ES2640267T3

ES2640267T3 - Hebras de ácido hialurónico reticulado y métodos de uso de las mismas

Info

Publication number: ES2640267T3
Application number: ES12773485.3T
Authority: ES
Inventors: Sara Fermanian; Kenneth Horne; Vivek Shenoy; Jayakumar Rajadas; Jeff Prior; Naveen Jayakumar; Geoffrey Gurtner
Original assignee: Allergan Industrie SAS
Current assignee: Allergan Industrie SAS
Priority date: 2011-10-11
Filing date: 2012-10-10
Publication date: 2017-11-02
Anticipated expiration: 2032-10-10
Also published as: JP2014533992A; NZ623909A; DK2766056T3; AU2012318283A1; HK1203855A1; EP2766056A1; KR102049124B1; AU2012318283B2; EP3243533A1; ES2823148T3; JP6153529B2; EP2766056B1; CA2852022A1; EP3243533B1; WO2013055832A1; CN104144714A; MX353955B; CN104144714B; US20130226235A1; KR20140100469A

Abstract

Hebra que comprende ácido hialurónico reticulado, en la que el ácido hialurónico se reticula con al menos el 15% en moles de un derivado de diglicidil éter de butanodiol (BDDE) en relación con la unidad de disacárido de repetición del ácido hialurónico, y al menos el 5% en peso de ácido hialurónico no reticulado en relación con el peso de los sólidos de ácido hialurónico totales, en la que el ácido hialurónico reticulado está presente en una cantidad de desde el 60% en peso hasta el 90% en peso basándose en el peso total de la hebra excluyendo la humedad.

Description

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DESCRIPCION

Hebras de acido hialuronico reticulado y metodos de uso de las mismas

Esta solicitud reivindica el beneficio segun la ley 35 U.S.C. 119(e) con respecto a las solicitudes provisionales numeros 61/545.962, presentada el 11 de octubre de 2011, 61/568.077, presentada el 7 de diciembre de 2011 y 61/644.945, presentada el 9 de mayo de 2012.

Campo

Esta divulgacion se refiere en general a hebras de acido hialuronico, a metodos de preparacion de tales hebras y a usos de las mismas, por ejemplo, en aplicaciones esteticas (por ejemplo, contorneado facial, relleno dermico), cirugfa (por ejemplo, suturas), administracion de farmacos, terapia de heridas con presion negativa, vendajes de heridas humedas y similares.

Antecedentes

El acido hialuronico (HA) es un polisacarido lineal (es decir, glucosaminoglucano no sulfatado) que consiste en una unidad de disacarido repetido de p-D-N-acetilglucosamina y acido p-D-glucuronico unidos alternamente que puede representarse mediante la formula:

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en la que n es el numero de unidades de repeticion. El acido hialuronico se denomina algunas veces mediante la nomenclatura (-4GlcUAp1-3GlcNAcp1-)n) y es un componente clave de la matriz extracelular encontrado, por ejemplo, en tejido conjuntivo, epitelial y neural. El acido hialuronico natural es altamente biocompatible debido a su carencia de especificidad de organo y especie y se usa a menudo como biomaterial en ingeniena de tejidos y como componente comun en productos de aumento de tejidos blandos.

El acido hialuronico natural tiene una escasa estabilidad in vivo debido a la hidrolisis y degradacion enzimatica rapidas y, por consiguiente, se han sintetizado diversas formas modificadas qmmicamente de acido hialuronico (por ejemplo, formas reticuladas, formas modificadas ionicamente, formas esterificadas, etc.) para abordar este problema. Actualmente, se usan acido hialuronico o versiones reticuladas del mismo en diversas formas de gel, por ejemplo como productos de aumento de tejidos blandos, barreras de adhesion y similares.

Sin embargo, existen problemas con el uso de geles de acido hialuronico o sus versiones reticuladas como productos de aumento de tejidos blandos. En primer lugar, la fuerza requerida para dispensar geles de acido hialuronico o sus versiones reticuladas no es lineal, lo que puede provocar una eyeccion inicial de un “pegote” de gel que muchos medicos notifican cuando usan geles de acido hialuronico inyectables. En segundo lugar, la dispensacion precisa de geles de acido hialuronico en ubicaciones espedficas puede ser diffcil porque tales geles tienen poca resistencia mecanica. Ademas, el gel ocupara el espacio de menor resistencia, lo que hace que su uso en muchas aplicaciones (por ejemplo, tratamiento de arrugas finas) sea problematico ya que el gel migrara a menudo al interior de zonas espaciales no deseadas haciendo que el procedimiento cosmetico sea diffcil y posiblemente incluso peligroso. En tercer lugar, muchos productos de aumento de tejidos blandos comunes que se inyectan en el sitio de tratamiento como un ffquido o un gel, tales como Restilane® (acido hialuronico), Juvederm® (acido hialuronico), Radiesse® (hidroxiapatita de calcio), Sculptra® (poli-acido-L-lactico) y Perlane® (acido hialuronico), son capaces de migrar y/o provocar “grumos” antiesteticos que son dolorosos de tratar. En cuarto lugar, estos productos de aumento de tejidos blandos no estan recomendados para su uso alrededor de los ojos ya que la migracion desde el sitio de inyeccion puede provocar ceguera, necrosis tisular, y en casos poco comunes incluso accidente cerebrovascular. Finalmente, los medicos tambien encuentran que la realizacion de aumentos de labios usando estos materiales de relleno requieren mucho tiempo y los pacientes encuentran los tratamientos en esta zona tan dolorosa que se realizan rutinariamente bloqueos de nervios.

Por consiguiente, se han desarrollado formas en hebras de acido hialuronico y sus versiones reticuladas que pueden dispensarse uniformemente en ubicaciones espedficas independientemente de la resistencia del tejido, y sin el riesgo de migracion en la implantacion. Estas formas en hebras son beneficiosas porque tienen una resistencia a la traccion mejorada y mayor facilidad de administracion. Por ejemplo, el documento WO 2010/028025 A1 se refiere a hebras de acido hialuronico reticulado o sales, hidratos o solvatos del mismo.

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Debido al potencial terapeutico significativo de formas en hebras de acido hialuronico, sigue habiendo la necesidad de desarrollar condiciones de reaccion y protocolos de fabricacion que produciran hebras mejoradas y productos de aumento de tejidos blandos que tienen propiedades ffsicas superiores.

Sumario

Se han desarrollado hebras que comprenden acido hialuronico reticulado tal como se expone en las reivindicaciones. Se ha encontrado sorprendentemente que alteraciones, tal como se describe a lo largo de todo el documento, en las cantidades relativas de los componentes, condiciones de reaccion, modificacion covalente del acido hialuronico y protocolos de fabricacion pueden tener efectos significativos sobre determinadas propiedades de las hebras que comprenden acido hialuronico reticulado.

En un aspecto, se divulga una composicion que comprende acido hialuronico reticulado, a partir de la que se preparan las hebras tal como se describe en el presente documento. Por ejemplo, en una realizacion, se divulga una composicion de gel que comprende al menos el 5% de acido hialuronico, en la que el acido hialuronico se reticula sustancialmente con al menos aproximadamente el 15% en moles de un derivado de diglicidil eter de butanodiol (BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. Ademas se proporcionan composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado, que comprenden ademas un aglutinante, tal como acido hialuronico no reticulado, tal como se expone en la reivindicacion 1.

Las hebras descritas en el presente documento pueden prepararse usando una composicion que comprende acido hialuronico sustancialmente reticulado, en la que el acido hialuronico se reticula con al menos aproximadamente el 15% en moles de un derivado de diglicidil eter de butanodiol (BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. Se ha descubierto que la concentracion de agente de reticulacion, es decir BDDE, usado para preparar el acido hialuronico sustancialmente reticulado, se usa para afinar y/o mejorar determinadas propiedades ffsicas de la hebra. Ademas, en determinadas realizaciones, la composicion comprende al menos el 5% de acido hialuronico antes de la reticulacion, tal como el 8%, el 10% o el 12% de acido hialuronico.

Ademas, las hebras tal como se proporcionan en el presente documento comprenden tanto acido hialuronico reticulado como no reticulado. Sorprendentemente, se descubrio que las concentraciones relativas de estos dos componentes teman un impacto sobre determinadas propiedades ffsicas de las hebras, lo que en ultima instancia condujo a un aumento de la eficacia in vivo como productos de aumento de tejidos blandos.

Ademas, tal como se detalla en el presente documento, pueden alterarse diversos aspectos del procedimiento de fabricacion de las hebras (por ejemplo, aclarado, desaireacion, extrusion y secado de los geles precursores, asf como la esterilizacion terminal de las hebras secas) para producir hebras que tienen caracteffsticas ffsicas mejoradas. Espedficamente, se han preparado hebras que comprenden acido hialuronico reticulado con una reticulacion significativa (por ejemplo, al menos aproximadamente el 15% de derivado de BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. Se contempla que esta reticulacion aumentada dentro de la composicion de acido hialuronico reticulado de como resultado hebras con una semivida in vivo mas prolongada.

Las hebras de acido hialuronico descritas en el presente documento presentan una semivida in vivo aumentada en comparacion con las hebras de acido hialuronico descritas anteriormente en la tecnica. Cuando se implantan en el dorso de conejos, las hebras esterilizadas descritas en la tecnica se reabsorbieron completamente en el plazo de 30 dfas mientras que las hebras descritas en el presente documento estaban presentes todavfa a los 3 meses o mas en algunos casos.

En otro aspecto, se proporciona una hebra que tiene caracteffsticas ffsicas que pueden atenuarse alterando los metodos de preparacion descritos en el presente documento. Por ejemplo, en una realizacion, se describe una hebra seca que comprende acido hialuronico sustancialmente reticulado preparado mediante las etapas de: a) formar una composicion de acido hialuronico sustancialmente reticulado poniendo en contacto acido hialuronico con BDDE; b) anadir acido hialuronico no reticulado a la composicion; c) extruir la composicion sustancialmente reticulada para formar una hebra humeda; y d) secar la hebra humeda para formar una hebra seca.

En una de sus realizaciones, se proporciona una hebra tal como se proporciona en el presente documento para su uso en un metodo de tratamiento de una arruga en un sujeto que lo necesita. En tal aspecto, la hebra se inserta en la piel de un paciente adyacente a o bajo la arruga. La hebra se aplica entonces bajo la arruga, tratando de ese modo la arruga. En una realizacion, tras la exposicion a fluidos corporales o mediante hidratacion manual, la hebra se expande tras la hidratacion y tal expansion es suficiente normalmente para rellenar la arruga. Es ventajoso hacer que una hebra se expanda tras la hidratacion porque se minimiza la invasividad del perfil de insercion, sin embargo, tambien pueden usarse hebras disenadas para no expandirse para tratar la arruga.

En otra realizacion, se proporciona una hebra tal como se proporciona en el presente documento para su uso en un metodo para proporcionar un contorneado facial en un sujeto que lo necesita. En esta realizacion, la hebra se inserta en la piel en o adyacente a la ubicacion de tratamiento deseada, por ejemplo, los labios, el pliegue nasolabial, el

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pliegue nasoyugal, etc. La hebra se aplica entonces proporcionando de ese modo un contorneado facial. En una realizacion, se aplica una hebra a diversos planos del tejido dermico. En una realizacion, pueden colocarse varias hebras generalmente paralelas entre sf y pueden colocarse otras hebras en una direccion generalmente perpendicular con respecto al primer conjunto de hebras paralelas formando de ese modo una estructura de malla cuyo efecto agregado es contornear un defecto mas grande o un defecto mas extendido tal como el pliegue nasoyugal o la region infraorbital del ojo.

Tambien se proporciona un kit de partes que comprende la hebra. En algunas realizaciones, el kit comprende ademas un medio para administrar la hebra. Los medios para la administracion pueden ser o bien una jeringa o bien una aguja.

En todavfa otros aspectos, se proporcionan hebras de acido hialuronico para su uso como productos de aumento de tejidos blandos, contorneado facial, barreras de adhesion, vendajes de heridas incluyendo vendajes de heridas con presion negativa, suturas y similares. Se describen ademas hebras de acido hialuronico para su uso, por ejemplo, en cirugfa, oftalmologfa, cierre de heridas, administracion de farmacos y similares. Estas realizaciones, asf como otras, se comentan en mas detalle a continuacion.

Breve descripcion de los dibujos

Determinados aspectos se entienden mejor a partir de la siguiente descripcion detallada cuando se lee conjuntamente con los dibujos adjuntos. Se enfatiza que, segun la practica comun, las diversas caractensticas de los dibujos no estan a escala. Por el contrario, las dimensiones de las diversas caractensticas se expanden o se reducen arbitrariamente por claridad. Se incluyen en los dibujos las siguientes figuras:

La figura 1 muestra un esquema de acido hialuronico reticulado con diglicidil eter de butanodiol (BDDE).

La figura 2 ilustra una hebra unida al extremo proximal de una aguja, en su totalidad (N = aguja; T = hebra).

Las figuras 3A y 3B muestran una aguja unida a la hebra (N = aguja; T = hebra). La figura 3A ilustra una vista en primer plano de una hebra insertada en el diametro interno de una aguja; y la figura 3B ilustra una vista en primer plano del extremo proximal de una aguja solida con la hebra solapandose con la aguja.

Las figuras 4A-4F muestran el tratamiento de una arruga. La figura 4A ilustra una arruga facial fina en la region periorbital de un humano; la figura 4B ilustra una aguja y hebra insertandose en la piel de la arruga en el margen medio; la figura 4C ilustra la aguja ajustandose para atravesar por debajo de la arruga; la figura 4D ilustra la aguja saliendo en el margen lateral de la arruga; la figura 4E ilustra la aguja que ha tirado de la hebra hasta la ubicacion que ocupaba previamente por debajo de la arruga; y la figura 4F ilustra la hebra implantada por debajo de la arruga, habiendose cortado la hebra en exceso.

Las figuras 5A-5C muestran el tratamiento de una arruga. La figura 5A ilustra una vista en seccion transversal de un pliegue o una arruga; la figura 5B ilustra una hebra implantada por debajo de una arruga que no esta hidratada aun; y la figura 5C ilustra una hebra implantada por debajo de una arruga que esta completamente hidratada y ha aplanado el aspecto superficial de la arruga.

La figura 6 ilustra como podnan usarse una aguja y una hebra para colocar una hebra en una ubicacion lineal, espedfica para promover el recrecimiento de nervios o vasos en una lmea espedfica.

La figura 7A muestra la colocacion de hebras en una orientacion relativamente paralela para el contorneado facial en el pliegue nasoyugal (hebra 1, 2, 3, 4, 5 y 6). Esta figura tambien muestra la colocacion de la hebra para el contorneado facial del pliegue nasolabial (hebra 7 y 8). La figura 7B muestra una colocacion alternativa de las hebras para el contorneado facial en el pliegue nasoyugal (hebra 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8).

Las figuras 8A y 8B muestran un esquema de la microanatoirna contemplada de una hebra implantada en un paciente tanto en seccion transversal de la piel como en seccion transversal tridimensional.

Las figuras 9A, 9B, 9C, 9D y 9E muestran (a 14x aumentos) una seccion transversal histologica de un conejo, un mes (9A), dos meses (9B), tres meses (9C), seis meses (9D) y nueve meses (9E) tras tratarse con hebras preparadas a partir de una composicion de hebras 8/40@15/20 (lavado con tampon fosfato; el 15% de solidos de HA, el 20% de HA es aglutinante no reticulado en agua). Los detalles de los estudios histologicos ilustrados en las figuras 9A, 9B, 9C, 9D y 9E pueden encontrarse en el ejemplo 9.

La figura 10 muestra una diseccion macroscopica de un conejo un mes despues de tratarse con hebras preparadas a partir de una composicion de hebras 8/40@15/20 (lavado con tampon fosfato; el 15% de solidos de HA, el 20% de hA es aglutinante de HA no reticulado). Los detalles de la diseccion ilustrada en la figura 10 pueden encontrarse en el ejemplo 10.

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La figura 11 muestra una diseccion macroscopica de un conejo dos meses tras tratarse con hebras preparadas a partir de una composicion de hebras 8/40@15/20 (lavado con tampon fosfato; el 15% de solidos de HA, el 20% de HA es aglutinante de HA no reticulado). Los detalles de esta diseccion ilustrada en la figura 11 pueden encontrarse en el ejemplo 10.

La siguiente nomenclature de hebras se usa en las figuras 12 y 13 para describir las composiciones de gel: AA/BB@XX/YY, en la que (AA) es el % en peso de acido hialuronico en relacion con el peso de la disolucion reticulada; (BB) es el % en peso de BDDE en relacion con el peso del acido hialuronico; (XX) es el % en peso de “solidos” de acido hialuronico reticulado y no reticulado en relacion con el peso de la composicion (antes de la extrusion); e (YY) es el % en peso de acido hialuronico no reticulado en relacion con el peso de “solidos” totales de acido hialuronico reticulado y no reticulado.

La figura 12 muestra los resultados de un estudio de degradacion de hebras con hialuronidasa (1 mg/ml). Los detalles de estas degradaciones enzimaticas representadas en la figura 12 pueden encontrarse en el ejemplo 7. Para las hebras A-F: A = 10/40@15/20 CaCh; B = 10/40@15/40; C = 10/40@15/20; D = 10/40@10/50; E = 8/40@15/20 lavado con H2O; F = 8/40@15/20; G = Control para 10/40@15/20 CaCh; H = Control para 10/40@15/40; I = Control para 10/40@15/20; J = Control para 8/40@15/20. Las flechas verticales corresponden a la adicion de 1 mg/ml de hialuronidasa nueva.

La figura 13 muestra puntuaciones de palpacion promedio para hebras a modo de ejemplo tal como se describe en el presente documento. Los detalles de estos estudios de palpacion representados en la figura 13 pueden encontrarse en el ejemplo 8. Para las hebras A-F: A = 8/40@15/20; B = 8/40@15/20; C = 10/40@10/50; D = 10/40@15/20; E = 10/40@15/20; F = 10/40@15/40; Aguja = predimensionada (20 G); esterilizada de manera terminal (20 kGy); tamano de hebra ~0,01 pulgadas.

La figura 14 muestra la distribucion de tamano de partfcula de partfculas de hasta 0,3 mm cuadrados de diametro del gel con una y multiples etapas de dimensionamiento.

Descripcion detallada

Se describen en el presente documento hebras de acido hialuronico sustancialmente reticulado, las composiciones a partir de las cuales se preparan, los metodos para su preparacion y usos de las mismas y formas espedficas formadas a partir de las mismas. Sin embargo, se definiran en primer lugar los siguientes terminos.

Debe entenderse que esta divulgacion no se limita a las realizaciones particulares descritas, como tal, por supuesto, puede variar. Tambien se entiende que la terminologfa usada en el presente documento es para el fin de describir realizaciones particulares solo, y no pretende ser limitativa, puesto que el alcance de la presente divulgacion estara limitado solo por las reivindicaciones adjuntas.

