ES2640648T3 - Nanopartículas poliméricas terapéuticas y métodos para su fabricación y uso - Google Patents

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Abstract

Una nanopartícula terapéutica que comprende 55 a 85 por ciento en peso de copolímero dibloque de poli(ácido láctico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartícula terapéutica comprende 10 a 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, 5 a 20 por ciento en peso de ácido pamoico y 10 a 25 por ciento en peso de 2-(3-((7-(3-(etil(2- hidroxietil)amino)propoxi)quinazolin-4-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-N-(3-fluorofenil)acetamida ("AZD1152 hqpa").

Description

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DESCRIPCION
Nanopartlcuias polimericas terapeuticas y metodos para su fabrication y uso Antecedentes
Sistemas que administran ciertos farmacos a un paciente (por ejempio, se distribuyen preferentemente a un tipo particular de tejido o celula o a un tejido enfermo especlfico mas que ai tejido normal) o que controian la liberation de farmacos se han reconocido durante mucho tiempo como beneficiosos.
Por ejemplo, los agentes terapeuticos que incluyen un agente activo distribuido preferentemente a un tejido enfermo especlfico mas que al tejido normal, pueden aumentar la exposition del farmaco en esos tejidos sobre otros en el cuerpo. Esto es particularmente importante cuando se trata una afeccion tal como el cancer cuando es deseable que se administre una dosis citotoxica del farmaco a las celulas cancerosas sin destruir el tejido no canceroso circundante. La distribucion efectiva de farmacos puede reducir los efectos secundarios indeseables y a veces potencialmente mortales comunes en la terapia contra el cancer.
Las nanopartlculas, en virtud de su tamano y propiedades de superficie, deben permitir la circulation prolongada en la vasculatura y la acumulacion preferencial en el tejido a traves de la arquitectura defectuosa de los tejidos/tumores enfermos mediante el efecto de Permeation y Retention Mejoradas.
Los tratamientos terapeuticos que ofrecen terapia de liberacion controlada tambien deben ser capaces de suministrar una cantidad efectiva de farmaco, lo que es una limitation conocida en algunos sistemas de suministro de nanopartlculas. Por ejemplo, puede ser un reto preparar sistemas de nanopartlculas que tengan una cantidad apropiada de farmaco asociada con cada nanoparticula, manteniendo al mismo tiempo el tamano de las nanopartlculas lo suficientemente pequeno para tener propiedades de suministro ventajosas.
Por consiguiente, existe una necesidad de agentes terapeuticos en nanopartlculas y metodos para fabricar tales nanopartlculas que sean capaces de proporcionar niveles terapeuticos del agente terapeutico para tratar enfermedades tales como cancer, al tiempo que reducen los efectos secundarios en el paciente.
El cancer (y otras enfermedades hiperproliferativas) se caracteriza por la proliferation celular no controlada. Esta perdida de la regulation normal de la proliferacion celular a menudo parece ocurrir como el resultado del dano genetico a las vias celulares que controlan el avance a traves del ciclo celular.
En los eucariotas, se considera que una cascada ordenada de fosforilacion proteica controla el ciclo celular. Se han identificado varias familias de proteinas quinasas que juegan papeles criticos en esta cascada. La actividad de muchas de estas quinasas se incrementa en los tumores humanos cuando se compara con el tejido normal. Esto puede ocurrir ya sea por niveles incrementados de expresion de la proteina (como resultado de la amplification genica, por ejemplo), o por cambios en la expresion de proteinas coactivadoras o inhibidoras.
Las aurora quinasas (Aurora-A, Aurora-B y Aurora-C) codifican quinasas de serina-treonina reguladas por el ciclo celular (resumidas en Adams et al., 2001, Trends in Cell Biology, 11(2): 49-54). Estas muestran un pico de expresion y la actividad de quinasa a traves de G2 y la mitosis y durante mucho tiempo ha sido implicado un papel de las aurora quinasas humanas en el cancer.
El inhibidor de Aurora quinasa conocido como AZD11152 (2-(etil(3-((4-((5-(2-((3-fluorofenil)amino)-2-oxoetil)-1H- pirazol-3-il)amino)quinazolin-7-il)oxi)propil)amino)etil dihidrogeno fosfato), que se describe a continuation, tambien conocido como barasertib, se describio por primera vez en la Solicitud de Patente Internacional WO2004/058781 (Ejemplo 39) y ha sido estudiado por AstraZeneca como un tratamiento potencial para diversos tipos de cancer. Sin embargo, existen retos practicos en la administration clinica de AZD1152 como una solution intravenosa administrada continuamente durante varios dias.
imagen1
Se sabe que AZD1152 se metaboliza in vivo en un compuesto conocido como AZD1152 hqpa (2-(3-((7-(3-(etil(2- hidroxietil)amino)propoxi)quinazolin-4-il)amino)-1H -pirazol-5-il)-N-(3-fluorofenil)acetamida), tambien descrito en el documento WO2004/058781. El AZD1152 hqpa es de hecho, en gran medida, la unidad estructural que ejerce el efecto biologico cuando se administra el AZD11152 mismo. Sin embargo, las composiciones farmaceuticas de
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AZD1152 hqpa, particularmente aquellas adecuadas para administracion comercial, no han sido previamente descritas o probadas especlficamente.
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En el documento WO2014/043625 se describen formulaciones en nanopartlculas que incluyen agentes terapeuticos basicos con un nitrogeno protonable. El documento US 2008/0045481 describe un cocristal de maleato de AZD1152.
Resumen
Se describen aqul nanopartlculas polimericas que incluyen AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo como agente terapeutico, y metodos para fabricar y usar tales nanopartlculas terapeuticas. La solicitud se refiere especlficamente a una nanopartlcula terapeutica que comprende 55 a 85 por ciento en peso de copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etileno) glicol, donde la nanopartlcula terapeutica comprende 10 a 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, 5 a 20 por ciento en peso de acido pamoico y 10 a 25 por ciento en peso de 2-(3-((7-(3- (etil(2-hidroxietil)amino)propoxi)quinazolin-4-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-N-(3-fluorofenil)acetamida ("AZD1152 hqpa"). Las referencias en el presente documento a “el” o a “un” "agente terapeutico" deben entenderse con el significado de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, a menos que el contexto dicte otra cosa.
En particular, el agente terapeutico es AZD1152 hqpa.
En un aspecto, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa, un pollmero adecuado y acido pamoico.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa, un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol y acido pamoico.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol y una mezcla de AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En otro aspecto se proporciona una nanopartlcula terapeutica que comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol y el producto obtenido mediante la interaccion de AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En un aspecto adicional se proporciona una nanopartlcula terapeutica que comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol y un par de iones hidrofobos formado entre AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 80 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 1 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 85 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por
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ciento en peso de AZD1152 hqpa.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 85 por ciento en peso de un copoilmero dibioque de poii(acido iactico)-poii(etiien)giicoi, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, y una mezcia de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 85 por ciento en peso de un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y ei producto obtenido por interaccion de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicionai se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 85 por ciento en peso de un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico.
En otro aspecto, ia nanopartlcuia terapeutica comprende un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa.
En otro aspecto se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y ei producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicionai se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende un copoilmero dibioque de poli(acido iactico)-poii(etiien)giicoi, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, y un par hidrofobo de iones formado entre aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico.
En otro aspecto, ia nanopartlcuia terapeutica comprende un copoilmero dibioque de poli(acido iacti co)-poii(etiien)giicoi (en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y ei acido poli(lactico) etiieno) giicoi tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi), aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 22 en peso de AZD 1152 hqpa.
En otro aspecto se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y ei copoilmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi) y ei producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicionai se proporciona una nanopartlcuia terapeutica que comprende un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y ei poli(acido lactico) poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi) y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico.
En otro aspecto, ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 76 por ciento en peso de un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 9 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptabie del mismo.
En aigunas reaiizaciones, ei copoilmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9. En otras reaiizaciones, ei copoilmero
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poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.75 a aproximadamente 0.85.
En ciertas realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol. En otras realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
En algunas realizaciones, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa de poli(etilen)glicol. En otras realizaciones, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
En ciertas realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero.
En algunas realizaciones, las nanopartlculas contempladas tienen un diametro hidrodinamico <200 nm, tal como 70140 nm.
En otras realizaciones, la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo al agente terapeutico es de aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 1.0:1, en donde el acido es acido pamoico.
En ciertas realizaciones, el acido sustancialmente hidrofobo y el agente terapeutico forman un par de iones hidrofobos en una nanopartlcula terapeutica contemplada. En otras realizaciones, el acido hidrofobo es acido pamoico.
En algunas realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico. En otras realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico. En otras realizaciones, las nanopartlculas contempladas comprenden de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico. Se entendera que la composition de cualquier formulation preferida puede ser un equilibrio de varios factores, incluyendo pero sin limitarse a:
una formulacion con carga de farmaco incrementada donde sea posible para minimizar el volumen de composicion farmaceutica que debe administrarse al paciente;
la formulacion que se puede conseguir reproducible y fiablemente en la fabrication a gran escala; la formulacion que optimiza el perfil de liberation del agente terapeutico a lo largo del tiempo; la formulacion que preferentemente se distribuye a sitios enfermos.
Un factor adicional puede ser una formulacion que tenga un efecto perjudicial reducido o mlnimo sobre la medula osea de un paciente despues de la dosificacion, como se ejemplifica en modelos animales en los Ejemplos mas adelante.
En cualquier formulacion preferida en particular, puede tomarse en consideration uno o mas de los factores anteriores.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcula que se puede obtener mediante cualquier procedimiento descrito o ejemplificado en el presente documento. En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcula obtenida mediante cualquier procedimiento descrito o ejemplificado en el presente documento. En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica sustancialmente como se describe en el presente documento.
En otro aspecto, se proporciona una composicion farmaceuticamente aceptable. La composicion farmaceuticamente aceptable comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas contempladas y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
En otro aspecto mas, un metodo para tratar el cancer (por ejemplo, incluyendo, pero no limitandose a, canceres hematologicos tales como leucemia mieloide aguda (AML) y linfoma difuso de celulas B grandes y canceres de tumores solidos tales como cancer colorrectal y cancer de pulmon) en un paciente que lo necesita. El metodo comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion que comprende nanopartlculas terapeuticas contempladas en el presente documento.
Breve description de los dibujos
La figura 1 es un diagrama de flujo para un proceso de emulsion para formar una nanopartlcula divulgada.
Las figuras 2A y 2B muestran diagramas de flujo para un proceso de emulsion divulgado.
La figura 3 representa un perfil de liberacion in vitro para formulaciones de nanopartlculas terapeuticas de control.
La figura 4 representa perfiles de liberacion in vitro para formulaciones de nanopartlculas de acido desoxicolico frente
a una formulacion terapeutica de nanopartlcuias de control.
La figura 5 representa perfiles de liberacion in vitro para una formulacion de nanopartlcuias de acido docusato frente a una formulacion terapeutica de nanopartlculas de control.
La figura 6 representa los resultados del modelo de xenoinjerto colorrectal humano SW620 en ratas desnudas hembra.
5 La figura 7 representa los resultados de un estudio de programacion de dosificacion con una formulacion en nanopartlculas de AZD11152 hqpa.
La figura 8 representa una comparacion de la concentration en plasma de nanopartlculas de AZD1152 hqpa frente a AZD1152 IV en un estudio de exposition in vivo.
La figura 9 representa perfiles de liberacion in vitro para una formulacion de nanopartlculas de acido pamoico frente a 10 una formulacion de nanopartlculas terapeuticas de control.
La figura 10 representa perfiles farmacocineticos comparativos para tres formulaciones de nanopartlculas.
La figura 11 representa una comparacion de los resultados de un estudio SW620.
La figura 12 muestra una comparacion adicional de los resultados de un estudio SW620.
La Figura 13 representa los efectos en la medula osea de ciertas formulaciones de nanopartlculas.
15 La figura 14 representa los efectos de la medula osea de ciertas formulaciones en nanopartlculas.
La figura 15 representa la actividad in vivo de las formulaciones G1 y G2 de nanopartlculas de AZD1152 y AZD1152 hqpa.
La figura 16 representa los efectos de las formulaciones G1 y G2 sobre la integridad de la medula osea.
La figura 17 representa una comparacion entre el control del tumor de la formulacion G1 y el de AZD1152 en ratones 20 portadores de tumores U2932.
La figura 18 representa una comparacion entre el control del tumor de la formulacion G1 y el de AZD1152 en ratones que llevan tumores primarios SC-61.
Las figuras 19 y 19a a 19e representan perfiles farmacocineticos comparativos para las formulaciones E a G.
La figura 20 representa la liberacion in vitro a 37°C de los lotes de formulacion G1 mostrados en el Ejemplo 11.
25 Descripcion detallada
Se describen aqul nanopartlculas polimericas que incluyen AZD1152 hqpa como un agente terapeutico, y metodos para fabricar y usar tales nanopartlculas terapeuticas. En algunas realizaciones, la inclusion (dopaje) de un acido sustancialmente hidrofobo (tal como un acido biliar u otros acidos adecuados como se describe aqul) en una nanopartlcula divulgada y/o incluida en un proceso de preparation de nanopartlculas puede dar como resultado 30 nanopartlculas que incluyen una carga mejorada del farmaco. Ademas, en ciertas realizaciones, las nanopartlculas que incluyen y/o se preparan en presencia del acido hidrofobo pueden presentar propiedades mejoradas de liberacion controlada. Por ejemplo, las nanopartlculas descritas pueden liberar mas lentamente el agente terapeutico en comparacion con las nanopartlculas preparadas en ausencia del acido hidrofobo.
Sin desear limitarse a ninguna teorla, se cree que las formulaciones de nanopartlculas descritas que incluyen un acido 35 hidrofobo (tal como acido pamoico) tienen propiedades de formulacion significativamente mejoradas (por ejemplo, carga de farmaco y/o perfil de liberacion) que pueden ocurrir mediante la formation de un par de iones hidrofobos (HIP), entre el acido sustancialmente hidrofobo y, por ejemplo, un grupo amina del agente terapeutico. Como se usa aqul, un HIP es un par de iones cargados de forma opuesta mantenidos juntos por atraccion Coulombica. Tambien sin querer limitarse por ninguna teorla, en algunas realizaciones, se puede usar un HIP para aumentar la hidrofobicidad 40 del agente terapeutico. En algunas realizaciones, un agente terapeutico con hidrofobicidad incrementada puede ser beneficioso para formulaciones de nanopartlculas y resultar en formacion de HIP lo que puede proporcionar una mayor solubilidad del agente terapeutico en disolventes organicos. La formacion de HIP, como se contempla aqul, puede dar como resultado nanopartlculas que tienen, por ejemplo, una carga aumentada de farmaco. Tambien puede producirse una liberacion mas lenta del agente terapeutico a partir de las nanopartlculas, por ejemplo en algunas realizaciones, 45 debido a una disminucion de la solubilidad del agente terapeutico en solution acuosa. Ademas, la complejacion del agente terapeutico con contraiones hidrofobos grandes puede retardar la difusion del agente terapeutico dentro de la matriz polimerica. Ventajosamente, la formacion de HIP se produce sin la necesidad de conjugation covalente del grupo hidrofobo con el agente terapeutico.
Sin desear limitarse por ninguna teorla, se cree que la resistencia del HIP puede afectar la carga del farmaco y la 50 velocidad de liberacion de las nanopartlculas contempladas. Por ejemplo, la intensidad del HIP puede aumentarse
5
10
15
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55
aumentando la magnitud de la diferencia entre el pKa del agente terapeutico y el pKa del acido hidrofobo, como se describe con mas detalle a continuacion. Tambien sin desear limitarse por ninguna teoria, se cree que las condiciones para la formacion de pares de iones pueden afectar la carga del farmaco y la velocidad de liberacion de las nanoparticulas contempladas.
Cualquiera que sea la naturaleza exacta de la interaccion (como se ha descrito anteriormente) entre AZD1152 hqpa y los acidos hidrofobos en las formulaciones descritas, las formulaciones preferidas son aquellas que comprenden un acido hidrofobo y que tienen una alta carga de farmaco (por ejemplo de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 por ciento en peso (% en peso) de AZD1152 hqpa, tal como aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso, o aproximadamente 15 a aproximadamente 20% en peso de AZD1152 hqpa) y un perfil de liberacion adecuado, como se discutira con mas detalle a continuacion. Adecuadamente, dichas formulaciones tambien tienen un impacto reducido en la medula osea en comparacion con otras formulaciones que comprenden AZD1152.
Las nanoparticulas descritas aqui incluyen uno, dos, tres o mas polimeros biocompatibles y/o biodegradables. Por ejemplo, una nanoparticula contemplada puede incluir aproximadamente 35 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 99.5 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 99 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 98 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 97 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 96 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 95 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 94 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 93 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 92 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 91 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 90 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 85 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 80 por ciento en peso y en algunas realizaciones de aproximadamente 65 a aproximadamente 85 por ciento en peso de uno o mas copolimeros de bloque que incluyen un polimero biodegradable y poli(etilenglicol) (PEG) y aproximadamente 0 a aproximadamente 50 por ciento en peso de un homopolimero biodegradable.
AZD1152 hqpa
Las nanoparticulas descritas incluyen AZD1152 hqpa (pKa1 = 5.7; pKa2 = 8.46) como un agente terapeutico. La referencia en el presente documento a un agente terapeutico debe entenderse como referencia a AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, pero particularmente AZD1152 hqpa, a menos que el contexto indique lo contrario.
En un primer aspecto de la invencion se proporciona una nanoparticula que comprende AZD1152 hqpa. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende el producto obtenido mediante la interaccion de AZD1152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende el producto obtenido mezclando AZD1152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende un par de iones hidrofobos entre AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En otro aspecto de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende AZD1152 hqpa en una nanoparticula. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una nanoparticula terapeutica que comprende el producto obtenido por la interaccion de AZD1152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una nanoparticula terapeutica que comprende el producto obtenido mezclando AZD11152 hqpa y acido pamoico. En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una nanoparticula terapeutica que comprende un par de iones hidrofobos entre AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En otro aspecto de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas que contienen AZD1152 hqpa como ingrediente activo. Dichas nanoparticulas contienen tambien adecuadamente un acido hidrofobo, tal como acido pamoico, mezclado con el AZD1152 hqpa en las nanoparticulas y contienen ademas un polimero adecuado tal como un copolimero 16/5 PLA-PEG.
En algunas realizaciones, las nanoparticulas descritas pueden incluir aproximadamente 0.2 a aproximadamente 35 por ciento en peso, aproximadamente 0.2 a aproximadamente 20 por ciento en peso, aproximadamente 0.2 a aproximadamente 10 por ciento en peso, aproximadamente 0.2 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 0.75 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 1 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 2 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 3 a aproximadamente 5 por ciento en peso, aproximadamente 1 a aproximadamente 20 por ciento en peso, aproximadamente 2 a aproximadamente 20 por ciento en peso, aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso, aproximadamente 1 a aproximadamente 15 por ciento
en peso, aproximadamente 2 a aproximadamente 15 por ciento en peso, aproximadamente 3 a aproximadamente 15 por ciento en peso, aproximadamente 4 a aproximadamente 15 por ciento en peso, aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso, aproximadamente 1 a aproximadamente 10 por ciento en peso, aproximadamente 2 a aproximadamente 10 por ciento en peso, aproximadamente 3 a aproximadamente 10 por ciento 5 en peso, aproximadamente 4 a aproximadamente 10 por ciento en peso, aproximadamente 5 a aproximadamente 10 por ciento en peso, aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso, aproximadamente 15 a aproximadamente 25, o aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico.
En aspectos particulares, las nanoparticulas descritas pueden incluir de aproximadamente 5 a aproximadamente 20, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 20, incluso mas preferiblemente de aproximadamente 10 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, o de aproximadamente 15 a aproximadamente 22
por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
Acido hidrofobo
En ciertas realizaciones, las nanoparticulas descritas comprenden un acido hidrofobo que es acido pamoico y/o se preparan mediante un proceso que incluye un acido hidrofobo. Tales nanoparticulas pueden tener una carga de 15 farmaco mas alta que las nanoparticulas preparadas mediante un proceso sin un acido hidrofobo. Por ejemplo, la carga de farmaco (por ejemplo, en peso) de las nanoparticulas descritas preparadas mediante un procedimiento que comprende el acido hidrofobo puede estar entre aproximadamente 2 veces hasta aproximadamente 10 veces superior, o incluso mas, que las nanoparticulas descritas preparadas mediante un procedimiento sin el acido hidrofobo. En algunas realizaciones, la carga de farmaco (en peso) de las nanoparticulas descritas preparadas mediante un primer 20 procedimiento que comprende el acido hidrofobo puede ser al menos aproximadamente 2 veces mayor, al menos aproximadamente 3 veces mayor, al menos aproximadamente 4 veces mayor, al menos aproximadamente 5 veces superior, o al menos aproximadamente 10 veces mayor que las nanoparticulas descritas preparadas mediante un segundo procedimiento, en el que el segundo proceso es identico al primer proceso, excepto que el segundo proceso no incluye el acido hidrofobo.
25 En otro aspecto, el acido hidrofobo es acido pamoico.
En una realizacion, la diferencia entre el pKa del acido hidrofobo y el primer pKa de AZD1152 hqpa esta entre 2 y 5 unidades pKa, determinados a 25°C.
Para evitar dudas, el acido pamoico (acido 4,4'-metilenbis[3-hidroxi-2-naftoico]) tiene un peso molecular de 388.37 y se informa (SciFinder) que tiene pka1=2.67 y log P=6.199.
30 En algunos casos, la concentracion de acido en una solucion de farmaco (la solucion de agente terapeutico) puede estar entre aproximadamente 1 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 2 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 3 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 4 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
35 entre aproximadamente 5 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 8 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 10 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 12 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
40 entre aproximadamente 14 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 16 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones
entre aproximadamente 1 por ciento en peso y aproximadamente 5 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 por ciento en peso y aproximadamente 9 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre
aproximadamente 6 por ciento en peso y aproximadamente 12 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre
45 aproximadamente 9 por ciento en peso y aproximadamente 15 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre
aproximadamente 12 por ciento en peso y aproximadamente 18 por ciento en peso, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 15 por ciento en peso y aproximadamente 21 por ciento en peso. En ciertas realizaciones, la concentracion de acido hidrofobo en una solucion de farmaco puede ser al menos aproximadamente 1 por ciento en peso, en algunas realizaciones al menos aproximadamente 2 por ciento en peso, en algunas realizaciones al menos 50 aproximadamente 3 por ciento en peso, en algunas realizaciones por lo menos aproximadamente 5 peso, en algunas realizaciones al menos aproximadamente 10 por ciento en peso, en algunas realizaciones al menos aproximadamente 15 por ciento en peso, y en algunas realizaciones al menos aproximadamente 20 por ciento en peso.
En ciertas realizaciones, la relacion molar de acido hidrofobo a agente terapeutico (por ejemplo, inicialmente durante la formulacion de las nanoparticulas y/o en las nanoparticulas) puede estar entre aproximadamente 0.25:1 a 55 aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 a aproximadamente 5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 a aproximadamente 4:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 a aproximadamente 3:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 a aproximadamente 2:1, en algunos realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 y aproximadamente 1.5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.25:1 y aproximadamente 1:1, en algunas realizaciones entre
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15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
aproximadamente 0.25:1 y aproximadamente 0.5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 y aproximadamente 5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 y aproximadamente 4:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 3:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 2:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 1.5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 1:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 0.75:1, algunas realizaciones entre aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 2:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 1.5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 1.25:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.75:1 y aproximadamente 1:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 a aproximadamente 5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 a 4:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 a aproximadamente 3:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 a aproximadamente 2:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1.5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1.5:1 y aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1.5:1 y aproximadamente 5:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1.5:1 a aproximadamente 4:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1.5:1 a aproximadamente 3:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 2:1 a aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 2:1 a aproximadamente 4:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3:1 a aproximadamente 6:1, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3:1 a aproximadamente 5:1, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 4:1 y aproximadamente 6:1. En algunas realizaciones, la relacion es de aproximadamente 2:1.
En otras realizaciones, la relacion molar de acido hidrofobo a AZD1152 hqpa durante la formacion de las nanopartlculas (cuando se mezclan primero juntas) es de aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 1:1, por ejemplo de aproximadamente 0.8:1 a aproximadamente 1:1. En una realizacion, el acido hidrofobo es acido pamoico y la relacion molar de acido pamoico a AZD1152 hqpa durante la formacion de las nanopartlculas (cuando se mezclan primero entre si) es de aproximadamente 0.75:1 a aproximadamente 1:1, por ejemplo aproximadamente 0.8:1 a aproximadamente 1:1. Esta realizacion se ilustra en los ejemplos 7, 7a y 7b del presente documento descriptiva. En una realizacion, la relacion molar de acido pamoico a AZD1152 hqpa cuando se mezclan primero es de aproximadamente 0.8:1. Esta realizacion se ilustra en el Ejemplo 7 y 7b. En una realizacion, la relacion molar de acido pamoico a AZD1152 hqpa cuando se mezclan primero es de aproximadamente 1:1, esto se ilustra en el Ejemplo 7a.
En algunos casos, la relacion molar inicial del acido hidrofobo al agente terapeutico (durante la formulacion de las nanopartlculas) puede ser diferente de la relacion molar del acido hidrofobo al agente terapeutico en las nanopartlculas (despues de la eliminacion del acido hidrofobo no encapsulado y del agente terapeutico). En otros casos, la relacion molar inicial del acido hidrofobo al agente terapeutico (durante la formulacion de las nanopartlculas) puede ser esencialmente la misma que la relacion molar del acido hidrofobo al agente terapeutico en las nanopartlculas (despues de la eliminacion del acido hidrofobo no encapsulado y del agente terapeutico). Por ejemplo, en las formulaciones a las que se hace referencia en este documento como G1, ilustradas por los Ejemplos 7 y 7b, la relacion molar de entrada de acido pamoico a AZD1152 hqpa es de aproximadamente 0.8:1 pero la relacion molar final en el G1 ejemplificado es aproximadamente 0.76:1 y los lotes tlpicos de formulaciones G1 estan entre aproximadamente 0.650.75:1. De forma similar, la relacion de entrada para G2 en el Ejemplo 7a es aproximadamente 1:1 y la relacion molar final como se ejemplifica es aproximadamente 0.87:1, estando los lotes tlpicos comprendidos entre aproximadamente 0.85-0.95:1.
En algunos casos, una solucion que contiene el agente terapeutico se puede preparar separadamente a partir de una solucion que contiene el pollmero, y las dos soluciones pueden combinarse entonces antes de la formulacion de nanopartlculas. Por ejemplo, en una realizacion, una primera solucion contiene el agente terapeutico y el acido hidrofobo, y una segunda solucion contiene el pollmero y opcionalmente el acido hidrofobo. Las formulaciones en las que la segunda solucion no contiene el acido hidrofobo pueden ser ventajosas, por ejemplo, para minimizar la cantidad de acido hidrofobo utilizada en un proceso o, en algunos casos, para minimizar el tiempo de contacto entre el acido hidrofobo y, por ejemplo, un pollmero que puede degradarse en presencia del acido hidrofobo. En otros casos, se puede preparar una unica solucion que contiene el agente terapeutico, el pollmero y el acido hidrofobo.
En algunas realizaciones, puede formarse un par de iones hidrofobos antes de la formulacion de las nanopartlculas. Por ejemplo, una solucion que contiene un par de iones hidrofobos puede prepararse antes de formular las nanopartlculas contempladas (por ejemplo, preparando una solucion que contiene cantidades adecuadas del agente terapeutico y del acido hidrofobo). En otras realizaciones, puede formarse un par de iones hidrofobos durante la formulacion de las nanopartlculas. Por ejemplo, una primera solucion que contiene el agente terapeutico y una segunda solucion que contiene el acido hidrofobo pueden combinarse durante una etapa del procedimiento para preparar las nanopartlculas (por ejemplo, antes de la formacion de la emulsion y/o durante la formacion de la emulsion). En ciertas realizaciones, puede formarse un par de iones hidrofobos antes de la encapsulacion del agente terapeutico y del acido hidrofobo en una nanopartlcula contemplada. En otras realizaciones, puede formarse un par de iones hidrofobos en la nanopartlcula, por ejemplo, despues de la encapsulacion del agente terapeutico y del acido hidrofobo.
En algunas realizaciones, el contenido de acido en las nanopartlculas descritas puede estar entre aproximadamente 0.05 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.5 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 2 por 5 ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 5 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 7 por ciento peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 10 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 15 por ciento en 10 peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 20 por ciento en peso a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.05 por ciento en peso a aproximadamente 0.5 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.05 por ciento en peso a aproximadamente 5 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 1 por ciento en peso a aproximadamente 5 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 por ciento en peso a 15 aproximadamente 10 por ciento en peso, en algunas realizaciones entre aproximadamente 5 por ciento en peso a aproximadamente 15 por ciento en peso, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 10 por ciento en peso a aproximadamente 20 por ciento en peso.
Perfil de liberacion
En algunas realizaciones, las nanopartlculas reveladas liberan sustancialmente inmediatamente (por ejemplo, durante 20 aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 25 minutos, aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 1 hora, aproximadamente 1 hora, o aproximadamente 24 horas) menos de aproximadamente 2%, menos de aproximadamente 5%, menos de aproximadamente 10%, menos de aproximadamente 15%, menos de aproximadamente 20%, menos de aproximadamente 25%, menos de aproximadamente 30%, o menos del 40% del 25 agente terapeutico, por ejemplo cuando se coloca en una solucion reguladora de fosfato a temperatura ambiente (por ejemplo, 25°C) y/o a 37°C. En ciertas realizaciones, las nanopartlculas que comprenden el agente terapeutico pueden liberar el agente terapeutico cuando se colocan en una solucion acuosa (por ejemplo, una solucion reguladora de fosfato), por ejemplo, a 25°C y/o a 37°C, a una velocidad que corresponde sustancialmente a aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50%, en algunas realizaciones de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 25%, en algunas 30 realizaciones de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 15%, en algunas realizaciones de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10%, en algunas realizaciones de aproximadamente 1 a aproximadamente 40%, en algunas realizaciones alrededor de 5 a aproximadamente 40%, y en algunas realizaciones aproximadamente 10 a aproximadamente 40% del agente terapeutico liberado durante aproximadamente 1 hora. En algunas realizaciones, las nanopartlculas que comprenden el agente terapeutico pueden liberar el agente terapeutico cuando se colocan en 35 una solucion acuosa (por ejemplo, una solucion reguladora de fosfato), por ejemplo, a 25°C y/o a 37°C, a una velocidad que corresponde sustancialmente a aproximadamente 10 a aproximadamente 70%, en algunas realizaciones de aproximadamente 10 a aproximadamente 45%, en algunas realizaciones de aproximadamente 10 a aproximadamente 35%, o en algunas realizaciones de aproximadamente 10 a aproximadamente 25%, del agente terapeutico liberado durante aproximadamente 4 horas.
