ES2632941T3 - Coprecipitado de uno o más polifenoles estilbénicos en sólidos aniónicos laminares, sus aplicaciones y método de preparación relacionado - Google Patents

Abstract

Producto compuesto por uno o varios coprecipitados de polifenoles estilbénicos en sólidos aniónicos laminares, en donde: a) los polifenoles estilbénicos se seleccionan del grupo que consiste en trans-resveratrol; trans-3,5-dimetoxi-4'-hidroxiestilbeno; trans-3,5,4'- trimetoxiestilbeno; trans-3,5-dihidroxi-4'-metoxiestilbeno; trans-3,5-diacetil-4'-hidroxiestilbeno; trans-3,5,4'- triacetilestilbeno; trans-3,5-dihidroxi-4'-acetilestilbeno; trans-piceida; trans-pinosilvina; cis-resveratrol; raponticina; trans-piceatanol; rapontigenina; δ-viniferina; ε-viniferina; astringina; combretastatina A-1; y hopeafenol; b) sólidos aniónicos laminares significa: - hidrotalcitas, caracterizadas por la siguiente fórmula: [M(II)1-xM(III)x(OH)2]x+[Anx/ n]x- × mS, donde M(II) es un metal con valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; M(III) es un metal con valencia (III) preferiblemente elegido entre Al, Cr, Fe, V, Co; An- es un anión caracterizado por una carga negativa igual a n, que equilibra la carga positiva de las láminas; m es el número de moléculas de solvente (S), por lo general agua, cointercaladas, por unidad de fórmula del compuesto; - las sales de hidróxidos dobles (SHD) caracterizadas por la siguiente fórmula: [M(II)1-xM(II)1+x(OH)3(1-y)]x+[An-](1+3y)/n × mS, donde M(II) es un metal con valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; An- es un anión caracterizado por una carga negativa n, que equilibra la carga positiva de las láminas; m es el número de moléculas de solvente (S), cointercaladas, por unidad de fórmula del compuesto.

Description

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DESCRIPCION

Coprecipitado de uno o mas polifenoles estilbenicos en solidos anionicos laminares, sus aplicaciones y metodo de preparacion relacionado

1. Campo de aplicacion

En la presente invencion, se describe un nuevo producto (en adelante denominado «producto») formado por los compuestos que se definen en la reivindicacion 1, que presenta un incremento de la velocidad de disolucion en el medio acuoso al pH de los acidos gastricos, un incremento de la biodisponibilidad, una mayor fotoestabilidad y fluidez en comparacion con los polifenoles estilbenicos (en adelante denominados «principios activos de partida»).

El proceso para obtener este producto se basa en el desarrollo, en medio hidroalcoholico, de un coprecipitado tal y como esta definido en la reivindicacion 1.

El incremento de la velocidad de disolucion del coprecipitado de polifenoles estilbenicos y, por lo tanto, la mejor biodisponibilidad que el material de partida, hace que este producto sea el idoneo para preparar formulaciones con una mejorla de la actividad y permite su uso para aplicaciones diferentes. Esta invencion permite formulaciones y aplicaciones para el ambito farmaceutico, nutraceutico, alimentario, cosmeceutico y dermatologico, y para productos sanitarios. Si se tienen en cuenta los conocimientos actuales sobre la actividad de los polifenoles estilbenicos, en particular del resveratrol, las propiedades farmacocineticas mejoradas son las antioxidantes, antiinflamatorias, antivlricas, antidiabeticas, cardioprotectoras, neuroprotectoras, quimioprotectoras, antibioticas, antiisquemicas, antiobesidad, antihipertensivas, antineoplasicas, antitumorales y antiangiogenicas. De igual forma, destaca por su mayor capacidad para reducir el melanoma y la incidencia del cancer colorrectal, su mayor eficacia a la hora de regularizar la glucemia, la trigliceridemia y la cantidad de marcadores de inflamacion en los sujetos obesos, su capacidad para inhibir la actividad fosfodiesterasa, en particular la de tipo 4, y de esta forma, su uso en el tratamiento de las enfermedades pulmonares obstructivas cronicas. Este producto, que muestra una mayor fotoestabilidad que el principio activo de partida, es tambien particularmente idoneo para la produccion industrial y la conservacion (se le ha incrementado la vida util). Las observaciones anteriores se pueden extender a toda la clase de polifenoles estilbenicos y sus derivados menos hidrosolubles.

2. Estado de la tecnica

Desde un punto de vista estructural, los polifenoles son un grupo heterogeneo de compuestos que se generan en el metabolismo secundario de las plantas y que se caracterizan por la presencia de grupos fenolicos. Desde un punto de vista farmacologico y de la salud, la actividad de los polifenoles se puede resumir en las siguientes acciones: antioxidante, antineoplasica, antiteratogena, antiinflamatoria, antibacteriana y antivlrica (Visioli et al., 2011, «Polyphenols and human health: a prospectus». Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 5: 524-46). Un grupo de polifenoles que ha suscitado gran interes por sus propiedades saludables y farmacologicas esta representado por los polifenoles estilbenicos (Roupe et al, 2006, «Pharmacometrics of stilbenes: seguing towards the clinic». Curr. Clin. Pharmacol.: 1: 81-101). Los polifenoles estilbenicos son compuestos que estan caracterizados por la siguiente formula general (I):

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y multlmeros relativos, en la que A y B son iguales o diferentes y cada uno podrla representar un atomo de halogeno, un grupo amino, un grupo amido, un grupo de acido sulfonico, un grupo fosfato, un grupo carboxllico, -OR1 (en donde R1 podrla representar un hidrogeno o un grupo alquilo(C1-C5)), un resto de azucar, -OCOR2 (en donde R2 representa un grupo hidroxilo o un grupo alquilo(C1-C5)); n y m son iguales o diferentes y cada una es un entero de 1 a 5.

El resveratrol (numero de registro del Chemical Abstracts Service CAS 501-36-0) es un polifenol de estructura estilbenica que se puede hallar principalmente en la piel de las uvas y en el vino tinto, as! como en algunas especies de plantas, por ejemplo, Polygonum cuspidatum, en las que el farmaco esta presente en la ralz. El resveratrol existe en dos isomeros estructurales (cis- (Z) y trans- (E)), y muestra una inestabilidad caracterlstica a pH alcalino, mientras que las soluciones de trans-resveratrol son estables a valores de pH entre 1 y 7 solo cuando estan protegidas de la luz. Ademas, el resveratrol es un compuesto extremadamente fotosensible. Por ejemplo, el trans- resveratrol se convierte casi por completo en cis-resveratrol (aproximadamente el 90%) como resultado de la irradiacion durante 120 minutos con una longitud de onda de 366 nm (Trela y Waterhouse, J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 1253-1257).

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Los compuestos sobre la base del resveratrol, en particular en su forma trans (3,5,4'-trihidroxiestilbeno):

a) presentan actividad antioxidante, antiinflamatoria, antivlrica, cardioprotectora, neuroprotectora, quimioprotectora, antineoplasica, antiangiogenica,

b) protegen contra la infeccion y la isquemia,

c) reducen la obesidad y previenen el envejecimiento.

Las investigaciones con animales demostraron que el resveratrol reduce la incidencia del melanoma y del cancer colorrectal. Ademas, reduce la hipertension, la incidencia del infarto de miocardio, la glucemia y la trigliceridemia. En los sujetos humanos obesos y sanos, el tratamiento con el trans-resveratrol reduce la glucemia, la trigliceridemia y la cantidad de marcadores de inflamacion con un efecto similar al inducido por la restriccion calorica.

(J. M. Smoligal et al, 2011. «Resveratrol and health - A comprehensive review of human clinical trials». Molecular Nutrition & Food Research -Special Issue: Resveratrol - 55: 1129-1141. Vang et al., 2011. «What is new for an old molecule? Systemic review and recommendations on the use of resveratrol». PloS One. 2011: 6 (6). Timmers et al.,

2011. «Calorie restriction-like effects of 30 days of resveratrol supplementation on energy metabolism and metabolic profile in obese humans». Cell Metab. 14: 612-22).

Recientemente, se ha demostrado que el resveratrol es un inhibidor importante de la fosfodiesterasa IV (Park et al.,

2012. «Resveratrol ameliorates aging-related metabolic phenotypes by inhibiting cAMP phosphodiesterases». Cell. 3 de febrero de 2012, 148 (3): 421-33), lo que muestra su potencial terapeutico contra enfermedades tales como la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (Chong et al., 2011, «Phosphodiesterase 4 inhibitors for chronic obstructive pulmonary disease». Cochrane Database Syst Rev. 11 de mayo de 2011; (5): CD002309).

