ES2631404T3 - Fórmula de bebida que comprende aceite omega-3 fresco de origen marino y antioxidantes - Google Patents

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Abstract

Bebida caracterizada por que la bebida comprende aceite fresco de origen marino en una emulsión de aceite en agua, en donde el aceite de origen marino tiene un valor totox inferior a 10, y a la que se añade al menos un antioxidante no presente de manera natural en dicha emulsión de aceite en agua, en donde el contenido de aceite de origen marino es del 0,5 % al 5 % en peso basado en el peso total y en donde el al menos un antioxidante añadido es una combinación de luteína añadida y de licopeno añadido que no están presentes de manera natural en las fases acuosa u oleaginosa, sino que se añaden por separado a la bebida.

Description

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DESCRIPCION
Formula de bebida que comprende aceite omega-3 fresco de origen marino y antioxidantes Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a una nueva formula de bebida que comprende aceite omega-3 fresco de origen marino en una emulsion y antioxidantes de acuerdo con la reivindicacion 1, muy conocidos por ser beneficiosos para la salud de seres humanos. Se describe un proceso para llevar a cabo la production de dicha bebida, pudiendose usar la bebida para la produccion de un medicamento.
Descripcion de la tecnica anterior
Los efectos beneficiosos para la salud de los aceites poliinsaturados son muy conocidos. Tambien se conocen los efectos beneficiosos para la salud de los antioxidantes. Sin embargo, existe la necesidad de una composition que combine estos nutrientes en una formula que produzca un aumento de la absorcion y de la que el organismo pueda utilizar los nutrientes de manera optima. Existe la necesidad de nuevas composiciones en las que se formulen estos nutrientes nativos inestables beneficiosos para la salud, de manera que cada componente se mantenga intacto y fresco. Los efectos de los acidos grasos omega-3 (EPA, DHA y DPA) en una serie de enfermedades y afecciones, tales como enfermedades cardiovasculares, mentales, cutaneas y el envejecimiento, estan bien documentados. La suplementacion de omega-3 aumenta en todo el mundo. Hay un aumento en el consumo de los productos que contienen omega-3, y el omega-3 en forma de pescado y/o complemento alimenticio es altamente recomendado por las autoridades sanitarias. El estres oxidativo es una especie de "estres qulmico" inducido por la presencia en nuestro organismo de cantidades anomalas de radicales libres. Cualquiera que sea la causa, se cree que el estres oxidativo es responsable del envejecimiento prematuro y de una serie muy amplia de enfermedades comunes - aproximadamente un centenar - que abarcan de la hipertension arterial a la aterosclerosis, del infarto al ictus, de la enfermedad de Parkinson a la enfermedad de Alzheimer, de la colitis a la pancreatitis, de la obesidad a la diabetes, de la bronquitis cronica a la artritis reumatoide, del SIDA a varios tipos de cancer. El organismo esta protegido contra los radicales libres por los antioxidantes, tanto por los autoproducidos como por los antioxidantes suministrados a traves de alimentos y bebidas. Los antioxidantes pueden ser vitaminas, minerales y enzimas, ya sean liposolubles o hidrosolubles. En situaciones en las que el organismo esta sometido a una potenciacion de la oxidation (una gran cantidad de radicales libres), el organismo podrla no tener suficientes antioxidantes para neutralizar o inactivar los radicales libres. Se producen reacciones en cadena destructivas, que podrlan causar un aumento del estres oxidativo perjudicial.
Un metodo convencional de medicion del estado oxidativo es el FRAS (Free Radical Analytical System: sistema de analisis de radicales libres). El ensayo se evalua en una unidad de medicion convencional denominada U. Carr (del qulmico Carratelli, el inventor del ensayo). El metodo es rapido y solo se requiere una gota de sangre extralda de la punta del dedo.
La siguiente tabla da una vision general de los valores oxidativos normales y elevados.
Valores normales Valores llmite
Estres oxidativo leve Estres oxidativo moderado Estres oxidativo grave
Valores FRAS 250-300 U. Carr
300-320 U. Carr (que muestran un nivel ligeramente elevado de radicales libres que podrla conducir a condiciones de estres oxidativo) 320-340 U. Carr 340-400 U. Carr 400-500 U. Carr
La base teorica para los efectos de los antioxidantes es bien conocida. Tambien se sabe que la absorcion de los antioxidantes en el organismo a partir de suplementos antioxidantes es un desaflo. Sin embargo, los estudios han demostrado que los antioxidantes en una forma no nativa o como vitaminas aisladas son captados de manera inadecuada por el organismo. Algunos estudios indican que la ingestion de altas dosis de vitaminas aisladas puede convertir los antioxidantes en prooxidantes, lo que conduce a una elevada oxidacion en el organismo. Los estudios y la literatura indican una mejor absorcion y biodisponibilidad de los antioxidantes que estan presentes de manera natural cuando se consumen en alimentos, por ejemplo, como frutas y verduras.
Se sabe que los seres humanos que tienen estres oxidativo grave suelen tener deficiencia en acidos grasos omega- 3 (DHA y EPA), y poseen un bajo estado antioxidante.
El dano oxidativo y la deficiencia de antioxidantes se consideran ahora factores cruciales para muchas enfermedades, y son probablemente la principal razon de que se produzca un reemplazo imperfecto de las celulas envejecidas danadas por celulas nuevas.
