ES2624272T3

ES2624272T3 - Utilización de anticuerpos optimizados en ADCC para tratar a los pacientes con bajo nivel de respuesta

Info

Publication number: ES2624272T3
Application number: ES10181317.8T
Authority: ES
Inventors: Dominique Bourel; Sylvie Jorieux; Christophe De Romeuf; Philippe Klein; Christine Gauchet; Nicolas Bihoreau; Emmanuel Nony
Original assignee: LFB SA
Current assignee: LFB SA
Priority date: 2003-07-31
Filing date: 2004-07-30
Publication date: 2017-07-13
Anticipated expiration: 2024-07-30
Also published as: US20140017243A1; WO2005012358A3; FR2858235B1; EP3159008B1; AU2004261754B8; US7713524B2; WO2005012358A2; CA2533918A1; ES2822930T3; AU2004261754B2; US20100303826A1; CA2533918C; US20060182741A1; JP5788273B2; EP2275134A2; EP2275134B1; US9109020B2; JP5252525B2; US8501171B2; AU2004261754C1

Abstract

Utilización de una composición de anticuerpo monoclonal quimérico, humanizado o humano dirigido contra un antígeno de un organismo patógeno para el ser humano, presentando dicha composición a nivel de la estructura glicánica del dominio Fc del anticuerpo un contenido superior al 60% para las formas G0 + G1 + G0F + G1F y un contenido para las formas G0F + G1F inferior al 50%, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de las infecciones por dicho organismo patógeno en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posición 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o de los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posición 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).

Description

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DESCRIPCION

Utilizacion de anticuerpos optimizados en ADCC para tratar a los pacientes con bajo nivel de respuesta

La presente descripcion se refiere a la utilizacion de anticuerpos monoclonales quimericos, humanizados o humanos de glicosilacion espedfica que presentan una fuerte interaccion para el receptor CD16 (FcgammaRIII) de las celulas efectoras del sistema inmunitario, pero tambien la propiedad de inducir la secrecion de citoquinas y de interleucinas, para tratar poblaciones de pacientes con bajo nivel de respuesta a los tratamientos existentes y que presenten un polimorfismo particular de su CD16.

La inmunoterapia mediante anticuerpos monoclonales esta fase de convertirse en una de las estrategias mas importantes e innovadoras de la medicina. Sin embargo, los resultados obtenidos durante ensayos clmicos parecen contrastados. En efecto, durante un cierto numero de tratamientos, el anticuerpo monoclonal no parece lo bastante activo y/o eficaz. Numerosos ensayos clmicos son detenidos debido a una falta de eficacia y de efectos secundarios incompatibles con una utilizacion en terapia clmica. Estos dos aspectos estan estrechamente relacionados, sabiendo que unos anticuerpos poco activos y/o eficaces son administrados a fuertes dosis para compensar la falta de eficacia y obtener una respuesta terapeutica. La administracion de fuertes dosis induce entonces unos efectos secundarios. Ademas, es economicamente poco viable.

Estos problemas son mayores en la industria de los anticuerpos monoclonales, en particular los anticuerpos quimericos, humanizados o humanos. Ahora bien, estos problemas son exacerbados para unas poblaciones particulares de pacientes para los cuales el efecto terapeutico de los anticuerpos es significativamente mas debil comparado con la media de la poblacion tratada. Estos pacientes son comunmente denominados “pacientes de bajo nivel de respuesta”.

Se conoce que la citotoxicidad celular mediada por los anticuerpos necesita por un lado una fijacion de la parte Fab de los anticuerpos en su diana asf como un compromiso de su dominio Fc en los receptores Fc de las celulas efectoras (RFc). En las celulas NK, el receptor responsable de esta actividad citotoxica es el CD16.

En base a sus conocimientos, se han llevado a cabo unos estudios a fin de establecer una correlacion entre las subpoblaciones de pacientes refractarios (pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta”) a la terapia con un anticuerpo espedfico de una patologfa a tratar y el polimorfismo de CD16.

En un estudio de 2000 (Cartron G, Dacheux L, Salles G, Solal-Celigny P, Bardos P, Colombat P, Watier H, Therapeutic activity of humanized anti-CD20 monoclonal antibody and polymorphism in IgG Fc receptor FcgammaRIIIa gene Blood. 1 de febrero de 2002; 99(3):754-8), la composicion de la poblacion de pacientes tratados con Rituxan® se analizo en funcion del polimorfismo de CD16 en la posicion 158. Esta estaba compuesta de 20% de FCGR3A-158V homocigotos (pacientes homocigotos para la valina en la posicion 158 del CD16), 35% de FCGR3A-158F homocigotos (pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 del CD16) y del 45% de heterocigotos FCGR3A-158V/F (pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 del CD16). La actividad ADCC asf como la eficacia clmica del anticuerpo anti-CD20 Rituxan® estan correlacionadas con el polimorfismo de CD16: los pacientes FCGR3A-158F homocigotos o heterocigotos FCGR3A-158V/F responden menos al tratamiento con Rituxan® que los pacientes FCGR3A-158V homocigotos.

Asf, este estudio ha permitido demostrar que las diferencias de respuesta a los tratamientos con unos anticuerpos terapeuticos estan asociadas a un polimorfismo de CD16.

Sin embargo, este estudio no propone solucion para disminuir el efecto de este polimorfismo en los pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta” tratados con unos anticuerpos terapeuticos. No proporciona herramienta terapeutica adaptada al tratamiento de los pacientes de bajo nivel de respuesta.

Por otro lado, se han obtenido otros resultados en terminos de estudios clmicos realizados con unos anticuerpos anti-rhesus, que han mostrado que la eliminacion de las hematfes Rhesus positivo por una IgG3 anti-D era mas rapido en los pacientes FCGR3A-158F homozygotes (Kumpel BM, De Haas M, Koene HR, Van De Winkel JG, Goodrick MJ. Clearance of red cells by monoclonal IgG3 anti-D in vivo is affected by the VF polymorphism of Fcgamma RIIIa (CD16). Clin Exp Immunol. 2003 Apr;132(1):81-6). Sin embargo, el bajo numero de pacientes estudiado no permite concluir una ensenanza tecnica de este estudio.

