensidad de la diarrea disminuyo significativa y constantemente despues del tratamiento con B. breve NCC2950 (41,1% + 4,8) tratadas con calor, mientras que la intensidad de la diarrea disminuyo en solo 20 + 28,3% despues del tratamiento con B. breve NCC2950 vivas. Estos resultados demuestran que B. breve NCC2950 tratadas con calor muestran un efecto protector potenciado frente a la diarrea
alergica que sus homologas vivas (figura 9).
Como consecuencia, se demostro que la capacidad de los probioticos para potenciar las defensas inmunologicas mejoro despues del tratamiento con calor.
Otro ejemplo
Puede prepararse la siguiente composicion de un alimento para animales de comparna empleando tecnicas convencionales, tal como se describen en esta solicitud de patente:
10
Ingrediente
g/100 g
Grasas
15
Protemas
29
Hidratos de carbono
46
Fibra dietetica
7
Agentes de equilibrio nutricional
2
Lactobacillus johnsonii La1 tratada con calor de corta duracion
1

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    REIVINDICACIONES
    1. Un metodo para preparar una composicion de un alimento para animales de compama que comprende microorganismos probioticos no replicativos en una cantidad correspondiente a de 106 a 1012 cfu por racion, en el que dicho metodo comprende tratar los microorganismos probioticos con un tratamiento de alta temperatura a 120150 °C durante 1-120 segundos y, asf, hacer que los microorganismos probioticos no sean replicativos.
  2. 2. Un metodo segun la reivindicacion 1, que comprende del 4 al 40% en peso seco de grasas, del 12 al 70% en peso seco de hidratos de carbono y del 12 al 50% en peso seco de protemas.
  3. 3. Un metodo segun la reivindicacion 2, que comprende del 10 al 20% en peso seco de grasas, del 30 al 60% en peso seco de hidratos de carbono y del 20 al 35% en peso seco de protemas.
  4. 4. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, que comprende ademas del 0,5 al 40% en peso seco, preferiblemente del 0,5 al 30% en peso seco, mas preferiblemente del 1 al 20% en peso seco, y lo mas preferiblemente del 1 al 10% en peso seco de fibra dietetica.
  5. 5. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, en el que la composicion alimentaria para animales de compama se selecciona del grupo que consiste en alimentos para animales de compama, dietas nutricionales para animales de compama, complementos para animales de compama, recompensas para animales de compama y juguetes comestibles para animales de compama, tales como juguetes que se pueden morder y comer.
  6. 6. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, que comprende ademas prebioticos, por ejemplo, oligofructosa e inulina.
  7. 7. Un metodo segun la reivindicacion 1, en el que el tratamiento con calor es un tratamiento a temperatura ultra-alta (UHT) que implica calentar la composicion durante un corto periodo de tiempo de 1 a 10 segundos a una temperatura que supera 135 °C.
  8. 8. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, en el que al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, mas preferiblemente al menos 98%, lo mas preferiblemente al menos 99%, de modo ideal al menos 99,9%, y del modo mas ideal todos los probioticos se hacen no replicativos.
  9. 9. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, en el que los microorganismos probioticos se seleccionan del grupo que consiste en bifidobacterias, lactobacilos, propionibacterias o sus combinaciones, por ejemplo, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescents, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli y/o sus mezclas.
  10. 10. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, en el que los microorganismos probioticos se seleccionan del grupo que consiste en Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bifidobacterium longum CNCM 12618, Bifidobacterium breve CNCM 1-3865, Bifidobacterium lactis CNCM 1-3446, Lactobacillus johnsonii CNCM 11225, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116, Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724, Lactobacillus reuteri DSM17983, Lactobacillus reuteri ATCC55730, Streptococcus thermophilus CNCM I-1422, Streptococcus thermophilus CNCM 1-4153, Lactobacillus casei cNcM 1-1518, Lactobacillus acidophilus ATCC 700396, Lactobacillus casei ACA-DC 6002, Escherichia coli Nissle DSM 6601, Lactobacillus bulgaricus CNCM 1-1198, Lactococcus lactis CNCM 1-4154, o sus combinaciones.
  11. 11. Un metodo segun una de las reivindicaciones anteriores, que contiene de 0,005 mg a 1000 mg de microorganismos no replicativos por dosis diaria.
ES11781488.9T 2010-11-05 2011-11-02 Proceso de producción de una preparación alimentaria para animales de compañía que contiene microorganismos probióticos Active ES2623837T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10190118 2010-11-05
EP10190118.9A EP2449887B1 (en) 2010-11-05 2010-11-05 Method for preparing pet food containing probiotic micro-organisms
PCT/EP2011/069209 WO2012059499A1 (en) 2010-11-05 2011-11-02 Pet food preparations containing probiotic micro-organisms

