ES2642633T3 - Prevention and / or treatment of cardiovascular disease and / or associated heart failure - Google Patents
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Description
Prevención y/o tratamiento de la enfermedad cardiovascular y/o la insuficiencia cardíaca asociada Prevention and / or treatment of cardiovascular disease and / or associated heart failure
5 La presente invención se refiere a medicamentos para su uso en métodos para prevenir y/o tratar (más adelante “tratar”) un ser humano predispuesto a una lesión de tejido por radicales libres mediada por cobre de tejido y/o a una alteración mediada por cobre de repuestas de células madre de tejido normal. La invención tiene aplicación, entre otras cosas, para insuficiencia cardíaca, enfermedad macrovascular, enfermedad microvascular y/o enfermedad de tejidos y/u órganos tóxicos (por ejemplo, hipertensos) (estando tales dolencias tipificadas por insuficiencia cardíaca, cardiomiopatía, infarto de miocardio y enfermedades arteriales y de órganos relacionadas) y a compuestos, formulaciones, usos y métodos relacionados. The present invention relates to medicaments for use in methods for preventing and / or treating (later "treating") a human being predisposed to a tissue-free radical-mediated tissue-mediated tissue injury and / or to an alteration mediated by copper from normal tissue stem cell responses. The invention has application, among other things, for heart failure, macrovascular disease, microvascular disease and / or disease of tissues and / or toxic organs (eg hypertensive) (such ailments being typified by heart failure, cardiomyopathy, myocardial infarction and arterial and related organ diseases) and related compounds, formulations, uses and methods.
15 La presente invención se refiere a medicamentos para su uso en métodos de tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o afección (más adelante “tratar”) en un mamífero que incluye, por ejemplo, un ser humano predispuesto a una lesión de tejido por radicales libres con afectación o mediada por cobre de tejido y/o a alteración con afectación o mediada por cobre de repuestas de células madre de tejido normal. La invención tiene aplicación, entre otras cosas, en insuficiencia cardíaca, enfermedad o lesión macrovascular, enfermedad o lesión microvascular y/o enfermedad de tejidos y/u órganos tóxicos (por ejemplo, hipertensivo) (tales dolencias como pueden caracterizarse, por ejemplo, por insuficiencia cardíaca, cardiomiopatía, infarto de miocardio y enfermedades arteriales y de órganos relacionadas) y a compuestos, formulaciones, usos y métodos relacionados. The present invention relates to medicaments for use in methods of treatment, prevention or amelioration of a disease, disorder or condition (later "treating") in a mammal that includes, for example, a human being predisposed to a lesion of free radical tissue with copper-mediated or tissue-mediated and / or copper-mediated alteration of normal tissue stem cell responses. The invention has application, among other things, in heart failure, macrovascular disease or injury, microvascular disease or injury and / or disease of tissues and / or toxic organs (for example, hypertensive) (such ailments as can be characterized, for example, by heart failure, cardiomyopathy, myocardial infarction and related arterial and organ diseases) and related compounds, formulations, uses and methods.
25 La siguiente descripción incluye información que puede ser útil en el entendimiento de la presente invención. No es una admisión que cualquiera de la información proporcionada en este documento sea técnica anterior o relevante para las invenciones presentemente descritas o reivindicadas, o que cualquier publicación o documento que sea específicamente o implícitamente aludido sea técnica anterior. The following description includes information that may be useful in understanding the present invention. It is not an admission that any of the information provided in this document is prior or relevant technique for the inventions presently described or claimed, or that any publication or document that is specifically or implicitly alluded to is prior art.
El documento US 6.147.070 describe uso de quelantes de hierro en métodos de terapia. US 6,147,070 describes the use of iron chelators in therapy methods.
Berenshtein y col. MOLECULAR AND CELULAR BIOCHEMISTRY vol. 234/235, 2002, páginas 283-292, describen funciones de ferritina y hierro en el preacondicionamiento isquémico del corazón. Berenshtein et al. MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY vol. 234/235, 2002, pages 283-292, describe functions of ferritin and iron in the ischemic preconditioning of the heart.
35 El documento WO 00/18392 (GLYCOX CORPORATION LIMITED) describe usos de inhibidores de fructosamina oxidasa en el tratamiento de pacientes diabéticos. 35 WO 00/18392 (GLYCOX CORPORATION LIMITED) describes uses of fructosamine oxidase inhibitors in the treatment of diabetic patients.
SHIMIZU N y col. PEDIATRICS INTERNATIONAL, vol. 41, 1999, páginas 419-422, describen el uso de quelantes de cobre en el tratamiento y la gestión de enfermedad de Wilson. SHIMIZU N et al. PEDIATRICS INTERNATIONAL, vol. 41, 1999, pages 419-422, describe the use of copper chelators in the treatment and management of Wilson's disease.
JEREMY J Y y col. JOURNAL OF DRUG DEVELOPMENT AND CLINICAL PRACTICE, vol. 7, nº 2, 1995, páginas 119-126, describe ciertos efectos in vitro de quelantes de cobre sobre la síntesis de tromboxano A2 de plaquetas y la actividad de lipoxigenasa. JEREMY J Y et al. JOURNAL OF DRUG DEVELOPMENT AND CLINICAL PRACTICE, vol. 7, No. 2, 1995, pages 119-126, describes certain in vitro effects of copper chelators on platelet thromboxane A2 synthesis and lipoxygenase activity.
45 Por tanto, se entenderá que los mecanismos que subyacen las complicaciones a largo plazo de diabetes, incluyendo enfermedades y afecciones cardíacas asociadas, son complejos y se han estudiado desde hace tiempo sin el descubrimiento de intervenciones terapéuticas claras, seguras y eficaces. Existe la necesidad de tales terapias, que se describen en este documento. 45 Therefore, it will be understood that the mechanisms underlying the long-term complications of diabetes, including associated diseases and heart conditions, are complex and have long been studied without the discovery of clear, safe and effective therapeutic interventions. There is a need for such therapies, which are described in this document.
El corazón es el órgano más susceptible de todos los órganos del cuerpo al envejecimiento prematuro y al estrés oxidativo por radicales libres. The heart is the most susceptible organ of all body organs to premature aging and oxidative stress by free radicals.
55 En nuestros propios estudios (usando el modelo de rata diabética con estreptozotocina (STZ)), encontramos una alta frecuencia de cardiomiopatía por insuficiencia cardíaca y enfermedad macrovascular en animales gravemente diabéticos. 55 In our own studies (using the streptozotocin diabetic rat model (STZ)), we found a high frequency of cardiomyopathy due to heart failure and macrovascular disease in severely diabetic animals.
Creemos, sin desear limitarnos a ese tratamiento con quelantes de cobre específicos y otros agentes (por ejemplo, cinc que evita la absorción de cobre), que la diminución de los valores de cobre (especialmente cuando no conducen a estados de agotamiento de otros metales de transición (por ejemplo, hierro, cinc y manganeso) y a metales esenciales) beneficiará a un número y espectro cada vez más creciente de la población siempre que se excluya por sí mismo un estado de deficiencia de cobre. Nuestra hipótesis a la que no deseamos limitarnos es que valores de We believe, without wishing to limit ourselves to this treatment with specific copper chelators and other agents (for example, zinc that prevents the absorption of copper), that the decrease in copper values (especially when they do not lead to depletion states of other metals of Transition (for example, iron, zinc and manganese) and essential metals) will benefit an increasing number and spectrum of the population as long as a state of copper deficiency is excluded by itself. Our hypothesis we don't want to limit ourselves to is that values of
65 cobre (y particularmente cobre (II)) no unidos internamente a células están disponibles para mediar junto con 65 copper (and particularly copper (II)) not internally bound to cells are available to mediate along with
sustancias reductoras disponibles en la generación de radicales libres perjudiciales que tienen una función en tanto lesión de tejido como alteración de la reparación mediada por células madre de tal tejido. reducing substances available in the generation of harmful free radicals that have a function in both tissue injury and alteration of stem cell-mediated repair of such tissue.
A modo de ejemplo, en relación con el tejido de miocardio normal, creemos que la lesión como resultado de la As an example, in relation to normal myocardial tissue, we believe that the lesion as a result of
5 presencia de radicales libres conduce a insuficiencia cardíaca y/o cardiomiopatía y creemos que la presión continuada de tales radicales libres altera la reparación mediada por células madre del miocardio a su estado de salud normal. Con respecto a tal lesión y la alteración de la reparación, proponemos una reducción en los valores de cobre libre disponibles ya que es un enfoque preventivo y/o de tratamiento apropiado. The presence of free radicals leads to heart failure and / or cardiomyopathy and we believe that the continued pressure of such free radicals alters the repair mediated by myocardial stem cells to their normal state of health. With respect to such injury and the alteration of the repair, we propose a reduction in the values of free copper available as it is a preventive and / or appropriate treatment approach.
Por referencia a la disponibilidad de valores de cobre en mamíferos (incluyendo seres humanos) pueden identificarse aquellos pacientes mamíferos con un nivel de cobre que es “elevado” más allá del de la población general de tales mamíferos. Referencia en este documento a “elevado” en relación con la presencia de valores de cobre incluirá seres humanos que tienen al menos 10 μg de cobre libre/dl de suero cuando se mide como se trata por Merck & Co Inc más adelante. By reference to the availability of copper values in mammals (including humans), those mammalian patients with a copper level that is "high" beyond that of the general population of such mammals can be identified. Reference in this document to "elevated" in relation to the presence of copper values will include humans who have at least 10 μg of free copper / dl of serum when measured as treated by Merck & Co Inc below.
15 Puede hacerse una medida del cobre libre [que es igual al cobre en plasma total menos el cobre unido a ceruloplasmina] usando el procedimiento desvelado en la hoja de datos de Merck & Co Inc (www.merck.com) para las cápsulas SYPRINE® (clorhidrato de trientina) en la que establecen con respecto al uso de clorhidrato de trientina para los excesos de valores de cobre de enfermedad de Wilson: 15 A measure of free copper [which is equal to total plasma copper minus copper bound to ceruloplasmin] can be made using the procedure disclosed in the data sheet of Merck & Co Inc (www.merck.com) for SYPRINE® capsules (trientine hydrochloride) in which they establish with respect to the use of trientine hydrochloride for excess copper values of Wilson's disease:
“El índice más fidedigno para monitorizar el tratamiento es la determinación del cobre libre en el suero, que es igual a la diferencia entre el cobre total cuantitativamente determinado y el cobre en ceruloplasmina. Pacientes adecuadamente tratados tendrán normalmente menos de 10 μg de cobre libre/dl de suero. “The most reliable index for monitoring treatment is the determination of serum free copper, which is equal to the difference between quantitatively determined total copper and copper in ceruloplasmin. Properly treated patients will normally have less than 10 μg of free copper / dl of serum.
25 La terapia puede monitorizarse con un análisis de cobre urinario de 24 horas periódicamente (es decir, cada 6-12 meses). La orina debe recogerse en material de vidrio libre de cobre. Como una dieta baja en cobre debe mantener la absorción de cobre por debajo de un miligramo a día, el paciente probablemente estará en el estado deseado de equilibrio de cobre negativo si en una recogida de orina de 24 horas están presentes 0,5 a 1,0 miligramos de cobre”. 25 Therapy can be monitored with a 24-hour urinary copper test periodically (that is, every 6-12 months). Urine should be collected in copper-free glassware. Since a low-copper diet should maintain copper absorption below one milligram per day, the patient will probably be in the desired state of negative copper equilibrium if 0.5 to 1 are present in a 24-hour urine collection. 0 milligrams of copper. ”
Nosotros creemos, sin desear estar limitándonos, que esa reducción en el cobre libre disponible tiene un efecto en la prevención de enfermedades macrovasculares, microvasculares y/o tóxicas/metabólicas del tipo ejemplificado en lo sucesivo y en procesos de reparación de tejido. Esto es independientemente del metabolismo de la glucosa del paciente. We believe, without wishing to limit ourselves, that this reduction in available free copper has an effect on the prevention of macrovascular, microvascular and / or toxic / metabolic diseases of the type exemplified hereinafter and in tissue repair processes. This is regardless of the patient's glucose metabolism.