Debe indicarse que tal como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”, “una”, y “el/la” incluyen referentes en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Por tanto, por ejemplo, la referencia a “una hebra” incluye una pluralidad de hebras.

1. Definiciones

A menos que se indique lo contrario, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comunmente un experto habitual en la tecnica a la que pertenece esta divulgacion. Tal como se usa en el presente documento los siguientes terminos tienen los siguientes significados.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “que comprende” o “comprende” pretende significar que las composiciones y los metodos incluyen los elementos mencionados, pero sin excluir otros. “Que consiste esencialmente en” cuando se usa para definir composiciones y metodos, significara que excluye otros elementos de cualquier significancia esencial para la combinacion para el fin establecido. Por tanto, una composicion que consiste esencialmente en los elementos definidos en el presente documento no excluina otros materiales o etapas que no afectan materialmente a la(s) caractenstica(s) basica(s) y novedosa(s) reivindicada(s). “Que consiste en” significara que excluye mas que elementos traza de otros componentes y etapas de metodo sustanciales. Las realizaciones definidas por cada uno de estos terminos de transicion estan dentro del alcance de esta divulgacion.

El termino “aproximadamente” cuando se usa antes de una designacion numerica, por ejemplo, temperatura, tiempo, cantidad y concentracion, incluyendo un intervalo, indica aproximaciones que pueden variar en (+) o (-) el 10%, el 5% o el 1%.

El termino “acido hialuronico” o “HA” se refiere al polfmero que tiene la formula:

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en la que n es el numero de unidades de repeticion. Todas las fuentes de acido hialuronico son utiles, incluyendo fuentes bacterianas y aviares. Los acidos hialuronicos utiles tienen un peso molecular de desde aproximadamente 0,5 MDa (mega Dalton) hasta aproximadamente 3,0 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de desde aproximadamente 0,6 MDa hasta aproximadamente 2,6 MDa y en aun otra realizacion, el peso molecular es de desde aproximadamente 1,4 MDa hasta aproximadamente 1,7 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de aproximadamente 0,7 MDa y en aun otra realizacion, el peso molecular es de aproximadamente 1,7 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de aproximadamente 2,7 MDa.

Al menos una porcion de la hebra tal como se describe en el presente documento se reticula. El termino “reticulado” pretende referirse a dos o mas cadenas de polfmero de acido hialuronico que se han unido covalentemente por medio de un agente de reticulacion. Tal reticulacion se diferencia de la deshidratacion intermolecular o intramolecular que da como resultado la formacion de lactona, anhfdrido o ester dentro de una unica cadena de polfmero o entre dos o mas cadenas. Aunque se contempla que tambien pueda producirse reticulacion intramolecular en las hebras tal como se describe en el presente documento. El termino “reticulado” tambien pretende referirse a acido hialuronico covalentemente unido a un derivado de BDDE. En algunas realizaciones, el termino “reticulado” tambien se refiere a acido hialuronico covalentemente modificado.

Los “agentes de reticulacion” contienen al menos dos grupos funcionales reactivos que crean enlaces covalentes entre dos o mas moleculas. Los agentes de reticulacion pueden ser homobifuncionales (es decir, tienen dos extremos reactivos que son identicos) o heterobifuncionales (es decir tienen dos extremos reactivos diferentes). Los agentes de reticulacion que van a usarse en la presente divulgacion deben comprender grupos funcionales complementarios al del acido hialuronico de manera que pueda avanzar la reaccion de reticulacion. En una realizacion, la reticulacion no forma acido hialuronico esterificado. Los agentes de reticulacion adecuados incluyen, a modo de ejemplo solo, diglicidil eter de butanodiol (BDDE), divinilsulfona (DVS) o clorhidrato de 1 -etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodimida (EDC), o una combinacion de los mismos. En una realizacion, el agente de reticulacion es BDDE.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “derivado de BDDE” se refiere a una forma de BDDE en la que uno o ambos epoxidos de BDDE han reaccionado con acido hialuronico. BDDE tiene la siguiente estructura qrnmica:

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BDDE

Un ejemplo de un derivado de BDDE de acido hialuronico se muestra a continuacion.

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El derivado de BDDE de acido hialuronico, tal como se mostro anteriormente, puede unirse covalentemente a acido hialuronico en ambos extremos habiendo reaccionado ambos epoxidos. Se contemplan derivados de BDDE adicionales de acido hialuronico en el presente documento. Por ejemplo, determinados derivados de BDDE de acido hialuronico pueden unirse covalentemente en ambos extremos entre dos polfmeros de acido hialuronico separados (es decir, reticularse), mientras que otros derivados de BDDE pueden unirse covalentemente en ambos extremos dentro de un unico polfmero de acido hialuronico. Tambien se contemplan derivados de BDDE que se unen covalentemente en uno o ambos extremos a un grupo hidroxilo de uno o mas derivados de BDDE adicionales que se unen covalentemente por sf mismos a acido hialuronico.

Tambien se contemplan derivados de BDDE que se unen covalentemente a acido hialuronico en tan solo un

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extremo. Por ejemplo, uno de los anillos de epoxido puede abrirse mediante union covalente a un unico tramo de un poKmero de acido hialuronico mientras que el otro anillo de epoxido puede permanecer cerrado (es decir, sin reaccionar). Se contempla ademas que, dentro de las composiciones de acido hialuronico reticulado, la concentracion de tales derivados de BDDe con un epoxido sin reaccionar sea lo suficientemente baja de modo que no afecte a la biocompatibilidad de hebras preparadas a partir de tales composiciones. Ademas se contempla un derivado de BDDE en el que uno de los anillos de epoxido se ha abierto mediante union covalente a un unico tramo de polfmero de acido hialuronico mientras que el otro anillo de epoxido se ha abierto mediante hidrolisis. Sin embargo, se contempla que las composiciones de acido hialuronico reticulado comprendan al menos aproximadamente el 2% en moles de BDDE (con respecto al monomero de disacarido) que se une covalentemente en ambos extremos entre dos polfmeros de acido hialuronico separados.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “aglutinante” se refiere a una sustancia sintetica o que se produce de manera natural que proporciona consistencia y/o cohesion uniforme en la composicion que comprende el acido hialuronico reticulado, que cuando se extruye, forma una hebra. En una realizacion, el aglutinante es acido hialuronico no reticulado. En otra realizacion, el aglutinante se selecciona de un grupo que consiste en azucares y polisacaridos tales como sacarosa, maltosa, sulfato de condroitina, sulfato de dermatan, heparina, quitosano, celulosa, gelatina, colageno, goma arabiga, almidon, PVP (polivinilpirrolidona), HPC (hidroxipropilcelulosa), HPMC (hidroxipropilmetilcelulosa), PEG, PLGA (poli(acido lactico-co-glicolico), carboximetilcelulosa, etilcelulosa, poli(oxido de etileno) de gelatina, dextrina, silicato de aluminio y magnesio, polimetacrilatos, y similares.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “piel” se refiere a las tres capas: la epidermis, la dermis y la hipodermis o el tejido subcutaneo mas profundo.

Tal como se usa en el presente documento, los terminos “mas suave”, “suave” y “suavidad” se refieren a la propiedad de una hebra que proporciona un arrastre disminuido cuando se tira de la misma a traves del tejido. Cuanto mas suave sea la hebra, menos arrastre habra cuando se tire de la misma a traves de la piel.

Tal como se usa en el presente documento, el termino “hebra” se refiere a una forma larga, fina, flexible de un material. La hebra tal como se describe en el presente documento puede tener una variedad de formas en la seccion transversal que se comentan mas adelante.

El termino “resistencia a la traccion final” pretende referirse a la resistencia a la traccion de la hebra que se ha normalizado con respecto al area de seccion transversal. El termino “resistencia a la traccion” pretende referirse al esfuerzo maximo que una hebra puede soportar sin fallar cuando se somete a tension. En una realizacion, se contempla que la resistencia a la traccion final sea suficiente para tirar de la hebra a traves de la piel y manipularla una vez que esta en la piel de manera que la integridad de la hebra no se vea sustancialmente comprometida por, por ejemplo, rotura o segmentacion. Se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan preferiblemente una resistencia a la traccion final de aproximadamente 3 kpsi (“kilolibras por pulgada cuadrada”) o mayor, o 5 kpsi o mayor, o 10 kpsi o mayor, o 15 kpsi o mayor o 20 kpsi o mayor o 50 kpsi o mayor o 75 kpsi o mayor. En algunas realizaciones, las hebras tienen una resistencia a la traccion de aproximadamente 0,4 lbf (libra de fuerza) o mayor, o 0,6 lbf o mayor, o 0,8 lbf o mayor, o 1,0 lbf o mayor, o 1,1 lbf o mayor. En algunas realizaciones, las hebras tienen una resistencia a la traccion de aproximadamente 0,7 lbf.

En algunas realizaciones, la resistencia a la traccion puede medirse usando un dinamometro y midiendo la fuerza maxima requerida para romper la hebra. De aproximadamente 9 lotes de hebras sometidos a prueba, la resistencia a la traccion promedio era de aproximadamente 0,71 libras de fuerza usando una boquilla de extrusion de calibre 20.

El termino “porcentaje de humedad” pretende referirse al porcentaje total de agua en peso. En una realizacion, el porcentaje de humedad de la hebra es de aproximadamente el 30% o menos, o alternativamente, de aproximadamente el 15% o menos, o alternativamente, de aproximadamente el 10% o menos. Esto puede medirse normalmente mediante una valoracion de Karl Fisher.

Las hebras descritas en el presente documento pueden prepararse para dar una variedad de formas. El termino “sustancialmente cilmdrico” se refiere a una hebra en la que la seccion transversal de la hebra es redonda. El termino “sustancialmente” tal como se usa para referirse a las formas de las hebras significa que al menos el 50% de la hebra tiene la forma aproximada descrita. El termino sustancialmente tambien se usa para abarcar hebras que tienen una variedad de formas a lo largo de la longitud de la hebra. Por ejemplo, una hebra podna ser sustancialmente cilmdrica pero los extremos de la hebra pueden tener una seccion transversal decreciente. Las hebras sustancialmente cilmdricas pueden proporcionarse cuando el angulo de contacto de la composicion de gel y el sustrato sobre el que se extruye tienen un angulo de contacto en equilibrio de mas de aproximadamente 90 grados.

El termino “sustancialmente con forma de D” se refiere a una hebra en la que la seccion transversal tiene forma de D o es sustancialmente semicircular. Las hebras con forma sustancialmente de D tienen un lado plano y un lado sustancialmente redondo. Las hebras con sustancialmente forma de D pueden proporcionarse cuando el angulo de contacto de la composicion de gel y el sustrato sobre el que se extruye tienen un angulo de contacto de equilibrio de

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aproximadamente 90 grados.

El termino “sustancialmente con forma de cinta” se refiere a una hebra en la que el grosor de la hebra es menor de aproximadamente el 50% de la anchura de la hebra. En algunas realizaciones, la seccion transversal es sustancialmente rectangular. Las hebras con forma de cinta pueden proporcionarse cuando el angulo de contacto de la composicion de gel y el sustrato sobre el que se extruye tienen un angulo de contacto de equilibrio de menos de aproximadamente 90 grados. Alternativamente, las hebras con forma de cinta pueden formarse cortando un gel humedo para lograr la forma de seccion transversal deseada. “En forma de cinta” puede incluir tambien formas que son sustancialmente elipsoidales. El termino “sustancialmente elipsoidal” se refiere a una hebra en la que la seccion transversal es sustancialmente oblonga o elfptica.

El termino “agente terapeutico” puede incluir uno o mas agentes terapeuticos. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es un anestesico, incluyendo pero sin limitarse a, lidocama, xilocama, novocama, benzocama, prilocama, ripivacama, propofol, o combinaciones de los mismos. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico incluye, pero no se limita a, epinefrina, efedrina, aminofilina, teofilina o combinaciones de las mismas. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es toxina botulmica. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es laminina-511. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es glucosamina, que puede usarse, por ejemplo, en el tratamiento de artropatfa degenerativa. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es un antioxidante, incluyendo pero sin limitarse a, vitamina E o acido todo-trans retinoico tal como retinol. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico incluye celulas madre. En todavfa otra de las realizaciones anteriores, el agente terapeutico es insulina, un factor de crecimiento tal como, por ejemplo, NGF (factor de crecimiento nervioso), BDNF (factor neurotrofico derivado del cerebro), PDGF (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) o purmorfamina-deferoxamina-NGF (factor de crecimiento nervioso), dexametasona, acido ascorbico, 5-azacitidina, pirrolopirimidina 4,6-disustituida, cardiogenoles, ADNc, ADN, iARN, BMP-4 (protema morfogenetica osea-4), BMP-2 (protema morfogenetica osea-2), un agente antibiotico tal como, por ejemplo, p-lactamas, quinolonas incluyendo fluoroquinolonas, aminoglucosidos o macrolidos, un agente antifibrotico, incluyendo pero sin limitarse a, factor de crecimiento de hepatocitos o pirfenidona, un agente anticicatrizacion, tal como, por ejemplo, anticuerpo monoclonal anti-TGF-b2 (AcM rhAnti-TGF-b2), un peptido tal como, por ejemplo, peptido de union a cobre GHK, un agente de regeneracion tisular, un esteroide, fibronectina, una citocina, un analgesico tal como, por ejemplo, tapentadol HCl, opiaceos, (por ejemplo, morfina, codona, oxicodona, etc.) un antiseptico, interferon alfa, beta o gamma, EPO, glucagones, calcitonina, heparina, interleucina-1, interleucina-2, filgrastim, una protema, HGH, hormona luteinizante, factor natriuretico auricular, factor VIII, factor IX o una hormona foliculoestimulante.

El termino “agente de diagnostico” se refiere a un agente que se usa como parte de una prueba de diagnostico (por ejemplo, un colorante fluorescente que va a usarse para observar la hebra in vivo). En una realizacion, el agente de diagnostico es protema de TB (tuberculosis) soluble.

El termino “agente potenciador de la lubricidad” pretende referirse a una sustancia o disolucion que cuando se pone en contacto con la hebra seca, actua lubricando la hebra seca. Un agente potenciador de la lubricidad puede comprender, por ejemplo, agua y/o un alcohol, un tampon acuoso, y puede comprender ademas agentes adicionales tales como polietilenglicol, acido hialuronico y/o colageno.

El termino “agente que impide la biodegradacion” pretende referirse a una sustancia biocompatible que ralentiza o impide la degradacion in vivo de la hebra. Por ejemplo, un agente que impide la biodegradacion puede incluir agentes hidrofobos (por ejemplo, lfpidos) o agentes de biodegradacion de sacrificio (por ejemplo, azucares).

El termino “carga de fallo” pretende referirse a la fuerza maxima que, cuando se aplica a la hebra, provoca que la hebra falle. Por “fallo”, quiere decirse que la hebra la hebra puede romperse o segmentarse o perder de otra forma la integridad estructural. En algunas realizaciones, la carga de fallo es de aproximadamente 0,1 libras o 0,22 kilogramos o mayor.

El termino “firme” pretende referirse a un material cohesivo que mantiene su forma en un entorno no constrenido (es decir, en contraposicion a un material que puede fluir/amorfo) y demuestra algun grado de integridad estructural bajo compresion. Un cubo de gelatina es un ejemplo de un gel firme.

El termino “composicion de gel acuosa” o “composicion de gel” o “mezcla de gel” pretende referirse a una composicion acuosa que comprende agua, acido hialuronico y un agente de reticulacion y/o acido hialuronico reticulado. En algunas realizaciones, la composicion puede comprender ademas un tampon de tal manera que el pH de la disolucion cambia muy poco con la adicion de componentes de la composicion. En estas realizaciones, la composicion se denomina composicion de gel tamponada acuosa. El pH de la composicion de gel tamponada es normalmente de desde aproximadamente 7 hasta aproximadamente 13. En determinadas realizaciones el pH es de aproximadamente 7. En determinadas realizaciones, el pH es mayor de aproximadamente 9 o aproximadamente 10. En algunas realizaciones, el pH puede ajustarse anadiendo una cantidad apropiada de una base adecuada, tal como Na2CO3 o NaOH. En algunas realizaciones, la composicion tamponada de gel acuosa comprende solucion salina tamponada con fosfato. En algunas realizaciones, la composicion tamponada de gel acuosa comprende

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tris(hidroximetil)aminometano (Tris), que tiene la formula (HOCH2)3CNH2. En algunas realizaciones, se anaden solutos adicionales para ajustar la osmolaridad y concentraciones ionicas, tales como cloruro de sodio, cloruro de calcio y/o cloruro de potasio.

El termino “tampon” pretende referirse a una disolucion que estabiliza el pH, en la que la disolucion comprende una mezcla de un acido debil y su base conjugada o una base debil y su acido conjugado. Las disoluciones tampon incluyen, pero no se limitan a, 2-amino-2-metil-1,3-propanodiol, 2-amino-2-metil-1-propanol, acido L-(+)-tartarico, acido D-(-)-tartarico, ACES, ADA, acido acetico, acetato de amonio, bicarbonato de amonio, citrato de amonio, formiato de amonio, oxalato de amonio, fosfato de amonio, fosfato de sodio y amonio, sulfato de amonio, tartrato de amonio, BES, BICINE, BIS-TRIS, bicarbonato, acido borico, CAPS, CHES, acetato de calcio, carbonato de calcio, citrato de calcio, citrato, acido cftrico, dietanolamina, EPP, sal de disodio de acido etilendiaminatetraacetico, disolucion de acido formico, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly, glicina, HEPES, imidazol, acetato de litio, citrato de litio, MES, MOPS, acetato de magnesio, citrato de magnesio, formiato de magnesio, fosfato de magnesio, acido oxalico, PIPES, solucion salina tamponada con fosfato, piperazina, D-tartrato de potasio, acetato de potasio, bicarbonato de potasio, carbonato de potasio, cloruro de potasio, citrato de potasio, formiato de potasio, oxalato de potasio, fosfato de potasio, ftalato de potasio, tartrato de sodio y potasio, tetraborato de potasio, tetraoxalato de potasio deshidratado, disolucion de acido propionico, disolucion tampon de STE, 5,5-dietilbarbiturato de sodio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, bitartrato de sodio monohidratado, carbonato de sodio, citrato de sodio, cloruro de sodio, formiato de sodio, oxalato de sodio, fosfato de sodio, pirofosfato de sodio, tartrato de sodio, tetraborato de sodio, TAPS, TES, TNT, TRIS-glicina, TRIS-acetato, solucion salina tamponada con TRIS, TRIS-HCl, TRIS fosfato-EDTA, tricina, trietanolamina, trietilamina, acetato de trietilamonio, fosfato de trietilamonio, acetato de trimetilamonio, fosfato de trimetilamonio, acetato de Trizma®, base de Trizma®, carbonato de Trizma®, clorhidrato de Trizma® o maleato de Trizma®.