Los polifenoles estilbenicos y sus derivados, aunque son principios activos de gran interes farmacologico y para la salud, gracias a sus notables propiedades y aplicaciones, muestran llmites para su uso con respecto a su escasa biodisponibilidad. Esto es as! por ser poco hidrosolubles debido a su lipofilia y a la ausencia de grupos que se ionicen con facilidad. Por ejemplo, entre los polifenoles estilbenicos, el resveratrol muestra una biodisponibilidad escasa y variable causada por su poca solubilidad (Walle et al., 2004, «High absorption but very low bioavailability of oral resveratrol in humans». Drug Metab Dispos 32: 1377-82. Boocock et al., 2007. «Phase I dose escalation pharmacokinetic study in healthy volunteers of resveratrol, a potential cancer chemopreventive agent». Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 16: 1246-52.

La escasa biodisponibilidad del resveratrol depende de sus propias caracterlsticas qulmicas y flsicas, su poca solubilidad en los llquidos biologicos con los resultantes problemas de farmacocinetica, en particular durante la absorcion del resveratrol a nivel gastrointestinal.

Por lo tanto, la escasa biodisponibilidad limita la eficacia del principio activo (S. Da et al., 2008, «The impact of aqueous solubility and dose on the pharmacokynetic profiles of resveratrol». Pharmaceutical Research. 25: 25952600). El resveratrol es, de hecho, un compuesto poco hidrosoluble (aproximadamente 30 mg/l), pero muy soluble en etanol, y presenta una elevada capacidad de permear a traves de las membranas. De acuerdo con el sistema de clasificacion biofarmaceutico (SCB), esta colocado en la clase 2, que incluye los compuestos que son poco solubles y muy permeables (R. Lobenberg y Amidon 2000, «Modern bioavailability, bioequivalence and biopharmaceutics classification system. New scientifc approaches to international regulatory standards». European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 50, 3-12. Amidon et al., 1995, «A theoretical basis of a Biopharmaceutic Drug Classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo biavailability». Pharmaceutical Research, 12: 413-420, adoptado por la Agencia Estadounidense del Medicamento (la FDA) para definir los ensayos de disolucion de las formas solidas farmaceuticas para la liberacion inmediata). Las moleculas que pertenecen a esta clase muestran un numero de absorcion alto y un numero de disolucion bajo. Esto significa que la etapa que limita la velocidad de absorcion del principio activo esta representada por su velocidad de disolucion in vivo. En este caso, la velocidad de absorcion del principio activo depende mucho de las caracterlsticas de la formulacion, de parametros biologicos tales como el tiempo de vaciado gastrico, de las interacciones con los alimentos, de afecciones patologicas y fisiologicas del sujeto que lo ingiere, etc., y limita las propiedades saludables y farmacologicas.

Despues de la administracion oral, el resveratrol aparece en el plasma humano al cabo de 30 minutos, lo que indica que su sitio de absorcion corresponde tambien al sitio de absorcion gastrica. Ciertamente, la absorcion esta presente a nivel intestinal, donde se ha supuesto la presencia de un transporte activo para el resveratrol. La biodisponibilidad del resveratrol es muy variable. Por ejemplo, la concentracion en el plasma de un sujeto varon que se registra despues de la administracion de una dosis unica de resveratrol de 25 mg corresponde a 10 ng/ml, pero si la dosis se incrementa 20 veces (500 mg al dla), la concentracion del plasma solo se incrementa 7 veces (72,6 ng/ml). En otros estudios en los que se utilizo un modelo farmacologico basado en la administracion diaria de 150 mg durante un periodo de tiempo prolongado, se observaron mas discordancias en lo que se refiere a la biodisponibilidad del resveratrol: en uno de estos estudios, la concentracion plasmatica era igual a 231 ng/ml, mientras que en otros estudios era mucho mas baja (63,8 ng/ml) (Goldberg et al., 2003. «Absortion of three wine-related polyphenols in three different matrices by healthy subjects». Clin. Biochem. 36: 79-87. Boocock et al., 2007, «Phase I dose

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escalation pharmacokinetic study in healthy volunteers of resveratrol, a potential cancer chemopreventive agent». Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 16: 1246-52. Timmers et al., 2011, «Calorie restriction-like effects of 30 days of resveratrol supplementation on energy metabolism and metabolic profile in obese humans». Cell Metab. 14: 612-22. Almeida et al., 2009, «Pharmacokinetic and safety profile of trans-resveratrol in a rising multiple-dose study in healty volunteers». Mol. Nutr. Food Res. 53 Supl. 1: S7-15).

Para solucionar el problema de la biodisponibilidad del resveratrol, se han sugerido muchas estrategias (Amri A, Chaumeil J C, Sfar S, Charrueau C. «Administration of resveratrol: What formulation solutions to biavailability limitations?» J. Control Release. 10 de marzo de 2012; 158 (2): 182-93; solicitud de patente internacional WO 02/07591 A2.

En particular, la solicitud de patente internacional WO 02/07591 A2 describe la formation de un complejo hecho de resveratrol y algunos fosfollpidos (el «complejo») que incrementa la lipofilia y, en consecuencia, favorece la absorcion gastrointestinal del principio activo (p. 2. llnea 15). En concordancia con las propiedades de este complejo, el coeficiente de permeabilidad aparente, medido con el metodo de «la camara de Ussing», se incrementa hasta aproximadamente 8 veces (p. 5. tab. 2. ejemplo 1). La formacion del complejo se demuestra mediante estudios de espectroscopia (IR y H-RMN) que muestran la presencia de interacciones intermoleculares ocasionadas por las interacciones entre los grupos oxidrllicos del resveratrol y los fosfollpidos (p. 6. llnea 30).

Estos efectos no se atribuyen a la posibilidad de formar estructuras fosfolipldicas supramoleculares tales como micelas, liposomas, unilaminares o polilaminares, etc., pero podlan ser compatibles con una estructura micelar inversa, al tener en cuenta el solvente organico apolar utilizado (cloruro de acetileno, acetona, dioxano) y la ausencia de interacciones con cadenas lipofilas de fosfollpidos, lo que se demuestra mediante ensayos de espectroscopia.

El complejo identificado en la solicitud de patente internacional WO 02/07591 A2 es ceroso y es poco probable que se administre, mientras que esta invention propone un producto en forma de polvo, que presenta grandes capacidades de flujo y se puede administrar tal como esta, o mediante formulaciones tradicionales, tales como plldoras, capsulas, etc.

Otro llmite intrlnseco de la solicitud de patente internacional WO 02/07591 A2 reside en el incremento de la biodisponibilidad al incrementar la permeabilidad aparente, mientras que, al igual que ocurre con la molecula de clase 2 del SCB, la etapa limitante de los polifenoles estilbenicos, en particular del resveratrol y de sus derivados, esta representada por su velocidad de disolucion. Por lo tanto, la formacion de los complejos lipofilos o la solution oleosa basica (por ejemplo, capsulas blandas) no es probable que solucione los problemas de solubilidad (tal y como se hace en la presente invencion). Solo incrementa la capacidad de atravesar las membranas biologicas, es decir, la permeabilidad.

Finalmente, de un modo especlfico, los fosfollpidos actuan como «agentes que mejoran la permeabilidad» que producen, de acuerdo con algunos estudios, (Ilback et al., 2004. «Do surface-active lipids in food increase the intestinal permeabilty to toxic substances and allergenic agents?» Med. Hypotheses, 63 (4) 724-30), un incremento de la frecuencia de enfermedades tales como cancer, enfermedades cardiovasculares o diabetes, lo que mejora la permeabilidad de las sustancias toxicas o alergenicas, lo que reduce los efectos saludables de los polifenoles estilbenicos, tales como el resveratrol. La presente invencion permite, en cambio, conseguir una mayor biodisponibilidad a traves de un incremento importante de la velocidad de disolucion de los polifenoles estilbenicos con respecto a la permeabilidad de las membranas biologicas y su funcion como barrera qulmica y flsica de sustancias toxicas y de los alergenos.

La solicitud de patente internacional WO 2011/104667 describe preparaciones salinas de aminoacidos basicos y polifenoles como el resveratrol. En particular, la sal de resveratrol-L-arginina presenta un incremento de la concentracion maxima en el plasma en comparacion con la del resveratrol. Ademas, la sal de resveratrol-L-arginina presenta una mejor solubilidad aparente, medida por espectroscopia, que el resveratrol por si solo.

Las hidrotalcitas anionicas y las sales de hidroxidos dobles, que son solidos anionicos laminares, captaron la atencion gracias a sus diversas aplicaciones en el campo farmaceutico, sanitario, alimentario y cosmetico.

