ES2626091T3

ES2626091T3 - Preparados de oleosomas estabilizados y métodos de fabricación de los mismos

Info

Publication number: ES2626091T3
Application number: ES09729878.0T
Authority: ES
Inventors: Jacob Guth; Joseph Boothe; Mitch Beazer; Kent Shafer
Original assignee: Botaneco Inc
Current assignee: Botaneco Inc
Priority date: 2008-04-11
Filing date: 2009-04-10
Publication date: 2017-07-21
Anticipated expiration: 2029-04-10
Also published as: CN102026662B; JP2011522779A; US20110081435A1; EP2274014A4; AU2009234385A1; US8597694B2; CA2720756C; MX2010011104A; KR20160048231A; CA2720756A1; EA201071167A1; AU2009234385B2; IL208482A0; CN102026662A; KR20110010698A; WO2009126302A2; BRPI0910879A2; EP2274014A2; KR101847313B1; EP2274014B1

Abstract

Un método de preparación de un preparado de oleosomas estabilizado que comprende: (a) proporcionar un preparado de oleosomas; y (b) mezclar el preparado de oleosomas en presencia de (i) un alcohol multihídrico y (ii) un ácido capaz de reducir el pH de dicho preparado de oleosomas hasta un pH inferior a 6,0.

Description

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DESCRIPCION

Preparados de oleosomas estabilizados y metodos de fabricacion de los mismos Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a nuevas composiciones que comprenden oleosomas y a una metodologfa para fabricarlas. Dichas composiciones son utiles en relacion con los productos de aplicacion topica cutanea en el cuerpo humano.

Antecedentes de la invencion

Los aceites de semillas vegetales, tales como el aceite de palma, el aceite de girasol y el aceite de colza, son un producto agncola principal en todo el mundo, con una gran variedad de usos industriales y nutricionales. Mas de 6,8 mil millones de kilos de aceite de semilla vegetal se producen anualmente solo en Estados Unidos. Wallis J., et al., "Seed oils and their metabolic engineering", en: SEED TECHNOLOGY AND ITS BIOLOGICAL BASIS, M. Black y J. D. Bewley (eds.), Sheffield Biological Sciences (2000). El noventa y ocho por ciento de la produccion de aceite de semilla vegetal en Estados Unidos se usa con fines nutricionales, tal como en la fabricacion de aceite de cocina y margarina. El resto de aceites vegetales se usa como materia prima en la fabricacion de productos industriales tales como jabones, plastificantes, polfmeros, tensioactivos y lubricantes.

Los aceites vegetales son triacilgliceroles, es decir, una fraccion glicerol en la que cada uno de los grupos hidroxilo esta esterificado en un acido graso. La estructura principal de glicerol del triacilglicerol es invariable en estructura, pero los acidos grasos unidos al glicerol vanan considerablemente dependiendo del aceite vegetal.

La estructura del acido graso determina las propiedades ffsicas y qmmicas del aceite vegetal. Por ejemplo, el numero de dobles enlaces de un acido graso, una variable que, con frecuencia, se denomina "grado de insaturacion", afecta al punto de fusion de los aceites, mientras que la longitud de la cadena de un acido graso afecta a su viscosidad, lubricidad y solubilidad.

Las moleculas de triacilglicerol son insolubles en ambientes acuosos y tienden a unirse en gotitas de aceite. Para almacenar estos triacilgliceroles insolubles en agua, las plantas han desarrollado compartimentos unicos de almacenamiento de aceite de semilla de aproximadamente 1 a 10 pm de diametro dentro de las celulas de las semillas vegetales, conocidas como "cuerpos oleosos", "oleosomas", "cuerpos lipfdicos" y “esferosomas” (en conjunto, "oleosomas"). Vease Huang, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200 (1992). Ademas del aceite vegetal, estos oleosomas comprenden dos constituyentes qmmicos: fosfolfpidos y una clase de protemas, conocida en la tecnica como protemas del cuerpo oleoso. Desde un punto de vista estructural, los oleosomas son un nucleo de triacilglicerol encapsulado por una membrana de media unidad de fosfolfpidos, en la que estan incrustadas las protemas del cuerpo oleoso. Se cree que las protemas de cuerpo oleoso desempenan un papel en la prevencion de la coalescencia de los oleosomas en gotitas de aceite mucho mas grandes.

Para la extraccion de los aceites vegetales de extracto, se trituran o se prensan las semillas y, despues, se refinan usando procesos que normalmente implican el uso de disolventes organicos para separar el aceite vegetal de otros constituyentes de la semilla tales como las protemas y los hidratos de carbono de las semillas. Tambien se han desarrollado metodologfas de extraccion de aceite vegetal a base de disolventes no organicos, como se describe, por ejemplo, por Embong y Jelen, Can. Inst. Food Sci. Techn. J. 10: 239-43 (1977).

Puesto que el objetivo primario de estos procesos de extraccion es obtener aceite vegetal puro, sin embargo, normalmente alteran el oleosoma estructural. Por lo tanto, en general, las composiciones convencionales preparadas a partir de aceites vegetales no comprenden oleosomas intactos.

Por ejemplo, las patentes de EE.UU. n.° 5.683.740 y n.° 5.613.583, concedidas a Voultoury et al., desvelan emulsiones preparadas a partir de semillas machacadas de plantas oleaginosas que comprenden vesmulas lipfdicas. En el transcurso del proceso de aplastamiento descrito en dichas patentes, los oleosomas pierden esencialmente su integridad estructural. Por consiguiente, se desvela que, en el proceso de aplastamiento se libera del 70 % al 90 % del aceite de las semillas en forma de aceite libre.

Por otra parte, los oleosomas que se afslan de semillas vegetales en una forma estructuralmente intacta tienen una utilidad practica reconocida. En particular, los oleosomas permiten la formulacion de mezclas complejas de compuestos acuosos y aceite en ausencia de emulsionantes exogenos, a temperatura ambiente, vease la solicitud PCT 2005/097059, concedida a Guth et al., y los oleosomas pueden cargarse con principios activos, segun lo descrito por Murray et al., solicitud PCT 2005/030169.

Se desvela una metodologfa no destructiva de preparacion de oleosomas por parte de Deckers et al., en las patentes de EE.UU. n.° 6.146.645, n.° 6.183.762, n.° 6.210.742, n.° 6.372.234, n.° 6.582.710, n.° 6.596.287, n.° 6.599.513 y n.° 6.761.914 (denominadas en conjunto "patentes de Deckers"). De acuerdo con las patentes de

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Deckers, se puede obtener un preparado de oleosomas purificado y usarlo para preparar emulsiones en presencia de una multiplicidad de otras sustancias, con el fin de conseguir un equilibrio deseable de emulsion, viscosidad y aspecto, y volver estas emulsiones adecuadas para productos cosmeticos, alimentos, productos farmaceuticos y aplicaciones industriales, entre otros.

Las solicitudes PCT 2007/122421 y 2007/122422, concedidas a Gray et al. y Galley et al., respectivamente, se refieren a una composicion que contiene oleosomas para su formulacion y la administracion a un mairnfero. La composicion de oleosoma desvelada, denominada "cuajada de aceite", se puede preparar a partir de plantas y granos oleaginosos, y comprende ademas material vegetal extrmseco, tal como protemas de semillas vegetales incluyendo albuminas, globulinas, prolaminas y glutelinas, e hidratos de carbono. Estos ultimos, de acuerdo con la solicitud 2007/122421, confieren ciertas propiedades deseables, tales como una mayor estabilidad y compatibilidad de la emulsion con ciertos productos qmmicos, en particular, detergentes.

Para las aplicaciones practicas, un preparado de oleosomas preferentemente no experimenta cambios ffsicos ni qmmicos no deseados cuando pueden darse diversas condiciones, como durante el almacenamiento prolongado, cuando el preparado de oleosomas sufre fluctuaciones de temperatura, como ocurre comunmente durante el transporte o cuando el preparado de oleosomas se usa como un ingrediente en los procesos de formulacion que pueden implicar el uso de fuerzas de cizalla, etapas de calentamiento y enfriamiento o la adicion de agentes qmmicos reactivos. En este ultimo aspecto, generan una preocupacion especial los agentes biologicos tales como bacterias, hongos, micoplasmas y similares, ya que su exposicion a los preparados de cuerpos oleosos puede provocar la degradacion de los oleosomas.