El objetivo de la presente invencion es proporcionar unos anticuerpos eficaces para tratar los pacientes que se encuentran en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles o que sufren efectos secundarios indeseables.

Se ha establecido una relacion entre la presencia de respuestas ADCC y la resolucion de infecciones virales (Fritz et al. J Am Acad Dermatol. Agosto de 1980; 3(2):167-73; Manischewitz et al. Infection and Immunity, Septiembre de 1980, p. 1050-1054; Khyatti et al. Journal of Virology, Febrero de 1991, p. 996-1001; Kohl et al. Rev Infect Dis. Enero-febrero de 1991; 13(1):108-14; Ahmad et al. FASEB J. 10, 258-266 (1996)), bacterianas (Nencioni et al. J

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Immunol. Febrero de 1983; 130(2):903-7; Morgan et al. Infect Immun. Octubre de 1984; 46(1):25-33; Cooper et al. Clin Microbiol Rev. Abril de 1989; 2 Suppl: S29-34), fungicas (Diamond et al. Infect. Immun. l976, 14(3):716; Kurup et al. Immunobiology. Mayo de 1985; 169(4):362-71) y parasitarias (Vinayak et al. Gut. Octubre de 1987; 28(10):1251-6; Brown et al. Clin. exp. Inmnunol. (1980) 41, 423-429; Kierszenbaum et al. Immunology. Mayo de 1980; 40(1):61-6; Hatcher et al. Science. 15 de octubre de 1982; 218(4569):295-6).

El documento WO 01/77181 describe que unos anticuerpos cuyo dominio Fc presenta una estructura glicanica particular, de tipo biantenado, con unas cadenas cortas, una baja sialilacion, unas manosas y GlcNAc del punto union terminales no intercalares y una baja fucosilacion (y en particular unas composiciones que presentan un contenido superior al 60% para las formas Go + G1 + G0F + G1F y un contenido en las formas G0F + G1F inferior al 50%) son capaces de inducir una fuerte respuesta ADCC por medio de un receptor CD16 cuyo polimorfismo no se ha determinado.

La solicitante ha encontrado que unos anticuerpos cuyo dominio Fc presenta una estructura glicanica particular presentan una actividad citotoxica particularmente adaptada al tratamiento de los pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta”, que no esta afectada por el polimorfismo FCGR3A-158F homocigotos o FCGR3A-158V/F del aminoacido 158 del CD16, contrariamente a los anticuerpos producidos en CHO cuya actividad citotoxica esta afectada por este polimorfismo. Ademas, la solicitante ha encontrado que estos anticuerpos inducen una produccion de citoquinas/quimioquinas, lo que contribuye tambien al refuerzo del efecto terapeutico estimulando unos mecanismos efectores del sistema inmunitario en los pacientes tratados.

La invencion propone por lo tanto utilizar estos anticuerpos para el tratamiento de sub-poblaciones de pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta”. Estos anticuerpos presentan una actividad ADCC y una produccion de citoquina y/o de quimioquinas hasta 100 veces superior a los anticuerpos disponibles en terapia.

Descripcion

Asf, la invencion se refiere a los objetos de las reivindicaciones 1 a 16.

La presente descripcion describe tambien la utilizacion de un anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano optimizado caracterizado por que:

a) esta producido en una lmea celular seleccionada por sus propiedades de glicosilacion de la region Fc de un anticuerpo, o

b) la estructura glicanica de la region Fc se ha modificado ex vivo, y/o

c) su secuencia primaria se ha modificado con el fin de aumentar su interaccion frente a unos receptores Fc;

presentando dicho anticuerpo i) un porcentaje ADCC a traves del CD16 (FCgammaRIIIA) superior al 60%, 70%, 80% o preferentemente superior al 90%, comparado con el mismo anticuerpo producido en una lmea CHO o a un anticuerpo homologo disponible en el comercio, para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de patologfas en pacientes que presentan el polimorfismo del receptor CD16 FCGR3A-158V/F o FCGR3A-158F homocigotos y calificados “de bajo nivel de respuesta” a las terapias con los anticuerpos actualmente disponibles.

Se entiende por pacientes “de bajo nivel de respuesta” los pacientes que presenten una reduccion del 20 al 50% de la respuesta a los tratamientos con unos anticuerpos terapeuticos con respecto a los pacientes denominados “de alto nivel de respuesta”, es decir los pacientes que presentan una respuesta completa que corresponde a la desaparicion de todos los smtomas y signos clmicos medibles de la enfermedad.

Por ejemplo, en el caso de un estudio de aclaramiento de las hematfes o de otro tipo celular en la circulacion, se entiende por pacientes “de bajo nivel de respuesta”, los pacientes que presentan un aclaramiento significativamente mas largo, con respecto a otro grupo de pacientes. En el tratamiento de las leucemias, se distingue:

* los de alto nivel de respuesta con una respuesta completa que corresponde a la desaparicion de todos los smtomas y signos medibles de la enfermedad, tanto desde el punto de vista del examen clmico como de los datos biologicos de laboratorios y de los estudios radiograficos. La disminucion del tamano de los tumores mas grandes es superior al 75%.

* los pacientes que responden parcialmente son descritos en el artmulo Cheson BD et al., Report of an international workshop to standardize response criteria for non-Hodgkin's lymphomas. NCI Sponsored International Working Group. J Clin Oncol. Abril de 1999; 17(4):1244. Review. Erratum in: J Clin Oncol. Junio de 2000; 18(11):2351.