Las hidrotalcitas, tambien conocidas como arcillas anionicas o hidroxidos dobles laminares, son solidos laminares inorganicos que no contienen carbono organico y, gracias a su estructura qulmica, representan un solido que esta organizado desde el punto de vista espacial como una secuencia laminar (Cap. 1. vol. VII de Comprehensive Supramolecular Chemistry, Pergamon Press, Oxford, 1996). Al utilizar los metodos qulmicos es posible intercalar aniones organicos e inorganicos dentro de la region interlaminar de las hidrotalcitas. A continuation, las moleculas interpuestas en las hidrotalcitas quedan protegidas por reacciones de oxidation y fotodegradacion. Ademas, las moleculas interpuestas en las hidrotalcitas se han utilizado como sistemas de liberation modificados y vehlculo de farmacos (Carretero M. I, Lagaly G. (Eds.): «Clays and health clays in pharmacy, cosmetics, pelotherapy and environmental protection)). Appl. Clay. Sci. 36, 2007; Choy J. H., Park D. H., «Biomedical applications of layered double hydroxides in low-dimensional solids», D. W. Bruce, D. O'Hare, R. I. Walton (Eds.), capltulo 3, 2010).

Dos propiedades importantes de la interposition de compuestos son la caracterlstica acida y la hidrosolubilidad. Por

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desgracia, los compuestos que se caracterizan por ser poco hidrosolubles y/o por ser poco acidos (tales como los polifenoles, en particular el resveratrol) son dificiles de desprotonar, por lo que resulta muy complicada la intercalacion y conseguir las propiedades previamente descritas.

Una estructura de las hidrotalcitas se puede dar a la brucita o Mg(OH)2 que, despues de la sustitucion isomorfica del Mg (M(II)) por otro metal trivalente como (M(III)), adquiere un exceso de carga positiva equilibrada por los aniones localizados en la region entre capas (por ejemplo, Cl- o NO3-). La formula general de las hidrotalcitas, o hidroxidos dobles laminares, sinteticas se puede escribir como [M(II)i-xM(III)x(OH)2]x+[An' x/n]x" x mS, donde M(II) es un metal de valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; M(III) es un metal de valencia preferiblemente elegido entre Al, Cr, Fe, V, Co; An- es un anion caracterizado por una carga negativa igual a n, que equilibra la carga positiva de las laminas; m es el numero de moleculas del solvente (S), cointercaladas, por la formula unitaria del compuesto.

Las sales de hidroxidos dobles (SHD) son solidos anionicos laminares formados por una unica clase cationica caracterizada por la misma valencia, normalmente divalente, tal como Mg, Cu, Ni y Zn, en donde el sitio de intercambio anionico entre laminas esta formado por diferencias en la estructura de coordinacion (tetrahedrica u octahedrica) del cation divalente (Biswick et al., 2006, Journal of Solid State Chemistry 179: 49-55).

Los solidos anionicos laminares, desde un punto de vista estructural, son sistemas anisotropos y, cuando se analizan por difraccion de rayos X, muestran reflexiones relacionadas con una estructura cristalina, a partir de lo cual es posible adquirir informacion sobre la distancia entre las capas. Por ejemplo, la hidrotalcita de MgAl-NO3 presenta una reflexion tipica en los planos (003) que corresponden a una distancia entre capas de 8,9 A, mientras que despues del intercambio anionico del NO3 con furosemida, la hidrotalcita intercalada resultante (MgAl-furosemida) presenta una reflexion basal que corresponde al incremento de una distancia entre laminas igual a 22,2 A (Perioli et al., 2011, Applied Clay Science, 53, 696-703).

En algunos casos, la interaction entre las hidrotalcitas y la molecula hospedadora organica podria conducir a una distorsion de la estructura cristalina general, con la formation de estructuras poco organizadas o «amorfas», que difieren por la presencia de una hidrotalcita «intercalada» [la solicitud de patente internacional WO 2013/060738 A1, para fabricar productos para ser utilizados en el envasado para incrementar la vida util del alimento, describe un proceso para la preparation de un polimero compuesto por hidrotalcitas intercaladas con moleculas activas preparadas mediante el metodo de coprecipitacion mediante una reaction en una sola etapa. El coprecipitado de hidrotalcitas y el principio activo (entre los cuales se cita, aunque realmente no se utiliza, tambien el resveratrol, cuya selection como molecula esta limitada a una aplicacion como antioxidante) se consumen en un medio polimerico a traves de los metodos tradicionales de incorporation. El proceso de coprecipitacion en una unica etapa se lleva a cabo de principio a fin en una solution acuosa. Los productos de intercalacion obtenidos de esta manera muestran un espectro de difraccion de rayos X que se caracteriza por presentar picos amplios y no muy intensos como prueba de las deficiencias estructurales o de la poca cristalinidad].

La formula general de cualquier sal de hidroxido doble (SHD) se puede escribir como [M(II)1-xM(II)1+x (OH)3(1-y)]x+[An- ](1+3y)/n x mS, donde M(II) es un metal de valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; An es un anion caracterizado por una carga negativa n, que equilibra la carga positiva de las laminas; m es el numero de moleculas de solvente (S), cointercaladas, para la formula unitaria del compuesto.

3. Compendio de la invencion

En esta invencion se solucionan muchos de los problemas descritos en el estado de la tecnica sobre la biodisponibilidad de los polifenoles estilbenicos, entre ellos el resveratrol. Esto se hace posible mediante la coprecipitacion de uno o mas polifenoles estilbenicos, a pH alcalino, junto con los solidos anionicos laminares descritos mas arriba (sales de hidroxidos dobles (SHD) e hidrotalcitas) en un medio hidroalcoholico.

El producto obtenido presenta poca capacidad de cristalizacion (o defectos entre las capas) como resultado de un analisis llevado a cabo por difraccion de rayos X con espectrometria, que no muestra picos amplios e intensos. Asi pues, el polifenol estilbenico estructurado presenta una forma anionica, tal y como se pone de manifiesto con el espectro de IR (datos sin mostrar).

El producto objeto de esta invencion muestra una velocidad de disolucion mas rapida que los polifenoles estilbenicos, lo que queda reflejado en una mayor biodisponibilidad del principio activo.

Por lo tanto, el producto es en polvo, se caracteriza por una alta pureza, capacidad de fluir y estabilidad fotoquimica, lo que lo convierte en un producto extremadamente idoneo para los procesos industriales, sin tener que tratar con problemas de dosificacion (caracteristica que hace que este producto sea diferente de, por ejemplo, los descritos en la solicitud de patente internacional WO 02/07591 a2).

La mejora de la fotoestabilidad de este producto en comparacion con los polifenoles estilbenicos permite una mayor facilidad cuando llega a la production, dosificacion y conservation, tal y como se menciona en el estado de la tecnica, lo que permite una diferente aplicacion al campo farmaceutico, nutraceutico, alimentario y cosmeceutico, tal

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como:

a) preparacion de solidos para el uso oral y yugal: polvos, partlculas, granulos, partlcula, capsulas, plldoras, almendras azucaradas, goma de mascar, bolos, sellos, comprimidos, pastillas para chupar, chocolate medicinal;

b) preparaciones llquidas/semisolidas para el uso oral: jarabes, elixires, bizcochos, zumos, decocciones, suspensiones, emulsiones, mucllago, te de hierbas, vinos medicinales, apotemas, pociones;

c) preparaciones para aplicaciones cutaneas: cremas, unguentos pomadas, geles, emulgeles, lociones, linimentos, jabones medicinales, champus medicinales y no medicinales, piedra azul y lapices, cataplasma, emplastos, parches, aceites, sustancias oleosas, tinturas, vinos, vendas medicinales;

d) preparaciones auriculares y nasales: lavados de boca, gargarismos, lavados auriculares, conos auriculares, lavados nasales, torundas, aceites, sustancias oleosas, emulsiones, unguento, geles, emulgeles, lipogeles, comprimidos, pellculas, cataplasmas medicinales;

e) preparaciones oftalmicas: colirios, insertos oftalmicos, soluciones para lavado ocular;

f) preparaciones administradas a traves de las cavidades inferiores naturales, anal y vaginal: supositorios, capsulas, comprimidos, enemas, lavadores, enemas, irrigaciones, duchas, espumas, tampones, velas, supositorios vaginales, espumas, gel, emulgel, cremas, unguentos, pellculas, suspensiones, compresas, emplastos, anillos, tampones, tampones medicinales, calibres medicinales;

g) preparaciones para pulverizacion para el uso local, oral, yugal e inhalado.

Si se tienen en cuenta las mejores caracterlsticas biofarmaceuticas, la mayor biodisponibilidad, y tambien la mayor operabilidad de este producto y la escalabilidad del proceso de production, otro aspecto importante esta representado por el uso de este producto en el campo farmaceutico, nutraceutico, cosmeceutico, alimentario y medico.

