ES2639752T3 - Inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53 - Google Patents

Inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53 Download PDF

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Abstract

Un compuesto de la fórmula (I) **(Ver fórmula)** incluyendo cualquiera de sus formas estereoquímicamente isoméricas, en la que R1 es hidroxialquilo de C1-6 o alquenilo de C2-6; con la condición de que el sustituyente R1 se ubique en la posición 6 o 7 del resto de indol; R2 es hidrógeno o alquilo de C1-4; Z es un radical seleccionado de **(Ver fórmula)** R3 es hidrógeno o hidroxialquilo de C1-4; R4 es hidroxi o alquiloxi de C1-4; R5 es hidrógeno o alquilo de C1-4; o R4 y R5 se toman juntos para formar oxo; una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos.

Description

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una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos. Un compuesto preferido de la presente invención es el compuesto que tiene la siguiente fórmula
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incluyendo cualquiera de sus formas estereoquímicamente isoméricas; una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos. Un compuesto preferido de la presente invención es el enantiómero que tiene la siguiente fórmula
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y que tiene una rotación levorrotatoria medida con luz a la longitud de onda de la línea D de sodio (589 nm) a una temperatura de 20ºC y una longitud de recorrido de celda de 1 dm en cloroformo a una concentración de 8,59 mg/ml; 10 o
una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos.
Un compuesto preferido de la presente invención es el enantiómero que tiene la siguiente fórmula
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y que tiene una rotación dextrorrotatoria medida con luz a la longitud de onda de la línea D de sodio (589 nm) a una 15 temperatura de 20ºC y una longitud de recorrido de celda de 1 dm en metanol a una concentración de 10,33 mg/ml; o
una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos.
Un compuesto preferido de la presente invención es el enantiómero que tiene la siguiente fórmula
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20 y que tiene una rotación levorrotatoria medida con luz a la longitud de onda de la línea D de sodio (589 nm) a una temperatura de 20ºC y una longitud de recorrido de celda de 1 dm en metanol a una concentración de 10,74 mg/ml; o
una de sus sales farmacéuticamente aceptables o uno de sus solvatos.
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Los compuestos de la fórmula (I-1), en la que el R1 representa hidroxialquilo de C1-4 y dicho hidroxialquilo de C1-4 está ubicado en la posición 7 del resto de indol, estando dichos compuestos representados por la fórmula (I-1-a), también se pueden preparar por hidrólisis de un intermedio de la fórmula (VI) con una base apropiada, tal como, por ejemplo, hidróxido de sodio, y un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, o un alcohol, por ejemplo etanol y similares.
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Los compuestos de la fórmula (I) también se pueden convertir entre sí por medio de reacciones conocidas en la técnica o transformaciones de grupos funcionales.
10 Los compuestos de la fórmula (I) también se pueden convertir en una sal de adición de ácidos farmacéuticamente aceptable por reacción con un ácido apropiado, tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, en un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo 2-propanol, éter dietílico, éter diisopropílico.
Algunos de los intermedios y materiales de partida son compuestos conocidos y pueden ser asequibles en comercios o se pueden preparar de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica.
15 En general, los intermedios de la fórmula (II) se pueden preparar hidrogenando un intermedio de la fórmula (VII) en presencia de un catalizador metálico apropiado, tal como, por ejemplo, níquel Raney, en presencia de un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo metanol o etanol y similar; o platino sobre carbón, en presencia de un veneno catalizador apropiado, tal como una disolución de tiofeno y pentóxido de vanadio, en presencia de un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano.
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Los intermedios de la fórmula (VII) se pueden preparar haciendo reaccionar un intermedio de la fórmula (VIII) con un intermedio de la fórmula (IX), en la que W2 representa un grupo saliente apropiado, tal como, por ejemplo, un átomo de halo, por ejemplo cloro, bromo, fluoro, y similares, en presencia de un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, N,N-dimetilsulfóxido. La adición de una base apropiada tal como, por ejemplo, un carbonato o hidrogenocarbonato
25 de metal alcalino o alcalino-térreo o una base orgánica, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina, trietilamina, carbonato de sodio, hidrogenocarbonato de sodio o carbonato de potasio, se puede utilizar para recoger el ácido que se libera durante el curso de la reacción.
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Los intermedios de la fórmula (XXIII) se pueden preparar haciendo reaccionar un intermedio de la fórmula (XXIV) con un intermedio de la fórmula (IX) en presencia de una base apropiada, tal como, por ejemplo, bicarbonato de sodio, y un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, N,N-dimetilsulfóxido.
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Los intermedios de la fórmula (XXIV) se pueden preparar haciendo reaccionar un intermedio de la fórmula (XXV) con NH3 en presencia de un catalizador apropiado, tal como, por ejemplo, níquel Raney, en presencia de un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo metanol y similares.
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Los intermedios de la fórmula (XXV) se pueden preparar haciendo reaccionar un intermedio de la fórmula (XXVI) con cloruro de terc-butildimetilsililo en presencia de una base apropiada tal como, por ejemplo, imidazol, y un disolvente apropiado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano.
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Los intermedios de la fórmula (XXVI) se pueden preparar tal como se describió con anterioridad para los intermedios de la fórmula (XI).
Los compuestos de la fórmula (I) y algunos de los intermedios de la presente invención pueden contener un átomo de carbono asimétrico. Las formas puras estereoquímicamente isoméricas de dichos compuestos y dichos intermedios se pueden obtener por la aplicación de procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los diastereoisómeros se pueden separar por métodos físicos tales como técnicas de cristalización selectiva o cromatográficas, por ejemplo distribución en contracorriente, cromatografía de líquidos y métodos similares. Los enantiómeros se pueden obtener a partir de mezclas racémicas convirtiendo primero dichas mezclas racémicas con agentes de resolución adecuados tales como, por ejemplo, ácidos quirales, en mezclas de sales o compuestos diastereoméricos; luego separando físicamente dichas mezclas de sales o compuestos diastereoméricos, por ejemplo, por técnicas de cristalización selectiva, cromatografía de fluidos supercríticos o cromatográficas, por ejemplo métodos de cromatografía de líquidos y similares; y finalmente convirtiendo dichas sales o compuestos diastereoméricos separados en los enantiómeros correspondientes. Las formas puras estereoquímicamente isoméricas también se pueden obtener a partir de las formas puras estereoquímicamente isoméricas de los intermedios y materiales de partida adecuados, siempre que las reacciones que intervienen ocurran en forma estereoespecífica.
Los compuestos de la fórmula (I), incluyendo cualquiera de sus formas estereoquímicamente isoméricas, sus sales farmacéuticamente aceptables o sus solvatos, tienen valiosas propiedades farmacológicas por cuanto incrementan la expresión de p53, muestran poderosa actividad antiproliferativa, muestran poderosa actividad antitumoral.
Tal como se indicó con anterioridad, los compuestos de la invención incrementan la expresión de p53 en el ensayo descrito en C.1. Este incremento puede ser causado, sin limitaciones, por uno o más de los siguientes mecanismos de acción:
-interacciones con dianas aguas arriba o aguas abajo, por ejemplo cinasas, o actividades de enzima incluidas en la ubiquitinación o la modificación SUMO,
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En consecuencia, esta descripción también proporciona un método para el tratamiento y la prevención de condiciones inflamatorias al administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención a un sujeto, por ejemplo un mamífero (y más particularmente un ser humano) que necesite dicho tratamiento.
Los compuestos de la presente invención también se pueden usar para el tratamiento de enfermedades y condiciones autoinmunes. Con la expresión “enfermedades autoinmunes” se entiende cualquier enfermedad en la cual el sistema inmune de un animal reacciona de forma adversa a un autoantígeno. Con el término “autoantígeno” se entiende cualquier antígeno que normalmente se encuentra en el cuerpo del animal. Las enfermedades autoinmunes representativas incluyen, pero no se limitan a: tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Grave, esclerosis múltiple, anemia perniciosa, enfermedad de Addison, diabetes mellitus insulinodependiente, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (SLE o lupus), dermatomiositis, enfermedad de Crohn, granulomatosis de Wegener, enfermedad antimembrana basal glomerular, síndrome antifosfolípídíco, dermatitis herpetiforme, encefalomielitis alérgica, glomerulonefritis, glomerulonefritis membranosa, síndrome del Goodpasture, síndrome de Lambert-Eaton, síndrome miasténico, miastenia grave, pénfigo ampolloso, poliendocrinopatías, enfermedad de Reiter, y síndrome del hombre rígido.