Para proteger los oleosomas de la exposicion a agentes biologicos, se pueden anadir conservantes a los preparados de oleosomas. Sin embargo, las preocupaciones de seguridad y reactividad/interaccion qmmica con el recubrimiento proteico de oleosomas descalifican muchos conservantes bien conocidos, tales como las sales de amonio cuaternario, los compuestos liberadores de formaldehffdo, los compuestos clorados y los ftalatos, de uso en aplicaciones alimentarias o en cosmetica, cuidado de la piel, aplicaciones farmaceuticas topicas y similares. Por consiguiente, los conservantes mas ampliamente aceptados y deseados para estas aplicaciones son las sales de acido, tales como benzoatos, salicilatos, sorbatos, propionatos, y los acidos tales como el acido deshidroacetico y acido ferulico.

Para actuar como conservantes, los agentes conservantes de acido o sal de acido deben estar esencialmente en su forma acida, es decir, a un pH inferior a 6,0 y preferentemente entre 4,0 y 5,0. Sin embargo, los presentes inventores han observado que, dentro de este intervalo de pH acido, un preparado de oleosomas carece de estabilidad ffsica, en el sentido de que la estructura de los oleosomas se debilita y el aceite "se escapa" de los oleosomas; Por lo tanto, resulta problematico mezclar en otros ingredientes, con lo que se prepara una formulacion acabada compuesta de oleosomas intactos.

Este problema es especialmente agudo cuando se introducen oleosomas en productos de cuidado de la piel, que, con frecuencia, se formulan para su compatibilidad con la piel humana, para los que el pH vana entre 4,1 y 5,8. Vease Segger, et al., IFSCC 10: 2 (2007). Algunos productos topicos, tales como los exfoliantes de la piel que contienen acidos como el acido lactico, los acidos glicolicos y el acido salidlico tienen un pH aun mas bajo, en un intervalo de 3,5 a 4,5, que es muy inferior al valor al que los oleosomas generalmente son ffsicamente estables.

Ademas, en presencia de alcoholes monovalentes, los presentes inventores han observado que la estructura del oleosoma se debilita, dando como resultado una fuga de aceite del oleosoma. Por consiguiente, los preparados de oleosomas ffpicos no son ffsicamente estables en productos tales como desinfectantes de manos, que requieren altos niveles de un alcohol monohffdrico.

A un preparado de oleosomas, de acuerdo con las patentes de Deckers, se pueden anadir Glydant Plus®, Phenonip®, metilparabeno, propilparabeno, Germall 115®, Germaben II®, acido fftico y mezclas de los mismos para conseguir la estabilidad en presencia de bacterias, hongos y otros agentes biologicos. Sin embargo, las patentes de Deckers no especifican el impacto de estos agentes sobre la integridad ffsica del preparado constituyente de oleosomas.

En resumen, existen deficiencias en los metodos convencionales para la fabricacion de preparados de oleosomas. En particular, existe la necesidad de una metodologfa mejorada para estabilizar los preparados de oleosomas contra cambios ffsicos o qmmicos no deseados que, de otro modo, ocurren en una variedad de condiciones. De acuerdo con la practica convencional, no esta claro si y como se puede obtener un preparado de oleosomas que se conserva desde un punto de vista microbiano y que sea estable con respecto a los aspectos ffsicos de un preparado en un intervalo de pH acido y en presencia de altos niveles de alcohol monohffdrico, como se ha descrito anteriormente.

El documento US 6.051.250 desvela un proceso de estabilizacion de vesfculas de ffpidos anfffilos y composiciones para la aplicacion topica que contienen dichas vesfculas estabilizadas.

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El documento US 2002/0183400 desvela composiciones para la aplicacion topica que comprenden al menos un hidroxiestilbeno y al menos un poliol para disolver el hidroxiestilbeno.

El documento WO2005/097059 ensena un metodo de preparacion de emulsiones cosmeticas.

Sumario de la invencion

La presente invencion ofrece un sistema que permite la conservacion de oleosomas a un pH inferior a 6,0 sin comprometer significativamente su estabilidad ffsica.

De acuerdo con un aspecto de la invencion, por lo tanto, se proporciona un metodo de preparacion de un preparado estabilizado de oleosomas. La metodologfa de la invencion comprende (a) proporcionar un preparado de oleosomas y, luego, (b) mezclar el preparado de oleosomas en presencia de (i) un alcohol multitffdrico e (ii) un compuesto acido capaz de reducir el pH de dicho preparado de oleosomas a un pH inferior a 6,0.

Un preparado estabilizado de oleosomas de la invencion puede comprender el 20 % en volumen del alcohol multitffdrico. En una realizacion preferida, el alcohol multitffdrico es un compuesto no halogenado. En otra realizacion preferida, el alcohol multitffdrico es un diol no aromatico, un triol no aromatico o un poliol no aromatico.

En el presente documento, se ensenan nuevas composiciones que comprenden oleosomas, un alcohol multitffdrico y una concentracion [H+] de 10-6 moles por litro.

Un preparado de oleosomas desvelado en el presente documento puede ser estable desde un punto de vista microbiano, asf como en sus aspectos ffsicos, cuando se almacena durante penodos prolongados a temperatura ambiente. Por lo tanto, al almacenar el preparado estabilizado de oleosomas a temperatura ambiente durante 2 anos, preferentemente el 95 % o mas en volumen del contenido total de aceite del preparado estara presente dentro de los oleosomas.

Los preparados de oleosomas obtenidos de acuerdo con la presente invencion son utiles en la fabricacion de una multiplicidad de formulaciones acabadas, incluyendo, productos cosmeticos, productos alimentarios, productos farmaceuticos y productos industriales, entre otros.

Otras caractensticas y ventajas de la presente invencion resultaran evidentes a partir de la siguiente descripcion detallada. Se ha de entender, sin embargo, que la descripcion detallada y los ejemplos espedficos, aunque indican realizaciones preferidas de la invencion, se dan meramente a modo ilustrativo, puesto que diversos cambios y modificaciones dentro del esprntu y alcance de la invencion se haran evidentes para los expertos en la materia a partir de la presente descripcion detallada.

Descripcion detallada de la invencion

Como se ha mencionado anteriormente, la presente invencion se refiere a metodos mejorados para la conservacion de preparados de oleosomas. Los presentes inventores han encontrado que, sorprendentemente, se puede obtener un preparado de oleosomas estable microbiologicamente que sea ademas estable con respecto a sus aspectos ffsicos dentro del intervalo de pH acido. Dicho preparado mejorado de oleosomas acomoda el almacenamiento en condiciones acidas, presenta una estabilidad mejorada cuando se expone a cambios repentinos de temperatura, y puede formularse en formulaciones acabadas que contienen oleosomas (i) que tienen un pH acido, por ejemplo, productos para la aplicacion topica en la piel humana que, con frecuencia, son acidos en su forma final; o (ii) que contienen altos niveles de alcohol monotffdrico. Ademas, estos preparados de oleosomas mejorados permiten un preparado mas eficaz de una formulacion final que incorpore el preparado de oleosomas como ingrediente. En particular, la mezcla de la fase acuosa requiere esencialmente menos energfa y tiempo en los procesos de formulacion en los que se mezcla una fase acuosa con el preparado de oleosomas que comprende una fase oleosa anadida exogenamente.

Por consiguiente, la presente invencion proporciona un metodo de preparacion de un preparado estabilizado de oleosomas que comprende:

(a) proporcionar un preparado de oleosomas; y

(b) mezclar el preparado de oleosomas en presencia de (i) un alcohol multitffdrico e (ii) un compuesto acido capaz de reducir el pH del preparado de oleosomas a un pH inferior a 6,0.

El preparado de oleosomas obtenido de acuerdo con la invencion es estable desde el punto de vista microbiano y desde el punto de vista ffsico. Preferentemente, el aspecto ffsico del preparado de oleosomas no experimenta ningun cambio significativo cuando se almacena a temperatura ambiente durante 2 anos o a 45 °C durante 2 meses. Tambien se prefiere que, durante el almacenamiento en las condiciones anteriores, el 95 % o mas en volumen del contenido total de aceite de un preparado de oleosomas de la invencion permanezca dentro de los oleosomas; mas

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preferentemente el 99% o mas y, lo mas preferentemente, el 100% en volumen este presente dentro de los oleosomas.

Preparado de oleosomas

El termino "oleosoma", en el presente documento, designa cualquier aceite subcelular diferenciado y organulo de almacenamiento de cera que se puede obtener a partir de una celula viva. Los oleosomas pueden obtenerse a partir de cualquier celula que contenga dichos organulos, incluyendo celulas vegetales, celulas fungicas, celulas de levadura (Leber, R. et al., 1994, “Yeast” 10: 1421-28), celulas bacterianas (Pieper-Furst et al., 1994, J. Bacteriol. 176: 4328 - 37) y celulas de algas (Roessler, P. G., 1988, J. Phycol. (Londres) 24: 394-400).