35 Nosotros también creemos, de nuevo sin estar limitándonos, que esa acumulación cardiovascular de iones de metales de transición redox-activos es responsable de muchas de las consecuencias adversas en diabetes. Bajo condiciones fisiológicas, la lesión a un órgano diana es detectada por células madre distantes, que migran al sitio de lesión, luego experimentan diferenciación de células madre alternativa; estos acontecimientos promueven la reparación estructural y funcional. Sin embargo, la acumulación de metales de transición redox-activos, particularmente cobre, en tejidos cardíacos o vasculares en sujetos con diabetes va acompañada de una supresión de la regeneración de tejido normal efectuada por la migración de células madre. Niveles de cobre elevados en tejido suprimen estos comportamientos biológicos normales de tales células sin diferenciar. Las afecciones que se producen en el contexto de diabetes o intolerancia a la glucosa, en las que la supresión de repuestas de células madre normales puede producir la alteración de respuestas de tejido normal, incluyen las siguientes: 35 We also believe, again without limiting ourselves, that this cardiovascular accumulation of redox-active transition metal ions is responsible for many of the adverse consequences in diabetes. Under physiological conditions, injury to a target organ is detected by distant stem cells, which migrate to the site of injury, then undergo alternative stem cell differentiation; These events promote structural and functional repair. However, the accumulation of redox-active transition metals, particularly copper, in cardiac or vascular tissues in subjects with diabetes is accompanied by a suppression of normal tissue regeneration effected by the migration of stem cells. High levels of copper in tissue suppress these normal biological behaviors of such undifferentiated cells. Conditions that occur in the context of diabetes or glucose intolerance, in which the suppression of normal stem cell responses can cause the alteration of normal tissue responses, include the following:
- 1.one.
- Insuficiencia cardíaca Heart failure
- 2.2.
- Infarto agudo de miocardio Acute myocardial infarction
- 3.3.
- Cicatrización y ulceración Healing and ulceration
- 4.Four.
- Lesión de tejido producida por infección Injury of tissue caused by infection
- 5.5.
- Lesión renal diabética Diabetic kidney injury
- 6.6.
- Alteración de la regeneración cardíaca Impaired cardiac regeneration
- 7.7.
- Alteración de la regeneración vascular Impaired vascular regeneration
- 8.8.
- Alteración de la regeneración de órganos dependientes Alteration of the regeneration of dependent organs
55 Las afecciones en las que la terapia para reducir los valores de cobre en pacientes diabéticos (es decir, con IG o diabetes mellitus de tipo 2) es responsable de demostrar beneficio incluyen al menos las siguientes: 55 Conditions in which therapy to reduce copper values in diabetic patients (that is, with GI or type 2 diabetes mellitus) is responsible for demonstrating benefit include at least the following:
1. INSUFICIENCIA CARDÍACA EN EL CONTEXTO DE DIABETES 1. HEART INSUFFICIENCY IN THE CONTEXT OF DIABETES
Puede producirse una regeneración significativa de tejidos cardíacos en el plazo de algunos días desde el trasplante cardíaco. Un mecanismo probable es la migración de células madre de sitios extracardíacos al corazón, con posterior diferenciación de tales células en diversas células cardíacas especializadas, que incluyen células vasculares miocárdicas, endoteliales y coronarias. Creemos, sin desear limitarnos, que la acumulación de cobre en tejidos cardíacos es probable que altere gravemente estas respuestas regeneradoras: de ahí una función para 65 terapia intravenosa de corta duración con un quelante de metal de transición de cobre en el tratamiento de Significant regeneration of cardiac tissues can occur within a few days from the heart transplant. A probable mechanism is the migration of stem cells from extracardiac sites to the heart, with subsequent differentiation of such cells into various specialized cardiac cells, including myocardial, endothelial and coronary vascular cells. We believe, without wishing to limit ourselves, that the accumulation of copper in cardiac tissues is likely to seriously alter these regenerative responses: hence a function for short-term intravenous therapy with a copper transition metal chelator in the treatment of
insuficiencia cardíaca diabética. diabetic heart failure
2. INFARTO DE MIOCARDIO EN EL CONTEXTO DE DIABETES. 2. INFO OF MYOCARDIUM IN THE CONTEXT OF DIABETES.
5 El infarto de miocardio va acompañado de proliferación de células en el miocardio ventricular. Si se produce IM en el contexto de diabetes, la presencia de niveles elevados en tejido de metales de transición activos para rédox suprime las repuestas de células madre normales, produciendo alteración de la reparación estructural y funcional de tejidos lesionados. Se ha informado que hasta el 20% de las células en el corazón puede reemplazarse por migración de células madre de sitios extraventriculares, en tan sólo cuatro días después del trasplante cardíaco4. Estas observaciones nos sugieren que el tratamiento de IMA en el contexto de diabetes mejorará por la administración de corta duración (si fuera necesario, parenteral), además de por posterior administración prolongada, de quelantes. Proponemos que el mecanismo de la alteración de la función cardíaca en diabetes es probablemente un efecto tóxico de metales de transición acumulados sobre la dinámica de tejidos, produciendo la alteración de la regeneración de tejidos producida a su vez por la supresión de repuestas de células madre normales, que median 5 Myocardial infarction is accompanied by proliferation of cells in the ventricular myocardium. If MI occurs in the context of diabetes, the presence of elevated levels in active transition metal tissue for redox suppresses the responses of normal stem cells, causing alteration of the structural and functional repair of injured tissues. It has been reported that up to 20% of the cells in the heart can be replaced by migration of stem cells from extraventricular sites, in just four days after heart transplantation4. These observations suggest that the treatment of IMA in the context of diabetes will be improved by the administration of short duration (if necessary, parenteral), in addition to subsequent prolonged administration of chelators. We propose that the mechanism of the alteration of the cardiac function in diabetes is probably a toxic effect of accumulated transition metals on the dynamics of tissues, producing the alteration of the regeneration of tissues produced in turn by the suppression of responses of normal stem cells that mediated
15 en la regeneración de tejido fisiológico por migración a tejido lesionado desde sitios externos. 15 in the regeneration of physiological tissue by migration to injured tissue from external sites.
3. CICATRIZACIÓN Y ULCERACIÓN EN EL CONTEXTO DE DIABETES 3. CICATRIZATION AND ULCERATION IN THE CONTEXT OF DIABETES
Los procesos de reparación de tejido normal requieren la intervención de células madre de movilización, que efectúan la reparación, por ejemplo, de las diversas capas de vasos sanguíneos. Creemos, sin desear limitarnos, que una acumulación de metales de transición (particularmente cobre) en tejidos vasculares produce la alteración del comportamiento del tejido característica de diabetes, que incluye alteración de la reparación de heridas tras cirugía o traumatismo, y la tendencia exagerada a ulceración y mala curación de úlceras establecidas. Creemos, sin desear limitarnos, que el tratamiento de diabéticos con quelantes de cobre antes de que se sometan a cirugía, o en Normal tissue repair processes require the intervention of mobilization stem cells, which repair, for example, the various layers of blood vessels. We believe, without wishing to limit ourselves, that an accumulation of transition metals (particularly copper) in vascular tissues causes the alteration of the characteristic tissue behavior of diabetes, which includes alteration of wound repair after surgery or trauma, and the exaggerated tendency to ulceration and poor healing of established ulcers. We believe, without wishing to limit ourselves, that the treatment of diabetics with copper chelators before they undergo surgery, or in
25 el contexto de lesión traumática de tejido, es probablemente beneficioso. Creemos adicionalmente que es probable que la cirugía en diabéticos tuviera un mejor resultado si el exceso de metales de transición se eliminara de vasos sanguíneos antes de la cirugía. Esto puede llevarse a cabo en tanto una base de corta duración (con terapia parenteral) como en una base más prolongada (con terapia oral) antes de la cirugía real. 25 The context of traumatic tissue injury is probably beneficial. We further believe that diabetic surgery is likely to have a better outcome if excess transition metals were removed from blood vessels before surgery. This can be done on both a short-term basis (with parenteral therapy) and on a longer basis (with oral therapy) before actual surgery.
4. LESIÓN DE TEJIDO BLANDO RESULTANTE DE INFECCIÓN Y QUE SE PRODUCE EN EL CONTEXTO DE DIABETES O INTOLERANCIA A LA GLUCOSA 4. INJURY OF SOFT TISSUE RESULTING FROM INFECTION AND THAT IS PRODUCED IN THE CONTEXT OF DIABETES OR GLUCOSE INTOLERANCE
Creemos, sin desear limitarnos, que los procesos de reparación de tejido normal tras la infección requieren la intervención de células madre movilizadas, que migran a sitios de lesión de tejido para efectuar la regeneración y We believe, without wishing to limit ourselves, that normal tissue repair processes after infection require the intervention of mobilized stem cells, which migrate to tissue injury sites to effect regeneration and
35 reparación de tejido, por ejemplo, de las diversas capas de vasos sanguíneos. De esto resulta que la reparación de tal lesión de tejido será alterada por repuestas de células madre suprimidas, tales como aquellas producidas por la formación de metales de transición activos para rédox (particularmente cobre) en tejidos, por ejemplos, las paredes de los vasos sanguíneos. 35 tissue repair, for example, of the various layers of blood vessels. It follows that the repair of such a tissue injury will be altered by suppressed stem cell responses, such as those produced by the formation of active transition metals for redox (particularly copper) in tissues, for example, the blood vessel walls .
5. LESIÓN RENAL QUE SE PRODUCE EN EL CONTEXTO DE DIABETES 5. RENAL INJURY THAT IS PRODUCED IN THE CONTEXT OF DIABETES
Creemos, sin desear limitarnos, que la alteración de respuestas de células madre en los riñones de diabéticos contribuye a nefropatía diabética e insuficiencia renal. Creemos, de nuevo sin desear limitarnos, que el tratamiento de diabéticos que tienen insuficiencia renal por administración de un quelante de cobre mejorará la regeneración de We believe, without wishing to limit ourselves, that altering stem cell responses in diabetic kidneys contributes to diabetic nephropathy and renal failure. We believe, again without wishing to limit ourselves, that the treatment of diabetics who have renal failure by administration of a copper chelator will improve the regeneration of
45 órganos restaurando la curación de tejido normal permitiendo que las células madre migren y se diferencien normalmente. 45 organs restoring normal tissue healing allowing stem cells to migrate and differentiate normally.
Creemos, de nuevo sin desear limitarnos, que una reducción en los valores de cobre extracelulares es ventajosa incluso en el mamífero no diabético e incluso en un mamífero sin una anomalía en el mecanismo de la glucosa, ya que tales menores niveles conducirán a uno o a ambos de una reducción en la lesión de tejido mediada por cobre y reparación de tejido mejorada por restauración de repuestas de células madre de tejido normal. We believe, again without wishing to limit ourselves, that a reduction in extracellular copper values is advantageous even in the non-diabetic mammal and even in a mammal without an abnormality in the glucose mechanism, since such lower levels will lead to one or both of a reduction in copper-mediated tissue injury and improved tissue repair by restoring stem cell responses from normal tissue.