40 En algunas realizaciones, las nanopartlculas descritas pueden conservar sustancialmente el agente terapeutico, por ejemplo, durante al menos aproximadamente 1 minuto, al menos aproximadamente 1 hora o mas, cuando se colocan en una solucion reguladora de fosfato a 37°C.
En algunas realizaciones, una nanopartlcula terapeutica contemplada retiene sustancialmente la AZD1152 hqpa durante al menos 1 minuto cuando se coloca en una solucion reguladora de fosfato a 37°C.
45 En algunas realizaciones, una nanopartlcula terapeutica contemplada libera sustancialmente inmediatamente menos de aproximadamente 30% de la AZD1152 hqpa cuando se coloca en una solucion reguladora de fosfato a 37°C.
En algunas realizaciones, una nanopartlcula terapeutica contemplada libera aproximadamente 10 a aproximadamente 45% de la AZD1152 hqpa durante aproximadamente 1 hora cuando se coloca en una solucion reguladora de fosfato a 37°C.
50 Los perfiles de liberacion in vitro para las nanopartlculas contempladas se pueden medir de la siguiente manera:
La liberacion se calculo dividiendo la cantidad de AZD1152 hqpa liberada de la nanopartlcula en el medio de liberacion por la cantidad total de AZD1152 hqpa. Con el fin de obtener estos dos valores, se introdujo una cantidad especlfica de nanopartlcula en un contenedor cerrado que contenla medio de liberacion (solucion de regulador fosfato (PBS) que contenla polisorbato 20 para asegurar las condiciones del sumidero) y se incubo en un bano de agua a 37°C. A cada 55 punto de tiempo establecido, se tomaron dos muestras. La primera, utilizada para dar el valor de hqpa AZD1152 total, se tomo del recipiente y se preparo para HPLC. La segunda muestra, usada para dar la AZD1152 hqpa liberada en el momento del tiempo, se tomo y se sedimento en una ultracentrlfuga dejando solo AZD 1152 hqpa liberado en la suspension (o sobrenadante) que luego se muestreo y se preparo para HpLC. En el Ejemplo 10 se da un metodo de HPLC adecuado.
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Se ensayaron nueve lotes de cada formulaciones G1 y G2, con composiciones cuantitativas similares a las mostradas en el Ejemplo 7-7b, y en particular con formulaciones G1 que tienen una relacion molar de acido pamoico: AZD1152 hqpa en el intervalo de aproximadamente 0.65-0.75:1 y G2 que tienen una relacion molar de aproximadamente 0.850.95:1. Los datos a continuacion muestran los valores medios de liberation durante 72 horas.
Perfiles de liberacion in vitro a 37°C
Formulation G1
0 4 24 48 72 Tiempo (hr)
G1 Liberacion media
0.808 3.182 7.708 13.808 23.075 %
Un estandar
Desviacion
0.327 0.696 1.259 2.436 3.390 %
Formulacion G2
0 4 24 48 72 Tiempo (hr)
G2 Liberacion media
1.558 13.713 32.107 50.637 67.257 %
Un estandar
Desviacion
0.816 9.481 12.896 9.916 7.720 %
En un aspecto, una nanopartlcula terapeutica contemplada que comprende 16-5 copollmero de PLA-PEG, acido pamoico y AZD1152 hqpa libera menos del 20% de AZD1152 hqpa despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otro aspecto, una nanopartlcula terapeutica contemplada que comprende 16-5 copollmero de PLA-PEG, acido pamoico y AZD1152 hqpa libera menos del 20% de AZD1152 hqpa despues de 40 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otro aspecto, una nanopartlcula terapeutica contemplada que comprende 16-5 copollmero de PLA- PEG, acido pamoico y AZD1152 hqpa libera menos del 20% de AZD1152 hqpa despues de 50 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otro aspecto, una nanopartlcula terapeutica contemplada que comprende 16-5 copollmero de PLA-PEG, acido pamoico y AZD11152 hqpa libera aproximadamente 10% de AZD11152 hqpa despues de 24 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En estos aspectos, convenientemente, la liberacion se mide por el metodo anterior.
En un aspecto, las nanopartlculas terapeuticas liberan el AZD1152 hqpa in vivo a una velocidad tal que menos del 40% se ha liberado 24 horas despues de la dosificacion. En otro aspecto, las nanopartlculas terapeuticas liberan el AZD1152 hqpa in vivo a una velocidad tal que menos del 30% se ha liberado 24 horas despues de la dosificacion. En un aspecto, las nanopartlculas terapeuticas liberan la AZD1152 hqpa in vivo a una velocidad tal que el 25-35% se ha liberado 24 horas despues de la dosificacion. En otro aspecto, las nanopartlculas terapeuticas liberan el AZD1152 hqpa in vivo a una velocidad tal que se ha liberado menos del 15% 24 horas despues de la dosificacion.
En general, una "nanopartlcula" se refiere a cualquier partlcula que tenga un diametro de menos de 1000 nm, por ejemplo, de aproximadamente 10 nm a aproximadamente 200 nm. Las nanopartlculas terapeuticas divulgadas pueden
incluir nanopartlculas
que tienen un diametro de aproximadamente 60 a aproximadamente 120 nm, o
aproximadamente
70 a aproximadamente 120 nm, o aproximadamente 80 a aproximadamente 120 nm, o
aproximadamente
90 a aproximadamente 120 nm, o aproximadamente 100 a aproximadamente 120 nm, o
aproximadamente
60 a aproximadamente 130 nm, o aproximadamente 70 a aproximadamente 130 nm, o
aproximadamente
80 a aproximadamente 130 nm, o aproximadamente 90 a aproximadamente 130 nm, o
aproximadamente
100 a aproximadamente 130 nm, o aproximadamente 110 a aproximadamente 130 nm, o
aproximadamente
60 a aproximadamente 140 nm, o aproximadamente 70 a aproximadamente 140 nm, o
aproximadamente
80 a aproximadamente 140 nm, o aproximadamente 90 a aproximadamente 140 nm, o
aproximadamente
100 a aproximadamente 140 nm, o aproximadamente 110 a aproximadamente 140 nm, o
aproximadamente
60 a aproximadamente 150 nm, o aproximadamente 70 a aproximadamente 150 nm, o
aproximadamente
80 a aproximadamente 150 nm, o aproximadamente 90 a aproximadamente 150 nm, o
aproximadamente
100 a aproximadamente 150 nm, o aproximadamente 110 a aproximadamente 150 nm, o
aproximadamente 120 a aproximadamente 150 nm.
En algunas realizaciones, el diametro hidrodinamico de una nanopartlcula terapeutica contemplada es de aproximadamente 60 a aproximadamente 150 nm, o de aproximadamente 90 a aproximadamente 140 nm, o de aproximadamente 90 a aproximadamente 120 nm. En un aspecto adicional, el diametro hidrodinamico de una nanopartlcula terapeutica contemplada es de aproximadamente 90 a aproximadamente 110 nm, por ejemplo cuando las nanopartlculas terapeuticas comprenden un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado entre acido
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desoxicolico, acido colico, acido dioctilsulfosuccinico, acido pamoico o mezclas de los mismos.
En una realizacion, las nanopartlculas descritas se forman con AZD1152 hqpa y acido pamoico, y tienen un diametro hidrodinamico <500 nm, tal como <200 nm, por ejemplo 70-140 nm.
Pollmeros
En algunas realizaciones, las nanopartlculas pueden comprender una matriz polimerica y el agente terapeutico. En algunas realizaciones, el agente terapeutico puede estar asociado con al menos parte de la matriz polimerica. El agente terapeutico puede estar asociado con la superficie de, encapsulado dentro, rodeado por, y/o dispersado a traves de la matriz polimerica.
Se puede usar cualquier pollmero adecuado en las nanopartlculas descritas. Los pollmeros pueden ser pollmeros naturales o no naturales (sinteticos). Los pollmeros pueden ser homopollmeros o copollmeros que comprenden dos o mas monomeros. En terminos de secuencia, los copollmeros pueden ser aleatorios, bloquear o comprender una combinacion de secuencias aleatorias y de bloques. Tlpicamente, los pollmeros son pollmeros organicos.
El termino "pollmero", tal como se utiliza aqul, recibe su significado ordinario tal como se utiliza en la tecnica, es decir, una estructura molecular que comprende una o mas unidades repetidas (monomeros), conectadas por enlaces covalentes. Las unidades de repeticion pueden ser todas identicas, o en algunos casos, puede haber mas de un tipo de unidad de repeticion presente dentro del pollmero. En algunos casos, el pollmero puede derivarse biologicamente (un biopollmero). Ejemplos no limitativos incluyen peptidos o protelnas. En algunos casos, pueden estar presentes tambien restos adicionales en el pollmero, por ejemplo restos biologicos tales como los descritos mas adelante. Si mas de un tipo de unidad de repeticion esta presente dentro del pollmero, entonces se dice que el pollmero es un "copollmero". Debe entenderse que en cualquier realizacion que emplea un pollmero, el pollmero que se emplea puede ser un copollmero en algunos casos. Las unidades de repeticion que forman el copollmero pueden estar dispuestas de cualquier manera. Por ejemplo, las unidades de repeticion pueden estar dispuestas en un orden aleatorio, en un orden alternativo, o como un copollmero de bloques, es decir, que comprende una o mas regiones que comprenden cada una primera unidad de repeticion (por ejemplo, un primer bloque) y una o mas regiones que comprenden cada una segunda unidad de repeticion (por ejemplo, un segundo bloque), etc. Los copollmeros de bloques pueden tener dos (un copollmero dibloque), tres (un copollmero tribloque) o mas numeros de bloques distintos.
Las partlculas divulgadas pueden incluir copollmeros que, en algunas realizaciones, describen dos o mas pollmeros (tales como los descritos aqul) que se han asociado entre si, usualmente por union covalente de los dos o mas pollmeros juntos. De este modo, un copollmero puede comprender un primer pollmero y un segundo pollmero que se han conjugado entre si para formar un copollmero de bloques en el que el primer pollmero puede ser un primer bloque del copollmero de bloques y el segundo pollmero puede ser un segundo bloque del copollmero de bloques. Naturalmente, los expertos en la tecnica comprenderan que un copollmero de bloques puede, en algunos casos, contener multiples bloques de pollmero, y que un "copollmero de bloques", tal como se utiliza en el presente documento, no esta limitado a solo copollmeros de bloques que tienen solamente un primer bloque individual y un solo segundo bloque. Por ejemplo, un copollmero de bloques puede comprender un primer bloque que comprende un primer pollmero, un segundo bloque que comprende un segundo pollmero y un tercer bloque que comprende un tercer pollmero o el primer pollmero, etc. En algunos casos, los copollmeros de bloque pueden contener cualquier numero de primeros bloques de un primer pollmero y segundos bloques de un segundo pollmero (y en ciertos casos, terceros bloques, cuartos bloques, etc.). Ademas, debe observarse que los copollmeros de bloques tambien pueden formarse, en algunos casos, a partir de otros copollmeros de bloques. Por ejemplo, se puede conjugar un primer copollmero de bloques con otro pollmero (que puede ser un homopollmero, un biopollmero, otro copollmero de bloques, etc.) para formar un nuevo copollmero de bloques que contiene multiples tipos de bloques y/o a otros restos (por ejemplo, a restos no polimericos).
En algunas realizaciones, el pollmero (por ejemplo un copollmero o un copollmero de bloques) puede ser anfifllico, es decir, tener una porcion hidrofila y una porcion hidrofoba, o una porcion relativamente hidrofila y una porcion relativamente hidrofoba. Un pollmero hidrofilo puede ser uno que atrae generalmente el agua y un pollmero hidrofobo puede ser uno que generalmente rechaza el agua. Se puede identificar un pollmero hidrofllico o hidrofobo, por ejemplo, preparando una muestra del pollmero y midiendo su angulo de contacto con agua (tlpicamente, un pollmero hidrofilo tendra un angulo de contacto de menos de 60°, mientras que un pollmero hidrofobo tendra un angulo de contacto mayor de aproximadamente 60°). En algunos casos, la hidrofilicidad de dos o mas pollmeros puede medirse entre si, es decir, un primer pollmero puede ser mas hidrofilo que un segundo pollmero. Por ejemplo, el primer pollmero puede tener un angulo de contacto menor que el segundo pollmero.
En un conjunto de realizaciones, un pollmero (tal como un copollmero o un copollmero de bloques) contemplado aqul incluye un pollmero biocompatible, que es un pollmero que tlpicamente no induce una respuesta adversa cuando se inserta o inyecta en un sujeto vivo, por ejemplo, sin inflamacion significativa y/o rechazo agudo del pollmero por el sistema inmune, por ejemplo a traves de una respuesta de celulas T. Por consiguiente, las partlculas terapeuticas contempladas en el presente documento pueden ser no inmunogenas. El termino no inmunogenico, como se usa en el presente documento, se refiere al factor de crecimiento endogeno en su estado natural que normalmente no provoca
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niveles unicos, o solo mlnimos, de anticuerpos circulantes, celulas T o celulas inmunes reactivas, y que normalmente no induce en el individuo una respuesta inmune contra si misma.
La biocompatibilidad se refiere tlpicamente al rechazo agudo de material por al menos una parte del sistema inmune - un material no biocompatible implantado en un sujeto provoca una respuesta inmune en el sujeto que puede ser lo suficientemente grave como para que el rechazo del material por el sistema inmune no puede ser controlado adecuadamente, y a menudo es de un grado tal que el material debe ser eliminado del sujeto. Una prueba simple para determinar la biocompatibilidad puede ser exponer un pollmero a las celulas in vitro; los pollmeros biocompatibles son pollmeros que tlpicamente no daran lugar a muerte celular significativa a concentraciones moderadas, por ejemplo, a concentraciones de 50 microgramos/106 celulas. Por ejemplo, un pollmero biocompatible puede causar menos de aproximadamente 20% de muerte celular cuando se expone a celulas tales como fibroblastos o celulas epiteliales, incluso si se fagocito o de otro modo se tomo de tales celulas. Ejemplos no limitativos de pollmeros biocompatibles que pueden ser utiles en diversas realizaciones incluyen polidioxanona (PDO), polihidroxialcanoato, polihidroxibutirato, poli(sebacato de glicerol), poliglicolida (acido poli(glicolico) (PGA), polilactida (acido poli(lactico) (PLA), poli(acido lactico) acido copoli(glicolico) (PLGA), policaprolactona, o copollmeros o derivados que incluyen estos y/o otros pollmeros.
En ciertas realizaciones, los pollmeros biocompatibles contemplados pueden ser biodegradables, de manera que el pollmero es capaz de degradarse, qulmicamente y/o biologicamente, dentro de un entorno fisiologico, tal como dentro del cuerpo. Como se usan en el presente documento, los pollmeros "biodegradables" son aquellos que, cuando se introducen en las celulas, se descomponen por la maquinaria celular (biologicamente degradables) y/o mediante un proceso qulmico, tal como hidrolisis (qulmicamente degradable) en componentes que las celulas pueden reutilizar o eliminar sin efecto toxico significativo sobre las celulas. En una realizacion, el pollmero biodegradable y sus subproductos de degradacion pueden ser biocompatibles.
Ademas, ciertas realizaciones pueden dirigirse a copollmeros que contienen poli(ester-eter)s, por ejemplo, pollmeros que tienen unidades repetidas unidas por enlaces ester (por ejemplo, enlaces R-C(O)-O-R') y enlaces eter (por ejemplo, enlaces R-O-R'). En algunas realizaciones, un pollmero biodegradable, tal como un pollmero hidrolizable, que contiene grupos acido carboxllico, puede conjugarse con unidades repetidas de poli(etilenglicol) para formar un poli(ester-eter). Un pollmero (por ejemplo, copollmero, por ejemplo, copollmero de bloques) que contiene unidades de repeticion de poli(etilenglicol) tambien puede denominarse pollmero "PEGilado".
Por ejemplo, un pollmero contemplado puede ser uno que se hidroliza espontaneamente tras la exposicion al agua (por ejemplo, dentro de un sujeto), o el pollmero puede degradarse tras la exposicion al calor (por ejemplo, a temperaturas de aproximadamente 37°C). La degradacion de un pollmero puede ocurrir a velocidades variables, dependiendo del pollmero o copollmero utilizado. Por ejemplo, la vida media del pollmero (el tiempo al que el 50% del pollmero puede degradarse en monomeros y/u otros restos no pollmeros) puede ser del orden de dlas, semanas, meses o anos, dependiendo de la pollmero. Los pollmeros pueden degradarse biologicamente, por ejemplo, mediante actividad enzimatica o maquinaria celular, en algunos casos, por ejemplo, a traves de la exposicion a una lisozima (por ejemplo, con un pH relativamente bajo). En algunos casos, los pollmeros pueden descomponerse en monomeros y/u otros restos no polimericos que las celulas pueden reutilizar o eliminar sin efecto toxico significativo sobre las celulas (por ejemplo, el polilactida puede hidrolizarse para formar acido lactico, el poliglicolido puede ser hidrolizado para formar acido glicolico, etc.).
En algunas realizaciones, los pollmeros pueden ser poliesteres, incluyendo copollmeros que comprenden unidades de acido lactico y acido glicolico, tales como poli(acido lactico-acido coglicolico) y poli(lactida-coglicolido), denominados colectivamente en el presente documento como "PLGA"; y homopollmeros que comprenden unidades de acido glicolico, denominadas en el presente documento como "PGA", y unidades de acido lactico, tales como acido poli-L-lactico, acido poli-D-lactico, acido poli-D,L-lactico, poli-L-lactida, poli-D-lactida y poli-D,L-lactida, denominados colectivamente en el presente documento "PLA". En algunas realizaciones, los poliesteres de ejemplo incluyen, por ejemplo, polihidroxiacidos; pollmeros y copollmeros PEGilados de lactida y glicolido (por ejemplo, PLA PEGilado, PGA PEGilado, PLGA PEGilado, y derivados de los mismos). En algunas realizaciones, los poliesteres incluyen, por ejemplo, polianhldridos, poli(orto ester) poli(ortoester) PEGilado, poli(caprolactona), poli(caprolactona) PEGilada, polilisina, polilisina PEGilada, poli(etilenimina), poli(etilenimina) PEGilada, poli(L-lactida-co-L-lisina), poli(ester de serina), poli(ester de 4-hidroxi-L-prolina), acido poli [a-(4-aminobutil)-L-glicolico], y sus derivados.
En algunas realizaciones, un pollmero puede ser PLGA. PLGA es un copollmero biocompatible y biodegradable de acido lactico y acido glicolico, y varias formas de PLGA se pueden caracterizar por la relacion de acido lactico:acido glicolico. El acido lactico puede ser acido L-lactico, acido D-lactico o acido D,L-lactico. La velocidad de degradacion de PLGA se puede ajustar alterando la relacion acido lactico-acido glicolico. En algunas realizaciones, el PLGA puede caracterizarse por una relacion de acido lactico:acido glicolico de aproximadamente 85:15, aproximadamente 75:25, aproximadamente 60:40, aproximadamente 50:50, aproximadamente 40:60, aproximadamente 25:75, o aproximadamente 15:85. En algunas realizaciones, la proporcion de acido lactico a monomeros de acido glicolico en el pollmero de la partlcula (por ejemplo, el copollmero de bloques PLGA o copollmero de bloques PLGA-PEG) puede seleccionarse para optimizar diversos parametros tales como absorcion de agua, liberacion de agente terapeutico y/o la cinetica de degradacion del pollmero puede ser optimizada.
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Se contempla que PEG puede ser terminado e incluir un grupo final. Por ejemplo, PEG puede terminar en un grupo hidroxilo, metoxi u otro alcoxilo, un grupo metilo u otro grupo alquilo, un grupo arilo, un acido carboxllico, una amina, una amida, un grupo acetilo, un grupo guanidino o un imidazol. Otros grupos terminales contemplados incluyen grupos azida, alquino, maleimida, aldehldo, hidrazida, hidroxilamina, alcoxiamina o tiol.
Los expertos en la tecnica conoceran metodos y tecnicas para PEGilar un pollmero, por ejemplo, usando EDC (clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) y NHS (N-hidroxisuccinimida) para hacer reaccionar un pollmero a un grupo PEG que termina en una amina, por tecnicas de polimerizacion de apertura de anillo (ROMP), o similares.
En una realizacion, el peso molecular (o, por ejemplo, la relacion de pesos moleculares de, por ejemplo, bloques diferentes de un copollmero) de los pollmeros puede optimizarse para un tratamiento efectiva como se describe aqul. Por ejemplo, el peso molecular de un pollmero puede influir en la velocidad de degradacion de partlculas (tal como cuando se puede ajustar el peso molecular de un pollmero biodegradable), solubilidad, absorcion de agua y cinetica de liberacion del farmaco. Por ejemplo, se puede ajustar el peso molecular del pollmero (o, por ejemplo, la relacion de pesos moleculares de, por ejemplo, bloques diferentes de un copollmero) de tal manera que la partlcula se biodegrade en el sujeto que se trata dentro de un perlodo razonable de tiempo (desde unas pocas horas a 1-2 semanas, 3-4 semanas, 5-6 semanas, 7-8 semanas, etc.).
Una partlcula descrita puede comprender, por ejemplo, un copollmero dibloque de PEG y PL(G)A, en el que por ejemplo, la porcion PEG puede tener un peso molecular medio numerico de aproximadamente 1.000-20.000, por ejemplo, aproximadamente 2.000-20.000, por ejemplo, aproximadamente 2 a aproximadamente 10.000, y la porcion PL(G)A puede tener un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5.000 a aproximadamente 20.000, o aproximadamente 5.000-100.000, por ejemplo, aproximadamente 20.000-70.000, por ejemplo, aproximadamente 15.000-50.000.
Por ejemplo, se describe aqul una nanopartlcula terapeutica de ejemplo que incluye aproximadamente 10 a aproximadamente 99 por ciento en peso de copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol o copollmero de acido poli(lactico)-copoli(glicolico)-poli(etilen)glicol, o aproximadamente 20 a aproximadamente 80 por ciento en peso, aproximadamente 40 a aproximadamente 80 por ciento en peso, o aproximadamente 30 a aproximadamente 50 por ciento en peso, o aproximadamente 70 a aproximadamente 90 por ciento en peso de copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol o copollmero de acido poli(lactico)-copoli(glicolico)-poli(etilen)glicol. Los copollmeros de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol a pueden incluir un numero de peso molecular medio de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 kDa, o de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 kDa de acido poli(lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 KDa a aproximadamente 6 kDa, o de aproximadamente 2 kDa a aproximadamente 10 kDa de poli(etilen)glicol.
En algunas realizaciones, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol puede tener una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.6 a aproximadamente 0.95, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.6 y aproximadamente 0.8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.7 y aproximadamente 0.8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.75 y aproximadamente 0.85, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.8 y aproximadamente 0.9, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.85 a aproximadamente 0.95. Debe entenderse que la fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) se puede calcular dividiendo el numero de peso molecular promedio del componente acido poli(lactico) del copollmero por la suma del numero de peso molecular promedio del acido poli(lactico) y el peso molecular medio numerico del componente poli(etilen)glicol.
En algunas realizaciones, una nanopartlcula terapeutica puede contener de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso, en algunas realizaciones aproximadamente 10 a aproximadamente 15 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 20 a aproximadamente 25 por ciento en peso, en algunas realizaciones de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso, o en algunas realizaciones de aproximadamente 25 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, donde el poli(etilen)glicol puede estar presente como un copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol, copollmero de acido poli(lactico)-co- poli(glicolico)-poli(etilen)glicol, u homopollmero de poli(etilen)glicol.
En un aspecto, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa de poli(etilen)glicol; por ejemplo, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
En un aspecto, el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9, tal como aproximadamente 0.75 a aproximadamente 0.85.
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En un aspecto, la nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol. En un aspecto adicional, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
En un aspecto adicional, la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero, por ejemplo aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 80 por ciento en peso de copollmero.
En un aspecto adicional, cuando el acido hidrofobo es acido pamoico, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 por ciento de copollmero (particularmente copollmero PLA-PEG, particularmente copollmero 16/5 PLA-PEG), tal como aproximadamente 65 a aproximadamente 75 por ciento de copollmero, donde el contenido de poli(etilen)glicol es de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de la nanopartlcula. Sin embargo, el experto en la materia comprendera que el porcentaje en peso de los pollmeros presentes en la nanopartlcula variara en cierta medida entre los lotes, ya que varla la cantidad de acido hidrofobo (tal como acido pamoico) y AZD1152 hqpa.
Preparacion de nanopartlculas
Otro aspecto de esta descripcion esta dirigido a sistemas y metodos para fabricar nanopartlculas descritas. En algunas realizaciones, se controlan las propiedades de las partlculas, utilizando dos o mas pollmeros diferentes (por ejemplo, copollmeros, por ejemplo, copollmeros de bloques) en diferentes proporciones y produciendo partlculas a partir de los pollmeros (por ejemplo, copollmeros, por ejemplo copollmeros de bloques). Por ejemplo, un pollmero (por ejemplo, copollmero, por ejemplo, copollmero de bloques) puede elegirse por su biocompatibilidad y/o su capacidad para controlar la inmunogenicidad de la partlcula resultante.
En algunas realizaciones, un disolvente usado en un proceso de preparacion de nanopartlculas (por ejemplo, un proceso de nanoprecipitacion o un proceso de nanoemulsion como se discute mas adelante) puede incluir un acido hidrofobo, que puede conferir propiedades ventajosas a las nanopartlculas preparadas usando el proceso. Como se discutio anteriormente, en algunos casos, el acido hidrofobo puede mejorar la carga de farmaco de las nanopartlculas descritas. Ademas, en algunos casos, las propiedades de liberacion controlada de las nanopartlculas descritas pueden mejorarse mediante el uso del acido hidrofobo. En algunos casos, el acido hidrofobo puede incluirse, por ejemplo, en una solucion organica o en una solucion acuosa utilizada en el procedimiento. En una realizacion, el acido hidrofobo se incorpora en una solucion acuosa en forma de una sal soluble en agua (tal como una sal sodica), por ejemplo como colato de sodio. En una realizacion, el farmaco se combina con una solucion organica y el acido hidrofobo y opcionalmente uno o mas pollmeros. La concentracion de acido hidrofobo en una solucion usada para disolver el farmaco se discute anteriormente y puede ser, por ejemplo, entre aproximadamente 1 por ciento en peso y aproximadamente 30 por ciento en peso, etc.
En un conjunto de realizaciones, las partlculas se forman proporcionando una solucion que comprende uno o mas pollmeros, y poniendo en contacto la solucion con un pollmero no disolvente para producir la partlcula. La solucion puede ser miscible o inmiscible con el pollmero no disolvente. Por ejemplo, un llquido miscible en agua tal como acetonitrilo puede contener los pollmeros, y se forman partlculas cuando el acetonitrilo se pone en contacto con agua, un pollmero no disolvente, por ejemplo, vertiendo el acetonitrilo en el agua a una velocidad controlada. El pollmero contenido dentro de la solucion, al entrar en contacto con el pollmero no disolvente, puede entonces precipitarse para formar partlculas tales como nanopartlculas. Se dice que dos llquidos son "inmiscibles" o no miscibles, entre si cuando uno no es soluble en el otro a un nivel de al menos 10% en peso a temperatura y presion ambiente. Tlpicamente, una solucion organica (por ejemplo, diclorometano, acetonitrilo, cloroformo, tetrahidrofurano, acetona, formamida, dimetilformamida, piridinas, dioxano, dimetilsulfoxido, etc.) y un llquido acuoso (por ejemplo, agua o agua que contiene sales disueltas u otras especies, celulas o medios biologicos, etanol, etc.) son inmiscibles entre si. Por ejemplo, la primera solucion se puede verter en la segunda solucion (a una velocidad o velocidad adecuadas). En algunos casos, pueden formarse partlculas tales como nanopartlculas cuando la primera solucion contacta con el segundo llquido inmiscible, por ejemplo, la precipitacion del pollmero al contacto hace que el pollmero forme nanopartlculas mientras que la primera solucion verter en el segundo llquido y, en algunos casos, por ejemplo, cuando la velocidad de introduccion se controla cuidadosamente y se mantiene a una velocidad relativamente lenta, pueden formarse nanopartlculas. El control de tal formacion de partlculas puede ser facilmente optimizado por un experto en la tecnica usando solamente experimentacion de rutina.
Las propiedades tales como la funcionalidad superficial, la carga superficial, el tamano, el potencial zeta Z), la hidrofobicidad, la capacidad para controlar la inmunogenicidad, y similares, pueden ser altamente controladas usando un procedimiento descrito. Por ejemplo, se puede sintetizar una biblioteca de partlculas y se puede cribar para identificar las partlculas que tienen una relacion particular de pollmeros que permite que las partlculas tengan una densidad especlfica de restos presentes en la superficie de la partlcula. Esto permite que se preparen partlculas que tengan una o mas propiedades especlficas, por ejemplo, un tamano especlfico y una densidad superficial especlfica de los restos, sin un esfuerzo indebido. Por consiguiente, ciertas realizaciones estan dirigidas a tecnicas de cribado usando tales bibliotecas, as! como cualquier partlcula identificada usando tales bibliotecas. Ademas, la identificacion puede ocurrir por cualquier metodo adecuado. Por ejemplo, la identificacion puede ser directa o indirecta, o proceder cuantitativa o cualitativamente.