Un rasgo caracterlstico de esta invention esta representado por la preparacion de un producto que incluye el trans- resveratrol coprecipitado en solidos anionicos laminares. La coprecipitacion se obtiene a pH alcalino en el medio hidroalcoholico despues de mezclar una solution hidroalcoholica que contiene trans-resveratrol y una solution hidroalcoholica que contiene sales de metales trivalentes (M III) o bivalentes (M II), o mezclas compuestas por sales de metales trivalentes y bivalentes. El procedimiento a traves del cual se fabrica el producto puede subdividirse en diferentes fases: I) preparacion de una solucion de trans-resveratrol; II) preparacion de una solucion de sales de metales trivalentes o bivalentes, o una mezcla de sales de metales bivalentes y trivalentes; III) coprecipitacion del trans-resveratrol en solidos anionicos laminares a pH entre 8 y 11 despues de mezclar las dos soluciones diferentes descritas en los puntos I y II; IV) separation del coprecipitado; V) lavado del coprecipitado; VI) evaporation de los solventes.

El incremento de la velocidad de disolucion del resveratrol producido mediante la presente invencion provoca un mejor comportamiento farmacocinetico, lo que determina una absorcion estable y un incremento de la biodisponibilidad del resveratrol, lo que permite un uso importante de sus propiedades saludables y farmacologicas.

4. Breve descripcion de las figuras

Figura 1. Caracterizacion del producto obtenido del procedimiento de coprecipitacion de acuerdo con la invencion descrito en el ejemplo 1. Figura 1A. Espectro de difraccion de rayos X por polvos del producto de coprecipitacion que resulta de la combination del resveratrol con sales de nitrato de Mg y Al. Los espectros de difraccion de rayos X marcados con los numeros 1 y 2 muestran la reflexion del coprecipitado obtenido antes (1) y despues (2) del lavado con etanol, mientras que los difractogramas, marcados con los numeros 3 y 4, muestran la reflexion de la hidrotalcita de nitrato de Mg/Al (4) y el resveratrol cristalino (3, pureza del 100%). Figura 1B. El analisis termogravimetrico define el porcentaje en peso de la carga de resveratrol del coprecipitado. La curva del grafico de la izquierda sugiere una perdida de peso durante el analisis termogravimetrico y define el peso en porcentaje de la carga de resveratrol, mientras que la curva del grafico a la derecha indica la senal del analisis diferencial termico (ADT), donde es posible observar una secuencia del proceso exotermico debido a la degradation del resveratrol.

Figura 2. Caracterizacion del producto obtenido del procedimiento de coprecipitacion de acuerdo con la invencion descrito en el ejemplo 2. Figura 2A. El espectro de difraccion de rayos X por polvos del producto de coprecipitacion del resveratrol con sales de cloruro de Mg y Al. Los espectros de difraccion de rayos X marcados como 1 y 2 muestran la reflexion del coprecipitado obtenido de acuerdo con el segundo ejemplo antes (1) y despues (2) del lavado con etanol, mientras que los espectros de difraccion de rayos X senalados como 3 y 4 muestran la reflexion de la hidrotalcita de cloruro de Mg y Al y el resveratrol cristalino (pureza al 98%). Figura 2B. El analisis termogravimetrico para calcular el porcentaje en peso del resveratrol en el coprecipitado. La curva del grafico de la izquierda revela una perdida de peso durante el analisis termogravimetrico para determinar el porcentaje en peso del resveratrol, mientras que la curva del grafico de la derecha muestra la senal del ADT, en donde se observa una

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secuencia de procesos exotermicos debido a la degradacion del resveratrol. Figura 2C. Analisis cromatografico de las muestras preparadas a partir del resveratrol cristalino (carril 1) o del coprecipitado de resveratrol descrito en el ejemplo 2 (carril 2). Las muestras estan preparadas en una solucion acuosa. Para liberar el resveratrol del coprecipitado en las hidrotalcitas anionicas, la solucion acuosa se acidifica a pH 1,2. Columna Luna Phenomenex Rp-18, eluyentes A)- H2O + TFA al 0,1% y B)- MeCN (Gradiente: 5 min: B al 5%; 20 min: B hasta el 95%; 5 min: B hasta el 5%, temperatura: 25 °C, velocidad de flujo del eluyente de 1,0 ml/min, detector: DAD (190-400 nm)).

Figura 3. Los coprecipitados de resveratrol muestran una mejor fotoestabilidad que el resveratrol cristalino. A) Espectro de absorcion del resveratrol cristalino. A) Espectros de absorcion del resveratrol en etanol sin irradiar (carril 1), irradiado durante 30 minutos (carril 2) y despues de la irradiacion adicional a 255 nm (carril 3). B) Espectros de absorcion del resveratrol cristalino antes de la irradiacion (carril 1) y despues de la radiacion a 340 nm durante 60 minutos (carril 2). C) Espectros de absorcion del resveratrol coprecipitado de acuerdo con el ejemplo 2 antes de la irradiacion (carril 1) y despues de la radiacion a 340 nm durante 120 minutos (carril 2).

Figura 4. El resveratrol coprecipitado muestra una mejor velocidad de disolucion que el resveratrol cristalino. A) La concentracion del resveratrol en la solucion durante el proceso de disolucion se sigue al espectrofotometro a una longitud de onda de 310 nm, y despues se realiza una recta de calibracion con el llquido gastrico simulado como blanco (r = 0,9996). Los puntos experimentales marcados como numero 1 indican la disolucion de resveratrol tal como es (pureza al 98%, Polygonum cuspidatum), mientras que los del resveratrol coprecipitado estan marcados como numero 2. B) Detalle del panel A. La concentracion se expresa como el porcentaje de resveratrol utilizado para el estudio de liberacion (132 mg). La velocidad de disolucion se mide para el tampon gastrico acido (pH 1,2, XII FU italiano) en una condicion sin sumergir a una temperatura de 37 °C y mientras se agita (agitacion de 60 rpm). La tabla 1 presenta los valores numericos mostrados en los paneles A y B.

5. Descripcion detallada de la invencion

El procedimiento a traves del cual los polifenoles estilbenicos, entre ellos el resveratrol, y sus derivados de coprecipitacion, se pueden subdividir en diferentes fases: I) Preparacion de una solucion hidroalcoholica de uno o varios polifenoles estilbenicos; II) Preparacion de una solucion hidroalcoholica compuesta por sales de metales trivalentes o divalentes, o una mezcla de divalentes y trivalentes; III) Coprecipitacion de uno o mas polifenoles estilbenicos en solidos anionicos laminares a un pH entre 8 y 11 despues de mezclar las soluciones previamente descritas en los puntos I) y II); IV) separacion del coprecipitado; V) lavado del coprecipitado; VI) evaporacion de los solventes.

Respecto a la preparacion de una solucion compuesta por uno o varios polifenoles estilbenicos descritos en la fase I), esta solucion se puede preparar mediante la disolucion de uno o mas polifenoles estilbenicos en una mezcla hidroalcoholica a una concentracion minima de 1 micromolar hasta una concentracion maxima igual a la concentracion saturada de los polifenoles estilbenicos dentro de la solucion correspondiente. La solucion se mantiene en agitacion en un recipiente con flujo de nitrogeno y en la oscuridad. El pH de esta solucion se puede incluir entre 8 y 11, a traves de la adicion de bases, tales como NaOH (para mantener el pH entre 8 y 11).

Se considera que los polifenoles estilbenicos son las moleculas caracterizadas por la siguiente formula general (I):

imagen2

Ejemplos de compuestos de formula (I) son: trans-resveratrol (C14H12O3; numero CAS 501-36-0); trans-3,5-dimetoxi- 4'-hidroxiestilbeno (C16H16O3; n.° CAS 537-42-8); trans-3,5,4'-trimetoxiestilbeno (C17H18O3; n.° CAS 22255-22-7); trans-3,5-dihidroxi-4'-metoxiestilbeno (C15H14O3; n.° CAS 33626-08-3); trans-3,5-diacetil-4'-hidroxiestilbeno

(C13H16Os); trans-3,5,4'-triacetilestilbeno (C2oH13O6); trans-3,5-dihidroxi-4'-acetilestilbeno (C16H14O4); trans-piceida (C20H22O8); n.° CAS 27208-80-6); trans-pinosilvina (C14H12O2; n.° CAS 102-61-4); cis-resveratrol (C14H12O3, n.° CAS 61434-67-1); raponticina (C21H24O9; n.° CAS 155-58-8); trans-piceatanol (C14H12O4; n.° CAS 10083-24-6); rapontigenina (C15H14O4; n.° CAS 500-65-2); delta-viniferina (C28H22O6; ID de ChemSpider: 552752); epsilon- viniferina (C23H22O6; n.° CAS 62218-08-0); astringina (C20H22Og; n.° CAS 29884-49-9); combretastatina A-1 (C18H20O6; n.° CAS 109971-63-3); hopeafenol (C66H42O12; n.° CAS 17912-85-5).