El termino “disolvente acuoso” pretende referirse a una composicion acuosa no toxica, no inmunogenica. El disolvente acuoso puede ser agua y/o un alcohol, y puede comprender ademas tampones, sales (por ejemplo, CaCl2) y otros de tales solutos no reactivos.

El termino “angulo de contacto” o “angulo de contacto de equilibrio” se refiere a la medida de la afinidad de un lfquido por un solido y cuantifica el grado en el que una gota de lfquido se extiende cuando se coloca sobre el solido. En el caso descrito en el presente documento, el lfquido es la composicion de gel acuosa y la superficie ngida o solida es el sustrato sobre el que se extruye la composicion. El angulo de contacto es una medida del angulo que forma el borde de una gota ideal con una superficie plana. Cuanto menor sea el angulo de contacto, mayor sera la atraccion entre la superficie y el lfquido. Por ejemplo, el agua se extiende casi completamente sobre vidrio y tiene un angulo de contacto muy bajo de casi 0 grados. El mercurio, en cambio, se acumula y se extiende muy poco; su angulo de contacto es muy grande.

2. Hebras y metodos de preparacion de hebras

Tal como se menciono anteriormente, se ha encontrado sorprendentemente que alteraciones de las cantidades relativas de los componentes, condiciones de reaccion, modificacion covalente del acido hialuronico y/o protocolos de fabricacion pueden tener efectos notables sobre determinadas propiedades de hebras que comprenden acido hialuronico reticulado. Por consiguiente, se han desarrollado tales hebras con caractensticas mejoradas y se describen metodos de su preparacion en el presente documento. Se contempla que tales hebras sean mas suaves. Algunas de las hebras que se describen a continuacion son mas fuertes. Tienen mayores resistencias a la traccion y capacidades mejoradas para absorber agua. Se contempla por tanto que las hebras descritas en el presente documento sean mas faciles para el medico de manipular e implantar en un paciente.

Preparacion de acido hialuronico reticulado

Se han preparado hebras que comprenden acido hialuronico reticulado segun metodos descritos en el presente documento que tienen razones aumentadas de agente de reticulacion (por ejemplo, derivados de BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico.

Generalmente, el acido hialuronico (HA) usado en el presente documento tiene un peso molecular de desde aproximadamente 0,5 MDa (mega Dalton) hasta aproximadamente 3,0 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de desde aproximadamente 0,6 MDa hasta aproximadamente 2,6 MDa, y en aun otra realizacion el peso molecular es de desde aproximadamente 1,4 MDa hasta aproximadamente 1,7 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de aproximadamente 0,7 MDa, y en aun otra realizacion el peso molecular es de aproximadamente 1,7 MDa. En algunas realizaciones, el peso molecular es de aproximadamente 2,7 MDa.

En un aspecto, se proporcionan composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado formado en condiciones acuosas. En determinadas realizaciones, tales composiciones acuosas forman geles. En determinadas realizaciones, el acido hialuronico se hidrata durante entre aproximadamente un minuto y aproximadamente 60 minutos antes de la reticulacion. En otras realizaciones, el acido hialuronico se hidrata durante entre aproximadamente una hora y aproximadamente 12 horas antes de la reticulacion. En determinadas realizaciones, el

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acido hialuronico se hidrata durante aproximadamente una hora y en aun otra realizacion se permite que el acido hialuronico se hidrate durante aproximadamente dos horas antes de la reticulacion. En determinadas realizaciones, el acido hialuronico se hidrata durante aproximadamente tres horas y en aun otra realizacion se permite que el acido hialuronico se hidrate durante cuatro horas antes de la reticulacion.

Antes de la adicion del HA, la disolucion acuosa se ajusta al pH deseado. En una realizacion, la disolucion acuosa tiene un pH > aproximadamente 7. En determinadas realizaciones, la disolucion tiene un pH de aproximadamente 9, o aproximadamente 10, o aproximadamente 11, o aproximadamente 12 o aproximadamente 13, o mayor de 13. Normalmente, la disolucion comprende agua y puede comprender opcionalmente solucion salina tamponada con fosfato (PBS) o tampon tris(hidroximetil)aminometano (Tris). El tampon puede seleccionarse basandose en el pH deseado de la composicion. Por ejemplo, puede usarse PBS para las composiciones a un pH de aproximadamente 7, mientras que puede usarse Tris para composiciones que tienen un pH mayor de aproximadamente 9 o aproximadamente 10. En algunas realizaciones, el pH es de desde entre aproximadamente 9 y aproximadamente 13. En algunas realizaciones, el pH es de al menos aproximadamente 13. En algunas realizaciones, el pH se ajusta con la cantidad apropiada de una base adecuada, tal como Na2CO3 o NaOH para alcanzar el pH deseado. En algunas realizaciones, la concentracion de base es de desde aproximadamente 0,00001 M hasta aproximadamente 0,5 M. En algunas realizaciones, la concentracion de base es de desde aproximadamente 0,1 M hasta aproximadamente 0,25 M. En algunas realizaciones, la concentracion de base es de aproximadamente 0,2 M.

Se ha encontrado sorprendentemente que la concentracion de acido hialuronico usada durante la reticulacion contribuye a la calidad de las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado, y en ultima instancia mejora determinadas propiedades de hebras que se preparan a partir de tales composiciones. Por ejemplo, los geles se vuelven cada vez mas firmes cuando la concentracion de acido hialuronico usada durante la reticulacion es de al menos aproximadamente el 5%. Ademas, se ha encontrado que la razon de hinchamiento del gel en agua puede aumentarse disminuyendo la concentracion de acido hialuronico usada durante la reticulacion. En una realizacion, la composicion durante la reticulacion comprende desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 25% en peso de acido hialuronico, antes de la reticulacion. En otra realizacion, la composicion durante la reticulacion comprende aproximadamente el 14% en peso de acido hialuronico, antes de la reticulacion. En otra realizacion, la composicion durante la reticulacion comprende aproximadamente el 12% en peso de acido hialuronico, antes de la reticulacion. En otra realizacion, la composicion durante la reticulacion comprende aproximadamente el 8% en peso de acido hialuronico, antes de la reticulacion. En otra realizacion, la composicion durante la reticulacion comprende aproximadamente el 5% en peso de acido hialuronico, antes de la reticulacion.

En una realizacion alternativa, la reticulacion se realiza pura, es decir, sin un disolvente. Por tanto, en determinadas realizaciones, se pone en contacto BDDE puro con acido hialuronico seco para proporcionar el acido hialuronico reticulado. La composicion puede entonces hidratarse con la cantidad deseada de medio acuoso para proporcionar la composicion de gel.

Se forman composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado cando se pone en contacto acido hialuronico con un agente de reticulacion. El agente de reticulacion que va a usarse en la presente divulgacion debe comprender grupos funcionales complementarios al de acido hialuronico de manera que pueda avanzar la reaccion de reticulacion. El agente de reticulacion puede ser homobifuncional o heterobifuncional. Se contempla que el porcentaje de hidratacion de la hebra pueda controlarse al menos parcialmente mediante el tipo de agente de reticulacion empleado. Por ejemplo, si la reticulacion deja los grupos carboxilo del acido hialuronico sin funcionalizar, el porcentaje de hidratacion de la hebra puede ser mayor que el del acido hialuronico esterificado. Los agentes de reticulacion adecuados incluyen, pero no se limitan a, diglicidil eter de butanodiol (BDDE), divinilsulfona (DVS) y clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), o una combinacion de los mismos. En algunos aspectos, se proporciona una composicion que comprende acido hialuronico sustancialmente reticulado, en la que se reticula el acido hialuronico o se modifica covalentemente con un derivado de BDDE.

Se ha descubierto tambien que la concentracion de agente de reticulacion, es decir BDDE, usada durante la reticulacion contribuye a la calidad de las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado y, en ultima instancia, mejora determinadas propiedades de las hebras que se preparan a partir de tales composiciones. La cantidad de BDDE usada es suficiente para producir una composicion que comprende al menos el 15% en moles de un derivado de BDDE en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. En una realizacion, la composicion comprende desde aproximadamente el 15% en moles hasta aproximadamente el 25% por ciento en moles, o de aproximadamente el 17% en moles a aproximadamente el 20% en moles del derivado de BDDE, o de aproximadamente el 18% en moles a aproximadamente el 19% en moles. En una realizacion, la composicion comprende el 18,75% del derivado de BDDE.

La cantidad de BDDE seleccionada sera suficiente como para proporcionar una composicion firme. Por ejemplo, los geles se vuelven cada vez mas firmes cuando la concentracion de BDDE usada durante la reticulacion es de al menos aproximadamente el 10% en peso en relacion con el peso del acido hialuronico. La cantidad de BDDE usada durante la reticulacion, tras la formacion de la composicion que comprende acido hialuronico reticulado, puede expresarse tambien como un % en peso en relacion con el peso del acido hialuronico usado durante la reticulacion. En una realizacion, se usa entre el 25% en peso y el 100% en peso de BDDE en relacion con el peso de acido

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hialuronico. En otra realizacion, se usa al menos el 30% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa aproximadamente el 30% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa al menos el 40% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa aproximadamente el 40% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa al menos el 50% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa aproximadamente el 50% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa entre aproximadamente el 50% de BDDE y aproximadamente el 75% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico. En otra realizacion, se usa entre aproximadamente el 75% de BDDE y aproximadamente el 100% de BDDE en relacion con el peso de acido hialuronico.

En determinados aspectos, se reticula acido hialuronico o se modifica covalentemente para formar composiciones que comprenden acido hialuronico sustancialmente reticulado. En determinadas realizaciones, la cantidad de agente de reticulacion incorporado en el mismo, o la densidad de reticulacion, debe ser suficientemente alta de manera que la hebra formada de ese modo sea elastomerica, sin embargo no debe ser tan alta que la hebra resultante se vuelva demasiado ngida de manera que no pueda moverse dentro de la piel durante la administracion cuando se usa como un producto de aumento de tejidos blandos. El modulo elastico o rigidez apropiados se determina mediante el uso previsto de la hebra.

Lavado, secado y formulacion de acido hialuronico reticulado

Tras haberse preparado el acido hialuronico reticulado, puede eliminarse por lavado cualquier exceso de agente de reticulacion. El aclarado con agua sola normalmente no es suficiente para eliminar todo el agente de reticulacion en exceso. El aclarado con agua puede ir seguido tambien de o reemplazarse por un tampon y/o disolvente de alcohol, tal como etanol para eliminar el BDDE sin reaccionar. Se contempla que puedan ser necesarios multiples lavados para eliminar todo o sustancialmente todo el agente de reticulacion en exceso. Se contempla ademas que los geles puedan cortarse en trozos mas pequenos o extruirse a partir de una jeringa para mejorar la eficacia de las etapas de lavado.

En algunas realizaciones, los trozos de gel hidratados o lavados se han dimensionado. El dimensionamiento se logra cargando el gel en una jeringa y extruyendolo a traves de una aguja (normalmente una aguja roma de calibre 20 (G)) o a traves de un tamiz (por ejemplo, tamiz de 355 pm). Puede realizarse mas de una o incluso una serie de etapas de dimensionamiento usando el mismo tamiz o aguja o una de un calibre diferente, normalmente mas pequeno, que la etapa de dimensionamiento previa. Por ejemplo, el gel puede extruirse en primer lugar a traves de una aguja 20 G una o dos veces, y luego extruirse opcionalmente a traves de una aguja 23 G o 25 G una o mas veces. Cuantas mas etapas de dimensionamiento se implementen, mas suave sera la hebra resultante. Tales resultados senan beneficiosos ya que una hebra mas suave facilitana la administracion a traves de la piel ya que la hebra mas suave presentana menos arrastre. Ademas, se contempla que etapas de dimensionamiento adicionales tambien puedan aumentar la resistencia a la traccion de la hebra. Por ejemplo, determinadas hebras que se han dimensionado una vez usando una aguja 20 G tienen una resistencia a la traccion de desde aproximadamente 0,381 libras hasta aproximadamente 0,476 libras, o de aproximadamente 0,436 libras. Determinadas hebras que se han dimensionado dos veces usando una aguja 20 G tienen una resistencia a la traccion de desde aproximadamente 0,416 libras hasta aproximadamente 0,579 libras, o de aproximadamente 0,479 libras. Determinadas hebras que se han dimensionado dos veces usando una aguja 20 G y luego una vez usando una aguja 25 G tienen una resistencia a la traccion de desde aproximadamente 0,462 libras hasta aproximadamente 0,605 libras, o de aproximadamente 0,529 libras.

Aunque la suavidad de la hebra se potencia implementando mas de una etapa de dimensionamiento, el tamano de partfcula del gel no cambia sustancialmente (figura 14). La razon de hinchamiento de hebra no cambia sustancialmente con el dimensionamiento aumentado (entre 1,66 y 1,70 para una, dos y tres etapas de dimensionamiento), aunque el diametro seco de la hebra disminuye ligeramente con el dimensionamiento aumentado.

En una realizacion, las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado, tal como se describio anteriormente, se secan sustancialmente (por ejemplo, se deshidratan) antes de combinarse adicionalmente con el aglutinante. En una realizacion, las composiciones de gel acuosas que comprenden acido hialuronico reticulado, tal como se describio anteriormente, se secan sustancialmente (por ejemplo, se deshidratan) antes de combinarse adicionalmente con acido hialuronico no reticulado. En algunas realizaciones, el secado se logra secando con aire o decantando en primer lugar el disolvente antes de secar con aire a temperaturas ambientales o elevadas. En una realizacion, el secado se logra mediante liofilizacion. En una realizacion, el secado es parcial.

En una realizacion, las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado, tal como se describio anteriormente, se afslan por medio de precipitacion a partir de un disolvente adecuado, tal como etanol, antes de combinarse adicionalmente con el aglutinante. La precipitacion puede implementarse multiples veces, es decir, mas de una vez. En algunas realizaciones, el tamano de partfcula del gel aislado por medio de precipitacion es sustancialmente del mismo tamano que, o mas pequeno que, las partfculas del gel liofilizado. En determinadas realizaciones, las hebras preparadas a partir del gel aislado por medio de precipitacion tienen un diametro de hebra secada pequeno (por ejemplo, aproximadamente 0,014”-0,015”), aunque presentan velocidad de hinchamiento mas

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rapida, suavidad potenciada y diametro de hinchamiento mayor.

En una realizacion, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado se deshidrata hasta eliminar aproximadamente el 25% del contenido de agua en peso. En una realizacion, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado se deshidrata hasta eliminar aproximadamente el 50% del contenido de agua en peso. En una realizacion, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado se deshidrata hasta eliminar aproximadamente el 75% del contenido de agua en peso. En una realizacion, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado se deshidrata hasta eliminar aproximadamente el 90% del contenido de agua en peso.

Se ha encontrado sorprendentemente que la concentracion de solidos de HA totales, incluyendo acido hialuronico reticulado y aglutinante no reticulado, dentro de las composiciones de gel acuosas antes de la extrusion, mejora determinadas propiedades de las hebras tal como se describe en el presente documento tales como suavidad y facilidad de manipulacion o bien antes o bien despues de la extrusion.

La composicion de acido hialuronico reticulado secada, tal como se describio anteriormente, puede combinarse con agua para formar un gel de acido hialuronico sustancialmente reticulado, que entonces se formula con un aglutinante (es decir, acido hialuronico no reticulado) y/u opcionalmente un aditivo (por ejemplo, una sal, excipiente, lidocama, o similar). La composicion de gel formulada resultante que comprende acido hialuronico reticulado, y acido hialuronico no reticulado como aglutinante, pueden extruirse entonces para dar una hebra humeda que puede secarse luego.

En una realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en la composicion, antes del secado de la hebra y con acido hialuronico no reticulado como aglutinante, en una cantidad de desde aproximadamente el 5% en peso hasta aproximadamente el 20% en peso basandose en el peso total de la composicion. En todavfa otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en la composicion, antes del secado de la hebra y con acido hialuronico no reticulado como aglutinante, en una cantidad de desde aproximadamente el 5% en peso hasta aproximadamente el 12% en peso o de aproximadamente el 8% en peso a aproximadamente el 10% en peso basandose en el peso total de la composicion, excluyendo la humedad.

En una realizacion, se proporciona una composicion que comprende el acido hialuronico sustancialmente reticulado de cualquiera de las realizaciones anteriores, que se ha secado y rehidratado, y comprende ademas un aglutinante. En una realizacion, el aglutinante es acido hialuronico no reticulado. En una realizacion, el aglutinante, es decir acido hialuronico no reticulado, se proporciona como una disolucion acuosa. En una realizacion, el aglutinante, es decir acido hialuronico no reticulado, se proporciona como una disolucion acuosa que comprende ademas una sal, tal como CaCl2. En una realizacion, el aglutinante, es decir acido hialuronico no reticulado, se proporciona como una disolucion acuosa que comprende ademas CaCl21 mM, CaCl2 2,5 mM, CaCl210 mM o CaCl2 mas de 10 mM.

Aun otro hallazgo sorprendente ha sido que la calidad de las hebras secas tal como se describe en el presente documento depende, al menos parcialmente, de la cantidad de los solidos de acido hialuronico totales usados para preparar las composiciones de hebras humedas, tal como se describio anteriormente. Los “solidos de acido hialuronico” incluyen cualquier combinacion de acido hialuronico sustancialmente reticulado y/o acido hialuronico no reticulado (es decir, aglutinante). En algunas realizaciones, una cantidad minima de solidos de acido hialuronico contribuye a la calidad de las hebras secas, por ejemplo, soportando la forma de seccion transversal (por ejemplo, un diametro relativamente redondo) de las hebras humedas usadas para preparar las hebras secas. Una cantidad minima de solidos de acido hialuronico puede contribuir ademas a la calidad de las hebras secas, por ejemplo, aumentando la resistencia a la traccion de las hebras secas y/o la razon de hinchamiento mediante lo cual las hebras secas absorben agua. Una cantidad minima de solidos de acido hialuronico puede contribuir todavfa adicionalmente a la calidad de las hebras secas aumentando la suavidad de las hebras secas. A continuacion se describen a modo de ejemplo cantidades mmimas de solidos de acido hialuronico.

En una realizacion, la hebra humeda comprende desde aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el 50% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende desde aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el 40% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende desde aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el 20% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 7% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 10% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 12% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 15% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 18% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 20% de solidos de acido hialuronico. En una realizacion, la hebra humeda comprende al menos el 25% de solidos de acido hialuronico.