* los de bajo nivel de respuesta corresponden a unos pacientes que tienen un estado denominado estable, con menos del 50% de reduccion de la masa tumoral, menos del 25% de aumento de las lesiones y ninguna nueva lesion. Este grupo de pacientes comprende tambien los pacientes para los cuales no se observa ninguna respuesta

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(progresion de la enfermedad que puede ir hasta la muerte).

As^ para una sub-poblacion de pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta” en relacion con el polimorfismo del aminoacido 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos o FCGR3A-158V/F) u otro polimorfismo asociado a este polimorfismo de CD16, la eficacia del tratamiento es mejor con los anticuerpos optimizados de la invencion, y se acerca a la de los pacientes denominados “de alto nivel de respuesta”.

En efecto, la interaccion del receptor para Fc de los anticuerpos es diferente segun los polimorfismos de CD16 (aa 158), teniendo el fenotipo FCGR3A-158V homocigoto una mejor afinidad que la forma FCGR3A-158F homocigoto y FCGR3A-158V/F heterocigoto. Los anticuerpos utilizados en el ambito de la invencion presentan una fuerte interaccion con el CD 16, lo que puede explicar el hecho de que su actividad funcional no sea o sea muy poco afectada por el polimorfismo fCgR3A-158F homocigotos o FCGR3A-158V/F de CD16.

La invencion se dirige por lo tanto a una poblacion particular de pacientes que presentan un polimorfismo de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos o FCGR3A-158V/F), en particular de los pacientes que se encuentran en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles y/o que sufren unos efectos secundarios indeseables que justifica la administracion del anticuerpo optimizado descrito aquf

Ademas de la mejora muy significativa de la actividad ADCC de tipo CD16 (FcyRIIIA), el anticuerpo utilizado en el ambito de la invencion se puede definir por que induce la secrecion de al menos una citoquina por un tipo de celulas efectoras del sistema inmunitario que expresa el receptor CD16 superior al 50%, al 100% o preferentemente superior al 200% comparado con el mismo anticuerpo producido en una lmea CHO o comparado con un anticuerpo homologo disponible en el comercio. El tipo de citoquina se selecciona entre IL-1, IL-4, IL-12, IL-18, IL-21, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IFNa, IFNp, TNFa, TGFp, IP10 y TNF, IFNy.

En el ambito de la presente descripcion, se muestra que unos anticuerpos que presentan una fuerte interaccion con CD16 tienen la ventaja de inducir la produccion de citoquinas, o de quimioquinas, en particular la produccion de IFNy. Las dos caractensticas antes citadas se complementan. En efecto, la produccion de IFNy o de otras citoquinas o quimioquinas, por unas celulas efectoras, inducida por los anticuerpos segun la invencion, puede reforzar el efecto terapeutico estimulando unos mecanismos efectores del sistema inmunitario en los pacientes tratados. El mecanismo de accion de tal estimulacion corresponde en particular a una regulacion positiva autocrina de las celulas efectoras. Los anticuerpos que se unen al CD16 inducen una actividad citotoxica asf como la produccion de IFNy o de otras citoquinas/quimioquinas, lo que al final lleva a aumentar aun mas la actividad citotoxica.

Preferentemente, este anticuerpo presenta un porcentaje ADCC superior de al menos un 100% comparado con el mismo anticuerpo producido en una lmea CHO o con un anticuerpo homologo disponible en el comercio y un porcentaje de produccion de al menos una citoquina por un tipo de celulas efectoras del sistema inmunitario que expresa el receptor CD16 superior de al menos un 100% comparado con el mismo anticuerpo producido en una lmea CHO o a un anticuerpo homologo disponible en el comercio.

Dichas citoquinas, cuya liberacion esta inducida por los anticuerpos optimizados se seleccionan entre las interleucinas, las citoquinas, unas quimioquinas, unos interferones y unos factores de necrosis tumoral (TNF).

Asf, el anticuerpo utilizado en el ambito de la invencion es capaz de inducir la secrecion de al menos un tipo de citoquina seleccionada entre IL-1, IL-4, IL-12, IL-18, IL-21, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IFNa, IFNp, TNFa, TGFp, IP10 y TNF, IFNy, por las celulas efectoras del sistema inmunitario.

Preferentemente, el anticuerpo seleccionado presenta la capacidad de inducir la secrecion de IFNy o de otras citoquinas/quimioquinas por las celulas efectoras del sistema inmunitario que expresa el receptor CD16 o mas espedficamente de IL2 por la celula Jurkat CD16. El porcentaje de IFNy o de otras citoquinas y/o quimioquinas segregadas traduce la capacidad de interaccion de la region Fc del anticuerpo con el CD16 y traduce tambien su capacidad de union al antfgeno. La secrecion de IFNy o de otras citoquinas y/o quimioquinas por las celulas del sistema inmunitario puede incrementar y/o inducir la actividad citotoxica de las celulas efectoras (NK, monocitos, macrofago, polinucleares neutrofilos, etc.).

Las celulas efectoras pueden expresar en CD16 endogeno eventualmente modulable por unas citoquinas y/o quimioquinas o factores de crecimiento o ser transformadas. Se entiende por celula transformada, una celula modificada geneticamente con el fin de expresar un receptor, en particular el receptor CD16.

En un modo de realizacion particular, el anticuerpo utilizado en el ambito de la invencion es capaz de inducir la secrecion de al menos una citoquina por una celula leucocitaria, en particular de la familia de las celulas NK (Natural Killer) o por unas celulas de la lmea mielo-monocitaria (monocitos-macrofagos y celula dendntica).

Preferentemente, se utiliza para la seleccion de los anticuerpos una lmea Jurkat transfectada con un vector de expresion que codifica el receptor CD16 como celula efectora. Esta lmea es particularmente ventajosa ya que esta

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inmortalizada y se mantiene en cultivo indefinidamente. El porcentaje de IL2 segregada traduce la capacidad de interaccion de la region Fc del anticuerpo con el CD16 y traduce tambien su capacidad de union al antigeno.