En realizaciones preferidas de la invencion, los oleosomas se obtienen a partir de una celula vegetal, en las que el termino "celula" incluye celulas de polen, esporas, semillas y organos vegetales vegetativos, respectivamente, en las que estan presentes oleosomas. En general, vease Huang, Ann. Rev. Plant Physiol. 43: 177-200 (1992). Mas preferentemente, los oleosomas empleados en la invencion se obtienen a partir de una semilla vegetal.

Entre las semillas vegetales utiles en el presente documento, se prefieren aquellas semillas que se pueden obtener de especies vegetales seleccionadas del grupo de especies vegetales que consiste en almendra (Prunus dulcis); ams (Pimpinella anisum); aguacate (Persea sp.); hayuco (Fagus sylvatica); borraja (Boragio officinalis); nuez de Brasil (Bertholletia excelsa); nuez de la India (Aleuritis tiglium); carapa (Carapa guineensis); anacardo (Ancardium occidentale); ricino (Ricinus communis); coco (Cocus nucifera); cilantro (Coriandrum sativum); semilla de algodon (Gossypium spp.); crambe (Crambe abyssinica); Crepis alpina; croton (Croton tiglium); pepino (Cucumis sativus); Cuphea sp.; eneldo (Anethum gravealis); Euphorbia lagascae; onagra (Oenothera biennis); Dimorphoteca pluvialis; lino falso (Camolina sativa); hinojo (Foeniculum vulgaris); cacahuete (Arachis hypogaea); avellana (coryllus avellana); canamo (Cannabis sativa); lunaria (Lunnaria annua); jojoba (Simmondsia chinensis); Ceiba (Ceiba pentandra); kukui (Aleuritis moluccana); Lesquerella sp., linaza/lino (Linum usitatissimum); altramuz (Lupinus spp.); nuez de macadamia (Macademia sp.); mafz (Zea mays); espuma de la pradera (Limnanthes alba); mostaza (Brassica sp. y Sinapis alba); aceituna (Olea spp.); palma de aceite (Elaeis guineeis); oiticia (Licania rigida); pawpaw (Assimina triloba); pacana (Juglandaceae sp.); perilla (Perilla frutescens); pinon de tempate (Gatropha curcas); almendro de java (Canarium ovatum); pinon (pine sp.); pistacho (Pistachia vera); pongam (Bongamin glabra); semilla de amapola (Papaver soniferum); calabaza (Cucurbita pepo); semilla de colza (Brassica sp.); cartamo (Carthamus tinctorius); semilla de sesamo (Sesamum indicum); soja (Glycine max); calabacm (Cucurbita maxima); sala (Shorea rubusha); Stokes aster (Stokesia laevis); girasol (Helianthus annuus); tukuma (Astocarya sp.); nuez peluda (Aleuritis cordata); vernonia (Vernonia galamensis); y sus mezclas. Lo mas preferentemente, las semillas vegetales son del grupo de especies vegetales que comprenden: semilla de colza (Brassica sp.), soja (Glycine max), girasol (Helianthus annuus), palma de aceite (Elaeis guineeis), semilla de algodon (Gossypium sp.), cacahuete (Arachis hypogaea), coco (Cocus nucifera), ricino (Ricinus communis), cartamo (Carthamus tinctorius), mostaza (Brassica sp. y Sinapis alba), cilantro (Coriandrum sativum), calabacm (Cucurbita maxima), linaza/lino (Linum usitatissimum), nuez de Brasil (Bertholletia excelsa), jojoba (Simmondsia chinensis), ir^z (Zea mays), crambe (Crambe abyssinica) y eruca (Eruca sativa). Los mas preferidos en el presente contexto son los cuerpos oleosos preparados a partir de cartamo (Carthamus tinctorius).

Para preparar oleosomas a partir plantas, se cultivan dichas plantas y se deja que establezcan las semillas usando practicas de cultivo agncola bien conocidas por el experto en la materia. Tras cosechar la semilla y, si se desea, retirar el material tal como las piedras o las cascarillas de las semillas (descascarillado), por ejemplo, mediante el tamizado o lavado y, opcionalmente, el secado de la semilla, las semillas se procesan posteriormente mediante molienda mecanica. Preferentemente, se anade una fase lfquida antes de la molienda de las semillas. Esto se conoce como "molienda en humedo”. Se ha informado de la molienda en humedo en los procesos de extraccion de aceite para las semillas de una variedad de especies vegetales incluyendo mostaza (Aguilar et al. 1991, J. Texture Studies 22: 59-84), la soja (patente de EE.UU. n.° 3.971.856, Cater et al., 1974, J. Am. Oil Chem. Soc. 51: 137-41), cacahuete (patentes de EE.UU. n.° 4.025.658 y n.° 4.362.759), semilla de algodon (Lawhon et al., 1977, J. Am. Oil Chem. Soc. 54: 75-80), y coco (Kumar et al., 1995, INFORM 6: 1217-40).

Preferentemente, el lfquido es agua, aunque tambien pueden usarse disolventes organicos tales como etanol. Tambien puede ser ventajoso embeber las semillas durante un penodo de tiempo de aproximadamente quince minutos a aproximadamente dos dfas en una fase lfquida antes de la molienda. La inmersion puede ablandar las paredes celulares y facilitar el proceso de molienda. La inmersion durante penodos de tiempo mas largos puede imitar el proceso de germinacion y dar lugar a ciertas alteraciones ventajosas en la composicion de los constituyentes de la semilla.

Las semillas se muelen preferentemente usando un molino coloidal. Ademas de los molinos coloidales, tambien se pueden emplear en la invencion descrita en el presente documento otros equipos de trituracion y molienda capaces de procesar cantidades industriales de semillas, incluyendo: molinos de disco, molinos coloidales, molinos de puas, molinos orbitales, molinos IKA y homogenizadores a escala industrial. La seleccion del molino puede depender de los requisitos de rendimiento de las semillas, asf como del origen de la semilla que se emplea.

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De acuerdo con la invencion, es importante que los cuerpos oleosos de semillas permanezcan intactos durante el proceso de molienda. Por lo tanto, cualesquiera de las condiciones operativas comunmente empleadas en el procesamiento de semillas oleaginosas, que tienden a alterar los cuerpos oleosos, no son adecuadas para un proceso de la invencion.

Las temperaturas de molienda estan preferentemente entre 10 °C y 90 °C. Mas preferentemente, estan entre 15 °C y 50 °C y lo mas preferentemente entre 18 °C y 30 °C, mientras que el pH se mantiene preferentemente entre 2,0 y 11,0, mas preferentemente entre 6,0 y 9,0, y lo mas preferentemente entre 7,0 y 9,0.

Los contaminantes solidos, tales como las cascaras de semilla, material fibroso, hidratos de carbono y protemas no disueltos y otros contaminantes insolubles se eliminan de la fraccion de semillas molidas. La separacion de los contaminantes solidos puede realizarse usando una centrifugadora de decantacion. Dependiendo de los requisitos de rendimiento de las semillas, se puede variar la capacidad de la centrifugadora de decantacion usando otros modelos de centrifugadoras de decantacion, tales como decantadores trifasicos. Las condiciones operativas vanan dependiendo de la centrifugadora que se emplee en particular y deben ajustarse de manera que los materiales contaminantes insolubles se sedimenten y permanezcan sedimentados tras la decantacion. En estas condiciones, puede observarse una separacion parcial de la fase del cuerpo oleoso y de la fase lfquida.

Tras la eliminacion de los contaminantes insolubles, la fraccion oleosomica se separa de la fase acuosa. En una realizacion de la invencion, se emplea una centrifugadora de cuenco tubular. En una realizacion preferida, se emplea una centrifugadora de discos. Como alternativa, se pueden usar hidrociclones o una sedimentacion de las fases bajo gravitacion natural o cualquier otra tecnica de separacion basada en la gravedad. Tambien es posible separar la fraccion oleosomica de la fraccion acuosa a traves de un metodo de exclusion de tamano, tal como filtracion, por ejemplo, ultrafiltracion de membrana y microfiltracion de flujo cruzado.

Cuando se usa una centrifugadora con este fin, un parametro importante es el tamano del filtro de anillo usada para operar la centrifugadora. Los filtros de anillo son anillos extrafbles con una abertura circular central de tamano variable, y regulan la separacion de la fase acuosa de la fase de oleosoma, dirigiendo de este modo la pureza de la fraccion oleosomica que se obtiene. El tamano del filtro de anillo seleccionado depende del tipo de centrifugadora y del tipo de semilla oleaginosa usada, asf como de la consistencia final deseada del preparado de oleosomas.