Tal como se describio anteriormente, los solidos de acido hialuronico que se usan para preparar las hebras humedas y secas tal como se describe en el presente documento pueden incluir cualquier combinacion de acido hialuronico reticulado y/o acido hialuronico no reticulado (es decir, aglutinante). Los ajustes en la cantidad y/o razon de acido hialuronico reticulado y/o acidos hialuronicos no reticulados pueden mejorar determinadas propiedades de las hebras (por ejemplo, la forma de seccion transversal de las hebras humedas, la resistencia a la traccion de las

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hebras secas, la razon de hinchamiento mediante la cual las hebras secas absorben agua, la suavidad de las hebras secas, la resistencia de las hebras secas a la digestion enzimatica in vitro mediante hialuronidasa, y/o una semivida in vivo aumentada).

En una realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en composiciones usadas para preparar hebras en una cantidad de desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 25% en peso basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 2% en peso hasta aproximadamente el 15% en peso basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 14% en peso. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 12% en peso. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 8% en peso. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 5% en peso.

En una realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en composiciones usadas para preparar hebras en una cantidad de desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 20% en peso basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 8% en peso basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 5% en peso. En otra realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 3% en peso. En otra realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de aproximadamente el 2% en peso.

En una realizacion, las composiciones usadas para preparar hebras comprenden desde aproximadamente el 5% en peso hasta aproximadamente el 15% en peso de acido hialuronico reticulado y desde aproximadamente el 2% en peso hasta aproximadamente el 8% en peso de acido hialuronico no reticulado. En una realizacion, la composicion comprende aproximadamente el 12% en peso de acido hialuronico reticulado y aproximadamente el 3% en peso de acido hialuronico no reticulado. En una realizacion, la composicion comprende aproximadamente el 8% en peso de acido hialuronico reticulado y aproximadamente el 2% en peso de acido hialuronico no reticulado. En una realizacion, la composicion comprende aproximadamente el 5% en peso de acido hialuronico reticulado y aproximadamente el 5% en peso de acido hialuronico no reticulado. Pueden prepararse composiciones usadas para preparar hebras con concentraciones superiores o inferiores de HA y Ha reticulado; las tres composiciones anteriores se proporcionan como ejemplos solo.

Desaireacion, extrusion y secado de geles para dar hebras

En algunas realizaciones, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado y no reticulado se desairea (es decir, se desgasifica), antes de la extrusion para minimizar las burbujas de aire tras la extrusion. La desgasificacion tambien puede realizarse usando una jeringa. Se ha descubierto que la resistencia a la traccion de las hebras mejora generalmente tras la desaireacion de las composiciones usadas para preparar las hebras.

En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean al menos una vez. En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean mas de una vez. En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean entre dos y diez veces. En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean dos veces. En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean tres veces, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez veces. En algunas realizaciones, las composiciones usadas para preparar las hebras se desairean al menos diez veces.

Para formar la hebra, la composicion de gel acuosa que comprende acido hialuronico reticulado y no reticulado se extruye normalmente sobre un sustrato, tal como se describe a continuacion, para formar una hebra humeda. La composicion se extruye usando una jeringa presurizada fijada a una boquilla. La boquilla puede tener diversas geometnas, tales como diversas longitudes, diametros internos y formas.

Generalmente, se ha descubierto que muchas de las propiedades de las composiciones de hebras secas pueden mejorarse mediante un tamano de boquilla aumentado (por ejemplo, anchura) durante la extrusion de la hebra humeda. Tales propiedades mejoradas en las hebras pueden incluir, por ejemplo, la forma de seccion transversal de las hebras, la resistencia a la traccion de las hebras, la razon de hinchamiento mediante la cual las hebras absorben agua, la suavidad de las hebras, la resistencia de las hebras secas a la digestion enzimatica in vitro mediante hialuronidasa y/o una semivida in vivo aumentada de las hebras secas.

La boquilla puede tener una forma circular o no circular, por ejemplo, una forma aplanada o una forma de “D”. La boquilla de la jeringa puede ser cualquiera de una boquilla de jeringa de desde aproximadamente calibre 15 hasta calibre 25. En algunas realizaciones, la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 15, mientras que en otras realizaciones la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 16. En algunas realizaciones, la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 17, mientras que en otras realizaciones la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre

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18. En algunas realizaciones, la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 19, mientras que en otras realizaciones la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 20. En algunas realizaciones, la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 21, mientras que en otras realizaciones la boquilla de la jeringa es una boquilla de calibre 22. Normalmente, la presion empleada es de desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 2000 psi o desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 240 psi. Los requisitos de presion vienen dictados por la geometna de la boquilla y otros atributos tales como la consistencia de la composicion y la velocidad de flujo deseada. La presion puede aplicarse neumaticamente, por ejemplo usando aire ambiental o nitrogeno, hidraulicamente o mecanicamente. La velocidad a la que se extruye el gel tiene en consideracion la minimizacion de las burbujas de aire en la longitud de la hebra y la maximizacion de una forma uniforme constante. Las burbujas de aire pueden reducir la integridad estructural de la hebra provocando puntos debiles.

La presion neumatica y la velocidad de la placa no son fijas sino que en su lugar se ajustan y monitorizan en el procedimiento de modo que el gel se extruye de una manera continua, lineal. Para un lote dado de hebras, la presion neumatica se aumenta en primer lugar hasta el punto de flujo de gel constante pero controlable. La velocidad de la placa se ajusta entonces de manera fina continuamente de modo que las hebras se extruyen de una manera lineal uniforme. Si la velocidad de la placa es demasiado lenta, pueden resultar hebras en zig-zag; demasiado rapida y las hebras pueden estirarse conduciendo a estriccion y/o rotura.

Se contemplan diversos sustratos para su uso mediante los metodos descritos en el presente documento. Los sustratos incluyen sustratos hidrofilos e hidrofobos y pueden seleccionarse de, pero no se limitan a, politetrafluoroetileno (PTFE), PTFE expandido, nailon, poli(tereftalato de etileno) (PET), poliestireno, silicio, poliuretano y celulosa activada.

El sustrato empleado, junto con la viscosidad de la composicion de gel, dicta la forma general de la hebra. Por ejemplo, si el gel y el sustrato tienen un angulo de contacto de equilibrio de menos de 90 grados, se contempla que la hebra formada pueda tener sustancialmente forma de cinta. Ademas, si el gel y el sustrato tienen un angulo de contacto de equilibrio de aproximadamente 90 grados, la hebra formada podna tener sustancialmente forma de D. Todavfa adicionalmente, si el gel y el sustrato tienen un angulo de contacto de equilibrio de mas de 90 grados, entonces la hebra formada podna ser sustancialmente redonda. Por ejemplo, un gel de 1,5 MDa al 10% tendra una seccion transversal sustancialmente circular (por ejemplo, aproximadamente el 80% de un cfrculo) cuando se extruye sobre PTFE, mientras que un gel de 1,5 MDa al 5% formara una cinta plana cuando se extruye sobre PTFE.

Alternativamente a la extrusion presurizada, la composicion de gel puede enrollarse para dar un cilindro alargado y/o cortarse en tiras alargadas antes de secarse.

La hebra humeda se seca entonces para formar una hebra seca. El secado puede realizarse en condiciones estaticas o, alternativamente, con la ayuda de un flujo de aire dinamico (es decir, dentro de una cabina de flujo laminar). En algunas realizaciones, los rendimientos de las hebras mejoran con el secado estatico. La etapa de secado se requiere para formar hebras con una resistencia a la traccion suficiente, tal como se comenta a continuacion. Puesto que la hebra puede perder algunas de sus propiedades cuando se expone a calor en exceso de temperatura de ebullicion de agua, se prefiere que la etapa de secado se realice en condiciones ambientales. Este procedimiento de secado proporciona una hebra con una mayor resistencia a la traccion, tal como, por ejemplo, una resistencia a la traccion final de aproximadamente 5 kpsi a 100 kpsi o de 20 kpsi a 80 kpsi. En otras palabras, las hebras descritas en el presente documento tienen una carga de fallo de al menos aproximadamente 0,1 libras o 0,22 kilogramos.

Se permite que la hebra se seque durante cualquiera desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 72 horas para formar hebras que tienen un diametro de desde 0,05 mm hasta aproximadamente 1,0 mm y que tienen el 10%-30% en peso de hidratacion. En algunas realizaciones, la hebra puede secarse durante aproximadamente 12 horas o aproximadamente 24 horas. Se contempla que cuanto mayor sea el peso molecular del HA empleado o mas concentrado este el HA en la composicion, se requeriran tiempos de secado mas prolongados. Ademas, durante el proceso de secado, puede emplearse un estfmulo no termico, tal como luz UV, radiacion o un catalizador o iniciador qrnmico para ayudar en la reaccion de reticulacion.

En algunas realizaciones, tras el secado, la hebra se lava con un disolvente acuoso o no acuoso, un gas o un fluido supercntico. En algunos casos, este lavado elimina el agente de reticulacion en exceso. El lavado puede lograrse mediante una variedad de metodos, tales como inmersion en un disolvente acuoso o usando un sistema de flujo simultaneo colocando la hebra en una depresion inclinada y permitiendo que un disolvente acuoso fluya sobre la hebra. Las hebras tambien pueden suspenderse, por ejemplo verticalmente, y lavarse haciendo gotear o fluir agua a lo largo de la longitud de la hebra.

En una realizacion, se usa agua para lavar las hebras. En esta realizacion, el agua no solo lava las hebras para eliminar el agente de reticulacion en exceso, tambien rehidrata la hebra para dar un estado elastomerico hidratado. En una realizacion, se usa una disolucion de antioxidante para lavar las hebras. Por ejemplo, en una realizacion, se usa una disolucion tampon que comprende acido ascorbico, vitamina E y/o fosfato de sodio para lavar las hebras. En una realizacion, se usa una disolucion tampon que comprende aproximadamente 1 mM, o aproximadamente 10 mM

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o aproximadamente 100 mM, o aproximadamente 1 M de acido ascorbico para lavar las hebras.

El porcentaje de hidratacion del acido hialuronico puede oscilar desde aproximadamente el 1% hasta mas de aproximadamente el 1000% basandose en el peso total. El porcentaje de hidratacion de la hebra de la presente divulgacion puede controlarse ajustando el porcentaje de acido hialuronico en el gel y/o controlando la cantidad y el tipo de agente de reticulacion anadido. Se contempla que un porcentaje de hidratacion inferior de la hebra dana como resultado una hebra con una resistencia a la traccion superior. En algunas realizaciones, la hebra tiene no mas de aproximadamente el 30% por ciento, o no mas del 15%, o no mas del 10% en peso de hidratacion basandose en el peso total. El porcentaje de hidratacion se determinara mediante el entorno al que se somete la hebra durante o tras el proceso de secado.

Debe indicarse que la semivida de la hebra de acido hialuronico in vivo puede controlarse controlando el grosor de la hebra, la densidad, el grado de reticulacion, el peso molecular del acido hialuronico y el grado de hidratacion, que pueden entonces controlarse adicionalmente ajustando las cantidades de acido hialuronico y agente de reticulacion tanto individual como relativamente. Se contempla que las hebras divulgadas en el presente documento puedan tener una semivida potenciada in vivo de desde aproximadamente 1 mes hasta aproximadamente 12 meses en comparacion con menos de 1 dfa para acido hialuronico natural. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tangan una semivida in vivo de al menos 1 mes. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 2 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 3 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 4 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 6 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 8 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 10 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 12 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 14 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 16 meses. En determinadas realizaciones, se contempla que las hebras descritas en el presente documento tengan una semivida in vivo de al menos 18 meses.

Se contempla que las hebras descritas en el presente documento puedan esterilizarse usando metodos de esterilizacion tfpicos conocidos en la tecnica, tales como autoclave, oxido de etileno, haz de electrones (haz de e), CO2 supercntico (con peroxido), etc. Por ejemplo, las hebras descritas en el presente documento pueden esterilizarse usando metodos de esterilizacion de haz de electrones (haz de e). En algunas realizaciones, las hebras se lavan en primer lugar en una disolucion tampon a alto pH (es decir, pH 9 o pH 10). En algunas realizaciones, las disoluciones de lavado comprenden ademas etanol, acido ascorbico, vitamina E y/o fosfato de sodio.

Opcionalmente y segun sea necesario, la hebra se estira mecanicamente cuando se hidrata, o bien poco despues de hidratarse o bien gradualmente antes del primer secado o tras la rehidratacion. El estiramiento o ausencia de estiramiento puede proporcionar una hebra de la longitud y/o volumen de hinchamiento de rehidratacion deseados. En algunas realizaciones, la longitud de la hebra puede ser de desde aproximadamente 0,5 cm hasta aproximadamente 15 cm. En otra realizacion, la longitud de la hebra puede ser de desde aproximadamente 2 cm hasta aproximadamente 12 cm. En otra realizacion, la longitud de la hebra puede ser de desde aproximadamente 5 cm hasta aproximadamente 10 cm.

Tras rehidratarse la hebra, se permite que se seque de nuevo en condiciones ambientales durante cualquiera desde 30 minutos hasta aproximadamente 72 horas. Tras el secado, la hebra, en algunas realizaciones, se cura para proporcionar una superficie de la hebra mas uniforme.

Esta etapa de hidratacion/deshidratacion de lavado puede realizarse multiples veces para permitir que el reactivo sin reaccionar en exceso se lave de la hebra o para continuar mejorando el grado de reticulacion o modificacion covalente. Esto es una mejora con respecto a metodos tales como el uso de disolventes organicos para eliminar el BDDE en exceso.

3. Nomenclatura de hebras

Las hebras descritas en el presente documento se preparan a partir de composiciones que comprenden acido hialuronico sustancialmente reticulado, y que comprenden ademas un aglutinante, es decir acido hialuronico no reticulado. Las hebras pueden describirse segun la siguiente nomenclatura AA/BB@XX/YY, en la que AA/BB describe la composicion formada inicialmente que comprende acido hialuronico sustancialmente reticulado y XX/YY describe la composicion con un aglutinante, es decir acido hialuronico no reticulado.

Por ejemplo, una hebra denominada “10/40@15/20” se refiere a una composicion de acido hialuronico

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sustancialmente reticulado, en la que la reaccion de reticulacion se realiza con el 10% en peso de acido hialuronico en relacion con el peso de la disolucion (por ejemplo, una disolucion acuosa), usando el 40% en peso de agente de reticulacion (por ejemplo, BDDE) en relacion con el peso del acido hialuronico.

Tal como se hace referencia en el presente documento, AA de AA/BB @XX/YY es al menos el 2%. En algunas realizaciones, AA es al menos el 5%. En algunas realizaciones, AA es aproximadamente el 8%. En algunas realizaciones, AA es aproximadamente el 10%. En algunas realizaciones, Aa es al menos el 10%. En algunas realizaciones, AA es aproximadamente el 12%. En algunas realizaciones, AA es al menos el 15%.

En algunas realizaciones, BB de AA/BB@XX/YY es al menos el 10%. En algunas realizaciones, BB es al menos el 20%. En algunas realizaciones, BB es al menos el 30%. En algunas realizaciones, BB es aproximadamente el 30%. En algunas realizaciones, es al menos el 40%. En algunas realizaciones, BB es aproximadamente el 40%. En algunas realizaciones, BB es al menos el 50%. En algunas realizaciones, BB es aproximadamente el 50%.

En algunas realizaciones, AA/BB de AA/BB@XX/YY es aproximadamente 8/10. En algunas realizaciones, AA/BB es al menos o aproximadamente o exactamente 8/20. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 8/30. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 8/40. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 8/50. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 10/10. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 10/20. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 10/30. En algunas realizaciones, aA/BB es aproximadamente 10/40. En algunas realizaciones, AA/BB es aproximadamente 10/50.

En algunas realizaciones, se anade acido hialuronico no reticulado como agente de union o mas agentes de union a las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado, y las composiciones resultantes se convierten mediante metodos adicionales descritos en el presente documento para proporcionar hebras novedosas. En algunas realizaciones, las composiciones que comprenden acido hialuronico reticulado comprenden ademas acido hialuronico no reticulado. El acido hialuronico no reticulado anadido se denomina opcionalmente en el presente documento “aglutinante”. La combinacion de acido hialuronico reticulado y acido hialuronico no reticulado, dentro de la composicion, se denomina opcionalmente en el presente documento “solidos de acido hialuronico”. Tal como se hace referencia en el presente documento, el XX de AA/BB@XX/YY se refiere al % en peso de solidos de acido hialuronico totales en relacion con el peso de la composicion, en el que los solidos de acido hialuronico incluyen tanto el acido hialuronico sustancialmente reticulado como cualquier acido hialuronico no reticulado. Tal como se hace referencia en el presente documento, el YY de AA/BB @XX/YY se refiere al % en peso de acido hialuronico no reticulado en relacion con el peso de solidos de acido hialuronico totales.

En algunas realizaciones, XX de AA/BB@XX/YY es al menos el 2%. En algunas realizaciones, XX es al menos el 5%. En algunas realizaciones, XX es al menos el 10%. En algunas realizaciones, XX es aproximadamente el 10%. En algunas realizaciones, XX es al menos el 15%. En algunas realizaciones, XX es aproximadamente el 15%. En algunas realizaciones, XX es al menos el 20%. En algunas realizaciones, XX es aproximadamente el 20%. En algunas realizaciones, XX es al menos el 25%. En algunas realizaciones, XX es aproximadamente el 25%.

En algunas realizaciones, YY de AA/BB@XX/YY es al menos el 5%. En algunas realizaciones, YY es al menos el 10%. En algunas realizaciones, YY es al menos el 20%. En algunas realizaciones, YY es aproximadamente el 20%. En algunas realizaciones, YY es al menos el 30%. En algunas realizaciones, YY es aproximadamente el 30%. En algunas realizaciones, YY es al menos el 40%. En algunas realizaciones, YY es aproximadamente el 40%. En algunas realizaciones, YY es al menos el 50%. En algunas realizaciones, YY es aproximadamente el 50%.

En algunas realizaciones, AA/BB@XX/YY es 8/10@2/5, 8/20@5/10, 8/30@10/20, 8/40@15/20, 8/50@20/30, 10/10@20/40, 10/20@25/50, 10/30@20/40, 10/40@10/50, 10/50@20/40 y similares.

Se ha mostrado que las hebras proporcionadas usando las composiciones de AA/BB@XX/YY divulgadas en el presente documento presentan una persistencia in vivo potenciada, asf como otras cualidades beneficiosas.

En determinadas realizaciones, se divulgan en el presente documento hebras que comprenden acido hialuronico sustancialmente reticulado, en las que el acido hialuronico se reticula sustancialmente con al menos aproximadamente el 15% en moles de un derivado de diglicidil eter de butanodiol (BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico, y al menos aproximadamente el 5% de acido hialuronico no reticulado en relacion con el peso de solidos de acido hialuronico totales, en las que el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 60% en peso hasta aproximadamente el 90% en peso basandose en el peso total de la hebra excluyendo la humedad y el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 10% en peso hasta aproximadamente el 40% en peso basandose en el peso total de la hebra excluyendo la humedad.