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Los trabajos de investigacion han demostrado que los productos de oxidacion de los acidos grasos son altamente reactivos y que pueden afectar e interferir en los procesos intracelulares. Muchos suplementos de omega-3 disponibles en el mercado contienen aceite de pescado que tiene un grado significativo de oxidacion que, a su vez, puede inducir efectos adversos en los procesos intracelulares.
Aunque estos suplementos dieteticos suelen ser antioxidantes anadidos, esto no invertira la rancidez ya presente en el suplemento dietetico. Por otra parte, para evitar la oxidacion adicional del aceite de pescado insaturado, los antioxidantes del suplemento se consumiran y, finalmente, (tras algunos meses) se agotaran. Por lo tanto, los antioxidantes de los suplementos dieteticos disponibles en el mercado no induciran ningun efecto beneficioso para la salud en los seres humanos.
Por lo tanto, existe la necesidad de una nueva composicion que combine el aceite de pescado fresco y antioxidantes especlficos para proporcionar una nueva formula de bebida que tenga efectos beneficiosos para la salud en los seres humanos.
Presente invencion
Por lo tanto, el objetivo de la presente invencion es proporcionar una nueva formula de bebida que comprenda aceite de omega-3 fresco de origen marino y antioxidantes conocidos por ser beneficiosos para la salud en los seres humanos.
Un objetivo adicional de la presente invencion es proporcionar un proceso de produccion de la nueva formula de bebida, en el que el aceite de pescado se emulsiona y se manipula en condiciones suaves a traves de un mlnimo de etapas del proceso.
Un objetivo adicional de la presente invencion es proporcionar una bebida para su uso como bebida terapeutica. Los antioxidantes especlficos que se incluiran en la bebida se seleccionan de acuerdo con la enfermedad o el trastorno que se vaya a tratar.
Estos y otros objetivos se consiguen mediante la presente invencion.
Por lo tanto, la presente invencion se refiere a una bebida que combina aceite fresco de origen marino y antioxidantes especlficos. Los antioxidantes que tienen un efecto beneficioso para la salud en los seres humanos estan presentes en la bebida para reducir el estres oxidativo del ser humano, no con el fin de estabilizar el aceite en la preparation. La bebida puede ser una bebida funcional o una bebida terapeutica, una bebida para saciar la sed o una bebida normal. Preferentemente, la bebida tiene una base que contiene antioxidantes naturales, por ejemplo, zumo de frutas o verduras, te verde, pero se puede usar cualquier llquido potable.
La nueva bebida combina la emulsion de omega-3 estable conocida de la tecnica anterior, y antioxidantes muy conocidos por sus beneficios para la salud. La bebida revela caracterlsticas sorprendentes en cuanto a la absorcion de los antioxidantes y al efecto de los antioxidantes en el organismo. En comparacion con el estado de la tecnica en el que las cantidades correspondientes de omega-3 y antioxidantes se ingieren en diferentes formulas, la bebida de acuerdo con la presente invencion muestra un suministro mejorado, una captation mejorada y un efecto mejorado sobre el estres oxidativo.
Tanto el aceite omega-3 como los antioxidantes contenidos en la bebida de acuerdo con la invencion son notablemente estables en la composicion, y el progreso de la rancidez y la perdida de los efectos antioxidantes son mucho mas bajos que en el producto conocido formulado como capsulas separadas. Un aspecto de la presente invencion se refiere a una bebida que comprende aceite fresco de origen marino en una emulsion de aceite en agua, en la que el aceite de origen marino tiene un valor TOTOX inferior a 10, anadiendose ademas al menos un antioxidante no presente de manera natural en dicha emulsion de aceite en agua. La expresion “aceite fresco de origen marino” describe un aceite preparado a partir de pescado fresco donde todas las etapas del proceso se realizan cuidadosamente y bajo un estricto control del oxlgeno de acuerdo con las normas funcionales para el aceite con el fin de prevenir la oxidacion del aceite. El aceite fresco de origen marino tendra un bajo estado oxidativo, revelando un aceite incoloro sin el olor ni el sabor caracterlsticos del pescado. El nivel de oxidacion dado como valor TOTOX (el doble del valor de peroxido (PV) mas el valor de anisidina (AV)) debe ser inferior a 10, preferentemente inferior a 8 y lo mas preferentemente inferior a 5. El aceite de origen marino presente en muchos complementos alimenticios de hoy en dla contiene aceite con un valor TOTOX mucho mas alto, normalmente de 20 a 30 o incluso mas alto. El aceite fresco de origen marino puede ser cualquier aceite rico en omega-3, por ejemplo, aceite de pescado, aceite de foca o aceite de krill. El aceite puede mezclarse con otros aceites poliinsaturados de origen vegetal tales como aceite de algas y aceite de hierbas tal como aceite de onagra y aceite de colza. La presente invencion proporciona una bebida en la que el contenido de aceite de origen marino es del aproximadamente 0,5 % al 5 % en peso basado en el peso total, mas preferentemente en el intervalo del 0,5 % al 3 %, mas preferentemente en el intervalo del 1,5 % al 2,5 %. La emulsion de aceite en agua se prepara mediante cualquier metodo convencional, preferentemente como se describe en las solicitudes noruegas n.° 20044542, 20053136 y 20055620, propiedad de las solicitantes. En dichas emulsiones, los antioxidantes estan presentes para estabilizar el aceite
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durante la produccion y el almacenamiento, no con el fin de inducir ningun efecto beneficioso para la salud en seres humanos. La fase acuosa de la emulsion de aceite en agua es preferentemente una fase acuosa que contiene antioxidantes naturales, por ejemplo, zumos de frutas/verduras, te verde, te blanco y te de hierbas. El zumo puede ser un zumo recien exprimido, o un zumo en forma de concentrado de zumo o pure de zumo diluido para obtener un zumo listo para su uso normal. La fase acuosa tambien puede contener protelnas tales como soja, protelnas de avena, protelnas de suero de la leche y/o protelnas de la leche.
