ES2629061T3 - Método para la detección de cáncer pancreático - Google Patents

Método para la detección de cáncer pancreático Download PDF

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Abstract

Un método para la detección de cáncer pancreático, que comprende medir, en una muestra aislada de un sujeto: (i) la presencia o una cantidad de un polipéptido que tiene una reactividad de unión específica a un anticuerpo contra una proteína CAPRIN-1 mediante una reacción antígeno-anticuerpo, o (ii) un anticuerpo contra la proteína CAPRIN-1, o (iii) la presencia o una cantidad de un ácido nucleico que codifica la proteína CAPRIN-1, en el que dicha proteína CAPRIN-1 consiste en una secuencia de aminoácidos representada por cualquiera de las SEQ ID NO: 2 a 30 de número par.

Description

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similar, aunque las técnicas no se limitan a estos métodos. Cuando se utiliza una enzima como un marcador para un anticuerpo, dichas enzima no está particularmente limitada, siempre que satisfaga condiciones tales como que: la tasa de utilización sea alta; permanezca estable incluso si se une a un anticuerpo; y causa específicamente el revelado de color del sustrato. Las enzimas que pueden utilizarse para un inmunoensayo enzimático general son 5 enzimas tales como peroxidasa, β-galactosidasa, fosfatasa alcalina, glucosa oxidasa, acetilcolinesterasa, glucosa-6fosfato deshidrogenasa y ácido málico deshidrogenasa. Además, pueden utilizarse sustancias inhibidoras de enzimas, coenzimas y similares. La unión de estas enzimas con los anticuerpos puede realizarse mediante métodos conocidos que implican el uso de un agente reticulante, tal como un compuesto de maleimida, o un sistema de biotina-(estrept)avidina, o similar. Como sustrato puede utilizarse una sustancia conocida dependiendo del tipo de una enzima que vaya a utilizarse. Cuando se utiliza peroxidasa como una enzima, puede utilizarse, por ejemplo, 3,3',5,5'-tetrametilbencidina. Cuando se utiliza fosfatasa alcalina, puede utilizarse, por ejemplo, para-nitrofenol. Puede utilizarse un radioisótopo que generalmente se utilice en un radioinmunoensayo, tal como, 125I o 3H. Puede utilizarse un colorante fluorescente que se utilice en técnicas generales basadas en anticuerpos fluorescentes, tal como isotiocianato de fluoresceína (FITC), isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC) o un colorante de cianina
15 fluorescente (p. ej., Cy3 o Cy5).
No es preciso explicar las técnicas de inmunoensayo anteriores en el presente documento dado que estas técnicas son muy conocidas; sin embargo, brevemente, por ejemplo, el método de tipo sándwich comprende: la inmovilización del polipéptido anterior utilizado como un antígeno en una fase sólida, lo que permite que el polipéptido reaccione con una muestra tal como suero; un lavado, lo que permite que un anticuerpo secundario apropiado reaccione con un anticuerpo de la muestra; lavar de nuevo y después medir el anticuerpo secundario unido a la fase sólida. A inmovilizar un polipéptido antigénico en una fase sólida, un anticuerpo secundario no unido puede retirarse fácilmente. Por consiguiente, es preferible como una realización del método para detectar el cáncer de la presente invención. Como un anticuerpo secundario, si la muestra procede de un perro, puede utilizarse, por
25 ejemplo, un anticuerpo anti-IgG de perro. Un anticuerpo secundario se marca por adelantado con una sustancia marcadora, cuyos ejemplos se han indicado anteriormente, de tal manera que puede medirse el anticuerpo secundario unido a una fase sólida. La cantidad de anticuerpo secundario así medida corresponde a la cantidad del anticuerpo anterior en la muestra de suero. Cuando se utiliza una enzima como una sustancia marcadora, la cantidad del anticuerpo puede medirse añadiendo un sustrato que se degrada para revelar un color mediante acción enzimática y después medirse ópticamente la cantidad de sustrato degradado. Cuando se utiliza un radioisótopo como una sustancia marcadora, la cantidad de radiación del isótopo puede medirse utilizando un contador de centelleo o similar.
En el segundo método de la presente invención, se mide la proteína CAPRIN-1 que puede haber en una muestra
35 obtenida de un sujeto. Como se ha descrito anteriormente, la cantidad de un anticuerpo que experimenta una reacción antígeno-anticuerpo con CAPRIN-1 de un perro, un ser humano, o similar, es significativamente mayor en sujetos con cáncer pancreático, en comparación con sujetos sanos. Esto indica que la cantidad de CAPRIN-1 acumulada como un antígeno es significativamente alta en células de cáncer pancreático. En el caso de sujetos sanos, el nivel de expresión de CAPRIN-1 está por debajo del límite de detección, o la expresión de CAPRIN-1 en tejido es débil y aparecería simplemente en las células. El cáncer pancreático también puede detectarse midiendo directamente CAPRIN-1, como se describe específicamente en los ejemplos más adelante. Por lo tanto, el cáncer pancreático puede detectarse en un sujeto midiendo la propia CAPRIN-1, como es el caso del primer método.
Un polipéptido en una muestra puede medirse fácilmente mediante técnicas de inmunoensayo muy conocidas.
45 Específicamente, se prepara un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que experimenta una reacción antígeno-anticuerpo con CAPRIN-1, y se realiza un inmunoensayo utilizando el mismo. De esta manera puede medirse la presencia de CAPRIN-1 en la muestra. Como se describe anteriormente, un anticuerpo tiene reactividad cruzada. Por consiguiente, utilizando un anticuerpo que experimenta una reacción antígeno-anticuerpo con CAPRIN-1 canina de SEQ ID NO: 6, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, no solo puede medirse la proteína CAPRIN-1 canina de SEQ ID NO: 6, sino también sus homólogos en otros mamíferos (p. ej., CAPRIN-1 humana de SEQ ID NO: 2 o 4). La propia técnica de inmunoensayo es una técnica convencional muy conocida, como se ha descrito anteriormente.
Este estudio revela que CAPRIN-1 es una proteína de membrana celular que se expresa en la superficie de células
55 de cáncer pancreático. Un sujeto con cáncer contiene muchas proteasas en tejidos de cáncer. Por consiguiente, la parte de la secuencia de CAPRIN-1 expresada fuera de las células cancerosas se degrada y se separa de las células cancerosas, y dicha parte es mayor en cantidad que la parte de la secuencia de CAPRIN-1 expresada en las células cancerosas. Por consiguiente, si en la medición se utiliza un anticuerpo capaz de unirse a las superficies de células de cáncer pancreático como un anticuerpo contra CAPRIN-1, o si se utiliza un fragmento de unión a antígeno del mismo, puede detectarse una mayor cantidad de CAPRIN-1, y las células de cáncer pancreático pueden diagnosticarse con mayor sensibilidad.
Por consiguiente, en la presente invención, se prefiere el uso de un anticuerpo que se una a una parte expresada en la superficie de una célula de cáncer pancreático de una molécula de la proteína CAPRIN-1. Un ejemplo de un 65 péptido parcial de una proteína CAPRIN-1 expresada en la superficie de una célula de cáncer pancreático es un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de 7 a 12 o más restos de aminoácido continuos dentro
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