En consecuencia, esta descripción también proporciona un método para el tratamiento de enfermedades y condiciones autoinmunes al administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención a un sujeto, por ejemplo un mamífero (y más particularmente un ser humano) que necesite dicho tratamiento.
Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades asociadas con proteínas conformacionales inestable o mal plegadas.
Los ejemplos de enfermedades asociadas con proteínas conformacionales inestables o mal plegadas incluyen, pero sin limitarse a: fibrosis quística (CFTR), síndrome de Marfan (fibrillina), esclerosis lateral amiotrófica (superóxido dismutasa), escorbuto (colágeno), enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce (complejo de alfa-cetoácido deshidrogenoasa), osteogénesis imperfecta (procolágeno pro-alfa tipo I), enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (priones), enfermedad de Alzheimer (beta-amiloide), amiloidosis familiar (lisozima), cataratas (cristalino), hipercolesterolemia familiar (receptor de LDL), deficiencia de I-antitripsina, enfermedad de Tay-Sachs (beta-hexosaminidasa), retinitis pigmentosa (rodopsina), y leprechaunismo (receptor de insulina).
En consecuencia, esta descripción también proporciona un método para el tratamiento de enfermedades asociadas con proteínas conformacionales inestables o mal plegadas al administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención a un sujeto, por ejemplo un mamífero (y más particularmente un ser humano) que necesite dicho tratamiento.
En vista de sus propiedades farmacológicas útiles, los compuestos objeto se pueden formular en diversas formas farmacéuticas con fines de administración.
Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención, como ingrediente activo, se combina en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, portador el cual puede adoptar una amplia variedad de formas según la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas de manera deseable están en una forma de dosificación unitaria adecuada, con preferencia, para la administración oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, al preparar las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos usuales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares, en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y disoluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares, en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos.
Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso obviamente se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, los portadores usualmente comprenden agua estéril, al menos en gran medida, si bien se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo para favorecer la solubilidad. Se pueden preparar disoluciones inyectables, por ejemplo, en las cuales el portador comprende disolución salina, disolución de glucosa, o una mezcla de disolución salina y glucosa. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear portadores líquidos, agentes de suspensión y similares apropiados. En las composiciones adecuadas para la administración percutánea, el portador opcionalmente comprende un agente mejorador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos los cuales no causan efecto significativo perjudicial a la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser de utilidad para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar de diversas maneras, por ejemplo como parche transdérmico, como una unción puntual, como ungüento. Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas antes mencionadas en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosis. La forma de dosificación unitaria tal como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones en la presente se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el
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La presente invención también se refiere al uso de una combinación de acuerdo con la invención en la fabricación de una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de las células tumorales.
La presente invención también se refiere a un producto que contiene como primer ingrediente activo un compuesto de acuerdo con la invención, y como otro ingrediente activo uno o más agentes anticancerosos, como preparación combinada para el uso simultáneo, separado o en secuencia en el tratamiento de pacientes que padecen cáncer.
Los uno o más de otros agentes medicinales y el compuesto de acuerdo con la presente invención se pueden administrar en forma simultánea (por ejemplo en composiciones separadas o unitarias) o secuencialmente en cualquier orden. En el último caso, los dos o más compuestos se administrarán dentro de un período y en una cantidad y forma que es suficiente para asegurar que se logre un efecto ventajoso o sinérgico. Se apreciará que el método y el orden de administración preferidos y las respectivas cantidades de dosis y regímenes para cada componente de la combinación dependerán del otro agente medicinal particular y el compuesto de la presente invención administrados, su vía de administración, el tumor particular tratado y el huésped particular tratado. El método y orden de administración óptimo y las cantidades y régimen de dosificación pueden ser determinados fácilmente por los expertos en la técnica mediante el uso de métodos convencionales y en vista de la información expuesta en la presente.
La relación en peso del compuesto de acuerdo con la presente invención y los uno o más de otros agentes anticancerosos cuando se dan en combinación puede ser determinada por el experto en la técnica. Dichas relaciones y la dosis exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular de acuerdo con la invención y los demás agentes anticancerosos usados, la condición particular tratada, la gravedad de la condición tratada, la edad, el peso, el sexo, la dieta, el momento de administración y la condición física general del paciente particular, el modo de administración así como otra medicación que pueda tomar el individuo, como es bien conocido por los expertos en la técnica. Además, es evidente que la cantidad diaria efectiva puede ser reducida o incrementada según la respuesta del sujeto tratado y/o según la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la presente invención. Una relación en peso particular para el presente compuesto de la fórmula (I) y otro agente anticanceroso puede variar desde 1/10 hasta 10/1, más en particular desde 1/5 hasta 5/1, aún más en particular desde 1/3 hasta 3/1.
El compuesto de coordinación de platino se administra ventajosamente en una dosis de 1 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 50 a 400 mg/m2, particularmente para cisplatino en una dosis de aproximadamente 75 mg/m2 y para carboplatino en aproximadamente 300 mg/m2 por curso de tratamiento.
El compuesto de taxano se administra ventajosamente en una dosis de 50 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 75 a 250 mg/m2, particularmente para paclitaxel en una dosis de aproximadamente 175 a 250 mg/m2 y para docetaxel en aproximadamente 75 a 150 mg/m2 por curso de tratamiento.
El compuesto de camptotecina se administra ventajosamente en una dosis de 0,1 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 1 a 300 mg/m2, particularmente para irinotecán en una dosis de aproximadamente 100 a 350 mg/m2 y para topotecán en aproximadamente 1 a 2 mg/m2 por curso de tratamiento.
El derivado antitumoral podofilotoxina se administra ventajosamente en una dosis de 30 a 300 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 50 a 250 mg/m2, particularmente para etopósido en una dosis de aproximadamente 35 a 100 mg/m2 y para tenipósido en aproximadamente 50 a 250 mg/m2 por curso de tratamiento.
El alcaloide antitumoral de vinca se administra ventajosamente en una dosis de 2 a 30 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, particularmente para vinblastina en una dosis de aproximadamente 3 a 12 mg/m2, para vincristina en una dosis de aproximadamente 1 a 2 mg/m2, y para vinorelbina en dosis de aproximadamente 10 a 30 mg/m2 por curso de tratamiento.
El derivado de nucleósido antitumoral se administra ventajosamente en una dosis de 200 a 2500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 700 a 1500 mg/m2, particularmente para 5-FU en una dosis de 200 a 500 mg/m2, para gemcitabina en una dosis de aproximadamente 800 a 1200 mg/m2 y para capecitabina en aproximadamente 1000 a 2500 mg/m2 por curso de tratamiento.
Los agentes alquilantes tales como mostaza nitrogenada o nitrosourea se administran ventajosamente en una dosis de 100 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 120 a 200 mg/m2, particularmente para ciclofosfamida en una dosis de aproximadamente 100 a 500 mg/m2, para clorambucilo en una dosis de aproximadamente 0,1 a 0,2 mg/kg, para carmustina en una dosis de aproximadamente 150 a 200 mg/m2, y para lomustina en una dosis de aproximadamente 100 a 150 mg/m2 por curso de tratamiento.
El derivado antitumoral de antraciclina se administra ventajosamente en una dosis de 10 a 75 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 15 a 60 mg/m2, particularmente para doxorrubicina en una dosis de aproximadamente 40 a 75 mg/m2, para daunorrubicina en una dosis de aproximadamente 25 a 45 mg/m2, y para idarrubicina en una dosis de aproximadamente 10 a 15 mg/m2 por curso de tratamiento.
imagen32
imagen33
Se agitaron intermedio 5 (0,043 moles), yodometano (0,047 moles) en EtOH (300 ml) a temperatura ambiente toda la noche. El precipitado se separó por filtración y se secó, produciendo 8,3 g de intermedio 6.
c) Preparación del intermedio 7
imagen34
Se calentaron a 110ºC durante 2 horas intermedio 6 (0,023 moles), cianuro de sodio (0,03 moles) en DMF (100 ml). La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo, se agitó durante 1 hora. El precipitado se separó por filtración y se recogió en DCM. La disolución se extrajo, la capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó, produciendo 5,1 g de intermedio 7.
d) Preparación del intermedio 8
imagen35
Se añadió gota a gota cloruro de metilmagnesio (0,058 moles) a una disolución de intermedio 7 (0,018 moles) en THF (50 ml) a 5ºC bajo un caudal de N2. La mezcla de reacción se agitó a 5ºC durante 1 hora. Se añadió gota a gota cloruro de amonio al 10% a 5ºC. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó, produciendo 4 g de intermedio 8.