Diferentes lmeas Jurkat transfectadas con un vector de expresion que codifica el receptor CD16 pueden ser utilizadas como celula efectora, expresando dichas lmeas cada una un CD16 particular.

Ademas, el anticuerpo optimizado puede ser preparado despues de ser purificado y/o modificado ex vivo, en lo que se refiere a la estructura glicanica de su region Fc. Para ello, se puede utilizar cualquier medio qmmico, cromatografico o enzimatico apropiado para modificar la estructura glicanica del anticuerpo. Por ejemplo, se pueden purificar unos anticuerpos obtenidos de diversos fuentes y anadir en una mezcla de reaccion una o varias glicosiltransferasa(s), en particular una galactosil-transferasa, incubar durante un tiempo determinado hasta la obtencion de los anticuerpos que presentan la estructura glicanica descrita anteriormente.

La seleccion se puede llevar a cabo sobre unos anticuerpos producidos por unas celulas habitualmente utilizadas para la produccion de anticuerpos terapeuticos, tales como las lmeas de mielomas de rata, en particular YB2/0 y sus derivados, las celulas linfoblastoides humanas, las celulas de insectos, las celulas de mielomas murinos, los hibridomas asf como las celulas eucariotas como por ejemplo las levaduras.

Es tambien posible producir los anticuerpos en una lmea de celulas de mairnferos modificada geneticamente, por ejemplo CHO modificada geneticamente, por introduccion de una o varias secuencias que expresan una o varias glicosil-transferasa(s), en particular seleccionadas entre una enzima implicada en la modificacion de las cadenas oligosacandicas en la posicion 1 de la fucosa unida en alfa a la posicion 6 del resto de N-acetilglucosamina en el extremo reductor, en particular una 1,6-fucosiltransferasa, y una galactosil-transferasa. La seleccion puede tambien ser aplicada a la evaluacion de anticuerpos producidos por unas plantas transgenicas o unos mamfferos transgenicos.

Para este fin, la produccion en CHO sirve de referencia (siendo CHO empleada para la produccion de anticuerpo medicamento) para comparar y seleccionar los sistemas de produccion que conducen a los anticuerpos utilizados en el ambito de la invencion. Una comparacion con unos anticuerpos policlonales puede tambien ser util durante unos ensayos de eficacia de los anticuerpos monoclonales. Asf, para una sub-poblacion de pacientes denominados “de bajo nivel de respuesta” en relacion con el polimorfismo del aminoacidos 158 del CD16 u otro polimorfismo asociado a este polimorfismo, la eficacia del tratamiento es mejor con los anticuerpos optimizados utilizados en el ambito de la invencion, y se acercan a la de los pacientes denominados “de alto nivel de respuesta”. Se muestra que la actividad funcional de los anticuerpos monoclonales optimizados se parece a la de los anticuerpos policlonales terapeuticos. Asf, en algunos ensayos terapeuticos, los anticuerpos policlonales pueden ser utilizados como controles durante ensayos de eficacia de anticuerpos monoclonales de diferentes ongenes. Esto permite seleccionar unos anticuerpos monoclonales destinados al tratamiento de sub-poblaciones de pacientes de bajo nivel de respuesta.

Asf, en algunos ensayos terapeuticos, los anticuerpos policlonales pueden ser utilizados como control durante ensayos de eficacia de anticuerpos monoclonales de diferentes ongenes. Esto permite seleccionar unos anticuerpos monoclonales destinados al tratamiento de sub-poblaciones de pacientes de bajo nivel de respuesta. Otra alternativa consiste en efectuar la comparacion con los anticuerpos disponibles en el comercio, en particular los anticuerpos en desarrollo, los anticuerpos que han obtenido una AMM o tambien unos anticuerpos cuyos ensayos clmicos se han detenido y se han revelado poco eficaces y/o produciendo unos efectos secundarios indeseables a las dosis administradas. En efecto, los anticuerpos modificados utilizados en el ambito de la invencion son al menos un 100% mas eficaces para activar ADCC soportada por unas celulas efectoras del sistema inmunitario, lo que implica unas dosis de administracion inferiores a las realizadas por los anticuerpos mencionados anteriormente y en el presente caso la posibilidad de tratar unos pacientes para los cuales los anticuerpos actualmente disponibles se revelaron ineficaces.

En una primera etapa, el anticuerpo puede ser seleccionado por su capacidad de interaccion con el receptor CD16 despues ensayado y seleccionado tal como se ha descrito anteriormente por sus propiedades para inducir la produccion de una citoquina, en particular IL-2, por las celulas Jurkat CD16 o de IFNy por las celulas efectoras que expresan CD16.

Tales anticuerpos que poseen esta doble propiedad de inducir la ADCC a traves del CD16 e inducir la produccion de IFNy o de otras citoquinas y/o quimioquinas por las celulas del sistema inmunitario puede incrementar y/o inducir la actividad citotoxica de las celulas efectoras (NK, monocitos, macrofagos, polinucleares neutrofilos en particular).

Asf, la presente descripcion describe la utilizacion del anticuerpo definido anteriormente para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de patologfas en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o unos pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).

Tales anticuerpos poseen una glicosilacion particular. Poseen un dominio Fc de tipo biantenado, con unas cadenas cortas, una baja sialilacion, unas manosas y GlcNAc del punto de union terminales no intercalares y una baja

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fucosilacion.

As^ en otro aspecto, la presente descripcion describe la utilizacion de un anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano, cuya estructura glicanica del dominio Fc del anticuerpo corresponde a un tipo biantenado, con unas cadenas cortas, una baja sialilacion, unas manosas y GlcNAc del punto de union terminales no intercalares, y una baja fucosilacion para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de patologfas en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 du CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o de los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).

En efecto, esta forma glicanica del dominio Fc del anticuerpo confiere a este las propiedades de inducir una fuerte ADCC y la produccion de citoquinas y/o quimioquinas tal como se ha descrito anteriormente.