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2623837T3 true ES2623837T3 (es) 2017-07-12

Family

ID=44022861

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10190118.9T Active ES2565407T3 (es) 2010-11-05 2010-11-05 Procedimiento para la preparación de un producto alimenticio para animales de compañía, el cual contiene microorganismos probióticos
ES11781488.9T Active ES2623837T3 (es) 2010-11-05 2011-11-02 Proceso de producción de una preparación alimentaria para animales de compañía que contiene microorganismos probióticos

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10190118.9T Active ES2565407T3 (es) 2010-11-05 2010-11-05 Procedimiento para la preparación de un producto alimenticio para animales de compañía, el cual contiene microorganismos probióticos

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20130309357A1 (es)
EP (2) EP2449887B1 (es)
JP (1) JP6321376B2 (es)
CN (1) CN103702569B (es)
AU (1) AU2011325207B2 (es)
BR (1) BR112013010891A2 (es)
CA (1) CA2816386C (es)
ES (2) ES2565407T3 (es)
MX (1) MX347262B (es)
RU (1) RU2580881C2 (es)
WO (1) WO2012059499A1 (es)
ZA (1) ZA201304086B (es)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10104903B2 (en) 2009-07-31 2018-10-23 Mars, Incorporated Animal food and its appearance
EP2455094A1 (en) * 2010-11-11 2012-05-23 Nestec S.A. Non-replicating probiotic micro-organisms protect children against gastrointestinal infections
EP3033091B1 (en) * 2013-08-16 2022-09-07 Versitech Limited Probiotic composition and use thereof in the prevention and treatment of hepatocellular carcinoma
US20160303226A1 (en) * 2013-11-25 2016-10-20 Nestec S.A. Heat-treated formulation of bifidobacterium lactis ncc 2818 reduces allergic manifestations
US20150173397A1 (en) * 2013-12-20 2015-06-25 The Lams Company Pet food composition having probiotic bifidobacterium animalis
CN104546944B (zh) * 2014-09-30 2019-02-01 深圳华大基因科技有限公司 乳酸乳球菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
JP6564043B2 (ja) * 2014-12-19 2019-08-21 ヒルズ・ペット・ニュートリシャン・インコーポレーテッド 歯科有効性のための動物用食品、製造方法、および使用
AU2016255437B2 (en) 2015-04-28 2020-10-08 Mars, Incorporated Process of preparing a sterilized wet pet food product
DK3292135T3 (da) 2015-05-06 2022-10-31 Univ Wageningen Anvendelse af et polypeptid til at fremkalde immunsignalering og/eller påvirke tarmbarrierefunktion og/eller modulere metabolsk status
KR102569754B1 (ko) * 2015-09-10 2023-08-23 위니베르시트카솔리끄드루뱅 대사장애를 치료하기 위한 살균된 아커만시아의 용도
KR102454681B1 (ko) * 2016-03-09 2022-10-17 (주)에스틴 반려동물용 음수 보충 및 식이 보조제
KR101873899B1 (ko) * 2016-08-09 2018-07-03 씨제이제일제당(주) 락토바실러스 살리바리우스 cjls1511, 상기 균 또는 이의 사균체를 포함하는 동물 사료 첨가제 조성물, 및 상기 사균체의 제조 방법
KR101868067B1 (ko) * 2016-09-30 2018-06-15 정문주 모링가 잎과 딸기를 함유한 애견용 건강보조사료 조성물
RU2655856C1 (ru) * 2017-05-29 2018-05-29 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Северо-Кавказский научно-исследовательский институт животноводства" Способ применения пробиотической кормовой добавки при выращивании свиней на мясо
CN107242351A (zh) * 2017-06-14 2017-10-13 南京天益鸿胜生物科技有限公司 一种益生菌组合物及其应用
CN107868764A (zh) * 2017-11-27 2018-04-03 内蒙古普泽生物制品有限责任公司 一种增强宠物免疫力的复合益生菌粉制剂及其制备方法
CN108323641A (zh) * 2018-02-07 2018-07-27 上海宠幸宠物用品有限公司 一种用于调理宠物犬猫肠道功能的保健食品及其制备方法
US11590182B2 (en) 2018-09-10 2023-02-28 Ohio State Innovation Foundation Methods and compositions to modulate antibiotic resistance and gastrointestinal microbiota
CA3114973A1 (en) * 2018-10-02 2020-04-09 Societe Des Produits Nestle S.A. Probiotic combination for treatment of inflammatory-related gastrointestinal disorders
CA3122937A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 Societe Des Produits Nestle S.A. Probiotic combination for treatment of allergic disorders
KR102364483B1 (ko) * 2019-07-04 2022-02-21 백우인 천연성분을 주원료로 한 애완동물용 영양제 조성물
KR102254310B1 (ko) * 2019-10-02 2021-05-21 주식회사 고바이오랩 락토바실러스 애시도필러스 kbl409 균주 및 그 용도
CN111961623B (zh) * 2020-08-25 2022-06-28 青岛农业大学 一种复方乳酸菌制剂及其应用、复方脱霉剂及其应用
CN114903119A (zh) * 2021-02-08 2022-08-16 安徽安宠宠物用品有限公司 一种宠物用天然发酵多肽肉浆及其制作方法
CA3219618A1 (en) * 2021-05-20 2022-11-24 Blue Buffalo Enterprises, Inc. Pet food composition
CN115044514A (zh) * 2022-06-30 2022-09-13 中国农业科学院饲料研究所 植物乳杆菌、宠物保健品及其使用方法
KR102873451B1 (ko) 2023-02-14 2025-10-23 주식회사 슈퍼바이오 미생물을 이용한 반려동물용 면역력 증강 건강식 및 이의 제조방법
KR102720937B1 (ko) * 2023-05-22 2024-10-25 한동대학교 산학협력단 프로바이오틱스 균주를 포함하는 비만 예방 및 체력 증진용 사료 조성물