15 e) Preparación del intermedio 9
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Se hidrogenaron intermedio 8 (0,019 moles), níquel Raney (4 g) en MeOH/NH3 (50 ml) a temperatura ambiente a 3 bares durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre celita, se lavó con DCM, y el filtrado se evaporó, produciendo 3,5 g de intermedio 9.
20 f) Preparación del intermedio 10
imagen37
Una mezcla de intermedio 9 (0,016 moles), 2-fluoro-5-nitrotolueno (0,018 moles), anión de carbonato monosódico (0,019 moles) en DMSO (100 ml) se calentó a 60ºC toda la noche. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se añadió agua con hielo, se añadió DCM. La mezcla de reacción se extrajo, la capa orgánica se separó,
25 se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: ciclohexano/EtOAc 60/40). Las fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 2,8 g de intermedio 10.
g) Preparación del intermedio 11
imagen38
30 Se hidrogenaron intermedio 10 (0,0079 moles), óxido de vanadio (0,05 g), disolución de tiofeno (4%) en DIPE (1 ml), Pt/C al 5% (1,3 g) en THF (50 ml) a presión atmosférica durante 1 noche a temperatura ambiente. La reacción
se filtró, y el disolvente se evaporó, produciendo intermedio 11. Este producto se usó sin purificación adicional en la etapa siguiente.
Los siguientes intermedios se obtuvieron según el método A3
intermedio nº 44
intermedio nº45
intermedio nº46
intermedio nº47
imagen39
imagen40
intermedio nº48
intermedio nº 49
Ejemplo A4
El intermedio 7 también se preparó de forma alternativa según lo siguiente a) Preparación del intermedio 12
imagen41
Se añadió 1-(trifenilfosforaniliden)-2-propanona (34,4 mmoles) en porciones a temperatura ambiente a una
10 disolución de 1H-Indol-7-carboxaldehído (34,44 mmoles) en metilbenceno (60 ml). La mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante 3 horas, y después se enfrió hasta la temperatura ambiente y se evaporó hasta sequedad. El residuo (17,4 g) se purificó mediante HPLC sobre sílice: 20-45 m (450 g). (Eluyente DCM/MeOH 99,5/0,5). Las fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 4,3 g de intermedio 12.
b) Preparación del intermedio 13
imagen42
15
Se calentaron a 65ºC durante 2 horas intermedio 12 (3,4 mmoles) y sal de Eschenmoser (3,8 mmoles) en ácido acético (10 ml). El precipitado se separó por filtración, se disolvió en DCM y carbonato de potasio al 10%. Se añadió carbonato de potasio (sólido), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se extrajo, la capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró, y el disolvente se evaporó, produciendo 0,7 g de
20 intermedio 13.
c) Preparación del intermedio 14
imagen43
Se agitaron intermedio 13 (0,13 moles), yodometano (0,14 ml) en EtOH (300 ml) a temperatura ambiente durante 2 días. El precipitado se separó por filtración y se secó, produciendo 47 g de intermedio 14.
d) Preparación del intermedio 15
imagen44
Se agitaron a temperatura ambiente durante 2 horas intermedio 14 (136,5 mmoles), cianuro de sodio (177,5 mmoles) en DMF (400 ml). Se añadió agua, y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones (SiOH irregular 20-45 m 1000 g MATREX). Fase móvil: ciclohexano al 70%/EtOAc al 30%). Las
10 fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 11,8 g de intermedio 15.
e) Preparación del intermedio 16
imagen45
Se añadió cloruro de metilmagnesio (0,07 moles) gota a gota a una disolución de intermedio 15 (0,022 moles) en THF (50 ml). Se añadieron NH4Cl al 10% y EOAc. La mezcla de reacción se extrajo, la capa orgánica se separó, se
15 secó sobre MgSO4, se filtró, y el disolvente se evaporó. El residuo (2,9 g) se purificó mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones (SiOH irregular 20-45 m 450 g MATREX). Fase móvil: ciclohexano al 60%/EtOAc al 40%). Las fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 2 g de intermedio 16.
f) Preparación del intermedio 7
imagen46
20 Se añadió peryodinano de Dess-Martin (24,9 ml) gota a gota a temperatura ambiente a una disolución de intermedio 16 (10 mmoles) en DCM (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después se vertió en agua con hielo, se filtró sobre celita, y el filtrado se extrajo con DCM. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró, y el disolvente se concentró. El residuo (2,8 g) se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente ciclohexano/EtOAc 60/40). Las fracciones puras se
25 recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 0,8 g de intermedio 7.
Ejemplo A5
El intermedio 15 también se preparó de forma alternativa según lo siguiente.
a) Preparación del intermedio 17
imagen47
5
10
20
25
30
35
Se añadió tetrahidroaluminato de litio (0,018 moles, 0,69 g) en porciones a una disolución de éster metílico del ácido 3-(cianometil)-1H-indol-7-carboxílico (0,012 moles, 2,6 g) en THF (50 ml) a 5ºC, bajo un caudal de N2. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió agua gota a gota a 5ºC, y la mezcla de reacción se filtró sobre celita, se lavó con EtOAc y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró, produciendo 2,4 g de intermedio 17.
b) Preparación del intermedio 15
imagen48
Se añadió peryodinano de Dess-Martin (0,016 moles) gota a gota a 5ºC a una disolución de intermedio 17 (0,0081 moles) en DCM (15 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre celita, el filtrado se evaporó. El residuo se purificó sobre gel de sílice mediante cromatografía en columna (eluyente ciclohexano/EtOAc 70/30). Las fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 0,5 g de intermedio 15.
Ejemplo A6
Preparación de los intermedios 18, 19 y 20
imagen49
Una mezcla de 4-cloro-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-ol (5 g, 0,029 moles) y Lipase Candida Antartica B (2,5 g) en éster etenílico del ácido acético (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre Celita. La Celita se lavó con DCM. El disolvente del filtrado se evaporó. El residuo (6,3 g) se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: DCM/MeOH desde 100/0 hasta 98/2; 1540 m). Se recogieron dos fracciones de producto diferentes, y el disolvente de cada fracción de producto se evaporó, produciendo 2,1 g de intermedio 18 (42%; enantiómero S), y 3,6 g de intermedio 19 (58%; enantiómero R). Cuando se desee, el intermedio 19 se puede convertir en el enantiómero R del intermedio 18 mediante reacción en MeOH/NH3, produciendo intermedio 20.
Como alternativa, los intermedios 18 y 20 también se prepararon según lo siguiente.
Se añadió tetrahidroborato de sodio (1,37 g, 36,10 mmoles) en porciones a 5ºC a una disolución de intermedio 1 (5,50 g, 32,82 mmoles) en MeOH (50 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 noche y después se vertió en agua, y la mezcla se extrajo tres veces mediante EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua y disolución de NaCl en agua, se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró, y el disolvente se evaporó. El residuo (4,42 g) se purificó mediante cromatografía de fluidos supercríticos quiral sobre CHIRALPAK AD-H 5 m 250 x 20 mm. Fase móvil: 85% de CO2, 15% de MeOH.
Las fracciones puras se recogieron, y el disolvente se evaporó, produciendo 1,625 g (29,2%) de compuesto 18 (enantiómero S) (DMF, 20ºC, concentración 0,33% p/v, 589 nm: -77,58º) y 1,620 g (29,1%) de compuesto 20 (enantiómero R) (DMF, 20ºC, concentración 0,33% p/v, 589 nm: +76,74º).
Ejemplo A7
Preparación del intermedio 21
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imagen58
concentró y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 100 ml) y las capas orgánicas deseadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y el disolvente se evaporó a vacío para dar 2,5 g (57%) de compuesto 1, que se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (AD 250mm * 20 mm, 20 m; CO2 supercrítico: isopropanol (0,05% de dietilamina) 40:60, v/v, 70 ml/min.), para dar 2 fracciones.