De acuerdo con la invention, la expresion “antioxidantes anadidos o anadidos adicionales” debe entenderse como antioxidantes no presentes de manera natural en la fase acuosa u oleaginosa, sino que se anaden por separado. El antioxidante anadido adicional puede ser similar a uno o mas antioxidantes presentes de manera natural en la fase acuosa u oleaginosa, o diferentes. El al menos un antioxidante anadido adicional puede ser uno o una combination de dos o mas antioxidantes.
Los antioxidantes utiles de acuerdo con la presente invencion son antioxidantes conocidos por tener efectos beneficiosos para la salud en los seres humanos. Los antioxidantes utiles son, por ejemplo, astaxantina, vitamina E, vitamina C, betacaroteno, lutelna, licopeno, zeaxanfina, glutation, flavonoides, carotenoides, fenoles vegetales, polifenoles, coenzima Q10, reservatrol, curcumina, picnogenol, selen, cobre, cinc y magnesio. Los antioxidantes pueden presentarse individualmente o en una mezcla de dos o mas. Los antioxidantes se pueden seleccionar para satisfacer fines especlficos, es decir, los efectos deseables para la salud que se han de conseguir. Como ejemplos, una bebida de acuerdo con la invencion que comprende lutelna y zeaxantina tendra probablemente un impacto positivo en diferentes condiciones oculares. Una bebida de acuerdo con la invencion que comprende la curcumina rica en antioxidantes es adecuada para aliviar la inflamacion y combatir las infecciones. Una bebida de acuerdo con la invencion que comprende CoQ10 puede ser util para los trastornos neurologicos. Ademas, una bebida de acuerdo con la invencion que comprende picnogenol puede ser beneficiosa para reducir la artrosis. El betacaroteno anadido a dicha bebida puede ser util para los trastornos respiratorios, y la CoQ10 y el selenio seran utiles para los trastornos cardiovasculares.
En una realization de la presente invencion, se pueden anadir a la bebida prebioticos y/o probioticos.
En una realizacion de la presente invencion, la bebida puede ser carbonatada.
Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a un proceso de produccion de una bebida de acuerdo con la invencion que comprende las siguientes etapas:
a) se anaden antioxidantes y agentes aromatizantes liposolubles junto con emulsionante a la fase oleaginosa;
b) se anaden aditivos hidrosolubles a la fase acuosa;
c) se mezclan la fase oleaginosa y acuosa, obteniendose una emulsion homogenea;
d) se somete la emulsion obtenida, opcionalmente, a procesos de pasteurization y/u homogeneizacion;
e) se enfrla la emulsion obtenida y se usa para llenar recipientes desechables limpios; en el que todas las etapas se realizan bajo un estricto control del oxlgeno.
Como alternativa, el proceso de produccion de una bebida de acuerdo con la invencion comprende las siguientes etapas:
a) se anaden antioxidantes y agentes aromatizantes liposolubles a la fase oleaginosa;
b) se anaden aditivos hidrosolubles a la fase acuosa;
c) se mezclan la fase oleaginosa y acuosa, y se anade el emulsionante, seguido de un mezclado suave, obteniendose una emulsion homogenea;
d) se somete la emulsion obtenida, opcionalmente, a procesos de pasteurizacion y/u homogeneizacion;
e) se enfrla la emulsion obtenida y se usa para llenar recipientes desechables limpios;
en el que todas las etapas se realizan bajo un estricto control del oxlgeno.
Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a una bebida para su uso como bebida terapeutica. Otros aspectos se refieren al uso de una bebida de acuerdo con la invencion para la produccion de un preparado medicinal para la profilaxis o el tratamiento de enfermedades asociadas con el estres oxidativo elevado, tales como cancer, trastornos inflamatorios, trastornos neurologicos, trastornos cardiovasculares y trastornos respiratorios.
Se ha encontrado, sorprendentemente, que la nueva formula de bebida que combina acidos grasos omega-3 frescos y al menos un antioxidante anadido tiene un mayor efecto beneficioso para la salud en comparacion con los complementos alimenticios en los que el aceite de origen marino y los antioxidantes se ingieren en formulas separadas, por ejemplo, capsulas, plldoras o comprimidos. Se cree que la formulation especlfica de la invencion es de gran importancia, presentando los nutrientes esenciales y los agentes especlficos beneficiosos para la salud (acidos grasos poliinsaturados y antioxidantes anadidos) al sistema digestivo y a las celulas en un formato altamente beneficioso para las celulas y para el organismo.
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Figuras
La Figura 1 muestra el efecto de los aceites de origen marino sobre la peroxidacion lipldica en celulas U937. Las celulas se incubaron durante 48 h con diferentes concentraciones de acidos grasos omega-3 de diferentes proveedores como se muestra en la leyenda. Las concentraciones se indican en el eje X. El eje Y muestra los niveles relativos de peroxidacion lipldica usando la fluorescencia mediada por DPPP como un sensor. Se indica la desviacion tlpica.