4. Modificacion de las hebras

Ademas de lavar la hebra, tambien puede funcionalizarse adicionalmente adsorbiendo una cantidad suficiente de un miembro seleccionado del grupo que consiste en un agente terapeutico, un agente de diagnostico, un agente

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potenciador de la fibrogenesis, un agente que impide la biodegradacion, un agente potenciador de la lubricidad y combinaciones de los mismos, opcionalmente seguido por volver a secar la hebra. Tales agentes terapeuticos incluyen agentes antibacterianos, anestesicos, colorantes para observar la colocacion in vivo, y similares. En algunas realizaciones, una hebra seca o hidratada se recubre para alterar las propiedades con un biopolfmero bioabsorbible, tal como colageno, PEG, PLGA o un Pluronic™ de transferencia de fase que puede introducirse como un lfquido y que se solidifica in vivo.

En una realizacion, la hebra puede recubrirse para modular la velocidad a la que se rehidrata la hebra. Por ejemplo, la hebra puede recubrirse con una capa hidrofoba, tal como un lfpido. El grosor de la capa de lfpido puede ajustarse entonces para lograr la velocidad de rehidratacion deseada. En otra realizacion, la hebra puede recubrirse con una composicion acuosa de acido hialuronico no reticulado. Esto puede realizarse justo antes de la implantacion de la hebra para actuar como lubricante. Tambien se contempla que este recubrimiento con acido hialuronico no reticulado pueda ralentizar la velocidad de hidratacion de la hebra. En algunas realizaciones, la hebra se recubre, o bien totalmente o bien en parte, con la composicion de gel para formar un material estratificado. Constructos tejidos, ya sean de una unica capa o 3D, pueden recubrirse en su totalidad para crear telas o mallas con propiedades ffsicas alteradas con respecto a una malla no tejida.

Las hebras descritas en el presente documento pueden trenzarse, enrollarse, estratificarse o tejerse. En algunas realizaciones, pueden formarse trenzas a partir de las hebras descritas anteriormente. Puede formarse una trenza entrecruzando tres o mas hebras en las que cada hebra es funcionalmente equivalente en zig-zag hacia delante a traves de la masa solapante de las otras. Las trenzas pueden ser una estructura plana, de tres cadenas, o pueden construirse trenzas mas complejas a partir de un numero arbitrario (pero habitualmente impar) de hebras para crear un intervalo mas amplio de estructuras, tales como bandas de tipo cinta mas amplias, cuerdas cilmdricas huecas o solidas, o esteras anchas que se asemejan a una onda perpendicular rudimentaria.

En una realizacion, se anade un plastificante para ajustar la rigidez de la hebra. Alternativamente, o ademas, pueden tejerse hebras de rigidez variable para producir una hebra o material trenzado que tiene la rigidez deseada.

En algunas realizaciones, puede construirse una estructura tridimensional tejiendo o envolviendo o enrollando o estratificando las hebras descritas anteriormente. En otras realizaciones, puede construirse una estructura tridimensional tejiendo o envolviendo o enrollando o estratificando las trenzas descritas anteriormente. En todavfa otras realizaciones, puede construirse una estructura tridimensional tejiendo o envolviendo o enrollando o estratificando las cuerdas descritas anteriormente. En todavfa otras realizaciones, puede construirse una estructura tridimensional tejiendo o envolviendo o enrollando o estratificando las mallas descritas anteriormente.

En algunas realizaciones, se proporciona un implante tridimensional, cilmdrico que se prepara con cualquiera de las hebras. Un uso a modo de ejemplo para un implante de este tipo es para la reconstruccion de pezones. En algunas realizaciones, las hebras usadas para preparar el implante cilmdrico se reticulan e incluyen compuestos de adhesion de condrocitos. En otras realizaciones, la forma cilmdrica se proporciona mediante multiples helices multiples, concentricas de las hebras.

Realizaciones de hebras

En un aspecto, se proporciona una hebra seca que comprende acido hialuronico, en la que al menos una porcion del acido hialuronico se reticula sustancialmente con al menos aproximadamente el 15% en moles de un derivado de BDDE en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. En otra realizacion, el acido hialuronico sustancialmente reticulado se reticula con desde aproximadamente el 15% en moles hasta aproximadamente el 20% en moles del derivado de BDDE. En una realizacion, el acido hialuronico sustancialmente reticulado se reticula con desde aproximadamente el 16% en moles hasta aproximadamente el 19% en moles del derivado de BDDE.

En una realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 50% en peso hasta aproximadamente el 90% en peso basandose en el peso total de la hebra seca. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 60% en peso hasta aproximadamente el 80% en peso basandose en el peso total de la hebra seca.

En una realizacion, la hebra seca comprende ademas un aglutinante, tal como por ejemplo, acido hialuronico no reticulado. El acido hialuronico no reticulado puede estar presente en una cantidad de desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 50% en peso basandose en el peso total de la hebra seca. En una realizacion, el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de desde aproximadamente el 15% en peso hasta aproximadamente el 20% en peso basandose en el peso total de la hebra seca.

En otra realizacion, la hebra seca tiene una resistencia a la traccion final de desde aproximadamente 2 kpsi hasta aproximadamente 20 kpsi. En una realizacion, la hebra tiene una resistencia a la traccion final de desde aproximadamente 4 kpsi hasta aproximadamente 10 kpsi.

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En otra realizacion, la hebra seca tiene un diametro de al menos aproximadamente 0,004 pulgadas. En una realizacion, la hebra seca tiene un diametro de desde aproximadamente 0,008 hasta aproximadamente 0,018 pulgadas.

En otra realizacion, la hebra seca tiene una razon de peso/longitud de desde aproximadamente 3,5 mg/pulgada.

En una realizacion, la hebra seca tiene una carga de fallo de aproximadamente realizacion, la hebra seca tiene una carga de fallo de desde aproximadamente 1,3 libras.

En una realizacion, la hebra seca comprende ademas una aguja.

En aun otro aspecto, se proporciona una hebra seca que comprende acido hialuronico sustancialmente reticulado preparado mediante las etapas de: a) formar una composicion de acido hialuronico sustancialmente reticulado poniendo en contacto acido hialuronico con BDDE; b) anadir acido hialuronico no reticulado a la composicion de acido hialuronico sustancialmente reticulado; c) extruir la composicion de acido hialuronico sustancialmente reticulado para formar una hebra humeda; y d) secar la hebra humeda para formar una hebra seca.

En una realizacion, se pone en contacto desde aproximadamente el 5 hasta aproximadamente el 15% en peso de acido hialuronico con desde aproximadamente el 2 hasta aproximadamente el 8% en peso de BDDE en relacion con el peso del acido hialuronico. En otra realizacion, el acido hialuronico se pone en contacto con aproximadamente el 40% en peso de BDDE en relacion con el peso del acido hialuronico. En una realizacion, el acido hialuronico reticulado se reticula con al menos aproximadamente el 15% en moles de un derivado de BDDE en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado se reticula con desde aproximadamente el 15 hasta aproximadamente el 25% en moles del derivado de BDDE en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. En una realizacion, el acido hialuronico reticulado se reticula con desde aproximadamente el 17 hasta aproximadamente el 20% en moles del derivado de BDDE en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico. En otra realizacion, el acido hialuronico reticulado se reticula con al menos aproximadamente el 12% en peso del derivado de BDDE en relacion con el peso del acido hialuronico.

En una realizacion, se pone en contacto al menos el 5% de acido hialuronico con desde aproximadamente el 2 hasta aproximadamente el 8% en peso de BDDE en relacion con el peso de la composicion de acido hialuronico. En otra realizacion, se pone en contacto aproximadamente el 8% de acido hialuronico con desde aproximadamente el 2 hasta aproximadamente el 8% en peso de BDDE en relacion con el peso de la composicion de acido hialuronico. En una realizacion, se pone en contacto aproximadamente el 10% de acido hialuronico con desde aproximadamente el 2 hasta aproximadamente el 8% en peso de BDDE en relacion con el peso de la composicion de acido hialuronico.

En una realizacion, la composicion formada poniendo en contacto acido hialuronico con BDDE comprende acido hialuronico reticulado en una cantidad de desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 50% en peso de acido hialuronico basandose en el peso total de la composicion. En una realizacion, la composicion formada poniendo en contacto acido hialuronico con BDDE comprende acido hialuronico reticulado en una cantidad de desde aproximadamente el 5% en peso hasta aproximadamente el 20% en peso de acido hialuronico basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, la hebra seca comprende ademas secar la composicion formada poniendo en contacto acido hialuronico con BDDE.

En una realizacion, se anade desde aproximadamente el 1% en peso hasta aproximadamente el 50% en peso de acido hialuronico no reticulado, basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, se anade desde aproximadamente el 2% en peso hasta aproximadamente el 15% en peso de acido hialuronico no reticulado, basandose en el peso total de la composicion. En otra realizacion, se anade aproximadamente el 3% en peso de acido hialuronico no reticulado, basandose en el peso total de la composicion.

En una realizacion, la hebra seca tiene una resistencia a la traccion final de desde aproximadamente 2 kpsi hasta aproximadamente 20 kpsi. En una realizacion, la hebra seca tiene una resistencia a la traccion final de aproximadamente 20 kpsi o mayor.

En una realizacion, la hebra seca tiene una carga de fallo de aproximadamente 0,3 libras o mayor. En una realizacion, la hebra tiene una carga de fallo de desde aproximadamente 0,3 hasta aproximadamente 1,3 libras.

En una realizacion, se proporciona una hebra segun cualquiera de las realizaciones anteriores, en la que la hebra se esteriliza de manera terminal.

5. Hebras de acido hialuronico reticulado para su uso en metodos

Las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento

aproximadamente 1,5 hasta

0,3 libras o mayor. En otra 0,3 hasta aproximadamente

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pueden usarse, por ejemplo, en un metodo para rellenar arrugas, para rellenar aneurismas, ocluir el flujo sangumeo a tumores, (es decir, oclusion de tumores), en cirugfa de parpados de ojos, en aumento de pene (por ejemplo, para aumento de tamano o para reduccion de la sensibilidad, es decir, tratamiento de la eyaculacion precoz), dispositivos de administracion internasal (barrera hematoencefalica) para agentes de diagnostico y/o terapeuticos, implantes corneales para administracion de farmacos, aumento o reconstruccion de nariz, aumento o reconstruccion de labios, aumento o reconstruccion facial, aumento o reconstruccion del lobulo de la oreja, implantes espinales (por ejemplo, para soportar un disco protuberante), material de relleno del conducto radicular (medicado con agente terapeutico), insuficiencia glotica, terapia fotorrefractiva laser (por ejemplo, hebra/onda de acido hialuronico usada como almohadilla), armazon para el recrecimiento de organos, tratamiento de la medula espinal (BDNF y NGF), en enfermedad de Parkinson (administracion estereotactica), administracion precisa de moleculas terapeuticas o de diagnostico, en implantacion en la pulpa, tratamiento de conducto radicular de pulpa de reemplazo, sistema de conducto radicular conformado, terapia de heridas con presion negativa, barreras de adhesion (por ejemplo, adhesiones abdominal, pelvica, cardiaca, espinal y tendinosa), vendajes de heridas, matriz dermica acelular, administracion de farmacos no hidraulica (por ejemplo, dolor (ortopedica), oftalmica, etc.), administracion de farmacos luminal (por ejemplo, hipertrofia prostatica, enfermedad de Crohn, estenosis vascular, etc.), y administracion de farmacos local, sostenida.

Hebras para su uso en metodos de tratamiento de una arruga

La reparacion de tejidos podna prolongar los efectos de “material de relleno” de la hebra cuando se usa para tratar o rellenar una arruga in vivo mucho mas alla de la semivida de la hebra basada en acido hialuronico tal como se describe en el presente documento. Esto se describe en el ejemplo 11.

En algunas realizaciones, se describe una hebra tal como se describe en el presente documento para su uso en un metodo de tratamiento de una arruga en un paciente que lo necesita 1) insertando la hebra en la dermis o el espacio subcutaneo del paciente adyacente a o bajo la arruga; y 2) aplicando la hebra adyacente a o bajo la arruga tratando de ese modo la arruga. Estas etapas pueden realizarse al menos una vez y hasta 6 veces para tratar cada arruga. En algunas realizaciones, la hebra se une al extremo proximal de una aguja tal como se muestra en las figuras 2, 3A y 3B. La hebra se inserta mediante una aguja, aguja que luego se retira. Opcionalmente y segun sea necesario, la hebra se hidrata con agua o solucion salina, o mediante los fluidos que perfunden normalmente el tejido circundante. Ademas, el resto de la arruga puede rellenarse con un material biocompatible tal como un Pluronic™ de transferencia de fase que puede introducirse como un lfquido y que se solidifica in vivo. Alternativamente, puede introducirse gel de acido hialuronico convencional para rellenar la arruga. En cualquier caso, la banda formada actua manteniendo el material de relleno biocompatible en el sitio de la arruga.

En algunas realizaciones, se proporciona una hebra tal como se describe en el presente documento para su uso en un metodo de tratamiento de una arruga en un sujeto. En algunas realizaciones, el medico encargado puede adormecer el area de tratamiento segun procedimientos conocidos en la tecnica usando una variedad de anestesicos, incluyendo, pero sin limitarse a, lidocama topica, hielo o un bloque con inyeccion de lidocama. Por ejemplo, la arruga puede estar en la region periorbital tal como se ilustra en la figura 4A. La hebra puede unirse a una aguja tal como se ilustra, por ejemplo, en las figuras 2, 3A y 3B. El extremo distal de la aguja puede insertarse a traves de la superficie de la piel del sujeto en la dermis adyacente a o dentro de la arruga tal como se ilustra, por ejemplo, en la figura 4B. En algunas realizaciones, la hebra se inserta en el espacio subcutaneo en lugar de la dermis. La aguja puede atravesar entonces la dermis o el espacio subcutaneo del sujeto por debajo de la arruga tal como se ilustra, por ejemplo, en la figura 4C. La aguja puede entonces salir de la piel del sujeto en el margen opuesto de la arruga, tal como se ilustra, por ejemplo, en la figura 4D. Entonces puede tirarse de la aguja distalmente hasta que se retira del sujeto de manera que se tira de la hebra hasta la ubicacion previamente ocupada por la aguja por debajo de la arruga, tal como se ilustra, por ejemplo, en la figura 4E. Finalmente, se corta la hebra en exceso de la aguja en la superficie de la piel del sujeto dejando la hebra implantada tal como se ilustra, por ejemplo, en la figura 4f.

La hebra para su uso en el metodo anterior puede tratar satisfactoriamente arrugas tal como se muestra en las figuras 5A, 5B y 5C. Una arruga tfpica se ilustra en la figura 5A. La figura 5B ilustra una hebra implantada por debajo de una arruga que aun no esta hidratada. A medida que la hebra implantada por debajo de la arruga se hidrata completamente, el aspecto superficial de la arruga se aplana simultaneamente tal como se ilustra en la figura 5C.

En algunas realizaciones, la hebra se manipula de un modo tal que un extremo de la hebra es suficientemente duro de manera que la hebra se usa para penetrar en la piel. Esto puede lograrse recubriendo la hebra con un material de endurecimiento, tal como un recubrimiento de azucar. En otra realizacion, la hebra se recubre en su totalidad, por ejemplo con un recubrimiento de azucar, para proporcionar a la hebra de resistencia columnar aumentada.

Contorneado facial

Las hebras descritas en el presente documento son para su uso en el contorneado facial. Lo que quiere decirse mediante contorneado facial es que las hebras pueden aplicarse a cualquier area de la cara, el cuello o el pecho que el paciente desee que se aumente, incluyendo, a modo de ejemplo solo, los labios, el pliegue nasolabial y el pliegue

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nasoyugal.

El aumento de labios es un procedimiento estetico frecuentemente deseado. Normalmente, el objetivo estetico son labios mas llenos, mas abultados. Las opciones de tratamiento disponibles para el aumento de labios incluyen materiales de relleno temporales tales como Restylane® y Juvederm®, materiales de relleno permanentes tales como implantes ArteFill®, Radiesse® y Goretex®, as^ como procedimientos quirurgicos. Las areas de potenciacion pueden incluir el borde bermellon (o rollo blanco) para el contorneado y borramiento de los labios y la union mucosa humeda-seca para aumento del volumen. Otras tecnicas incluyen infiltracion mas difusa del musculo orbicular de la boca.

El aumento y contorneado de los labios mediante productos de aumento de tejidos blandos temporales es una opcion popular, de bajo riesgo debido a la invasividad minima y naturaleza temporal del procedimiento. Las desventajas principales de los productos de aumento de tejidos blandos usados actualmente en procedimientos de labios son que es (a) doloroso, (b) diffcil de inyectar de manera constante y homogenea el gel en la ubicacion deseada, y (c) el gel puede migrar a lo largo de la vida util del implante provocando que los resultados esteticos cambien.

La presente divulgacion aborda las desventajas descritas anteriormente. Mas alla de abordar las desventajas enumeradas anteriormente para productos de aumento de tejidos blandos temporales existentes descritos anteriormente, se ha encontrado que el metodo basado en hebras de HA de potenciacion del aspecto de los labios es muy rapido. Un paciente tfpico puede tener 3 hebras en su(s) labios(s) en solo 3 minutos. Los procedimientos de labios con productos de aumento de tejidos blandos actuales pueden tardar de 15 a 20 minutos.

En realizaciones dirigidas al contorneado facial, el medico encargado puede adormecer el area de tratamiento segun procedimientos conocidos en la tecnica usando una variedad de anestesicos, incluyendo, pero sin limitarse a, iidocama topica, hielo o un bloque con inyeccion de lidocama. Las hebras preparadas con HA (acido hialuronico) pueden unirse al extremo proximal de una aguja y tirarse de las mismas en el labio. La aguja puede servir como grna precisa, y tambien usarse para predecir y corregir la ubicacion del implante antes de tirar de la hebra hasta la ubicacion deseada. Este mecanismo de administracion preciso puede usarse para administrar hebras a lo largo del borde bermellon para un contorneado, superficialmente si se desea, asf como en la union humeda-seca para rellenar, mas profundamente en el labio si se desea.

Se contempla que cuando la hebra se usa para el contorneado facial, pueda usarse cualquier numero de hebras dependiendo del efecto deseado y el tamano de la hebra. Por ejemplo, la descripcion del procedimiento realizado para el contorneado y aumento de labios se comenta mas adelante en el ejemplo 11.

Se ha encontrado sorprendente e inesperadamente que las hebras pueden ser para su uso en implantacion en diversos planos de tejido del paciente para proporcionar un aspecto mas natural cuando se realiza un contorneado facial. Por ejemplo, las hebras pueden ser para su uso en implantacion de una manera que forma una hamaca en la ubicacion deseada. Dadas las propiedades unicas de las hebras descritas en el presente documento, el medico encargado puede depositar o implantar las hebras en la epidermis, la dermis y/o la capa subcutanea.