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En otra realizacion, se proporciona un proceso de nanoemulsion, tal como el proceso representado en las figuras 1, 2A y 2B. Por ejemplo, el agente terapeutico, un acido hidrofobo, un primer pollmero (por ejemplo, un copollmero dibloque tal como PLA-PEG o PLGA-PEG) y un segundo pollmero opcional (por ejemplo, (PL(G)A-PEG o PLA) se puede combinar con una solucion organica para formar una primera fase organica. Esta primera fase puede incluir de aproximadamente 1 a aproximadamente 50% en peso de solidos, aproximadamente 5 a aproximadamente 50% en peso de solidos, aproximadamente 5 a aproximadamente 40% en peso de solidos, aproximadamente 1 a aproximadamente 15% en peso de solidos o aproximadamente 10 a aproximadamente 30% en peso de solidos La primera fase organica puede combinarse con una primera solucion acuosa para formar una segunda fase. La solucion organica puede incluir, por ejemplo, tolueno, metiletilcetona acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de etilo, alcohol isopropllico, acetato de isopropilo, dimetilformamida, cloruro de metileno, diclorometano, cloroformo, acetona, alcohol bencllico, Tween®80, Span®80, Brij®100 o similares y combinaciones de los mismos. La solucion organica tambien puede incluir dimetilsulfoxido (DMSO). En una realizacion, la fase organica puede incluir alcohol bencllico, acetato de etilo y combinaciones de los mismos. En otra realizacion, la fase organica puede incluir alcohol bencllico, acetato de etilo y DMSO. La segunda fase puede estar entre aproximadamente 0.1 y 50% en peso, entre aproximadamente 1 y 50% en peso, entre aproximadamente 5 y 40% en peso, o entre aproximadamente 1 y 15% en peso de solidos. La solucion acuosa puede ser agua, opcionalmente en combinacion con uno o mas de colato de sodio, docusato de sodio, acetato de etilo, acetato de polivinilo y alcohol bencllico. La solucion acuosa puede contener tambien DMSO y/o Brij®100 o similar. En algunas realizaciones, la solucion acuosa comprende Brij®100, alcohol bencllico y DMSO en agua. En algunas realizaciones, el pH de la fase acuosa se puede seleccionar con base en el pKa del agente terapeutico protonado y/o en el pKa del acido hidrofobo. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el agente terapeutico, cuando esta protonado, puede tener un primer pKa, el acido hidrofobo puede tener un segundo pKa y la fase acuosa puede tener un pH igual a una unidad pKa entre el primer pKa y el segundo pKa. En una realizacion particular, el pH de la fase acuosa puede ser igual a una unidad de pKa que es aproximadamente equidistante entre el primer pKa y el segundo pKa.
Por ejemplo, el aceite o la fase organica pueden utilizar un disolvente que es solo parcialmente miscible con el no disolvente (agua). Por lo tanto, cuando se mezcla a una relacion suficientemente baja y/o cuando se utiliza agua presaturada con los disolventes organicos, la fase organica (aceite) permanece llquida. La fase organica (aceite) puede emulsionarse en una solucion acuosa y, como gotitas llquidas, cortarse en nanopartlculas usando, por ejemplo, sistemas de dispersion de alta energla, tales como homogeneizadores o sonicadores. La parte acuosa de la emulsion, tambien conocida como "fase acuosa", puede ser una solucion tensioactiva que consiste en colato de sodio (o posiblemente docusato de sodio) y presaturada con acetato de etilo y alcohol bencllico. En algunos casos, la fase organica (por ejemplo, la primera fase organica) puede incluir el agente terapeutico. Adicionalmente, en ciertas realizaciones, la solucion acuosa (por ejemplo, la primera solucion acuosa) puede incluir el acido sustancialmente hidrofobo. En otras realizaciones, tanto el agente terapeutico como el acido sustancialmente hidrofobo pueden disolverse en la fase organica.
La emulsificacion de la segunda fase para formar una fase de emulsion se puede realizar, por ejemplo, en una o dos etapas de emulsion. Por ejemplo, se puede preparar una emulsion primaria, y luego emulsionar para formar una emulsion fina. La emulsion primaria puede formarse, por ejemplo, utilizando una mezcla simple, un homogeneizador de alta presion, un sonicador de sonda, una barra de agitacion o un homogeneizador de rotor de estator. La emulsion primaria puede formarse en una emulsion fina mediante el uso de, por ejemplo, un sonicador de sonda o un homogeneizador de alta presion, por ejemplo usando 1,2, 3 o mas pases a traves de un homogeneizador. Por ejemplo, cuando se usa un homogeneizador de alta presion, la presion utilizada puede ser de aproximadamente 30 a aproximadamente 60 psi, aproximadamente 40 a aproximadamente 50 psi, aproximadamente 1000 a aproximadamente 8000 psi, aproximadamente 2000 a aproximadamente 4000 psi, aproximadamente 4000 a aproximadamente 8000 psi , o aproximadamente 4000 a aproximadamente 5000 psi, por ejemplo, aproximadamente 2000, 2500, 4000 o 5000 psi. La presion utilizada puede ser de aproximadamente 5.000 a 20.000 psi, tal como 5.000 a 15.000 psi, tal como aproximadamente 8.000 a 15.000 psi, por ejemplo 8.000 a aproximadamente 12.000 psi. Los procedimientos ejemplificados en el presente documento utilizan aproximadamente 9.000 psi (veanse Ejemplos 7, 7a y 7b) y aproximadamente 11.000 psi (tal como el Ejemplo 1).
En algunos casos, pueden elegirse condiciones de emulsion fina, que pueden caracterizarse por una relacion de superficie a volumen muy alta de las gotitas en la emulsion, para maximizar la solubilidad del agente terapeutico y el acido hidrofobo y formar el HIP deseado. En ciertas realizaciones, bajo condiciones de emulsion fina, el equilibrado de los componentes disueltos puede ocurrir muy rapidamente y mas rapido que la solidificacion de las nanopartlculas. Por lo tanto, la seleccion de un HIP con base en, por ejemplo, la diferencia de pKa entre el agente terapeutico y el acido hidrofobo, o el ajuste de otros parametros tales como el pH de la emulsion fina y/o el pH de la solucion de enfriamiento, pueden tener un impacto significativo en la carga del farmaco y las propiedades de liberacion de las nanopartlculas, dictando, por ejemplo, la formacion de un HIP en la nanopartlcula en oposicion a la difusion del agente terapeutico y/o acido hidrofobo a partir de la nanopartlcula.
En algunas realizaciones, el agente terapeutico y el acido pamoico pueden combinarse en la segunda fase antes de emulsionar la segunda fase. En algunos casos, el agente terapeutico y el acido sustancialmente hidrofobo pueden formar un par de iones hidrofobos antes de emulsionar la segunda fase. En otras realizaciones, el agente terapeutico y el acido sustancialmente hidrofobo pueden formar un par de iones hidrofobos durante la emulsificacion de la segunda fase. Por ejemplo, el agente terapeutico y el acido sustancialmente hidrofobo pueden combinarse en la segunda fase
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sustancialmente simultaneamente con la emulsificacion de la segunda fase, por ejemplo, el agente terapeutico y el acido sustancialmente hidrofobo pueden disolverse en soluciones separadas (por ejemplo, dos soluciones sustancialmente inmiscibles), que luego se combinan durante la emulsion. En otro ejemplo, el agente terapeutico y el acido sustancialmente hidrofobo pueden disolverse en disoluciones miscibles separadas que luego se alimentan a la segunda fase durante la emulsificacion.
Puede ser necesaria la evaporacion o dilucion del disolvente para completar la extraccion del disolvente y solidificar las partlculas. Para un mejor control sobre la cinetica de extraccion y un proceso mas escalable, se puede usar una dilucion de disolvente mediante enfriamiento acuoso. Por ejemplo, la emulsion se puede diluir en agua frla hasta una concentracion suficiente para disolver todo el disolvente organico para formar una fase detenida. En algunas realizaciones, la detencion se puede realizar al menos parcialmente a una temperatura de aproximadamente 5°C o menos. Por ejemplo, el agua (u otra solucion de detencion) usada en la extincion puede estar a una temperatura que sea menor que la temperatura ambiente (por ejemplo, aproximadamente 0 a aproximadamente 10°C, o aproximadamente 0 a aproximadamente 5°C). Las soluciones tambien se pueden enfriar durante la detencion. En ciertas realizaciones, se puede escoger la detencion con un pH que sea ventajoso para enfriar la fase de emulsion, por ejemplo, mejorando las propiedades de las nanopartlculas, tal como el perfil de liberacion, o mejorando un parametro de nanopartlcula, tal como la carga de farmaco. El pH de la detencion se puede ajustar por titulacion acida o basica, por ejemplo, o mediante la seleccion apropiada de un regulador.
En algunas realizaciones, el pH de la detencion se puede seleccionar con base en el pKa del agente terapeutico protonado y/o en el pKa del acido hidrofobo. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el agente terapeutico, cuando esta protonado, puede tener un primer pKa, el acido hidrofobo puede tener un segundo pKa, y la fase de emulsion puede ser templada con una solucion acuosa que tiene un pH igual a una unidad pKa entre el primero pKa y el segundo pKa. En algunas realizaciones, la fase detenida resultante puede tener tambien un pH igual a una unidad pKa entre el primer pKa y el segundo pKa. En una realizacion particular, el pH puede ser igual a una unidad de pKa que es aproximadamente equidistante entre el primer pKa y el segundo pKa.
En algunas realizaciones, la detencion puede tener un pH entre aproximadamente 2 y aproximadamente 12, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 10, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 9, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4,2 y aproximadamente 4.8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 10, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 9, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7. En ciertas realizaciones, la detencion puede tener un pH de aproximadamente 4.5. En otras realizaciones, la detencion puede tener un pH de aproximadamente 6.5. Debe entenderse que el pH de una solucion reguladora puede variar en funcion de la temperatura. A menos que se especifique lo contrario, el pH de una solucion reguladora a la que se hace referencia en el presente documento es el pH a 23°C.
En algunas realizaciones, la detencion puede ser una solucion acuosa que comprende un agente regulador (una solucion reguladora). Se puede usar cualquier agente regulador adecuado. Ejemplos no limitativos de agentes reguladoras incluyen fosfato, citrato, acetato, borato, imidazol, MES (acido 4-morfolinoetanosulfonico), bis-tris(bis(2- hidroxietil)amino-tris(hidroximetil)metano), ADA (acido N-(2-acetamida)iminodiacetico), ACES (acido N-(2-acetamido)-
2- aminoetanosulfonico), PIPES (acido 1,4-piperazinodietanosulfonico), MOPSO (acido 3-morfolino-2- hidroxipropanosulfonico), bis-tris propano (1,3-bis[tris(hidroximetil)metilamino]propano), BES (acido N,N-bis(2- hidroxietil)-2-aminoetanosulfonico), MOPS (acido 3-(N-morfolino)propanosulfonico), TES (acido 2-[(2-hidroxi-1,1- bis(hidroximetil)etil)amino]etanosulfonico), HEPES (acido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanosulfonico), DIPSO (acido
3- (N,N-bis[2-hidroxietil]amino)-2-hidroxipropanosulfonico), MOBS (acido 4-(N-morfolino)butanosulfonico), TAPSO (acido 2-hidroxi-3-[tris(hidroximetil)metilamino]-1-propanosulfonico), Trizma (2-amino-2-(hidroximetil)-1,3- propanodiol), HEPPSO (4-(2-hidroxietil)piperazina-1-(2-hidroxipropanosulfonico acido fosforico), POPSO (acido piperazina-N,N'-bis(2-hidroxipropanosulfonico)), TEA (trietilamina), EPPS (acido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinapropanosulfonico), tricina (N-[tris(hidroximetil)metil]glicina), Gly-Gly (Diglicina), bicina (N,N-bis(2- hidroxietil)glicina), HEPBS (acido N-(2-hidroxietil)piperazina-N'-(4-butanosulfonico)), TAPS (acido N- [tris(hidroximetil)metil]-3-aminopropanosulfonico), AMPD (2-amino-2-metil-1,3-propanodiol), TABS (acido N-tris (hidroximetil)metil-4-aminobutanosulfonico), AMPSO (acido N-(1,1-dimetil-2-hidroxietil)-3-amino-2- hidroxipropanosulfonico), CHES (acido 2-(ciclohexilamino)etanosulfonico), CAPSO (acido 3-(ciclohexilamino)-2- hidroxi-1-propanosulfonico), AMP (alcohol p-aminobutoxido), CAPS (acido 3-(ciclohexilamino)-1-propanosulfonico), CABS (acido 4-(ciclohexilamino)-1-butanosulfonico) y combinaciones de los mismos. Debe entenderse que un regulador comprende un acido y una base en equilibrio (por ejemplo, un acido y una base conjugada y/o una base y un acido conjugado). Por lo tanto, debe entenderse ademas que, por brevedad, una solucion reguladora o agente regulador se puede denominar en el presente documento con el nombre de un acido libre (por ejemplo, acido fosforico) o su base conjugada (por ejemplo fosfato) o el nombre de una base libre (por ejemplo, imidazol) o su acido conjugado (por ejemplo, imidazolio), pero que un experto en la tecnica entenderla que existe un equilibrio entre dos o mas especies de protonacion diferentes del agente regulador (por ejemplo H3PO4, H2PO4-, HPO42' y PO43'). En algunas
realizaciones, la detencion puede comprender dos o mas agentes amortiguadores. Por ejemplo, la detencion puede comprender dos, tres, cuatro o cinco agentes regulador. En algunas realizaciones, la detencion puede comprender una mezcla de fosfato y citrato. En otras realizaciones, la detencion puede comprender una mezcla de borato, fosfato y acetato (por ejemplo, regulador de Britton-Robbinson, que comprende 0.04 M de H3BO3, 0.04 M de H3PO4 y 0.04 M 5 de CH3COOH titulado a un pH deseado).
En algunas realizaciones, una solucion reguladora (una extincion) puede tener una capacidad reguladora adecuada dentro de un intervalo de pH particular. Los intervalos de pH no limitantes para soluciones regulador de ejemplo se proporcionan en la Tabla A siguiente. En ciertas realizaciones, una solucion reguladora puede tener una concentracion de agente regulador entre aproximadamente 0.001M y aproximadamente 1M, en algunas realizaciones entre 10 aproximadamente 0.001M y aproximadamente 0.5M, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.01M y aproximadamente 0.5M, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.05M y aproximadamente 0.5M, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.1M y aproximadamente 0.5M, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.01M y aproximadamente 0.2M, en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.05M y aproximadamente 0.15M, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 0.075M y aproximadamente 0.125M.
15 Tabla A. Intervalos de pH no limitantes para reguladores de ejemplo.
Agente regulador
Rango de pH
Fosfato
5.7-8.0
Citrato
3.0-6.2
Fosfato-Citrato
2.6-7.6
Acetato
3.7-5.6
Imidazol
6.2-7.8
Britton-Robbinson
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ADA
6.0-7.2
ACES
6.1-7.5
PIPES
6.1-7.5
MOPSO
6.2-7.6
Bis-tris Propano
6.3-9.5
BES
6.4-7.8
MOPS
6.5-7.9
TES
6.8-8.2
HEPES
6.8-8.2
DIPSO
7.0-8.2
MOBS
6.9-8.3
En algunas realizaciones, una detencion puede tener una concentracion de agente regulador suficiente para resistir
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un cambio sustancial de pH. Por ejemplo, una fase templada puede tener un pH que difiera del pH de la fase de emulsion en menos de 1 unidad de pH, en algunas realizaciones menos de 0.5 unidades de pH, en algunas realizaciones, menos de 0.2 unidades de pH, en algunas realizaciones menos de 0.1 unidades de pH, y en algunas realizaciones menos de 0.05 unidades de pH. En algunas realizaciones, el pH de la fase templada puede ser sustancialmente el mismo que el pH de la fase de emulsion (antes de la extincion).
En algunas realizaciones, la fase detenida puede tener un pH entre aproximadamente 2 y aproximadamente 12, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 10, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 9, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4.2 y aproximadamente 4.8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 10, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 9, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7. En ciertas realizaciones, la fase templada puede tener un pH de aproximadamente 4.6.
Una solucion reguladora (por ejemplo, una extincion) a un pH deseado puede prepararse facilmente por un experto en la tecnica. Por ejemplo, se puede preparar una solucion reguladora a un pH deseado titulando una solucion que contiene un agente regulador con un acido fuerte (por ejemplo, HCl) o una base fuerte (por ejemplo, NaOH). Alternativamente, una solucion reguladora a un pH deseado puede prepararse combinando un acido debil (por ejemplo acido cltrico) con su base conjugada (por ejemplo, citrato de sodio) o combinando una base debil (por ejemplo, imidazol) con su acido conjugado (por ejemplo, cloruro de imidazolio). Un experto en la materia puede determinar las cantidades de acido debil o base debil y el conjugado correspondiente para usar en la preparacion de una solucion reguladora usando la ecuacion de Henderson-Hasselbalch.
En un aspecto, la solucion de detencion es una solucion reguladora a pH 6.5 (tal como regulador fosfato de sodio 0.17 M). Convenientemente, la solucion de detencion se enfrla a <5°C antes de anadir la emulsion. Convenientemente, la mezcla de soluciones de enfriamiento y emulsion se enfrla mientras se mezclan entre si. En una realizacion, la relacion de la solucion de enfriamiento a la emulsion es de 10:1 (en peso). En otra realizacion, la relacion de la solucion de enfriamiento a la emulsion es de 3:1. En este aspecto y realizaciones, convenientemente el acido hidrofobo es acido pamoico.
En ciertas realizaciones, la formacion de HIP puede ocurrir durante o despues de la emulsificacion, por ejemplo, como resultado de las condiciones de equilibrio en la emulsion fina. Sin desear limitarse por ninguna teorla, se cree que los contraiones solubles organicamente (el acido hidrofobo) pueden facilitar la difusion del agente terapeutico en una nanopartlcula de una emulsion como resultado de la formacion de HIP. Sin desear limitarse por ninguna teorla, el HIP puede permanecer en la nanopartlcula antes de la solidificacion de la nanopartlcula ya que la solubilidad del HIP en la nanopartlcula es superior a la solubilidad del HIP en la fase acuosa de la emulsion y/o en la aplacar. Por ejemplo, seleccionando un pH para la detencion que esta entre el pKa del agente terapeutico y el pKa del acido hidrofobo, se puede optimizar la formacion de agente terapeutico ionizado y acido hidrofobo. Sin embargo, la seleccion de un pH que es demasiado alto puede tender a hacer que el acido hidrofobo se difunda fuera de la nanopartlcula, mientras que la seleccion de un pH que es demasiado bajo puede tender a hacer que el agente terapeutico se difunda fuera de la nanopartlcula.
En algunas realizaciones, el pH de una solucion acuosa usada en un proceso de formulacion de nanopartlculas (por ejemplo, incluyendo, pero sin limitacion, la fase acuosa, la fase de emulsion, la detencion y la fase detenida) puede seleccionarse independientemente y puede estar entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3, en algunas realizaciones entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4, en algunas realizaciones entre aproximadamente 3 y aproximadamente 5, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6, en algunas realizaciones entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 8, en algunas realizaciones entre aproximadamente 7 y aproximadamente 9 y en algunas realizaciones entre aproximadamente 8 y aproximadamente 10. En ciertas realizaciones, el pH de una solucion acuosa usada en un proceso de formulacion de nanopartlculas puede estar entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4, en algunas realizaciones entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5, en algunas realizaciones entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6, en algunas realizaciones entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7, en algunas realizaciones entre aproximadamente 7 y aproximadamente 8, y en algunas realizaciones entre aproximadamente 8 y aproximadamente 9.
La eficacia de encapsulacion conseguida (el porcentaje de ingrediente activo en la nanopartlcula en comparacion con el ingrediente activo total en el proceso) variara con los componentes exactos de la formulacion utilizada y los parametros de proceso detallados. Una alta eficiencia de encapsulacion es mas economica. En algunas realizaciones, no todo el agente terapeutico esta encapsulado en las partlculas en esta etapa, y se anade un solubilizante de farmaco a la fase detenida para formar una fase solubilizada. El solubilizante del farmaco puede ser, por ejemplo, Tween®80, Tween®20, polivinilpirrolidona, ciclodextrano, dodecilsulfato de sodio, colato de sodio, dietilnitrosamina, acetato de sodio, urea, glicerina, propilenglicol, glicofurol, poli(etilen)glicol, bris(polioxietilenglicol)dodecil eter, benzoato de sodio,
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salicilato de sodio, o combinaciones de los mismos. Por ejemplo, se puede anadir Tween®80 a la suspension de nanopartlcuias detenidas para solubilizar el farmaco libre y prevenir la formation de cristales de farmaco. En algunas realizaciones, una proportion de solubilizante de farmaco para el agente terapeutico es de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 10:1, o en algunas realizaciones de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 10:1 (en peso).
La fase solubilizada puede filtrarse para recuperar las nanopartlculas.
Por ejemplo, se pueden usar membranas de ultrafiltracion para concentrar la suspension de nanopartlculas y eliminar sustancialmente material extrano tal como disolvente organico, farmaco libre (es decir, agente terapeutico no encapsulado), solubilizante de farmaco y otros coadyuvantes de procesamiento (tensioactivos).
La filtration de ejemplo se puede realizar usando un sistema de filtration de flujo cruzado o flujo tangencial, en el que la alimentation se hace pasar a traves de la membrana de filtro (tangencialmente) a presion positiva con respecto al lado del permeado. Una proporcion del material extrano pasa a traves de la membrana como permeato o filtrado; todo lo demas se retiene en el lado de alimentacion de la membrana como retenido. Por ejemplo, mediante el uso de una membrana con un tamano de poro adecuado para retener nanopartlculas permitiendo el paso de solutos, micelas y disolvente organico, las nanopartlculas pueden separarse selectivamente. Se pueden usar membranas de ejemplo con llmites de peso molecular de aproximadamente 300-500 kDa (~5-25 nm).
En algunas realizaciones, la concentration del material extrano en el retenido se puede reducir "lavando" con agua, un proceso llamado diafiltracion. La cantidad de material extrano eliminado esta relacionada con el volumen de filtrado generado, con respecto al volumen de retenido. El volumen de filtrado generado se refiere usualmente en terminos de "volumenes de diafiltracion" o diavolumenes. Un diavolumen unico es el volumen de retenido cuando se inicia la diafiltracion.
La diafiltracion puede realizarse usando un enfoque de volumen constante, lo que significa que el diafiltrato (agua desionizada en frlo, por ejemplo, de aproximadamente 0 a aproximadamente 5°C, o de 0 a aproximadamente 10°C) puede anadirse a la suspension de alimentacion a la misma velocidad que el filtrado se elimina de la suspension. Cuando el volumen de filtrado recogido es igual al volumen de retenido inicial, se ha procesado 1 diavolumen.
En algunas realizaciones, la filtracion puede incluir una primera filtracion usando una primera temperatura de aproximadamente 0 a aproximadamente 5°C, o de 0 a aproximadamente 10°C, y una segunda temperatura de aproximadamente 20 a aproximadamente 30°C, o de 15 a aproximadamente 35°C. En algunas realizaciones, la filtracion puede incluir el procesamiento de aproximadamente 1 a aproximadamente 30, en algunos casos de aproximadamente 1 a aproximadamente 15, o en algunos casos de 1 a aproximadamente 6 diavolumenes. Por ejemplo, la filtracion puede incluir procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 30, o en algunos casos de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolumenes, de aproximadamente 0 a aproximadamente 5°C, y procesar al menos un diavolumen (por ejemplo, aproximadamente 1 a aproximadamente 15, aproximadamente 1 a aproximadamente 3, o aproximadamente 1 a aproximadamente 2 diavolumenes) a aproximadamente 20 a aproximadamente 30°C. En algunas realizaciones, el filtrado comprende procesar diavolumenes diferentes a diferentes temperaturas distintas.
En una realization, se utilizan aproximadamente 20 diavolumenes de agua desionizada frla. En otra realization, se utilizan aproximadamente 20 diavolumenes de agua desionizada a temperatura ambiente.
Despues de purificar y concentrar la suspension de nanopartlculas, las partlculas pueden pasar a traves de uno, dos o mas filtros de esterilizacion y/o profundidad, por ejemplo, utilizando un filtro previo de -0.2 pm de profundidad. Por ejemplo, una etapa de filtracion esteril puede implicar el filtrado de las nanopartlculas terapeuticas utilizando un tren de filtracion a una velocidad controlada. En algunas realizaciones, el tren de filtracion puede incluir un filtro de profundidad y un filtro esteril.
En otra realizacion de preparar nanopartlculas, se forma una fase organica compuesta por una mezcla del agente terapeutico (AZD1152 hqpa) y pollmero (homopollmero y copollmero). La fase organica se mezcla con una fase acuosa a una relation aproximadamente 1:5 (fase organica:fase acuosa) donde la fase acuosa esta compuesta por un tensioactivo y algun disolvente disuelto. La emulsion primaria se forma por la combination de las dos fases bajo simple mezcla o mediante el uso de un homogeneizador de rotor de estator. La emulsion primaria se forma a continuation en una emulsion fina mediante el uso de un homogeneizador de alta presion. La emulsion fina se enfrla despues por adicion a agua desionizada bajo mezcla. En algunas realizaciones, la relacion de detencion:emulsion puede ser de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 40:1, o en algunas realizaciones de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 15:1. En algunas realizaciones, la relacion de enfriamiento: emulsion es de aproximadamente 8.5:1. A continuacion, se anade una solution de Tween® (por ejemplo, Tween®80) al temple para conseguir aproximadamente un 2% de Tween® total. Esto sirve para disolver agente terapeutico libre, no encapsulado (es decir, AZD1152 hqpa). A continuacion, las nanopartlculas se alslan mediante centrifugation o ultrafiltracion/diafiltracion.
Se apreciara que las cantidades de pollmero, agente terapeutico (es decir, AZD1152 hqpa) y acido hidrofobo que se usan en la preparation de la formulation pueden diferir de una formulation final. Por ejemplo, algunas de las AZD1152 hqpa pueden no incorporarse completamente en una nanopartlcula y dicha AZD1152 hqpa libre puede ser, por ejemplo, separada por filtracion. Por ejemplo, en una realizacion, una primera solucion organica que contiene
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aproximadamente 11 por ciento en peso de carga teorica de AZD 1152 hqpa en una primera solucion organica que contiene aproximadamente 9% de un primer acido hidrofobo (por ejemplo, un acido graso), una segunda solucion organica que contiene aproximadamente 89 por ciento en peso de pollmero (por ejemplo, el pollmero puede incluir PLA-PEG), y una solucion acuosa que contiene aproximadamente 0.12% de un segundo acido hidrofobo (por ejemplo, un acido biliar) puede usarse en la preparacion de una formulacion que da como resultado, por ejemplo, una nanopartlcula final que comprende aproximadamente 2 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 97.5 por ciento en peso de pollmero y aproximadamente 0.5% de acido hidrofobo total. Tales procedimientos pueden proporcionar nanopartlculas finales adecuadas para la administracion a un paciente que incluye de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, por ejemplo, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 8, aproximadamente 10, o aproximadamente 15 por ciento de AZD1152 hqpa en peso.
En algunas realizaciones, la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 2 y aproximadamente 8, tal como entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7.
En otro aspecto, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica. El procedimiento comprende combinar una primera fase organica con una primera solucion acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase de emulsion, en la que la fase de emulsion comprende un primer pollmero, un agente terapeutico basico que es AZD1152 hqpa y un acido sustancialmente hidrofobo que es acido pamoico; detencion de la fase de emulsion formando de esta manera una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7.
En algunas realizaciones, el proceso comprende ademas filtrar la fase templada para recuperar las nanopartlculas terapeuticas.
En algunas realizaciones, el procedimiento comprende ademas combinar AZD1152 hqpa y el acido pamoico en la segunda fase antes de emulsionar la segunda fase. Por ejemplo, en algunas realizaciones, AZD1152 hqpa y el acido forman un par de iones hidrofobos antes de emulsionar la segunda fase. En otras realizaciones, AZD1152 hqpa y el acido forman un par de iones hidrofobos durante la emulsificacion de la segunda fase.
En algunas realizaciones, el procedimiento comprende ademas combinar AZD1152 hqpa y el acido en la segunda fase sustancialmente simultaneamente con la emulsificacion de la segunda fase. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la primera fase organica comprende AZD1152 hqpa y la primera solucion acuosa comprende el acido.
En otras realizaciones, la primera fase organica comprende el pollmero, AZD1152 hqpa y el acido sustancialmente hidrofobo.
En un aspecto, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende combinar una primera fase organica con una primera solucion acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase de emulsion, en la que la fase de emulsion comprende un primer pollmero, un
agente terapeutico basico que es AZD 1152 hqpa y acido pamoico; detencion de la fase de emulsion formando de
este modo una fase detenida. En este aspecto, preferentemente, la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7.
En otro aspecto, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende combinar una primera fase organica con una primera solucion acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase de emulsion, en la que la fase de emulsion comprende un primer pollmero, un
agente terapeutico basico que es AZD1152 hqpa y un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado entre acido
desoxicolico y acido dioctilsulfosucclnico; enfriamiento de la fase de emulsion formando de este modo una fase de detencion rapido, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7.
Convenientemente, la fase de emulsion se mantiene, por ejemplo por almacenamiento en hielo, durante un perlodo (tal como de 5 a 15 minutos) antes de detencion. En algunos aspectos, como se ha mencionado anteriormente, la emulsion se lleva a cabo en un proceso de dos etapas, con formacion de una emulsion gruesa previo a la formacion de una emulsion fina. En algunas realizaciones, se forma una emulsion gruesa y esta se puede mantener convenientemente, por ejemplo por almacenamiento en hielo, durante un perlodo (tal como de 5 a 15 minutos) antes de que se forme la emulsion fina. La emulsion fina en si misma, tambien puede almacenarse, por ejemplo a una temperatura de 0-5°C, en algunas realizaciones a aproximadamente 2°C, durante un perlodo de 1-15 minutos (en algunas realizaciones aproximadamente 1 minuto, en otras realizaciones aproximadamente 2 minutos, en otras realizaciones, no mas de 1 minuto, en aun otras realizaciones durante al menos 5 minutos) antes de la extincion.
Convenientemente, la detencion se lleva a cabo a temperatura reducida tal como a <5°C.