En este anticuerpo, el porcentaje de GlcNac intercalar es diferente de cero.

En el ambito de la invencion, se utilizan unas composiciones que presentan un contenido superior al 60%, preferentemente superior al 80% para las formas G0 + G1 + G0F + GlF y un contenido en formas G0F + G1F inferior al 50%, preferentemente inferior al 30% para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o de los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).

Ventajosamente, los anticuerpos mencionados anteriormente son unas IgG1.

Otro objeto de la presente descripcion es un metodo de tratamiento terapeutico que comprende la administracion de un anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano cuya estructura glicanica del dominio Fc del anticuerpo corresponde a un tipo biantenado, con unas cadenas cortas, una baja sialilacion, unas manosas y GlcNAc del punto de union terminales no intercalares y una baja fucosilacion en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o en los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).

Ventajosamente, los pacientes son unos pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos).

Preferiblemente, los pacientes tratados estan en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles o sufren efectos secundarios indeseables.

Ventajosamente, la dosis del anticuerpo administrada al paciente es 2 veces, 5 veces, preferentemente 10 veces, 25 veces, 50 veces o preferentemente 100 veces menos elevada que una dosis indicada con un anticuerpo de misma especificidad, pero de glicosilacion diferente o producido en una lmea CHO.

De manera ventajosa, la dosis del anticuerpo administrado al paciente esta entre 2 y 5 veces, entre 5 y 10 veces, entre 5 y 25 veces, entre 5 y 50 veces o preferentemente entre 5 y 100 veces menos elevada que una dosis de anticuerpos de misma especificidad, pero de glicosilacion diferente o producido en una lmea CHO.

En otro aspecto de la invencion, el anticuerpo utilizado puede ser producido en lmeas celulares de tipo mieloma de rata, por ejemplo YB 2/0 (ATCC n° CRL 1662). En efecto, tales celulas permiten la obtencion de un anticuerpo glicosilado tal como se ha descrito anteriormente. Asf, en un aspecto complementario, la presente descripcion se refiere a la utilizacion de un anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano producido en una lmea de mieloma de rata, por ejemplo YB2/0 o uno de sus derivados, para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de pacientes que presentan la forma FCGR3A-158V/F o FCGR3A-158F homocigotos de CD16,en particular unos pacientes que se encuentran en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles o que sufren efectos secundarios indeseables que justifican la administracion del anticuerpo optimizado de la invencion. Preferentemente, la presente descripcion se refiere a la utilizacion de anticuerpos producidos en lmeas de mielomas de rata, en particular YB2/0 y sus derivados. Dichos anticuerpos que poseen la doble propiedad de inducir a traves del CD16 de forma FCGR3A-158V/F o FCGR3A-158F homocigotos, la ADCC y tambien la produccion de IFNy o de otras citoquinas y/o quimioquinas por las celulas del sistema inmunitario, pudiendo esto aumentar y/o inducir la actividad citotoxica de celulas efectoras (NK, monocitos, macrofago, polinucleares neutrofilos, etc.) descritas como expresando el receptor CD16 se utilizan para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de una poblacion particular de pacientes de bajo nivel de respuesta o que se encuentran en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles o que sufren efectos secundarios indeseables.

El anticuerpo producido en lmeas de mieloma de rata, en particular YB2/0 o de uno de sus derivados, presenta la estructura glicanica del fragmento Fc tal como se ha descrito anteriormente, el contenido en formas G0+G1+G0F+G1F y G0F+G1F tal como se ha descrito anteriormente, e induce a una citotoxicidad por ADCC y a la secrecion de citoquinas de la manera ya descrita anteriormente.

El anticuerpo utilizado en el ambito de la invencion esta dirigido contra un antfgeno de un organismo patogeno para

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el ser humano, en particular contra un antigeno de una celula infectada por un virus. Es ventajoso utilizar los anticuerpos definidos anteriormente para el tratamiento de las infecciones por unos agentes patogenos para estos pacientes.

Entre las patologfas que necesitan la administracion de tal anticuerpo en estos pacientes se pueden citar a tftulo de ejemplo las enfermedades seleccionadas entre las enfermedades infecciosas, en particular la tuberculosis, el smdrome de la fatiga cronica (CFS), las infecciones parasitarias como por ejemplo la esquistosomula o el paludismo, en particular en las mujeres embarazadas, y las infecciones virales para determinar las celulas deposito de virus (VIH, VCH, VBH en particular) y las celulas infectadas.

Entre las patologfas tratadas, se pueden citar las patologfas en las que el antigeno esta poco expresado. Se entiende por “antigeno debilmente expresado” un numero de sitios antigenicos inferior a 250000, preferentemente inferior a 100000 o 50000 y de manera particularmente ventajosa inferior a 10000 o 5000 por celula diana.

Ademas, a tftulo de ejemplo, los anticuerpos utilizados en el ambito de la invencion pueden ser unos anticuerpos de segunda generacion que corresponden a los anticuerpos disponibles actualmente listados en la Tabla 1.

Tabla 1

Nombre y marca comercial del anticuerpo Compama Diana Indicacion

XTL 002: XTL biopharmaceuticals ND anti-viral: HCV

XTL 001 XTL biopharmaceuticals: ND anti-viral: HBV

Otros anticuerpos pueden ser seleccionados entre los anti-virales: VIH, VBH, VCH y VCR.

La presente descripcion se refiere tambien a la utilizacion de un anticuerpo descrito anteriormente para la fabricacion de un medicamento destinado a inducir la expresion de IL-1, IL4, IL12, IL18, IL21, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL- 9, IL-10, IFNa, IFNp, TNFa, TGFp, IP10 y IFNy por las celulas efectoras naturales del sistema inmunitario, siendo dicho medicamento util en particular para el tratamiento del cancer y de las infecciones en los pacientes que se encuentran en fracaso terapeutico con los anticuerpos actualmente disponibles o que sufren efectos secundarios indeseables que justifican la administracion del anticuerpo optimizado de la invencion y en particular que presenta la forma V/F158 o F/F158 de CD16.