REALIZACIONES
La invencion se ilustrara ahora mejor con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.
Bebida de acuerdo con la invencion
El aceite de origen marino usado en todos los preparados fue el aceite de salmon Xalar de Marine Harvest Ingredients, numero de lote: 099000F016. El valor TOTOX era inferior a 5, y la preparacion se realizo de acuerdo con las normas funcionales para el aceite.
Ejemplo 1 - comparativo
Bebida que comprende emulsion de omega-3 fresco de origen marino y astaxantina
%
Agua, purificada
42,31
Zumo de verduras
45,00
Extracto de romero 201
0,02
Toco 50
0,01
Grindsted 3115
1,00
Concentrado de zumo de manzana
10,00
Aroma de limon Nat
0,15
Astaxantina
0,01
Aceite de origen marino
1,50
Suma
100,00
Zumo de verduras Granini Grindsted 3115 de Dansico Aroma de limon Nat de Firmencih.
Haematococcus pluvialis en polvo de calidad alimentaria (complejo de astaxantina esterificado de biomasa del alga Haematococcus pluvialis), suministrado por: Sinochem Hebei corporation, 707 Lianmeng, Shijiazhuang, China.
- comparativo.
Bebida que comprende emulsion de omega-3 fresco de origen marino suministrada con vitamina C y E.
% kg
Extracto de romero 201
0,02 0,16
Toco 50
0,01 0,08
Grindsted 3115
1,00 8,00
Concentrado de manzana
6,05 48,40
Concentrado de manzana y granada
2,40 19,20
Concentrado de aronia
0,80 6,40
Concentrado de pera
6,49 51,92
Agua, purificada
81,00 648,00
Aroma de naranja/mandarina
0,10 0,80
Aroma de frambuesa
0,12 0,96
Vitamina C
0,01 0,80
Selenio
0,4
Vitamina E
0,08
Aceite mineral
2,00 16,00
Suma
100,00 800,80
Aroma de frambuesa natural de Firmenich
Aroma de naranja/mandarina natural de Firmenich
Vitamina E: D-alfa, D-delta, D-gamma tocoferol y D-gamma tocotrenol
Vitamina C: Calsio-L-ascorbato (acido neutro)
Selenio: metionina de L(+)-selenio;
Todo de G.O. Johnsen
Ejemplo 3
5
10
Bebida que comprende acidos grasos omega-3 frescos de origen marino emulsionados, y licopeno y lutelna.
%
Extracto de romero 201
0,020
Toco 50
0,01
Grindsted 3115
1,00
Protelna de suero lacteo
0,45
Concentrado de manzana
6,23
Concentrado de granada
2,40
Concentrado de aronia
0,88
Concentrado de pera
5,56
Agua, purificada
81,48
Aroma de narania/mandarina
0,10
Aroma de frambuesa
0,20
Aceite de origen marino
1,50
Lyconat (licopeno al 6 %)
0,12
Lutenat (lutelna al 10 %)
0,05
Suma
100,00
Extracto de romero 201, Toco 50 y Grindsted 3115 de Dansico Protelna de suero lacteo de Arla Foods Agentes aromatizantes naturales de Firmenich Licopeno natural (Lyconat) de Vitatene Lutelna natural (Lutenat) de Vitatene
Ejemplo 4 - Comparativo
Bebida que comprende acidos grasos omega-3 frescos de origen marino emulsionados y lutelna.
%
Extracto de romero 201
0,020
Toco 50
0,01
Grindsted 3115
1,00
Concentrado de manzana
3,23
Concentrado de granada
1,40
Concentrado de uva blanca
2,56
Leche de soia
58,40
Agua, purificada
31,42
Aroma de albaricoque
0,25
Aroma de limon
0,10
Aceite de origen marino
1,50
Lutelna
0,11
Suma
100,00
Extracto de romero 201, Toco 50 y Grindsted 3115 de Dansico Agentes aromatizantes naturales de Firmenich Aceite de salmon para Marine Harvest Ingredients, TOTOX inferior a 5 y procesado de acuerdo con las normas funcionales para el aceite Lutelna natural (Lutenat OS al 10 %) de Vitatene, Italia
Ejemplo 5 - Comparativo
Bebida que comprende acidos grasos omega-3 frescos de origen marino emulsionados, y CoQ10 y selenio.
%
Extracto de romero 201
0,02
Toco 50
0,01
Protelnas de suero lacteo
0,35
5
10
15
20
25
30
35
40
45
%
Grindsted 3115
1,20
Concentrado de manzana
6,66
Concentrado de granada
1,90
Concentrado de aronia
2,56
Agua, purificada
84,15
Aroma de mangostan
0,25
Aroma de umbu
0,10
Aceite de origen marino
2,50
CoQ10(%)
0,30
Selenio
50 gg
Vitamina D
1,5 gg
Suma
100,00
Extracto de romero 201, Toco 50 y Grindsted 3115 de Dansico Agentes aromatizantes naturales de Cargill Selenio suministrado por: Sinochem Hebei corporation, 707 Liamneng, Shijazhuang, China Coenzima Q10 de DSM Vitamina D de G. O. Johnsen Protelna de suero lacteo de Arla Foods
Ejemplo 6
PROCESO DE PRODUCCION
1. Fase oleaginosa
Se mezcla el aceite con extracto de romero, Toco 50 (un preparado antioxidante favorable a la estabilizacion del aceite). Es importante que el aceite este protegido contra la oxidacion durante el procesamiento. A continuacion, se anade el emulsionante (Grindsted 3115) al aceite, se mezcla suavemente a temperatura ambiente hasta obtenerse una mezcla homogenea. Despues, se anaden los agentes aromatizantes.