Adecuadamente, en los aspectos anteriores y en la realizacion, la primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tal
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como colato de sodio o eter estearliico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®) en agua y alcohol bencllico.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende combinar una primera fase organica con una primera solucion acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase de emulsion, en la que la fase de emulsion comprende un primer pollmero, un agente terapeutico basico que es AZD1152 hqpa y acido pamoico; mantener opcionalmente la fase de emulsion durante un tiempo de retencion (tal como de 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C); enfriamiento de la fase de emulsion formando de este modo una fase de detencion, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5), preferiblemente a <5°C. Adecuadamente, la primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tal como colato de sodio o eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en uno o mas disolventes) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo en agua) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion;
3) mantener opcionalmente la fase de emulsion durante un tiempo de retencion (tal como de 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C);
4) detener la fase de emulsion <5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
5) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Adecuadamente, la primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tal como colato de sodio o eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en uno o mas disolventes) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo en agua) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion <5°C formando de este modo una fase de detencion, en la que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Adecuadamente, la primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tal como colato de sodio o eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion;
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3) mantener opcionalmente la fase de emulsion durante un tiempo de retention convenientemente a aproximadamente 0°C);
4) detener la fase de emulsion a <5°C formando de este modo una fase de detention, de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solution aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
5) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtration.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentration y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relation molar de 1:3 y 1:4) con una primera solucion acuosa (que
(tal como de 5 a 15 minutos,
en el que la detencion de la fase acuosa que tiene un pH entre
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comprende un tensioactivo tal eter estearliico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®S100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion detenida antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH de 6.5;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35 por ciento en peso en agua) al enfriamiento a una proportion de aproximadamente 20:1 a 100:1 de Tween®80 a farmaco en peso;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relation molar entre 1:3 y 1:4) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5;
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7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante a la solucion enfriada;
8) concentrar y aislar las nanoparticulas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanoparticula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copolimero 16/5 de PLA-PEG, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bendlico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bendlico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearilico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bendlico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende regulador a pH 6.5;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante;
8) concentrar y aislar las nanoparticulas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanoparticula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copolimero 16/5 PLA-PEG, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bendlico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bendlico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearilico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bendlico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende regulador a pH 6.5;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante;
8) concentrar y aislar las nanoparticulas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanoparticula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copolimero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bendlico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bendlico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearilico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bendlico) para formar una segunda fase en la que la relacion
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de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 en la que la relacion de segunda solucion acuosa a emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo al enfriamiento;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo en la forma comercializada bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17 M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo en una proporcion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco en peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
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5) despues de aproximadamente 1 minuto, enfriamiento brusco de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, formando de este modo una fase de detencion, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5;
6) anadir a la solucion de enfriamiento una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% en peso en agua); a la solucion de detencion
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de aproximadamente 1 mol de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una proporcion molar de aproximadamente 1:3) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) despues de aproximadamente 1 minuto, enfriamiento brusco de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17 M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion es de aproximadamente 10:1;
6) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% en peso en agua) a la detencion a una relacion de aproximadamente 100:1 de Tween®80 al farmaco en peso;
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de aproximadamente 1 mol de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo esten presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa a una relacion inicial de 1 mol de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo comercializado con el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) despues de aproximadamente 1 minuto, detencion de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, formando de esta manera una fase detenida, en donde la extincion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 y en la que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion es de aproximadamente 10:1;
6) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% en peso en agua) a la extincion a una relacion de aproximadamente 100:1 de Tween®80 al farmaco en peso;
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
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En otros aspectos, se proporciona un procedimiento para preparar una nanopartlcuia terapeutica que comprende cualquiera de ios metodos especlficos expuestos en ios Ejempios en ei presente documento.
En aigunas reaiizaciones, AZD1152 hqpa, cuando se protona, tiene un primer pKa, ei acido tiene un segundo pKa y ia fase de emuision se enfrla con una soiucion acuosa que tiene un pH iguai a una unidad pKa entre ei primer pKa y ei segundo pKa. Por ejempio, en aigunos casos, ia fase detenida tiene un pH iguai a una unidad pKa entre ei primer pKa y ei segundo pKa. En aigunas reaiizaciones, AZD1152 hqpa, cuando se protona, tiene un primer pKa, ei acido tiene un segundo pKa y ia primera soiucion acuosa tiene un pH iguai a una unidad pKa entre ei primer pKa y ei segundo pKa. En aigunas reaiizaciones, ei pH (por ejempio, de ia fase detenida o primera soiucion acuosa) es iguai a una unidad pKa que es aproximadamente equidistante entre ei primer pKa y ei segundo pKa.
En otro aspecto mas, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica, en ia que ia nanopartlcuia terapeutica se prepara por emuisificacion de una mezcia que comprende un primer poilmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico, formando de este modo una fase de emuision; y extincion de ia fase de emuision formando de esta manera una fase de detention rapido que comprende una piuraiidad de nanopartlcuias terapeuticas.
En aigunas reaiizaciones, ia detencion de ia fase de emuision comprende mezciar ia fase de emuision con una soiucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 2 y aproximadamente 8, tai como entre aproximadamente pH 4 y 7. Se prefiere ia detencion a una temperatura reducida, tai como <5°C.
En aun otro aspecto, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica, en ia que ia nanopartlcuia terapeutica se prepara por emuisificacion de una mezcia que comprende un primer poilmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico, formando de este modo una fase de emuision; y extincion de ia fase de emuision formando de este modo una fase de detencion que comprende una piuraiidad de nanopartlcuias terapeuticas, en donde ia detencion de ia fase de emuision comprende mezciar ia fase de emuision con una soiucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7.
En aigunas reaiizaciones, ei pH de una soiucion acuosa contempiada (por ejempio, ia primera o segunda soiucion acuosa esta entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7, por ejempio, entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5 o entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7.
En aigunas reaiizaciones, una soiucion acuosa contempiada comprende fosfato, citrato o una mezcia de fosfato y citrato. En aigunas reaiizaciones, ia segunda soiucion acuosa comprende una mezcia de borato, fosfato y acetato.
En aigunas reaiizaciones, un proceso contempiado para preparar una nanopartlcuia terapeutica comprende ademas ia fiitracion de ia fase detenida para recuperar ias nanopartlcuias terapeuticas.
En aigunas reaiizaciones, ia fase detenida tiene un pH sustanciaimente iguai que ia fase de emuision. En aigunas reaiizaciones, ia fase tempiada tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7, por ejempio, entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5 o entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica, en ia que ia nanopartlcuia terapeutica se prepara mediante un procedimiento de preparation que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un poilmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en uno o mas disoiventes) con una primera soiucion acuosa (que comprende un tensioactivo en agua) para formar una segunda fase;
2) emuisionar ia segunda fase para formar una emuision;
3) mantener opcionaimente ia fase de emuision durante un tiempo de retention (tai como de 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C);
4) detener ia fase de emuision a <5°C formando de este modo una fase de detencion, en ei que ia detencion de ia fase de emuision comprende mezciar ia fase de emuision con una segunda soiucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tai como aproximadamente pH 6.5);
5) concentrar y aisiar ias nanopartlcuias resuitantes por fiitracion.
Adecuadamente, ia primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tai como coiato de sodio o eter estearliico de poiioxietiieno (100) (por ejempio, vendido bajo ei nombre comerciai Brij®), en agua y aicohoi bencliico.
En un aspecto adicionai, se proporciona una nanopartlcuia terapeutica, en ia que ia nanopartlcuia terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un poilmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en uno o mas disoiventes) con una primera soiucion acuosa (que comprende un tensioactivo en agua) para formar una segunda fase;
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2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Adecuadamente, la primera fase acuosa comprende un tensioactivo, tal como colato de sodio o eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico.
En otro aspecto, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno 100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion;
3) mantener opcionalmente la fase de emulsion durante un tiempo de retencion (tal como de 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C);
4) detener la fase de emulsion a <5°C formando de este modo una fase de detencion, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
5) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (tal como aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema
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disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (como por ejemplo aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de 1:3 y 1:4) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en donde la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7 (como por ejemplo aproximadamente pH 6.5);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otro tensioactivo tal como Tween®80 en agua se puede anadir a la solucion enfriada antes de la concentracion y filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal como estearil polioxietileno (100) eter (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brij®), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH de 6.5;
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7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua) al temple a una proporcion de aproximadamente 20:1 a 100:1 de Tween®80 al farmaco por peso;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un procedimiento de preparation que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un pollmero, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relation molar entre 1:3 y 1:4) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retention (tal como 5 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detention de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante a la solucion enfriada;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en el presente documento como formulation G1, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero 16/5 de PLA-PEG, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende regulador a pH 6.5;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en este documento como formulacion G1, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero 16/5 PLA-PEG, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un tensioactivo tal eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
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2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende regulador a pH 6.5;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en este documento como formulacion G1, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en el que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 en la que la relacion de segunda solucion acuosa a emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo al enfriamiento;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en este documento como formulacion G1, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido con el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
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5) esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una proporcion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco por peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en este documento como formulacion G2, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) despues de aproximadamente 1 minuto, enfriamiento brusco de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, formando de este modo una fase de detencion, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5;
6) anadir a la solucion de enfriamiento una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua);
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Convenientemente, el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de aproximadamente 1 mol de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en este documento como formulacion G2, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo esta presente en una proporcion molar de aproximadamente 1:3) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo, vendido bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) despues de aproximadamente 1 minuto, enfriamiento brusco de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion es de aproximadamente 10:1;
6) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua) al enfriamiento a una relacion de aproximadamente 100:1 de Tween®80 al farmaco en peso;
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
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Convenientemente, el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de aproximadamente 1 mol de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional, se proporciona una nanopartlcula terapeutica que se describe en el presente documento como formulacion G2, en la que la nanopartlcula terapeutica se prepara mediante un proceso de preparacion que comprende:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa a una relacion inicial de 1 mol de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) Ejemplo comercializado con el nombre comercial Brim®510o), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) despues de aproximadamente 1 minuto, detention de la fase de emulsion a aproximadamente 2°C, formando de esta manera una fase detenida, en donde la extincion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 y en la que la relacion de segunda solucion acuosa a emulsion es de aproximadamente 10:1;
6) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua) al enfriamiento a una relacion de aproximadamente 100:1 de Tween®80 al farmaco en peso;
7) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtration.
En un aspecto, las nanopartlculas finales incluyen aproximadamente 5 a aproximadamente 20% en peso de AZD1152 hqpa, tal como aproximadamente 8 a aproximadamente 20% en peso tal como aproximadamente 10 a aproximadamente 20% en peso, tal como aproximadamente 10 a aproximadamente 15% en peso, tal como aproximadamente 10 a aproximadamente 16% en peso, tal como aproximadamente 12 a aproximadamente 16% en peso, tal como aproximadamente 15 a aproximadamente 20% en peso, tal como aproximadamente 15 a
aproximadamente 18% en peso. En un aspecto, las nanopartlculas finales incluyen aproximadamente 10 a
aproximadamente 20% en peso de AZD1152 hqpa. En un aspecto adicional, las nanopartlculas finales incluyen de aproximadamente 15 a aproximadamente 20% en peso de AZD1152 hqpa. En un aspecto adicional, las nanopartlculas finales incluyen de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD1152 hqpa.
Una caracterlstica adicional de la invention proporciona nanopartlculas que comprenden aproximadamente 10-20% en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 50 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copollmero de acido poli(lactico) poli(lactico)-poli(etilen)glicol dibloque (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende
aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido
poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y acido pamoico.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol que tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de un acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol que tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de poli(etilen)glicol de aproximadamente 5 kDa, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 1 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD11152 Hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 80 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol que tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de poli(etilen)glicol de
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aproximadamente 5 kDa, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 76 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol que tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 9 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD11152 Hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Una caracterlstica adicional de la invencion proporciona nanopartlculas que comprenden aproximadamente 10-20 por ciento en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 50 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente el 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y acido pamoico.
Otras caracterlsticas de la invencion comprenden cada una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones E, F1, F2, G1 y G2 en el presente documento. Otras caracterlsticas de la invencion comprenden cada una de las formulaciones de los Ejemplos denominados formulaciones E, F1, F2, G1 y G2 en el presente documento, en las que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia). Otras caracterlsticas de la invencion comprenden cada una de las formulaciones de los Ejemplos denominados formulaciones E, F1, F2, G1 y G2 en el presente documento, en las que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1.5% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia). Otras caracterlsticas de la invencion comprenden cada una de las formulaciones de los Ejemplos denominados formulaciones E, F1, F2, G1 y G2 en el presente documento, en las que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 2% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia).
En un aspecto, las nanopartlculas contempladas tienen un diametro hidrodinamico <200 nm, tal como 70-140 nm.
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-25 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a 15 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a 15 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa, aproximadamente 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de poli(etilen)glicol de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que menos de 20% de la hqpa AZD11152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos del 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 40 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 50 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberation de AZD1152 hqpa a partir de la nanopartlcula se puede medir usando el metodo descrito anteriormente en este documento.
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico, en el que el AZD1152 hqpa y el acido pamoico forman un par de iones hidrofobos y (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una media en peso molecular numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 16 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra
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realizacion de este aspecto, menos del 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcuia despues de 40 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 50 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberacion de AZD1152 hqpa a partir de la nanopartlcula se puede medir usando el metodo descrito anteriormente en este documento.
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) un peso molecular numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlculas se hacen mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16: 5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo en la forma comercializada bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17 M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35 por ciento en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una relacion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco en peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto adicional de la invencion se proporcionan nanopartlculas que comprenden aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que las nanopartlculas se fabrican mediante un procedimiento que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo esta presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo en la forma comercializada bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador
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a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17 M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35 por ciento en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una relacion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco en peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En un aspecto, se proporcionan nanopartlculas terapeuticas descritas como la formulacion G1 de la presente invencion, que comprende aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico, y un acido poli(lactico) (etileno) glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En otro aspecto se proporcionan nanopartlculas terapeuticas descritas como la formulacion G2 de la presente invencion, que comprende aproximadamente 15-22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 9 a 13 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
Formulaciones Farmaceuticas
Las nanopartlculas descritas en la presente invencion se pueden combinar con vehlculos farmaceuticamente aceptables para formar una composicion farmaceutica, de acuerdo con otro aspecto. Como se apreciara por un experto en la tecnica, los portadores pueden elegirse basandose en la via de administracion como se describe a continuacion, en la localizacion del tejido diana, en el farmaco que se administra, en el tiempo de administracion del farmaco, etc.
En otro aspecto, se proporciona una composicion farmaceuticamente aceptable. La composicion farmaceuticamente aceptable comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas contempladas y un portador farmaceuticamente aceptable. La composicion farmaceuticamente aceptable puede comprender tambien uno o mas excipientes y/o diluyentes. En una realizacion de este aspecto, la composicion farmaceutica comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas, en donde las nanopartlculas comprenden aproximadamente 10-20% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 50 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un acido dibloque de poli(lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y acido pamoico.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende AZD1152 hqpa y acido pamoico.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende AZD1152 hqpa, un pollmero adecuado y acido pamoico.
En otro aspecto, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o portadores farmaceuticamente aceptables, en el que las nanopartlculas comprenden AZD1152 hqpa, un poli(acido lactico) dibloque de acido poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y acido pamoico.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 en peso de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en
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donde cada nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94.75 por ciento en peso de un poli(acido lactico) poli(etilen)glicol, en ei que ia nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 80 por ciento en peso de un copollmero de bloque de acido poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
En un aspecto adicional de la invencion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 76 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 9 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 20 en peso de AZD1152 hqpa.
En las composiciones farmaceuticas descritas en las caracterlsticas anteriores, convenientemente el copollmero tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
Otras caracterlsticas de la invencion comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento, en la que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia). Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento, pero en la que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1.5% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de
nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a uno de los Ejemplos denominados formulaciones G1 y G2 pero en la que el % en peso de AZD11152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 2% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de
nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a uno de los Ejemplos denominados formulaciones G1 y G2 pero en la que el % en peso de AZD1152 hqpa varla hasta aproximadamente +/- 3% en peso, la cantidad de acido hidrofobo varla en proporcion a la cantidad de AZD1152 hqpa correspondiente a las proporciones en las formulaciones ejemplificadas del presente documento y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 25% en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el acido poli(lactico) (polietileno) glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa , aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el poli ) copollmero de acido-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente
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En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa , aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y aproximadamente 63 a aproximadamente 78 por ciento en peso de un copollmero dibloque de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y una mezcla de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un poli(acido lactico) dibloque acido-poli(etileno ) (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y el producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD 1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol) y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso (de la nanopartlcula) de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso (de la nanopartlcula) de pamoico acido.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el poli lactico) tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en la que menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos del 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 40 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 50 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberation de AZD1152 hqpa de la nanopartlcula se mide utilizando el metodo descrito anteriormente en este documento.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el acido poli(lactico) (polietileno) glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlculas se hacen mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el
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alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) que se vende con el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como de 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase de detencion rapido, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17M) en la que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35 por ciento en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una proportion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 a farmaco en peso) ;
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtration.
Convenientemente, las nanopartlculas en las composiciones farmaceuticas anteriores tienen un diametro hidrodinamico <200 nm, tal como 70-140 nm.
Las composiciones farmaceuticas se pueden administrar a un paciente por cualquier medio conocido en la tecnica incluyendo rutas orales y parenterales. El termino "paciente", tal como se usa en el presente documento, se refiere tanto a seres humanos como a seres no humanos, incluyendo, por ejemplo, mamlferos, aves, reptiles, anfibios y peces. Por ejemplo, los no humanos pueden ser mamlferos (por ejemplo, un roedor, un raton, una rata, un conejo, un mono, un perro, un gato, un primate o un cerdo). En ciertas realizaciones son deseables rutas parenterales ya que evitan el contacto con las enzimas digestivas que se encuentran en el canal alimenticio. De acuerdo con tales realizaciones, las composiciones de la invention se pueden administrar por inyeccion (por ejemplo, intravenosa, subcutanea o intramuscular, inyeccion intraperitoneal), rectal, vaginal, topica (como por medio de polvos, cremas, unguentos o gotas), o por inhalacion).
En una realization particular, las nanopartlculas se administran a un sujeto que lo necesita sistemicamente, por ejemplo, mediante infusion o inyeccion IV (intravenoso).
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables esteriles pueden formularse de acuerdo con la tecnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspension adecuados. La preparation inyectable esteril tambien puede ser una solucion, suspension o emulsion inyectable esteril en un diluyente o disolvente no toxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solucion en 1,3-butanodiol. Entre los vehlculos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran agua, solucion de Ringer, U.S.P., y solucion isotonica de cloruro de sodio. Ademas, se emplean convencionalmente aceites fijos esteriles como disolvente o medio de suspension. Para este proposito se puede emplear cualquier aceite fijo blando incluyendo mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, se utilizan acidos grasos tales como acido oleico en la preparacion de inyectables. En una realizacion, el conjugado de la invencion se suspende en un fluido portador que comprende 1% (p/v) de carboximetil celulosa sodica y TWEEN™ 80 al 0.1% (v/v). Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo, filtro de retencion de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse o dispersarse en agua esteril u otro medio inyectable esteril antes de su uso.
Las formas de dosificacion solidas para administration oral incluyen capsulas, comprimidos, plldoras, polvos y granulos. En tales formas de dosificacion solidas, el conjugado encapsulado o no encapsulado se mezcla con al menos un excipiente o vehlculo inerte, farmaceuticamente aceptable tal como citrato de sodio o fosfato dicalcico y/o (a) cargas o extendedores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y acido sillcico, (b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarosa y acacia, (c) humectantes tales como glicerol, (d) agentes desintegrantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidon de patata o tapioca, acido alglnico, ciertos silicatos y carbonato de sodio, (e) agentes retardadores de la disolucion tales como parafina, (f) aceleradores de la absorcion tales como compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetllico y monoestearato de glicerol, (h) absorbentes tales como caolln y arcilla de bentonita, e (i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, laurilsulfato de sodio y mezclas de los mismos. En el caso de capsulas, tabletas y pastillas, la forma de dosificacion tambien puede comprender agentes regulador.
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Se apreciara que la dosificacion exacta de una nanopartlcuia que contiene el agente terapeutico es elegida por el medico individual en vista del paciente que se va a tratar, en general, la dosificacion y la administracion se ajustan para proporcionar una cantidad efectiva de la nanopartlcula terapeutica al paciente que esta siendo tratado. Tal como se utiliza en el presente documento, la "cantidad efectiva" de una nanopartlcula que contiene el agente terapeutico se refiere a la cantidad necesaria para obtener la respuesta biologica deseada. Como apreciaran los expertos en la tecnica, la cantidad efectiva de una nanopartlcula que contiene el agente terapeutico puede variar dependiendo de factores tales como el punto final biologico deseado, el farmaco que se va a administrar, el tejido diana, la via de administracion, etc. Por ejemplo, la cantidad efectiva de una nanopartlcula que contiene el agente terapeutico podrla ser la cantidad que da como resultado una reduccion en el tamano del tumor en una cantidad deseada durante un periodo de tiempo deseado. Otros factores que pueden tenerse en cuenta incluyen la gravedad del estado de enfermedad; edad, peso y sexo del paciente tratado; dieta, tiempo y frecuencia de administracion; combinaciones de farmacos; sensibilidad a la reaccion; y tolerancia/respuesta a la terapia.
Las nanopartlculas pueden formularse en forma unitaria de dosificacion para facilitar la administracion y uniformidad de dosificacion. La expresion "forma unitaria de dosificacion" tal como se utiliza en el presente documento se refiere a una unidad flsicamente discreta de nanopartlcula apropiada para el paciente que se va a tratar. Se entendera, sin embargo, que el uso diario total de las composiciones sera decidido por el medico asistente dentro del alcance de un juicio medico solido. Para cualquier nanopartlcula, la dosis terapeuticamente efectiva se puede estimar inicialmente en ensayos de cultivo celular o en modelos animales, usualmente ratones, conejos, perros o cerdos. El modelo animal tambien se utiliza para conseguir un intervalo de concentration deseable y la via de administracion. Dicha information puede usarse entonces para determinar dosis y vlas utiles para la administracion en seres humanos. La eficacia terapeutica y la toxicidad de las nanopartlculas pueden determinarse mediante procedimientos farmaceuticos estandar en cultivos celulares o animales de experimentation, por ejemplo ED50 (la dosis es terapeuticamente efectiva en el 50% de la poblacion) y LD50 (la dosis es letal para el 50% de la poblacion). La relation de dosis de efectos toxicos a efectos terapeuticos es el Indice terapeutico, y puede expresarse como la relacion, DL50/ED50. Las composiciones farmaceuticas que exhiben grandes Indices terapeuticos pueden ser utiles en algunas realizaciones. Los datos obtenidos a partir de ensayos de cultivos celulares y estudios en animales pueden usarse en la formulation de una gama de dosis para uso humano.
En un aspecto, la formulacion farmaceutica que comprende las nanopartlculas de AZD1152 hqpa esta disenada de tal manera que libera la hqpa AZD1152 lentamente durante varios dlas. Por ejemplo, la formulacion farmaceutica puede ser tal que se administre una dosis al paciente en (por ejemplo) dlas 1 y 3, dlas 1 y 5 o dlas 1 y 7 de un ciclo de tratamiento de siete dlas. El ciclo puede repetirse cada semana, dos semanas o tres semanas en un ciclo de tratamiento mensual o bimestral. La cantidad de farmaco que se va a administrar en cada visita se calcula as! para lograr una exposition total de farmaco particular durante el programa de tratamiento. Ventajosamente, las formulaciones que contienen nanopartlculas pueden reducir el tiempo requerido para la administracion del farmaco al paciente en cada dosis y pueden reducir el numero de visitas al hospital para los tratamientos que un paciente necesita hacer, en comparacion con metodos previamente conocidos de administracion de AZD 1152.
Adecuadamente, cuando se administra al hombre, la dosis de AZD11152 hqpa suministrada por la formulacion en nanopartlculas de la invention puede estar en el intervalo de 100 mg a 2000 mg. La dosis total exacta que se va a administrar se determinara por PK y perfil de seguridad optimos para el paciente y el tipo de tumor que se trata, que se suministrara, por ejemplo, en los esquemas descritos anteriormente.
En una realization, las composiciones descritas en el presente documento pueden incluir menos de aproximadamente 10 ppm de paladio, o menos de aproximadamente 8 ppm, o menos de aproximadamente 6 ppm de paladio. Por ejemplo, se proporciona aqul una composition que incluye nanopartlculas en las que la composition tiene menos de aproximadamente 10 ppm de paladio.
En algunas realizaciones se contempla una composicion adecuada para la congelation, incluyendo nanopartlculas descritas en el presente documento y una solution adecuada para la congelacion, por ejemplo, un azucar tal como mono, di o poli sacarido, por ejemplo sacarosa y/o trehalosa, y/o se anade una solucion de sal y/o ciclodextrina a la suspension de nanopartlculas. El azucar (por ejemplo, sacarosa o trehalosa) puede actuar, por ejemplo, como crioprotector para evitar que las partlculas se agregaron al congelarse. Por ejemplo, se proporciona aqul una formulacion de nanopartlculas que comprende una pluralidad de nanopartlculas descritas, sacarosa, un haluro ionico y agua; en el que las nanopartlculas/sacarosa/agua/haluro ionico son aproximadamente 3-40%/10-40%/20-95%/0.1- 10% (p/p/p/p) o aproximadamente 5-10%/10-15%/80-90%/1-10% (p/p/p/p). Por ejemplo, tal solucion puede incluir nanopartlculas como se describe en el presente documento, aproximadamente 5% a aproximadamente 20% en peso de sacarosa y un haluro ionico tal como cloruro de sodio, en una concentracion de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mM. En otro ejemplo, se proporciona aqul una formulacion de nanopartlculas que comprende una pluralidad de nanopartlculas descritas, trehalosa, ciclodextrina y agua; en el que las nanopartlculas/trehalosa/agua/ciclodextrina es aproximadamente 3-40%/1-25%/20-95%/1-25% (p/p/p/p) o
aproximadamente 5-10%/1-25%/80-90%/10-15% (p/p/p/p).
Por ejemplo, una solucion contemplada puede incluir nanopartlculas como se describe en el presente documento, aproximadamente 1% a aproximadamente 25% en peso de un disacarido tal como trehalosa o sacarosa (por ejemplo, aproximadamente 5% a aproximadamente 25% de trehalosa o sacarosa, por ejemplo aproximadamente 10% de
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trehalosa trehalosa o sacarosa, o aproximadamente 15% de trehalosa o sacarosa, por ejemplo aproximadamente 5% en peso) y una ciclodextrina tal como p-ciclodextrina, en una concentracion de aproximadamente 1% a aproximadamente 25% en peso (por ejemplo, aproximadamente 5% a aproximadamente 20% , por ejemplo 10% o aproximadamente 20% en peso, o aproximadamente 15% a aproximadamente 20% en peso de ciclodextrina). Las formulaciones contempladas pueden incluir una pluralidad de nanopartlculas descritas (por ejemplo, nanopartlculas que tienen PLA-PEG y un agente activo) y aproximadamente de 2% a aproximadamente 15% en peso (o aproximadamente 4% en peso a aproximadamente 6% en peso, por ejemplo aproximadamente 5% en peso) de sacarosa y aproximadamente 5% en peso a aproximadamente 20% en peso (por ejemplo, aproximadamente 7% en peso a aproximadamente 12% en peso, por ejemplo, aproximadamente 10% en peso) de una ciclodextrina, por ejemplo, HPbCD).
La presente descripcion se refiere en parte a composiciones farmaceuticas liofilizadas que, cuando se reconstituyen, tienen una cantidad minima de grandes agregados. Tales agregados grandes pueden tener un tamano mayor que aproximadamente 0.5 pm, mayor que aproximadamente 1 pm, o mayor que aproximadamente 10 pm, y pueden ser indeseables en una solucion reconstituida. Los tamanos de agregados se pueden medir utilizando una variedad de tecnicas, incluyendo las indicadas en la Farmacopea de los EE.UU. a 32 <788>, incorporada a la presente como referencia. Las pruebas descritas en USP 32 <788> incluyen una prueba de recuento de partlculas de oscurecimiento de luz, ensayo de recuento de partlculas microscopicas, difraccion de laser y deteccion optica de partlcula unica. En una realizacion, el tamano de partlcula en una muestra dada se mide usando difraccion laser y/o deteccion optica de particula unica.
La prueba de recuento de partlculas por oscurecimiento de luz USP 32 <788> establece directrices para el muestreo de tamanos de particula en una suspension. Para soluciones con un valor inferior o igual a 100 mL, la preparacion cumple el ensayo si el numero medio de partlculas presentes no supera los 6000 por contenedor que son >10 pm y 600 por contenedor que son >25 pm.
Como se describe en la USP 32 <788>, la prueba de recuento de partlculas microscopicas establece pautas para determinar las cantidades de partlculas usando un microscopio binocular ajustado a un aumento de 100 ± 10x que tiene un micrometro ocular. Un micrometro ocular es una reticula de diametro circular que consiste en un circulo dividido en cuadrantes con circulos de referencia negros que denotan 10 pm y 25 pm cuando se ven con un aumento de 100x. Se proporciona una escala lineal debajo de la reticula. El numero de partlculas con referencia a 10 pm y 25 pm se registra visualmente. Para soluciones con un valor inferior o igual a 100 mL, la preparacion cumple el ensayo si el numero medio de partlculas presentes no supera los 3000 por envase que son >10 pm y 300 por contenedor que son >25 pm.
En algunas realizaciones, una muestra acuosa de 10 mL de una composicion revelada tras la reconstitucion comprende menos de 600 partlculas por ml que tienen un tamano mayor o igual a 10 micrometres; y/o menos de 60 partlculas por ml que tienen un tamano mayor o igual a 25 micras.