6. ALTERACIÓN DE LA REGENERACIÓN CARDÍACA 6. CHANGING THE HEART REGENERATION
55 Creemos, sin desear limitarnos, que la acumulación de cobre en tejidos cardíacos suprime la regeneración de tejido normal efectuada por la migración de células madre de sitios extracardíacos al corazón, con posterior diferenciación de tales células en diversas células cardíacas especializadas, que incluyen células vasculares miocárdicas, endoteliales y coronarias. Creemos, de nuevo sin desear limitarnos, que una reducción en los valores de cobre extracelulares reducirá o eliminará la alteración de la regeneración de tejido producida por la supresión de repuestas de células madre normales. 55 We believe, without wishing to limit ourselves, that the accumulation of copper in cardiac tissues suppresses the regeneration of normal tissue effected by the migration of stem cells from extracardiac sites to the heart, with subsequent differentiation of such cells into various specialized cardiac cells, including vascular cells myocardial, endothelial and coronary. We believe, again without wishing to limit ourselves, that a reduction in extracellular copper values will reduce or eliminate the alteration of tissue regeneration caused by the suppression of normal stem cell responses.
7. ALTERACIÓN DE LA REGENERACIÓN VASCULAR 7. ALTERATION OF THE VASCULAR REGENERATION
Los procesos de regeneración vascular requieren la intervención de células madre de movilización, que efectúan la 65 reparación de las diversas capas de vasos sanguíneos. Creemos, sin desear limitarnos, que una acumulación de Vascular regeneration processes require the intervention of mobilization stem cells, which repair the various layers of blood vessels. We believe, without wishing to limit ourselves, that an accumulation of
metales de transición (particularmente cobre) en tejidos vasculares produce alteración de la regeneración de tejidos suprimiendo la migración de células madre no diferenciadas y repuestas de células madre de tejido normal. Adicionalmente creemos, de nuevo sin desear limitarnos, que una reducción en los valores de cobre extracelulares es ventajosa porque tales menores niveles conducirán a una reducción en la alteración de la regeneración vascular Transition metals (particularly copper) in vascular tissues cause tissue regeneration to be altered by suppressing the migration of undifferentiated stem cells and normal tissue stem cell responses. Additionally we believe, again without wishing to limit ourselves, that a reduction in extracellular copper values is advantageous because such lower levels will lead to a reduction in the alteration of vascular regeneration
5 por restauración de repuestas de células madre de tejido normal. 5 by restoration of normal tissue stem cell responses.
8. ALTERACIÓN DE LA REGENERACIÓN DE ÓRGANOS DEPENDIENTE 8. ALTERATION OF THE REGENERATION OF DEPENDENT BODIES
Creemos, sin desear limitarnos, que una acumulación de metales de transición (particularmente cobre) en los tejidos de los órganos dependientes del árbol cardiovascular (por ejemplo retina, riñón, nervios, etc.) produce alteración de la regeneración de tejidos suprimiendo la migración de células madre y así los comportamientos biológicos normales de tales células madre. De esto resulta que una reducción en los valores de cobre extracelulares es ventajosa para reducir o eliminar la alteración en la regeneración de tejido por restauración de repuestas de células madre de tejido normal. We believe, without wishing to limit ourselves, that an accumulation of transition metals (particularly copper) in the tissues of the organs dependent on the cardiovascular tree (for example, retina, kidney, nerves, etc.) causes alteration of tissue regeneration suppressing the migration of stem cells and thus the normal biological behaviors of such stem cells. It follows that a reduction in extracellular copper values is advantageous to reduce or eliminate the alteration in tissue regeneration by restoring responses of normal tissue stem cells.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un agente eficaz para reducir el contenido de valores de cobre en un sujeto humano, comprendiendo dicho agente trientina o un agente quelante de cobre de tipo trientina seleccionado del grupo que consiste en: trietilentetramina, clorhidrato de trientina, 2,3,2 tetramina, tetraclorhidrato de 2,2,2 tetramina, tetraclorhidrato de 2,3,2 tetramina y tetraclorhidrato de trietilentetramina, para uso en el tratamiento en un sujeto humano no diabético que no tiene enfermedad de Wilson de patologías del árbol cardiovascular y órganos dependientes seleccionados de: In a first aspect, the present invention provides an effective agent for reducing the content of copper values in a human subject, said trientine agent or a trientine type copper chelating agent selected from the group consisting of: triethylenetetramine, trientine hydrochloride , 2,3,2 tetramine, 2,2,2 tetramine tetrahydrochloride, 2,3,2 tetramine tetrahydrochloride and triethylenetetramine tetrahydrochloride, for use in the treatment of a non-diabetic human subject without Wilson's disease of pathologies of the cardiovascular tree and dependent organs selected from:
25 i) cardiomiopatía, ii) trastornos ateromatosos de los vasos sanguíneos principales, iii) trastornos tóxicos, inducidos por fármaco y metabólicos de vasos sanguíneos pequeños y iv) ruptura de placas de lesiones ateromatosas de los vasos sanguíneos principales, 25 i) cardiomyopathy, ii) atheromatous disorders of the main blood vessels, iii) toxic, drug-induced and metabolic disorders of small blood vessels and iv) rupture of plaques of atheromatous lesions of the main blood vessels,
o para uso en dicho sujeto en un método para mejorar la reparación tisular de tejido dañado seleccionado de miocardio, el árbol vascular y órganos dependientes del árbol vascular, en el que el daño ha surgido de uno o más de i) a iv). or for use in said subject in a method to improve tissue repair of damaged tissue selected from myocardium, the vascular tree and organs dependent on the vascular tree, in which the damage has arisen from one or more of i) to iv).
En algunas realizaciones, los órganos dependientes comprenden el riñón. In some embodiments, the dependent organs comprise the kidney.
35 En algunas realizaciones, los órganos dependientes comprenden la retina o los nervios. In some embodiments, the dependent organs comprise the retina or nerves.
En algunas realizaciones, el agente comprende trietilentetramina. In some embodiments, the agent comprises triethylenetetramine.
En algunas realizaciones, el sujeto padece y/o está predispuesto a insuficiencia cardíaca y/o cardiomiopatía. In some embodiments, the subject suffers and / or is predisposed to heart failure and / or cardiomyopathy.
En algunas realizaciones, el agente tiene una afinidad por el cobre por encima de la del hierro. In some embodiments, the agent has an affinity for copper over that of iron.
En algunas realizaciones, el sujeto tiene un contenido de valores de cobre elevado y/o se realiza al menos una 45 determinación del estado de los valores de cobre en dicho sujeto. In some embodiments, the subject has a high content of copper values and / or at least a determination is made of the status of the copper values in said subject.
En algunas realizaciones, el agente se selecciona del grupo que consiste en clorhidrato de trientina, tetraclorhidrato de 2,2,2 tetramina, tetraclorhidrato de 2,3,2 tetramina y tetraclorhidrato de trietilentetramina. In some embodiments, the agent is selected from the group consisting of trientine hydrochloride, 2.2.2 tetramine tetrahydrochloride, 2,3.2 tetramine tetrahydrochloride and triethylenetetramine tetrahydrochloride.
En algunas realizaciones, el agente es clorhidrato de trientina y es para su uso en una administración a dosificaciones o a una dosificación para proporcionar, si es parenteral, al menos aproximadamente 120 mg/día en dicho paciente y, si es oral, al menos aproximadamente 1200 mg/día en dicho sujeto. In some embodiments, the agent is trientine hydrochloride and is for use in a dosage or dosage administration to provide, if parenteral, at least about 120 mg / day in said patient and, if oral, at least about 1200 mg / day in said subject.
En algunas realizaciones, el agente está en forma de una unidad de dosificación. En particular, la unidad de 55 dosificación puede ser una unidad de dosificación oral. In some embodiments, the agent is in the form of a dosage unit. In particular, the dosage unit may be an oral dosage unit.
En algunas realizaciones, el trastorno ateromatoso es un trastorno ateromatoso de la aorta, las arterias coronarias, las arterias carótidas, las arterias cerebrovasculares, las arterias renales, las arterias ilíacas, las arterias femorales o las arterias poplíteas. In some embodiments, the atheromatous disorder is an atheromatous disorder of the aorta, coronary arteries, carotid arteries, cerebrovascular arteries, renal arteries, iliac arteries, femoral arteries or popliteal arteries.
En algunas realizaciones, el trastorno de un vaso sanguíneo pequeño es un trastorno de uno o más de las arteriolas retinianas, las arteriolas glomerulares, el vaso nervorum, las arteriolas cardíacas, los lechos capilares del ojo, el riñón, el corazón y los sistemas nervioso central y periférico. In some embodiments, the disorder of a small blood vessel is a disorder of one or more of the retinal arterioles, glomerular arterioles, nervorum vessel, cardiac arterioles, capillary beds of the eye, kidney, heart and nervous systems. central and peripheral.
65 En algunas realizaciones, la lesión ateromatosa es una lesión ateromatosa de la aorta, las arterias coronarias, las 65 In some embodiments, the atheromatous lesion is an atheromatous lesion of the aorta, the coronary arteries, the
arterias carótidas, las arterias cerebrovasculares, las arterias renales, las arterias ilíacas, las arterias femorales y las arterias poplíteas. carotid arteries, cerebrovascular arteries, renal arteries, iliac arteries, femoral arteries and popliteal arteries.