2. Antioxidantes
Los antioxidantes liposolubles se mezclan con la fase oleaginosa y los antioxidantes hidrosolubles se mezclan con la fase acuosa antes del calentamiento. Opcionalmente, los antioxidantes hidrosolubles se mezclan con la fase acuosa despues del calentamiento a traves de sistemas especializados tales como Flexdose (solucion Tetra Pack), o se anaden a un deposito esteril a traves de un proceso ultrapuro.
3. Fase acuosa
Se llena un tanque con agua purificada y desionizada. Se anade la fase oleaginosa a la fase acuosa.
Opcionalmente, la fase oleaginosa puede mezclarse con la fase acuosa, tras lo que se anade el emulsionante y se obtiene una emulsion. A continuacion, se anaden los concentrados de fruta a la emulsion obtenida y se mezclan a fondo.
Como alternativa, se puede someter la emulsion obtenida a una pasteurization rapida (aproximadamente 90 °C durante 8 s), seguida de la homogeneizacion y el enfriamiento hasta una temperatura de 4 a 8 °C.
Finalmente, se usa la bebida para llenar recipientes asepticos hermeticos, preferentemente recipientes monodosis, por ejemplo, Tetra Brick de aproximadamente 200 ml, y se almacenan a 6-8 °C hasta su uso.
Se debe realizar un estricto control del oxlgeno en todas las etapas para evitar la oxidacion del aceite de origen marino.
EFECTOS QUE FAVORECEN LA SALUD DE LA BEBIDA DE ACUERDO CON LA INVENCION Materiales y metodos
Para investigar los efectos fisiologicos de la bebida de acuerdo con la invention, se ha analizado la oxidacion de los PUFA en membranas celulares. Se uso un sensor fluorescente de peroxidation lipldica denominado difenil-1- pirenilfosfina (DPPP) para evaluar la peroxidacion lipldica. La DPPP se incorpora rapidamente a la membrana celular y, tras la oxidacion, emite luz, que puede medirse con un fluorometro (Okimotoa et al., FEBS Letter, junio de 2000). Se analizaron y se compararon las muestras de acuerdo con la invencion y las muestras que contenlan aceite de pescado de capsulas de aceite de origen marino disponibles en el mercado.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Preparacion de las muestras
La bebida descrita en el Ejemplo 3 se uso y se identified como la muestra 1 = Smartfish. La bebida contiene 900 mg de omega-3 por cada 200 ml de bebida. La cantidad de licopeno y de lutelna es de 16 mg y 10 mg por cada 900 mg de omega-3, respectivamente.
Mejor antes de: 15-08-09. Sabor y olor a fruta fresca. No se pudo experimentar olor ni sabor a aceite de pescado. Aspecto jugoso rojo oscuro homogeneo.
Se prepararon muestras de referencia a partir de capsulas disponibles en el mercado que contenlan aceite de origen marino.
Muestra de referencia 1 = Triomega
Triomega (Lote n.°: 56416408; Midelfart) que contiene 620 mg de omega-3 por cada g de aceite. Mejor antes de: 0611-2010. Color: Claro. Olor: Debil pero detectable.
Muestra de referencia 2 = Omega 3.
Omega 3 (Lote n.°: 58212708, Eldorado) que contiene 570 mg de omega-3 por cada g de aceite. Mejor antes de: 2710-2010. Color: claro; Olor: debil pero detectable.
Muestra de referencia 3 = Direct Care
CAREMAX (Lote n.° 71105, Direct Care) que contiene 600 mg de omega-3 por cada g de aceite. Mejor antes de: octubre de 2009; Color marron; Olor: fuerte.
La muestra de referencia 1 y 2 esta disponible en las tiendas y se adquirio en una tienda de comestibles. La muestra de referencia 3 se ordeno a traves de Internet.
Se recogieron los aceites de origen marino de las capsulas con una jeringuilla y se mezclaron con el mismo emulsionante que se uso en la bebida de acuerdo con la invencion, es decir, Grindsted 3115. Se mezclaron 1,5 g de aceite de origen marino con 0,75 g de emulsionante (aceite de origen marino:emulsionante 2:1). Se anadio medio celular para dar un volumen total de 10 ml, proporcionando una emulsion de aceite en agua. La adicion del medio se siguio mediante agitacion con formacion de vortice.
Se anaden a la muestra 1 licopeno y lutelna. As! pues, los aceites de origen marino de las capsulas se complementaron con licopeno y lutelna para corresponder a la cantidad de licopeno y lutelna presentes en la muestra 1.
Se adquirieron el licopeno y la lutelna en Sigma-Aldrich y se disolvieron en DMSO (Sigma-Aldrich) hasta soluciones madre que contenlan 3,6 pg/pl o 2,2 pg/pl, respectivamente. Se anadieron 10 pl de las soluciones madre a 316 pl de aceite de origen marino de las muestras de referencia para conseguir cantidades correspondientes de licopeno y de lutelna como en la muestra 1 de la invencion. La siguiente Tabla 1 muestra la preparacion de soluciones madre y la adicion a las muestras de referencia.