5 La fracción 1 (1 g) se purificó adicionalmente mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones (columna Synergi 50 * 250 mm, 10 m; eluyente: CH3CN/H2O (ácido trifluoroacético al 0,1%) gradiente de CH3CN al 10% durante un tiempo de 0 min. hasta CH3CN al 40% durante un tiempo de 25 min.) para dar 0,88 g (20%) compuestonº 26, punto de fusión 122,3-124ºC, (ee = 100%).
La fracción 2 (1 g) se purificó adicionalmente mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones (columna
10 Synergi 50 * 250mm, 10 m; eluyente: CH3CN/H2O (ácido trifluoroacético al 0,1%) gradiente de CH3CN al 10% durante un tiempo de 0 min. hasta CH3CN al 40% durante un tiempo de 25 min.) para dar 0,96 g (22%) de compuesto 27, punto de fusión 121,4-122,6ºC, (ee = 99%).
La Tabla 1 enumera los compuestos que se prepararon según uno de los Ejemplos anteriores.
Tabla 1
Comp. nº 1; Ej. [B1];
Comp. nº 2; Ej. [B2];
Comp. nº 3; Ej. [B2];
Comp. nº 4; Ej. [B3];
Comp. nº 5; Ej. [B4];
Comp. nº 6; Ej. [B5];
Comp. nº 7; Ej. [B6];
Comp. nº 8; Ej. [B6];
imagen59
Comp. nº 9; Ej. [B7];
Comp. nº 10; Ej. [B1];
Comp. nº 11; Ej. [B1];
Comp. nº 12; Ej. [B1];
Comp. nº 13; Ej. [B1];
Comp. nº 14; Ej. [B1];
Comp. nº 15; Ej. [B1];
Comp. nº 16; Ej. [B1];
Comp. nº 17; Ej. [B1];
Comp. nº 18; Ej. [B1];
Comp. nº 19; Ej. [B1];
Comp. nº 20; Ej. [B1];
Comp. nº 21; Ej. [B1];
Comp. nº 22; Ej. [B2];
Comp. nº 23; Ej. [B1];
Comp. nº 24; Ej. [B8]
Comp. nº 25; Ej. [B8]
Comp. nº 26; Ej. [B9]
Comp. nº 27; Ej. [B9]
Comp. nº 28; Ej. [B8,9]
Comp. nº 29; Ej. [B8,9]
Comp. nº 30; Ej. [B8,9]
Comp. nº 31; Ej. [B8,9]
* significa estereoquímica relativa
Caracterización de compuestos Puntos de fusión: Los valores son valores pico o intervalos de fusión, y se obtuvieron con inceridumbres experimentales comúnmente
asociadas con este método analítico. Kofler
imagen60
100% de acetonitrilo) para llevar a cabo una condición de gradiente desde 90% de A y 10% de B (mantener durante 0,5 minutos) hasta 8% de A y 92% de B en 3,5 minutos, mantener durante 2 min. y volver a las condiciones iniciales en 0,5 min., mantener durante 1,5 minutos. Se usó un volumen de inyección de 2 l. El voltaje del cono fue 20 V para el modo de ionización positivo y para el negativo. Los espectros de masas de adquirieron por barrido desde 100 5 hasta 1000 en 0,2 segundos usando un retraso entre barridos de 0,1 segundos.
Método 3
Además del procedimiento general C: Se efectuó HPLC de fase inversa en una columna YMC-Pack ODS-AQ, 50 x 2,0 mm 5 m con un caudal de 0,8 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil A: agua con 0,1% de TFA; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05% de TFA). En primer lugar, se mantuvo 90% de A y 10% de B durante 0,8
10 minutos. Luego se aplicó un gradiente hasta 20% de A y 80% de B en 3,7 minutos y se mantuvo durante 3 minutos. Se usaron volúmenes típicos de inyección de 2 l. La temperatura de la estufa fue 50ºC (polaridad de MS: positiva)
Tabla 2: Datos de LCMS y puntos de fusión (tiempo de retención: Rt en minutos), pico de (MH)+, el procedimiento de LCMS se refiere al método usado para LCMS.
Comp. nº
LCMS Puntos de fusión
Rt
(MH)+ Procedimiento
1
3,39 471 2 209ºC
2
3,35 401
2
4
3,19 441 2 121ºC
5
2,97 417 2
6
7,47 415 1
7
3,94 439 2
8
3,45 457 2
9
8,51 471 1
10
3,05 457 2
11
3,01 473 3 221,0-222,5ºC
12
3,07 443 2
13
3,00 443 2
14
3,49 425 2
15
8,22 443 1
16
3,34 457 2
17
3,32 457 2
18
8,68 457 1
20
8,62 457 1
21
8,2 443 1
22
8,95 415 1
23
2,93 443 3
24
110,5-111,6ºC
25
111,4-113,3ºC
26
122,3-124ºC
Comp. nº
LCMS Puntos de fusión
Rt
(MH)+ Procedimiento
27
121,4-122,6ºC
28
98,3-100ºC
29
96,8-99ºC
30
111,5-112,3ºC
31
112,7-113,6ºC
Rotación óptica
La rotación óptica se midió mediante el uso de un polarímetro. []D20 indica la rotación óptica medida con luz a la longitud de onda de la línea D de sodio (589 nm) a una temperatura de 20ºC. La longitud de recorrido de celda es 1 dm. Detrás del valor real, se mencionan la concentración y el disolvente de la disolución usada para medir la rotación óptica.
Tabla 3: Rotación óptica
Comp. nº
[]D 20 concentración disolvente
18
-37,4º 0,516 % p/v DMF
20
+36,87º 0,575 % p/v DMF
21
-39,68º 0,378 % p/v DMF
24
+5,03º 10,30 mg/ml MeOH
25
-3,44º 10,70 mg/ml MeOH
26
-13,74 8,59 mg/ml cloroformo
27
+11,89 9,00 mg/ml cloroformo
30
-5,25 4,00 mg/ml MeOH
31
+7,99 4,00 mg/ml MeOH
28
-4,90 10,00 mg/ml MeOH
29
+5,69 9,89 mg/ml MeOH
C. Ejemplo farmacológico:
10 La capacidad de los presentes compuestos para conservar p53 en las células A2780 se midió mediante el ensayo de inmunosorción ligado a enzima de p53. El ensayo de p53 es un inmunoensayo enzimático de “sándwich” que emplea dos anticuerpos policlonales. Un anticuerpo policlonal, específico para la proteína p53, se inmovilizó sobre la superficie de los pocillos de plástico. Toda la p53 presente en la muestra a ensayar se unirá al anticuerpo de captura. El anticuerpo policlonal detector biotinilado también reconoce la proteína p53, y se unirá a cualquier p53
15 que haya sido retenida por el anticuerpo de captura. El anticuerpo detector, a su vez, se une mediante la estreptavidina conjugada a peroxidasa de rábano picante. La peroxidasa de rábano picante cataliza la conversión del sustrato cromogénico o-fenilendiamina, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de proteína p53 unida a la placa. El producto de reacción coloreado se cuantifica mediante el uso de un espectrofotómetro. Se logra la cuantificación mediante la construcción de una curva estándar usando concentraciones conocidas de la proteína p53
20 etiquetada con HIS recombinante purificada (véase el ejemplo C.1.).
C.1. ELISA de p53
Se cultivaron células A2780 (ATCC) en RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino (FCS), 2 mM de Lglutamina y gentamicina a 37ºC en una incubadora humidificada con 5% de CO2.
imagen61
Comp. nº
LAD de elisa de p53 [microM]
9
1,0
11
0,30
14
1,0
4
0,10
10
1,0
7
0,30
8
0,10
16
0,30
23
3,00
1
0,10
27
0,10
24
0,03
25
0,10
31
0,10
26
0,10
30
0,10
29
0,03
28
0,10
C.2 Ensayo de proliferación
Las células de cáncer de ovario humano A2780 fueron un gentil obsequio del Dr. T.C. Hamilton (Fox Chase Cancer Centre, Pennsylvania, U.S.A.). Las células se cultivaron en medio RPMI 1640 suplementado con 2 mM de L5 glutamina, 50 g/ml de gentamicina y 10% de suero fetal bovino.
Reactivos usados en el ensayo de Alamar Blue
Se adquirió resazurina de Aldrich (Prod. nº 199303). Se adquirió ferrocianuro de potasio, ferricianuro de potasio, KH2PO4 y K2HPO4 de Sigma (Prod. nº P9387, P8131, P5655 y P8281, respectivamente).