Otros aspectos y ventajas de la invencion se describiran en los ejemplos siguientes, que deben ser considerados como ilustrativos.

Leyendas de las figuras

Figura 1: Actividad ADCC del anticuerpo monoclonal anti-Rhesus D R297 (IgG1 T125 producido en YB2/0) y de los anticuerpos policlonales WinRho en presencia de celulas efectoras (PBMC: Peripheral Blood Mononuclear Cells) de diferentes donantes de sangre y de inmunoglobulinas polivalentes (Tegeline 500|jg/ml).

Figura 2: ADCC inducido por los anticuerpos anti-Rhesus D (anticuerpos WinRho policlonales, T125 producidos en YB2/0 y T125 producidos en CHO) sobre celulas NK de donantes de fenotipo CD16 FCGR3A-158F homocigotos.

Figura 3: ADCC inducido por los anticuerpos anti-Rhesus D (anticuerpos WinRho policlonales, T125 producidos en YB2/0 y T125 producidos en CHO) sobre celulas NK de donantes de fenotipo CD16 FCGR3A-158V homocigotos.

Figura 4: Activacion de Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos por los anticuerpos anti-Rhesus D T125 expresados en YB2/0 y CHO.

Figura 5: Activacion de Jurkat CD16 FCGR3A-158V homocigotos por los anticuerpos anti-Rhesus D T125 expresados en YB2/0 y CHO.

Figura 6: Activacion de Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos inducida por los anticuerpos anti-HLA-DR expresados en YB2/0 y CHO.

Figura 7: Activacion de Jurkat CD16 FCGR3A-158V homocigotos inducida por los anticuerpos anti-HLA-DR expresados en YB2/0 y CHO.

Ejemplos

Ejemplo 1: Actividad ADCC del anticuerpo monoclonal anti-Resus D R297 comparada con los anticuerpos

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policlonales anti-D sobre un grupo de 107 donantes de sangre.

Se comparan las capacidades respectivas del anticuerpo monoclonal anti-Resus D R297 y de los anticuerpos policlonales anti-D a lisar de las hematies en presencia de celulas efectoras de diferentes donantes individuales (figura 1).

Las celulas efectoras provienen de un grupo de 107 donantes de sangre. Las celulas mononucleadas (PBMC) se afslan a partir de una bolsa de sangre por centrifugacion sobre un gradiente de Ficoll (Pack Plus Pharmacia). Las plaquetas se eliminan por centrifugacion (190 a, 15 min.) y los globulos rojos residuales se lisan con NH4Cl. Las celulas se lavan y se resuspenden a 8x10' celulas/ml en IMDM. Los globulos rojos obtenidos a partir de concentrados terapeuticos (grupo O, Rhesus+) se tratan durante 10 minutos con papama (1 mg/ml) despues se lavan tres veces en tampon salino y se ajustan a la concentracion de 4x107/ml o 2x107/ml (ensayo NK) en IMDM.

El ensayo se efectua en placa de 96 pocillos (NUNC). Los sobrenadantes de cultivo o los anticuerpos purificados (100 |il a 200 ng/ml en IMDM + 0,5% de SVF), las celulas efectoras (25 |il), los globulos rojos (25 |il) y las inmunoglobulinas polivalentes (Tegelina, LFB) (50 |il) se incuban durante 16h a 37°C bajo atmosfera enriquecida en CO2 %.

Para la lisis no espedfica, las celulas efectoras se sustituyen por IMDM.

Despues de 16h a 37°C, las placas se centrifugan. Se extraen 60 |il de sobrenadantes y se mezclan con 60 |il de 2,7-diaminofluoreno (DAF, Sigma).

Despues de 5 minutos, se mide la DO a 620 nm.

El porcentaje de lisis se estima utilizando una gama de calibracion obtenida con diferentes diluciones de globulos rojos lisados con NH4Cl, que corresponde al 100, 75, 50, 25 y 0% de lisis respectivamente.

En base al estudio genotfpico realizado en donantes de mismo origen geografica, se estima en el presente estudio que la distribucion media de los 107 donantes en lo referente al polimorfismo de CD16 es de 27 FCGR3A-158F homocigotos, 20 FCGR3A-158V homocigotos y 60 FCGR3A-158V/F.

Los resultados muestran una gran variabilidad en la capacidad de las celulas efectoras de los diferentes sujetos a inducir una lisis de los hematfes Rhesus positivo, sean cuales sean los anticuerpos ensayados. Los anticuerpos expresados en la lmea celular YB2/0 presentan una actividad citolftica comparable a la de los anticuerpos policlonales, sea cual sea el donante estudiado, y por lo tanto sea cual sea el polimorfismo de CD16 de las celulas efectoras del donante (vease la figura 1).

Ejemplo 2: Eficacia ADCC de los anticuerpos producidos en CHO y YB2/0 en funcion del polimorfismo de CD16.

Se ha transfectado la misma secuencia que codifica una IgG1 espedfica del antfgeno Rhesus D en las lmeas celulares CHO y YB2/0. Los anticuerpos se incubaron con unos hematfes Rhesus positivo (celula dianas) y unas celulas NK que provienen de 6 donantes diferentes (3 FCGR3A-158V homocigotos y 3 FCGR3A-158F homocigotos) previamente genotipados por su fenotipo CD16 en la posicion 158. Las celulas NK se afslan utilizando la tecnica de separacion sobre bolas magneticas (MACS) de Myltenyi. Las celulas NK se lavan y se resuspenden a 2x107/ml y/o 6x107/ml en IMDM. Los globulos rojos se ajustan a la concentracion de 2x107/ml en IMDM. La Tegelina se sustituye por IMDM. Fuera de estas modificaciones, el ensayo es identico al ensayo ADCC con PBMC.

Se ha evaluado la actividad citotoxica de los anticuerpos sobre los hematfes (ADCC) (figura 2 y figura 3).