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5419283A (en) 1992-04-08 1995-05-30 Ciuffo Gatto S.R.L. Animal chew toy of starch material and degradable ethylene copolymer
US5339771A (en) 1993-09-15 1994-08-23 Axelrod Herbert R Animal chew toy containing animal meal
DE60119515T2 (de) * 2000-05-25 2007-05-24 Société des Produits Nestlé S.A. Probiotica für verwendung als haustierfutter
AU2003303894A1 (en) * 2003-01-30 2004-08-30 The Regents Of The University Of California Inactivated probiotic bacteria and methods of use thereof
CN1217587C (zh) * 2003-08-29 2005-09-07 周青许 宠物除臭型饼干及其加工工艺
US8871266B2 (en) * 2003-10-01 2014-10-28 Commonwealth Scientific & Industrial Research Organisation Probiotic storage and delivery
US8877178B2 (en) * 2003-12-19 2014-11-04 The Iams Company Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals
CN101155518A (zh) * 2005-04-11 2008-04-02 爱默思公司 包含两种组分的宠物食物组合物
ES2381211T3 (es) * 2006-02-15 2012-05-24 Nestec S.A. Uso del Bifidobacterium longum para prevenir y tratar inflamaciones
AU2007356903A1 (en) * 2007-07-25 2009-01-29 Campina Nederland Holding B.V. Probiotics for inducing satiety and/or satiation
EP2227239A2 (en) * 2007-12-06 2010-09-15 Arla Foods Amba Probiotic bacteria and regulation of fat storage
GB0809665D0 (en) * 2008-05-28 2008-07-02 Mars Uk Ltd Food product
US8137718B2 (en) * 2008-09-19 2012-03-20 Mead Johnson Nutrition Company Probiotic infant products
ES2689129T3 (es) * 2009-01-02 2018-11-08 Nestec S.A. Composiciones alimenticias que tienen un aspecto, una textura y un tacto similar a la carne
US10576110B2 (en) * 2009-05-11 2020-03-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Lactobacillus johnsonii La1 NCC533 (CNCM I-1225) and immune disorders
CN101584418B (zh) * 2009-06-15 2012-07-04 丁淑绿 宠物食品

Also Published As

Publication number Publication date
CA2816386A1 (en) 2012-05-10
EP2449887B1 (en) 2016-01-06
MX347262B (es) 2017-04-20
RU2580881C2 (ru) 2016-04-10
EP2635132B1 (en) 2017-01-11
AU2011325207A1 (en) 2013-05-23
RU2013125765A (ru) 2014-12-10
MX2013005042A (es) 2013-06-03
ZA201304086B (en) 2014-12-23
AU2011325207B2 (en) 2015-10-01
EP2449887A1 (en) 2012-05-09
EP2635132A1 (en) 2013-09-11
JP6321376B2 (ja) 2018-05-09
BR112013010891A2 (pt) 2016-07-12
JP2014500007A (ja) 2014-01-09
ES2565407T3 (es) 2016-04-04
CN103702569A (zh) 2014-04-02
CN103702569B (zh) 2016-05-11
US20130309357A1 (en) 2013-11-21
WO2012059499A1 (en) 2012-05-10
CA2816386C (en) 2019-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2623837T3 (es) Proceso de producción de una preparación alimentaria para animales de compañía que contiene microorganismos probióticos
ES2572760T3 (es) Leches de crecimiento que contienen microorganismos probióticos
US20120107290A1 (en) Non-replicating micro-organisms and their immune boosting effect
US20130224166A1 (en) Powdered cereal compositions comprising non-replicating probiotic microorganisms