De acuerdo con una realizacion de la invencion, el oleosoma de cartamo se obtiene usando una centrifugadora de disco SA-7 (Westfalia) junto con un tamano del filtro de anillo de 69-75 mm. La eficacia de la separacion se ve afectada ademas por el caudal, que, en dicha realizacion, se mantiene normalmente entre 0,5 y 7,0 l/min. Las temperaturas se mantienen preferentemente entre 26 °C y 40 °C.

Dependiendo del modelo de centrifugadora usado, los caudales y los tamanos de los filtros de anillo se pueden ajustar de modo que se consiga una separacion optima de la fraccion oleosomica de la fase acuosa. Estos ajustes seran facilmente evidentes para una persona con conocimientos en el campo de la ingeniena de procesos.

La separacion de solidos y la separacion de la fase acuosa de la fraccion oleosomica se pueden llevar a cabo de manera concomitante. Esto puede hacerse por medio de un metodo de separacion basado en la gravedad, tal como una centrifugadora de cuenco tubular trifasica, un decantador, un hidrociclon o un metodo de separacion basado en la exclusion por tamanos.

En general, una composicion de oleosoma obtenida en esta etapa del proceso de la invencion esta relativamente en bruto, y comprende numerosas protemas de semillas, glicosiladas y no glicosiladas, y otros contaminantes tales como glucosinilatos o sus productos de descomposicion. La invencion comprende dicha composicion, pero, en realizaciones preferidas, se elimina una cantidad sustancial de contaminantes de semillas antes de preparar un preparado estabilizado de oleosomas.

Para realizar la eliminacion del material de semillas contaminante, se lava al menos una vez un preparado de oleosomas de aceite obtenido tras la separacion de la fase acuosa, como se ha descrito anteriormente, volviendo a suspender la fraccion oleosomica en una fase lfquida y centrifugando la fraccion resuspendida, lo que produce un “preparado de oleosomas lavado”.

De acuerdo con la invencion, las condiciones de lavado, en general, se seleccionan en funcion de la pureza deseada del preparado de oleosomas. En este sentido, las condiciones que pueden variarse de una manera controlada, con el fin de obtener preparados de oleosomas de diferentes grados de pureza del oleosoma, incluyen la composicion de la fase lfquida usada para el lavado, el tiempo de lavado, la proporcion de la fase lfquida con respecto a la fase del oleosoma y el pH. Por ejemplo, la fase lfquida puede ser agua o un disolvente organico. Por lo general, resulta ventajoso seleccionar una fase lfquida tamponada que (i) tenga un pH retirado al menos un punto de pH del punto isoelectrico de los oleosomas, punto que generalmente vana entre 4 y 6, dependiendo de la fuente de los oleosomas, debido a que dichas condiciones facilitan la separacion entre oleosomas y contaminantes. Tambien es ventajoso que una fase lfquida tamponada (ii) tenga un pH al que los oleosomas sean estables, es decir, en general, en el intervalo de pH ligeramente basico (pH 7,0- 9,0).

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Los sistemas tampon adecuados para la presente invencion se ilustran mediante sistemas que comprenden cloruro sodico a concentraciones entre 0,01 M y 2 M, tampones de bicarbonato sodico a concentraciones entre 25 mM y 50 mM; y tampones bajos en sal tales como Tris-HCl 50 mM a pH 7,5. En un ejemplo, cuando se preparan oleosomas de cartamo, un tampon de bicarbonato sodico 45 mM a pH 8,2 es particularmente adecuado para obtener preparados de oleosomas relativamente puros.

Con dicho tampon se puede obtener, por ejemplo, un preparado de oleosomas que comprenda el 2 % o menos de protemas de cuerpo no oleoso. Las condiciones adicionales que influyen en la pureza del oleosoma, de acuerdo con la presente invencion, son el tiempo de lavado y las cantidades relativas de oleosoma/fase lfquida. Al prolongar los tiempos de lavado y/o aumentar el numero de lavados, y al usar grandes cantidades de fase lfquida, normalmente es posible obtener un grado mas alto de pureza del oleosoma, aunque a expensas del rendimiento, como apreciara el experto en ingeniena de procesos.

Las condiciones de lavado pueden ajustarse en funcion de la fuente de los oleosomas preparados. En particular, los parametros anteriormente descritos de composicion de tampon, tiempo de lavado, pH y similares se pueden variar para influir en la constitucion del preparado de oleosomas, asf como en los constituyentes contaminantes, ya que estos vanan en funcion de la fuente.

Asf pues, en funcion de las condiciones de lavado, se puede obtener un preparado de oleosomas "esencialmente puro"; es decir, las unicas protemas presentes son las protemas del cuerpo oleoso. En una realizacion preferida, la fraccion oleosomica contiene menos del 30 % (p/p) de protemas de cuerpo no oleoso, mas preferentemente menos del 20 % (p/p) e incluso mas preferentemente menos del 10 % (p/p). En una realizacion mas preferida, la fraccion oleosomica comprende el 2 % (p/p) o menos de protemas de cuerpo no oleoso.

El lavado a varios valores de pH diferentes puede ser beneficioso, ya que esto permitira la eliminacion por etapas de los contaminantes, en particular, de las protemas. Se pueden usar la electroforesis en gel de SDS u otras tecnicas analtticas convenientemente para controlar la eliminacion de protemas de semillas y otros contaminantes al lavarse los oleosomas. Ademas, en los casos en que se lleve a cabo mas de una etapa de lavado, las condiciones de lavado pueden variar para diferentes etapas de lavado.

No es necesario eliminar toda la fase acuosa entre las etapas de lavado, y el preparado de oleosomas lavado final puede suspenderse en agua, un sistema tampon, por ejemplo, Tris-HCl 50 mM a pH 7,5, o cualquier otra fase ifquida. Si se desea, el pH se puede ajustar a cualquier pH entre pH 2,0 y 11,0, preferentemente entre 6,0 y 9,0, y lo mas preferentemente entre 7,0 y 8,5. La cantidad de agua en el preparado de oleosomas puede variarse y, dependiendo de la cantidad de agua, se puede obtener un preparado de oleosomas mas o menos viscoso, de acuerdo con la invencion. Por lo tanto, los preparados de oleosomas de la invencion contienen preferentemente mas del 10 % y menos del 65 % de agua en volumen, mas preferentemente mas de 15 % y menos de 50 % de agua en volumen y mas preferentemente mas de 20 % de agua en volumen y menos del 50 % de agua en volumen.

De acuerdo con la invencion, el proceso de fabricacion de un preparado de oleosomas puede realizarse en operaciones discontinuas o en un proceso de flujo continuo. En particular, cuando se usa una centrifugadora de discos, se configura convenientemente un sistema de bombas para generar un flujo continuo. Como ejemplos de las bombas que se pueden emplear estan una bomba de doble diafragma accionada por aire y una bomba hidraulica de desplazamiento positivo o peristaltica.

Para mantener un suministro de consistencia homogenea a la centrifugadora de decantacion y a la centrifugadora de cuenco tubular, se pueden anadir homogenizadores tales como un homogeneizador IKA entre las etapas de separacion. Tambien se pueden anadir homogenizadores en lmea entre varias centrifugadoras o dispositivos de separacion basados en la exclusion por tamano que se emplean para lavar los preparados de cuerpos oleosos. Los tamanos de los filtros de anillo, las composiciones del tampon, la temperatura y el pH pueden diferir en cada etapa de lavado.

Un preparado de oleosomas obtenida de acuerdo con lo anterior puede estabilizarse mediante la metodologfa descrita con mayor detalle a continuacion.

Alcoholes multihndricos

En la presente descripcion, la expresion "alcohol multihndrico" significa un compuesto organico que contiene hidroxilo con dos o mas grupos hidroxilo. Se puede usar cualquier alcohol multihndrico en la invencion. Preferentemente, el alcohol multihndrico es un alcohol multihndrico no halogenado, hidrosoluble, de peso molecular de bajo a medio, y menos de 200.000 Da.