Los polifenoles estilbenicos utilizados para la preparacion de soluciones pueden ser de origen natural o sintetico, caracterizados por niveles diferentes de pureza que oscilan del 20 al 100% en peso, preferiblemente del 50 al 100%, y aun mas preferiblemente del 98 al 100%. Los polifenoles estilbenicos pueden estar en la configuracion cis o trans,

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preferiblemente en la configuracion trans.

En cuanto a la preparacion de soluciones de sales caracterizadas por metales trivalentes o divalentes, o una mezcla compuesta de ambas especies de metales, descrita en la fase II), esta solucion se puede conseguir mediante la disolucion de las correspondientes sales en una mezcla hidroalcoholica. Las sales son compuestos binarios formados por un metal divalente o trivalente y un anion, preferiblemente elegido entre carbonatos, sulfatos, hidroxidos, fosfatos, fluoruros, cloruros, bromuros, nitratos, yoduros, percloratos. Ademas, el metal divalente (II) es un metal con valencia preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu, mientras el metal trivalente (III) es un metal con valencia preferiblemente elegido entre Al, Cr, Fe, V, Co. La solucion se puede preparar mediante la disolucion de una sal, preferiblemente formada por un metal divalente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu o mas sales (normalmente dos) de metales divalentes o trivalentes. En el caso de la solucion, esta compuesta por dos sales, una de las cuales procede de un metal divalente y la otra de un metal trivalente, la estequiometrla esta organizada para tener una razon molar porcentual de metal divalente en comparacion con los moles totales de metales (moles totales de divalentes y trivalentes) incluidos en un margen del 1 al 99%, o preferiblemente del 30 al 70%, y aun mas preferiblemente del 60 al 65%.

Una solucion hidroalcoholica esta formada por agua y uno o mas alcoholes, preferiblemente solo uno, caracterizado por una composicion porcentual en volumen de alcohol con respecto al volumen total (agua + alcoholes) que oscila del 1 al 99%, preferiblemente del 25 al 75%, y aun mas preferiblemente del 45 al 55%. Entre los alcoholes, los que se pueden utilizar son: metanol, etanol, propanol, isopropanol, tert-butanol y n-butanol.

La solucion acuosa presenta un residuo conocido y estable, y esta preferiblemente destilada, desionizada y desprovista de iones de carbonato.

Con respecto al procedimiento de coprecipitacion descrito en el punto III), este se obtiene mediante la mezcla de las soluciones descritas en las fases I) y II), en flujo de nitrogeno, en un entorno en la oscuridad y con la adicion, si es necesario, de una base elegida entre NaOH, KOH, CsOH, Mg(OH)2, para llevar el pH a un margen que abarca de 8 a 11, preferiblemente de 9 a 10, y aun mas preferiblemente a 9,5. La base se puede anadir bien en forma solida o en solucion acuosa, desprovista de carbonato en un intervalo de tiempo que abarca de 0,1 a 24 horas, o mejor de 1 a 1 hora e incluso mejor de 2 a 4 horas. La temperatura se puede mantener entre 15 y 90 °C, preferiblemente entre 15 y 70 °C, y aun mas preferiblemente entre 20 y 50 °C.

El procedimiento de separacion descrito en el punto IV) se puede realizar bien a traves de la sedimentacion, la centrifugacion, la filtracion normal, o por filtracion a presion reducida. El proceso de lavado del coprecipitado descrito en el punto V) se obtiene gracia a la resuspension del precipitado con agua o alcohol, preferiblemente etanol, o mezclas hidroalcoholicas, para retirar los polifenoles estilbenicos que se retroprecipitan durante la slntesis y que no estan fijados a un solido anionico laminar. Esta suspension se filtra dos o cuatro veces como esta descrito en el punto IV).

El procedimiento de la evaporacion de los solventes descrito en el punto VI) consiste en retirar, para el compuesto obtenido en el punto V), el solvente, secarlo con el uso de una estufa de aire a una temperatura comprendida entre 20 y 60 °C, preferiblemente entre 30 y 50 °C, e incluso mas preferiblemente a 40 °C, o traves de la retirada del solvente a una presion reducida.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: preparacion del coprecipitado de resveratrol con las hidrotalcitas de nitrato de Mg y Al.

Se prepara la solucion 1 mediante la disolucion de 641 mg de Mg(NO3)2 • 6H2O, 401,4 mg de Al(NO3)3 • 9H2O en 18 ml de agua desionizada. Se prepara la solucion 2 mediante la disolucion de 300 mg de resveratrol (100 en pureza de origen sintetico) en 18 ml de solucion hidroalcoholica. A la segunda solucion, que se mantiene en la oscuridad y esta en agitacion y con flujo de nitrogeno, se le anaden 10 ml de la solucion de NaOH a 1 M (hasta un pH entre 10 y 11). Despues, a la segunda solucion se le anaden 16 ml de la primera solucion, junto con 6 ml de NaOH a 1 M para mantener el pH entre 10 y 11, mientras que se realizan estas adiciones. El precipitado solido se deja digerir durante 15 minutos y a continuacion se separa por centrifugacion. El solido recuperado se ha de lavar dos veces con 30 ml de agua desionizada y, finalmente, con 20 ml de etanol. A continuacion, se seca el producto a 50 °C.

El analisis por difraccion de rayos X revela la ausencia de cristales de resveratrol despues del lavado (comparense la figura 1A negra y roja, respectivamente, antes y despues del lavado), mientras que es posible observar las senales relativas a las reflexiones de las hidrotalcitas de Mg y Al, en forma de nitrato. La anchura de las senales se debe a la poca capacidad de cristalizacion de la matriz hidrotalcltica que se puede decir que es una fase amorfa.

Las senales estrechas del coprecipitado sin lavar se atribuyen al resveratrol cristalino, ya que son superponibles basandose en el analisis por difraccion de rayos X, realizado sobre el resveratrol puro (comparense las trazas 1 y 3 de la figura 1A).

El analisis termogravimetrico muestra dos etapas de degradacion (figura 1B). A partir de la curva de la calda de

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masa (traza roja), se puede observar una primera etapa (hasta 220 °C) debida a la perdida de agua de cristalizacion, y a 1200 °C se puede observar la perdida del agua de constitucion (deshidroxilacion) junto con la descomposicion de los aniones entre capas (nitrato) y el resveratrol. La presencia del resveratrol se confirma mediante la senal del ADT (traza negra), en la que se puede observar una secuencia de procesos exotermicos debido a la degradacion del resveratrol.

Mediante computaciones que tienen en cuenta la presencia de la hidrotalcita de nitrato de Mg y Al, que presenta la siguiente formula Mg2Al(OH)6(NO3) • 2H2O, el porcentaje de carga de resveratrol en la muestra equivale al 30% del peso.

Ejemplo 2: preparacion del coprecipitado de resveratrol con la hidrotalcita de cloruro de Mg y Al

Se prepara la solucion 1 mediante la disolucion de 258,3 mg de AlCl3 • 6H2O y 508,3 mg de MgCl2 • 6H2O en 18 ml de agua desionizada. La solucion 2 se prepara mediante la disolucion de 300 mg de resveratrol (98% de pureza de origen natural, Polygonum cuspidatum) en 18 ml de etanol. Se obtiene una solucion hidroalcoholica al mezclar la primera y la segunda solucion, y manteniendola en un entorno oscuro, en agitacion y con flujo de nitrogeno. A esta solucion, con flujo de nitrogeno, se le tienen que anadir 10 ml de la solucion de NaOH a 1 M hasta un pH entre 10 y 11. El solido precipitado se deja digerir durante 15 minutos y a continuacion se separa por centrifugacion. El solido recuperado se tiene que lavar 2 veces con 30 ml de agua desionizada y finalmente con 20 ml de etanol. Finalmente, el solido recuperado se seca a 50 °C.

El analisis por difraccion de rayos X revela la ausencia de cristales de resveratrol despues del lavado (comparense la figura 2A negro y rojo, respectivamente, antes y despues del lavado), mientras que las senales relacionadas con las reflexiones de la hidrotalcita de Mg y Al en forma de cloruro continuan siendo persistentes. La anchura de las senales se debe a la poca capacidad de cristalizacion de la matriz hidrotalcltica, que se puede atribuir a una fase amorfa. Las senales estrechas presentes en el coprecipitado sin lavar se pueden atribuir al resveratrol cristalino, al ser superponibles por el analisis por difraccion de rayos X, realizado con el resveratrol natural caracterizado por un 98% de pureza (comparense las trazas 1 y 3 de la figura 2A). El analisis termogravimetrico muestra dos etapas de degradacion (figura 2B). A partir de la curva de la calda de masa (traza roja), se puede observar una primera etapa (hasta 220 °C) debida a la perdida del agua de cristalizacion, y a 1200 °C se puede observar la perdida de agua de constitucion (deshidroxilacion) junto con la descomposicion de los aniones entre capas (cloruro y resveratrol). La presencia del resveratrol se confirma mediante la senal del ADT (traza negra), en la que es posible observar una secuencia de procesos exotermicos debido a la degradacion del resveratrol. Mediante la realizacion de computaciones que tienen en cuenta la presencia de la hidrotalcita de cloruro de Mg y Al, caracterizada por la siguiente formulacion Mg2Al(OH)6(Cl) • 2H2O, el porcentaje de carga del resveratrol de la muestra equivale a 23,5 en peso.