Se preparó amortiguador de fosfato de potasio 0,1 M (PPB) como sigue: 2,72 gramos de KH2PO4 y 13,86 gramos de
10 K2HPO4 se disolvieron en 500 ml de mili-Q H2O, el pH se ajustó a pH 7,4, y el volumen se llevó a 1 litro con mili-Q H2O; el amortiguador se esterilizó por filtración y se almacenó a temperatura ambiente. La disolución madre de resazurina (PPB-A) se preparó de forma reciente disolviendo 45 mg de resazurina en 15 ml de PBS. Se prepararon 30 mM de ferricianuro de potasio (PPB-B) disolviendo 0,987 gramos de ferricianuro de potasio en 100 ml de PPB. Se prepararon 30 mM de ferrocianuro de potasio (PPB-C) disolviendo 1,266 gramos de ferrocianuro de potasio en 100
15 ml de PPB.
Se preparó la mezcla de PPB-A, PPB-B y PPB-C al mezclar volúmenes iguales de las disoluciones respectivas. Se preparó la disolución de trabajo de resazurina (denominada en la presente disolución “Alamar Blue”) diluyendo dicha mezcla 20x (vol/vol) en PPB y esterilizar por filtración; la disolución Alamar Blue se podría guardar a 4ºC durante un máximo de 2 semanas.
20 Procedimiento del ensayo Alamar Blue
Para los experimentos en placas de 384 pocillos, las células se sembraron a una densidad de 5 x 103 células/ml en placas de cultivo de 384 pocillos Falcon (Life Technologies, Merelbeke, Bélgica), negras con fondo transparente, en 45 l de medio de cultivo. Las células se dejaron adherir al plástico durante 24 h. El compuesto ensayado se prediluyó (1/50 en medio de cultivo) y se añadieron 5 l de compuesto prediluido a los pocillos. Después de 4 días
de incubación, se añadieron 10 l de la disolución Alamar Blue a cada pocillo, y las células se incubaron durante otras 5 h (A2780) a 37ºC. Se midió la intensidad de la fluorescencia para cada pocillo con un lector de fluorescencia de placa (Fluorskan, Labsystems, 540 nm de excitación y 590 nm de emisión)
Se calculó la actividad antiproliferativa como porcentaje de células que permanecían viables en condiciones tratadas
5 frente al control (células no tratadas). En cada experimento, el resultado para cada condición experimental es la media de 3 pocillos replicados. Cuando sea apropiado, los experimentos se repitieron para establecer curvas completas de respuesta frente a la concentración. Cuando sea apropiado, se calcularon valores IC50 (concentración del fármaco necesaria para reducir el crecimiento celular al 50% del control) mediante el uso de análisis de probitios para datos graduados (Finney, D.J., Probit Analyses, 2ª Ed. Capítulo 10, Graded Responses, Cambridge University
10 Press, Cambridge 1962). En la presente, se expresan los efectos de los compuestos de ensayo como pIC50 (el valor logarítmico negativo de la curva de IC50 (M)) (véase la Tabla 5A).
Tabla 5A: Resultados de los compuestos ensayados en el protocolo de proliferación celular anterior (células A2780)
Comp. nº
Inhibición de la proliferación de células A2780 pIC50
6
6,67
17
7,40
12
7,20
13
6,90
19
7,34
2
7,38
5
7,28
22
6,26
15
7,27
20
7,29
18
7,47
21
6,85
9
6,85
11
6,55
14
6,43
4
6,74
10
6,70
7
6,96
8
7,06
16
6,87
23
6,52
1
6,94
27
6,85
24
7,18
31
6,84
26
7,11
Comp. nº
Inhibición de la proliferación de células A2780 pIC50
30
7,04
29
7,14
28
6,89
Los compuestos también se analizaron de acuerdo con el protocolo anterior, pero usando otras líneas celulares: línea celular de cáncer colorrectal HCT116, línea celular de cáncer pulmonar no microcítico H1299, línea celular de cáncer de próstata humano DU145. Los resultados se dan en la Tabla 5B.
Tabla 5B
Comp. nº
Inhibición de la proliferación de células HCT116 pIC50 Inhibición de la proliferación de células H1299 pIC50 Inhibición de la proliferación de células DU145 pIC50
6
5,39 5,03
17
7,05 6,18 6,17
12
6,06 5,2
13
5,61 <5
19
5,46 5,74
2
5,94 6,16
5
6,46 5,23 5,56
22
5,09 5,07
15
6,69 5,82
20
5,72 5,73
18
7,27 6,38 6,40
21
6,83 6,12 5,22
9
6,02 5,17 5,26
11
6,67 5,81 6,21
14
<5 5,40 5,14
4
6,00 5,43 5,29
10
6,47 5,68 5,65
7
7,00 6,39 6,60
8
7,06
16
6,68 6,73 5,98
23
5,53 5,61 5
1
6,82 6,06 5,92
27
7,08 5,99 6,00
24
7,42 6,63 6,53
31
6,94 5,84 6,04
26
7,26 6,27 6,18
Comp. nº
Inhibición de la proliferación de células HCT116 pIC50 Inhibición de la proliferación de células H1299 pIC50 Inhibición de la proliferación de células DU145 pIC50
30
7,19 6,02 6,14
29
7,37 6,67 6,58
28
7,11 6,73 6,52
C.3. Ensayo de P450
Las proteínas CYP P450 (expresadas en E. coli) (3A4, 2D6, 2C9, 1A2 y 2C19) convierten sus sustratos específicos en una molécula fluorescente12. La molécula fluorescente se mide mediante el uso de un lector de placa fluorescente. Los compuestos que inhiben la reacción enzimática dan como resultado una disminución de la señal fluorescente.
Conversiones mediadas por las isoenzimas respectivas de citocromo P450 expresadas por ADNc
Sustrato Enzima Molécula fluorescente CEC CHC MFC 7-HFC CEC CHC AMMC AHMC BFC 7-HFC DBF Fluoresceína 7-BQ Quinolinol
Abreviaturas CEC: 7-etoxi-3-cianocumarina; CHC: 3-ciano-7-hidroxicumarina, MFC: 7-metoxi-4-trifluorometilcumarina; 7-HFC: 7hidroxi-trifluorometilcumarina, CEC: 7-etoxi-3-cianocumarina; CHC: 3-ciano-7-hidroxicumarina, AMMC: 3-[2-(N,Ndietil-N-metilamino)etil]-7-metoxi-4-metilcumarina; AHMC: hidrocloruro de 3-[2-(N,N-dietilamino)etil]-7-hidroxi-4metilcumarina, BFC: 7-benciloxi-trifluorometilcumarina; DBF: dibencilfluoresceína, 7-BQ: benciloxiquinolina.
10 Mezcla de cofactores: (para todas las enzimas CYP excepto CYP 2D6)
disolución de trabajo G-6-P 8,25 mM 25,10 mg G-6-P-DH 1 U/ml 14,29 l 0.5M MgCl2.6H2O 8,25 mM 165,0 l NADP 3,25 mM 25,59 mg disueltos en un amortiguador de fosfato de Na-K 0,1 M 10 ml
concentración final 3,3 mM 0,4 U/ml 3,3 mM 1,3 mM
Abreviaturas: G-6-P: glucosa-6-fosfato; G-6-P-DH: glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa.
Mezcla de cofactores: (para CYP2D6)
disolución de trabajo
concentración final
G-6-P
1,025 mM 3,12 mg 0,41 mM
G-6-P-DH
1 U/ml 14,29 l 0,4 U/ml
0.5M MgCl2.6H2O
1,025 mM 20,5 l 0,41 mM
NADP
20,5 M 0,161 mg 8,2 M
disuélvase en un amortiguador de fosfato de Na-K 0,1 M
10 ml
Disoluciones de enzimas CYP P450:
CYP1A2:
(CEC) concentración final 5 pmol P450/ml
CYP2C9:
(MFC) concentración final 60 pmol P450/ml
CYP2C19:
(CEC) concentración final 2,5 pmol P450/ml
CYP2D6:
(AMMC) concentración final 42 pmol P450/ml
CYP3A4:
(BFC) concentración final 83 pmol P450/ml
(DBF) concentración final 5 pmol P450/ml
(7-BQ) concentración final 20 pmol P450/ml
5
Todas estas enzimas CYP se disolvieron en 0,01 M de amortiguador de fosfato de Na-K + 1,15% de KCl, y se mantuvieron en hielo hasta el uso. Las enzimas CYP P450 se almacenaron a -80ºC.