La presente invención se describirá ahora con referencia a uno cualquiera o más de los siguientes dibujos en los que The present invention will now be described with reference to any one or more of the following drawings in which
5 la Figura 1 es un diagrama que muestra lo que nosotros creemos que son las rutas tratadas por la presente invención, la Figura 2 es nuestra hipótesis de los mecanismos implicados aplicables a cardiomiopatía y enfermedad macrovascular en un paciente con diabetes de tipo II o intolerancia a la glucosa, mostrando una hipótesis tal dependencia de una posible generación de fructosamina oxidasa/superóxido dismutasa de un precursor en una reacción catalizada por cobre (la reacción de Haber-Weiss) que genera los radicales libres perjudiciales, la Figura 3 es la metodología para un paciente humano sospechoso de cardiomiopatía bajo la presente invención, la Figura 4 es un diagrama similar al de la Figura 3, pero esta vez con respecto a un paciente sospechoso de 5 Figure 1 is a diagram showing what we believe are the routes treated by the present invention, Figure 2 is our hypothesis of the mechanisms involved applicable to cardiomyopathy and macrovascular disease in a patient with type II diabetes or intolerance to glucose, showing a hypothesis such dependence on a possible generation of fructosamine oxidase / superoxide dismutase from a precursor in a copper-catalyzed reaction (the Haber-Weiss reaction) that generates harmful free radicals, Figure 3 is the methodology for Human patient suspected of cardiomyopathy under the present invention, Figure 4 is a diagram similar to that of Figure 3, but this time with respect to a patient suspected of
15 enfermedad macrovascular, la Figura 5 es un diagrama que muestra el peso corporal de los animales que cambia con el periodo de tiempo del experimento, la Figura 6 muestra los niveles de glucosa de los animales que cambia con el periodo de tiempo del experimento, la Figura 7 es un diagrama que muestra la entrada cardíaca, la Figura 8 es un diagrama que muestra el flujo coronario, la Figura 9 es un diagrama que muestra el flujo coronario normalizado al peso cardíaco final, la Figura 10 es un diagrama que muestra el flujo aórtico, la Figura 11 es un diagrama que muestra la tasa máxima de cambio positivo en el desarrollo de la presión en el 15 macrovascular disease, Figure 5 is a diagram showing the body weight of the animals that changes with the period of time of the experiment, Figure 6 shows the glucose levels of the animals that changes with the period of time of the experiment, the Figure 7 is a diagram showing the cardiac input, Figure 8 is a diagram showing the coronary flow, Figure 9 is a diagram showing the coronary flow normalized to the final cardiac weight, Figure 10 is a diagram showing the flow aortic, Figure 11 is a diagram showing the maximum rate of positive change in the development of pressure in the
25 ventrículo con cada ciclo cardíaco (contracción), la Figura 12 es un diagrama que muestra la tasa máxima de disminución en la presión en el ventrículo con cada ciclo cardíaco (relajación), la Figura 13 muestra el porcentaje de corazones de supervivencia funcional en cada poscarga, la Figura 14 muestra en un diagrama cómo el corazón extraído se unió al aparato modificado, la Figura 15 muestra en un diagrama el corazón representado en la Figura 14 en más detalle (figura adaptada de Grupp I y col., Am J Physiol (1993) 34: H1401 -1410), la Figura 16 muestra la secreción de orina en animales diabéticos y no diabéticos en respuesta a dosis crecientes de trientina o volumen equivalente de solución salina, donde la secreción de orina en animales diabéticos y no diabéticos en respuesta a dosis crecientes de trientina (abajo; 0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg-1 en 75 µl 25 ventricle with each cardiac cycle (contraction), Figure 12 is a diagram showing the maximum rate of decrease in ventricle pressure with each cardiac cycle (relaxation), Figure 13 shows the percentage of functional survival hearts in each afterload, Figure 14 shows in a diagram how the extracted heart was attached to the modified apparatus, Figure 15 shows in a diagram the heart represented in Figure 14 in more detail (adapted figure from Grupp I et al., Am J Physiol ( 1993) 34: H1401-1410), Figure 16 shows urine secretion in diabetic and non-diabetic animals in response to increasing doses of trientine or equivalent volume of saline, where urine secretion in diabetic and non-diabetic animals in response at increasing doses of trientine (below; 0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg-1 in 75 µl
35 de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina (arriba), y cada punto representa un periodo de recogida de orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 17 muestra la secreción de orina en animales diabéticos y no diabéticos que reciben dosis crecientes de trientina o un volumen equivalente de solución salina, donde la secreción de orina en ratas diabéticas (arriba) y no diabéticas (abajo) que reciben dosis crecientes de trientina (0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg-1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina, y cada punto representa un periodo de recogida de orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son 35 saline solution followed by 125 µl of saline solution injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution (above), and each point represents a 15 min urine collection period (see Methods for the details); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 17 shows urine secretion in diabetic and non-diabetic animals receiving increasing doses of trientine or an equivalent volume of solution saline, where the secretion of urine in diabetic (above) and non-diabetic (below) rats receiving increasing doses of trientine (0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg-1 in 75 µl of saline followed by 125 µl of saline solution injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution, and each point represents a 15 min urine collection period (see Methods for details); error bars show EEM and P values are set if they are
45 significativos (P < 0,05), la Figura 18 muestra la secreción de cobre en la orina de animales diabéticos y no diabéticos que reciben dosis crecientes de trientina o un volumen equivalente de solución salina, donde la secreción de cobre en orina de ratas diabéticas (arriba) y no diabéticas (abajo) que reciben dosis crecientes de trientina (0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina, y cada punto representa un periodo de recogida de orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 19 muestra la misma información en la Figura 18 con presentación de la secreción de cobre urinario por gramo de peso corporal, donde la secreción de cobre urinario por gramo de peso corporal en animales 45 significant (P <0.05), Figure 18 shows the secretion of copper in the urine of diabetic and non-diabetic animals receiving increasing doses of trientine or an equivalent volume of saline, where the secretion of copper in the urine of rats diabetic (above) and non-diabetic (below) receiving increasing doses of trientine (0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg1 in 75 µl of saline followed by 125 µl of saline wash injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution, and each point represents a urine collection period of 15 min (see Methods for details); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 19 shows the same information in Figure 18 with presentation of urinary copper secretion per gram of body weight, where urinary copper secretion per gram of body weight in animals
55 diabéticos y no diabéticos en respuesta a dosis crecientes de trientina (abajo; 0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg-1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina (arriba), y cada punto representa un periodo de recogida de orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 20 muestra la cantidad total de cobre secretado en animales diabéticos y no diabéticos a los que se les administró solución salina o fármaco, donde la secreción de cobre urinario total (µmol) en animales no diabéticos a los que se les administró solución salina (barra negra, n = 7) o trientina (barra sombreada, n = 7) y en animales diabéticos a los que se les administró solución salina (barra gris, n = 7) o trientina (barra blanca, n = 7); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), 55 diabetics and non-diabetics in response to increasing doses of trientine (below; 0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg-1 in 75 µl of saline followed by 125 µl of saline wash injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution (above), and each point represents a urine collection period of 15 min (see Methods for details); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 20 shows the total amount of copper secreted in diabetic and non-diabetic animals that were given saline or drug solution , where the secretion of total urinary copper (µmol) in non-diabetic animals that were given saline (black bar, n = 7) or trientine (shaded bar, n = 7) and in diabetic animals that were given administered saline (gray bar, n = 7) or trientine (white bar, n = 7); Error bars show EEM and P values are set if they are significant (P <0.05),
65 la Figura 21 muestra la cantidad total de cobre secretado por gramo de peso corporal en animales que reciben 65 Figure 21 shows the total amount of copper secreted per gram of body weight in animals receiving
trientina o solución salina, donde la secreción de cobre urinario total por gramo de peso corporal (µmol·g de PC-1) en animales que reciben trientina (no diabéticos: barra sombreada, n = 7; diabéticos: barra blanca, n = 7) o solución salina (no diabéticos: barra negra, n = 7; diabéticos: barra gris, n = 7); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), trientine or saline solution, where total urinary copper secretion per gram of body weight (µmol · g of PC-1) in animals receiving trientine (non-diabetic: shaded bar, n = 7; diabetic: white bar, n = 7 ) or saline solution (non-diabetic: black bar, n = 7; diabetic: gray bar, n = 7); Error bars show EEM and P values are set if they are significant (P <0.05),
5 la Figura 22 muestra la secreción de hierro en orina de animales diabéticos y no diabéticos que reciben dosis crecientes de trientina o un volumen equivalente de solución salina, donde la secreción de hierro en orina de ratas diabéticas (arriba) y no diabéticas (abajo) que reciben dosis crecientes de trientina (0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina, y cada punto representa un periodo de recogida de 5 Figure 22 shows the secretion of iron in the urine of diabetic and non-diabetic animals receiving increasing doses of trientine or an equivalent volume of saline, where the secretion of iron in the urine of diabetic (above) and non-diabetic (below) rats receiving increasing doses of trientine (0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg1 in 75 µl of saline followed by 125 µl of saline wash injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution, and each point represents a collection period of
10 orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 23 muestra la secreción de hierro urinario por gramo de peso corporal en animales diabéticos y no diabéticos que reciben trientina o solución salina, donde la secreción de hierro urinario por gramo de peso corporal en animales diabéticos y no diabéticos en respuesta a dosis crecientes de trientina (abajo; 0,1, 1,0, 10, 10 urine for 15 min (see Methods for details); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 23 shows the secretion of urinary iron per gram of body weight in diabetic and non-diabetic animals receiving trientine or saline solution , where the secretion of urinary iron per gram of body weight in diabetic and non-diabetic animals in response to increasing doses of trientine (below; 0.1, 1.0, 10,
15 100 mg·kg-1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina inyectado en el momento mostrado por la flecha) o un volumen equivalente de solución salina (arriba), y cada punto representa un periodo de recogida de orina de 15 min (véase Métodos para los detalles); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 24 muestra la secreción de hierro urinario total en animales diabéticos y no diabéticos a los que se les 15 100 mg · kg-1 in 75 µl of saline solution followed by 125 µl of saline wash injected at the time shown by the arrow) or an equivalent volume of saline solution (above), and each point represents a collection period 15 min urine (see Methods for details); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 24 shows the secretion of total urinary iron in diabetic and non-diabetic animals that are given
20 administró solución salina o fármaco, donde la secreción de hierro urinario total (µmol) en animales no diabéticos a los que se les administró solución salina (barra negra, n = 7) o trientina (barra sombreada, n = 7) y en animales diabéticos a los que se les administró solución salina (barra gris, n = 7) o trientina (barra blanca, n = 7); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P < 0,05), la Figura 25 muestra la secreción de hierro urinario total por gramo de peso corporal en animales que reciben 20 administered saline or drug, where the secretion of total urinary iron (µmol) in non-diabetic animals that were given saline (black bar, n = 7) or trientine (shaded bar, n = 7) and in animals diabetics who were given saline (gray bar, n = 7) or trientine (white bar, n = 7); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P <0.05), Figure 25 shows total urinary iron secretion per gram of body weight in animals receiving
25 trientina o solución salina, donde la secreción de hierro urinario total por gramo de peso corporal (µmol·g de PC1) en animales que reciben trientina (no diabéticos: barra sombreada, n = 7; diabéticos: barra blanca, n = 7) o solución salina (no diabéticos: barra negra, n = 7; diabéticos: barra gris, n = 7); las barras de error muestran EEM y los valores de P se establecen si son significativos (P ≤ 0,05), la Figura 26 es una tabla que compara la secreción de cobre y de hierro en los animales que reciben trientina o 25 trientine or saline solution, where the secretion of total urinary iron per gram of body weight (µmol · g of PC1) in animals receiving trientine (non-diabetic: shaded bar, n = 7; diabetic: white bar, n = 7) or saline solution (non-diabetic: black bar, n = 7; diabetic: gray bar, n = 7); Error bars show EEM and P values are established if they are significant (P ≤ 0.05), Figure 26 is a table that compares the secretion of copper and iron in animals receiving trientine or
30 solución salina, que es un análisis estadístico usando un modelo lineal mixto. 30 saline solution, which is a statistical analysis using a mixed linear model.
El aumento de cobre en tejido participa en mecanismos que conducen a lesión nerviosa diabética. Por tanto, The increase in copper in tissue participates in mechanisms that lead to diabetic nerve injury. So,
35 nosotros planteamos como hipótesis que la acumulación en tejido de metales traza podría desempeñar una función en los mecanismos de lesión diabética en otros tejidos. Las pruebas histológicas de estudios anteriores nuestros mostraron que 6 meses de tratamiento con trientina parece proteger los corazones de ratas Wistar diabéticas del desarrollo de lesión diabética (cardiomiopatía) como se juzga por la histología. En este estudio, investigamos las dosis de trientina requeridas para secretar cobre y hierro en la orina, y también cualquier posible diferencia entre la 35 We hypothesize that the accumulation in trace metal tissue could play a role in the mechanisms of diabetic injury in other tissues. The histological tests of our previous studies showed that 6 months of treatment with trientine seems to protect the hearts of diabetic Wistar rats from the development of diabetic lesion (cardiomyopathy) as judged by histology. In this study, we investigated the doses of trientine required to secrete copper and iron in the urine, and also any possible difference between the
40 secreción de estos metales en animales diabéticos y no diabéticos. 40 secretion of these metals in diabetic and non-diabetic animals.
AIM AIM
1. Para comparar los perfiles de secreción de cobre y hierro en la orina de ratas normales y diabéticas después 45 de administración intravenosa a corto plazo de dosis crecientes de trientina. 1. To compare the profiles of copper and iron secretion in the urine of normal and diabetic rats after short-term intravenous administration of increasing doses of trientine.
2. Para determinar que la administración intravenosa a corto plazo de trientina no tiene efectos secundarios cardiovasculares adversos agudos. 2. To determine that short-term intravenous administration of trientine has no acute adverse cardiovascular side effects.