Se realiza un analisis cromatografico por HPLC (figura 2C) sobre muestras preparadas con el resveratrol coprecipitado descrito en el ejemplo 2 y el resveratrol de partida (98% de pureza de origen natural, Polygonum cuspidatum). Los cromatogramas resultan similares en terminos de calidad: el trans-resveratrol representa la principal especie qulmica junto con otras pocas impurezas tambien presentes en el resveratrol de partida. Juntos, estos analisis indican que el resveratrol no se degrada durante la fase de preparacion del coprecipitado.

En la solucion acuosa, el trans-resveratrol muestra fotoinestabilidad, lo que queda demostrado por la fotoconversion trans-cis despues de una irradiacion de 30 minutos a 340 nm (figura 3A, traza negra: sin irradiar; traza verde: irradiado).

En su forma cristalina, el resveratrol resulta estar fotodegradado, como queda demostrado por la variacion de absorcion despues de una irradiacion de 60 minutos a 340 nm (figura 3B, traza roja: sin irradiar; traza negra: irradiado). El resveratrol coprecipitado muestra una mayor fotoestabilidad. Por lo tanto, despues de la irradiacion (en las mismas condiciones experimentales en las que se irradian la solucion de resveratrol y el resveratrol cristalino), el espectro registrado en la luz reflejada se puede superponer con el de una muestra sin irradiar (no se muestran los datos). Se observan pocos cambios despues de una irradiacion de 120 minutos a 340 nm (figura 3C, traza negra: sin irradiar; traza roja: irradiado).

El resveratrol coprecipitado se disuelve con mayor rapidez en comparacion con el resveratrol cristalino. Las pruebas de disolucion en los llquidos que imitan el jugo gastrico (pH 1-2, FU) a 37 °C, se agitan y se caracterizan con una velocidad de rotacion de la paleta igual a 60 rpm en condiciones sin sumergir. La solubilidad del resveratrol en el jugo gastrico (pH 1,2, FU) determinada tanto mediante el peso indirecto y la dosis de UV, resulta ser de 44 mg/l. Para la prueba de disolucion, se utilizo una cantidad igual a 132 mg de resveratrol equivalente a 134,7 mg de resveratrol cristalino (98% de pureza de origen natural, Polygonum cuspidatum) y 561,6 mg del resveratrol coprecipitado obtenido como en el ejemplo 2 (carga de resveratrol igual al 23,5% en peso). A la disolucion del resveratrol le siguieron tomas en un momento predeterminado y la determinacion de su concentracion, mediante el empleo de un ensayo espectrofotometrico a una longitud de onda de 310 nm. En la figura 4, se solapan la velocidad de disolucion del resveratrol cristalino y la del coprecipitado. Observese que el resveratrol coprecipitado se disuelve mejor que el resveratrol de partida (comparense los datos numericos de la tabla de la figura 4).

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Ejemplo 3 (comparacion): siguiendo el procedimiento descrito en la solicitud de patente internacional WO 2013/060738 A1, se prepara un coprecipitado de resveratrol con hidrotalcitas de nitrato de Mg y Al. Se obtiene una solucion mediante la disolucion de 641 mg de Mg(NO3)2 • 6H2O y 401,4 mg de Al(NO3)3 • 9H2O en 18 ml de agua desionizada. Se prepara una segunda solucion mediante la disolucion de 1 mg de resveratrol en 18 ml de agua (presencia de cristales de resveratrol, lo que indica que es imposible preparar una solucion caracterizada por una mayor concentracion). Observese que, en la tecnica utilizada en la solicitud de patente internacional WO 2013/060738 A1, se preparan las soluciones anionicas, pero esta tecnica no se puede llevar a cabo porque el resveratrol tiene un pKa alto (aproximadamente 10) y, por lo tanto, no se ioniza con facilidad, y a pH alcalino, que podia contribuir para conseguir una mayor concentracion del resveratrol en su forma ionica. Sin embargo, esto serla inestable, lo que se demuestra inmediatamente por un cambio de color (lo que indica fotodegradacion, en concordancia con la bibliografla). La solucion final se obtiene en una unica etapa, con la mezcla de las dos soluciones acuosas diferentes previamente descritas (metal y resveratrol) y la adicion de una solucion de NaOH a 1 M hasta pH 7,5 en 4 horas. Finalmente, se filtra la mezcla de la reaccion y se lava 3 veces con 30 ml de agua desionizada y, al final, se seca a 50 °C.

Con el uso del analisis TG y al tener en cuenta la presencia de la hidrotalcita de nitrato de Mg y Al, que presenta la siguiente formula qulmica: Mg2Al(OH)6(NO3) • 2H2O, el porcentaje de la carga de resveratrol es poco probable que se pueda apreciar (menos del 1% en peso).

Ejemplo 4: preparacion de un coprecipitado de polifenoles estilbenicos compuesto por trans-resveratrol y trans- 3,5,4'-triacetilestilbeno (C20H18O6) con hidrotalcitas de nitrato de Mg y Al. Se prepara el frans-3,5,4'-triacetilestilbeno (C20H18O6) mediante la adicion de 1,5 ml (14,7 mmol) de anhldrido acetico a una solucion de 0,88 mmol de resveratrol (en 0,5 ml de piridina. El producto deseado se obtiene despues de 40 minutos de agitacion a temperatura ambiente, se precipita desde la solucion de reaccion al enfriarla en agua equilibrada con hielo. El precipitado filtrado tiene una masa de 230 mg y se identifica por espectroscopia 1H-RMN. Para preparar el coprecipitado que se considera, se tiene que preparar una primera solucion mediante la disolucion de 641 mg de Mg(NO3)2 • 6H2O, 401,4 mg de Al(NO3)3 • 9H2O en 18 ml de agua desionizada. A continuacion, una segunda solucion mediante la disolucion de 150 mg de resveratrol y 230 mg de frans-3,5,4'-triacetilestilbeno en 18 ml de solucion hidroalcoholica. A la segunda solucion, mantenida en un entorno en oscuridad, agitada y con flujo de nitrogeno, se le anaden 3 ml de una solucion de NaOH a 1 M (hasta que el pH este entre 10 y 11). A continuacion, se le tienen que anadir 16 ml de la primera solucion junto con 3 ml de NaOH a 1 M para mantener un valor de pH entre 10 y 11 durante las adiciones. El precipitado solido se deja digerir durante 15 minutos y, a continuacion, se separa por centrifugacion. El solido recuperado se lava dos veces con 30 ml de agua desionizada y una vez con 20 ml de etanol. Este producto se seca a 50 °C. Mediante el analisis de TG y al tener en cuenta la presencia de la hidrotalcita de nitrato de Mg y Al, la siguiente formula qulmica: Mg2Al(OH)6(NO3) • 2H2O, el porcentaje de la carga de resveratrol y del frans-3,5,4'- triacetilestilbeno en la muestra es de aproximadamente del 40% en peso.

Ejemplo 5: preparacion del coprecipitado de 5-viniferina (C28H22O6; ID de ChemSpider: 552752) con las hidrotalcitas de cloruro de Mg y Al. Se ha de preparar la solucion 1 mediante la disolucion de 258,3 mg de AlCh • 6H2O y 508,3 mg de MgCh • 6H2O en 18 ml de agua desionizada. Se ha de preparar la solucion 2 mediante la disolucion de 600 mg de 5-viniferina en 18 ml de etanol. La solucion hidroalcoholica, obtenida al mezclar la primera y la segunda solucion, se mantiene en una habitacion a oscuras, agitada y en presencia de flujo de nitrogeno. A esta solucion, se le tienen que anadir 10 ml de la solucion de NaOH a 1 M hasta que el pH este entre 10 y 11, con flujo de nitrogeno. El solido precipitado se deja digerir durante 15 minutos y, a continuacion, se tiene que separar por centrifugacion. El solido recuperado se lava 2 veces con 30 ml de agua desionizada y una vez con 20 ml de etanol. Finalmente, se tiene que secar a 50 °C. Mediante el analisis de TG y al tener en cuenta la presencia de la hidrotalcita de cloruro de Mg y Al, caracterizada por la siguiente formula qulmica: Mg2Al(OH)6(Cl) • 2H2O, el porcentaje de la carga de la 5- viniferina en la muestra es de aproximadamente del 35,5% en peso.