Dilución de compuesto e inhibidor de referencia:
Los compuestos y los inhibidores de referencia se enviaron al departamento como una disolución 5 mM en DMSO.
10 Una disolución de trabajo de 5.10-4 M se preparó por dilución seriada usando acetonitrilo. La concentración final de compuesto fue 10-5 M para el cribado primario, y la concentración final de disolvente fue 2%. Después de un cribado primario a una concentración de 10-5 M, se analizaron los valores de IC50 de los inhibidores potentes seleccionados, a un intervalo de concentración de 3.10-9-10-5 M. En el cribado primario, todos los compuestos se ensayaron por triplicado.
15 Los inhibidores de referencia se analizaron a un intervalo de concentraciones de 10-9-10-4 M.
Inhibidores de referencia:
Furafilina:
(Ultra Fine Chemicals) para CYP1A2
Sulfafenazol:
Nuestro laboratorio para CYP2C9
Tranilcipromina:
Nuestro laboratorio para CYP2C19
Quinidina:
Nuestro laboratorio para CYP2D6
Ketoconazol:
Nuestro laboratorio para CYP3A4
Disoluciones de sustrato:
CEC (sustrato de CYP1A2) 6,25 l de disolución 20 mM de CEC/5 ml volumen total 5 M MFC (sustrato de CYP2C9) 200 l de disolución 25mM de MFC/5 ml volumen total 200 M
5
10
15
20
25
30
CEC
(sustrato de CYP2C19) 31.25 l de disolución 20 mM de CEC/5 ml volumen total 25 M
AMMC
(sustrato de CYP2D6) 150 l de disolución 0,5 mM de AMMC/5ml volumen total 3 M
BFC
(sustrato de CYP3A4) 750 l de disolución 5 mM de BFC/5ml volumen total 150 M
DBF
(sustrato de CYP3A4) 12.5 l de disolución 2 mM DBF/5 ml volumen total 1 M
7-BQ
(sustrato de CYP3A4) 60 l de disolución 25 mM de 7-BQ/5 ml volumen total 60 M
Las disoluciones madre de sustrato se disolvieron en acetonitrilo, y se almacenaron a -20ºC. La disolución final de trabajo se disolvió en 0,1 M de amortiguador de fosfato de Na-K pH 7,4, y esta disolución siempre se preparó reciente antes de iniciar el ensayo.
Análisis de datos
La preparación de la placa, la relación de datos, el análisis de datos, la convalidación y la aprobación de resultados y la carga de datos se realizaron en forma semiautomática con el software de Lexis-Laplace (Laplace-DLM-RVAM)
Las fórmulas usadas en los cálculos son:
% de actividad = (100/(prom. control positivo -prom. control negativo)) x (prom. muestra -prom. control negativo).
% de inhibición = 100 -% de actividad
Cuando se calculó, el valor de IC50 se generó automáticamente mediante extrapolación gráfica en RVAM, sobre la base de la intersección con el 50% del eje de control.
Método
El ensayo se efectuó en una placa Costar negra de 96 pocillos. Por pocillo, el ensayo comprende: 40 l de disolución de enzima CYP P450 (en las muestras de control negativo se añadieron 40 l de 0,1 M de amortiguador de fosfato de Na-K pH 7,4 sin enzima); 40 l de mezcla de cofactores; 2 l de compuesto o inhibidor de referencia para las muestras de control negativo, o disolvente para las muestras de control positivo. Después de 5 min. de preincubación a 37ºC en una incubadora agitadora, se añadieron 20 l de disolución de sustrato. Las placas se incubaron a 37ºC durante 10 min. (CYP3A4/DBF), 15 min. (CYP1A2), 30 min. (CYP2C9, CYP3A4/BFC y CYP3A4/ 7-BQ y CYP2C19) y 45 min. (CYP2D6). La reacción se detuvo por adición de 200 l de acetonitrilo. Para CYP3A4/DBF, la reacción se detuvo por adición de 200 l de 2 M de NaOH. Para CYP3A4/7-BQ, la reacción se detuvo por adición de 40 l de Tris/acetonitrilo (1:5) (V:V, seguido de 10 minutos de centrifugación a 2000 rpm. La señal fluorescente fue detectada por un lector fluorescente Victor2 (Wallac) o Fluoroskan (Labsystems). La longitud de onda de excitación y de emisión para las diferentes enzimas y su sustrato específico se mencionan en la Tabla 6.
Tabla 6: Longitudes de onda de excitación y de emisión
Enzima
Sustrato Longitud de onda de excitación Longitud de onda de emisión
CYP1A2
CEC 410 nm 460 nm
CYP3A4
BFC 405 nm 535 nm
CYP3A4
DBF 485 nm 538 nm
CYP3A4
7-BQ 405 nm 535 nm
CYP2C9
MFC 405 nm 535 nm
CYP2C19
CEC 410 nm 460 nm
CYP2D6
AMMC 390 nm 460 nm
Referencias
[1] Microtiter Plate Assays for Inhibition of Human, Drug-Metabolizing Cytochromes P450
Charles L. Crespi, Vaughn P. Miller, Bruce W. Penman (Gentest) Analytical Biochemistry 248, 188-190 (1997) Article n° AB972145
[2] Novel High Throughput fluorescent P450 assays V.P. Miller, J. Ackermann, D.M. Stresser, C.L. Crespi Gentest Internet site.
La Tabla 7 proporciona datos para los compuestos de la presente invención (compuestos nº 18, 20, 9, 14 y 4) estudiados en los siete ensayos, comparados con compuestos de la técnica anterior. Tal como se describió con anterioridad, se ensayaron cinco enzimas P450, una de ellas en tres sustratos diferentes (en consecuencia siete ensayos en total). En la Tabla 7 se indica en cuántos de los ensayos de P450 un compuesto mostró actividad inhibidora con IC50 < 1,00E-06.
Tabla 7: Datos comparativos sobre la inhibición de CYP
compuesto
Efectos sobre P450 IC50
7 veces < 1,00E-06
3 veces < 1,00E-06
7 veces < 1,00E-06
0 veces < 1,00E-06
0 veces < 1,00E-06
Compuesto nº 20
0 veces < 1,00E-06
compuesto
Efectos sobre P450 IC50
Compuesto nº 18
0 veces < 1,00E-06
Compuesto nº 9
0 veces < 1,00E-06
Compuesto nº 14
1 vez < 1,00E-06
Compuesto nº 4
0 veces < 1,00E-06
C.4. Antagonismo de Ro-4-1284 en ratones3,4,5
El ensayo es una modificación de un procedimiento descrito por Colpaert et al. (1975).3 Se enjaularon ratones NMRI machos (22 ± 3 g) en jaulas de observación Makrolon (L x W x H: 11 x 12 x 17 cm; n = 3 por jaula). Al comienzo de 5 los experimentos, inmediatamente antes de la administración de los compuestos de ensayo, se midió la temperatura corporal inicial de los ratones con una precisión de 0,1ºC al insertar la sonda termosensible (1,0 mm de diámetro) de un termómetro eléctrico (Comark) hasta una profundidad constante de 3 cm en el esófago, hasta que se obtuvo una lectura estable. Se midió el diámetro de la pupila del ojo derecho con un microscopio graduado, y se expresó en unidades de 1/24 mm. Quince minutos después de la administración de los compuestos de ensayo, los ratones se 10 expusieron a Ro-4-1284 (10 mg/kg, s.c.). Ro-4-1284 es un inhibidor del transporte de monoamina vesicular (VMAT2) similar a reserpina, que agota rápidamente las vesículas secretoras.3, 4 Quince, 30 y 60 min. después de la exposición, los ratones se puntuaron para la abertura palpebral (0, 1, 2, 3, 4, 5) y actividad locomotora (-1, 0, 1, 2, 3). En el intervalo de 60 min., inmediatamente después de la puntuación del comportamiento manifiesto, se midió nuevamente el diámetro de la pupila del ojo derecho y la temperatura esofágica. Se observaron fenómenos 15 anormales como olfateo intenso, masticación, crianza, hiperemia, piloerección, salivación, temblores, convulsiones y muerte (estos últimos fenómenos también se observaron cuando ocurrieron antes de la administración de Ro-41284). Criterios para los efectos inducidos por fármacos: reversión de la ptosis: puntuación de la abertura palpebral >1 a 15, 30 o 60 min. (2,7, 0,5 y 0% de controles positivos falsos, respectivamente; n > 350); inducción de la prostración: puntuación -1 para locomoción a 15, 30 o 60 min. (nunca se observó en los controles); reversión de
20 hipomovilidad: puntuación > 0 para locomoción a 15, 30 y 60 min. (2,2, 0,8 y 0% de controles positivos falsos, respectivamente); reversión de la miosis: diámetro de pupila > 5 unidades a 60 min. (0,8% de positivos falsos); potenciación de la hipotermia: disminución de la temperatura (a lo largo del intervalo de tiempo de 1 h) > 9,0ºC (1,4% de positivos falsos); reversión de hipotermia: disminución de la temperatura < 3,0ºC (1,8% de positivos falsos).