Esta tecnica se permite por la precision con la que las hebras pueden colocarse, y su tamano relativo con respecto a la dermis y estructuras subyacentes. Las hebras pueden conferir diferentes efectos sobre caractensticas faciales tales como arrugas, contornos, pliegues y depresiones dependiendo de en donde se implanten.

Por ejemplo, la experiencia clmica reciente indica que la colocacion de una hebra (en este caso, una que tema aproximadamente 008” de diametro) de manera profunda, por ejemplo en el espacio subcutaneo, a lo largo del eje de una arruga de la frente puede ayudar a suavizar entonces el aspecto de la arruga que se forma cuando el paciente se anima, flexionando su frente (lo que normalmente exacerbana el aspecto de la arruga). Estos tipos de arrugas dinamicas solo se tratan bien actualmente con Botox®, que tiene el efecto no deseado de impedir que el paciente exprese todas las expresiones faciales. Ademas, la experiencia clmica reciente muestra que las arrugas estaticas, las que son visibles en reposo, pueden tratarse eficazmente mediante la colocacion de una hebra (de desde 0,004 hasta 0,008” de diametro) superficialmente, por ejemplo dentro de la dermis.

La tecnica de estratificacion de planos de tejido de implantes de hebras tambien se usa satisfactoriamente en la mejora del aspecto de los pliegues nasolabiales (hasta 4x hebras de 0,008”), lmeas glabelares, lmeas de marioneta y labios.

Esta es otra tecnica que se permite mediante las hebras de HA y su metodo de implantacion. Para suavizar el aspecto de huecos o depresiones tales como el pliegue nasoyugal, o de otra forma el contorno de la cara en areas tales como los huesos de las mejillas, la barbilla, por ejemplo, pueden implantarse hebras en patrones de trama (vease la figura 7A) y/o trama cruzada (vease la figura 7B) para tratar areas mayores que la anchura de una unica hebra. Tal como se observa en las figuras 7A y 7B, se han suavizado eficazmente los pliegues nasoyugales de dos pacientes colocando hebras paralelas en un caso (figura 7A) y en trama cruzada en otro caso (figura 7B). La trama cruzada podna realizarse oblicuamente a la direccion inicial, como fue el caso en la figura 7B, o perpendicularmente.

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Ademas, las tramas pueden ser en diferentes pianos de tejido tambien.

En otra realizacion de esta tecnica, la trama puede realizarse oblicuamente a la direccion del area que esta tratandose. Por ejemplo, en la figura 7A las hebras se colocan alineadas al eje del pliegue nasoyugal. En su lugar, las hebras podnan colocarse oblicuamente al eje del pliegue nasoyugal para soportar el tejido en el area de manera diferente.

Se contempla que la implantacion de las hebras en diversos planos tambien puede realizarse en el tratamiento de arrugas tal como se describio anteriormente.

Terapia de heridas

En algunas realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso en vendajes de heridas incluyendo vendajes de heridas con presion negativa.

En algunas realizaciones, el vendaje de heridas permanece en contacto con la herida durante al menos 72 horas. En otras realizaciones, el vendaje de heridas con presion negativa permanece en contacto con la herida durante al menos 1 semana. En todavfa otras realizaciones, el vendaje de heridas permanece en contacto con la herida durante al menos 2 semanas. En todavfa otras realizaciones, el vendaje de heridas permanece en contacto con la herida durante al menos 3 semanas. En todavfa otras realizaciones, el vendaje de heridas permanece en contacto con la herida durante al menos 4 semanas. En las realizaciones anteriores, debe entenderse que el tejido de granulacion no retiene las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento ya que estos componentes pueden absorberse completamente. En algunas de estas realizaciones, el vendaje de heridas tiene entre aproximadamente 1 cm y aproximadamente 5 cm de grosor. Por consiguiente, en algunas de estas realizaciones, puede lograrse el cierre del lecho de la herida sin cambiar el vendaje.

En algunas realizaciones, las mallas tejidas descritas en el presente documento son para su uso en vendajes de heridas incluyendo vendajes de heridas con presion negativa. En otras realizaciones, el vendaje incluye entre 2 y aproximadamente 10 capas de mallas tejidas.

En todavfa otras realizaciones, las mallas tejidas comprenden hebras identicas. En todavfa otras realizaciones, las mallas tejidas comprenden hebras diferentes.

En algunas realizaciones, las mallas tejidas tienen entre aproximadamente 1 mm y aproximadamente 2 mm de grosor cuando estan secas. En otras realizaciones, las mallas tejidas tienen entre aproximadamente 2 mm y aproximadamente 4 mm de grosor cuando estan secas.

En algunas realizaciones, el tamano de poro de la malla tejida es de entre aproximadamente 1 mm y aproximadamente 10 mm de anchura. En otras realizaciones, el tamano de poro de la malla tejida es de entre aproximadamente 0,3 mm y aproximadamente 0,6 mm de anchura. En todavfa otras realizaciones, los poros de la malla tejida estan alineados. En todavfa otras realizaciones, los poros de la malla tejida estan escalonados. En todavfa otras realizaciones, las mallas tejidas se coliman para crear poros de tamano deseado.

En algunas realizaciones, la malla tejida es estable mecanicamente a un nivel de vacfo mmimo de aproximadamente 75 mm de Hg. En otras realizaciones, la malla tejida es estable mecanicamente a un vacfo de hasta aproximadamente 150 mm de Hg.

En algunas realizaciones, la malla tejida incluye colageno. En otras realizaciones, el vendaje se une a una espuma de poliuretano. En todavfa otras realizaciones, la espuma de poliuretano es de celulas abiertas. En todavfa otras realizaciones, el vendaje se une a una pelfcula fina. En todavfa otras realizaciones, la pelfcula fina es de silicona o poliuretano. En todavfa otras realizaciones, el vendaje se une a la pelfcula fina con un adhesivo soluble en agua.

En algunas realizaciones, la hebra para su uso en el vendaje incluye un agente terapeutico o un agente de diagnostico.

En algunas realizaciones, se proporciona un vendaje de heridas con presion negativa (Johnson et al., patente estadounidense n.° 7.070.584, Kemp et al., patente estadounidense n.° 5.256.418, Chatelier et al., patente estadounidense n.° 5.449.383, Bennet et al., patente estadounidense n.° 5.578.662, Yasukawa et al., patentes estadounidenses n.os 5.629.186, 5.780.281 y 7.611.500) para su uso en la cicatrizacion de heridas inducida por vacfo, particularmente heridas de superficies abiertas (Zamierski patentes estadounidenses n.os 4.969.880, 5.100.396, 5,261.893, 5.527.293 y 6.071.267 y Argenta et al., patentes estadounidenses n.os 5.636.643 y 5.645.081). El vendaje incluye una almohadilla que se adapta a la ubicacion de la herida, un sello estanco al aire que puede adherirse de manera retirable a la almohadilla, una fuente de presion negativa en comunicacion de fluido con la almohadilla y las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento unidas a la superficie en contacto con la herida de la almohadilla. La almohadilla, el sello y la fuente de

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vado se implementan tal como se describe en la tecnica anterior.

En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son estables mecanicamente a un nivel de vado mmimo de aproximadamente 75 mm de Hg. En todavfa otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son estables mecanicamente a un vado de hasta aproximadamente 150 mm de Hg. En todavfa otras realizaciones, el vendaje incluye al menos una capa de malla tejida. En todavfa otras realizaciones, el vendaje incluye entre 2 y aproximadamente 10 capas de malla tejida.

En algunas realizaciones un tubo conecta la almohadilla a la fuente de presion negativa. En todavfa otras realizaciones, se inserta un bote retirable entre la almohadilla y la fuente de presion negativa y esta en comunicacion de fluido con tanto la almohadilla como la fuente de presion negativa.

En algunas realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento no estan hidratadas. Por consiguiente, en estas realizaciones, el vendaje podna absorber exudados de la herida cuando se colocan en contacto con la herida. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento estan hidratadas. Por consiguiente, en estas realizaciones, el vendaje podna mantener la herida humeda cuando se coloca en contacto con la herida.

En algunas realizaciones, se conecta un orificio de entrada a un fluido con la almohadilla. Por consiguiente, en estas realizaciones, podna dispensarse fluido en la herida. En algunas realizaciones, el fluido es solucion salina. En otras realizaciones, el fluido contiene agentes de diagnostico o terapeuticos.

En algunas realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso como barreras de adhesion. En algunas realizaciones, las mallas tejidas descritas en el presente documento son para su uso en barreras de adhesion. En algunas realizaciones, las barreras de adhesion pueden ser para su uso en una implementacion conjuntamente con otros tipos de barreras de adhesion, tales como lfquidos, geles, pulverizaciones, otras pelfculas o solidos, productos farmaceuticos y/o terapias celulares.

Tratamiento de perdida del cabello

En algunas realizaciones, se describe una hebra para su uso en un metodo de tratamiento de la perdida de cabello en un sujeto. Un sujeto tal como, por ejemplo, un hombre con calvicie de patron masculino tfpica puede tratarse con una hebra, opcionalmente unida a una aguja, tal como se ilustra, por ejemplo, en las figuras 2, 3A y 3B. El extremo distal de la aguja puede insertarse en una de las lmeas de cabello. La aguja puede entonces atravesar el area por debajo de la lmea de cabello del sujeto y puede entonces salir de la piel del sujeto. Entonces puede tirase de la aguja distalmente hasta que se retira del sujeto de manera que se tira de la hebra hasta la ubicacion previamente ocupada por la aguja. Finalmente, se corta la hebra en exceso de la aguja en la superficie de la piel del sujeto dejando la hebra implantada. En algunas realizaciones, la hebra comprende ademas uno o mas compuestos que promueven el crecimiento del cabello.

Tratamientos medicos y quirurgicos adicionales

En algunas realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso como productos de aumento de tejidos blandos en diversas aplicaciones esteticas tal como se describio anteriormente. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso como suturas en diversas aplicaciones medicas y/o quirurgicas. En todavfa otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso en cirugfa oftalmologica, administracion de farmacos e inyeccion intraarticular. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso como barreras de adhesion, por ejemplo para tratar adhesiones abdominales, pelvicas, cardiacas, espinales y/o tendinosas. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento se incorporan en una matriz dermica acelular. Se contempla que una matriz dermica acelular integrada con las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento proporcione una revascularizacion y/o integracion biologica mejoradas. Las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento pueden comprender ademas otros biomateriales regenerativos, productos biologicos y/o farmacologicos. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento se usan como dispositivos de administracion de farmacos local, sostenida. En algunas realizaciones, los farmacos incluyen reserpina, guanetidina, fenoxibenzamina y fentolamina, hexametonio, 6-hidroxidopamina, tetrodotoxina, glutamato, etc. En otras realizaciones, las hebras, trenzas, cuerdas, mallas tejidas o estructuras tridimensionales descritas en el presente documento son para su uso como endoprotesis de elucion de farmacos pasiva.

En algunas realizaciones, se describe una hebra para su uso en un metodo para tratar tumores en un sujeto que lo

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necesita. La hebra puede unirse a una aguja tal como se ilustra, por ejemplo, en las figuras 2, 3A y 3B. El extremo distal de la aguja puede insertarse en el tumor del sujeto. La aguja puede entonces atravesar el tumor y puede entonces salir del tumor. Entonces puede tirarse distalmente de la aguja hasta que se retira del tumor del sujeto de manera que se tira de la hebra hasta la ubicacion previamente ocupada por la aguja. Finalmente, se corta la hebra en exceso de la aguja dejando la hebra implantada en el tumor del sujeto. En algunas de las realizaciones anteriores, la hebra incluye un agente anticancengeno. En algunas realizaciones, la hebra se reticula e incluye inhibidores de Bcl-2.

En una realizacion a modo de ejemplo, las hebras de la presente divulgacion pueden ser para su uso para tratar tumores pancreaticos. Puede accederse al pancreas mediante cirugfa o metodos mmimamente invasivos tal como mediante laparoscopia. El extremo distal de la aguja puede insertarse en el tumor pancreatico. La aguja puede entonces atravesar el tumor pancreatico y puede entonces salir del tumor. Entonces puede tirarse distalmente de la aguja hasta que se retira del tumor pancreatico de manera que se tira de la hebra hasta la ubicacion previamente ocupada por la aguja. Finalmente, se corta la hebra en exceso de la aguja dejando la hebra implantada en el tumor pancreatico. El procedimiento puede repetirse cualquier numero de veces para proporcionar un tumor pancreatico en el que se han implantado varias hebras. En algunas realizaciones, la hebra incluye un agente anticancengeno.

En algunas realizaciones, se describe una hebra para su uso en un metodo para tratar una vena varicosa en un sujeto que lo necesita. La hebra puede unirse a una aguja tal como se ilustra, por ejemplo, en las figuras 2, 3A y 3B. El extremo distal de la aguja puede insertarse en la vena varicosa del sujeto. La aguja puede entonces atravesar la vena varicosa y puede entonces salir de la vena. Entonces puede tirarse distalmente de la aguja hasta que se retira de la vena varicosa del sujeto de manera que se tira de la hebra hasta la ubicacion previamente ocupada por la aguja. Finalmente, se corta la hebra en exceso de la aguja dejando la hebra implantada en la vena varicosa del sujeto. En algunas realizaciones, la aguja es flexible. En otras realizaciones, la hebra se enrolla cuando se hidrata, ocluyendo mas facilmente el vaso.

En algunas realizaciones, se describe una hebra para su uso en un metodo para la reconstruccion de pezones en el que se implanta un implante cilmdrico, tridimensional que comprende hebras reticuladas por debajo de la piel. El implante puede incluir agentes terapeuticos, por ejemplo compuestos de adhesion de condrocitos.

En algunas realizaciones, se describen hebras para su uso en metodos para el recrecimiento de nervios o vasos. Tal como se ilustra en la figura 6, puede usarse una aguja para colocar una hebra en una lmea espedfica, lo que podna promover la regeneracion de nervios o vasos.

6. Kits

Tambien se proporciona en el presente documento un kit de partes que comprende una hebra y un medio para administrar o implantar la hebra en un paciente. En una realizacion, el medio para la administracion a un paciente es una jeringa o una aguja. En otra realizacion, el medio para la administracion a un paciente es una pistola de aire. El tamano (o diametro) de la aguja puede depender del uso de la hebra, y por tanto tambien puede basarse en el area de seccion transversal de la hebra usada. El diametro externo de la aguja o jeringa puede ser mayor o igual al area de seccion transversal de la hebra usada para disminuir el requisito de traccion de la hebra a medida que se aplica a la dermis. Se contempla ademas que el diametro externo de la hebra pueda ser mayor que el diametro externo de la aguja. La piel es bastante flexible de modo que tener un diametro de aguja mas pequeno puede permitir que el tamano de puncion sea incluso pequeno con el uso de una hebra de diametro mas grande. Ademas, el grosor de la hebra sena diferente en el caso en el que la hebra es una sutura en comparacion con el tratamiento de lmeas finas y arrugas en donde puede usarse una hebra mas fina. Tambien puede unirse mas de una hebra a una unica aguja.

Ademas, el tamano del dispositivo de administracion, una aguja, dependera de su uso previsto y del tamano de la hebra. Se contempla que para su uso en el contorneado facial y o relleno de arrugas una hebra de diametro de aproximadamente 0,006” (pulgada) a aproximadamente 0,008” o incluso una hebra de diametro de aproximadamente 0,003” a aproximadamente 0,004” sera suficiente. Sin embargo, en algunas realizaciones, la hebra es de desde aproximadamente 0,003” hasta aproximadamente 0,050”, o desde aproximadamente 0,005” hasta aproximadamente 0,030”, o desde aproximadamente 0,005” hasta aproximadamente 0,025”. En algunas realizaciones, el tamano de la hebra es de desde aproximadamente 0,010” hasta aproximadamente 0,020” de diametro, o desde aproximadamente 0,011” hasta aproximadamente 0,016”.

La union de la hebra a la aguja puede ser o bien una union mecanica y/o bien con el uso de un adhesivo, tal como cianoacrilato. En una realizacion, la aguja es de acero inoxidable. En una realizacion, la hebra se teje o forma un bucle a traves de orificios en el extremo proximal de la aguja, o alternativamente, la hebra se envuelve alrededor del extremo proximal de la aguja, o alternativamente, la hebra se enhebra a traves de un ojo de la aguja y o bien se ata o bien de une con un adhesivo para formar un bucle, o alternativamente, la hebra se sujeta (o bien mecanicamente o bien se une con un adhesivo) dentro de un orificio en el extremo proximal de la aguja. En otra realizacion, la hebra puede prepararse para formar una union ffsica a la aguja durante el proceso de secado ya que la hebra se forma a partir del gel. Por ejemplo, si se usa una aguja que tiene poros en el extremo proximal, los poros pueden rellenarse con el gel durante el proceso de extrusion y la hebra se sujetana por tanto tras el secado. La aguja puede ser ngida

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o flexible para permitir que el usuario siga la aguja por debajo de la arruga dentro de la piel. Ademas, la aguja puede estar equipada con una rampa para guiar la aguja a una profundidad deseada dentro de la piel, y tras la insercion de la aguja, la gma puede desacoplarse a medida que la aguja se lleva a traves de la superficie de la piel. En algunas realizaciones, la hebra se une a una aguja.

Se contempla ademas que el kit comprenda una aguja y la hebra unida a la misma, este envasado de manera esteril y este previsto para un unico uso. Alternativamente, un kit puede comprender varias agujas, cada una con una hebra unida. En una realizacion adicional, un kit incluye hebras de diferentes tamanos para permitir opciones de tratamiento para el medico mientras se minimiza el numero de pinchazos de aguja requeridos. En aun otra realizacion, el kit incluye hebras y agujas de diferente longitud y formas curvadas para simplificar la implantacion en areas que son diffciles de tratar o acceder con una aguja recta, por ejemplo cerca de la nariz, alrededor de los ojos y la parte media del labio superior.

Ejemplos

La presente divulgacion se define adicionalmente mediante la referencia a los siguientes ejemplos. Resultara evidente para los expertos en la tecnica que pueden ponerse en practica muchas modificaciones, tanto en las hebras como en los metodos, sin apartarse del alcance de la presente divulgacion. El acido hialuronico y los agentes de reticulacion estan disponibles de fuentes comerciales.

Ejemplo 1: Sintesis de una hebra reticulada

Pueden prepararse hebras de acido hialuronico reticulado segun los siguientes procedimientos.

Reticulacion: preparacion de gel de acido hialuronico reticulado

Se hidrata polvo de acido hialuronico (HA) en aproximadamente el 75% de un volumen total deseado de NaOH durante aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 50°C en un recipiente apropiado. El HA hidratado se anade entonces a una jeringa y se mezcla meticulosamente (por ejemplo, de jeringa a jeringa aproximadamente 20 veces). Se continua el calentamiento durante aproximadamente 30 minutos.