50 Todos los métodos usados en este estudio fueron aprobados por el Comité de ética animal de la Universidad de Auckland y fueron según el Acta de protección animal y reglamentaciones de Nueva Zelanda. 50 All the methods used in this study were approved by the Animal Ethics Committee of the University of Auckland and were according to the New Zealand Animal Protection and Regulations Act.
55 Ratas Wistar macho (n = 28, 303 ± 2,9 g) se dividieron aleatoriamente en grupos diabéticos y no diabéticos. Tras la inducción de anestesia (5% de halotano y 2 l·min-1 de O2), los animales en el grupo diabético recibieron una dosis intravenosa única de estreptozotocina (STZ, 55 mg·kg-1 de peso corporal, Sigma; St. Louis, MO) en 0,5 ml de solución salina administrada por la vena de la cola. Los animales no diabéticos recibieron un volumen equivalente de 55 Male Wistar rats (n = 28, 303 ± 2.9 g) were randomly divided into diabetic and non-diabetic groups. After induction of anesthesia (5% halothane and 2 l · min-1 of O2), the animals in the diabetic group received a single intravenous dose of streptozotocin (STZ, 55 mg · kg-1 body weight, Sigma; St Louis, MO) in 0.5 ml of saline solution administered by the tail vein. Non-diabetic animals received an equivalent volume of
60 solución salina. Tras la inyección, tanto las ratas diabéticas como no diabéticas se alojaron en parejas iguales y se les proporcionó acceso a pienso de rata normal (gránulos de la dieta 86; New Zealand Stock Feeds, Auckland, NZ) y agua desionizada a voluntad. La glucosa en sangre y el peso corporal se midieron en el día 3 tras la inyección de STZ/solución salina y luego semanalmente durante todo el estudio. La diabetes se identificó por polidipsia, poliuria y hiperglucemia (> 11 mmol·l-1, Advantage II, Roche Diagnostics, NZ Ltd). 60 saline solution. After injection, both diabetic and non-diabetic rats were housed in equal pairs and were given access to normal rat feed (diet pellets 86; New Zealand Stock Feeds, Auckland, NZ) and deionized water at will. Blood glucose and body weight were measured on day 3 after STZ / saline injection and then weekly throughout the study. Diabetes was identified by polydipsia, polyuria and hyperglycemia (> 11 mmol·l-1, Advantage II, Roche Diagnostics, NZ Ltd).
Seis a siete semanas (media = 44 ± 1 días) después de la administración de STZ, los animales se sometieron a un protocolo experimental tanto de control como de fármaco. Todos los animales ayunaron durante la noche antes de la 5 cirugía, pero continuaron teniendo acceso a voluntad a agua desionizada. La inducción y el mantenimiento de la anestesia quirúrgica fue por 3 -5% de halotano y 21.min-1 de O2. La arteria y vena femoral se canularon con un transductor de tensión arterial en estado sólido (Mikrotip™ 1.4F, Millar Instruments, Texas, EE.UU.) y un catéter de PE 50 cargado de solución salina, respectivamente. Los uréteres se expusieron mediante una incisión abdominal de la línea media, se canularon usando catéteres de polietileno (diámetro externo 0,9 mm, diámetro interno 0,5 mm) y la 10 herida se cerró por sutura. La tráquea se canuló y el animal se ventiló a 70-80 ventilaciones·min-1 con aire complementado con O2 (Pressure Controlled Ventilator, Kent Scientific, Connecticut, EE.UU.). La frecuencia respiratoria y la presión espiratoria final (10-15 cm de H2O) se ajustaron para mantener el CO2 espiratorio final a 3540 mm de Hg (monitor de CO2 SC-300, Pryon Corporation, Wisconsin, EE.UU.). La temperatura corporal se mantuvo a 37ºC durante toda la cirugía y el experimento por una almohadilla calefactora. La pérdida de fluido estimada se Six to seven weeks (mean = 44 ± 1 days) after administration of STZ, the animals were subjected to an experimental control and drug protocol. All animals fasted overnight before surgery, but continued to have access to deionized water at will. The induction and maintenance of surgical anesthesia was 3-5% halothane and 21.min-1 O2. The femoral artery and vein were cannulated with a solid-state blood pressure transducer (Mikrotip ™ 1.4F, Millar Instruments, Texas, USA) and a PE 50 catheter loaded with saline solution, respectively. The ureters were exposed through an abdominal midline incision, cannulated using polyethylene catheters (0.9 mm external diameter, 0.5 mm internal diameter) and the wound was closed by suture. The trachea was cannulated and the animal was ventilated at 70-80 min · 1 ventilations with air supplemented with O2 (Pressure Controlled Ventilator, Kent Scientific, Connecticut, USA). Respiratory rate and final expiratory pressure (10-15 cm H2O) were adjusted to maintain final expiratory CO2 at 3540 mm Hg (SC-300 CO2 monitor, Pryon Corporation, Wisconsin, USA). Body temperature was maintained at 37 ° C throughout the surgery and the experiment by a heating pad. The estimated fluid loss is
15 sustituyó con administración intravenosa de 154 mmol·l-1 de disolución de NaCl a una tasa de 5 ml·kg-1·h-1 . 15 substituted with intravenous administration of 154 mmol·l-1 of NaCl solution at a rate of 5 ml · kg-1 · h-1.
Tras la cirugía y un periodo de estabilización de 20 min, el protocolo experimental se empezó. La trientina se administró intravenosamente durante 60 s en dosis constantes de concentración creciente (0,1, 1,0, 10 y 100 mg·kg1 en 75 µl de solución salina seguidos de 125 µl de lavado de solución salina). Los animales de control recibieron un After surgery and a stabilization period of 20 min, the experimental protocol was started. Trientine was administered intravenously for 60 s at constant doses of increasing concentration (0.1, 1.0, 10 and 100 mg · kg1 in 75 µl of saline solution followed by 125 µl of saline wash). Control animals received a
20 volumen equivalente de solución salina. La orina se recogió en alícuotas de 15 min durante todo el experimento en tubos Eppendorf de polietileno previamente pesados. Al final del experimento se tomó una muestra de sangre terminal por punción cardíaca y el suero separado se guardó a -80ºC hasta el futuro análisis. Los corazones se extirparon por una toracotomía medio-esternal rápida y se procesaron como se describe más adelante. 20 equivalent volume of saline solution. Urine was collected in 15 min aliquots throughout the experiment in previously weighed Eppendorf polyethylene tubes. At the end of the experiment a terminal blood sample was taken by cardiac puncture and the separated serum was stored at -80 ° C until further analysis. Hearts were removed by rapid mid-sternal thoracotomy and processed as described below.
La tensión arterial media (TAM), frecuencia cardíaca (FC, derivada de la forma de la onda de TAM), saturación de oxígeno (oxímetro de pulso Nonin 8600V, Nonin Medical Inc., Minnesota, EE.UU.) y la temperatura corporal central se monitorizaron todos continuamente durante todo el experimento usando un módulo de adquisición de datos Mean blood pressure (TAM), heart rate (HR, derived from the TAM waveform), oxygen saturation (Nonin Medical Pulse Oximeter 8600V, Nonin Medical Inc., Minnesota, USA) and body temperature central all were continuously monitored throughout the experiment using a data acquisition module
30 PowerLab/16s (AD Instruments, Australia). Las señales calibradas se mostraron en la pantalla y se guardaron en disco como promedios de 2 s de cada variable. 30 PowerLab / 16s (AD Instruments, Australia). The calibrated signals were displayed on the screen and saved to disk as averages of 2 s of each variable.
35 Instrumentación: Un espectrofotómetro de absorción atómica modelo 3100 de Perkin Elmer (PE) equipado con un horno de grafito PE HGA-600 e inyector automático de horno PE AS-60 se usó para las determinaciones de Cu y Fe en orina. Se empleó corrección del ruido con deuterio. Se usó una lámpara de cátodo hueco de Cu o Fe (Perkin Elmer Corporation) y se operó tanto a 10 W (Cu) como a 15 W (Fe). La línea atómica de 324,8 nm se usó para Cu y la línea atómica de 248,3 nm para Fe. La anchura de la ranura para tanto Cu como Fe fue 0,7 nm. Para todos los 35 Instrumentation: A Perkin Elmer Model 3100 atomic absorption spectrophotometer (PE) equipped with an HGA-600 PE graphite furnace and AS-60 PE furnace automatic injector was used for urine Cu and Fe determinations. Deuterium noise correction was used. A Cu or Fe hollow cathode lamp (Perkin Elmer Corporation) was used and operated at both 10 W (Cu) and 15 W (Fe). The atomic line of 324.8 nm was used for Cu and the atomic line of 248.3 nm for Fe. The groove width for both Cu and Fe was 0.7 nm. For all the
40 análisis se usaron tubos de grafito pirolíticamente recubiertos. El volumen de inyección fue 20 µl. A continuación se muestra un programa de temperatura del horno de grafito típico. 40 analyzes were used pyrolytically coated graphite tubes. The injection volume was 20 µl. Below is a typical graphite furnace temperature program.
Programa de temperatura de GF-AAS Procedimiento Temp/ºC Mantenimiento/s GF-AAS temperature program Procedure Temp / ºC Maintenance / s
Rampa/s Ramp / s
Flujo int. / ml min-1 Secado 90 1 5 300 120 605 300 Int. Flow / ml min-1 Drying 90 1 5 300 120 605 300
Pre-tratamiento 1250* 20 10 300 20 110 300 Pre-treatment 1250 * 20 10 300 20 110 300
Atomización -Cu / Fe 2300 / 2500 1 8 0 Atomization -Cu / Fe 2300/2500 1 8 0
Post-tratamiento 2600 1 5 300 Post-treatment 2600 1 5 300
* Se usó una temperatura de pre-tratamiento de 1050ºC para los análisis de digestión de tejido * A pre-treatment temperature of 1050 ° C was used for tissue digestion analysis
45 También se determinaron Cu, Fe y Zn en digestos de tejido en Hill Laboratories (Hamilton, Nueva Zelanda) usando un DRC ICP-EM tanto de PE Sciex Elan-6000 como de PE Sciex Elan-6100. Los parámetros de operación se resumen en la siguiente tabla. 45 Cu, Fe and Zn were also determined in tissue digests at Hill Laboratories (Hamilton, New Zealand) using an ICP-EM DRC from both Sciex Elan-6000 PE and Sciex Elan-6100 PE. The operation parameters are summarized in the following table.
Parámetros de operación instrumentales para ICP-EM Instrumental operating parameters for ICP-EM
Parámetro Valor Parameter Value
Plasma inductivamente acoplado Inductively coupled plasma
Potencia de radiofrecuencia 1500 W Velocidad de flujo del gas de plasma de argón 15 l·min-1 Velocidad de flujo del gas auxiliar de argón 1,2 l·min-1 Radio frequency power 1500 W Argon plasma gas flow rate 15 l · min-1 Argon auxiliary gas flow rate 1.2 l · min-1
Parámetro Valor Parameter Value
Velocidad de flujo del gas nebulizador de argón 0,89 l·min-1 Argon nebulizer gas flow rate 0.89 l · min-1
Interfase Interface
Cono del inyector y diámetro del orificio Ni / 1,1 mm Cono del separador y diámetro del orificio Ni / 0,9 mm Injector cone and hole diameter Ni / 1.1 mm Separator cone and hole diameter Ni / 0.9 mm
Parámetros de adquisición de datos Data Acquisition Parameters
Modo de barrido Espera de pico Tiempo de muestreo 30 ms (Cu, Zn) / 100 ms (Fe) Barridos / duplicados 20 Duplicados 3 Tasa de captación de muestras 1 ml·min-1 Sweep mode Peak wait Sampling time 30 ms (Cu, Zn) / 100 ms (Fe) Sweeps / duplicates 20 Duplicates 3 Sample collection rate 1 ml · min-1
Reactivos: Todos los reactivos usados fueron de la mayor pureza disponible y al menos de calidad analítica. Las disoluciones de trabajo patrón de GF-AAS de Cu y Fe se prepararon por dilución escalonada de 1000 mg·l-1 (disoluciones patrón Spectrosol; BDH). El agua se purificó por un sistema de agua ultra-pura Millipore Milli-Q a una Reagents: All reagents used were of the highest available purity and at least of analytical quality. The standard working solutions of GF-AAS of Cu and Fe were prepared by stepwise dilution of 1000 mg · l-1 (standard solutions Spectrosol; BDH). The water was purified by an ultra-pure Millipore Milli-Q water system at a
5 resistividad de 18 MΩ. El material de referencia patrón 1577b Hígado bovino se obtuvo del Instituto nacional de patrones y tecnología y se usó para evaluar la eficiencia de la digestión de tejido. Los resultados obtenidos se informan a continuación. 5 resistivity of 18 MΩ. The standard reference material 1577b Bovine liver was obtained from the National Institute of Patterns and Technology and was used to evaluate the efficiency of tissue digestion. The results obtained are reported below.