Se puede utilizar la dispersion dinamica de la luz (DLS) para medir el tamano de particula, pero se basa en el movimiento browniano para que la tecnica no detecte algunas partlculas mas grandes. La difraccion laser se basa en diferencias en el indice de refraccion entre la partlcula y el medio de suspension. La tecnica es capaz de detectar partlculas en el rango de submicron a milimetro. Pueden determinarse cantidades relativamente pequenas (por ejemplo, aproximadamente 1-5% en peso) de partlculas mas grandes en suspensiones de nanopartlculas. La deteccion optica de particula unica (SPOS) utiliza un oscurecimiento ligero de suspensiones diluidas para contar partlculas individuales de aproximadamente 0.5 pm. Conociendo la concentracion de partlculas de la muestra medida, se puede calcular el porcentaje en peso de agregados o la concentracion de agregado (particulas/mL).
La formation de agregados puede ocurrir durante la liofilizacion debido a la deshidratacion de la superficie de las partlculas. Esta deshidratacion se puede evitar usando lioprotectores, tales como disacaridos, en la suspension antes de la liofilizacion. Los disacaridos adecuados incluyen sacarosa, lactulosa, lactosa, maltosa, trehalosa o celobiosa, y/o mezclas de los mismos. Otros disacaridos contemplados incluyen kojibiosa, nigerosa, isomaltosa, p,p-trehalosa, a,p- trehalosa, sophorosa, laminaribiosa, gentiobiosa, turanosa, maltulosa, palatinosa, gentiobiulosa, manobiosa, melibiosa, melibiulosa, rutinosa, rutinulosa y xilobiosa. La reconstitucion muestra distribuciones de tamano DLS equivalentes cuando se compara con la suspension de partida. Sin embargo, la difraccion laser puede detectar partlculas de >10 pm de tamano en algunas soluciones reconstituidas. Ademas, SPOS tambien puede detectar partlculas de tamano >10 pm a una concentracion superior a las directrices de la FDA (104-105 particulas/mL para partlculas de >10 pm).
En algunas realizaciones, se puede usar una o mas sales de haluro ionicas como un lioprotector adicional a un azucar, tal como sacarosa, trehalosa o mezclas de los mismos. Los azucares pueden incluir disacaridos, monosacaridos, trisacaridos y/o polisacaridos, y pueden incluir otros excipientes, por ejemplo glicerol y/o tensioactivos. Opcionalmente, se puede incluir una ciclodextrina como un lioprotector adicional. La ciclodextrina se puede anadir en lugar de la sales de haluro ionica. Alternativamente, la ciclodextrina puede anadirse ademas de la sales de haluro ionica.
Sales de haluro ionicas adecuadas pueden incluir cloruro de sodio, cloruro de calcio, cloruro de zinc, o mezclas de los mismos. Las sales de haluro ionicas adecuadas adicionales incluyen cloruro de potasio, cloruro de magnesio, cloruro
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de amonio, bromuro de sodio, bromuro de calcio, bromuro de zinc, bromuro de potasio, bromuro de magnesio, bromuro de amonio, yoduro de sodio, yoduro de calcio, yoduro de zinc, yoduro de potasio, yoduro de magnesio, yoduro de amonio, y/o mezclas de los mismos. En una realizacion, se puede usar de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 por ciento en peso de sacarosa con una sales de haluro ionica. En una realizacion, la composition farmaceutica liofilizada puede comprender de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mM de cloruro de sodio. En otra realizacion, la composicion farmaceutica liofilizada puede comprender de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mM de sal de cloruro ionico divalente, tal como cloruro de calcio o cloruro de zinc. En otra realizacion mas, la suspension a ser liofilizada puede comprender ademas una ciclodextrina, por ejemplo, se puede usar aproximadamente 1 a aproximadamente 25 por ciento en peso de ciclodextrina.
Una ciclodextrina adecuada puede incluir a-ciclodextrina, p-ciclodextrina, g-ciclodextrina, o mezclas de las mismas. Las ciclodextrinas de ejemplo contempladas para uso en las composiciones descritas aqul incluyen hidroxipropil-(3- ciclodextrina (HPbCD), hidroxietil-p-ciclodextrina, sulfobutileter-p-ciclodextrina, metil-p-ciclodextrina, dimetil-p- ciclodextrina, carboximetil-p-ciclodextrina, carboximetil-etil-p-ciclodextrina, dietil-p-ciclodextrina, tri-O-alquil-p- ciclodextrina, glocosil-p-ciclodextrina y maltosil-p-ciclodextrina. En una realizacion, se puede usar aproximadamente 1 a aproximadamente 25 por ciento en peso de trehalosa (por ejemplo, aproximadamente 10% a aproximadamente 15%, por ejemplo 5 a aproximadamente 20% en peso) con una ciclodextrina. En una realizacion, la composicion farmaceutica liofilizada puede comprender de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 por ciento en peso de p- ciclodextrina. Una composicion de ejemplo puede comprender nanopartlculas que comprenden PLA-PEG, un agente activo/terapeutico, aproximadamente 4% en peso a aproximadamente 6% en peso (por ejemplo, aproximadamente 5% en peso) de sacarosa y aproximadamente 8 a aproximadamente 12% en peso (por ejemplo aproximadamente 10% en peso) de HPbCD.
En un aspecto, se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende nanopartlculas descritas, en donde tras la reconstitution de la composicion farmaceutica liofilizada a una concentration de nanopartlculas de aproximadamente 50 mg/mL, en menos de o aproximadamente 100 mL de un medio acuoso, la composicion adecuada para administration parenteral comprende menos de 6000, tal como menos de 3000, micropartlculas de mas de o igual a 10 micrometros; y/o menos de 600, tales como menos de 300, micropartlculas mayores o iguales a 25 micras.
El numero de micropartlculas puede determinarse por medios tales como la USP 32 <788> por ensayo de conteo de partlculas de oscurecimiento de luz, la USP 32 <788> mediante ensayo de conteo de partlculas microscopicas, difraccion de laser y detection optica de partlcula unica.
En un aspecto, se proporciona una composicion farmaceutica adecuada para uso parenteral despues de la reconstitucion que comprende una pluralidad de partlculas terapeuticas que comprenden cada una un copollmero que tiene un segmento de pollmero hidrofobo y un segmento de pollmero hidrofilo; un agente activo; un azucar; y una ciclodextrina.
Por ejemplo, el copollmero puede ser un copollmero de bloque de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol. Tras la reconstitucion, una muestra acuosa de 100 mL puede comprender menos de 6000 partlculas que tienen un tamano mayor o igual a 10 micrometros; y menos de 600 partlculas que tienen un tamano mayor o igual a 25 micras.
La etapa de adicion de un disacarido y una sal de haluro ionica puede comprender la adicion de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de sacarosa o aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de trehalosa (por ejemplo, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de trehalosa) y aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mM de sal ionica. La sales de haluro ionica puede seleccionarse entre cloruro de sodio, cloruro de calcio y cloruro de zinc, o mezclas de los mismos. En una realizacion, tambien se anade aproximadamente 1 a aproximadamente 25 por ciento en peso de ciclodextrina.
En otra realizacion, la etapa de anadir un disacarido y una ciclodextrina puede comprender la adicion de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de sacarosa o aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de trehalosa (por ejemplo, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de trehalosa) y aproximadamente 1 a aproximadamente 25 por ciento en peso de ciclodextrina. En una realizacion, se anade aproximadamente 10 a aproximadamente 15 por ciento en peso de ciclodextrina. La ciclodextrina puede seleccionarse entre a-ciclodextrina, p-ciclodextrina, g-ciclodextrina o mezclas de las mismas.
En otro aspecto, se proporciona un metodo para evitar la agregacion sustancial de partlculas en una composicion farmaceutica de nanopartlculas que comprende anadir un azucar y una sal a la formulation liofilizada para evitar la agregacion de las nanopartlculas despues de la reconstitucion. En una realizacion, se anade tambien una ciclodextrina a la formulacion liofilizada. En otro aspecto mas, se proporciona un metodo para evitar la agregacion sustancial de partlculas en una composicion farmaceutica de nanopartlculas que comprende anadir un azucar y una ciclodextrina a la formulacion liofilizada para evitar la agregacion de las nanopartlculas despues de la reconstitucion.
Una composicion liofilizada contemplada puede tener una concentracion de partlcula terapeutica mayor que aproximadamente 40 mg/mL. La formulacion adecuada para la administracion parenteral puede tener menos de aproximadamente 600 partlculas que tienen un tamano superior a 10 micrometros en una dosis de 10 mL. La liofilizacion puede comprender congelar la composicion a una temperatura superior a aproximadamente -40°C, o por
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ejemplo menos de aproximadamente -30°C, formando una composition congelada; y secar la composition congelada para formar la composicion liofilizada. La etapa de secado puede ocurrir a aproximadamente 50 mTorr a una temperatura de aproximadamente -25 a aproximadamente -34°C, o de aproximadamente -30 a aproximadamente - 34°C.
Otras caracterlsticas de la invention comprenden una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominados formulaciones G1 y G2 en el presente documento. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento, en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/aproximadamente 1% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia). Todavla otras caracterlsticas de la invencion comprenden una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento, el % en peso de AZD 1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1.5% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a uno de los ejemplos mencionados como formulaciones G1 y G2 en el presente documento, en peso de AZD11152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 2% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos. Otras caracterlsticas adicionales de la invencion comprenden una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a uno de los ejemplos mencionados como formulaciones G1 y G2 en el presente documento, en peso de AZD1152 hqpa varla hasta aproximadamente +/- 3% en peso, la cantidad de acido hidrofobo varla en proportion a la cantidad de AZD1152 hqpa correspondiente a las proporciones en las formulaciones ejemplificadas del presente documento y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia .
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 25% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% por (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el poli(acido lactico) acido poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el acido poli(lactico) etileno) glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y aproximadamente 63 a aproximadamente 78 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol).
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y una mezcla de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicional se proporciona una composicion farmaceutica liofilizada que comprende una pluralidad de
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nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcuia terapeutica comprende un copoilmero dibioque de poli(lactico) acido-poii(etiien)giicoi (en el que la nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copoilmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poii(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi) y el producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD 1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico.
En un aspecto adicionai se proporciona una composicion farmaceutica iiofiiizada que comprende una piuraiidad de nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcuia terapeutica comprende un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copoilmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poii(etiien)giicoi) y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso (de la nanopartlcuia) de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso (de la nanopartlcuia) de acido pamoico.
En un aspecto adicionai se proporciona una composicion farmaceutica iiofiiizada que comprende una piuraiidad de nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi); en la que menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcuia despues de 30 horas en PBS y poiisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos del 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcuia despues de 40 horas en PBS y poiisorbato 20 a 37°C. En otra realizacion de este aspecto, menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcuia despues de 50 horas en PBS y poiisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberation de AZD1152 hqpa de la nanopartlcuia se mide utiiizando el metodo descrito anteriormente en este documento.
En un aspecto adicionai se proporciona una composicion farmaceutica iiofiiizada que comprende una piuraiidad de nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcuia terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22% en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y un copoilmero dibioque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcuia terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poii(etiien)giicoi); en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcuia despues de 30 horas en PBS y poiisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlcuias se hacen mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copoilmero PLA-PEG 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcia de disoiventes que comprende TFA, alcohol bencliico, DMSO y acetato de etiio de tai manera que el alcohol bencliico:acetato de etiio estan presentes en una relation molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion iniciai de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solution acuosa (que comprende un eter estearliico de poiioxietiieno (100) (que se vende con el nombre comerciai Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencliico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emuisionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retention (tai como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejempio, sumergiendose en un bano de hieio);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de aita presion;
5) opcionaimente esperar un tiempo de retardo de ai menos 5 minutos, por ejempio 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detention de la fase de emulsion comprende mezciar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un reguiador a pH 6.5 (tai como un reguiador fosfato 0.17M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tai como aproximadamente 3:1;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo (tai como Tween®80, por ejempio una solucion de Tween®80 ai 35 por ciento en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejempio a una relacion de aproximadamente 20:1
8) concentrar y aisiar las nanopartlcuias resuitantes por filtration.
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Convenientemente, las nanopartlcuias en las composiciones farmaceuticas anteriores tienen un diametro hidrodinamico <200 nm, tal como 70-140 nm.
En un aspecto adicional, se proporciona un kit de partes, que comprende:
1) una composicion farmaceutica liofilizada que comprende nanopartlculas descritas anteriormente; y
2) instrucciones de uso.
En un aspecto adicional, se proporciona un kit de piezas, cuyo kit comprende:
1) una composicion farmaceutica liofilizada que comprende nanopartlculas descritas anteriormente; y
2) instrucciones de uso.
Metodos de tratamiento
En algunas realizaciones, las nanopartlculas contempladas pueden usarse para tratar, aliviar, mejorar, atenuar, retrasar el inicio de, inhibir la progresion de, reducir la gravedad de, y/o reducir la incidencia de uno o mas slntomas o caracterlsticas de una enfermedad, trastorno, y/o condicion. En algunas realizaciones, las nanopartlculas contempladas pueden usarse para tratar tumores solidos, por ejemplo, cancer y/o celulas cancerosas.
El termino “cancer” incluye canceres premalignos as! como canceres malignos. Los canceres incluyen, pero no se limitan a, canceres hematologicos (sangre) (por ejemplo, leucemia mielogena cronica, leucemia mielomonocltica cronica, leucemia linfoblastica aguda positiva del cromosoma de Filadelfia, linfoma de celulas del manto, leucemia mieloide aguda, linfoma difuso de celulas B grandes, mieloma, linfoma de celulas T periferico, slndrome mielodisplasico), cancer de prostata, cancer gastrico, cancer colorrectal, cancer de piel, por ejemplo melanomas o carcinomas basocelulares, cancer de pulmon (por ejemplo cancer de pulmon de celulas no pequenas (NSCLC), cancer de pulmon de celulas pequenas (SCLC)), cancer de mama, cancer de ovario, cancer de cabeza y cuello, cancer de bronquios, cancer de pancreas, cancer de vejiga urinaria, cancer de cerebro o sistema nervioso central, cancer de sistema nervioso periferico, cancer de esofago, cancer de la cavidad bucal o faringe, cancer de hlgado (por ejemplo, carcinoma hepatocelular), cancer de rinon (por ejemplo, carcinoma de celulas renales), cancer testicular, cancer de vlas biliares, intestino delgado o cancer de apendice, tumor estromal gastrointestinal, cancer de glandula salival, cancer de glandula tiroides, cancer de glandula suprarrenal, osteosarcoma, condrosarcoma, cancer de tejidos hematologicos y similares. Las "celulas cancerosas" pueden estar en forma de un tumor (un tumor solido), existir solo dentro de un sujeto (por ejemplo, celulas de leucemia), o ser llneas celulares derivadas de un cancer.
En un aspecto, el cancer que se va a tratar es una leucemia. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es un cancer hematologico. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es un cancer hematologico tal como AML. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es un cancer hematologico tal como DLBCL. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es un cancer hematologico tal como el slndrome mielodisplasico.
En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es un tumor solido. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es NSCLC. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es SCLC. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es ovarico. En otro aspecto, el cancer que se va a tratar es colorrectal.
En un aspecto, las nanopartlculas de la invencion se usan para tratar tipos de cancer altamente proliferativos.
Los pacientes pueden seleccionarse utilizando biomarcadores que pueden indicar una mayor probabilidad de beneficiarse de este tratamiento. Por ejemplo, debido a que su tumor tiene celulas con una alta tasa de proliferacion (por ejemplo, debido a una alta expresion o amplification de c-myc) o una funcion apoptotica desregulada (por ejemplo debido a la translocation del gen Bcl-2).
El cancer puede estar asociado con una variedad de slntomas flsicos. Los slntomas del cancer generalmente dependen del tipo y localization del tumor. Por ejemplo, el cancer de pulmon puede causar tos, dificultad para respirar y dolor en el pecho, mientras que el cancer de colon a menudo causa diarrea, estrenimiento y sangre en las heces. Sin embargo, para dar solamente algunos ejemplos, los slntomas siguientes se asocian generalmente con muchos canceres: fiebre, escalofrlos, sudores nocturnos, tos, disnea, perdida de peso, perdida del apetito, anorexia, nausea, vomito, diarrea, hepatomegalia, hemoptisis, fatiga, malestar general, disfuncion cognitiva, depresion, alteraciones hormonales, neutropenia, dolor, llagas no cicatrizantes, ganglios linfaticos agrandados, neuropatla periferica y disfuncion sexual.
En un aspecto, se proporciona un metodo para el tratamiento del cancer. En algunas realizaciones, el tratamiento de cancer comprende administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de partlculas inventivas a un sujeto que lo necesite, en tales cantidades y durante el tiempo que sea necesario para lograr el resultado deseado. En ciertas realizaciones, una "cantidad terapeuticamente efectiva" de una partlcula de la invencion es esa cantidad efectiva para tratar, aliviar, mejorar, atenuar, retrasar el inicio, inhibir la progresion de, reducir la gravedad y/o reducir la incidencia de uno o mas slntomas o caracterlsticas del cancer.
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En un aspecto, se proporciona un metodo para administrar composiciones inventivas a un sujeto que sufre de cancer. En algunas realizaciones, las nanoparticulas se pueden administrar a un sujeto en tales cantidades y durante el tiempo que sea necesario para lograr el resultado deseado (tratamiento del cancer). En ciertas realizaciones, una "cantidad terapeuticamente efectiva" de una nanoparticula contemplada es aquella cantidad efectiva para tratar, aliviar, mejorar, atenuar, retrasar el inicio, inhibir la progresion de, reducir la gravedad y/o reducir la incidencia de uno o mas sintomas o caracteristicas del cancer.
En otra caracteristica de la invencion, se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa para uso como un medicamento en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
En otra caracteristica de la invencion, se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa para uso en la produccion de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
De acuerdo con una caracteristica adicional de este aspecto de la invencion, se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa para su uso en un animal de sangre caliente tal como el hombre como agente antiinvasivo en la contencion y/o tratamiento de tumores solidos enfermedad.
En otra caracteristica de la invencion, se proporciona el uso de una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa en la prevencion o tratamiento de cancer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
En una caracteristica adicional de la invencion, se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD1152 hqpa para uso en la prevencion o tratamiento de cancer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
En un aspecto de las caracteristicas anteriores, el cancer es un tumor solido. En otro aspecto de estas caracteristicas, el cancer es una leucemia.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, se proporciona el uso de una nanoparticula terapeutica que comprende AZD11152 hqpa para la produccion de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, se proporciona una nanoparticula terapeutica que comprende AZD11152 hqpa para uso en la prevencion o tratamiento de enfermedad de tumor solido en un animal de sangre caliente tal como el hombre.
En los usos y metodos anteriores, se administran convenientemente 100 mg a 2000 mg de AZD11152 hqpa en (por ejemplo) dias 1 y 3, dias 1 y 5 o dias 1 y 7 de un ciclo de tratamiento de siete dias. El ciclo puede repetirse cada semana, dos semanas o tres semanas en un ciclo de tratamiento mensual o bimestral.
En los usos y metodos anteriores, adecuadamente la nanoparticula terapeutica que comprende AZD11152 hqpa se administra en forma de una composicion farmaceutica, tal como las enumeradas en 1) a 15):
1) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas y uno o mas
excipientes, diluyentes y/o vehicuios farmaceuticamente aceptables, donde cada nanoparticula terapeutica
comprende AZD1152 hqpa y acido pamoico;
2) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehiculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanoparticula terapeutica comprende AZD1152 hqpa, un polimero adecuado y acido pamoico;
3) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas y uno o mas
excipientes, diluyentes y/o vehiculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanoparticula terapeutica
comprende AZD1152 hqpa, un copolimero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol y ademas comprende un acido pamoico;
4) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehiculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanoparticula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94.75 por ciento en peso de un copolimero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol, en el que la nanoparticula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
5) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanoparticulas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehiculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanoparticula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copolimero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol, en el que la nanoparticula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de un acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
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6) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 1 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD11152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
7) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 80 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
8) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 76 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 9 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD11152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
9) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol);
10) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol);
11) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y una mezcla de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico;
12) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y el producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico;
13) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 15 y aproximadamente 22 por ciento en peso (de la nanopartlcula) de AZD1152 hqpa
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y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso (de la nanopartlcuia) de acido pamoico;
14) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que menos de 20% de la hqpa AZD11152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberacion de AZD1152 hqpa de la nanopartlcula se mide utilizando el metodo descrito anteriormente en este documento.
15) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlculas se hacen mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo este presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo en la forma comercializada bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35 por ciento en peso en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una relacion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco en peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
En las composiciones farmaceuticas descritas anteriormente para uso en los usos y metodos anteriores, convenientemente el copollmero tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
En los usos y metodos anteriores adecuadamente, la nanopartlcula terapeutica que comprende AZD11152 hqpa se administra en forma de una composicion farmaceutica que comprende una de las formulaciones de los Ejemplos denominadas formulaciones G1 y G2 en el presente documento y uno o mas excipientes, diluyentes y/o portadores. Tambien son adecuados para uso en los metodos y usos anteriores son nanopartlculas terapeuticas que comprenden AZD1152 hqpa administradas en forma de una composicion farmaceutica que comprende una formulacion descrita en los Ejemplos como formulaciones G1 y G2 en el presente documento, pero en la que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 1% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos, y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables. Tambien son adecuados para uso en los metodos y usos anteriores son nanopartlculas terapeuticas que comprenden AZD1152 hqpa administradas en forma de una composicion farmaceutica que comprende una formulacion descrita en los Ejemplos como formulaciones G1 y G2 en el presente documento, pero en la que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/-
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aproximadamente 1.5% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables. Tambien son adecuados para uso en los metodos y usos anteriores son nanopartlculas terapeuticas que comprenden AZD11152 hqpa administradas en forma de una composition farmaceutica que comprende una formulation descrita en los Ejemplos como formulaciones G1 y G2 en el presente documento, pero en la que el % en peso de AZD1152 hqpa y/o el % en peso de acido hidrofobo varla en +/- aproximadamente 2% en peso (y por lo tanto la cantidad de pollmero varla en consecuencia) de la descrita en los Ejemplos y uno o mas excipientes, diluyentes y/ o vehlculos farmaceuticamente aceptables. Otras caracterlsticas adicionales de la invention comprenden una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica corresponde a uno de los Ejemplos denominados formulaciones G1 y G2 pero en la que el % en peso de AZD11152 hqpa varla hasta aproximadamente +/- 3% en peso, la cantidad de acido hidrofobo varla en proportion a la cantidad de AZD1152 hqpa correspondiente a las proporciones en las formulaciones ejemplificadas del presente documento, la cantidad de pollmero varla en consecuencia.
Los protocolos terapeuticos de la invencion implican administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de una nanopartlcula contemplada a un individuo sano (es decir, un sujeto que no presenta ningun slntoma de cancer y/o que no ha sido diagnosticado con cancer). Por ejemplo, los individuos sanos pueden ser "inmunizados" con una nanopartlcula contemplada antes del desarrollo del cancer y/o el inicio de los slntomas del cancer; (por ejemplo, pacientes que tienen antecedentes familiares de cancer, pacientes portadores de una o mas mutaciones geneticas asociadas con el desarrollo de cancer, pacientes que tienen un polimorfismo genetico asociado con el desarrollo de cancer, pacientes infectados por un virus asociado con el desarrollo de cancer, pacientes con habitos y/o estilos de vida asociados con el desarrollo de cancer, etc.) pueden ser tratados sustancialmente contemporaneamente con (por ejemplo, dentro de las 48 horas, dentro de las 24 horas o dentro de las 12 horas) del inicio de los slntomas del cancer. Por supuesto, las personas que se sabe que tienen cancer pueden recibir tratamiento inventivo en cualquier momento.
En otras realizaciones, las nanopartlculas descritas pueden usarse para inhibir el crecimiento de celulas cancerosas, por ejemplo, celulas de cancer de pulmon. Tal como se utiliza en el presente documento, el termino “inhibe el crecimiento de celulas cancerosas” o “inhibir el crecimiento de celulas cancerosas” se refiere a cualquier ralentizacion de la tasa de proliferation y/o migration de celulas cancerosas, detention de la proliferation y/o migration de celulas cancerosas o muerte de modo que la tasa de crecimiento de celulas cancerosas se reduce en comparacion con la tasa de crecimiento observada o prevista de una celula de cancer de control no tratada. El termino “inhibe el crecimiento” tambien puede referirse a una reduction en el tamano o desaparicion de una celula o tumor de cancer, as! como a una reduccion en su potencial metastasico. Preferiblemente, tal inhibition a nivel celular puede reducir el tamano, disuadir el crecimiento, reducir la agresividad, o prevenir o inhibir la metastasis de un cancer en un paciente. Los expertos en la tecnica pueden determinar facilmente, mediante cualquiera de una variedad de indicaciones adecuadas, si se inhibe el crecimiento de celulas cancerosas.
La inhibicion del crecimiento de celulas cancerosas se puede evidenciar, por ejemplo, mediante la detencion de celulas cancerosas en una fase particular del ciclo celular, por ejemplo, la detencion en la fase G2/M del ciclo celular. La inhibicion del crecimiento de celulas cancerosas tambien puede evidenciarse mediante medicion directa o indirecta de celulas cancerosas o tamano tumoral. En pacientes con cancer humano, tales mediciones generalmente se hacen usando metodos de generation de imagenes bien conocidos tales como imagenes de resonancia magnetica, tomografla axial computarizada y rayos X. El crecimiento de celulas cancerosas tambien puede determinarse indirectamente, por ejemplo determinando los niveles de antlgeno carcinoembrionario circulante, antlgeno prostatico especlfico u otros antlgenos especlficos del cancer que estan correlacionados con el crecimiento de celulas cancerosas. La inhibicion del crecimiento del cancer tambien se correlaciona generalmente con una supervivencia prolongada y/o un aumento de la salud y bienestar del sujeto.
Tambien se proporcionan en el presente documento metodos para administrar a un paciente una nanopartlcula descrita en el presente documento que incluye un agente activo, en los que, tras la administration a un paciente, dichas nanopartlculas reducen sustancialmente el volumen de distribution y/o reducen sustancialmente la Cmax libre, en comparacion con la administracion del agente solo (es decir, no como una nanopartlcula revelada).
Las nanopartlculas de la presente invencion pueden administrarse a un paciente como terapia unica o pueden administrarse en combination (simultanea o secuencial) con cirugla convencional o radioterapia o quimioterapia. Dicha quimioterapia puede incluir una o mas de las siguientes categorlas de agentes antitumorales:
(i) otros farmacos antiproliferativos/antineoplasicos y sus combinaciones, tal como se usan en oncologla medica, tales como agentes alquilantes (por ejemplo cisplatina, oxaliplatino, carboplatino, ciclofosfamida, mostaza nitrogenada, melfalan, clorambucilo, busulfano, temozolamida y nitrosoureas); antimetabolitos (por ejemplo gemcitabina y antifolatos tales como fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo y tegafur, raltitrexed, metotrexato, citosina arabinosido e hidroxiurea); antibioticos antitumorales (por ejemplo antraciclinas como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina); agentes antimitoticos (por ejemplo, alcaloides de vinca como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorrelbina y taxoides como taxol e inhibidores de taxotera y poloquinasa); inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo epipodofilotoxinas como etoposido y teniposido, amsacrina, topotecan y camptotecina); y otros tales como anticuerpos terapeuticos (por ejemplo rituximab);
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(ii) agentes antihormonales tales como antioestrogenicos (por ejemplo tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno e iodoxifeno), progestagenos (por ejemplo acetato de megestrol), inhibidores de aromatasa (por ejemplo, anastrozol, letrozol, vorazol y exemestano);
(iii) inhibidores de la funcion del factor de crecimiento y sus vlas de senalizacion aguas abajo: se incluyen moduladores de Ab de cualquier factor de crecimiento o dianas del receptor del factor de crecimiento, revisado por Stern et al. (Critical Reviews in Oncology/Hematology, 2005, 54, pp11-29); tambien se incluyen inhibidores de moleculas pequenas de tales dianas, por ejemplo inhibidores de quinasas, los ejemplos incluyen el anticuerpo anti-erbB2 trastuzumab [Herceptin™], el anticuerpo anti-EGFR panitumumab, el anticuerpo anti-EGFR cetuximab [Erbitux, C225] y los inhibidores de la tirosina quinasa incluyendo inhibidores de la familia de receptores erbB, tales como inhibidores de la tirosina quinasa del receptor de la familia del factor de crecimiento epidermico (EGFR/erbB1) tales como gefitinib o erlotinib, inhibidores de la tirosina quinasa erbB2 tales como lapatinib e inhibidores mixtos erb1/2 tales como afatanib; estan disponibles estrategias similares para otras clases de factores de crecimiento y sus receptores, por ejemplo, inhibidores de la familia del factor de crecimiento de hepatocitos o sus receptores incluyendo c-met y ron; inhibidores de la insulina y la familia del factor de crecimiento de la insulina o sus receptores (IGFR, IR) inhibidores de la familia del factor de crecimiento derivado de plaquetas o sus receptores (PDGFR) e inhibidores de la senalizacion mediada por otros tirosina quinasas receptoras tales como c-kit, AnLK y CSF-1R; tambien se incluyen moduladores que dirigen protelnas de senalizacion en la ruta de senalizacion PI3-quinasa, por ejemplo, inhibidores de isoformas de PI3-quinasa tales como PI3K-a/p/y y ser/thr quinasas tales como AKT, mTOR, PDK, SGK, PI4K o PIP5K; tambien se incluyen inhibidores de quinasas de serina/treonina no enumeradas anteriormente, por ejemplo inhibidores de raf tales como vemurafenib, inhibidores de MEK tales como selumetinib (AZD6244), inhibidores de Abl tales como imatinib o nilotinib, inhibidores de Btk tales como ibrutinib, inhibidores de Syk tales como fostamatinib, inhibidores de la enzima de inmunofluorescencia, inhibidores de otras quinasas ser/thr tales como JAKs, STAT e IRAK4, e inhibidores de quinasa dependientes de ciclina;
(iv) moduladores de vlas de senalizacion de dano al ADN, por ejemplo inhibidores de PARP (por ejemplo, Olaparib), inhibidores de ATR o inhibidores ATM y moduladores del ciclo celular, por ejemplo inhibidores de CDK4 y CDK6 (por ejemplo palbociclib);
(v) moduladores de vlas de apoptosis y muerte celular tales como moduladores de la familia Bcl (por ejemplo, ABT- 263/Navitoclax, ABT-199);
(vi) agentes antiangiogenicos tales como los que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular [por ejemplo, el anticuerpo antivascular del factor de crecimiento de celulas endoteliales bevacizumab (AvastinTM) y por ejemplo, un inhibidor de la tirosina quinasa del receptor VEGF tal como sorafenib, axitinib, pazopanib, sunitinib y vandetanib (y compuestos que funcionan por otros mecanismos (por ejemplo linomida, inhibidores de la funcion de la integrina avp3 y angiostatina)];
(vii) agentes daninos vasculares, tales como Combretastatina A4;
(viii) agentes antiinvasion, por ejemplo inhibidores de la familia de quinasas c-Src como (dasatinib, J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) y bosutinib (SKI-606), e inhibidores de metaloproteinasas como marimastat, inhibidores de la funcion del receptor del activador del plasminogeno uroquinasa o anticuerpos contra la heparanasa;
(ix) metodologlas de inmunoterapia, incluyendo por ejemplo metodologlas ex vivo e in vivo para aumentar la inmunogenicidad de celulas tumorales de pacientes, tales como transfeccion con citoquinas tales como interleucina 2, interleucina 4 o factor estimulante de colonias de granulocitos-macrofagos, metodologlas para disminuir T anergia de celulas, se aproxima usando celulas inmunitarias transfectadas tales como celulas dendrlticas transfectadas con citoquinas, metodologlas que usan llneas de celulas tumorales transfectadas con citocinas y metodologlas que usan anticuerpos antiidiotfpicos. Ejemplos especlficos incluyen anticuerpos monoclonales dirigidos a PD-1 (por ejemplo, BMS-936558), PDL-1 (por ejemplo MEDI4736 vease US 8,779,108) o CTLA4 (por ejemplo ipilimumab y tremelimumab);
(x) terapias basadas en antisentido o ARNi, por ejemplo las que estan dirigidas a las dianas listadas.