Por consiguiente, el alcohol multihndrico empleado es adecuadamente un diol, triol o poliol no aromatico. Cuando el alcohol multihndrico es un diol, puede ser glicol o un derivado de glicol no aromatico. Los derivados de glicol adecuados incluyen butilenglicol, polietilenglicol, propilenglicol, hexilenglicol, dipropilenglicol, hexanodiol o polibutilenglicol. Cuando el alcohol multihndrico es un triol, es adecuadamente 1,2,6-hexanotriol o glicerol. Tambien

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se pueden usar poKmeros de glicerol, incluyendo cualquiera de di-, tri-, tetra-, penta-, hexa-, septa-, octa-, nona- y decaglicerol. Tambien se pueden usar derivados ligeramente sustituidos de glicerol y sus poUmeros. Son derivados ligeramente sustituidos de glicerol y sus polfmeros aquellas moleculas en las que se ha modificado uno de cada seis grupos hidroxilo dentro de esas moleculas. Las sustituciones particularmente deseables son las esterificaciones

Cuando el alcohol multitudrico es un poliol, preferentemente al menos un atomo de carbono no tiene un grupo hidroxilo unido al mismo. El glicerol y los azucares tales como el sorbitol son ejemplos de polioles que tienen un grupo hidroxilo unido a cada atomo de carbono. De hecho, el glicerol y sus analogos polimericos lineales y no lineales (ramificados) (poligliceroles), son alcoholes multitudricos preferidos en la presente invencion. Algunos productos etoxilados de dichos polioles son adecuados para su uso en las formulaciones de la presente invencion, sin embargo, siempre que sean lfquidos a temperatura ambiente o sean hidrosolubles, por ejemplo sorbeth 6, sorbeth 20, sorbeth 30 y sorbeth 40. Los alcoholes polivimlicos son ilustrativos de otros polioles adecuados en el presente contexto.

Tambien es posible usar azucares multitudricos de acuerdo con la invencion, incluyendo azucares monosacaridos, tales como glucosa y fructosa, y azucares disacaridos tales como sacarosa, asf como azucares multitudricos complejos tales como almidon y celulosa. Ademas, se pueden usar esteres de azucares ligeramente sustituidos, siempre que dichos esteres permanezcan multitudricos.

Tambien es posible usar peptidos y polipeptidos exogenos como alcohol multitudrico de acuerdo con la presente invencion, siempre que dichos peptidos y polipeptidos comprendan dos o mas restos de aminoacidos que contienen alcohol, seleccionados entre treonina y serina. Cuando se emplean peptidos o polipeptidos que contienen serina o treonina, son preferentemente hidrosolubles y tienen una masa molecular de entre 80 Da y 200.000 Da. Se prefiere ademas que carezcan de estructura secundaria o terciaria. De acuerdo con la invencion, los peptidos y polipeptidos que contienen serina y treonina, respectivamente, se usan preferentemente en forma purificada, aunque pueden emplearse mezclas de dos o mas polipeptidos.

A la luz de la descripcion anterior, un experto en qrnmica sera capaz de identificar alcoholes multitudricos adecuados. Ademas, dichos expertos reconoceran que se pueden usar otros alcoholes multitudricos no mencionados espedficamente, asf como mezclas de alcoholes multitudricos, sin apartarse del espmtu ni del alcance de la presente invencion.

Compuesto acido

De acuerdo con la presente invencion, es adecuado cualquier compuesto acido o sal de acido que, cuando se disuelva en un preparado de oleosomas como se ha descrito anteriormente, reduzca el pH del preparado hasta menos de aproximadamente 6,0, es decir, que produzca un preparado de oleosomas que tenga una concentracion [H+] de aproximadamente 10-6 moles por litro. En una realizacion preferida, el compuesto acido se escoge por su capacidad para reducir asf el pH de la composicion oleosomica hasta entre aproximadamente 5,0 y aproximadamente 6,0, mas preferentemente entre aproximadamente 5,0 y aproximadamente 4,0, y lo mas preferentemente entre aproximadamente 4,0 y aproximadamente 3,5. En el presente contexto, son ilustrativos de la clase de compuestos acidos adecuados el acido dtrico, acido fosforico, acido clorhfdrico, acido benzoico, acido propionico, acido glicolico, acido retinoico, acido lactico, acido sorbico, acido gluconico, acido deshidroacetico, acido hialuronico, acido malico, acido fumarico y acido salidlico, y cualquier mezcla de los mismos. Para un preparado de oleosomas destinado a formularse en forma de un producto cosmetico con propiedades de exfoliacion, se prefiere el uso de acido glicolico, acido lactico, acido retinoico y/o acido salidlico.

Preparacion de preparados de oleosomas estabilizados

Un preparado de oleosomas de la invencion comprende preferentemente al menos un 1 % en volumen de oleosomas. Mas preferentemente, un preparado de oleosomas comprende al menos un 5%, 10%, 20%, 30%, 40 %, 50 %, 60 % o 75 % en volumen de oleosomas.

Para estabilizar dichos preparados, de acuerdo con la invencion, se anade preferentemente un alcohol multitudrico al preparado de oleosomas antes de anadir el compuesto acido. Tras su adicion, el alcohol multitudrico se dispersa en el preparado de oleosomas simplemente mediante mezclado o agitacion, usando un agitador de helice de un agitador magnetico de baja cizalla (normalmente inferior a 500 rpm) y una barra de agitacion, por ejemplo. En operaciones mayores se puede emplear un mezclador en lmea o homogeneizador convencional, o cualquier otro medio que sea eficaz para obtener una mezcla homogenea, siempre que las fuerzas de cizalla generadas durante el proceso de mezcla o agitacion sean moderadas y los oleosomas permanezcan intactos.

Como se ha mencionado anteriormente, la cantidad de la fase acuosa dentro de un preparado de oleosomas puede variar. El alcohol multitudrico forma parte de la fase acuosa del preparado de oleosomas. Cuando se usa un diol, triol o poliol no proteico, la concentracion de alcohol multihudrico vana preferentemente entre el 15 % y 95 % en volumen de la fase acuosa del preparado de oleosomas, y mas preferentemente entre el 25 % y 75 % en volumen e incluso mas preferentemente entre el 40 % y 60 % en volumen de la fase acuosa. Lo mas preferentemente, el alcohol

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multihudrico no proteico y el agua estan presentes en partes iguales dentro del preparado de oleosomas estabilizado. Cuando el alcohol multihudrico es un peptido o un polipeptido, entonces la concentracion de alcohol multihudrico vana preferentemente entre el 0,5% y 10% en volumen de la fase acuosa del preparado de oleosomas, mas preferentemente entre el 0,5 % y el 5 % en volumen e incluso mas preferentemente entre 0,5 % y 3,5 % en volumen.

Con la mezcla completamente mezclada de oleosomas y alcohol multitndrico asf obtenida, se ajusta el pH del preparado mediante la adicion de un compuesto acido capaz de reducir el pH a 6 o menos y la dispersion del acido en el preparado de oleosomas. El volumen de compuesto acido requerido depende del compuesto acido o de la mezcla de compuestos acidos usados, pero, en general, esta limitado preferentemente al 10% en volumen. Se pueden emplear instrumentos convencionales tales como un medidor de pH electronico convencional, para controlar el pH del preparado durante la adicion del compuesto acido, con el fin de garantizar que se consiga el pH deseado. Como se ha mencionado anteriormente, el alcohol multitndrico se anade preferentemente antes del compuesto acido, ya que se desea ajustar el pH como la etapa final. Sin embargo, es posible invertir el orden o anadir ambos compuestos juntos, una vez que se haya establecido un proceso reproducible y se sepa que cantidad del compuesto acido se requiere.

El proceso anterior de estabilizacion de oleosomas se puede realizar a temperatura y presion ambiente, y se realiza preferentemente inmediatamente despues de obtenerse el preparado de oleosomas a partir de su fuente biologica. Sin embargo, el proceso puede realizarse a la hora de la obtencion del preparado de oleosomas, o incluso en las 12 horas siguientes a la obtencion del preparado de oleosomas. El proceso de estabilizacion tambien puede incluirse como parte del proceso continuo para el aislamiento de oleosomas, como se ha descrito anteriormente.

Para evaluar la estabilidad de los oleosomas, se puede controlar la aparicion del aceite libre mediante examen visual, es decir, mediante la aparicion de gotitas de aceite dentro del preparado de oleosomas o mediante una metodologfa analttica mas cuantitativa, por ejemplo, extraccion con hexano (vease el Ejemplo 4 que figura mas adelante). Preferentemente, el aspecto ffsico de un preparado de oleosomas de la invencion, cuando se almacena a temperatura ambiente durante 2 anos o a 45 °C durante 2 meses, no experimenta cambios significativos y no cambia ninguna de las propiedades oleosomicas ni la constitucion qrnmica. Al almacenar un preparado de oleosomas de la invencion a 45 °C durante 2 meses, preferentemente el 95 % o mas en volumen del contenido total de aceite del preparado de oleosomas permanece dentro de los oleosomas (es decir, menos del 5 % en volumen de aceite libre), mas preferentemente, el 99 % o mas en volumen (menos del 1 % en volumen de aceite libre) y lo mas preferentemente, el 100 % en volumen (sin aceite libre).