Según el procedimiento estándar, se inyecta R0-4-1284 15 min. después de la administración subcutánea u oral, y las observaciones comienzan 15 min. más tarde. Las dosis se dan inicialmente a 3 animales. Cuando al menos 2 de los 3 animales muestran actividad para al menos una de las observaciones, el compuesto se considera activo. En otros casos, el compuesto se considera inactivo al régimen particular de tiempo-vía-dosis, y se clasifica como
5 terminado.
Los compuestos nos 20, 18, 1, 27, 24, 25, 31, 30, 7, 29, 28, 26 y 17 se ensayaron cada uno en 3 animales a una concentración de 80 mg/kg tras la administración oral, y no mostraron actividad en la reversión de miosis, reversión de ptosis, reversión de hipomovilidad. El compuesto 4 se ensayó solamente a 40 mg/kg, y no mostró actividad en la reversión de miosis, reversión de ptosis, reversión de la hipomovilidad.
10 Los compuestos del documento EP 1809622 también se evaluaron en el mismo ensayo, y los resultados se muestran en la Tabla 8 a continuación.
Tabla 8: Datos comparativos
compuesto
efectos secundarios neurológicos inducidos por fármacos
sí
sí
sí
sí
sí
Referencias
[3] Colpaert, F.C., Lenaerts, F.M., Niemegeers, C.J.E., Janssen, P.A.J.: “A critical study on Ro-4-1284 antagonism in mice.”, Arch. Int. Pharmacodyn. 215 40-90 (1975).
[4] Colzi, A., D’Agostini, R., Cesura, A.M., Borroni, E., Da Prada, M.: “Monoamine oxidase-A inhibitors and dopamine metabolism in rat caudatus: evidence that an increased cytosolic level of dopamine displaces reversible monoamine oxidase-A inhibitors in vivo.”, J. Pharmacol. Exp. Ther. 265 103-111 (1993).
[5] Filinger, E.J.: “Effect of a reserpine-like agent on the release and metabolism of [3H]NA in cell bodies and terminals.”, Gen. Pharmacol. 25 1039-1043 (1994).
C.5 Ensayo de fijación de voltaje-inhibición de la corriente de K+ mediada por HERG en células HEK293
Los experimentos se llevaron a cabo usando células HEK293 que expresan de forma estable el canal de potasio
5 HERG. Las células se hicieron crecer a 37ºC y 5% de CO2 en matraces de cultivo en medio MEM suplementado con 10% de suero fetal bovino inactivado por calor, 1% de disolución de L-glutamina-penicilina-estreptomicina, 1% de aminoácidos no esenciales (100x), 1% de piruvato sódico (100 mM) y 0,8% de geneticina (50 mg/ml). Antes del uso, las células se subcultivaron en medio MEM en ausencia de 5 ml de L-glutamina-penicilina-estreptomicina. Pare el uso en el sistema de fijación de voltaje automatizado PatchXpress 7000A (Axon Instruments), las células se
10 cosecharon para obtener suspensión celular de células individuales. La disolución extracelular contenía (mM): 150 de NaCl, 4 de KCl, 1 de MgCl2, 1,8 de CaCl2, 10 de HEPES, 5 de glucosa (pH 7,4 con NaOH). La disolución de la pipeta contenía (mM): 120 de KCl, 10 de HEPES, 5 de EGTA, 4 de ATP-Mg2, 2 de MgCl2, 0,5 de CaCl2 (pH 7,2 con KOH).
Los experimentos de fijación de voltaje se llevaron a cabo en el modo de fijación de voltaje, y las corrientes de
15 células completas se registraron con un ensayo automatizado de fijación de voltaje que utiliza el sistema PatchXpress 7000A (Axon Instruments). Las señales de corriente se amplificaron y se digitalizaron mediante un amplificador Multiclamp, se almacenaron y se analizaron usando el software PatchXpress, DataXpress e Igor 5.0 (Wavemetrics).
El potencial de mantenimiento fue -80 mV. La corriente de HERG (corriente saliente selectiva de K+) se determinó
20 como la corriente de cola máxima a -40 mV después de una despolarización de 2 segundos hasta +60 mV. La velocidad de ciclaje de los pulsos fue 15 s. Antes de cada pulso de ensayo, se administró un pulso corto (0,5 s) desde el potencial de mantenimiento hasta -60 mV, para determinar la corriente de fuga (lineal). Después de establecer la configuración de célula completa y un período de estabilidad, se aplicó el vehículo durante 5 minutos, seguido de la sustancia de ensayo mediante concentraciones crecientes de 10-7 M, 3 x 10-7 M y 3 x 10-6 M. Cada
25 concentración de la sustancia de ensayo se aplicó dos veces. El efecto de cada concentración se determinó después de 5 min. como una corriente promedio de 3 pulsos de voltaje secuenciales. Para determinar el grado de bloqueo, la corriente residual se comparó con pretratamiento con vehículo. Los datos (Tabla 9) se presentan como valores medios (± error estándar de la media (SEM), si está disponible) del porcentaje de inhibición en comparación con el control (el control es 100%) (n = número de experimentos).
30 Tabla 9: Inhibición de la corriente de K+ mediada por HERG en células HEK293
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
76 ± 1,6
58 ± 2,7 13 ± 3,1
68 ± 3,5
41 ± 2,9 5 ± 0,33
68 ± 3,2
36 ± 6,1 5 ± 1
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
80 ± 3,7
65 ± 2 19 ± 0,4
81 ± 4,8
63 ± 5,5 18 ± 1,1
86 ± 4,6
66 ± 5,2 22 ± 4,6
35 ± 8,6
8 ± 3,6 0 ± 0
Compuesto 112 de EP1809622 (n=3)
74 ± 3,2 46 ± 7,3 6 ± 3,1
Compuesto 196 de EP1809622 (n=3)
87 ± 0,9 76 ± 1,6 38 ± 3,1
Compuesto nº 2 (n=3)
89 ± 3,9 75 ± 0,8 18 ± 4,6
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
Compuesto nº 20 (n=3)
88 ± 5,1 76 ± 1,8 26 ± 7,1
Compuesto nº 18 (n=3)
90 ± 1,8 82 ± 3,8 41 ± 4,3
Compuesto nº 1 (n=4)
86 ± 2,5 82 ± 1,1 69 ± 5,1
Compuesto nº 7 (n=3)
86 ± 2,9 53 ± 6,8 2 ± 0,3
Nº 6 (n=4)
89 ± 2,9 87 ± 4,8 69 ± 3,4
Nº 17 (n=3)
84 ± 3,9 70 ± 4,7 21 ± 3,3
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
Nº12 (n=6)
87 ± 0,9 78 ± 2,8 58 ± 2,9
Nº13 (n=3)
91 ± 2,8 85 ± 4,2 75 ± 1,8
Nº19 (n=3)
89 ± 2,4 72 ± 3,2 26 ± 4,7
Nº5 (n=3)
88 ± 1,9 74 ± 6,1 33 ± 10,5
Nº22 (n=3)
76 ± 5,2 49 ± 7,8 9 ± 2,3
Nº15 (n=3)
93 ± 1,2 88 ± 0,8 66 ± 4,4
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
Nº21 (n=3)
91 ± 0,9 86 ± 1,8 65 ± 1,2
Nº9 (n=3)
87 ± 2,1 72 ± 3,4 47 ± 3,2
Nº11 (n=3)
90 ± 8,7 80 ± 7,2 43 ± 3,3
Nº14 (n=4)
84 ± 2,1 57 ± 5,4 10 ± 3,8
Nº4 (n=3)
89 ± 4,2 85 ± 1,7 66 ± 3,3
Nº 10 (n=3)
82 ± 2,1 72 ± 2,6 62 ± 1,8
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
Nº8 (n=3)
93 ± 7,3 83 ± 6,4 25 ± 5,4
Nº16 (n=3)
89 ± 6,0 74 ± 7,9 34 ± 4,4
Nº23 (n=3)
92 ± 1,0 87 ± 2,0 72 ± 0,4
Nº27 (n=3)
90 ± 1,8 75 ± 3,3 53 ± 8,1
Nº24 (n=3)
88 ± 3,2 77 ± 4,2 29 ± 2,9
Nº25 (n=3)
82 ± 1,7 65 ± 2,8 27 ± 2,7
Compuesto
1.10-7 M 3.10-7 M 3.10-6 M
Nº31 (n=3)
91 ± 0,9 82 ± 2,3 55 ± 3,8
Nº26 (n=3)
87 ± 1,7 78 ± 1,8 51 ± 5,9
Nº30 (n=3)
98 ± 1,6 93 ± 6,3 80 ± 7,2
Nº29 (n=3)
89 ± 2,3 82 ± 3,9 39 ± 0,8
imagen62
entonces nuevamente en el día 10. Se monitorizó el recrecimiento tumoral (después de que se detuvo la dosificación) de manera que se pudiera registrar el tiempo para alcanzar un volumen de 2000 mm3 (TTR2000). Esto da información adicional sobre la duración de la acción del fármaco sobre el crecimiento tumoral. En general, el tamaño tumoral y los pesos corporales se midieron dos veces a la semana, monitorizándose los ratones diariamente
5 en busca de signos clínicos de toxicidad durante todo el tratamiento. Los signos clínicos de toxicidad incluyeron (pero sin limitarse a) anorexia persistente o deshidratación, postura, moribundo, letargo, hipotermia y/o respiración dificultosa (según las directrices de UKCCCR para el bienestar de animales en neoplasia experimental (The UKCCCR (UK Coordinating Committee on Cancer Research) guidelines for the welfare of animals in experimental neoplasia (julio de 1997); y Workman, P. et al. UKCCCR guideline. Br. J. Cancer. 1998, 77: 1-10).