(xi) metodologlas de terapia genica, incluyendo por ejemplo metodologlas para reemplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 o BRCA2 aberrante, gDePT (enzima dirigida por enzimas profarmacos) metodologlas tales como las que utilizan citosina desaminasa, timidina quinasa o enzima nitrorreductasa bacteriana y metodologlas para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o la radioterapia, como la terapia genica de resistencia a multiples farmacos.
En una realizacion se proporciona una combinacion adecuada para su uso en el tratamiento de cancer que comprende nanopartlculas de la presente invencion como se define en el presente documento y otro agente antitumoral seleccionado entre i-a), iv-a) y ix-a) como se define a continuacion, en la que i-a) es un subconjunto de i) anterior, iv- a) es un subconjunto de iv) anterior y ix-a) es un subconjunto de ix) anterior, y en el que:
i-a) comprende reglmenes quimioterapeuticos estandar, que incluyen pero no se limitan a reemplazar o aumentar quimioterapias antimitoticas en tumores solidos y canceres hematologicos, tales como taxanos y alcaloides vinca;
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iv-a) comprende terapias que se dirigen a la respuesta de dano al ADN, incluyendo, pero sin limitarse a, agentes que inhiben la reparacion del dano del ADN y el ciclo celular; y
ix-a) comprende terapias mediadas por inmunidad, incluyendo, pero sin limitarse a ellas, inhibidores del bloqueo de control inmunitario tales como terapias dirigidas a CTLA4, PD-1 y PDL-1.
De acuerdo con este aspecto de la invencion se proporciona una combination adecuada para su uso en el tratamiento de cancer que comprende nanopartlculas de la presente invencion como se define en el presente documento y otro agente antitumoral, en particular cualquiera de los agentes antitumorales enumerados en (i)-(xi) anterior. En particular, el agente antitumoral indicado en (i)-(xi) anterior es el estandar de atencion para el cancer especlfico por tratar; el experto en la tecnica comprendera el significado de "estandar de atencion".
Por lo tanto, en un aspecto adicional de la invencion, se proporcionan nanopartlculas de la presente invencion como se describe en el presente documento en combinacion con otro agente antitumoral, en particular un agente antitumoral seleccionado entre uno de los listados en (i)-(xi), tal como i-a), iv-a) o ix-a), en lo que antecede. Por ejemplo, las nanopartlculas de la invencion para uso en la combinacion con un agente antitumoral seleccionado entre uno de los listados en (i)-(xi) anterior, tal como i-a), iv-a) o ix-a), se pueden proporcionar como una composition farmaceutica seleccionada de 1) a 15) siguiente:
1) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende AZD1152 hqpa y acido pamoico;
2) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende AZD1152 hqpa, un pollmero adecuado y acido pamoico;
3) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende AZD1152 hqpa, un copollmero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol y ademas comprende acido pamoico;
4) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
5) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 90 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD11152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
6) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 35 a aproximadamente 94 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 1 a aproximadamente 35 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD11152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;
7) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 55 a aproximadamente 80 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de acido pamoico y aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD11152 hqpa;
8) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en el que cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 65 a aproximadamente 76 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(lactico) acido-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, aproximadamente 9 a aproximadamente 15 por ciento en
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peso de acido pamoico y aproximadamente 15 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD11152 hqpa;
9) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlcuias terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular numerico medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol);
10) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol);
11) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y una mezcla de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico;
12) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y el producto obtenido por interaccion de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD11152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico;
13) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, en donde cada nanopartlcula terapeutica comprende un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa poli(etilen)glicol) y un par de iones hidrofobos formado entre aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso (de la nanopartlcula) de AZD1152 hqpa y aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso (de la nanopartlcula) de acido pamoico;
14) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15% en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que menos 20% de la hqpa AZD11152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C. Convenientemente, la liberacion de AZD1152 hqpa de la nanopartlcula se mide utilizando el metodo descrito anteriormente en este documento.
15) una composicion farmaceutica que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables, donde cada nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, aproximadamente 7 a aproximadamente 15 por ciento en peso de acido pamoico y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol (en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol); en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlculas se hacen mediante
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un proceso que comprende las siguientes etapas:
1) combinar una primera fase organica (que comprende un copollmero PLA-PEG 16:5, AZD 1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo esta presente en una relacion molar de aproximadamente 1:3.6 y el acido pamoico y AZD11152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa) con una primera solucion acuosa (que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) (por ejemplo en la forma comercializada bajo el nombre comercial Brim®5100), en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de aproximadamente 5.5:1;
2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion (tal como 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo);
4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5 (tal como un regulador fosfato 0.17M) en el que la relacion de la segunda solucion acuosa a la emulsion esta entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 10:1, tal como aproximadamente 3:1;
7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo (tal como Tween®80, por ejemplo una solucion de Tween®80 al 35% p/p en agua) a la solucion de detencion (por ejemplo a una proporcion de aproximadamente 20:1 de Tween®80 al farmaco por peso);
8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
Otras composiciones farmaceuticas adecuadas que comprenden AZD1152 hqpa en una nanopartlcula descrita en el presente documento tambien pueden usarse en las combinaciones anteriores.
Otros aspectos de la invention se exponen en las siguientes caracterlsticas:
1. Una nanopartlcula terapeutica que comprende:
de aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol o un copollmero dibloque de poli(acido lactico-acido coglicolico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; y
aproximadamente 0.2 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9.
3. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.75 a aproximadamente 0.85.
4. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1, 2 o 3, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
5. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1, 2 o 3, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
6. La nanopartlcula terapeutica de cualquier caracterlstica precedente, en la que el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa de poli(etilen)glicol.
7. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 6, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un numero de peso molecular medio de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
8. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-6, que comprende aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero.
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9. La nanopartlcuia terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-8, que comprende ademas un acido sustancialmente hidrofobo.

10. La nanopartlcuia terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-8, que comprende ademas de
aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.

11. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-8, que comprende ademas de
aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.

12. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-8, que comprende ademas de
aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.
13. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9 a 12, en la que el acido hidrofobo es un acido biliar.
14. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 13, en la que el acido biliar es acido desoxicolico, acido colico o una mezcla de los mismos.
15. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9 a 12, en la que el acido hidrofobo es acido dioctilsulfosucclnico.
16. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9 a 12, en la que el acido hidrofobo es acido pamoico.
17. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9-12, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo al agente terapeutico es de aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 1.6:1, en donde el acido es acido desoxicolico, acido colico o una mezcla de acido colico y acido desoxicolico.
18. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9-12, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo a AZD1152 hqpa es de aproximadamente 1.3:1 a aproximadamente 1.6:1, donde el acido es una mezcla de acido colico y acido desoxicolico.
19. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9-12, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo a AZD1152 hqpa es de aproximadamente 0.9:1 a aproximadamente 1.1:1, en donde el acido es acido dioctilsulfosucclnico.
20. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9-15, en la que un pKa de AZD1152 hqpa es al menos aproximadamente 1.0 unidades pKa mayores que un pKa del acido hidrofobo.
21. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9-19, en la que el acido sustancialmente hidrofobo y AZD1152 hqpa forman un par de iones hidrofobos en la nanopartlcula terapeutica.
22. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-21, que comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
23. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-21, que comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
24. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de un agente terapeutico que es AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado del grupo que consiste en acido desoxicolico, acido colico y acido dioctilsulfosucclnico; o de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de una mezcla de acidos sustancialmente hidrofobos que son acido desoxicolico y acido colico.
25. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de un agente terapeutico que es AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado del grupo que consiste en acido desoxicolico, acido colico y acido dioctilsulfosucclnico; o de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de una mezcla de acidos sustancialmente hidrofobos que son acido desoxicolico y acido colico.
26. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 35 a aproximadamente 94.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; aproximadamente 0.05 a
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aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado del grupo que consiste en acido desoxicolico, acido colico (o una mezcla de acido colico y desoxicolico), acido dioctilsulfosucclnico y acido
pamoico; y de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal
farmaceuticamente aceptable del mismo.
27. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 65 a aproximadamente 90 por ciento en peso
de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado del grupo que consiste en acido desoxicolico, acido colico (o una mezcla de acido colico y desoxicolico), acido dioctilsulfosucclnico y acido
pamoico; y de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal
farmaceuticamente aceptable del mismo.
28. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 24, caracterlstica 25, caracterlstica 26 o caracterlstica 27 en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9.
29. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 24, caracterlstica 25, caracterlstica 26 o caracterlstica 27 en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.75 a aproximadamente 0.85.
30. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 24, caracterlstica 25, caracterlstica 26 o caracterlstica 27, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
31. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 24, caracterlstica 25, caracterlstica 26 o caracterlstica 27 en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
32. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 24 a 31, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa de poli(etilen)glicol.
33. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 24 a 31, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa polietilenglicol.
34. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 24-33, que comprende aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero.
35. Una composition farmaceuticamente aceptable que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas de cualquiera de las caracterlsticas 1-34 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
36. Un metodo para tratar cancer en un paciente que lo necesite, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion que comprende la nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1-34.
37. El metodo de la caracterlstica 36, en el que el cancer es cancer de pulmon.
38. El metodo de la caracterlstica 36, en el que el cancer es una leucemia.
39. El metodo de la caracterlstica 36, en el que el cancer es cancer colorrectal.
Otros aspectos de la invention se exponen en las siguientes caracterlsticas:
1a. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol o un copollmero dibloque de poli(acido lactico-acido coglicolico)-poli(etilen)glicol, la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; y aproximadamente 0.2 a aproximadamente 30 por ciento en peso de AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9.
3a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.75 a aproximadamente
0.85.
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4a. La nanopartlcuia terapeutica de la caracterlstica 1a, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
5a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1a, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
6a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 1a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa polietilenglicol.
7a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 6a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
8a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-6a, que comprende aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero.
9a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-8a, que comprende ademas un acido sustancialmente hidrofobo.

10a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-8a, que comprende ademas de
aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.

11a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-8a, que comprende ademas de
aproximadamente 5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.

12a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-8a, que comprende ademas de
aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo.
13a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-12a, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo al agente terapeutico es de aproximadamente 0.5:1 a aproximadamente 1.6:1, donde el acido es acido desoxicolico, acido colico o una mezcla de acido colico acido y acido desoxicolico.
14a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-12a, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo al agente terapeutico es de aproximadamente 1.3:1 a aproximadamente 1.6:1, en la que el acido es una mezcla de acido colico y acido desoxicolico.
15a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-12a, en la que la relacion molar del acido sustancialmente hidrofobo al agente terapeutico es de aproximadamente 0.9:1 a aproximadamente 1.1:1, en donde el acido es acido dioctilsulfosucclnico.
16a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-15a, en la que un pKa del agente terapeutico es al menos aproximadamente 1.0 unidades pKa mayores que un pKa del acido hidrofobo.
17a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-16a, en la que el acido sustancialmente hidrofobo y el agente terapeutico forman un par de iones hidrofobos en la nanopartlcula terapeutica.
18a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-17a, en la que el acido hidrofobo es un acido biliar.
19a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 18a, en la que el acido biliar es acido desoxicolico, acido colico o una mezcla de los mismos.
20a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 9a-18a, en la que el acido hidrofobo es acido dioctilsulfosucclnico.
21a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-20a, que comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico.
22a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-20a, que comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento en peso del agente terapeutico.
23a. Una nanopartlcula terapeutica que comprende: aproximadamente 50 a aproximadamente 99.75 por ciento en peso de un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol; de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso de un agente terapeutico que es AZD1152 hqpa o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de un acido sustancialmente hidrofobo seleccionado del grupo que consiste en acido desoxicolico, acido colico y acido
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dioctilsulfosuccinico; o de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 35 por ciento en peso de una mezcla de acidos sustancialmente hidrofobos que son acido desoxicolico y acido colico.
24a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 23a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular medio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.7 a aproximadamente 0.9.
25a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 23a, en la que el copollmero poli(acido lacti co)-poli(etilen)glicol tiene una fraccion de peso molecular promedio de acido poli(lactico) de aproximadamente 0.75 a aproximadamente
0.85.
26a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 23a, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
27a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 23a, en la que la nanopartlcula terapeutica comprende de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol.
28a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 23a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de aproximadamente 15 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 4 kDa a aproximadamente 6 kDa polietilenglicol.
29a. La nanopartlcula terapeutica de la caracterlstica 28a, en la que el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol.
30a. La nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 23a-29a, que comprende aproximadamente 65 por ciento en peso a aproximadamente 85 por ciento en peso del copollmero.
31a. Una composicion farmaceuticamente aceptable que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas de cualquiera de las caracterlsticas 1a-30a y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
32a. Un metodo para tratar el cancer en un paciente que lo necesite, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion que comprende la nanopartlcula terapeutica de cualquiera de las caracterlsticas 1a-30a.
33a. El metodo de la caracterlstica 32a, en el que el cancer es cancer de pulmon.
34a. El metodo de la caracterlstica 32a, en el que el cancer es una leucemia.
35a. El metodo de la caracterlstica 32a, en el que el cancer es cancer colorrectal.
Ejemplos
La invencion que ahora se describe en terminos generales, se entendera mas facilmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos que se incluyen meramente con fines de ilustracion de ciertos aspectos y realizaciones, y no se pretende que limiten la invencion de ninguna manera.
Cada uno de los siguientes ejemplos proporciona un aspecto separado, independiente, de la invencion. En particular, las formulaciones descritas en los siguientes ejemplos y los metodos descritos para prepararlos comprenden aspectos independientes de la invencion.
El AZD1152 hqpa puede realizarse como se describe en los documentos WO2004/058781 o WO2007/132210. Abreviaturas:
Se pueden usar las siguientes abreviaturas.
EA Acetato de etilo BA Alcohol bencllico DI desionizada
TFF Filtracion de flujo tangencial TFA Acido trifluoroacetico Lyo/horno Horno de Li ofilizacion
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DMSO Dimetilsulfoxido
scid Inmunodeficiente severo comprometido
El tensioactivo Brij®100 Brij®S 100 es un eter estearllico de polioxietileno (100) comercialmente disponible con un peso molecular medio de aproximadamente 4670, resumenes qulmicos (CAS) numero 9005-00-9
Tween®80 Un monooleato de polioxietilen sorbitan comercialmente disponible, tambien conocido como polisorbato 80, CAS numero 9005-65-6
Span®80 Un monooleato de sorbitan comercialmente disponible, CAS numero 1338-43-8
Para evitar dudas, cuando se hace referencia a "pollmero-PEG" en los siguientes ejemplos, significa copollmero de PLA-PEG en el que el copollmero tiene un peso molecular medio numerico de aproximadamente 16 kDa de poli(acido lactico) y un peso molecular medio numerico de aproximadamente 5 kDa de poli(etilen)glicol. Dichos pollmeros estan comercialmente disponibles o pueden fabricarse por metodos conocidos en la tecnica. Tales pollmeros se usan, por ejemplo, en WO2010/005721.
Ejemplo 1: Preparacion de nanopartlculas terapeuticas que contienen 2-(3-((7-(3-(etil(2-hidroxietil)amino)propoxi) quinazolin-4-il) amino)-1H-pirazol-5-il)-N-(3-fluorofenil)acetamida usando un proceso de nanoemulsion
Este ejemplo demuestra procedimientos para preparar nanopartlculas que contienen AZD1152 hqpa.
Procedimiento de preparacion de nanopartlculas de acido desoxicolico
1. Preparacion de la solucion de pollmero
1.1 A un vial de vidrio de 20 mL anadir pollmero-PEG, 350 mg.
1.2 Anadir 3.15 g de acetato de etilo a un vial de vidrio y agitar con vortex durante una noche para obtener una solucion de pollmero-EA.
2. Preparacion de la solucion de farmaco
2.1 Para hacer acido desoxicolico al 9%/BA, anadir 1.8 g de acido desoxicolico en 18.2 g de BA en un vial de centelleo de 20 ml con base en la tabla de recetas.
2.2 Calentar la solucion a 80°C durante 30 minutos.
2.3 Pesar 150 mg de agente terapeutico en vial de centelleo de 20 mL.
2.4 Anadir mas de un 9% de acido desoxicolico al farmaco y dejar a 80°C durante 15-30 minutos para obtener una solucion de farmaco clara.
2.5 Justo antes de la formulacion, combine el farmaco y la solucion de pollmero.
3. Preparacion de solucion acuosa:
o colato de sodio al 0.475%, alcohol bencllico al 4% en agua.
3.1 En una botella de 1L, anadir 4.75 g de colato de sodio y 955.25 g de agua DI y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
3.2 Anadir 40 g de alcohol bencllico a colato de sodio/agua y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
4. Formation de la emulsion. La relation entre la fase acuosa y la fase organica es de 5:1
4.1 Verter la fase organica en una solucion acuosa y homogeneizar utilizando un homogeneizador manual rotor/estator durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa.
4.2 Alimentar solucion a traves de homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a ~11.000 psi en el manometro para 1 pase discreto para formar nanoemulsion.
5. Formacion de nanopartlculas
Verter la emulsion en Quench (D.I. agua) a <5°C mientras se agita sobre la placa de agitacion. La relacion de Quench a emulsion es de 10:1.
6. Anadir Tween®80 al 35% (p/p) en agua para inactivar a razon de 100:1 de Tween®80 en peso de farmaco.
7. Concentrar las nanopartlculas a traves de TFF
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7.1 Concentrar el detenido en TFF con un casete de 300 kDa Pall (2 x 0.1 m2 de membranas) hasta ~200 mL.
7.2 Diafiltrar ~20 diavolumenes (4 litros) usando agua DI frla.
7.3 Reducir el volumen a un volumen mlnimo.
7.4 Anadir 100 mL de agua frla al recipiente y bombear a traves de la membrana para enjuagar.
7.5 Recoger el material en un vial de vidrio, ~100 mL.
8. Determinacion de la concentracion de solidos de la suspension final no filtrada:
8.1 A un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de suspension final y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
8.2 Determinar el peso de las nanopartlculas en el volumen de la suspension seca.
9. Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final filtrada de 0.45 pm:
9.1 Filtrar aproximadamente una porcion de la muestra de suspension final antes de la adicion de sacarosa a traves de un filtro de jeringa de 0.45 pm.
9.2 En un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de muestra filtrada y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
10. Anadir 1 parte de sacarosa a las 9 partes finales de la muestra de suspension para alcanzar el 10% de sacarosa.
11. Congelar la muestra restante de la suspension final sin filtrar con sacarosa.
Procedimiento de preparacion de nanopartlculas de Docusato
1. Preparacion de la solucion de pollmero
1.1 A un vial de vidrio de 20 mL anadir pollmero-PEG, 750 mg.
1.2 Se anaden 2.75 g de acetato de etilo al vial de vidrio y se agita durante la noche para dar una solucion de pollmero- EA.
2. Preparacion de la solucion de farmaco
2.1 Para obtener 30% de docusato/alcohol bencllico ("30% docusato/BA"), utilizar la Tabla 1.
2.2 Pesar 250 mg de agente terapeutico en vial de centelleo de 20 mL.
2.3 Agregar mas de 690 mg de docusato al 30% al farmaco y agitar durante mas de 1 hora para obtener una solucion de farmaco clara.
2.4 Justo antes de la formulacion, agregar el medicamento y la solucion de pollmero.
Tabla 1. Preparacion de la solucion de docusato/BA.
Concentracion deseada (p/p) Total Docusato + solucion BA gram Docusato-sodio Acido requerido (g) BA por anadir (g) HCl (g) adicion (5N) salmuera requerida (g)
Docusato 30% / en BA
30.00% 40.00 12.00 28.00 16.20 18.67
3. Preparacion de solucion acuosa:
• de colato de sodio al 0.475%, alcohol bencllico 4% en agua.
3.1 En una botella de 1L, anadir 4.75 g de colato de sodio y 955.25 g de agua DI y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
3.2 Anadir 40 g de alcohol bencllico a colato de sodio/agua y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
5
10
15
20
25
30
35
40
4. Formation de la emulsion. La relation entre la fase acuosa y la fase organica es de 5:1
4.1 Verter la fase organica en una solution acuosa y homogeneizar utilizando un homogeneizador manual rotor/estator durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa.
4.2 Alimentar la solucion a traves de homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a ~11.000 psi en el manometro para 1 pase discreto para formar nanoemulsion.
5. Formacion de nanopartlculas
Verter la emulsion en Quench (D.I. agua) a <5°C mientras se agita sobre la placa de agitation. La relacion de Quench a emulsion es de 10:1.
6. Anadir Tween®80 al 35% (p/p) en agua para inactivar a razon de 100:1 de Tween®80 en peso de farmaco.
7. Concentrar las nanopartlculas a traves de TFF
7.1 Concentrar el detenido en TFF con un casete de 300 kDa Pall (2 x 0.1 m2 de membranas) hasta ~200 mL.
7.2 Diafiltrar -20 diavolumenes (4 litros) usando agua DI frla.
7.3 Reducir el volumen a un volumen mlnimo.
7.4 Anadir 100 mL de agua frla al recipiente y bombear a traves de la membrana para enjuagar.
7.5 Recoger el material en un vial de vidrio, ~100 mL.
8. Determination de la concentration de solidos de la suspension final no filtrada:
8.1 A un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de suspension final y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
8.2 Determinar el peso de las nanopartlculas en el volumen de la suspension seca.
9. Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final filtrada de 0.45 pm:
9.1 Filtrar aproximadamente una portion de la muestra de suspension final antes de la adicion de sacarosa a traves de un filtro de jeringa de 0.45 pm.
9.2 En un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de muestra filtrada y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
10. Anadir 1 parte de sacarosa a las 9 partes finales de la muestra de suspension para alcanzar el 10% de sacarosa.
11. Congelar la muestra restante de la suspension final sin filtrar con sacarosa.
En una variacion del procedimiento anterior, se puede usar docusato de sodio en lugar del colato de sodio en la etapa
3.1 anterior.
Ejemplo 2: Caracterizacion de nanopartlculas terapeuticas que contienen AZD1152 hqpa
Este ejemplo demuestra que la coencapsulacion con contraiones hidrofobos tales como acido desoxicolico y docusato mejoro mucho la carga del farmaco (de ~3% a hasta ~15% de carga de farmaco). La liberation de agente terapeutico a partir de nanopartlculas fue sustancialmente mas lenta cuando se formulo como un par de iones hidrofobos en comparacion con la formulation de control.
Formulaciones de Control
Las formulaciones de control se fabricaron como nanopartlculas planas ("NPs") sin contraiones. Se prepararon NPs utilizando matriz polimerica PLA-PEG (16 kDa PLA/5 kDa PEG) ("16/5 PLA-PEG") sin excipientes adicionales.
El agente terapeutico se disolvio en alcohol bencllico (“BA”) o BA/agua para formar la solucion del farmaco, y la solucion polimerica en acetato de etilo ("EA") se vertio en la solucion del farmaco justo antes de anadirla a una solucion acuosa para homogeneizacion. Esta formulacion de control da como resultado nanopartlculas con carga de farmaco relativamente baja (~3%), alto estallido (~20%) y liberacion rapida (>50% a las 4 horas). (Vease Tabla 1 y Figura 3). Estos resultados no son inusuales para APIs con PM relativamente bajo (<600 kDa) y/o menor hidrofobicidad (log P <3).
Tabla 2. Formulacion de nanopartlculas de control.
Lote #
Carga teorica de farmaco Concentracion de solidos en fase organica Carga % tamano (nm)
16/5 PLA-PEG, 7.5% agua en BA solamente
20 7% 3.17 128.9 (0.172)
Formulaciones de acido desoxicolico
Las formulaciones de acido desoxicolico se prepararon de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 usando diversas cantidades de acido desoxicolico en la fase organica como se muestra en la Tabla 3. Se prepararon 5 nanopartlculas utilizando 16/5 PLA-PEG.
Tabla 3. Formulaciones de nanopartlculas de acido desoxicolico.
Acido % en peso Masa total (g) BA Acido Desoxicolico
8% de acido Desoxicolico en BA
8 20 18.4g 16g
9% de acido Desoxicolico en BA
9 20 18.2g 18g
10% de acido Desoxicolico en BA
10 20 18.0g 2.0g
La Tabla 4 a continuacion proporciona datos de caracterizacion para formulaciones de acido desoxicolico. Como esta 10 evidenciado por los datos, la presencia del acido desoxicolico aumenta en gran medida la carga de API en las formulaciones de nanopartlculas finales en comparacion con las nanopartlculas de control.
Tabla 4. Datos de caracterizacion para formulaciones que contienen acido desoxicolico.
Lote #
Carga teorica del farmaco (% en peso) Fase organica [solidos]1 (% en peso) Alcohol bencllico [acido desoxicolico] (% en peso) Acido: Proporcion de adicion de farmaco (mol: mol) Porcion de acetato de etilo de disolventes organicos (% en peso) Carga real de farmaco (% en peso) Tamano medio por DLS (nm)
254 14-1
20 15% 9.0 0.99 70 10% 99.6
254 20-1
20 15% 9.0 0.99 70 9.90% 105.6
254 14-2
20 15% 8.0 1.02 65 7.30% 84.5
254 20-2
20 15% 8.0 1.02 65 8.20% 127.7
254 20-3
30 15% 13.5 0.99 70 10.00% 104.7
254 20-4
20 15% 8.0 0.99 70 9.40% 102.3
Lote #
Carga teorica del farmaco (% en peso) Fase organica [solidos]1 (% en peso) Alcohol bencllico [acido desoxicolico] (% en peso) Acido: Proporcion de adicion de farmaco (mol: mol) Porcion de acetato de etilo de disolventes organicos (% en peso) Carga real de farmaco (% en peso) Tamano medio por DLS (nm)
254 20-5
25 10% 7.0 0.98 70 10.50% 135.4
254 20-6
25 10% 7.0 0.98 70 10.00% 105.4
254 20-7
30 10% 9.0 1.05 70 11.70% 110.3
254 20-8
30 10% 9.0 1.05 70 11.20% 112.6
254 20-9
30 10% 10.0 0.97 75 11.40% 107.6
254 20 10
30 10% 10.0 0.97 75 11.20% 107.4
254 32-1
30 10% 9.0 1.05 70 9.60% 111.4
254 34-1
35 10% 8.0 1.06 60 6.40% 136.8
254 34-2
35 10% 8.0 1.06 60 7.90% 119.4
254 34-3
35 12.5% 8.0 1.03 50 7.40% 111.1
254 38-1
35 10% 8.0 1.06 60 7.40% 117.6
254 38-2
35 10% 8.0 1.06 60 7.80% 117.3
254 38-3
35 10% 8.0 1.06 60 7.70% 124.0
254 38-4
35 10% 8.0 1.06 60 8.70% 120.9
254 38-5
30 15% 10.0 0.98 60 7.60% 141.1
254 38-6
30 15% 10.0 0.98 60 9.10% 121.1
254 38-7
30 15% 10.0 0.98 60 8.30% 150.3
Lote #
Carga teorica del farmaco (% en peso) Fase organica [solidos]1 (% en peso) Alcohol bencllico [acido desoxicolico] (% en peso) Acido: Proporcion de adicion de farmaco (mol: mol) Porcion de acetato de etilo de disolventes organicos (% en peso) Carga real de farmaco (% en peso) Tamano medio por DLS (nm)
254 38-8
30 15% 10.0 0.98 60 10.40% 127.0
1 Este valor =% en peso de concentracion de farmaco + pollmero dividido por solidos organicos y no incluye el acido desoxicolico para estos lotes.
DLS es dispersion dinamica de luz.
La figura 4 muestra la liberacion del agente terapeutico in vitro que muestra una liberacion controlada y lenta/sostenida 5 de farmacos de NP de acido desoxicolico en comparacion con el de los NPs de control sin contraiones de acido desoxicolico.
La tabla siguiente describe la composicion (en Porcentaje en peso) de cada componente en la partlcula de una formulacion particular de nanopartlculas, a la que se hace referencia en el presente documento como "Formulacion F1".