El anticuerpo producido en la lmea CHO induce una lisis mas baja que el anticuerpo producido en YB2/0, sea cual sea el fenotipo del donante. El anticuerpo R297 expresado en la lmea YB2/0 induce a partir de las mas bajas concentraciones una mas fuerte actividad citolftica. A la concentracion maxima de 25 ng/ml, los dos anticuerpos inducen el mismo porcentaje de ADCC.

A las concentraciones inferiores a 25 ng/ml, la diferencia de lisis entre el anticuerpo producido en CHO y el producido en YB2/0 es mas importante en los donantes FCGR3A-158F homocigotos que los donantes FCGR3A- 158V homocigotos. A la concentracion de 2,5 ng/ml, en presencia de las celulas NK FCGR3A-158V homocigotos, el anticuerpo producido por CHO induce el 54% de lisis mientras que el producido por YB2/0 induce el 89% de lisis, es decir un 56% de aumento. Por el contrario, a la misma concentracion, en presencia de celulas NK FCGR3A-158F homocigotos, el anticuerpo producido por CHO induce solo el 22% de lisis mientras que el producido por YB2/0 induce el 74% de lisis, es decir un 236% de aumento.

El anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 es por lo tanto mucho mejor producto para tratar los pacientes que dan una lisis debil con los anticuerpos producidos en CHO.

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As^ la diferencia de actividad ADCC entre los pacientes FCGR3A-158V homocigotos y FCGR3A-158F homocigotos es mas debil con el anticuerpo expresado en YB2/0 (89 y 74%) con respecto a la observada con el anticuerpo expresado en CHO (56 y 22%). Los anticuerpos optimizados presentan una respuesta que parece por lo tanto menos dependiente de las formas polimorficas de CD16.

Por otro lado, el anticuerpo monoclonal expresado en YB2/0 induce siempre una lisis superior o igual a los anticuerpos policlonales.

Ejemplo 3: comparacion de la activacion de celulas Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos y Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos inducida por los anticuerpos anti-Rhesus producidos en CHO y YB2/0 respectivamente: evaluacion de la produccion de IL2.

Este ensayo estima la capacidad de los anticuerpos para fijarse sobre el receptor CD16 (FC gamma RIII) expresado en las celulas Jurkat CD16 y para inducir la secrecion de IL2.

La misma secuencia que codifica una IgG1 (T125) espedfica del antigeno Rhesus D se ha transfectado en las lmeas celulares CHO y YB2/0. Los anticuerpos se incuban con unos hematies Rhesus positivo (celula diana) y unas celulas Jurkat CD16 (celulas efectoras). Se utilizan dos tipos de celulas Jurkat: 1- unas celulas transfectadas con el gen que codifica un RFc que lleva el aminoacido fenilalanina F en la posicion 158 (forma F), 2- unas celulas transfectadas con el gen que codifica un RFc que lleva el aminoacido valina V en la posicion 158 (forma V). La cantidad de citoquina (IL2) segregada por las celulas Jurkat CD16 se midio por ELISA.

En una placa de 96 pocillos en mezcla:

Anticuerpos: 50jl de una dilucion 50; 37,5; 25; 18,75; 12,5; 9,4 ;6,25; 3,125 ng/ml en IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's) Medium 5% SVF (suero fetal de ternera)

- PMA 50 |jl de una dilucion a 40 ng/ml en IMDM 5% SVF

- Hematies tratados con papama. 50jl a 8x106/ml en IMDM 5% SVF

- Jurkat CD16. 50jl a 2x106/ml en IMDM 5% SVF Incubacion 1 noche a 37°C

Despues centrifugacion de las placas, extraccion de 100 |il de sobrenadantes y determinacion de IL2 con el kit comercial (Quantikine de R/D). Lectura a 450 nm.

El anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 es capaz de inducir una secrecion mas alta de IL2, contrariamente al anticuerpo expresado en CHO, sea cual sea el fenotipo CD16 (figura 4 y figura 5).

El anticuerpo producido en CHO no induce secrecion de IL2 a partir de Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos y solo una muy debil produccion de IL2 con la forma FCGR3A-158V homocigotos.

Al ser una de las particularidades del sistema Rhesus la baja expresion del antfgeno en la superficie membranaria, parece que en estas condiciones, el anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 demuestra ser un producto mucho mejor para activar las celulas efectoras portadoras de la forma FCGR3A-158F homocigotos de CD16 que no parecen activables con el anticuerpo producido en CHO. En lo que se refiere a la forma FCGR3A-158V homocigotos, unas cantidades muy bajas de anticuerpos producidos por YB2/0 (<1,56) permiten inducir una activacion comparable con la obtenida con concentraciones mas altas de anticuerpos producidos en CHO (12,5 ng/ml).

Con la forma FCGR3A-158F homocigotos y a la concentracion de 12,5 ng/ml, el anticuerpo producido en CHO induce a una secrecion de IL2 (18 pg/ml) inferior al 2% de la inducida por el anticuerpo producido en YB2/0 (1435 pg/ml). Esto corresponde a una ganancia de mas del 7000% cuando se utiliza el anticuerpo producido en YB2/0 con respecto al anticuerpo producido en CHO.

Con la forma FCGR3A-158V homocigotos y a la concentracion de 12,5 ng/ml, el anticuerpo producido en CHO induce a una secrecion de IL2 (869 pg/ml) inferior al 8% de la inducida por el anticuerpo producido en YB2/0 (12312 pg/ml). Esto corresponde a una ganancia de mas del 1300% cuando se utiliza el anticuerpo producido en YB2/0 con respecto al anticuerpo producido en CHO.

Ejemplo 4: comparacion de la activacion de las celulas Jurkat CD16 FCGR3A-158F homocigotos y Jurkat CD16 FCGR3A-158V homocigotos inducida por dos anticuerpos anti-HLA-DR expresados en CHO y YB2/0 respectivamente: evaluacion de la secrecion de IL2.