Resultados de GF-AAS y ICP-EM para NIST SRM 1577b hígado bovino* Results of GF-AAS and ICP-EM for NIST SRM 1577b bovine liver *
Elemento Valor certificado GF-AAS ICP-EM Element Value certified GF-AAS ICP-EM
- Cu Cu
- 160 ± 8 142 ± 12 164 ± 12 160 ± 8 142 ± 12 164 ± 12
- Fe Faith
- 194 ± 15 192 ± 21 166 ± 14 194 ± 15 192 ± 21 166 ± 14
- Zn Zn
- 127 ± 16 - 155 ± 42 127 ± 16 - 155 ± 42
* Medido en µg·g-1 de material seca. 10 * Measured in µg · g-1 of dry material. 10
Orina: La orina se recogió en microtubos de ensayo de 1,5 ml previamente pesados (Eppendorf). Después de volver Urine: The urine was collected in 1.5 ml pre-weighed test microtubes (Eppendorf). After returning
a pesarse, los especímenes de orina se centrifugaron y el sobrenadante se diluyó 25:1 con 0,02 M de 69% de HNO3 to be weighed, urine specimens were centrifuged and the supernatant diluted 25: 1 with 0.02 M of 69% HNO3
15 de calidad Aristar. La muestra se almacenó a 4ºC antes del análisis de GF-AAS. Si fue necesario guardar una muestra durante un periodo superior a 2 semanas, se congeló y se mantuvo a -20ºC. 15 Aristar quality. The sample was stored at 4 ° C before the GF-AAS analysis. If it was necessary to store a sample for more than 2 weeks, it was frozen and kept at -20 ° C.
Corazón: Tras extraerse del animal, el corazón se limpió de tejido en exceso, se aclaró en tampón para eliminar la Heart: After being removed from the animal, the heart was cleaned of excess tissue, cleared in buffer to remove the
sangre en exceso, se secó con material absorbente y se registró un peso ventricular en húmedo. Usando excess blood, dried with absorbent material and a wet ventricular weight was recorded. Using
20 instrumentos de titanio, un segmento del músculo ventricular izquierdo se diseccionó y se colocó en un tubo de poliestireno de 5,0 ml previamente pesado. La muestra se liofilizó durante la noche a peso constante antes de añadir 0,45 ml de 69% de HNO3 de calidad Aristar. El tubo de muestra se calentó en un baño de agua a 65ºC durante 60 minutos. La muestra se llevó a 4,5 ml con H2O Milli-Q. La disolución resultante se diluyó 2:1 con el fin de reducir la concentración de HNO3 por debajo de la máxima permitida para el análisis de ICP-EM. Suero: Muestras de sangre 20 titanium instruments, a segment of the left ventricular muscle was dissected and placed in a previously weighed 5.0 ml polystyrene tube. The sample was lyophilized overnight at constant weight before adding 0.45 ml of 69% Aristar grade HNO3. The sample tube was heated in a 65 ° C water bath for 60 minutes. The sample was taken to 4.5 ml with H2O Milli-Q. The resulting solution was diluted 2: 1 in order to reduce the concentration of HNO3 below the maximum allowed for the ICP-MS analysis. Serum: Blood samples
25 terminales se centrifugaron y el suero se trató y se guardó según la orina hasta el análisis. Del contenido de metales traza de suero de la muestra de sangre terminal y orina recogida durante la hora final del experimento se calculó la eliminación renal usando la siguiente ecuación: 25 terminals were centrifuged and the serum was treated and stored according to urine until analysis. From the serum trace metal content of the sample of terminal blood and urine collected during the final hour of the experiment, renal elimination was calculated using the following equation:
Eliminación renal de metal traza (µl·min-1) = Renal removal of trace metal (µl · min-1) =
Todos los valores se expresan como media ± EEM y los valores de P < 0,05 se consideraron estadísticamente All values are expressed as mean ± SEM and P values <0.05 were considered statistically
35 significativos. La prueba de la t de Student para datos independientes se usó inicialmente para probar diferencias de peso y de glucosa entre los grupos diabéticos y de control. Para la comparación de respuestas durante la exposición a fármaco, los análisis estadísticos se realizaron usando análisis de la varianza (Statistica for Windows v.6.1, SAS Institute Inc., California, EE.UU.). El posterior análisis estadístico se realizó usando un modelo mixto de diseño ANOVA de medidas repetidas. 35 significant. Student's t-test for independent data was initially used to test differences in weight and glucose between diabetic and control groups. For comparison of responses during drug exposure, statistical analyzes were performed using analysis of variance (Statistica for Windows v.6.1, SAS Institute Inc., California, USA). Subsequent statistical analysis was performed using a mixed ANOVA model of repeated measures.
Los datos para cada nivel de dosis se analizaron usando un modelo lineal mixto (PROC MIXED; SAS, versión 8). El modelo incluyó diabetes, fármaco y su interacción como efectos fijos, tiempo como una medida repetida y ratas 5 como sujetos en el conjunto de datos. La independencia completa se asume a través de los sujetos. El modelo completo se ajustó a cada conjunto de datos usando un método de estimación de probabilidad máxima (REML) que se ajusta a modelos lineales mixtos (es decir, modelos de efectos fijos y al azar). Un modelo mixto es una generalización del modelo lineal convencional, siendo la generalización la que puede analizar datos generados a partir de varias fuentes de variación en lugar de solo una. Se usó un nivel de significancia de 0,05 para todas las Data for each dose level were analyzed using a mixed linear model (PROC MIXED; SAS, version 8). The model included diabetes, drug and its interaction as fixed effects, time as a repeated measure and 5 rats as subjects in the data set. Full independence is assumed through the subjects. The complete model was adjusted to each data set using a maximum probability estimation (REML) method that fits mixed linear models (i.e. fixed and random effect models). A mixed model is a generalization of the conventional linear model, the generalization being the one that can analyze data generated from several sources of variation instead of just one. A significance level of 0.05 was used for all
10 pruebas. 10 tests
RESULTADOS RESULTS
15 La glucosa en sangre aumentó a 25 ± 2 mmol·l-1 tres días tras la inyección de STZ. A pesar de una mayor ingesta de alimentos diaria, los animales diabéticos perdieron peso mientras que los animales no diabéticos continuaron ganando peso durante los 44 días siguientes a la inyección de STZ/solución salina. En el día del experimento, los niveles de glucosa en sangre fueron 24 ± 1 y 5 ± 0 mmol·l-1 y el peso corporal 264 ± 7 g y 434 ± 9 g para animales 15 Blood glucose increased to 25 ± 2 mmol·l-1 three days after STZ injection. Despite a higher daily food intake, diabetic animals lost weight while non-diabetic animals continued to gain weight during the 44 days following the injection of STZ / saline. On the day of the experiment, blood glucose levels were 24 ± 1 and 5 ± 0 mmol·l-1 and body weight 264 ± 7 g and 434 ± 9 g for animals
20 diabéticos y no diabéticos, respectivamente. 20 diabetics and non-diabetics, respectively.
Tabla 1. Glucosa en sangre, peso corporal y consumo de alimentos en animales diabéticos frente a nodiabéticos. Table 1. Blood glucose, body weight and food consumption in diabetic animals versus nodiabetics.
- Diabéticos Diabetics
- No diabéticos Non-diabetic
- Peso corporal antes de STZ/solución salina Body weight before STZ / saline solution
- 303 ± 3 g 303 ± 3 g 303 ± 3 g 303 ± 3 g
- Glucosa en sangre 3 días tras STZ/solución salina Blood glucose 3 days after STZ / saline
- *25 ± 2 mmol·l-1 5 ± 0,2 mmol·l-1 * 25 ± 2 mmol·l-1 5 ± 0.2 mmol·l-1
- Consumo de alimentos diario Daily food consumption
- *58 ± 1 g 28 ± 1 g * 58 ± 1 g 28 ± 1 g
- Glucosa en sangre en el día experimental Blood glucose in the experimental day
- *24 ± 1 mmol·l-1 5 ± 0,2 mmol·l-1 * 24 ± 1 mmol·l-1 5 ± 0.2 mmol·l-1
- Peso corporal en el día experimental Body weight on the experimental day
- *264 ± 7 g 434 ± 9 g * 264 ± 7 g 434 ± 9 g
25 Animales diabéticos n = 14, animales no diabéticos n = 14. Valores mostrados como media ± EEM. Asterisco indica una diferencia significativa (P < 0,05). 25 Diabetic animals n = 14, non-diabetic animals n = 14. Values shown as mean ± SEM. Asterisk indicates a significant difference (P <0.05).
30 Los niveles de referencia de TAM durante el periodo de control antes de la infusión no fueron significativamente diferentes entre animales no diabéticos y diabéticos (99 ± 4 mm de Hg). La FC fue significativamente menor en animales diabéticos que en no diabéticos (287 ± 11 y 364 ± 9 lpm, respectivamente, P < 0,001). La infusión de trientina o solución salina no tuvo efecto sobre estas variables, excepto a la mayor dosis a la que TAM disminuyó un máximo de 19 ± 4 mm de Hg durante 2 min tras la administración y volvió a niveles previos a la dosis en el plazo de 30 The reference levels of TAM during the control period before infusion were not significantly different between non-diabetic and diabetic animals (99 ± 4 mm Hg). HR was significantly lower in diabetic animals than in non-diabetic animals (287 ± 11 and 364 ± 9 bpm, respectively, P <0.001). The infusion of trientine or saline solution had no effect on these variables, except at the highest dose at which TAM decreased a maximum of 19 ± 4 mm Hg for 2 min after administration and returned to pre-dose levels over time. from
35 10 min. La temperatura corporal y la saturación de oxígeno permanecieron estables en todos los animales durante todo el experimento. 35 10 min. Body temperature and oxygen saturation remained stable in all animals throughout the experiment.
40 Los animales diabéticos secretaron coherentemente significativamente más orina que los animales no diabéticos, excepto en respuesta a la mayor dosis de fármaco (100 mg·kg-1) o volumen equivalente de solución salina (Fig. 16). La administración de 100 mg·kg-1 de dosis de trientina también aumentó la secreción de orina en animales no diabéticos a superior a la de animales no diabéticos que recibieron el volumen equivalente de solución salina (Fig. 17). Este efecto no se observó en animales diabéticos. 40 Diabetic animals consistently secreted significantly more urine than non-diabetic animals, except in response to the higher dose of drug (100 mg · kg-1) or equivalent volume of saline (Fig. 16). The administration of 100 mg · kg-1 dose of trientine also increased the secretion of urine in non-diabetic animals to that of non-diabetic animals that received the equivalent volume of saline (Fig. 17). This effect was not observed in diabetic animals.