Componente
Porcentaje en peso de la nanopartlcula
16/5 PLA-PEG
75%
Acido desoxicolico
9%
Acido colico
6%
AZD1152 hqpa
10%
10
Formulaciones con docusato
Se convirtio el docusato de sodio (por ejemplo, disponible como "Aerosol OT" o "AOT") en forma acida (es decir, acido dioctilsulfosucclnico) usando un metodo de conversion in situ antes de ser mezclado con el farmaco. Se disolvio el docusato de sodio en BA y se anadio solucion concentrada de HCl a proporciones controladas de HCl/docusato. La 15 mezcla se agito en vortex para facilitar el intercambio de protones y la conversion de la sal sodica en forma de acido libre. A continuacion, se anadio solucion saturada de cloruro de sodio y se mezclo mediante agitacion con vortex para extraer agua y sal de cloruro de sodio formada en la mezcla BA. Despues de mezclar, la muestra se incubo a temperatura ambiente para separacion de fases. Con el tiempo, dos capas se desarrollaron gradualmente con BA en la parte superior y la capa acuosa en la parte inferior. La capa superior se aspiro como disolvente de farmaco que 20 contenla contraion docusato. Las concentraciones de docusato acido en BA se informaron como concentracion de docusato de sodio en BA. Las formulaciones de nanopartlculas de Docusato se prepararon usando el procedimiento del Ejemplo 1 con pollmero 16/5 PLA/PEG como para la formulacion de acido desoxicolico. Las preparaciones tlpicas de docusato acido se enumeran en la Tabla 5.
Tabla 5. Preparaciones tlpicas de solucion de docusato de sodio protonado (DSS) en BA (como disolvente de farmaco).
DSS % en BA
Material Porcentaje Cantidad calculada Relacion molar de HCl/docusato
Masa (g)
mMol
10%
BA 90% 60 - -
DSS% en BA
Material Porcentaje Cantidad calculada Relacion molar de HCl/docusato
Masa (g)
mMol
Docusato
10% 6.7 15 3.33
5N HCl
- 10 50
NaCl saturado - 20 - -
15%
BA 85% 60 - -
docusato
15% 10.6 23.8 4.20
5N HCl
- 20 100
NaCl saturado
- 40 - -
20%
BA 80% 60 - -
docusato
20% 15 33.7 5.93
5N HCl
- 40 200
NaCl saturado
- 80 - -
La Tabla 6 a continuacion proporciona datos de caracterizacion para las formulaciones de docusato representativas. Sin desear limitarse por ninguna teoria, se cree que la presencia del contraion docusato sirve para potenciar la 5 encapsulacion y carga del farmaco por el proceso de apareamiento de iones hidrofobos (HIP).
Tabla 6. Datos de caracterizacion para formulaciones que contienen acido docusato.
Lote #
Carga teorica de farmaco (% en peso) Fase organica [solidos] (% en peso) [Docusato] % Acido: Proporcion de adicion de farmaco (mol:mol) %EA Carga del farmaco % en peso Tamano medio (nm)
250 80-5
20 18 20 1.09 80 8.89% 100.2
250 80-6:
20 18 20 1.09 80 10.95% 96.6
250 80-7:
30 18 20 1.09 70 13.75% 113.2
250 80-8:
30 18 20 1.09 70 16.25% 132.1
250 110 1:
25 22.5 30 0.99 80 13.80% 116.8
Lote #
Carga teorica de farmaco (% en peso) Fase organica [solidos] (% en peso) [Docusato] % Acido: Proporcion de adicion de farmaco (mol:mol) %EA Carga del farmaco % en peso Tamano medio (nm)
250 110 2:
25 22.5 30 0.99 80 15.22% 135.6
250 110 3:
20 18 20 1.09 80 9.92% 117.4
250 110 4:
20 18 20 1.09 80 11.45% 139.2
250 110 5:
20 18 20 1.09 80 10.52% 114.8
250 110 6:
25 25 25 0.90 75 7.17% 104.8
250 110 7:
25 25 25 0.90 75 6.01% 92.7
250 110 1:
25 22.5 30 0.99 80 13.80% 116.8
250 130 1:
25 22.5 30 0.99 80 8.49% 104
250 130 2:
25 22.5 30 1.06 80 10.10% 125
250 130 3:
35 22.5 30 1.06 70 13.39% 120.8
250 130 4:
35 22.5 30 1.06 70 14.41% 124.7
250 130 6:
35 22.5 30 1.06 70 4.61% 85
La figura 5 muestra la liberacion de farmacos terapeuticos in vitro que muestra una liberacion controlada y lenta/sostenida de farmacos a partir de NPs de docusato acido comparados con los NPs de control sin contraiones docusato.
5 La tabla siguiente describe la composicion (en porcentaje en peso) de cada componente en la partlcula de una
5
10
15
20
25
formulacion particular de nanopartlcuias, a la que se hace referencia en el presente documento como "Formulacion F2".
Componente
Porcentaje en peso de la nanopartlcula
16/5 PLA-PEG
80%
Docusato
10%
AZD1152 hqpa
10%
Ejemplo de referencia 3
A continuacion se describe una formulacion que contiene acido colico. Esta formulacion se denomina en el presente documento como "Formulacion E".
Componente
Porcentaje en peso de la nanopartlcula
AZD1152 hqpa
5
PLA-PEG 16/5
90
Acido colico
5
Procedimiento de preparacion de nanopartlculas de acido colico
1. Preparacion de la solucion de pollmero
1.1 A un vial de vidrio de 20 mL anadir pollmero-PEG, 350 mg.
1.2 Anadir 8.11 g de acetato de etilo al vial de vidrio y agitar durante una noche para dar una solucion de pollmero- EA.
2. Preparacion de la solucion de farmaco
2.1 Para obtener TFA/BA al 3%, agregar 63 mg de TFA a 2.03 g de BA en un vial de centelleo de 20 ml con base en la tabla de recetas
2.2 Pesar 150 mg de agente terapeutico en vial de centelleo de 20 mL.
2.3 Anadir mas de 3% de TFA en BA al farmaco y mezclar durante 15-30 minutos para obtener una solucion de farmaco clara.
2.4 Antes de la formulacion, combinar el farmaco y la solucion de pollmero.
3. Preparacion de solucion acuosa:
o colato de sodio al 0.52%, alcohol bencllico al 4% en agua.
3.1 En una botella de 1 litro, anadir 5.2 g de colato de sodio y 954.8 g de agua desionizada y mezclar en una placa de agitacion hasta que se disuelva.
3.2 Anadir 40 g de alcohol bencllico a colato de sodio/agua y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
4. Formation de la emulsion. La relation de la fase acuosa a la fase organica es de 5:1
4.1 Verter la fase organica en una solucion acuosa y homogeneizar utilizando un homogeneizador manual rotor/estator durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa.
4.2 Alimentar solucion a traves de homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a ~11.000 psi en el manometro para 1 pases discretos para formar nanoemulsion.
5
10
15
20
25
30
35
5. Formation de nanopartlcuias
Verter ia emulsion en Quench (D.I. agua) a <5°C mientras se agita sobre ia piaca de agitation. La relacion de Quench a emulsion es de 10:1.
6. Anadir Tween®80 ai 35% (p/p) en agua para inactivar a razon de 100:1 de Tween®80 en peso de farmaco.
7. Concentrar ias nanopartlcuias a traves de TFF
7.1 Concentrar ei detenido en TFF con un casete de 300 kDa Paii (2 x 0.1 m2 de membranas) hasta ~200 mL.
7.2 Diafiitrar ~20 diavoiumenes (4 iitros) usando agua DI frla.
7.3 Reducir ei voiumen a un voiumen mlnimo.
7.4 Anadir 100 mL de agua frla ai recipiente y bombear a traves de ia membrana para enjuagar.
7.5 Recoger ei materiai en un viai de vidrio, ~100 mL.
8. Determination de ia concentration de soiidos de ia suspension finai no fiitrada:
8.1 A un viai de centeiieo tarado de 20 mL, anadir un voiumen de suspension finai y secar ai vaclo sobre ei horno de iiofiiizacion.
8.2 Determinar ei peso de ias nanopartlcuias en ei voiumen de ia suspension seca.
9. Determinacion de ia concentracion de soiidos de suspension finai fiitrada de 0.45 pm:
9.1 Fiitrar aproximadamente una portion de ia muestra de suspension finai antes de ia adicion de sacarosa a traves de un fiitro de jeringa de 0.45 pm.
9.2 En un viai de centeiieo tarado de 20 mL, anadir un voiumen de muestra fiitrada y secar ai vaclo sobre ei horno de iiofiiizacion.
10. Anadir 1 parte de sacarosa a ias 9 partes finaies de ia muestra de suspension para obtener 10% de sacarosa en peso.
11. Congeiar ia muestra restante de suspension finai sin fiitrar con sacarosa.
Ejempio de referencia 4
Se preparo una formuiacion adicionai mediante un proceso simiiar a ios procedimientos de formuiacion de acido dioctiisuifosucclnico en ei Ejempio 1. Esta formuiacion adicionai se detaiia en ia siguiente tabia y se hace referencia a ia misma en ei presente documento como "Formuiacion B".
Componente
Porcentaje en masa de partlcuias (nominai)
AZD1152 hqpa
10
PLA-PEG 16/5
85
Acido oieico
5
Ejempio 5 - Indice terapeutico Datos generados en ei modeio de xenoinjerto de tumor humano SW620 en rata y raton.
Se sabe que ei modeio de rata desnuda femenina con SW620 es susceptibie a regresiones espontaneas dei tumor que son mas frecuentes en estudios de xenoinjertos de mayor duration y no se muestran.
Estudios de Indice terapeutico de rata (SW620 en rata desnuda femenina)
Se criaron ratas desnudas hembra en AstraZeneca y se sometieron a estudio con un peso mlnimo de 150 g. Los animaies se inocuiaron en ei fianco con ceiuias tumoraies humanas SW620 y se inicio ia dosificacion cuando ios tumores hablan aicanzado 0.4-0.9 cm3. Los compuestos se dosificaron por via intravenosa (IV) a 5 mi/kg con ia formuiacion B o E. de nanopartlcuias de AZD1152 o AZD1152 hqpa. Se administro AZD1152 en vehlcuio TRIS (dlas 1-4 IV, cada dosis a 25 mg/kg) y AZD1152 hqpa nanopartlcuia se dosifico ia formuiacion en soiucion saiina fisioiogica
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
(dosis de 25 mg/kg cada uno de los dlas 1 y 3 IV). En los momentos indicados se sacrificaron los animales y se tomaron muestras de tumor, sangre y femur/medula osea. Los efectos de los tratamientos sobre el tumor y la medula osea fueron anotados por patologo evaluador de las secciones tenidas con hematoxilina y eosina derivadas del femur.
Los efectos de las formulaciones de las nanopartlculas AZD1152 y AZD1152 B y E en el tumor se caracterizan por la presencia de nucleos de poliploidia agrandados. La figura 6 muestra imagenes representativas del tumor despues del tratamiento con cada terapia a partir de muestras obtenidas en el dla 5. Los efectos de las formulaciones B y E de la nanopartlcula de AZD1152 y AZD1152 hqpa en la medula osea se caracterizan por la perdida de celulas de la medula osea. La figura 6 muestra imagenes representativas del tumor despues del tratamiento con cada terapia a partir de muestras obtenidas el dla 5.
La figura 6 muestra que la Formulacion E, suministrada a la mitad de la intensidad de la dosis de AZD1152, tiene una mayor eficacia (A), induce un espectro similar de cambios en la patologla tumoral (B) y al mismo tiempo evita la medula osea (C).
Estudio antitumoral en raton (SW620 en raton desnudo masculino)
Los ratones desnudos machos fueron criados en AstraZeneca. Los animales se inocularon en el flanco con celulas tumorales humanas SW620, y luego se asignaron al azar al estudio cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 0.25 cm3. Se dosifico AZD1152 en vehlculo regulador TRIS a la concentration indicada. AZD1152 hqpa formulacion de nanopartlculas E se dosifico en solution salina fisiologica. Se publican un trabajo cllnico anterior y metodologlas con AZD1152 en Wilkinson et al, Clinical Cancer Research 2007 (13) 3682.
Los datos generados en el modelo de xenoinjerto de tumor humano SW620 en rata y raton sugirieron que el suministro de AZD1152 IV a 25 mg/kg durante 4 dlas da una eficacia maxima (100 mg/kg de dosis total).
En el modelo SW620 en raton, las nanopartlculas del Ejemplo 3 demostraron eficacia equivalente a AZD1152 IV a 100 mg/kg y esta eficacia se alcanzo a dosis mas bajas de solo 25 mg/kg en una sola dosis, o incluso 5 mg/kg al dla 1 y 3 (10 mg/kg equivalentes) mostrando que la eficacia puede administrarse usando una variedad de diferentes esquemas y dosis mucho mas bajas usando la formulacion en nanopartlculas de AZD1152 hqpa que una formulacion IV de AZD1152.
Por lo tanto, la formulacion en nanopartlculas AZD1152 hqpa reivindicada mostro eficacia tumoral equivalente o mejorada cuando se administro a una intensidad de dosis mas baja. Esto puede resultar en menos efectos secundarios, por ejemplo menos toxicidad de la medula osea.
Se alcanzo la maxima actividad con un equivalente de dosis de 50 mg/kg de formulacion en nanopartlculas de AZD1152 hqpa frente a 100 mg/kg IV de AZD1152. Mediante el uso de las formulaciones de la presente invention, puede ser posible proporcionar mas ingrediente activo al paciente por los mismos efectos adversos que la dosis maxima tolerada anterior de AZD1152 dosificada IV. Asl, el perfil de riesgo/beneficio de las formulaciones de la presente invencion puede ser mejorado.
La figura 7 muestra los datos de estudios de eficacia/dosificacion de la programacion con la Formulacion E en el xenoinjerto SW620 en raton desnudo. En este estudio Se dosifico AZD1152 el dla 0-3 a 25 mg/kg (100 mg/kg total). La formulacion E se dosifico a una variedad de diferentes esquemas como se describio anteriormente.
Ejemplo de referencia 6
La exposition in vivo se examino comparando AZD1152 IV (dosificado 4x25 mg/kg) dlas 1-4 IV) con las Formulaciones B (dosificado 2x25 mg/kg los dlas 1 y 3 IV) y E (dosificado 2x25 mg/kg dlas 1 y 3 IV) del estudio en ratas desnudas descritas en el Ejemplo 5. Los resultados se muestran (valor promediado de varios puntos de datos) en la figura 8. Las concentraciones medidas despues de la dosis de AZD1152 IV son para el farmaco AZD1152 hqpa.
Los datos muestran el total de AZD1152 hqpa extraldo de la muestra (dentro de las nanopartlculas y liberadas de ellas) en el punto de muestreo y, por tanto, demuestran durante cuanto tiempo el farmaco o el farmaco encapsulado esta todavla presente en el cuerpo durante este tiempo, es decir, la longevidad de la exposicion al AZD1152 hqpa despues de la dosificacion. Los datos muestran que una intensidad de dosis mas baja dio una concentracion de farmaco total mas alta en la sangre, sostenida durante un perlodo mas largo si se suministro como una formulacion de nanopartlculas en lugar de como farmaco activo intravenoso.
Resumen del metodo bioanalltico para medir el farmaco total en muestras in vivo dosificadas con nanopartlculas.
Este es un proceso de multiples etapas que debe llevarse a cabo en hielo siempre que sea posible para detener la liberation adicional de farmaco de las nanopartlculas.
Metodo de Extraction Total de Farmacos:
• Disolver el farmaco original solido en DMSO a una concentracion de 2 mM.
• Tomar una allcuota de 50 |jl de cada muestra de plasma, utilizando un factor de dilucion adecuado, en una placa de 96 pozos.
• Preparar en la curva de calibracion estandar utilizando el Robot Hamilton Star de la poblacion de 2 mM en DMSO (consulte el apendice 1 para obtener detalles sobre la preparacion)
5 • Anadir 150 pl de acetonitrilo con un patron interno.
• Agitar la placa para mezclar las muestras.
• Rotar en centrifugadora a 4500 rpm durante 10 minutos.
• Transferir 50 jl de sobrenadante para limpiar la placa de 96 pozos.
• Anadir 300 jl de agua.
10 • Analizar a traves de LC-MS/MS (cromatografla llquida-espectrometrla de masas/espectrometrla de masas en
tandem).
Apendice 1 - Detalles de la preparacion de la curva estandar
El robot agregara primero diluyente adecuado a la microplaca para las diluciones antes de diluir en serie las soluciones madre de derecha a izquierda en la microplaca, una fila por compuesto (vease la tabla A a continuacion):
15 Tabla A: Muestra las 11 diluciones de derecha a izquierda (columnas 12-1) de la placa de dilucion para un material de partida de 2 mM en la columna 12 de la microplaca de dilucion. Despues, se introducen 2.5 jl de las columnas 1-11 de izquierda a derecha en los pozos 2-12 de una placa de matriz para dar lugar a una curva de once puntos (Tabla B).
Columna de la placa de predilucion
Conc. Final pM Volumen de conc para ser diluido jL Volumen de diluyente de DMSO jL Factor de dilucion
12
2000 - - -
11
200 25 pL de la columna 12 225 10
10
100 125 pL de la columna 11 125 2
9
40 100 pL de la columna 10 150 2.5
8
20 125 pL de la columna 9 125 2
7
10 125 pL de la columna 8 125 2
6
2 50 pL de la columna 7 200 5
5
1 125 pL de la columna 6 125 2
4
0.4 100 pL de la columna 5 150 2.5
3
0.2 125 pL de la columna 4 125 2
2
0.1 125 pL de la columna 3 125
2
1
0.02 50 pL de la columna 2 200 5
20 Tabla B: Tabla que demuestra la curva de calibracion generada despues de la punta de la serie de dilucion generada por el robot. Las columnas 1-11 de la Tabla A se introducen en las columnas 2-12 de la placa de matriz para producir la curva de calibracion de once puntos como se ha indicado anteriormente
Concentration final (nM)
Volumen de matriz (pL) Volumen intgroducido (pL) Solution de trabajo de DMSO (pM) Columna de la placa de preparation de plasma
0
47.5 2.5 pL DMSO 1
1
47.5 2.5 0.02 2
5
47.5 2.5 0.1 3
10
47.5 2.5 0.2 4
20
47.5 2.5 0.4 5
50
47.5 2.5 1 6
100
47.5 2.5 2 7
500
47.5 2.5 10 8
1000
47.5 2.5 20 9
2000
47.5 2.5 40 10
5000
47.5 2.5 100 11
10000
47.5 2.5 200 12
Parametros LC-MS/MS
Espectrometrla de masas
Aguas Xevo TQS (serial No.-186005453)
Columna
Phenomenex Kinetex C18 50 x 2.1, 2.6u
Solvente A
95% agua + 0.1 % de acido formico
Solvente B
95% MeOH + 0.1 % de acido formico
Gradiente
Tiempo (min) % A %B
0 95 5
0.3 95 5
1.9 5 95
2.3 5 95
2.31 95 5
2.5 95 5
Flujo
0.75 ml/min
Tiempo de ejecucion
2,5 min, usar una valvula de desvlo durante 0.3 minutos iniciales
Parametros de optimization
5
10
15
20
25
Compuesto
Modo de ionizacion Polaridad Ion progenitor Ion de la hija Tension del cono (v) Energla de colision Tiempo de retention (min)
AZD1152
ESI Positiva 588.941 491.13 20 16 1.07
AZD1152 hqpa
ESI Positiva 509.042 129.74 40 16 0.98
Compuesto A
ESI Positiva 405.588 173.81 80 22 1.35
Compuesto A: 2-etil-4-{[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metoxi}quinolina (estandar interno). Vease, por ejemplo, WO92/02508 y WO92/13853.
Ejemplo 7 (Utilizando un lote nominal de 1 g)
Procedimiento para nanopartlculas de acido pamoico
Se prepararon nanopartlculas de AZD1152 hqpa con acido pamoico de acuerdo con el procedimiento expuesto a continuacion.
Composicion (de la formulacion descrita en el presente documento en adelante como formulacion G1):
Componente
Porcentaje en peso de la nanopartlcula Porcentaje molar de la nanopartlcula
16/5 PLA-PEG
73.1% 5.8%
PLA
54.8% 4.4%
PEG
18.3% 1.5%
AZD1152 hqpa
17.0% 53.5%
Acido pamoico
9.9% 40.7%
7.1 Preparation de la solution de acido pamoico. Se preparo una solution al 29% (p/p) de acido pamoico en DMSO mezclando 2.9 g de acido pamoico con 7.1 g de DMSO en un recipiente. El recipiente se calento en un horno de calentamiento a 70-80°C hasta que se disolvio todo el acido pamoico.
7.2 Preparacion de 8% de TFA/7.5% de agua/84.5% de solucion de alcohol bencllico (% en peso). Se combinaron acido trifluoroacetico (TFA) (3.2 g), agua desionizada (DI) (3.0 g) y alcohol bencllico (BA) (33.8 g) para preparar el TFA al 8%/agua al 7.5%/solucion de alcohol bencllico al 84.5% (% en peso).
7.3 Preparacion del regulador:
Para hacer 1000 ml de fosfato 0.17 M (pKa2=7.2) Regulador: pH=6.5, Formular dos reguladores de partida: A. disolver 13.26 g de fosfato de sodio monobasico, anhidro NaH2PO4 H2O (Mr=119.98) en 650 ml de agua pura y B disolver 10.82 g de fosfato de sodio dibasico, NaH2PO4 anhidro (Mr=141.96) en 650 ml de agua pura. Anadir regulador B al regulador A mientras se mezcla hasta pH=6.50 a la temperatura del laboratorio de 25°C.
Alternativa:
Para hacer 1000 ml de regulador de fosfato de sodio 0.17 M a pH 6.5: En ~800 ml de agua DI, disolver 16.26 g de fosfato de sodio monobasico, dihidratado (NaH2PO4-2H2O, fW=156.01) y 11.70 g de fosfato de sodio dibasico dihidratado (Na2HPO4-2H20, FW=177.99) y anadir suficiente agua extra para obtener 1000 ml, a la temperatura del laboratorio de 25°C.
7.4 Preparacion de la solucion de pollmero
• A un vial de vidrio de 20 mL anadir pollmero-PEG, 700 mg
• Se anaden 7078 mg de acetato de etilo al vial de vidrio y se agita durante la noche para dar una solucion de pollmero-
5
10
15
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40
EA.
7.5 Preparacion de solucion acuosa:
• Brij®100 al 0.12%, alcohol bencllico al 4% en agua
• En una botella de 1 L, anadir 1.2 g de Brij®100 y 958.8 g de agua DI y mezclar en una placa de agitacion hasta que se disuelva.
• Anadir 40 g de alcohol bencllico a Brij®/agua y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
7.6 Preparacion de la solucion de farmaco
• Pesar 300 mg de AZD1152 hqpa en vial de centelleo de 20 mL
• Anadir 2399 mg de solucion anterior de TFA al 8% /7.5% de agua/BA a AZD1152
• Anadir 634 mg de solucion de pamoico/DMSO por encima del 29% a la solucion de farmaco y agitar con vortex para obtener una solucion de farmaco transparente
• Justo antes de la formulacion, combinar el farmaco y la solucion de pollmero.
7.7 Formacion de la emulsion. La relacion de la fase acuosa a la fase organica es de 5:1
• Verter la fase organica en una solucion acuosa y se homogeneiza usando un homogeneizador de rotor/estator manual durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa. Almacenar en hielo durante 10-15 minutos.
• Alimentar solucion a traves de un homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a -9000 psi en el medidor de entrada de aire comprimido para 1 pase discreto para formar nanoemulsion
Formacion de nanopartlculas
• Verter la emulsion en Quench (fosfato de sodio 0.17 M, pH 6.5) a <5°C mientras se agita sobre la placa de agitacion. Asegurarse de que transcurran al menos 5 minutos desde el comienzo de la recoleccion, antes de apagar. La relacion de emulsion a emulsion es 10:1
• Se anade 35% (p/p) de Tween®80 en agua para templar a razon de 100:1 Tween®80 a farmaco en peso.
• Concentrar las nanopartlculas mediante filtracion tangencial (TFF)
• Concentrar el detenido en TFF con 300kDa Pall casete (3x0.1 m2 membranas) a ~200 mL.
• Diafiltrar ~20 diavolumenes (4 litros) usando agua DI frla.
• Reducir el volumen a un volumen mlnimo
• Anadir 100 mL de agua frla al recipiente y bombear a traves de la membrana para enjuagar.
• Recoger el material en vial de vidrio, ~100 mL
7.8 Determinacion de la concentration de solidos de suspension final no filtrada:
• A un vial de centelleo tarado de 20 mL anadir un volumen de suspension final y secar al vaclo en el horno de liofilizacion.
• Determinar el peso de las nanopartlculas en el volumen de la suspension seca
7.9 Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final filtrada de 0.45 pm:
• Filtrar una portion de la muestra de suspension final antes de la adicion de sacarosa a traves de un filtro de jeringa de 0.45 pm
• A un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de muestra filtrada y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
7.10 Anadir 1 parte de sacarosa a las 9 partes finales de la muestra de suspension para obtener sacarosa al 10%.
7.11 Congelar la muestra restante de suspension final sin filtrar con sacarosa
La figura 9 muestra la liberation in vitro de AZD1152 hqpa representativa que demuestra la liberation controlada y
5
10
15
20
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35
lenta/sostenida de farmacos a partir de nanopartlcuias de acido pamoico comparadas con las nanopartlcuias basales sin contraiones de acido pamoico (hechas como se describe para las formulaciones de control en el Ejemplo 2).
Otra formulacion de acido pamoico, denominada en lo sucesivo formulacion G2, se prepare como sigue: (Usando un lote nominal de 1 g)
Composicion:
Componente
Porcentaje en peso de nanopartlcula Porcentaje molar de nanopartlcula
16/5 PLA-PEG
67.7% 4.5%
PLA
50.7% 3.4%
PEG
16.9% 1.1%
AZD1152 hqpa
19.4% 51.1%
Acido pamoico
12.9% 44.4%
Ejemplo 7a
7a.1 Preparacion de la solucion de acido pamoico. Se prepare una solucion al 29% (p/p) de acido pamoico en DMSO mezclando 2.9 g de acido pamoico con 7.1 g de DMSO en un recipiente. El recipiente se calento en un horno de calentamiento a 70-80°C hasta que se disolvio todo el acido pamoico.
7a.2 Preparacion de 8% de TFA/7.5% de agua/84.5% de solucion de alcohol bencllico (% en peso). Se combinaron acido trifluoroacetico (TFA) (3.2 g), agua desionizada (DI) (3.0 g) y alcohol bencllico (BA) (33.8 g) para preparar el TFA al 8%/agua al 7.5%/solucion alcohol bencllico al 84.5%).
7a.3 Preparacion del regulador:
Para hacer 1000 ml de fosfato 0.17 M (pKa2=7.2) Regulador: pH=6.5, Formular dos reguladores de almacenamiento: A. disolver 13.26 g de fosfato de sodio monobasico, anhidro NaH2PO4 H2O (Mr=119.98) en 650 ml de agua pura y B disolver 10.82 g de fosfato de sodio dibasico, NaH2PO4 anhidro (Mr=141.96) en 650 ml de agua pura. Anadir regulador B al regulador A mientras se mezcla hasta pH=6.50 a la temperatura del laboratorio de 25°C.
Alternativa:
Para obtener 1000 ml de regulador de fosfato de sodio 0.17 M a pH 6.5: En ~800 ml de agua DI, disolver 16.26 g de fosfato de sodio monobasico, dihidrato (NaH2PO4-2H20; FW=156.01) y 11.70 g de fosfato de sodio dibasico dihidratado (Na2HPO4-2H2O, FW=177.99) y anadir suficiente agua adicional para producir 1000 ml, a la temperatura del laboratorio de 25°C.
7a.4 Preparacion de la solucion de pollmero
• A un vial de vidrio de 20 mL anadir pollmero-PEG, 700 mg
• Se anaden 6572 mg de acetato de etilo a un vial de vidrio y se agita durante la noche para dar una solucion de pollmero-EA.
7a.5 Preparacion de solucion acuosa:
• Brij®100 al 0.15%, alcohol bencllico al 4% en agua
• En una botella de 1 litro, anadir 1.5 g de Brij®100 y 958.5 g de agua DI y mezclar en una placa de agitacion hasta que se disuelva.
• Anadir 40 g de alcohol bencllico a Brij®/agua y mezclar en placa de agitacion hasta que se disuelva.
7a.6 Preparacion de la solucion del farmaco
• Pesar 300 mg de AZD1152 hqpa en vial de centelleo de 20 mL
• Anadir 2746 mg de solucion de TFA al 8% al 8%/7.5% de agua/BA a AZD1152
5
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25
30
35
40
•Anadir 792 mg de solucion de pamoico/DMSO por encima del 29% a la solucion de farmaco y agitar con vortex para obtener una solucion de farmaco transparente
• Justo antes de la formulacion, combinar el farmaco y la solucion de pollmero.
7a.7 Formacion de la emulsion. La relacion entre la fase acuosa y la fase organica es de 5:1
• Verter la fase organica en una solucion acuosa y se homogeneiza usando un homogeneizador de rotor/estator manual durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa. Almacenar en hielo durante 10 minutos.
• Alimentar la solucion a traves de homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a -9000 psi en el medidor de entrada de aire comprimido para 1 pase discreto para formar nanoemulsion
Formacion de nanopartlculas
• Verter inmediatamente la emulsion en Quench (fosfato de sodio 0.17 M, pH 6.5) a <5°C mientras se agita sobre una placa de agitacion. La relacion de emulsion a emulsion es 10:1
• Se anade 35% (p/p) de Tween®80 en agua para templar a razon de 100:1 Tween®80 a farmaco en peso.
• Concentrar las nanopartlculas mediante filtracion de flujo tangencial (TFF)
• Concentrar el detenido en TFF con 300kDa Pall casete (3x0.1 m2 membranas) a ~200 mL.
• Diafiltrar ~20 diavolumenes (4 litros) usando agua DI frla.
• Reducir el volumen a un volumen mlnimo
• Anadir 100 mL de agua frla al recipiente y bombear a traves de la membrana para enjuagar.
• Recoger el material en vial de vidrio, ~100 mL
7a.8 Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final no filtrada:
• A un vial de centelleo tarado de 20 mL anadir un volumen de suspension final y secar al vaclo en el horno de liofilizacion.
• Determinar el peso de las nanopartlculas en el volumen de la suspension seca
7a.9 Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final filtrada de 0.45 pm:
• Filtrar una porcion de la muestra de suspension final antes de la adicion de sacarosa a traves de un filtro de jeringa de 0.45 pm
• A un vial de centelleo tarado de 20 ml, anadir un volumen de muestra filtrada y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
7a.10 Anadir 1 parte de sacarosa a las 9 partes finales de la muestra de suspension para obtener 10% de sacarosa en peso.