Tabla 1: Preparacion de soluciones madre y adicion de licopeno y lutelna
Licopeno en DMSO Lutelna en DMSO Vol anadido a w-3 3.160 pM
Soluciones madre
3,6 pg/pl (1 mg/277 pl de DMSO) 2,2 pg/pl (1 mg/454 pl de DMSO) 10 pl de cada
Tabla 2: Vision de conjunto de la preparacion de las muestras
Omega-3 (w-3) Moles de w-3/g Licopeno Lutelna
Muestra 1 - Smartfish
900 mg/200 ml de zumo 14 pmol/g de zumo 16 mg/900 mg de w3 10 mg/900 mg de w3
Muestra de ref. 1 - Triomega
620 mg/g de aceite 1,94 mmol/g de aceite 11 mg/620 mg de w3 6,8 mg/620 mg de w3
Muestra de ref. 2 - Omega 3
570 mg/g de aceite 1,78 mmol/g de aceite 10,1 mg/570 mg de w3 10,1 mg/570 mg de w3
Muestra de ref. 3 - Direct care
600 mg/g de aceite 1,87 mmol/g de aceite 10,7 mg/600 mg de w3 10,7 mg/600 mg de w3
Para todas las muestras
18 pg/mg de w3 11 pg/mg de w3
Celulas
5
10
15
20
25
30
35
Celulas U937 (ATCC n.° CRL-1593.2™), una ilnea celular de monoblastos humanos, que se transfectan establemente con NF-kB-RE unido a luciferasa. Las celulas se cultivaron en RPMI + L-glut, FCS al 10 %, 2 x P/S, higromicina.
Se incubaron las celulas con la muestra 1 y la muestra de referencia 1-3 a concentraciones de acidos grasos omega-3 que variaban de 1 |jM a ~3000 |jM durante 48 horas. Las muestras se complementaron con lipoprotelna lipasa, que hidroliza y libera acidos grasos de la cadena principal de glicerol de los trigliceridos como se describe a continuacion.
Sonda para la peroxidacion lipfdica:
Se adquirio dipenil-1-pirenilfosfina (DPPP, D7894, lote n.° 29055W) en Invitrogen. PM: 386,43 g/mol, 5 mg. Excitacion/emision: 351/380 nm. Solucion madre: 5 mM (5 mg en 2,6 ml de DMSO).
Lipasa
Se anadieron 10 unidades de lipoprotelna lipasa de leche bovina (de Sigma-Aldrich, L2254, lote n.° 114K7430) a las celulas que contenlan las mayores concentraciones de acidos grasos omega-3 en los aceites de origen marino. Tras la dilucion de las muestras, se diluyo la lipasa correspondientemente. Por lo tanto, la concentracion mas baja de las muestras ricas en omega-3 (1 jM) contenla 0,003 unidades de lipoprotelna lipasa.
Tratamiento de las celulas y mediciones de la oxidacion de DPPP, LDH y contenido de protefnas
La muestra 1 de acuerdo con la invencion y las muestras de referencia 1-3 que contenlan licopeno y lutelna se prepararon como soluciones madre que contenlan 14.000 jM y 300.000 jM de acidos grasos omega-3, respectivamente. Se calcularon las concentraciones de acidos grasos omega-3 basandose en el contenido de omega-3 enumerado en las descripciones del producto. Dado que las muestras son aceites de pescado, los acidos grasos omega-3 se presentan a las celulas como trigliceridos, y no como acidos grasos libres. Se diluyeron mas, dando concentraciones finales en el medio celular que variaban de 1 a 3.160 jmol/l por triplicado (vease la Tabla 5 para la configuracion de la placa). Se anadieron licopeno, lutelna y lipoprotelna lipasa para diluir las muestras destinadas a las celulas con omega-3 3.160 jM, y se diluyeron mas de acuerdo con las Tablas 3 y 4. Se sembraron las celulas (105) en placas de 96 pocillos con 100 jl de medio. Antes de la adicion de las muestras, se cambio el medio y se anadieron a las celulas 50 jl de medio/pocillo. A continuacion, se anadieron 50 jl de las diferentes diluciones que contenlan todos los ingredientes indicados a las celulas. Las celulas se incubaron entonces durante 48 horas a 37 °C y se prepararon para la evaluacion de la fluorescencia de DPPP de acuerdo con un metodo ligeramente modificado descrito por Okimotoa (Okimotoa et al., FEBS Letter, junio de 2000).