Entonces se disuelve el agente de reticulacion (es decir, BDDE) en la porcion restante del volumen deseado total de NaOH (es decir, aproximadamente el 25% del volumen deseado total), se anade a la disolucion de acido hialuronico hidratado (gota a gota o en una porcion), se mezcla meticulosamente (por ejemplo, de jeringa a jeringa aproximadamente 20 veces), se calienta durante aproximadamente 30 minutos, vuelve a mezclarse (por ejemplo, de jeringa a jeringa aproximadamente 20 veces) y se transfiere a un recipiente apropiado. Entonces se continua el calentamiento a aproximadamente 50°C durante de 3 a 5 horas adicionales.

Se prepararon diversos geles reticulados con diferentes concentraciones de componentes usando el procedimiento descrito anteriormente en el presente documento.

• Peso molecular de HA (MDa): por ejemplo, 0,7, 1,7, 2,7.

• Tiempo de hidratacion de HA: por ejemplo, 0 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, durante la noche.

• pH de reaccion: 9-13,4 usando, por ejemplo, NaOH 0,00001-0,25 M.

• Tiempo de reaccion de reticulacion: por ejemplo, 3-4,5 horas.

• Concentracion de HA (% p/p de HA:NaOH acuoso): por ejemplo, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12.

• Concentracion de BDDE (% p/p de BDDE:HA): por ejemplo, 0,5, 2, 2,5, 5, 7,5, 8, 10, 20, 30, 40, 100. Aclarado/dimensionamiento opcional

El gel de acido hialuronico reticulado se aclara para eliminar el hidroxido de sodio y cualquier BDDE sin reaccionar. Tambien puede eliminarse el agua, y los geles pueden fragmentarse para facilitar la etapa de extrusion y/o para lograr una eficacia de aclarado. En tal caso, el dimensionamiento se logra cortando el gel en cubos de aproximadamente 0,5 cm. Entonces se logra el aclarado aclarando con aproximadamente 40 volumenes de fosfato de sodio 10 mM, a pH 6,0, tres veces durante aproximadamente 30 minutos cada una, aclarando con etanol al 100% seis veces durante aproximadamente 30 minutos, y entonces aclarando con agua cuatro veces durante aproximadamente 30 minutos.

Los trozos de gel hinchados pueden dimensionarse entonces adicionalmente en cubos de aproximadamente 0,25 cm, cargarse en una jeringa y extruirse a traves de una aguja roma de calibre 20 (G). Puede realizarse mas de una etapa de dimensionamiento usando una aguja del mismo calibre o una de calibre diferente, normalmente mas

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pequeno (por ejemplo, 20 G, entonces dos etapas de dimensionamiento de 25 G).

Secado

El gel de acido hialuronico reticulado se diluye entonces aproximadamente 2:1 con agua, se carga en una cubeta secada. El secado se logra mediante secado con aire en condiciones ambientales o liofilizacion. Alternativamente, el gel se afsla por medio de precipitacion en etanol. El gel o bien se seca parcialmente hasta una concentracion final deseada o bien se seca completamente.

Formulacion

El gel de acido hialuronico reticulado completamente secado se formula como una composicion acuosa hasta la concentracion de HA final deseada (por ejemplo, el 2,5%, el 5%, el 7,5%, el 10%, el 12,5%, el 15%, el 20%). El gel de acido hialuronico reticulado parcialmente secado puede usarse como composicion acuosa en la formulacion sin tratamiento adicional.

La composicion acuosa de gel de acido hialuronico reticulado puede formularse entonces adicionalmente con un aglutinante tal como acido hialuronico no reticulado. En tal caso, el acido hialuronico no reticulado se hidrata (por ejemplo, durante la noche a 4°C) a la concentracion de HA final deseada (por ejemplo, el 2,5%, el 5%, el 7,5%, el 10%, el 12,5%, el 15%, el 20%). El aglutinante se mezcla con el gel de acido hialuronico reticulado. Los aglutinantes tfpicos incluyen acido hialuronico no reticulado, sales (por ejemplo, CaCh), excipientes, lidocama y similares.

La composicion acuosa puede comprender cualquier medio acuoso, tal como un acido, una base, un tampon o una sal. Pueden usarse tampones tales como solucion salina tamponada con fosfato (por ejemplo, PBS 10 mM a pH 7,4). Tambien pueden usarse disoluciones de cloruro de calcio (por ejemplo, 1 mM, 2,5 mM o 5 mM). Pueden usarse disoluciones de hidroxido de sodio (NaOH) (por ejemplo, 0,1 M, 0,2 M, 0,3 M o 0,5 M).

Pueden prepararse composiciones con concentraciones de acido hialuronico y HA reticulado superiores o inferiores; las siguientes tres composiciones se facilitan como ejemplos solo.

En una composicion, por ejemplo, la composicion extruida final contema el 12% (p/p) de acido hialuronico reticulado y el 3% (p/p) de HA no reticulado, en la que el acido hialuronico reticulado se derivaba de una reaccion de reticulacion con o bien el 10% de acido hialuronico y el 4% de BDDE, o bien el 8% de acido hialuronico y el 3,2% de BDDE.

En otra composicion, la composicion extruida final contema el 8% (p/p) de acido hialuronico reticulado y 2% (p/p) de HA no reticulado, derivandose el acido hialuronico reticulado de una reaccion de reticulacion con o bien el 10% de acido hialuronico y el 4% de BDDE, o bien el 8% de acido hialuronico y el 3,2% de BDDE.

En aun otra composicion, la composicion extruida final contema el 5% (p/p) de acido hialuronico reticulado y el 5% (p/p) de HA no reticulado, derivandose el acido hialuronico reticulado de una reaccion de reticulacion con el 10% de acido hialuronico y el 4% de BDDE.

Extrusion

Las formulaciones de gel finales se extruyen entonces sobre una superficie adecuada para producir hebras humedas. Se usan diversos tamanos de boquilla dependiendo del grosor de hebra deseado final (por ejemplo, 20 G, 19 G, 18 G, 17 G, 16 G).

Las formulaciones de gel finales se transfieren a una extrusora presurizada (por ejemplo, maquina de dispensacion neumatica EFD modelo XL1500). La boquilla de la extrusora puede tener una punta que oscila desde un calibre 15 hasta aproximadamente calibre 25. La presion de la jeringa puede ser de entre aproximadamente 10 psi y aproximadamente 2000 psi, dependiendo de la viscosidad de la formulacion de gel final. Para formulaciones de gel muy viscosas, puede usarse un multiplicador de presion.

La hebra humeda se forma entonces extruyendo la formulacion de gel final sobre un sustrato mediante una extrusora para lograr el grosor de hebra humeda deseado. Por ejemplo, para lograr un diametro secado similar, puede usarse una aguja de calibre 20 para composiciones de acido hialuronico al 15%, o una aguja de calibre 19 para composiciones de acido hialuronico al 10%.

Secado de hebras

La hebra humeda puede secarse entonces en condiciones ambientales hasta un porcentaje de hidratacion de menos de aproximadamente el 30%, o menos de aproximadamente el 15%, o menos de aproximadamente el 10%, proporcionando por tanto una hebra seca. Opcionalmente, puede permitirse que la hebra se seque bajo una humedad relativa de desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 80% a una temperatura de desde

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aproximadamente 20°C hasta aproximadamente 37°C. Por ejemplo, las hebras pueden secarse al aire durante dos d^as en condiciones ambientales.

Opcionalmente, antes de secar la hebra, la hebra humeda puede estirarse hasta una longitud deseada y diametro reducido antes del secado. El estiramiento puede ser o bien colgando la hebra por un extremo y aplicando peso al extremo opuesto, o bien estirando horizontalmente la hebra humeda sobre una superficie (o bien la misma o bien diferente de la superficie de extrusion) y adhiriendo los extremos a la superficie.

Union a una aguja

Las hebras secas pueden unirse a una aguja usando tecnicas conocidas (veanse, por ejemplo, las figuras 2, 3A y 3B).

Esterilizacion

Las hebras descritas en el presente documento pueden esterilizarse usando metodos de esterilizacion de haz de electrones (haz de e). Las hebras preparadas en el ejemplo 1 reticuladas con BDDE se lavaron en una disolucion de tampon fosfato o tampon Tris a pH 10. Algunas de las disoluciones conteman ademas acido ascorbico 1 mM, acido ascorbico 10 mM, acido ascorbico 100 mM, acido ascorbico 1 M, vitamina E 10 mM y Na3PO4 50 mM. Las hebras se esterilizaron entonces usando tecnicas de haz de e convencionales a 4 kGy o 20 kGy. En algunas realizaciones, la temperatura de la hebra puede alterarse antes de la esterilizacion. En algunas realizaciones, la temperatura de la hebra se reduce hasta aproximadamente -20°C. En algunas realizaciones, la hebra esta justo por debajo de 5°C tras la esterilizacion.

Usando las etapas divulgadas anteriormente, pueden prepararse hebras usando uno cualquiera de los procedimientos comentados a continuacion.

Ejemplo 1A: Procedimiento 1

Pueden prepararse hebras usando las siguientes etapas:

1. Reticulacion;

2. Aclarado;

3. Dimensionamiento;

4. Secado;

5. Formulacion del HA reticulado con aglutinante;

6. Desaireacion;

7. Extrusion;

8. Secado de hebras;

9. Union a una aguja; y

10. Esterilizacion.

Ejemplo 1B: Procedimiento 2

Tambien pueden prepararse hebras usando las siguientes etapas:

1. Reticulacion;

2. Aclarado;

3. Dimensionamiento;

4. Secado;

5. Formulacion del HA reticulado con aglutinante;

6. Desaireacion y esterilizacion en autoclave;

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7. Extrusion;

8. Secado de hebras;

9. Union a una aguja; y

10. Esterilizacion (opcional).

Ejemplo 1C: Procedimiento 3

Tambien pueden prepararse hebras usando las siguientes etapas:

1. Reticulacion;

2. Extrusion;

3. Secado de hebras;

4. Aclarado;

5. Secado de hebras;

6. Union a una aguja; y

7. Esterilizacion en autoclave.

Ejemplo 1D: Procedimiento 4

Tambien pueden prepararse hebras usando las siguientes etapas:

1. Reticulacion;

2. Aclarado;

3. Dimensionamiento y formulacion del HA reticulado con aglutinante;

4. Secado;

5. Desaireacion;

6. Extrusion;

7. Secado de hebras;

8. Union a una aguja; y

9. Esterilizacion.

Ejemplo 1E: Procedimiento 5

Tambien pueden prepararse hebras usando las siguientes etapas:

1. Reticulacion;

2. Aclarado;

3. Dimensionamiento;

4. Precipitacion en etanol y secado;

5. Formulacion del HA reticulado con aglutinante;

6. Desaireacion;

7. Extrusion;

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8. Secado de hebras;

9. Union a una aguja; y

10. Esterilizacion (opcional).

Ejemplo 2: Lavado (rehidratacion) y vuelta a secar de la hebra

Las hebras secas pueden lavarse con un disolvente acuoso para eliminar cualquier contaminante, tales como agente de reticulacion sin reaccionar. El lavado puede realizarse mediante diversos metodos, tales como immersion en un disolvente acuoso o usando un sistema de flujo simultaneo colocando la hebra en una depresion inclinada y permitiendo que un disolvente acuoso fluya sobre la hebra. Ademas, la hebra, una vez rehidratada, puede estirarse antes de volverse a secar. El estiramiento puede realizarse mediante los medios descritos anteriormente en el ejemplo 1. La hebra rehidratada y lavada vuelve a secarse entonces para proporcionar la hebra seca. La vuelta a secar se realiza normalmente en condiciones ambientales (es decir temperatura y/o presion ambientales) durante desde aproximadamente 8 horas hasta aproximadamente 24 horas o hasta que la hebra seca tiene un porcentaje de hidratacion de menos de aproximadamente el 30%. La hebra puede lavarse varias veces (por ejemplo 10 o mas veces) sin perder su integridad estructural. A lo largo del transcurso de multiples ciclos de lavado la longitud global de la hebra puede aumentarse entre aproximadamente el 25% y aproximadamente el 100%.

Ejemplo 3: Hebras de muestra

En la tabla 1 a continuacion se proporcionan hebras de muestra preparadas a partir de los metodos del ejemplo 1.

Tabla 1

Hebra de muestra: Gel Pretamano % de solidos de HA % HA NXL Desaireacion Boquilla de extrusion

113: 8/40 20 G - afilada 15 20 4X 20 G

114: 8/40 20 G - afilada 15 20 2X 20 G

115: 8/40 20 G - afilada 15 20 6X 20 G

116: 8/40 20 G - afilada 15 20 6X, durante la noche 20 G

117: 10/40 16G/20G - afilada 15 20 6X 20G, 19G

118: 10/40 16G/20G - afilada 15 40 6X 20G, 19G

119: 10/40 16G/20G - afilada 15 40 10X 20G, 19G

120: 10/40 16G/20G - afilada 15 20 10X 20G, 19G

121: 10/40 16G/20G - afilada 10 50 3X 19 G, 18 G

122: 10/40 16G/20G - afilada 10 50 6X 19 G, 18 G

123: 10/40 16/18/20-afilada 10 50 6X 19 G, 18 G

124: 10/40 16/18/20-afilada 15 20 6X 20G, 19G

125: 10/40 16/18/20-afilada 15 40 6X 20G, 19G

126: 10/40 16/18/20-afilada (2X) 15 40 6X 20G, 19G

127: 8/40 20 G - afilada 15 20 6X 20G, 19G

128: 8/40 15 20 8X 19 G

129: 8/40 15 20 8X 19 G

% de solidos de HA = HA reticulado y no reticulado; NXL = HA no reticulado

Ejemplo 4: Caracteristicas fisicas de las hebras

Se evaluaron diversas hebras preparadas tal como se describio anteriormente para determinar la densidad de hebra, circularidad y diametro de hebra seca. Se determino la densidad de hebra midiendo el peso de una hebra de una

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longitud medida y calculando la razon de peso con respecto a longitud. Se determinaron la circularidad (W:T) y diametro (D) de hebra seca cortando hebras axialmente y midiendo el diametro mas corto (W) y mas largo (T) para una seccion transversal dada. La circularidad o razon de aspecto es la razon de W:T. El diametro de hebra (D) es un promedio de diametros cortos (W) y largos (T). La densidad de hebra promedio para hebras preparadas con agujas 20 G, 19 G y 18 G era de 1,78 mg/pulgada (n=7), 2,61 mg/pulgada (n=8) y 2,07 mg/pulgada (n=3), respectivamente.

Ejemplo 5: Comparacion de la resistencia a la traccion final de diferentes hebras

Se sometieron a prueba diversas hebras preparadas tal como se describio anteriormente para determinar la resistencia a la traccion usando un dinamometro (por ejemplo dinamometro digital de Precision Instruments o Chatillon). Se determino el fallo en el peso al que la hebra se rompfa. Se calculo la resistencia a la traccion final dividiendo la fuerza de traccion/carga de fallo entre el area de seccion transversal de la hebra. La carga de fallo promedio (en libras) para hebras no esterilizadas preparadas con agujas de 20 G y 19 G era de desde aproximadamente 0,420 lb hasta aproximadamente 1,172 lb. La carga de fallo promedio (en libras) para hebras esterilizadas con haz de e preparadas con agujas de 20 G, 19 G y 18 G era de desde aproximadamente 0,330 lb hasta aproximadamente 0,997 lb. La elongacion promedio (en pulgadas) para hebras no esterilizadas preparadas con agujas de 20 G y 19 G era de desde aproximadamente 0,028 pulgadas hasta aproximadamente 0,192 pulgadas. La elongacion promedio (en pulgadas) para hebras esterilizadas con haz de e preparadas con agujas de 20 G, 19 G y 18 G era de desde aproximadamente 0,021 pulgadas hasta aproximadamente 0,078 pulgadas. La resistencia a la traccion promedio (en psi) para hebras no esterilizadas preparadas con agujas de 20 G y 19 G era de desde aproximadamente 3236 psi hasta aproximadamente 19922 psi. La resistencia a la traccion promedio (en psi) para hebras esterilizadas con haz de e preparadas con agujas de 20 G y 19 G era de desde aproximadamente 1943 psi hasta aproximadamente 12859 psi.

Ejemplo 6: Datos de hinchamiento

La razon de hinchamiento de masa, tal como se representa mediante V2/V0, es la razon del gel hinchado en relacion con el peso de gel completamente secado (tablas 2 y 3).

Se calculo la razon de hinchamiento de diametro (razon de hebra hidratada con respecto a hebra seca) de hebras extruidas a partir de una boquilla de extrusion de 20 G que teman un diametro de hebra seca promedio de 0,0132 pulgadas. Cada hebra sometida a prueba tema una razon de hinchamiento de diametro de 1,5 o mas, siendo la razon de hinchamiento de diametro promedio de 1,55.

Tabla 2

Hebras hinchadas en agua (V2/V0)

HA/BDDE: 5/40 6/40 7/40 8/40 9/40 10/40 10/10 10/100

Prom.: 682,7 396,7 306,2 494,7 85,3 183,3 967,5 56,1

Est.: 322,8 188,4 11,9

Mm.: 122,3 50,1 54,5

Max.: 696,2 696,2 76,4

Tabla 3

Hebras hinchadas en PBS (V2/V0)

HA/BDDE: 10/10 10/20 10/30 10/40 10/100

Prom.: 71,6 45,2 38,4 37,3 23,7

Est.: 5,2 0,9 1,0 4,8 1,4

Mm.: 62,8 44,6 37,7 32,0 22,4

Max.: 78,3 45,8 39,1 54,4 25,3

Ejemplo 7: Degradacion enzimatica de las hebras con hialuronidasa

Se incubaron las hebras con hialuronidasa a 1 mg/ml en 1 ml de tampon (acetato de sodio 100 mM, pH 4,5, NaCl 150 mM) a 37°C; las hebras de control no estaban en presencia de hialuronidasa. A diversos tiempos, se retiraron almuotas de 40 |il de sobrenadante y se sometieron a ensayo mediante el ensayo de carbazol (Cesaretti, M, et al., Carbohydrate Polymers 54: 59-61 (2003)) para acido hialuronico. Las flechas verticales corresponden a la adicion de hialuronidasa 1 mg/ml nueva. Se reemplazaron los sobrenadantes por enzima 1 mg/ml nueva en tampon. Para las hebras A-F: A = 10/40@15/20 CaCh; B = 10/40@15/40; C = 10/40@15/20; D = 10/40@10/50; E = 8/40@15/20 lavado con H2O; F = 8/40@15/20; G = Control para 10/40@15/20 CaCh; H = Control para 10/40@15/40; I = Control para 10/40@15/20; J = Control para 8/40@15/20. Los detalles de estas degradaciones enzimaticas representadas

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estan en la figura 12 y la tabla 4. Esto muestra que las hebras de control, que no estan en presencia de hialuronidasa, no se degradan a lo largo del tiempo monitorizado, mientras que las hebras que estan en presencia de hialuronidasa se degradan.