7a.11 Congelar la muestra restante de la suspension final sin filtrar con sacarosa Ejemplo 7b
A continuacion se describe un procedimiento adicional para preparar una formulacion G1 (lote nominal de 1 g)
7b.1 Preparacion de la solucion de acido pamoico. Se preparo una solucion al 29% (p/p) de acido pamoico en DMSO mezclando 2.9 g de acido pamoico con 7.1 g de DMSo en un recipiente. El recipiente se calento en un horno de calentamiento a 70-80°C hasta que se disolvio todo el acido pamoico.
7b.2 Preparacion de 8% de TFA/7.5% de agua/84.5% de solucion de alcohol bencllico (% en peso). Se combinaron acido trifluoroacetico (TFA) (3.2 g), agua desionizada (DI) (3.0 g) y alcohol bencllico (BA) (33.8 g) para preparar la solucion de TFA al 8%/agua al 7.5% / alcohol bencllico al 84.5%).
7b.3 Preparacion del regulador:
Para hacer 1000 ml de fosfato 0.17 M (pKa2=7.2) Regulador: pH=6,5, formular dos reguladores de almacenamiento: A. disolver 13.26 g de fosfato de sodio monobasico, anhidro NaH2PO4 H2O (Mr=119.98) en 650 ml de agua pura y B disolver 10.82 g de fosfato de sodio dibasico, NaH2PO4 anhidro (Mr=141.96) en 650 ml de agua pura. Anadir regulador B al regulador A mientras se mezcla hasta pH=6.50 a la temperatura del laboratorio de 25°C.
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Alternativa:
Para preparar 1000 ml de regulador de fosfato de sodio 0.17 M a pH 6.5: En ~800 ml de agua DI, disolver 16.26 g de fosfato de sodio monobasico, dihidratado (NaH2PO4-2H2O, FW=156.01) y 11.70 g de fosfato de sodio dibasico dihidratado (Na2HPO4-2H2O, FW=177.99) y anadir suficiente agua adicional para producir 1000 ml, a la temperatura del laboratorio de 25°C.
7b.4 Preparacion de la solucion de pollmero
• A un vial de vidrio de 20 mL se anade pollmero-PEG, 591.3 mg
• Se anaden 5978.6 mg de acetato de etilo al vial de vidrio y se agita durante la noche para dar una solucion de pollmero-EA.
7b.5 Preparacion de solucion acuosa:
• Brij®100 al 0.12%, alcohol bencllico al 4%, DMSO al 5.7% en agua
• A una botella de 1 L, anadir 1.4 g de Brij® 100 y 901.6 g de agua DI y mezclar en una placa de agitacion hasta que se disuelva.
• Se anaden 40 g de alcohol bencllico y 57 g de DMSO a Brij®/agua y se mezclan en una placa de agitacion hasta que se disuelvan.
7b.6 Preparacion de la solucion del farmaco
• Pesar 253.4 mg de AZD 1152 hqpa en un vial de centelleo de 20 ml
• Anadir 2026.8 mg de solucion anterior de TFA al 8% /7.5% de agua/BA a AZD1152
• Anadir 535.5 mg de solucion de pamoico/DMSO por encima del 29% a la solucion de farmaco y agitar con vortex para obtener una solucion de farmaco transparente
• Justo antes de la formulacion, combinar el farmaco y la solucion de pollmero.
7b.7 Formacion de la emulsion. La relacion de la fase acuosa a la fase organica es de 5.5:1
• Verter la fase organica en una solucion acuosa y se homogeneiza usando un homogeneizador de rotor/estator manual durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsion gruesa. Almacenar en hielo durante 10-15 minutos.
• Alimentar solucion a traves de homogeneizador de alta presion (110S) con presion ajustada a ~9.000 psi en el medidor de entrada de aire comprimido para 1 pase discreto para formar nanoemulsion
Formacion de nanopartlculas
• Vierta la emulsion en Quench (fosfato de sodio 0.17 M, pH 6.5) a <5°C mientras se agita sobre la placa de agitacion. Asegurarse de que transcurran al menos 5 minutos desde el comienzo de la recoleccion, antes de detener. La proporcion de emulsion a emulsion es de 3:1 en peso.
• Se anade 35% (p/p) de Tween®80 en agua para detenerla proporcion de Tween®80 20:1 a farmaco en peso.
• Concentrar las nanopartlculas mediante filtracion de flujo tangencial (TFF)
• Concentrar el detenido en TFF con 300kDa Pall casete (3x0.1 m2 membranas) a ~200 mL.
• Diafiltrar ~20 diavolumenes (4 litros) utilizando agua DI de temperatura ambiente.
• Reducir el volumen a un volumen mlnimo
• Anadir 100 Ml de agua DI al recipiente y bombear a traves de la membrana para enjuagar.
• Recoger el material en vial de vidrio, ~100 mL
7b.8 Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final no filtrada:
• A un vial de centelleo tarado de 20 mL anadir un volumen de suspension final y secar al vaclo en el horno de liofilizacion. •
• Determinar el peso de las nanopartlculas en el volumen de la suspension seca.
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7b.9 Determinacion de la concentracion de solidos de suspension final filtrada de 0.45 pm:
• Filtrar una porcion de la muestra de suspension final antes de la adicion de sacarosa a traves de un filtro de jeringa de 0,45 pm
• A un vial de centelleo tarado de 20 mL, anadir un volumen de muestra filtrada y secar al vaclo sobre el horno de liofilizacion.
7b.10 Anadir 1 parte de sacarosa a las 9 partes finales de la muestra de suspension no filtrada para alcanzar 10% de sacarosa en peso.
7b. 11 Congelar la muestra restante de la suspension final sin filtrar con sacarosa Ejemplo de referencia 8: Comparacion de las formulaciones E, F1 y F2
La formulacion E se describio en el Ejemplo 3. Las formulaciones F1 y F2 se describieron en el Ejemplo 2.
Exposicion in vivo
La figura 10 muestra una comparacion de la exposicion in vivo en rata para las formulaciones E, F1 y F2. Los experimentos se realizaron como dosis unicas de 25 mg/kg en ratas y se analizaron por un metodo analogo al descrito en el Ejemplo 6.
Datos de eficacia in vivo
Los datos mostrados en la figura 11 muestran que las formulaciones E, F1 y F2 dan una eficacia equivalente despues de la dosificacion a corto plazo de ratas desnudas con xenoinjertos tumorales SW620 establecidos. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con los metodos descritos en el Ejemplo 5. Las ratas que portaban tumores SW620 se dosificaron con AZD1152 a 25 mg/kg diarios durante 4 dlas, o formulacion E, F1 y F2 a 25 mg/kg los dlas 0 y 2. Formulacion E, F1 y F2 dieron una eficacia equivalente. La eficacia fue equivalente a AZD1152 y comparable a la observada en estudios previos con AZD1152 y formulacion E en este momento. El estudio se termino al dla 9 para permitir el analisis de marcadores farmacodinamicos tumorales y medula osea. Estos datos demuestran que las formulaciones E, F1 y F2 dan una eficacia equivalente.
Comparacion de las formulaciones de nanopartlculas E, F1 y F2 sobre los biomarcadores tumorales fosfohistona H3
Este experimento compara el efecto de la formulacion E, F1 y F2 sobre una fosforilacion fosfohistona H3 (pHH3) en tumores SW620. AZD1152 se incluyo como control positivo. La actividad se midio como una inhibicion de la fosforilacion de histona H3 en Ser10 (pHH3 como un marcador sustitutivo altamente dinamico sensible de la actividad de la quinasa Aurora B). Se calculo el nivel medio de la positividad del pHH3 [%] para las celulas en fase G2/M del ciclo celular para cada grupo de tratamiento a las 24 horas y 96 horas despues de la primera dosis y se comparo con el nivel de pHH3 observado para las celulas en fase de ciclo celular G2/M que se extrajeron de los tumores tratados con BIND Placebo (referido aqul como 100%). La significancia estadlstica se calculo mediante la prueba t de Student, asumiendo varianzas desiguales (* p<0,05, ** p<0.01, *** p<001, n.s. P>0.05).
Las formulaciones (formulacion E, F1 y F2) se dosificaron como se ha descrito anteriormente a xenoinjertos de colon SW620 establecidos en ratas hembras desnudas. Las ratas se inyectaron IV con BIND Placebo (0 mg/kg) o AZD1152 o AZD1152 hqpa formulacion E/F1/F2 a 25 mg/kg el dla 1 y terminaron el dla 2 (24 horas despues de la primera dosis) o el dla 5 (96 horas despues de la primera dosis). Los tumores congelados se desagregaron utilizando Medimachine (BD Biosystems), se fijaron con etanol al 80% durante un mlnimo de 12 horas y se prepararon para analisis de contenido de ADN (tincion PI) y pHH3 mediante citometrla de flujo utilizando analizador BD FACSCanto (anticuerpo primario pHH3:Millipore 06-570 , anticuerpo secundario: FITC Anticuerpo secundario conjugado con fluorescelna IgG anticonejo IgG Millipore AP307F) como se describio previamente por Wilkinson, RW et al., Clin Cancer Res, 2007; 13(12).
La figura 12 muestra que la proportion de celulas positivas para pHH3 dentro de la fase G2/M del ciclo celular fue suprimida al maximo por AZD1152 a las 24 horas. Los tumores expuestos a las formulaciones E o F1, F2 mostraron menos reduction en pHH3 a las 24 horas despues de la dosis unica en comparacion con los animales que recibieron AZD1152. A las 96 horas, los niveles de reduccion de pHH3 fueron comparables en todos los grupos.
Estos datos muestran que las formulaciones E, F1 y F2 dan una supresion equivalente de pHH3 y, por tanto, actividad de Aurora quinasa B durante un transcurso de tiempo de dosis unica.
Efectos de las formulaciones E, F1 y F2 en la medula osea.
Este ejemplo muestra los efectos de las formulaciones en la medula osea evaluadas por dos medidas independientes.
Las ratas se inyectaron IV con BIND placebo (0 mg/kg), o AZD1152/AZD1152 hqpa formulacion E/F1/F2 a 25 mg/kg en los momentos indicados y sacrificados en los momentos indicados.
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Se extrajeron muestras de medula osea de cada animal. En primer lugar, las muestras de medula osea se procesaron para la evaluacion patologica. Las articulaciones femuro-tibiales se tomaron a 10% de formalina regulada, se descalcificaron usando procedimientos estandar, se embebieron en parafina y se tineron con hemotoxilina y eosina. La evaluacion patologica de la hipovolemia de la medula osea fue realizada por un patologo (Figura 13). La integridad de la medula osea fue anotada por el patologo. Se genero una puntuacion de hipocelularidad de medula osea basada en un sistema de puntuacion de 0-4, representando 0 ningun efecto en la medula osea y representando 4 un efecto maximo en la medula osea. Las cifras muestran la mediana, los intervalos de confianza del 95% y el intervalo para cada grupo de animales en el dla 5 y 9. Los datos muestran que mientras que AZD1152 tiene un gran impacto en la medula osea, cada una de las formulaciones en nanopartlculas de AZD1152 hqpa muestra efectos mlnimos equivalentes en la medula osea.
En segundo lugar, se realizan enjuagues de medula osea para examinar la celularidad de la medula osea mediante FAC. Al final se tomo medula osea de cada femur en 50% FBS y 50% PBS en hielo. Las celulas se sedimentaron por centrifugacion a 4°C y se resuspendieron en PBS. Las celulas se sedimentaron de nuevo a 4°C y se volvieron a suspender en PBS. Se anadieron 50 pl de LDS-751 (0.5 mg/ml en metanol) y las celulas se sometieron a vortex. Finalmente las celulas filtraron a traves de un filtro de 50 micras en un tubo FACs. Las muestras se analizaron en un FACS Canto (Beckton Dickinson). Los resultados se muestran en la Figura 14. Una hipocelularidad de medula osea se representa como un total de celulas nucleadas en relacion con controles no tratados. Se muestra el porcentaje de celularidad de cada muestra de medula osea en cada animal individual. La llnea punteada representa el porcentaje mas bajo de valor de celulas nucleadas totales visto en animales que reciben unicamente vehlculo (nanopartlcula vacla). Los resultados muestran que mientras que AZD1152 tiene un gran impacto en la medula osea, cada una de las formulaciones en nanopartlculas de AZD1152 hqpa mostro efectos mlnimos equivalentes en la medula osea.
Ejemplo 9: Datos para las Formulaciones G
Comparacion de las formulaciones de nanopartlculas G1 y G2 en los biomarcadores tumorales fosfohistona H3
Este experimento compara el efecto de la formulacion G1 y G2 sobre una fosforilacion fosfohistona H3 (pHH3) en tumores SW620. AZD1152 se incluyo como control positivo.
La actividad se midio como una inhibicion de la fosforilacion de histona H3 sobre Ser10 (pHH3 como un marcador sustitutivo, altamente dinamico, sensible de la actividad de la quinasa Aurora B). Se calculo el nivel medio de positividad del pHH3 [%] para las celulas en la fase G2/M del ciclo celular para cada grupo de tratamiento a las 24, 48, 72, 96 y 120 horas despues de 1 dosis y se comparo con el nivel de pHH3 observado para las celulas en la fase del ciclo celular G2/M que se extrajeron de los tumores tratados con BIND Placebo (referido aqul como 100%).
Las formulaciones (formulacion G1 y G2) se dosificaron como se ha descrito anteriormente a los xenoinjertos de colon SW620 establecidos en ratas hembras desnudas. Las ratas se inyectaron IV con BIND Placebo (0 mg/kg) o AZD1152 o AZD1152 hqpa formulacion G1 o G2 a 25 mg/kg el dla 1 y terminaron el dla 2 (24 horas despues de la primera dosis), dla 3 (48 horas despues de la primera dosis), dla 4 (72 horas despues de la primera dosis), dla 5 (96 horas despues de la primera dosis) y dla 6 (120 horas despues de la primera dosis). Los tumores congelados se desagregaron utilizando Medimachine (BD Biosystems), se fijaron con etanol al 80% durante un mlnimo de 12 horas y se prepararon para analisis de contenido de ADN (tincion PI) y pHH3 mediante citometrla de flujo utilizando analizador BD FACSCanto (anticuerpo primario pHH3: Millipore 06-570, anticuerpo secundario: FITC Anticuerpo secundario conjugado con fluorescelna IgG anticonejo IgG Millipore AP307F) como se describio previamente por Wilkinson, RW et al., Clin Cancer Res, 2007; 13(12).
La figura 15 muestra que la proportion de celulas positivas para pHH3 dentro de la fase G2/M del ciclo celular fue suprimida al maximo por AZD1152 a las 24 horas. Los tumores expuestos a las formulaciones G1 o G2 mostraron menos reduction en pHH3 a las 24 horas despues de la dosis unica en comparacion con los animales que recibieron AZD1152. La reduccion maxima de la actividad de pHH3 ocurre entre 72 y 120 horas despues de la primera dosis de formulaciones G1 o G2. Estos datos muestran que las formulaciones G1 y G2 suprimen pHH3 y, por tanto, la actividad de Aurora quinasa B durante un transcurso de tiempo de dosis unica.
Efectos de las formulaciones G1 y G2 en la medula osea.
Este ejemplo muestra los efectos de las Formulaciones sobre la medula osea.
A las ratas se les inyecto IV con BIND Placebo (0 mg/kg), o AZD1152 hqpa formulacion G1 o G2 a 25 mg/kg en los dlas 1 y 3 y se sacrificaron en los momentos indicados.
Se extrajeron muestras de medula osea de cada animal y se procesaron para la evaluacion patologica. Las articulaciones femuro-tibiales se llevaron a 10% de formalina regulada, se descalcificaron usando procedimientos estandar, se embebieron en parafina y se tineron con hemotoxilina y eosina. La evaluacion patologica de la hipocelularidad de la medula osea fue realizada por un patologo (Figura 16). La integridad de la medula osea fue anotada por el patologo. Se genero una puntuacion de hipocelularidad de medula osea basada en un sistema de puntuacion de 0-4, representando 0 ningun efecto en la medula osea y representando 4 un efecto maximo en la medula osea. Las cifras muestran las puntuaciones de animales individuales en cada grupo de animales en el dla 5 y
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9. Los datos muestran que cada una de las formulaciones en nanopartlcuias comprobadas de AZD1152 hqpa muestran hipocelularidad minima a leve de la medula osea al dla 5 que ha vuelto a niveles similares como el placebo BIND al dla 9.
Estudio de eficacia de xenoinjerto de celulas B difusas grandes U2932
Se cultivaron ratones scid hembra en Charles River. Los animales se inocularon en el flanco con celulas tumorales humanas U2932, y luego se asignaron al azar al estudio cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 0.25 cm3. Se dosifico AZD1152 en vehlculo regulador tris a la concentracion indicada. Se dosifico formulacion de AZD1152 hqpa en nanopartlculas G1 en solucion salina fisiologica. En el modelo U2932 en raton, la formulacion de nanopartlculas G1 demostro una eficacia equivalente a AZD 1152 IV a una dosis total de 100 mg/kg y esta eficacia se alcanzo a la dosis total mas baja de solo 50 mg/kg mostrando que dosis mas bajas de la formulacion en nanopartlculas de AZD1152 hqpa son equivalentes a una formulacion IV de AZD1152.
La figura 17 muestra los datos de un estudio de eficacia con la formulacion G1 en el xenoinjerto U2932 en el raton scid. Los ratones que llevaban tumores U2932 se dosificaron por via intravenosa con AZD1152 a 25 mg/kg diarios en los dias 26-30 despues del implante del tumor (dosis total 100 mg/kg) o formulacion G1 25 mg/kg en los dias 26 y 28 despues del implante tumoral (dosis total 50 mg/kg). Estos datos demuestran que la formulacion G1 da una eficacia equivalente a AZD 1152 solo a la mitad de la dosis.
Estudio de eficacia del explante derivado del paciente SC-61 SCLC
Se criaron ratones desnudos hembra en Harlan. Los animales se inocularon en el flanco con fragmentos de tumor humano SC-61 y luego se asignaron al azar al estudio cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 0.2 cm3. Se dosifico AZD1152 en vehiculo regulador tris a la concentracion indicada. Se dosifico formulacion de nanopartlculas G1 de AZD1152 hqpa en solucion salina fisiologica. En el modelo SC-61 en raton, la formulacion de nanopartlculas G1, a una dosis total de 50 mg/kg demostro una eficacia equivalente a AZD1152 IV a una dosis total de 100 mg/kg.
La figura 18 muestra los datos de un estudio de eficacia con la formulacion G1 en el explante derivado del paciente SC-61 en el raton desnudo. Los ratones que llevaban tumores SC-61 se dosificaron por via intravenosa con AZD1152 a 25 mg/kg al dla en los dias 0-3 despues de la asignacion al azar (dosis total 100 mg/kg) o formulacion G1 25 mg/kg en los dias 0 y 2 despues de la asignacion tumoral al azar (dosis total 50 mg / kg).
Estos datos demuestran que la formulacion G1, a solo la mitad de la dosis, da un control tumoral mas largo que AZD1152 en este modelo.
Exposicion in vivo de las formulaciones G1 y G2
La figura 19 muestra datos de exposicion in vivo para las formulaciones G1 y G2, superpuestas a las de las formulaciones E y F de la figura 10. Todos los datos se generaron a partir de una dosis unica de la formulacion relevante a 25 mg/kg en ratas y se analizaron mediante un metodo analogo al descrito en el Ejemplo 6. Las figuras 19a-19e muestran cada una de las llneas de datos individuales por separado.
Ejemplo 10: Condiciones de HPLC adecuadas para medir la liberacion in vitro
Parametros del instrumento
Rata de flujo
0.300 mL/min
Bucle de muestra
20 pL
Volumen de inyeccion
5 pL
Temperatura del inyector automatico
5°C
Temperatura de la columna
30°C
Longitud de onda del detector
240 nm
Rata de muestreo
20 puntos/segundos
Tiempo de ejecucion
8 min
Programa de gradiente de la bomba
Tiempo
Fase Movil A (%) Fase Movil B (%) Pendiente de gradiente
0.0
85 15 6
4.0
80 20 6
5.0
50 50 6
6.0
15 85 6
6.1
85 15 6
8
85 15 6
Fase movil-A: 0.10% de TFA en agua: Llenar una botella de vidrio de 2 litros con 2 litros de agua purificada. Anadir 2.0 ± 0.1 mL de TFA y mezclar.
Fase movil B: TFA al 0.08% en acetonitrilo: Llenar una botella de medio de vidrio de 2 litros con acetonitrilo 2 litros. Anadir 1.6 ± 0.1 mL de TFA y mezclar.
Columna HPLC
Waters Acquity CSH C18, 2.1 x 150 mm, 3 pm (P/N 186005298)
Ejemplo 11
A continuation se muestran los datos de lote para 3 lotes de formulaciones G1 que contienen acido pamoico. El tamano de particula se midio por dispersion dinamica de la luz.
Lote
Carga de AZD1152 hqpa (%) Tamano medio de particula (nm) proportion pamoico:AZD1152 hqpa
A
17.0 87.9 0.76
B
19.9 98.4 0.60
C
19.0 85.1 0.73
Media
18.6 90.5 0.70
Estandar
1.5 7.0 0.09
+3 STD
23.1 111.5 0.95
-3 STD
14.2 69.4 0.44
5
Los perfiles de liberation in vitro a 37°C para estos lotes se muestran en la figura 20.

Claims (24)

  1. 5
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    40
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    1. Una nanopartlcuia terapeutica que comprende 55 a 85 por ciento en peso de copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende 10 a 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol, 5 a 20 por ciento en peso de acido pamoico y 10 a 25 por ciento en peso de 2-(3-((7-(3-(etil(2- hidroxietil)amino)propoxi)quinazolin-4-il)amino)-1H-pirazol-5-il)-N-(3-fluorofenil)acetamida ("AZD1152 hqpa").
  2. 2. La nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, en la que el copollmero de acido poli(lactico)- poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 15 kDa a 20 kDa y un peso molecular medio numerico de 4 kDa a 6 kDa de polietilenglicol.
  3. 3. La nanopartlcula terapeutica de la reivindicacion 2, en la que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 16 kDa y un peso molecular medio numerico de 5 kDa de poli(etilen)glicol.
  4. 4. La nanopartlcula terapeutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende de 15 a 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa.
  5. 5. Una nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, que comprende 15 a 25 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa, 7 a 15 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende un 10 a un 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol) y el copollmero de acido poli(lactico) poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 16 kDa y un peso molecular medio numerico de 5 kDa de poli(etilen)glicol.
  6. 6. Una nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, que comprende 15 a 22 por ciento en peso de AZD 1152 hqpa, 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende un 10 a un 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 16 kDa y un peso molecular medio numerico de 5 kDa de poli(etilen)glicol); en el que menos de 20% de la hqpa AZD1152 se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C.
  7. 7. Una nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, que comprende 15 a 22 por ciento en peso de AZD1152 hqpa, 7 a 10 por ciento en peso de acido pamoico, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)- poli(etilen)glicol, en el que la nanopartlcula terapeutica comprende 10 a 30 por ciento en peso de poli(etilen)glicol y el copollmero de acido poli(lactico)-poii(etiien)giicoi tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 16 kDa y un peso molecular medio numerico de 5 kDa de poli(etilen)glicol; en la que menos de 20% de la AZD1152 hqpa se libera de la nanopartlcula despues de 30 horas en PBS y polisorbato 20 a 37°C, y en el que las nanopartlculas se hacen mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
    1) combinar una primera fase organica que comprende un copollmero PLA-PEG de 16:5, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo estan presentes en una relacion molar de 1:3.6 y el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico: 1 mol de AZD1152 hqpa; con una primera solucion acuosa que comprende un eter estearllico de polioxietileno (100) en agua, DMSO y alcohol bencllico) para formar una segunda fase, en la que la relacion de la fase acuosa a la fase organica es de 5.5:1;
    2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
    3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion, tal como de 10 a 15 minutos, convenientemente a aproximadamente 0°C, por ejemplo, sumergiendose en un bano de hielo;
    4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
    5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos, por ejemplo 10 minutos;
    6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador a pH 6.5, en donde la realcion de la segunda solucion acuosa a emulsion esta entre 2:1 y 10:1, tal como 3:1;
    7) anadir una solucion acuosa de tensioactivo a la solucion de detencion;
    8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
  8. 8. La nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, que consiste en 15-19% en peso de AZD1152 hqpa, acido pamoico en una relacion molar de 0.76 con respecto a AZD1152 hqpa, y un copollmero dibloque de poli(acido lactico)-poli(etilen)glicol, en el que el copollmero de acido poli(lactico)-poli(etilen)glicol tiene un peso molecular medio numerico de poli(acido lactico) de 16 kDa y un peso molecular medio numerico de 5 kDa de poli(etilen)glicol.
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
  9. 9. Una nanopartlcuia terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 3, en la que la nanopartlcula terapeutica libera menos del 20% de AZD1152 hqpa despues de 30 horas en solucion reguladora de fosfato y polisorbato 20 a 37°C.
  10. 10. La nanopartlcula terapeutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 que tiene un diametro hidrodinamico de 70-140 nm.
  11. 11. Una composition farmaceuticamente aceptable que comprende una pluralidad de nanopartlculas terapeuticas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y uno o mas excipientes, diluyentes y/o vehlculos farmaceuticamente aceptables.
  12. 12. Una nanopartlcula terapeutica como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso como medicamento.
  13. 13. Una composicion como se reivindica en la reivindicacion 11 para su uso como medicamento.
  14. 14. Nanopartlcula terapeutica como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para su uso como medicamento para el tratamiento del cancer.
  15. 15. Una composicion como se reivindica en la reivindicacion 11 para su uso como medicamento para el tratamiento del cancer.
  16. 16. Una nanopartlcula terapeutica para uso como un medicamento para el tratamiento de cancer como se reivindica en la reivindicacion 14, en la que el cancer es cancer de pulmon, cancer colorrectal o un cancer hematologico, tal como leucemia mieloide aguda (AML) o linfoma difuso de celulas B grandes (DLBCL).
  17. 17. Una composicion para uso como medicamento para el tratamiento de cancer como se reivindica en la reivindicacion 15, en la que el cancer es cancer de pulmon, cancer colorrectal o un cancer hematologico, tal como AML o DLBCL.
  18. 18. Una combination adecuada para su uso en el tratamiento de cancer que comprende una composicion farmaceuticamente aceptable como se reivindica en la reivindicacion 11 y otro agente antitumoral.
  19. 19. Una combinacion como se reivindica en la reivindicacion 18, en la que el otro agente antitumoral se selecciona de:
    a) reglmenes quimioterapeuticos de cuidado estandar que incluyen la sustitucion o el aumento de quimioterapias antimitoticas en tumores solidos y canceres hematologicos, tales como taxeanos y alcaloides vinca;
    b) terapias dirigidas a la respuesta al dano del ADN, incluyendo agentes que inhiben la reparation del dano del ADN y el ciclo celular; y
    c) terapias mediadas por inmunidad, incluyendo inhibidores del bloqueo de control inmune tal como terapias dirigidas a CTLA4, PD-1 y PDL-1.
  20. 20. Un kit de partes que comprende:
    a) una composicion farmaceutica liofilizada que comprende nanopartlculas como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10; y
    b) instrucciones de uso.
  21. 21. Un procedimiento para preparar una nanopartlcula terapeutica como se reivindica en la reivindicacion 1, comprendiendo dicho procedimiento:
    1) combinar una primera fase organica que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema disolvente de TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO; con una primera solucion acuosa que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o eter estearllico de polioxietileno (100), en agua y alcohol bencllico para formar una segunda fase;
    2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion;
    3) detener la fase de emulsion a <5°C, formando de este modo una fase de detention, en el que la detention de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que tiene un pH entre 4 y 7;
    4) anadir una solucion acuosa de tensioactivo;
    5) concentration y aislamiento de las nanopartlculas resultantes por filtration.
  22. 22. Un procedimiento como se reivindica en la reivindicacion 21, que comprende
    1) combinar una primera fase organica que comprende un pollmero en acetato de etilo, AZD1152 hqpa en un sistema
    5
    10
    15
    20
    25
    disolvente TFA/agua/alcohol bencllico y acido pamoico en DMSO, con una primera solucion acuosa que comprende un tensioactivo tal como colato de sodio o polioxietileno (100) estearil eter, en agua, DMSO y alcohol bencllico, para formar una segunda fase;
    2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
    3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion;
    4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
    5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
    6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende un regulador que tiene un pH entre 4 y 7 tal como pH 6.5;
    7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo;
    8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
  23. 23. Un procedimiento como se reivindica en la reivindicacion 22, que comprende:
    1) combinar una primera fase organica que comprende un copollmero 16/5 PLA-PEG, AZD1152 hqpa y acido pamoico en una mezcla de disolventes que comprende TFA, alcohol bencllico, DMSO y acetato de etilo de tal manera que el alcohol bencllico:acetato de etilo esta presente en una proporcion molar de 1:3.6, con una primera solucion acuosa que comprende un tensioactivo tal como eter estearllico de polioxietileno (100), en agua, DMSO y alcohol bencllico, para formar una segunda fase;
    2) emulsionar la segunda fase para formar una emulsion gruesa;
    3) mantener la emulsion gruesa durante un tiempo de retencion;
    4) formar una nanoemulsion usando un homogeneizador de alta presion;
    5) opcionalmente esperar un tiempo de retardo de al menos 5 minutos;
    6) detener la fase de emulsion a 0-5°C, formando de este modo una fase detenida, en el que la detencion de la fase de emulsion comprende mezclar la fase de emulsion con una segunda solucion acuosa que comprende regulador a pH 6.5;
    7) adicionar una solucion acuosa de tensioactivo como solubilizante;
    8) concentrar y aislar las nanopartlculas resultantes por filtracion.
  24. 24. Un procedimiento como se reivindica en la reivindicacion 23, en el que el acido pamoico y AZD1152 hqpa se anaden a una relacion inicial de 0.8 moles de acido pamoico:1 mol de AZD1152 hqpa.
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