Tabla 3: Diluciones de la muestra 1 de acuerdo con la invencion
Conc. (jM) de Omega-3 Vol (jl) Volumen medio (jl) Volumen total (jl)
Solucion madre de aceite
14.000 2.000
6.320* 450 550 1.000
2.000* 316 684 1.000
632* 316 684 1.000
200* 316 684 1.000
63,2* 316 684 1.000
20* 316 684 1.000
6,32* 316 684 1.000
2* 316 684 1.000
Tabla 4: Diluciones de las muestras de referencia 1-3
Conc. (jM) de Omega-3 Vol (jl) Volumen medio (jl) Volumen total (jl)
Solucion madre de aceite
300.000
6.320* 21 979 1.000
2.000* 316 684 1.000
632* 316 684 1.000
200* 316 684 1.000
63,2* 316 684 1.000
20* 316 684 1.000
6,32* 316 684 1.000
2* 316 684 1.000
5
10
15
20
25
30
*Las concentraciones se indican como el doble de la conc. final en el medio celular, porque se diluyo mas cuando se anadieron 50 pl de las soluciones a las celulas que contenian 50 pl de medio celular_____________________
Tabla 5: Configuracion de la placa; concentracion de Omega-3
DPPP
+ + + +
Lipasa
+ + + +
Muestra 1 “Smartfish” Muestra de ref. 1 “Triomega” Muestra de ref. 2 “Omega 3” Muestra de ref. 3 “Care direct”
1 1 2 | 3 CD LO 00 CD 10 | 11 | 12
A
3.160 pM 3.160 pM 3.160 pM 3.160 pM
B
1.000 pM 1.000 pM 1.000 pM 1.000 pM
C
316 pM 316 pM 316 pM 316 pM
D
100 pM 100 pM 100 pM 100 pM
E
31,6 pM 31,6 pM 31,6 pM 31,6 pM
F
10 pM 10 pM 10 pM 10 pM
G
3,16 pM 3,16 pM 3,16 pM 3,16 pM
H
1 pM 1 pM 1 pM 1 pM
Para las mediciones de DPPP, se lavaron las celulas 2 veces en solucion salina tamponada con fosfato y se anadio DPPP a una concentracion final de 50 pmol/l. Esto se realizo en condiciones de oscuridad para evitar la oxidacion inducida por la luz de DPPP. A continuacion, se midieron las celulas que contenian la DPPP para determinar la fluorescencia usando un espectrofluorlmetro (Spectramax Molecular Devices) 3 horas despues de la adicion de DPPP.
Las mediciones de protelnas se realizaron en lisados celulares despues de las evaluaciones de la DPPP. Las protelnas se midieron de acuerdo con un kit Bio-rad (ensayo de absorbancia colorometrica) y se usaron para calcular los valores relativos.
Resultados
La Tabla 6 muestra los valores fluorescentes normalizados de muestras de Smartfish, emulsion (control) y de referencia despues de la incubacion de celulas U937 durante 48 h. La fluorescencia se basa en la oxidacion de la DPPP con el consiguiente cambio en la intensidad de la fluorescencia. Los datos se presentan como valores normalizados corregidos para el contenido de protelnas en lisados celulares. Se indican ± desviacion tlpica.
Tabla 6
Concentracion es de Omega-3
Muestra 1 Smartfish Emulsion de control Muestra de ref. 1 Triomega Muestra de ref. 2 Omega 3 Muestra de ref. 3 Care direct
1 pM
DT de DPPP 100,0 ± 7,0 100,0 ± 7,9 100,0 ± 2,1 100,0 ± 4,7 100,0 ± 9,6
3,16 pM
DT de DPPP 98,0 ± 7,5 100,0 ± 8,0 97,7 ± 71,1 101,2 ± 8,6 101,6 ± 6,7
10 pM
DT de DPPP 97,6 ± 6,2 98,4 ± 3,8 106,2 ± 5,5 106,1 ± 13,3 111,9 ± 4,6
31,6 pM
DT de DPPP 102,2 ± 9,8 101,8 ± 2,1 106,0 ± 9,7 117,9 ± 17,0 114,9 ± 8,9
100 pM
DT de DPPP 95,1 ± 9,9 105,1 ± 3,7 98,5 ± 0,8 132,1 ± 23,5 121,7 ± 11,8
316 pM
DT de DPPP 94,2 ± 14,2 113,3 ± 3,7 107,2 ± 11,1 132,9 ± 19,2 137,1 ± 8,1
1.000 pM
DT de DPPP 97,2 ± 7,6 102,3 ± 11,5 110,6 ± 2,7 136,3 ± 43,6 168,9 ± 11,7
3.160 pM
DT de DPPP 95,2 ± 15,1 98,2 ± 9,2 121,9 ± 13,0 176,0 ± 31,7 239,1 ± 12,8
Efecto de los aceites de origen marino en la peroxidacion lipidica en celulas U937
Los resultados muestran que no se observo peroxidacion lipldica detectable en las celulas incubadas con la muestra de acuerdo con la invencion en ninguna de las dosis usadas, en comparacion con los controles que recibieron solo el medio celular (datos no mostrados) o una emulsion sin aceite anadido. Para las muestras de referencia, se encontro un aumento dependiente de la dosis en la peroxidacion lipldica. En particular, el grado de peroxidacion lipldica coincidio con el olor y el aspecto de color de los productos de aceite de origen marino. El olor y el color son indicativos de la oxidacion del aceite. La adicion de licopeno y lutelna a los aceites a concentraciones comparables a
5
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45
las de la muestra 1 de acuerdo con la invencion no fue suficiente para inhibir la peroxidacion lipldica.