Ejemplo 6: preparacion del coprecipitado de la combretastatina A-1 (C18H20O6; n.° CAS 109971-63-3) con las hidrotalcitas de nitrato de Mg y Al. Se ha de preparar la primera solucion mediante la disolucion de 641 mg de Mg(NO3)2 • 6H2O, 401,4 mg de Al(NO3)3 • 9H2O en 18 ml de agua desionizada. Se ha de preparar la segunda solucion mediante la disolucion de 300 mg de combretastatina A-1 en 18 ml de solucion hidroalcoholica. A la segunda solucion, mantenida en una habitacion a oscuras, en agitacion y en presencia de flujo de nitrogeno, se le tienen que anadir 3 ml de la solucion de NaOH a 1 M (hasta que el pH este entre 10 y 11). Despues, se le tienen que anadir 16 ml de la primera solucion con 6 ml de NaOH a 1 M para mantener el valor de pH entre 10 y 11 durante la coprecipitacion. El solido precipitado se deja digerir durante 15 minutos y a continuacion se separa por centrifugacion. El solido recuperado se lava 2 veces con 30 ml de agua desionizada y una vez con 20 ml de etanol. A continuacion, se seca el producto a 50 °C. Mediante el analisis de TG y al tener en cuenta la presencia de la hidrotalcita de nitrato de Mg y Al, caracterizada por la siguiente formula quimica: Mg2Al(OH)6(NO3) • 2H2O, el porcentaje de carga de la combretastatina A-1 en la muestra es de aproximadamente el 32% en peso.

Ejemplo 7: capsula dura de 25 mg para el uso farmaceutico y nutraceutico.

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Coprecipitado descrito en el ejemplo 1 (30% de carga) 83,3 mg mezcla para la capsula, c. s.

La mezcla estandar de la capsula esta compuesta por lactosa al 75%, almidon al 15%, sllice anhidro coloidal al 7% y estearato de magnesio al 3%. Esta mezcla idonea se utiliza en una cantidad variable segun el tamano de la capsula elegida, cambiable de 00 a 5, y el metodo de relleno (manual, semiautomatico, automatico). La introduccion del material, objeto de la patente, en las capsulas duras es un procedimiento simple (tambien idoneo para el uso galenico) y barato, y no es nocivo para el material (no hay operaciones tales como el uso de solventes, temperaturas altas, etc.).

Ejemplo 8: comprimido de 25 mg, formulacion de liberation rapida para el uso farmaceutico y nutraceutico. Coprecipitado descrito en el primer ejemplo (p. ej., 30% de carga) 83,3 mg Almidon 6,7 mg

Glicolato sodico de almidon (Explotab®) 10,0 mg

El comprimido, que presenta un peso total de 100 mg, se prepara con el uso de un punzon con un diametro de 13 mm para la comprension directa (1 min de tiempo, fuerza de comprension de 5 x 103 kg) con el uso de una prensa hidraulica manual (Perkin Elmer, Inglaterra). La comprension se produce a tiempos bajos y la fuerza de comprension controlada sin el uso de lubricantes o deslizantes, debido a las propiedades especiales de los solidos anionicos laminares. La propiedad de alta autocompactacion del producto pudo permitir la preparation de comprimidos sin el apoyo de otros «ingredientes». Sin embargo, de este modo, el tiempo de disgregacion y de disolucion se prolongarla demasiado. Por este motivo, el uso de un producto disgregante es ventajoso. El disgregante elegido, Explotab®, produce un efecto macroscopico sobre la disgregacion del comprimido y no es responsable del incremento de la solubilidad del ingrediente activo. Su cantidad en el comprimido es del 10%.

Ejemplo 9: comprimido de 25 mg, liberacion rapida, de tipo super, para uso farmaceutico y nutraceutico.

Coprecipitado descrito en el primer ejemplo (p. ej., 30% de carga) 83,3 mg

Amido 12,7 mg

L-HPC LH-21® 4,0 mg

El comprimido, que tiene un peso total de 100 mg, se prepara con un punzon con un diametro de 13 mm mediante la comprension directa (1 min de tiempo, fuerza de comprension de 5 x 103 kg) mediante el uso de una prensa hidraulica manual (Perkin Elmer, Inglaterra). Para las modalidades de comprension y la election para utilizar un producto disgregante, hay que tener en cuenta las observaciones del ejemplo 8.

En este caso, se emplea un disgregante nuevo debido a la nueva generation de compuestos superdisgregantes. Es el superdisgregante L-HPC LH-21® (eter de 2-hidroxipropilo y celulosa poco sustituido; su empleo es util para disgregar el comprimido de una manera muy rapida y, tambien en este caso, su actividad no es responsable del incremento de la solubilidad del ingrediente activo. Este superdisgregante se hincha bien cuando se pone en contacto con el agua gracias a la formation de hojas en multicapa y al desarrollo de canales capaces de facilitar la penetration del agua. El L-HPC LH-21® es insoluble en el agua, pero es capaz de absorber una cantidad suficiente de agua para expandir enormemente su volumen. Esta action de hinchamiento es responsable de la disgregacion muy rapida del comprimido. El volumen del hinchamiento depende del tamano de la partlcula del superdisgregante, de la glucosa y de los grupos hidropropoxi presentes en la cadena del pollmero. Teniendo en cuenta sus caracterlsticas, se puede usar en un porcentaje mas bajo en comparacion con el disgregante clasico; especlficamente, el 4%.

Ejemplo 10: formulacion de monofase hidrofila - hidrogel al 2% para uso dermatologico y cosmeceutico.

Coprecipitado descrito en el ejemplo 1 (p. ej., 30% de carga) 2,0 g

Propilenglicol 10,0 g

Sal sodica de carboximetilcelulosa (NaCMC) 5,0 g

Agua destilada hasta 100,0 g

Esta formulacion se forma mediante un gel hidrofilo clasico con base de gelificante independiente del pH (derivado de la celulosa). Esta formulacion es muy simple y el producto, objeto de esta patente, queda perfectamente contenido en esta clase de formulacion e incluso la mejora.

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Ademas, el material de esta patente es facil de dispersar en agua, y el unico expediente a tener en cuenta para obtener una muy buena formulacion es la preparacion del primario, su mezcla con el pollmero gelificante en forma anhidra que a continuacion se debe humedecer mediante la adicion de propilenglicol para evitar los fenomenos de flotamiento e incorporar todo el gel nuevo. La mejora del gel de base debido a la adicion del material de esta patente esta representada por la mejora de la propiedad reologica. Ademas, los geles hidrofilos tal cual son, por lo general, rlgidos y duros, muestran un comportamiento plastico (poca fluidez). La adicion de materiales laminares es capaz de reducir el llmite de fluidez del llquido (llmite de elasticidad) y, por lo general, puede transformar los materiales plasticos en materiales pseudoplasticos.

Ejemplo 11: preparacion de multifase hidrofila - activa al 2% en una emulsion aceite/agua para uso cosmeceutico.

Coprecipitado descrito en el ejemplo 1 (p. ej., 30% de carga) 2,0 g

Fase oleosa (O)

Vaselina 11,0 g

Aceite mineral (parafina) 10,0 g

Alcohol cetoestearllico 7,2 g

Cetomacrogol 1000 1,8 g

Fase acuosa (W)

Hidroetilcelulosa (HEC) 2,0 g

Glicerol 10,0 g

Agua destilada hasta 100,0

La naturaleza del producto (sus propiedades qulmico-flsicas) permite que sea anadido tanto a la fase W como a la fase O. El metodo de preparacion mas facil es la mezcla del primario del coprecipitado del producto con HEC seguido del humedecimiento con glicerol y la preparacion final del gel por la adicion de agua. El gel final se anade a la fase oleosa fundida en caliente (por lo general, en un bano de vapor). De este modo, el ingrediente activo estara en la fase externa de la emulsion (W) y, por lo tanto, estara disponible (liberada) con facilidad.

Ejemplo 12: formulacion vaginal mucoadherente antiseptica (multifase).

Emulsion O/W al 2% - producto sanitario (P. S. limltrofe)

Coprecipitado descrito en el ejemplo 1 (p. ej., 30% de carga) 2,0 g

Fase oleosa (O)

Vaselina 15,0 g

Aceite mineral (parafina) 6,0 g

Alcohol cetoestearllico 7,2 g

Fase acuosa (W)

Cetomacrogol 1000 1,8 g

Gel al 4% de NaCMC Hasta 100,0 g

En cuanto al metodo de preparacion, se deben tener en cuenta todas las indicaciones dadas del ejemplo 11. La presente formulacion bifasica debe ser tambien bioadherente (mucoadherente) con el objetivo de adherirse a la mucosa vaginal para fijar la formulacion al sitio especlfico de accion. Esto tiene el proposito doble de prevenir la perdida de material (tambien cuando el usuario esta en la posicion ortostatica) y de prolongar la duracion del contacto entre el ingrediente activo y el sitio de accion. La presencia del ingrediente activo en la fase externa (W) de la emulsion permite su liberacion rapida y el efecto antiseptico rapido. Si el ingrediente activo estuviera en la fase interna (O), deberla pasar primero de O a W y a continuacion de W a la mucosa vaginal (fase de liberacion). La presencia de material laminar en la fase externa (W) no cambia la mucoadherencia de esta formulacion e incrementa sus propiedades de flujo, que son muy importantes para esta clase de forma farmaceutica vaginal, tanto en el caso de la aplicacion directa in loco (incremento de la capacidad de diseminacion) y en el caso en que se utilice un aplicador vaginal.