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La misma secuencia que codifica una IgG1 espedfica del antigeno HLA-DR se ha transfectado en las lmeas celulares CHO e YB2/0. Los anticuerpos se incuban con unas celulas Raji (celula diana HLA-DR positivas) y unas celulas Jurkat CD16 (celulas efectoras). Se han utilizado dos tipos de celulas Jurkat: 1- unas celulas transfectadas con el gen que codifica un R Fc que lleva el aminoacido fenilalanina F en la posicion 158 (forma F), 2- celulas transfectadas con el gen que codifica un RFc que tiene el aminoacido valina V en la posicion 158 (forma V). La cantidad de citoquinas (IL2) segregada por las celulas Jurkat CD16 se ha medido por ELlSA.

En una placa de 96 pocillos en mezcla:

Anticuerpos: 50jl de una dilucion de 50; 37,5; 25; 18,75; 12,5; 9,4 ;6,25; 3,125 ng/ml en IMDM 5% SVF

- PMA 50|jl de una dilucion a 40ng/ml en IMDM 5% SVF

- celulas Raji: 50jl a 6x105/ml en IMDM 5% SVF

- Jurkat CD16. 50jl a 20x106/ml en IMDM 5% SVF Incubacion durante 1 noche a37°C

Despues centrifugacion de las placas, extraccion de 100 |il de sobrenadante y determinacion de IL2 con el kit comercial (Quantikine de R/D). Lectura a 450 nm.

El anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 es capaz de inducir una secrecion mas alta de IL2, contrariamente al anticuerpo expresado en CHO, sea cual sea el fenotipo CD16 (figura 6 y figura 7).

Contrariamente al sistema Rhesus sobre los hematies, la expresion del antfgeno HLA-DR en la superficie membranaria de la celula Rai no es baja (200000 a 400000 copias). En estas condiciones, parece que el anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 demuestra ser un producto mucho mejor para activar las celulas efectoras portadoras de la forma F158 asf como V158 de CD16, y esto mas particularmente a las bajas concentraciones de anticuerpos. Asf, a la concentracion de 1,56 ng/ml, el anticuerpo producido en CHO induce a una secrecion de IL2 (2410 pg/ml) inferior al 15% de la inducida por el anticuerpo producido en YB2/0 (16952 pg/ml). Esto corresponde a una ganancia de mas del 600% cuando se utiliza el anticuerpo producido en YB2/0 con respecto al anticuerpo producido en CHO.

A la concentracion de 12,5 ng/ml, el anticuerpo producido en CHO induce a una secrecion de IL2 (14597 pg/ml) inferior al 45% de la inducida por el anticuerpo producido en YB2/0 (34823 pg/ml). Esto corresponde a una ganancia de mas del 100% cuando se utiliza el anticuerpo producido en YB2/0 con respecto al anticuerpo producido en CHO.

El anticuerpo expresado en la lmea YB2/0 es por lo tanto un producto mucho mejor para inducir la secrecion de citoquinas de celulas efectoras portadoras de la forma polimorfica V158 (FCGR3A-158V homocigotos) y F158 (FcGr3A-158F homocigotos).

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REIVINDICACIONES

1. Utilizacion de una composicion de anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano dirigido contra un antigeno de un organismo patogeno para el ser humano, presentando dicha composicion a nivel de la estructura glicanica del dominio Fc del anticuerpo un contenido superior al 60% para las formas G0 + G1 + G0F + G1F y un contenido para las formas G0F + G1F inferior al 50%, para la preparacion de un medicamento destinado al tratamiento de las infecciones por dicho organismo patogeno en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o de los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).
2. Utilizacion segun la reivindicacion 1, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo dirigido contra una celula infectada por un virus y esta destinado al tratamiento de las infecciones por dicho virus.
3. Utilizacion segun la reivindicacion 2, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo anti-VIH y esta destinado al tratamiento de las infecciones por VIH.
4. Utilizacion segun la reivindicacion 2, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo anti-RSV y esta destinado al tratamiento de las infecciones por RSV.
5. Utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por que dicha composicion presenta un contenido superior al 80% para las formas G0 + G1 + G0F + G1F.
6. Utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por que las formas G0F + G1F son inferiores al 30%.
7. Utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada por que los anticuerpos son unas

igG1.
8. Utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada por que los pacientes son unos pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos).
9. Composicion de anticuerpo monoclonal quimerico, humanizado o humano dirigido contra un antfgeno de un organismo patogeno para el ser humano, presentando dicha composicion a nivel de la estructura glicanica del dominio Fc del anticuerpo un contenido superior al 60% para las formas G0 + G1 + G0F + G1F y un contenido para las formas G0F + G1F inferior al 50%, para su utilizacion en el tratamiento de las infecciones por dicho organismo patogeno en pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos) o de los pacientes heterocigotos valina/fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158V/F).
10. Composicion para su utilizacion segun la reivindicacion 9, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo dirigido contra una celula infectada por un virus y esta destinado al tratamiento de las infecciones por dicho virus.
11. Composicion para su utilizacion segun la reivindicacion 10, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo anti-VIH y esta destinado al tratamiento de las infecciones por VIH.
12. Composicion para su utilizacion segun la reivindicacion 10, caracterizada por que el anticuerpo es un anticuerpo anti-RSV y esta destinado al tratamiento de las infecciones por RSV.
13. Composicion para su utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, caracterizada por que dicha composicion presenta un contenido superior al 80% para las formas G0 + G1 + G0F + G1F.
14. Composicion para su utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, caracterizada por que las formas G0F + G1F son inferiores al 30%.
15. Composicion para su utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, caracterizada por que los anticuerpos son unas IgG1.
16. Composicion para su utilizacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 15, caracterizada por que los pacientes son unos pacientes homocigotos para la fenilalanina en la posicion 158 de CD16 (FCGR3A-158F homocigotos).