La presente invencion comprende ademas nuevas preparados de oleosomas. Por lo tanto, en otro aspecto, la invencion proporciona una composicion que comprende un preparado de oleosomas con (i) un alcohol multihndrico e (ii) una concentracion [H+] de 10-6 moles por litro o mas. Dicha composicion puede comprender una concentracion [H+] de 10-5 moles por litro o mas, o una concentracion [H+] de 10-4 moles por litro o mas, o una concentracion [H+] de 10-3,5 moles por litro o mas. La composicion puede contener cualquiera de los acidos y alcoholes multihndricos anteriormente mencionados.

Utilidad de los preparados de oleosomas estabilizados

El preparado de oleosomas estabilizado obtenido de acuerdo con la presente invencion se puede usar como ingrediente para preparar una multitud de formulaciones finales, como se describe, por ejemplo, en las patentes de Deckers, en la solicitud PCT 2005/030169 y en la solicitud PCT 2005/097059, mediante la adicion al preparado de oleosomas de uno o mas compuestos adicionales. La expresion "formulacion final" designa aquella formulacion, lista para su uso final previsto.

Una formulacion final se puede presentar en una amplia variedad de formas, incluyendo, pero sin limitacion, una crema, un gel, una locion, un solido ceroso, una pomada, un balsamo, una pasta, un pulverizado o una leche. Ventajosamente, el preparado de dicha formulacion puede realizarse en ausencia de emulsionantes exogenos.

Las formulaciones finales de la presente invencion se ilustran mediante formulaciones de aplicacion topica en la superficie de un mairnfero, incluyendo productos de cuidado personal, productos cosmeticos, productos farmaceuticos aplicados por via topica, productos para el cuidado de la piel, productos cosmoceuticos, productos dermatologicos y productos veterinarios aplicados por via topica. Otros productos que se pueden formular usando un preparado de oleosomas como se ha descrito anteriormente son productos alimentarios, nutraceuticos y suplementos nutricionales, asf como productos farmaceuticos e industriales.

Como se ha mencionado anteriormente, los oleosomas preparados de acuerdo con la presente invencion son particularmente utiles en la fabricacion de productos que se mantienen a un pH acido en su forma final. En particular, productos para el cuidado de la piel que comunmente se formulan en forma de un producto final a un intervalo de pH de la piel humana, entre aproximadamente 5,0 y 6,0. Otros productos para el cuidado personal que se pueden formular ventajosamente con los oleosomas preparados de acuerdo con la invencion son productos exfoliantes, que normalmente tienen un pH de entre 3,5 y 4,5 y tratamientos del acne, que tambien tienen un pH < 5. Ademas, los preparados de oleosomas de la invencion son utiles en la fabricacion de formulaciones finales, ilustradas por

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productos de cuidado personal tales como desinfectantes para manos, que contienen un alto porcentaje en volumen de alcohol monohndrico, incluyendo alcohol etilico.

La presente invencion se describe ademas haciendo referencia a los siguientes ejemplos, que son solo ilustrativos y no limitantes de la invencion.

Ejemplo 1. Obtencion de un preparado de oleosomas a partir del cartamo

El presente ejemplo describe la recuperacion de la fraccion oleosomica del cartamo. El preparado resultante contiene oleosomas lavados intactos.

Descontaminacion de las semillas. Se lavo un total de 45 kg de semilla de cartamo seco (Carthamus tinctorius) dos veces usando aproximadamente 120 l de agua corriente a 65 °C y una vez usando aproximadamente 120 l de agua corriente a aproximadamente 15 °C. El lavado se llevo a cabo en un barril con malla de tamiz para separar las aguas residuales.

Molienda de las semillas. Se vertieron las semillas lavadas a traves de la tolva de un molino coloidal (Molino coloidal, MZ-130 (Fryma), capacidad: 350 kg/h), que estaba dotado de un conjunto de molienda de rotor/estator dentado transversal MZ-130 y una tolva de carga superior, mientras que se suministraban aproximadamente 100 l de tampon de bicarbonato sodico 45 mM a pH 8,2 a traves de una manguera conectada externamente antes de la molienda. El funcionamiento del molino se realizo con un ajuste de separacion de 1R, escogido para conseguir un tamano de partmula inferior a 100 micrometros a 18 °C y 30 °C. Se molio el total de los 45 kg de semillas en 10 minutos.

Homogenizacion y extraccion de solidos. Se bombeo la suspension resultante a un homogeneizador en lmea de cuchillas (Dispax Reactor® DR 3-6/A, IKA® Works, Inc.) a una velocidad de aproximadamente 7 l/min. La suspension de salida se introdujo directamente en una centrifugadora de decantacion (NX-314B-31, Alfa-Laval) despues de llevar la centrifugadora a una velocidad de funcionamiento de 3.250 rpm. En 25 minutos, se decantaron aproximadamente 160 kg de suspension molida de semillas.

Separacion de los oleosomas. La separacion de la fraccion oleosomica se realizo usando un separador de centrifugadora de disco (SB 7, Westfalia) dotado de un cuenco de separacion y autolimpieza trifasico y una serie de filtros de anillo extrafbles; capacidad maxima: 83 l/min; filtro de anillo: 69 mm. La velocidad operativa fue de ~8.520 rpm. Se uso una bomba peristaltica Watson-Marlow (Modelo 704) para bombear la fase lfquida decantada (DL) a la centrifugadora despues de llevarla a la velocidad operativa. Esto produce la separacion de la fase lfquida decantada en una fase pesada (HP1) que comprende agua y protemas de semillas solubles, y una fase ligera (LP1) que comprende cuerpos oleosos. La fraccion oleosomica, que se obtuvo despues de pasar una vez a traves de la centrifugadora, se denomina preparado de oleosomas sin lavar. Se paso entonces dicha fraccion oleosomica sin lavar a traves de un mezclador estatico en lmea, mezclando con tampon de bicarbonato sodico 45 mM (pH 8,2) (35 °C, 4 l/min) a un segundo separador de centrifugadora de discos (SA 7, Westfalia); capacidad maxima: 83 l/min; filtro de anillo: 73 mm. La velocidad operativa fue de ~8.520 rpm. Se paso entonces la fase ligera separada (LP2) que comprende el oleosoma a traves de otro mezclador estatico en lmea mezclando con pH 8, tampon de bicarbonato sodico 45 mM (pH 8,2) (35 °C, 4 l/min) al tercer separador de centrifugadora de discos (SA 7, Westfalia); capacidad maxima: 83 l/min; filtro de anillo: 75 mm. La velocidad operativa fue de ~8.520 rpm. Todo el procedimiento se llevo a cabo a temperatura ambiente. Todos los preparados obtenidos despues de la segunda separacion se denominan preparados de oleosomas lavados.

Ejemplo 2. Preparacion de un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 4,5 en presencia de un alcohol multihndrico, glicerina

A 100 g de una dispersion de solidos al 75 % de oleosomas de cartamo, se anadieron 25 g de glicerina pura (99 % + pureza) con mezcla de baja cizalla. Esto redujo el nivel total de oleosomas al 60 % (20 % de agua, 20 % de glicerina). El pH de esta dispersion normalmente es > 8,5. Se anadieron, a la dispersion con agitacion de baja cizalla, 1,25 g de un conservante comercial Geogard Ultra que consiste en una mezcla de glucono-delta-lactona y acido benzoico que redujo el pH de la dispersion a 4,2-4,5. Se sometio la dispersion a un ensayo de estimulacion microbiana, y no se observo ninguna fuga de los oleosomas despues de 6 meses a 25 °C.

Ejemplo 3. Preparacion de un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 4,5 en presencia de un alcohol multitndrico, decaglicerina

A 100 g de una dispersion de solidos al 75% de oleosomas de cartamo, se anadieron 25 g de Natrulon H-10 (decaglicerina, de Lonza) bajo un propulsor a 400 rpm durante 10 minutos. Esto redujo el nivel total de oleosomas al 60 % (20 % de agua, 20 % de decaglicerina). El pH de esta dispersion era normalmente de 7,5. Se anadieron, a la dispersion con agitacion de baja cizalla, 1,25 g de un conservante comercial Geogard® Ultra de Lonza, que consiste en una mezcla de glucono-delta-lactona y acido benzoico. Una vez equilibrado, el conservante redujo el pH de la dispersion a 4,5.