Cuando la administracion de la crema se realiza con un aplicador vaginal, la formulacion tenia que ir primero desde el tubo de la crema al aplicador (incremento de la extraccion, incremento de la capacidad de extrusion) y a continuacion desde el aplicador a la mucosa vaginal (aumento del flujo, de la capacidad de diseminacion y de la capacidad de expansion).

Claims (14)

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   REIVINDICACIONES

   1. Producto compuesto por uno o varios coprecipitados de polifenoles estilbenicos en solidos anionicos laminares, en donde:

   a) los polifenoles estilbenicos

   se seleccionan del grupo que consiste en frans-resveratrol; frans-3,5-dimetoxi-4'-hidroxiestilbeno; frans-3,5,4'- trimetoxiestilbeno; frans-3,5-dihidroxi-4'-metoxiestilbeno; frans-3,5-diacetil-4'-hidroxiestilbeno; frans-3,5,4'-

   triacetilestilbeno; frans-3,5-dihidroxi-4'-acetilestilbeno; frans-piceida; frans-pinosilvina; c/s-resveratrol; raponticina; frans-piceatanol; rapontigenina; 5-viniferina; £-viniferina; astringina; combretastatina A-1; y hopeafenol;

   b) solidos anionicos laminares significa:

   - hidrotalcitas, caracterizadas por la siguiente formula:

   [M(II)1_xM(III)x(OH)2]x+[An'x/n]x' x mS, donde M(II) es un metal con valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; M(III) es un metal con valencia (III) preferiblemente elegido entre Al, Cr, Fe, V, Co; An- es un anion caracterizado por una carga negativa igual a n, que equilibra la carga positiva de las laminas; m es el numero de moleculas de solvente (S), por lo general agua, cointercaladas, por unidad de formula del compuesto;

   - las sales de hidroxidos dobles (SHD) caracterizadas por la siguiente formula:

   [M(II)1-xM(II)1+x(OH)3(1-y)]x+[An'](1+3y)/n x mS, donde M(II) es un metal con valencia (II) preferiblemente elegido entre Mg, Zn, Co, Ni, Mn, Cu; An- es un anion caracterizado por una carga negativa n, que equilibra la carga positiva de las laminas; m es el numero de moleculas de solvente (S), cointercaladas, por unidad de formula del compuesto.
2. 2. Metodo para la preparacion de un producto compuesto por uno o varios polifenoles estilbenicos, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, coprecipitado con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, caracterizado por las fases siguientes:

   I) preparacion de una solucion hidroalcoholica de uno o varios polifenoles estilbenicos;

   II) preparacion de una solucion hidroalcoholica de sales de metales divalentes o trivalentes, o una mezcla compuesta por divalentes y trivalentes;

   III) coprecipitacion de uno o varios polifenoles estilbenicos en solidos anionicos laminares a un pH entre 8 y 11 despues de la mezcla de las soluciones descritas en el punto I) y II), y la adicion de hidroxidos;

   IV) separacion del coprecipitado;

   V) lavado del coprecipitado;

   VI) evaporacion de los solventes.
3. 3. El producto de acuerdo con la reivindicacion 1 o el metodo de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde entre los polifenoles estilbenicos estan incluidos tanto los de origen sintetico como los de origen natural, caracterizados por un nivel de pureza diferente, entre el 20 y el 100%.
4. 4. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, en un producto sanitario.
5. 5. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, con fines alimentarios.
6. 6. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, con fines nutraceuticos.
7. 7. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, para la formulacion de productos farmaceuticos.
8. 8. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la

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   reivindicacion 2, con fines dermatologicos.
9. 9. El uso del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, con fines cosmeceuticos.
10. 10. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 4, 5, 6, 7, 8 y 9 del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares, tal y como esta definido en la reivindicacion 1, y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, por separado o asociado a ingredientes, en formulaciones especlficas para:

    a) preparaciones solidas para el uso oral y yugal: polvos, granulados, partlculas, capsulas, plldoras, comprimidos, comprimidos revestidos, gomas de mascar, bolos, obleas, pastillas para chupar, chocolates medicinales;

    b) preparaciones llquidas/semisolidas para el uso oral: jarabes, elixires, pastas, zumos, decocciones, suspensiones, emulsiones, mucllagos, tes de hierbas, vinos medicinales, apotemas, pociones;

    c) preparaciones para la aplicacion cutanea: cremas, pastas, unguentos, geles, emulgeles, lociones, linimentos, jabones medicinales, champus y champus medicinales, lapislazuli o lapices, cataplasmas, emplastos, parches, aceites, oleolitos, oleosos, tinturas, vinos, calibres medicinales;

    d) preparaciones para el uso auricular, nasal y/o oromucoso; colutorios para la boca, gargaras, lavado auricular, auricular con forma de cono, lavado nasal, tampones, aceites, oleolitos, emulsiones, unguentos, geles, emulgeles, comprimidos, capsulas, pellculas, parches, emplastos;

    e) preparaciones oftalmicas: colirios, insertos oculares y lavados oculares;

    f) preparaciones para la administracion en cavidades naturales (vlas anal y vaginal): supositorios, capsulas, comprimidos, enema, enteroenemas, enema, irrigaciones, duchas, espumas, tampones, velas, ovulos, espumas, geles, pastas, emulgeles, cremas, unguentos, pellculas, suspensiones, compresas, emplastos, anillos, tampones medicinales, calibres medicinales;

    g) preparaciones en pulverizacion para los usos topico, inhalado, oral y yugal.
11. 11. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 del producto compuesto por polifenoles estilbenicos y sus coprecipitados con solidos anionicos laminares definidos en la reivindicacion 1 y realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2 en las formulaciones presentadas en la reivindicacion 10 caracterizados por las siguientes propiedades:

    a) actividades antioxidante, antiinflamatoria, antivlrica, antidiabetes, cardioprotectora, neuroprotectora,

    quimioprotectora antibiotica, antiisquemica, antiobesidad, antihipertensiva, antineoplasica, antitumoral,

    antiangiogenica y antienvejecimiento;

    b) actividades protectoras frente a agentes infecciosos, disfuncion cardiovascular y enfermedad neoplasica, tal como melanoma y cancer colorrectal;

    c) actividad regularizadora de la glucemia y de la trigliceridemia, y de los marcadores inflamatorios de la obesidad humana;
12. 12. Un coprecipitado de resveratrol con solidos anionicos laminares tal y como esta definido en la reivindicacion 1 y realizado de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2 en formulaciones especlficas tal y como estan descritas en la reivindicacion 10 para ser usado de acuerdo con las reivindicaciones 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10,

    a) en un metodo para tratar las actividades de oxidacion, inflamacion, infecciones vlricas, diabetes, enfermedades cardlacas, enfermedades neuronales, acontecimientos adversos de sustancias qulmicas, infecciones bacterianas, isquemia, obesidad, hipertension, cancer, tumor, angiogenesis, edad;

    b) en un metodo para prevenir las enfermedades infecciosas, la disfuncion cardiovascular y la enfermedad neoplasica, tal como melanoma y cancer colorrectal;

    c) en un metodo para la regularizacion de actividad es la glucemia y la trigliceridemia, y de los marcadores inflamatorios en la obesidad humana.
13. 13. La produccion y el uso industrial de acuerdo con las reivindicaciones 2 a 12 del producto compuesto por uno o varios polifenoles estilbenicos y sus derivados coprecipitados con solidos anionicos laminares definidos en la reivindicacion 1 realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2, tal cual y/o en formulaciones; en particular en los procedimientos donde una mejor fotoestabilidad del producto produce ventajas a la hora de manipular los polifenoles estilbenicos durante la produccion y la conservacion de estos ultimos.
14. 14. Un producto compuesto por resveratrol y solidos anionicos laminares definidos en la reivindicacion 1 realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2 para ser usado de acuerdo con las reivindicaciones 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la inhibicion de la fosfodiesterasa IV.

    5 15. Un producto compuesto por resveratrol y solidos anionicos laminares definidos en la reivindicacion 1

    realizados de acuerdo con el procedimiento descrito en la reivindicacion 2 para ser usado de acuerdo con las reivindicaciones 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 en el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva cronica.