Tabla 4: Velocidad de degradacion (pendiente de ajuste lineal de los primeros cinco puntos de datos

: A B C D E F G H I J

Velocidad de degradacion*: 0,014 0,011 0,010 0,007 0,041 0,023 0,00 0,00 0,00 0,00

*mg de HA/dfa

Ejemplo 8: Datos de palpacion

Un evaluador ciego palpa y puntua todos los sitios de muestra por animal y registra el valor sobre hojas de datos preimpresas. Se recopilaron los datos y se calculo el promedio basandose en el sitio de muestra. Las puntuaciones de los evaluadores son 0 = sin signos tactiles de implante, 1 = ligero signo tactil de implante y 2 = signo tactil de implante claro. Se realizo la puntuacion tactil de implante (palpacion cualitativa) por protocolo en sujetos de prueba a intervalos preespecificados que abarcaban la duracion del estudio, midiendo la respuesta dermica de superficie tras la implantacion. La respuesta medida era la continuidad en longitud del implante. Por ejemplo, si se palpaban dos puntos, y el implante se siente continuo, sin roturas, entonces se clasificana como “2”, si el implante se siente longitudinalmente intermitente entonces se clasificana como “1”, y si no se detecta implante, entonces la puntuacion se clasificana como “0”. En la figura 13 se muestra un grafico del numero de dfas frente a la puntuacion de palpacion promedio.

Ejemplo 9: Estudios histologicos

Se fijaron muestras de tejido que conteman implantes de hebras en un fijador de etanol con acido-formalina antes de la incrustacion en metacrilato de metilo. Se tineron secciones histologicas con hematoxilina y eosina (H&E) asf como azul Alcian con rojo neutro para visualizar las respuestas celulares y la presencia del implante, respectivamente. Las imagenes de histologfa de 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses y 9 meses de la formulacion 8/40@15/20 se muestran en las figuras 9A, 9B, 9C, 9D, 9E y 9E. Las muestras eran similares en aspecto, indicando que las hebras estaban persistiendo in vivo.

Ejemplo 10: Estudios de hebras de acido hialuronico en conejos

Se evaluo el rendimiento in vivo, incluyendo la persistencia y la respuesta biologica, de formulaciones de hebras en un estudio cronico en conejos. Se implantaron formulaciones de hebras descritas en el presente documento en la dermis dorsal de conejos New Zealand White y se evaluaron en los puntos de tiempo de 1 semana, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses y 9 meses. Durante la fase de vida, se evaluaron los sitios de implante para detectar la presencia del implante por medio de palpacion y un sistema de puntuacion tactil (vease el ejemplo 8). A los intervalos de tiempo programados, se sacrificaron los animales y se recogieron los sitios de implante para evaluacion macroscopica e histologica. Se seccionaron un subconjunto de sitios de implante axialmente con un bistun y se evaluaron bajo el microscopio para detectar la presencia visual de material de implante en el tejido dermico. Se aplico presion en el sitio de implante para evaluar si los implantes estaban bien integrados dentro del tejido o podnan extruirse del sitio de implante. El subconjunto restante de sitios de implante se fijaron y procesaron para la evaluacion histologica (vease el ejemplo 9). Las imagenes de histologfa de 1 mes y 2 meses de la formulacion 8/40@15/20 se muestran en las figuras 10 y 11, respectivamente, mostrando que la hebra esta todavfa presente.

Ejemplo 11: Tratamiento de arrugas con hebras de acido hialuronico

Se fijan a agujas hipodermicas (de 22 a 25 G) una unica o dobles cadenas de hebras de acido hialuronico (reticulado con BDDE), oscilando desde grosores de 0,004 pulgadas hasta 0,008 pulgadas. Las muestras se esterilizan con haz de e por NuTek Corp. a 29 kGy. La aguja tira de la hebra o hebras unidas en la piel. Las arrugas que se tratan son arrugas en el pliegue nasolabial, periorales, periorbitales, frontales (frente) y glabelares. La aguja tirana entonces de la hebra a traves de la piel de manera que la hebra queda ubicada donde se inserto previamente la aguja. Puede usarse mas de una hebra para tratar las arrugas con el fin de lograr el efecto de relleno deseado (de dos a cuatro o mas hebras). La arruga disminuye visiblemente tras la hidratacion de la hebra.

Ejemplo 12: Aumento de labios

Pueden implantarse en un paciente hebras de HA para el aumento de labios, o bien contorneado y/o bien relleno. El paciente puede recibir anestesico topico sobre la cara, pero no se aplica espedficamente a los labios segun el siguiente procedimiento:

• Abrir la bolsa y retirar la bandeja esteril que contiene las hebras de HA (acido hialuronico).

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• Usando guantes esteriles o un instrumento esteril tal como pinzas, retirar la hebra de HA deseada de la bandeja.

• Insertar el extremo afilado de la aguja en un margen del area de tratamiento prevista.

•Trasladar la aguja dentro de la piel bajo o cerca del area de tratamiento prevista. Si la aguja no esta en una ubicacion deseada en cualquier punto, retirar suavemente la aguja y volver a insertarla en la ubicacion correcta.

• Salir de la piel en el margen opuesto del area de tratamiento prevista usando el extremo afilado de la aguja. Si la aguja no esta en la ubicacion deseada, retirar suavemente la aguja y reinsertarla en la ubicacion correcta.

•Tras confirmar la ubicacion deseable de la aguja, tirar rapidamente de la aguja de manera distal, tirando de la hebra en su sitio dentro de la piel.

• Usando un bistun o tijeras quirurgicas esteriles, cortar la hebra en exceso que sobresale de la piel en ambos margenes del area de tratamiento. Esto separa eficazmente la aguja, que debe desecharse apropiadamente.

Las areas de potenciacion incluyen el borde bermellon (o rollo blanco) para borramiento y contorneado del labio, la union mucosa humeda-seca para aumentar el volumen. Otras tecnicas incluyen una infiltracion mas difusa del musculo orbicular de la boca. El medico encargado es capaz de seleccionar la ubicacion de colocacion de la hebra, el numero de hebras y el tamano de las hebras dependiendo del efecto deseado. Se contempla que cada area se trate con de 1 a 2 hebras en donde cada hebra tiene un diametro de cualquiera desde 200 micrometros hasta aproximadamente 500 micrometros cuando la hebra esta seca. Tras la hidratacion, se contempla que la hebra tenga un diametro de desde 0,5 milfmetros hasta aproximadamente 5 milfmetros.

Ejemplo 13: Estudio de RMN para determinar la razon de derivado de BDDE con respecto a HA en hidrogeles reticulados

Se emprendio un estudio de RMN para determinar la razon de derivado de diglicidil eter de 1,4-butanodiol (BDDE) con respecto a la subunidad de disacarido de acido hialuronico (HA) en hidrogeles de HA reticulados. Se prepararon hidrogeles a concentraciones de HA del 8 y del 10 por ciento, se reticularon con el 3,2 y el 4 por ciento de BDDE, respectivamente. Se aclararon los geles extensamente para eliminar el BDDE residual, se digirieron con hialuronidasa y se secaron. Se disolvieron los polvos resultantes en D2O y se analizaron mediante RMN de proton. Se determino la razon de BDDE con respecto a la subunidad de disacarido de HA comparando el pico de los hidrogenos de metileno internos de 1,4-butanodiol a 1,6 ppm con el grupo acetilmetilo de N-acetilglucosilamina a 2,0 ppm. A iguales cantidades molares de BDDE y subunidad de disacarido, estas areas de pico deben integrarse a 4 y 3, respectivamente. Los resultados con el hidrogel de HA al 8% dieron areas de pico que se integraban a 0,75 y 3, respectivamente, lo que corresponde a aproximadamente 0,19 moles de BDDE por mol de subunidad de disacarido. Los resultados con el hidrogel de HA al 10% dieron areas de pico que se integraban a 0,72 y 3, respectivamente, lo que corresponde a aproximadamente 0,18 moles de BDDE por mol de subunidad de disacarido.

Se repitio el experimento con la formulacion 8/40 con un segundo lote de gel y dio resultados de 0,217 moles de BDDE por mol de subunidad de disacarido. El porcentaje promedio de BDDE en el gel 8/40 es por tanto del 20% + 2% D.E. La tabla 5, a continuacion, muestra formulaciones adicionales.

Tabla 5

Formulacion de gel: % de entrada de BDDE (en peso) % de BDDE sustituido* % de BDDE reticulado* % de BDDE colgante*

12/40: 40% 35,2 8,5 26,7

12/20: 20% 19,1 4,9 14,2

12/15: 15% 17,2 3,5 13,7

* % en moles

Ejemplo 14: Efecto de la reticulacion sobre la persistencia in vivo de la hebra - Comparacion de datos de animales

Se colocaron hebras de acido hialuronico esterilizadas producidas por medio de los siguientes metodos en un animal y se evaluaron para determinar la persistencia in vivo.

Parte 14A

Se prepararon hebras de HA a partir de un gel de acido hialuronico al 10% p/p (PM = 1,47 MDa) formulado en tampon bicarbonato de sodio 10 mM (pH 10) y reticulado con el 10% (en relacion con la masa de HA) de diglicidil eter de 1,4-butanodiol (BDDE). Se aclararon hebras en los artfculos de prueba 1 y 2 en tampon Tris (Tris 50 mM,

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NaCI 150 mM) que contema acido ascorbico 100 mM, se aclararon hebras en los artfculos de prueba 3 y 4 en tampon Tris (Tris 50 mM, NaCl 150 mM) que contema vitamina E 100 mM, se aclararon hebras en los artfculos de prueba 5 y 6 en agua antes del secado final (secadas al aire). Se prepararon hebras en los artfculos de prueba 7 y 8 en tampon Tris 10 mM (pH 7) en vez de tampon bicarbonato de sodio 10 mM (pH 10) y se aclararon en agua antes del secado final. Las hebras secadas teman una forma cilmdrica, 0,006-0,008” de diametro y 1,0-1,5” de longitud. Se usaron agujas Keith de pared fina, de calibre 27, de acero inoxidable, hipodermicas en todos los artfculos de prueba. Las agujas teman 21^” de longitud y teman puntas con un unico bisel. Se unieron hebras de HA reticuladas a la aguja por medio de engarzado mecanico. Se esterilizaron de manera terminal los artfculos de prueba por medio de irradiacion con haz de e. Los artfculos de prueba 1 y 3 recibieron una dosis de irradiacion de 4 kGy. Los artfculos de prueba 2 y 4 recibieron una dosis de irradiacion de 20 kGy. Los artfculos de prueba 6 y 8 recibieron una dosis de irradiacion de 20 kGy congelados. Los artfculos de prueba 5 y 7 se procesaron en un entorno de tipo aseptico y no se esterilizaron de manera terminal.

Los resultados del estudio de persistencia in vivo (utilizando 10 ratas Sprague Dawley) indicaron que todas las hebras en el artfculo de prueba 2 eran indetectables en una semana. Las hebras implantadas de los artfculos de prueba 1, 3, 4 y 6 desaparecieron en gran medida en una semana con solo pequenos numeros de partfculas intracelulares encontradas dentro de pequenos infiltrados celulares en el punto de tiempo de una semana. Se observo mas material residual en los sitios tratados con los artfculos de prueba 3 y 4 que en los sitios tratados con el artfculo de prueba 1 en una semana, lo que sugiere que la velocidad de resorcion era mas lenta para esas hebras. No se observo nada del material implantado de los artfculos de prueba 1, 2, 3 o 4 a las 3 semanas. Ademas, todas las hebras de los artfculos de prueba 5, 6, 7 y 8 eran indetectables en el dfa 30.

Parte 14B

Se preparo una disolucion de acido hialuronico al 0,75% p/p (1,7 MDa) disolviendo el HA en tampon TRIS 10 mM (pH 7). Se anadio diglicidil eter de butanodiol (BDDE) a la disolucion de HA y se agito la disolucion durante la noche. La razon de BDDE con respecto a HA era de 2:1. Entonces se dializo la disolucion de HA sustancialmente reticulado frente a agua desionizada en exceso usando una membrana de dialisis con un punto de corte de peso molecular de aproximadamente 12 a aproximadamente 14 KDa. Entonces se liofilizo la disolucion dializada para obtener acido hialuronico sustancialmente reticulado seco. Se expuso el acido hialuronico reticulado seco (2,0 g) a 25 kGy de haz de e (temperatura de irradiacion 1 - 3°C), se formulo hasta el 16% de solidos (p/p) en tampon TRIS 10 mM (pH 7,00), se extruyo y se seco durante aproximadamente 48 h a temperatura ambiental.

Se irradio el artfculo de prueba 9 tras la reticulacion a 25 kGy, 0,020” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal. Se irradio el artfculo de prueba 10 tras la reticulacion a 25 kGy, 0,010” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal. El artfculo de prueba 11 tema 0,020” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal. Se irradio el artfculo de prueba 12 tras la reticulacion a 25 kGy, 0,020” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal. Se irradio el artfculo de prueba 13 tras la reticulacion a 25 kGy, 0,010” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal. El artfculo de prueba 14 tema 0,020” de diametro, se proceso en un entorno de tipo aseptico y se esterilizo de manera no terminal.

Se implantaron las hebras de los artfculos de prueba 9-14 en conejos. Se retiraron de cada animal segmentos de piel que conteman un total de 20 sitios tratados. Se procesaron y analizaron espedmenes seleccionados (4/grupo/punto de tiempo tomados de cada hebra de los sitios tratados con los artfculos de prueba 9-14). Se produjo la resorcion completa de las hebras de los artfculos de prueba 9, 10 y 13 a los 7 dfas. Se produjo la resorcion completa de las hebras del artfculo de prueba 12 entre 7 y 30 dfas. Se habfa producido la resorcion completa o casi completa de las hebras del artfculo de prueba 14 y se habfa producido la resorcion parcial de las hebras del artfculo de prueba 11 a los 30 dfas.

Parte 14C

Se prepararon seis hebras reticuladas segun el ejemplo 1. Se prepararon las hebras de los artfculos de prueba 1520 tal como sigue. Se prepararon hebras reticuladas de un diametro de entre 0,008 pulgadas y 0,010 pulgadas formando un gel con una concentracion del 10% de acido hialuronico y el 4% de BDDE en peso en relacion con la composicion total comprendiendo el resto hidroxido de sodio 0,1 N. La razon de BDDE con respecto a HA en el gel reticulado era de 0,18 moles de BDDE por mol de subunidad de disacarido. Tras el aclarado, predimensionamiento, liofilizacion y combinacion con aglutinante no reticulado, se extruyo entonces el gel para dar una forma de hebra usando una boquilla de 20 G. La hebra humeda se seca entonces durante aproximadamente 48 h para proporcionar una hebra seca.

Tabla 6. Composicion/procesamiento de artfculos de prueba

Artfculo: Partida [BDDE] Medio Predimensionado Solidos % de Medio de Esterilizacion

de: [HA] de de HA aglutinante formulacion

prueba: aclarado en el gel

15: 10% 40% PB 20 G 10% 50% H2O Haz de e

16: 10% 40% PB 20 G 15% 20% H2O Haz de e

17: 10% 40% PB 20 G 15% 20% CaCl2 5 mM H2O Haz de e

18: 10% 40% PB 20 G 15% 40% H2O Haz de e

19: 8% 40% PB 20 G 15% 20% H2O Haz de e

20: 8% 40% H2O 20 G 15% 20% H2O Haz de e

PB = tampon fosfato de sodio 10 mM, pH 6

Se evaluaron satisfactoriamente artfculos de prueba para determinar la degradacion mediante observacion macroscopica y mediante analisis histologico. Todos los artfculos de prueba eran identificables mediante observacion macroscopica a lo largo de 90 dfas, pero con la excepcion del artfculo de prueba 20, cuya identificacion 5 no era constante a los 135 y 180 dfas. Histologicamente, todos los artfculos de prueba eran identificables cualitativamente en puntos de tiempo tempranos. Cualitativamente, los artfculos de prueba 15, 16, 17 y 18 demostraron mas evidencias de degradacion que los artfculos de prueba 19 y 20. La degradacion del artfculo de prueba 20 se analizo cuantitativamente y el area de seccion transversal persistfa sin cambios significativos a los 270 dfas.

10

Por tanto, cuanto mas reticulada este la hebra de esta divulgacion mas persistente sera in vivo que cuando la hebra esta menos reticulada tal como puede observarse a partir de los datos anteriores.

Claims

10 2.
3. 15
4.

20 5.
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25
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8.

30
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35 10.
11.

40 12.
13.

45 14.
15.

50

REIVINDICACIONES

Hebra que comprende acido hialuronico reticulado, en la que el acido hialuronico se reticula con al menos el 15% en moles de un derivado de diglicidil eter de butanodiol (BDDE) en relacion con la unidad de disacarido de repeticion del acido hialuronico, y al menos el 5% en peso de acido hialuronico no reticulado en relacion con el peso de los solidos de acido hialuronico totales, en la que el acido hialuronico reticulado esta presente en una cantidad de desde el 60% en peso hasta el 90% en peso basandose en el peso total de la hebra excluyendo la humedad.

Hebra segun la reivindicacion 1, en la que el acido hialuronico no reticulado esta presente en una cantidad de desde el 10% en peso hasta el 40% en peso basandose en el peso total de la hebra excluyendo la humedad.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en la que el acido hialuronico reticulado se reticula con desde el 17% en moles hasta el 20% en moles del derivado de BDDE.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que la hebra tiene una resistencia a la traccion final de 3 kpsi (20,7 MPa) o mayor.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la hebra tiene una resistencia a la traccion final de desde 2 kpsi (13,8 MPa) hasta 20 kpsi (138 MPa).

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la hebra tiene un diametro de desde 0,008 pulgadas (0,20 mm) hasta 0,018 pulgadas (0,46 mm).

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que la hebra tiene un diametro de desde 0,011 pulgadas (0,28 mm) hasta 0,016 pulgadas (0,41 mm).

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que la hebra tiene una razon de peso/longitud de desde 1,5 mg/pulgada (0,059 mg/mm) hasta 3,5 mg/pulgada (0,14 mg/mm).

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la que la hebra tiene una longitud de desde 5 cm hasta 10 cm.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en la que la hebra tiene una carga de fallo de desde 0,3 libras (0,14 kg) hasta 1,3 libras (0,59 kg).

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que comprende ademas una aguja unida a la hebra.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que la hebra es una hebra seca.

Kit de partes que comprende la hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1-12 y un medio para implantar o administrar la hebra a un paciente que es preferiblemente una jeringa o una aguja.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en el tratamiento de una arruga en un paciente.

Hebra segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en el contorneado facial o vendaje de heridas en un paciente.