El análisis de las curvas de respuesta a dosis muestra que, a todas las dosis, los animales diabéticos y no diabéticos que recibieron fármaco secretaron más Cu que los animales que recibieron un volumen equivalente de solución 50 salina (Fig. 18). Para proporcionar alguna corrección a los efectos de menor crecimiento corporal total de los animales diabéticos y, por tanto, para permitir la comparación más apropiada entre animales diabéticos y no diabéticos, las tasas de secreción de oligoelementos también se calcularon por gramo de peso corporal. La Figura 19 muestra que los animales diabéticos tuvieron secreción de cobre significativamente mayor por gramo de peso corporal en respuesta a cada dosis de fármaco que los animales no diabéticos. El mismo patrón se observó en Analysis of the dose response curves shows that, at all doses, diabetic and non-diabetic animals that received drug secreted more Cu than animals that received an equivalent volume of saline solution (Fig. 18). To provide some correction to the effects of lower total body growth of diabetic animals and, therefore, to allow the most appropriate comparison between diabetic and non-diabetic animals, the secretion rates of trace elements were also calculated per gram of body weight. Figure 19 shows that diabetic animals had significantly greater copper secretion per gram of body weight in response to each dose of drug than non-diabetic animals. The same pattern was observed in
55 respuesta a solución salina, sin embargo el efecto no fue siempre significativo. 55 response to saline, however the effect was not always significant.
El cobre secretado total con respecto a toda la duración del experimento fue significativamente elevado en animales tanto no diabéticos como diabéticos a los que se les administró trientina en comparación con sus controles de The total secreted copper with respect to the entire duration of the experiment was significantly elevated in both non-diabetic and diabetic animals that were administered trientine compared to their controls.
solución salina respectivos (Fig. 20). Los animales diabéticos que recibieron fármaco también secretaron más cobre total por gramo de peso corporal que los animales no diabéticos que recibieron fármaco. La misma tendencia significativa se observó en respuesta a administración de solución salina (Fig. 21). Volumen de solución salina (Fig. 22). El análisis por gramo de peso corporal muestra que animales diabéticos que respective saline solution (Fig. 20). Diabetic animals that received drug also secreted more total copper per gram of body weight than non-diabetic animals that received drug. The same significant trend was observed in response to saline administration (Fig. 21). Volume of saline solution (Fig. 22). The analysis per gram of body weight shows that diabetic animals that
5 recibieron solución salina secretan significativamente más hierro que animales no diabéticos; sin embargo, esta tendencia no fue evidente entre animales diabéticos y no diabéticos que recibieron trientina (Fig. 23). La secreción de hierro total en animales tanto diabéticos como no diabéticos que recibieron fármaco no fue diferente de la de animales que recibieron solución salina (Fig 24). De acuerdo con el análisis de curvas de respuesta a dosis, la secreción de hierro total por gramo de peso corporal fue significativamente mayor en animales diabéticos que 5 received saline solution secrete significantly more iron than non-diabetic animals; however, this trend was not evident among diabetic and non-diabetic animals that received trientine (Fig. 23). The total iron secretion in both diabetic and non-diabetic animals that received drug was not different from that of animals that received saline solution (Fig 24). According to the analysis of dose response curves, total iron secretion per gram of body weight was significantly higher in diabetic animals than
10 recibieron solución salina que en animales no diabéticos, pero esta diferencia no se observó en respuesta a trientina (Fig 25). 10 received saline solution than in non-diabetic animals, but this difference was not observed in response to trientine (Fig 25).
15 Aunque no hubo diferencia significativa en el contenido de cobre en suero, hubo un aumento significativo en la eliminación renal de cobre en animales diabéticos que recibieron fármaco en comparación con animales diabéticos que recibieron solución salina. El mismo patrón se observó en animales no diabéticos, aunque la tendencia no fue estadísticamente significativa (P = 0,056). No hubo efecto de fármaco o estado (diabético frente a no diabético) sobre el contenido de suero o eliminación renal de hierro. 15 Although there was no significant difference in serum copper content, there was a significant increase in renal elimination of copper in diabetic animals that received drug compared to diabetic animals that received saline. The same pattern was observed in non-diabetic animals, although the trend was not statistically significant (P = 0.056). There was no effect of drug or condition (diabetic versus non-diabetic) on serum content or renal elimination of iron.
20 Tabla 2. Contenido de suero y eliminación renal de Cu y Fe en animales diabéticos y no diabéticos que recibieron fármaco o solución salina. 20 Table 2. Serum content and renal elimination of Cu and Fe in diabetic and non-diabetic animals that received saline drug or solution.
- 1.1.a.a.1 Diabéticos 1.1.a.a.1 Diabetics
- 1.1.a.a.2 No diabéticos 1.1.a.a.2 Non-diabetics
- trientina n = 6 trientine n = 6
- Solución salina n = 7 trientina n = 4 Solución salina n = 7 Saline solution n = 7 trientine n = 4 Saline solution n = 7
- Cu en suero (µg.µl-1 x 10-4) Serum Cu (µg.µl-1 x 10-4)
- 7,56 ± 0,06 9,07 ± 1,74 7,11 ± 0,41 7,56 ± 0,62 7.56 ± 0.06 9.07 ± 1.74 7.11 ± 0.41 7.56 ± 0.62
- Fe en suero (µg.µl-1 x 10-4) Serum faith (µg.µl-1 x 10-4)
- 35,7 ± 7,98 63,2 ± 16,4 33,6 ± 1,62 31,4 ± 8,17 35.7 ± 7.98 63.2 ± 16.4 33.6 ± 1.62 31.4 ± 8.17
- Eliminación renal de Cu (µl·min-1) Renal removal of Cu (µl · min-1)
- *28,5 ± 4,8 1,66 ± 0,82 19,9 ± 6,4 0,58 ± 0,28 * 28.5 ± 4.8 1.66 ± 0.82 19.9 ± 6.4 0.58 ± 0.28
- Eliminación renal de Fe (µl·min-1) Renal elimination of Fe (µl · min-1)
- 0,25 ± 0,07 0,38 ± 0,15 0,46 ± 022 0,11 ± 0,03 0.25 ± 0.07 0.38 ± 0.15 0.46 ± 022 0.11 ± 0.03
Valores mostrados como media ± EEM. El asterisco indica una significativa diferencia (P < 0,05) entre animales 25 diabéticos que recibieron trientina y animales diabéticos que recibieron un volumen equivalente de solución salina. Values shown as mean ± SEM. The asterisk indicates a significant difference (P <0.05) between diabetic animals that received trientine and diabetic animals that received an equivalent volume of saline.
Los pesos de corazones húmedo en animales diabéticos fueron significativamente inferiores a los de en animales no The weights of wet hearts in diabetic animals were significantly lower than in non-animal animals.
30 diabéticos, mientras que aumentaron las relaciones de corazón/peso corporal. El tejido cardíaco también se analizó para contenido de Cu y Fe. No hubo diferencia significativa en el contenido de cobre entre animales diabéticos y no diabéticos que recibieron solución salina o trientina. El contenido de hierro de los animales no diabéticos a los que se les administró solución salina fue significativamente mayor que el de los animales diabéticos a los que se les administró solución salina. 30 diabetics, while increased heart / body weight ratios. Cardiac tissue was also analyzed for Cu and Fe content. There was no significant difference in copper content between diabetic and non-diabetic animals that received saline or trientine solution. The iron content of non-diabetic animals that were given saline solution was significantly higher than that of diabetic animals that were given saline solution.
35 Tabla 3: Peso del corazón, relaciones de peso del corazón/peso corporal y contenido de metales traza de tejido de corazón en animales diabéticos frente a no diabéticos. 35 Table 3: Heart weight, heart weight / body weight ratios and trace metal content of heart tissue in diabetic versus non-diabetic animals.
- Diabéticos Diabetics
- No diabéticos Non-diabetic
- Peso de corazones húmedos Wet hearts weight
- *0,78 ± 0,02 g 1,00 ± 0,02 g * 0.78 ± 0.02 g 1.00 ± 0.02 g
- Peso de corazón/peso corporal Heart weight / body weight
- *2,93 ± 0,05 mg·g-1 2,30 ± 0,03 mg·g-1 * 2.93 ± 0.05 mg · g-1 2.30 ± 0.03 mg · g-1
- Contenido de Cu µg.g-1 de tejido seco Tratado con trientina Tratado con solución salina Cu content µg.g-1 of dry tissue Treated with trientine Treated with saline solution
- 24,7 ± 1,5 213 ± 0,9 27,1 ± 1,0 27,2 ± 0,7 24.7 ± 1.5 213 ± 0.9 27.1 ± 1.0 27.2 ± 0.7
- Contenido de Fe µg·g-1 de tejido seco Tratado con trientina Tratado con solución salina Fe content µg · g-1 of dry tissue Treated with trientine Treated with saline
- 186 ± 46 †180 ± 35 235 ± 39 274 ± 30 186 ± 46 † 180 ± 35 235 ± 39 274 ± 30
Animales diabéticos: n = 14; animales no diabéticos: n = 14. Valores mostrados como media ± EEM. El asterisco 40 indica una diferencia significativa (P < 0,05) entre animales diabéticos y no diabéticos. † indica una diferencia significativa (P < 0,05) entre animales diabéticos y no diabéticos que recibieron solución salina. Diabetic animals: n = 14; non-diabetic animals: n = 14. Values shown as mean ± SEM. Asterisk 40 indicates a significant difference (P <0.05) between diabetic and non-diabetic animals. † indicates a significant difference (P <0.05) between diabetic and non-diabetic animals that received saline.
Cobre Copper
5 Ratas diabéticas secretaron niveles de cobre significativamente mayores que ratas no diabéticas a través de todos los niveles de dosis. La secreción de cobre de referencia también fue significativamente mayor en ratas diabéticas en comparación con ratas no diabéticas. El fármaco en comparación con solución salina produjo una secreción de cobre significativamente mayor a todos los niveles de dosis. No hubo diferencia en los niveles de secreción de cobre de referencia entre los grupos de fármaco y de solución salina. El efecto de interacción para el modelo fue 5 Diabetic rats secreted significantly higher copper levels than non-diabetic rats across all dose levels. Reference copper secretion was also significantly higher in diabetic rats compared to non-diabetic rats. The drug compared to saline solution produced significantly greater copper secretion at all dose levels. There was no difference in the levels of reference copper secretion between the drug and saline groups. The interaction effect for the model was
10 significativo a niveles de dosis de 1,0 mg·kg-1 y por encima. La presencia de un término de interacción significativa significa que la influencia de un efecto varía con el nivel del otro efecto. Por tanto, las consecuencias de una interacción significativa entre los factores de diabetes y de fármaco es la secreción de cobre elevada por encima de los efectos aditivos predichos de estos dos factores. 10 significant at dose levels of 1.0 mg · kg-1 and above. The presence of a meaningful interaction term means that the influence of one effect varies with the level of the other effect. Therefore, the consequences of a significant interaction between diabetes and drug factors is elevated copper secretion above the predicted additive effects of these two factors.
15 Hierro 15 Iron
Ratas diabéticas en el grupo de solución salina sólo secretaron niveles de hierro significativamente mayores a todos los niveles de dosis. Esto hizo que todos los factores en el modelo fueran significativos a través de todos los niveles de dosis. Diabetic rats in the saline group only secreted iron levels significantly higher at all dose levels. This made all the factors in the model significant across all dose levels.