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Ejemplo 4. Estabilidad de un preparado de oleosomas de cartamo a un pH de aproximadamente 4,5 en presencia y en ausencia de un alcohol multitndrico

Los preparados de oleosomas estabilizados se prepararon de acuerdo con los Ejemplos 1 y 2.

Tipo de oleosoma: pH < 4,5

Formulacion de oleosomas estabilizada: La formulacion es estable. Sin fugas (exploracion visual)

Formulacion de oleosomas no estabilizada: Separacion de capa acuosa y oleosa (exploracion visual)

La siguiente metodologfa se puede usar para evaluar, de una manera cuantitativa, la estabilidad de un preparado de oleosomas:

1. Se marcan y se pesan 4 (cuatro) tubos de ensayo Pyrex con tapa de rosca, limpios y secos, de 16 x 100 mm (± 0,0001 g) por muestra. Se marcan con el nombre de la muestra A y T1, el nombre de la muestra B y T1, y luego se repite sustituyendo T1 con T2. Se registran los valores. Se anade 1 ml de muestra de oleosoma.

2. Se invierte el recipiente de muestra de 10 a 12 veces para mezclar bien la muestra y se aplica con una pipeta de inmediato 1 ml de muestra usando una punta de pipeta de 1 ml de ancho.

3. Se transfiere la muestra por duplicado a los numeros de tubo T1.

4. Se limpia cualquier muestra de la parte superior del tubo y se vuelven a pesar los tubos que contienen las muestras (± 0,0001 g). Se registran los valores.

5. Se anaden 3 ml de hexano puro a los tubos con la muestra, se tapa el tubo con tapa de teflon, se agita y se mezcla vigorosamente durante 30 segundos, tratando de incorporar cualquier muestra pegada a los lados del tubo.

6. Se centrifuga la muestra en una centrifugadora clmica a velocidad completa de 3.000 rpm durante 2 minutos hasta obtenerse una muestra de microgranulos. El aceite libre permanecera en el hexano (capa superior) y los cuerpos oleosos/resto de la muestra se aglomeraran.

7. Usando una pipeta de transferencia de vidrio, se retira con cuidado la mayor cantidad de hexano que contenga el aceite libre de la parte superior de la muestra y se transfiere al tubo t2. Se coloca el tubo T2 en el bloque calefactor y se repiten las etapas 6 y 7. Las extracciones posteriores se colocaran en T2.

8. Se evapora el hexano de las muestras sometiendo los tubos a una corriente suave de gas N2 de alta pureza (colector Pierce Reacti-Vap) mientras se calienta el bloque a 40-45 °C. Se evapora el hexano durante al menos una hora.

9. Se vuelven a pesar los tubos que contienen aceite libre y se vuelve a realizar la evaporacion con N2 durante 15 minutos.

10. Se vuelven a pesar los tubos hasta que dos lecturas sucesivas sean iguales (± 0,0002). Esto representa el aceite libre con todos los disolventes eliminados.

Calculos de las muestras:

Masa de la muestra:

Masa del tubo 1:: 11,9365 g

Masa del tubo 1 + muestra:: 12,4022 g

Masa de la muestra:: 0,4657 g

Masa del tubo 2:: 12,0706 g

Masa del tubo 2 + muestra:: 12,0865 g

Masa de la muestra:: 0,0159 g

Descomposicion de los cuerpos oleosos causada por el hexano puro = 0,0040 g por extraccion.

Aceite libre como un % de la muestra: (masa de la muestra T2 - correccion)/(muestra de T1) x 100

= (0,0159-0,0120/0,4657) x 100 = 0,84 %

Ejemplo 5. Preparacion de una crema para la piel que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 6 o inferior en presencia de un alcohol multitndrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1. Fase oleosa

Oleosomas estabilizados con glicerina (que consisten en oleosomas al 59,33 %, agua al 10,0 %

19,33 %, glicerina al 19,33 %, Geogard Ultra al 1 %)

Decaoleato de decaglicerilo 5,0 %

Fase 2. Fase acuosa

Agua 70,2 %

Decaglicerina 5,0 %

NaOH (0,25 N) 6,20 %

Fase 3

Aristoflex AVC 1,3%

(Copolfmero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP)

Fase 4

Geogard Ultra (Glucono-delta-lactona y acido benzoico) 2,0 %

Fase 5

Perfume 0,30 %

PROCEDIMIENTO

5 1. Se anaden los ingredientes de la Fase 1 juntos con agitacion de baja cizalla.

2. Se anaden los ingredientes de la Fase 2 juntos, a pH de aproximadamente 11.

3. Se anade lentamente la Fase 2 a la Fase 1 con mezclado de baja cizalla. La homogeneidad se realizara muy

10 rapidamente (normalmente en menos de un minuto).

4. Se anade lentamente la Fase 3 con un mezclado de alta pureza (500 rpm).

5. Se anaden la Fase 4 y la Fase 5, y se agita durante otros 5 minutos. Se comprueba el pH y se ajusta a entre 5

15 y 6.

Ejemplo 6. Preparacion de un producto exfoliante que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 4.0 en presencia de un alcohol multihndrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1. Fase oleosa

Oleosomas estabilizados con glicerina (que consisten en oleosomas al 59,33 %, agua al 12,5 %

19,33 %, glicerina al 19,33 %, Geogard Ultra al 1 %)

Fase 2. Fase acuosa

Acido glicolico (activo al 70 %) 8,0 %

Agua 74,25 %

Hidroxido sodico cs hasta pH 4,0 1,5 %

Fase 3

Aristoflex AVC 1,5%

(Copolfmero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP)

Fase 4

Geogard Ultra (Glucono-delta-lactona y acido benzoico) 2,0 %

Fase 5

Perfume 0,25 %

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PROCEDIMIENTO

1. Se anaden los ingredientes de la Fase 2 juntos con enfriamiento y agitacion. Se comprueba el pH, que debe ser de aproximadamente 4,0.

2. Se anade lentamente la Fase 2 a la Fase 1 con mezclado de baja cizalla. La homogeneidad se realizara muy rapidamente (normalmente en menos de un minuto).

3. Se anade lentamente la Fase 3 con un mezclado de alta pureza (500 rpm). Primero se coagulara, y luego se volvera a dispersar gradualmente y espesara la mezcla.

4. Se anaden la Fase 4 y la Fase 5, y se agita durante otros 5 minutos.

Ejemplo 7. Preparacion de una locion hidratante que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 5,2 en presencia de un alcohol multihndrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas estabilizados con glicerina

(que consisten en oleosomas al 59,33%, agua al 19,33%, glicerina al 19,33%, Geogard Ultra al 1 %)

Decaoleato de decaglicerilo Metoxicinamato de octilo Fase 2 Glicerina Agua Fase 3

Aristoflex AVC

(Copolfmero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP)

Fase 4

Geogard Ultra (Glucono-delta-lactona y acido benzoico)

NaOH

PROCEDIMIENTO

1. Se mezcla la Fase 1 durante 8-10 min a 300-500 rpm.

2. Se anade la Fase 2 a la Fase 1 en incrementos mientras se mezcla a 500 rpm durante 10 min.

3. Se anade la Fase 3 y se mezcla a 700 rpm durante otros 5 minutos.

4. Se anade la Fase 4 y se ajusta el pH hasta 5,0-5,5 con NaOH con agitacion (700 rpm).

5. Viscosidad, 70.000 mPa.s (70.000 cp) (TC del huso a 2 rpm y 25 °C).

Ejemplo 8. Preparacion de una crema exfoliante que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 4.0 en presencia de un alcohol multihndrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas estabilizados con glicerina 10 %

(que consisten en oleosomas al 59,33 %, agua al 19,33 %, glicerina al 19,33 %, Geogard Ultra al 1 %)

Decaoleato de decaglicerilo 5 %

Metoxicinamato de octilo 2 %

Fase 2

10%

5%

2%

5% 74,9 %

1,1 %

2,0 % cs

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INGREDIENTE PORCENTAJE

Acido glicolico (70 %) 8 %

Agua 73,5 %

Fase 3

Aristoflex AVC 1,1%

(CopoUmero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP)

Fase 4

Acido deshidroacetico (DHA), acido salidlico, acido benzoico 0,4 %

y cloruro de bencetonio (Geogard 361)