Como se observa en la Tabla 6 y en la Figura 1, no se observo ningun efecto en la fluorescencia mediada por DPPP con las dos concentraciones mas bajas, es decir, 1 pM y 3,16 pM de la muestra de acuerdo con la invencion o las muestras de referencia. Esto indica que a estas concentraciones no se ha producido ninguna peroxidacion lipldica detectable en la membrana celular. A mayores concentraciones, se observa un debil aumento para todos los aceites, a excepcion de la muestra de acuerdo con la invencion. De 10 pM en adelante, parece ser evidente un cambio gradual en la senal. A 100 pM, hay una diferencia significativa entre la muestra 1 de acuerdo con la invencion y la muestra de referencia 3 (Care direct) (p = 0,045), mientras que se observa una tendencia para la muestra de referencia 1 (Triomega) y la muestra de referencia 2 (Omega 3). A 316 pM y 1.000 pM, se encontro una diferencia significativa entre la muestra de acuerdo con la invencion y todas las muestras de referencia. La diferencia fue aun mas pronunciada a la concentracion mas alta, es decir, a 3.160 pM. El grado mas alto de peroxidacion lipldica se encontro con la muestra de referencia 3 (Care direct), mientras que la muestra de referencia 1 (Triomega) dio el menor grado de peroxidacion lipldica de los tres productos de aceite de origen marino disponibles en el mercado. En particular, la muestra de acuerdo con la invencion no afecto a la peroxidacion lipldica a ninguna de las concentraciones usadas.
Los estudios realizados en seres humanos han demostrado que la ingestion de acidos grasos omega-3 como complementos puede alcanzar del 10 al 20 % de los acidos grasos totales en plasma (revision de Masson et al., J Cardiovasc. Med., 2007). Dado que las concentraciones en plasma de los acidos grasos totales como trigliceridos estan en el intervalo de 1-5 mM, las concentraciones en plasma de aceite de pescado pueden alcanzar de 100 a 1.000 pM tras la ingestion oral del aceite de pescado. En el presente estudio, se encontro una mayor peroxidacion lipldica en todas las muestras de referencia en este intervalo de concentraciones, que puede considerarse fisiologicamente relevante.
Sorprendentemente, los presentes inventores han encontrado que la Muestra 1 de acuerdo con la invencion ofrece una mayor proteccion contra la peroxidacion lipldica en comparacion con las muestras de referencia. No se encontro ningun cambio detectable en la peroxidacion lipldica para ninguna de las concentraciones usadas para la muestra 1. Se observo un aumento dependiente de la dosis en la peroxidacion lipldica para las tres muestras de referencia, a pesar de que el perlodo de caducidad de todas las capsulas no expiro, y todas las capsulas contenlan antioxidantes para estabilizar el aceite de pescado durante el almacenamiento. El efecto sobre la peroxidacion lipldica de los aceites de origen marino a base de capsulas difirio entre los proveedores. El olor mas fuerte del aceite de pescado y la coloracion del aceite (marron), que son indicativos de oxidacion, se encontraron en la muestra de referencia 3 (Care direct), que tambien dio lugar a mas peroxidacion lipldica. El perlodo de caducidad de este producto expira en octubre de 2009. Las muestras de referencia 1 y 2, que expiran en octubre/noviembre de 2010, tambien indujeron una peroxidacion lipldica significativa de las celulas. La adicion de licopeno y lutelna a las muestras de referencia evidentemente no proporciono proteccion suficiente para inhibir la peroxidacion lipldica.
Por lo tanto, la presente invencion proporciona una nueva formula de bebida en la que el aceite de pescado fresco y los antioxidantes anadidos protegen a las celulas contra el estres oxidativo de una manera mucho mas eficaz que los aceites de pescado disponibles en el mercado a los que se anadieron las cantidades correspondientes de antioxidantes. Como se cree que el estres oxidativo es responsable de una larga serie de enfermedades, esta nueva formula de bebidas tiene un gran potencial como bebida beneficiosa para la salud.

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Bebida caracterizada por que la bebida comprende aceite fresco de origen marino en una emulsion de aceite en agua, en donde el aceite de origen marino tiene un valor totox inferior a 10, y a la que se anade al menos un antioxidante no presente de manera natural en dicha emulsion de aceite en agua, en donde el contenido de aceite de origen marino es del 0,5 % al 5 % en peso basado en el peso total y en donde el al menos un antioxidante anadido es una combinacion de lutelna anadida y de licopeno anadido que no estan presentes de manera natural en las fases acuosa u oleaginosa, sino que se anaden por separado a la bebida.
  2. 2. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el valor totox es inferior a 8.
  3. 3. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 2, en la que el valor totox es inferior a 5.
  4. 4. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el contenido de aceite de origen marino es del 0,5 % al 3 % en peso basado en el peso total.
  5. 5. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 4, en la que el contenido de aceite de origen marino es de aproximadamente el 1,5 % al 2,5 % en peso basado en el peso total.
  6. 6. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la fase acuosa de la emulsion de aceite en agua comprende antioxidantes naturales que se encuentran presentes de manera natural en la fase acuosa.
  7. 7. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 6, en la que la fase acuosa es una base de zumo.
  8. 8. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 6, en la que la fase acuosa es una base de te.
  9. 9. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la fase acuosa comprende ademas protelnas.
  10. 10. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 9, en la que la protelna es protelna de suero lacteo.
  11. 11. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende ademas aceite vegetal poliinsaturado.
  12. 12. Bebida de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:
    %
    Extracto de romero 201
    0,020
    Toco 50
    0,01
    Grindsted3115
    1,00
    Protelna de suero lacteo
    0,45
    Concentrado de manzana
    6,23
    Concentrado de granada
    2,40
    Concentrado de aronia
    0,88
    Concentrado de pera
    5,56
    Agua, purificada
    81,48
    Aroma de naranja/mandarina
    0,10
    Aroma de frambuesa
    0,20
    Aceite de origen marino
    1,50
    Lyconat (licopeno al 6 %)
    0,12
    Lutenat (lutelna al 10 %)
    0,05
    suma
    100,00
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