10 Análisis de los datos:
Para cada animal individual, se monitorizaron dos veces a la semana el peso corporal y el tamaño tumoral [usando la fórmula aceptada habitualmente: Volumen Tumoral (mm3) = (a x b2/2); en la que “a” representa la longitud, y “b” representa la anchura del tumor, según se determina mediante medidas con calibre], durante el estudio. Una pérdida de peso corporal sostenida mayor que 15% del peso corporal inicial se consideró como toxicidad clínica, y 15 retirándose el animal del estudio y sacrificándolo. El transcurso de tiempo del crecimiento tumoral se expresa como valores de la mediana, o se puede normalizar con respecto al volumen tumoral inicial en el día de tratamiento comenzado y se puede expresar como media ± error estándar de la media (SEM) (5 animales por grupo). Para tumores preestablecidos, se pueden calcular los volúmenes tumorales relativos para cada ratón (volumen de tumor tratado/volumen tumoral en el día 0) y se pueden expresar como media ± SEM para cada grupo de tratamiento. La
20 significancia estadística se indica mediante los valores de p de un lado a partir del análisis de Wilcoxon-Mann-Whitney (prueba de la suma de rangos de Wilcoxon), y p < 0,05 se considera como estadísticamente significativo. Las relaciones de tratamiento/control (T/C) se calculan en base a los volúmenes tumorales relativos finales, usando los criterios del NCI en el día 6 y 10 (día 1 = comienzo del tratamiento, una vez que los ratones se han distribuido al azar y se han asignado a los grupos de tratamiento apropiados). El criterio efectivo para relaciones T/C es 42%.
25 Tabla 10: % T/C en el día 6 y en el día 10 tras el comienzo de la dosificación
Comp. nº
% T/C día 6 % T/C día 10
6
105 99
12
64 71
19
57 40
2
14 -0,23
5
103 67
22
40 55
15
53 88
18
9 -3
21
102 95
9
145 113
11
72 79
4
77 129
10
96 71
16
63 64
23
72 95
1
17 8
27
193 22
24
60 1
31
179 1
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2841517B2 (ja) 1989-08-11 1998-12-24 株式会社ツムラ 入浴剤
JP2872763B2 (ja) 1990-06-28 1999-03-24 紀伊産業株式会社 携帯用肛門洗浄器
EP2771341A4 (en) * 2011-10-28 2015-09-23 Univ Texas NEW COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF CANCER
WO2014085486A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Waters Technologies Corporation Methods and apparatus for the analysis of vitamin d metabolites
CN108239083B (zh) 2016-12-26 2021-08-17 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
CN106632303A (zh) * 2017-01-09 2017-05-10 湖南华腾制药有限公司 一种6‑噻唑基吲哚衍生物的制备方法
EP3713937A2 (en) 2017-11-20 2020-09-30 Ariagen, Inc. Indole compounds as aryl hydrocarbon receptor (ahr) modulators
CN108659003B (zh) * 2018-04-14 2021-01-26 上海朝晖药业有限公司 一种治疗口腔溃疡的化合物的制备方法
CA3125244A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. 6-oxo-1,6-dihydropyridazine derivative, preparation method therefor and medical use thereof
CN112996776B (zh) * 2019-02-20 2024-03-15 福建盛迪医药有限公司 6-氧代-1,6-二氢哒嗪类前药衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CA3137027A1 (en) 2019-04-15 2020-10-22 Ariagen, Inc. Chiral indole compounds and their use
WO2024102758A2 (en) * 2022-11-08 2024-05-16 The General Hospital Corporation N-(n-aminoalkyl)phenanthridiunium series of chloride-sensitive fluorophores and methods of use thereof

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
AUPO863197A0 (en) 1997-08-18 1997-09-11 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel derivatives
US6309492B1 (en) 1998-09-16 2001-10-30 Marc A. Seidner Polymer fill coating for laminate or composite wood products and method of making same
UA71587C2 (uk) 1998-11-10 2004-12-15 Шерінг Акцієнгезелльшафт Аміди антранілової кислоти та їхнє застосування як лікарських засобів
AU1290700A (en) 1998-12-02 2000-06-19 Pfizer Products Inc. Methods and compositions for restoring conformational stability of a protein of the p53 family
AU1734401A (en) 1999-12-09 2001-06-18 Mitsubishi Pharma Corporation Carboxyamido derivatives
US6835731B2 (en) 2000-09-15 2004-12-28 Anormed, Inc. Chemokine receptor binding heterocyclic compounds
DE60222396T2 (de) * 2001-03-29 2008-05-15 Eli Lilly And Co., Indianapolis N-(2-arylethyl) benzylamine als 5-ht6 rezeptor-antagoniste
WO2003040402A2 (en) 2001-11-09 2003-05-15 The Regents Of The University Of California Alpha-helix mimicry by a class of organic molecules
PT1443937E (pt) 2001-11-13 2008-09-23 Ortho Mcneil Janssen Pharm 1,4-benzodiazepinas substituídas e as suas utilizações para o tratamento de cancro
BR0215157A (pt) 2001-12-18 2004-10-19 Hoffmann La Roche Cis-2,4,5-trifenil-imidazolinas e seu uso no tratamento de tumores
GB0215650D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Cyclacel Ltd Bisarylsufonamide compounds
ATE474833T1 (de) * 2004-09-22 2010-08-15 Janssen Pharmaceutica Nv Inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und p53
JP5385125B2 (ja) 2006-03-22 2014-01-08 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ＭＤＭ２とｐ５３の間の相互作用の阻害剤
JP5162574B2 (ja) 2006-03-22 2013-03-13 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ Ｍｄｍ２及びｐ５３間の相互作用のインヒビターとしての環式アルキルアミン誘導体
US20100129933A1 (en) * 2007-04-26 2010-05-27 Forschungszentrum Karlsruhe Gmbh Method for detecting the binding between mdm2 and the proteasome
ES2534899T3 (es) 2007-08-06 2015-04-30 Janssen Pharmaceutica, N.V. Fenilendiaminas sustituidas como inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53
ATE547415T1 (de) 2007-09-21 2012-03-15 Janssen Pharmaceutica Nv Inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und p53
JO2704B1 (en) 2007-09-21 2013-03-03 جانسين فارماسوتيكا ان في Interference inhibition factors between MD2 and B53

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