NaOH cs

PROCEDIMIENTO

1. Se mezcla la Fase 1 durante 8-10 min a 300-500 rpm.

2. Se anade la Fase 2 a la Fase 1 en incrementos mientras se mezcla a 300-500 rpm durante 10 minutos.

3. Se anade la Fase 3 y se mezcla a 700 rpm durante otros 5 minutos.

4. Se anade la Fase 4 y se ajusta el pH hasta 4,0 con NaOH con agitacion (700 rpm) durante 2 minutos.

5. Viscosidad, 150.000 mPa.s (150.000 cp) (TC del huso a 2 rpm y 25 °C).

Ejemplo 9. Preparacion de una crema hidratante natural que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 5,3 en presencia de un alcohol multihfdrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas estabilizados con glicerina 10 %

(que consisten en oleosomas al 59,33 %, agua al 19,33 %, glicerina al 19,33 %,

Geogard Ultra al 1 %)

Decaoleato de decaglicerilo 5 %

TiO2 (modificado hidrofobamente) 2 %

Fase 2

Glicerina 5 %

Agua 74,9 %

Fase 3

Carragenano (Genuvisco) 1,1%

Fase 4

Geogard Ultra (Glucono-delta-lactona y acido benzoico) 2,0 %

NaOH cs

PROCEDIMIENTO

1. Se mezcla la Fase 1 durante 10 min a 300-500 rpm.

2. Se anade la Fase 2 a la Fase A en incrementos mientras se mezcla a 300-500 rpm durante 10 min.

3. Se anade la Fase 3 y se mezcla a 700 rpm durante otros 5 minutos.

4. Se anade la Fase 4, y se agita durante 2 minutos a 700 rpm.

5. Se ajusta el pH a 5,0-5,5 con NaOH.

6. Viscosidad de aproximadamente 40.000 mPa.s (40.000 cps).

5

10

15

20

25

Ejemplo 10. Preparacion de una crema hidratante natural que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 5,7 en presencia de un alcohol multihudrico

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas estabilizados con glicerina 10 %

(que consisten en oleosomas al 59,33 %, agua al 19,33 %, glicerina al 19,33 %,

Geogard Ultra al 1 %)

TiO2 (modificado hidrofobamente) 1 %

Fase 2

Glicerina 10%

Agua 76,75 %

Fase 3

Carragenano (Genuvisco) 1,1%

Fase 4

Conservante de tipo glucosa oxidasa/lacto peroxidasa 1,15 %

HCl cs

PROCEDIMIENTO

1. Se mezcla la Fase 1 durante 10 min a 300-500 rpm.

2. Se anade la Fase 2 a la Fase 1 en incrementos mientras se mezcla a 300-500 rpm durante 10 min.

3. Se anade la Fase 3 y se mezcla a 700 rpm durante otros 5 minutos.

4. Se anade la Fase 4, y se agita durante 2 minutos a 500 rpm.

5. Se ajusta el pH a 5,5-6,0 con HCl.

6. Viscosidad de aproximadamente 42.000 mPa.s (42.000 cps).

Ejemplo 11. Preparacion de una crema hidratante que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado a un pH de aproximadamente 5,3 en presencia de un alcohol muititndrico (decaglicerina)

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas convencionales (oleosomas al 75 %, agua al 25 %) 10,0

Natrulon H-10 (Decaglicerina/Agua) 2,50

Fase 2

Polyaldo DGDO (10-10-0) (Poliglicerol-10 Decaoleato) 5,00

Uvinul MC 80 (Etilhexil-metoxicinnamato) 2,00

Perfume 0,50

Fase 3

Agua DI 77,90

Fase 4

Geogard Ultra (Gluconolactona/Benzoato de sodio) 1,00

Aristoflex AVC (Copolfmero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP) 1,10

PROCEDIMIENTO

1. Se prepara el preparado de oleosomas estabilizado con decaglicerina mediante la combinacion de la Fase 1 bajo un propulsor y el mezclado durante 10 minutos a 400 rpm.

2. Se anade la Fase 2 en el orden que aparece y se mezcla durante otros 10 minutos.

5

10

15

20

25

3. Se anade la Fase 3 en incremented y se mezcla bajo un propulsor durante 20 minutes; se aumenta lentamente la velocidad de 400 a 650 rpm.

4. Se anade la Fase 4 en el orden que aparece y se mezcla a 650 rpm hasta que el lote es uniforme y espeso. Se ajusta el pH a 5,2-5,5.

Ejemplo 12. Preparacion de un desinfectante para las manos que comprende un preparado de oleosomas de

cartamo estabilizado en presencia de un alcohol multitedrico (no de acuerdo con la invencion).

INGREDIENTE PORCENTAJE

Fase 1

Oleosomas estabilizados con glicerina 12,5

Perfume 0,3

Fase 2

Agua desionizada 30,0

Fase 3

Alcohol ertlico 55,0

Fase 4

Methocel J75M (Hidroxipropilmetilcelulosa) Amercol 1,0

Fase 5

Solucion de hidroxido sodico cs

Solucion de acido cftrico cs

PROCEDIMIENTO

1. Bajo un propulsor, se combinan los ingredientes de la Fase 1 y se mezclan durante 10 minutos a 400 rpm.

2. Se anade la Fase 2 lentamente en incrementos. Se aumenta la velocidad hasta 600 rpm y se mezcla durante 10 minutos.

3. Una vez introducida toda el agua, se inicia lentamente la adicion de la Fase 3 y se mezcla durante 10 minutos.

4. Se anade lentamente la Fase 4 y se mezcla durante 20 minutos para dispersar adecuadamente la goma.

5. Se anade hidroxido sodico hasta aumentar el pH hasta 8,5-9,0 para espesar la goma. Se mezcla hasta que se vuelve uniforme.

6. Se anade acido cftrico para ajustar el pH hasta 6,5-7,0.

Ejemplo 13. Preparacion de una margarina que comprende un preparado de oleosomas de cartamo estabilizado en

presencia de un alcohol multitedrico

INGREDIENTE GRAMOS

Aceite de palma 1.500

Aceite de soja 1.653

Agua 751,2

Sal 72

Oleosomas estabilizados con glicerina 10,8

Lecitina 8

Acido lactico 1,8

Betacaroteno 0,28

Sorbato de potasio 3

PROCEDIMIENTO

1. Se anade el aceite de soja a una caldera. Con agitacion, se calienta hasta 54,4 °C (130 °F).

2. Se anade el aceite de palma y se mantiene la temperatura.

5 3. Con agitacion, se anade la lecitina. Se mezcla durante 5 minutos.

4. En una caldera separada, se anade el agua y se calienta hasta 60 °C (140 °F).

5. Con agitacion, se anade la sal, el acido lactico y el sorbato de potasio. Se mezcla durante 5 minutos.

6. Se anaden los oleosomas estabilizados con glicerina. Se mezcla durante 5 minutos.

7. Con agitacion, se anade el betacaroteno a la mezcla de aceite.

10 8. Se combinan las mezclas de aceite y de agua, y se mantiene la temperatura a 54,4 °C (130 °F). Se mezcla

durante 10 minutos.

9. Se realiza la homogenizacion y el procesamiento a temperatura ultra-alta.

Aunque la presente invencion se ha descrito con referencia a lo que actualmente se considera que son los ejemplos 15 preferidos, se ha de entender que la invencion no se limita a los ejemplos desvelados. Por el contrario, la invencion pretende cubrir diversas modificaciones y disposiciones equivalentes incluidas dentro del esprntu y del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes se incorporan por referencia en su totalidad en la misma 20 medida que si cada una de dichas publicaciones, patentes o solicitudes de patente se indicara de forma espedfica e individualizada como incorporada por referencia en su totalidad.

Claims

5

10

15

20

25

REIVINDICACIONES

1. Un metodo de preparacion de un preparado de oleosomas estabilizado que comprende:

(a) proporcionar un preparado de oleosomas; y

(b) mezclar el preparado de oleosomas en presencia de (i) un alcohol multihndrico y (ii) un acido capaz de reducir el pH de dicho preparado de oleosomas hasta un pH inferior a 6,0.
2. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el preparado de oleosomas estabilizado comprende menos del 5 % en volumen de aceite libre cuando se almacena a 45 °C durante un penodo de dos meses.
3. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en el que el preparado de oleosomas comprende oleosomas a al menos 1 %.
4. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1,2 o 3, en el que el alcohol multihndrico es un diol, triol o poliol no aromatico.
5. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que el diol, triol o poliol no aromatico tiene una masa molecular de 200.000 Da o inferior.
6. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 3, en el que el alcohol multihndrico es un peptido o polipeptido compuesto de dos o mas aminoacidos que contienen alcohol.
7. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 6, en el que el aminoacido que contiene alcohol se selecciona del grupo que consiste en treonina y serina.
8. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, en el que el peptido o polipeptido esta presente en el preparado en una cantidad del 0,5 % al 3,5 %.