El efecto a corto plazo de la administración de trientina intravenosa sobre el sistema cardiovascular y la secreción urinaria de cobre y hierro se estudió en ratas anestesiadas, diabéticas (6 semanas de diabetes, inducida por The short-term effect of intravenous trientine administration on the cardiovascular system and urinary secretion of copper and iron was studied in anesthetized, diabetic rats (6 weeks of diabetes, induced by
25 estreptozotocina) y no diabéticas. Los animales se asignaron a uno de los cuatro grupos: diabético + trientina, diabético + solución salina, no diabético + trientina, no diabético + solución salina. El fármaco, o un volumen equivalente de solución salina, se administró cada hora en dosis de concentración creciente (0,1, 1,0, 10, 100 mg·kg1) y la orina se recogió durante todo el experimento en alícuotas de 15 min. Se tomó una muestra de sangre terminal y se recogió tejido cardíaco. 25 streptozotocin) and non-diabetic. The animals were assigned to one of four groups: diabetic + trientine, diabetic + saline, non-diabetic + trientine, non-diabetic + saline. The drug, or an equivalent volume of saline solution, was administered every hour in doses of increasing concentration (0.1, 1.0, 10, 100 mg · kg1) and the urine was collected throughout the experiment in 15 min aliquots . A sample of terminal blood was taken and cardiac tissue was collected.
30 El análisis de muestras de orina mostró los siguientes puntos principales: 30 The analysis of urine samples showed the following main points:
A todas las dosis de fármaco, los animales diabéticos y no diabéticos que recibieron fármaco secretaron más Cu (µmol) que los animales que recibieron un volumen equivalente de solución salina. At all drug doses, diabetic and non-diabetic animals that received drug secreted more Cu (µmol) than animals that received an equivalent volume of saline.
35 Cuando se analizaron por gramo de peso corporal, los animales diabéticos secretaron significativamente más cobre (µmol·g de PC-1) a cada dosis de trientina que los animales no diabéticos. El mismo patrón se observó en respuesta a solución salina, pero el efecto no fue significativo a cualquier dosis. 35 When analyzed per gram of body weight, diabetic animals secreted significantly more copper (µmol · g of PC-1) at each dose of trientine than non-diabetic animals. The same pattern was observed in response to saline, but the effect was not significant at any dose.
En la mayoría de las dosis, en animales diabéticos la secreción de hierro (µmol) fue mayor en animales a los que se les administró solución salina que en aquellos a los que se les administró fármaco. En animales no diabéticos 40 no hubo diferencia entre la secreción de hierro en respuesta a la administración de solución salina o trientina. In most doses, in diabetic animals the secretion of iron (µmol) was higher in animals that were given saline than in those that were given drug. In non-diabetic animals 40 there was no difference between iron secretion in response to the administration of saline or trientine.
El análisis por gramo de peso corporal no muestra diferencia entre la secreción de hierro en animales no diabéticos y diabéticos que recibieron trientina. Los animales diabéticos que recibieron solución salina secretan más hierro por gramo de peso corporal que los animales no diabéticos que recibieron solución salina. El análisis de tejido de corazón no mostró diferencia significativa en el contenido de cobre total entre animales The analysis per gram of body weight shows no difference between the secretion of iron in non-diabetic and diabetic animals that received trientine. Diabetic animals that received saline solution secrete more iron per gram of body weight than non-diabetic animals that received saline solution. The analysis of heart tissue showed no significant difference in the total copper content between animals
45 diabéticos y no diabéticos, ni ningún efecto de fármaco sobre el contenido cardíaco de hierro y cobre. Los cálculos de eliminación renal mostraron un aumento significativo en la eliminación de cobre en animales diabéticos que recibieron trientina en comparación con animales diabéticos que recibieron solución salina. La misma tendencia se observó en animales no diabéticos, pero el efecto no fue significativo. No hubo efecto de trientina sobre la eliminación renal de hierro. 45 diabetics and non-diabetics, or any drug effect on the cardiac content of iron and copper. Kidney clearance calculations showed a significant increase in copper removal in diabetic animals that received trientine compared to diabetic animals that received saline. The same trend was observed in non-diabetic animals, but the effect was not significant. There was no effect of trientine on renal elimination of iron.
50 En resumen, no se observaron efectos cardiovasculares adversos después de la administración aguda de trientina. El tratamiento con trientina aumenta eficazmente la secreción de cobre en animales tanto diabéticos como no diabéticos. La secreción de cobre en orina tras la administración de trientina es mayor por gramo de peso corporal en animales diabéticos que en no diabéticos. La secreción de hierro no aumentó por tratamiento con trientina en 50 In summary, no adverse cardiovascular effects were observed after acute administration of trientine. Treatment with trientine effectively increases copper secretion in both diabetic and non-diabetic animals. The secretion of copper in urine after administration of trientine is greater per gram of body weight in diabetic animals than in non-diabetic animals. Iron secretion was not increased by treatment with trientine in
55 tanto animales diabéticos como no diabéticos. 55 both diabetic and non-diabetic animals.
LA EFICACIA DE TRIENTINA PARA RESTAURAR LA FUNCIÓN CARDÍACA EN RATAS DIABÉTICAS POR STZ THE EFFECTIVENESS OF TRIENTINA TO RESTORE HEART FUNCTION IN DIABETIC RATS BY STZ
60 El aumento de cobre en tejido participa en mecanismos que conducen a lesión nerviosa diabética. Por tanto, planteamos como hipótesis que la acumulación en tejido de metales traza podría desempeñar una función en los mecanismos de lesión diabética en otros tejidos. Las pruebas histológicas de estudios anteriores nuestros mostraron que 6 meses de tratamiento con trientina parece proteger los corazones de ratas Wistar diabéticas del desarrollo de 60 The increase in copper in tissue participates in mechanisms that lead to diabetic nerve injury. Therefore, we hypothesize that the accumulation in trace metal tissue could play a role in the mechanisms of diabetic injury in other tissues. Histological tests from our previous studies showed that 6 months of treatment with trientine seems to protect the hearts of diabetic Wistar rats from the development of
lesión diabética (cardiomiopatía diabética) como se juzga por la histología. Sin embargo, era desconocido si esta mejora histológica se traduce en una mejora en la función cardíaca, un hallazgo que prestaría más soporte al uso de terapia con trientina en aplicaciones clínicas. diabetic lesion (diabetic cardiomyopathy) as judged by histology. However, it was unknown if this histological improvement results in an improvement in cardiac function, a finding that would provide more support for the use of trientine therapy in clinical applications.
5 Objetivo El objetivo de este estudio fue usar un modelo de corazón de roedor en funcionamiento aislado para comparar la función cardíaca en ratas tratadas con trientina y no tratadas, diabéticas por STZ y normales. 10 Métodos Animales 5 Objective The objective of this study was to use an isolated functioning rodent heart model to compare cardiac function in rats treated with trientine and untreated, diabetic by STZ and normal. 10 Animal Methods
Los animales usados en estos experimentos recibieron cuidados que cumplieron los “Principios del cuidado de 15 animales de laboratorio” (Sociedad nacional de investigación médica) y el estudio fue aprobado por el comité de ética animal de la Universidad de Auckland. The animals used in these experiments received care that complied with the "Principles of Care of 15 Laboratory Animals" (National Society for Medical Research) and the study was approved by the animal ethics committee of the University of Auckland.
Ratas Wistar albinas macho que pesaban 330-430 g se asignaron a cuatro grupos experimentales del siguiente Wistar male albino rats weighing 330-430 g were assigned to four experimental groups of the following
- modo: mode:
- 20 twenty
- Grupo Group
- Código N Grupos experimentales Tratamiento Code N Experimental groups Treatment
- Grupo A Group A
- STZ 8 Diabetes durante 13 semanas STZ 8 Diabetes for 13 weeks
- Grupo B B Group
- STZ/D7 8 Diabetes durante 13 semanas (semana de terapia con fármaco 7-13) STZ / D7 8 Diabetes for 13 weeks (drug therapy week 7-13)
- Grupo C Group C
- Referencia 9 Controles no diabéticos Reference 9 Non-diabetic controls
- Grupo D Group D
- Referencia/D7 11 Controles no diabéticos (semana de terapia con fármaco 7-13) Reference / D7 eleven Non-diabetic controls (week of drug therapy 7-13)
- STZ = Estreptozotocina STZ = Streptozotocin
D7 = tratamiento con trientina durante 7 semanas consecutivas comenzando 6 semanas después del inicio del experimento. D7 = treatment with trientine for 7 consecutive weeks beginning 6 weeks after the start of the experiment.
La diabetes se indujo por estreptozotocina intravenosa (STZ; Sigma; St. Louis, MO). A todas las ratas se les administró un anestésico de inhalación corta (inducción: 5% de halotano y 2 l/min de oxígeno, mantenido en 2% de 25 halotano y 2 l/min de oxígeno). Aquellas ratas asignadas a estar en los dos grupos diabéticos recibieron luego una única dosis en bolo intravenoso de STZ (57 mg/kg de peso corporal) en 0,5 ml de 0,9% de solución salina administrada por una vena de la cola. Los animales de referencia no diabéticos recibieron un volumen equivalente de 0,9% de solución salina sola. Las ratas diabéticas y no diabéticas se alojaron en parejas iguales y se les proporcionó acceso libre a pienso de rata normal (gránulos de la dieta 86; New Zealand Stock Feeds, Auckland, NZ) 30 y agua desionizada a voluntad. Cada jaula tuvo dos botellas de agua en ella para garantizar igual acceso a agua o fármaco para cada animal. Los animales se alojaron a 21 grados y 60% de humedad en jaulas para ratas convencionales con un suelo de serrín que se cambió diariamente. La glucosa en sangre se midió en muestras de sangre capilar de la punta de la cola (Advantage II, Roche Diagnostics, NZ Ltd). El muestreo se realizó en todos los grupos a la misma hora del día. La glucosa en sangre y el peso corporal se midieron en el día 3 tras la inyección de Diabetes was induced by intravenous streptozotocin (STZ; Sigma; St. Louis, MO). All rats were given a short inhalation anesthetic (induction: 5% halothane and 2 l / min oxygen, maintained at 2% 25 halothane and 2 l / min oxygen). Those rats assigned to be in the two diabetic groups then received a single intravenous bolus dose of STZ (57 mg / kg body weight) in 0.5 ml of 0.9% saline administered by a tail vein. Non-diabetic reference animals received an equivalent volume of 0.9% saline alone. Diabetic and non-diabetic rats were housed in equal pairs and were given free access to normal rat feed (diet pellets 86; New Zealand Stock Feeds, Auckland, NZ) 30 and deionized water at will. Each cage had two bottles of water in it to ensure equal access to water or drug for each animal. The animals were housed at 21 degrees and 60% humidity in cages for conventional rats with a sawdust floor that was changed daily. Blood glucose was measured in capillary blood samples from the tip of the tail (Advantage II, Roche Diagnostics, NZ Ltd). Sampling was performed in all groups at the same time of day. Blood glucose and body weight were measured on day 3 after injection of
35 STZ o solución salina y luego semanalmente durante todo el estudio. La diabetes se confirmó por la presencia de polidipsia, poliuria e hiperglucemia (>11 mmol·l-1). En el grupo diabético tratado con fármaco, la trientina se preparó en el agua potable para cada jaula a una concentración de 50 mg/l. Cada animal consumió aproximadamente 260 ml de agua por día una vez se estableció la diabetes, dando una dosis de fármaco total por animal por día de ∼13 mg. El agua potable que contenía trientina se 35 STZ or saline solution and then weekly throughout the study. Diabetes was confirmed by the presence of polydipsia, polyuria and hyperglycemia (> 11 mmol·l-1). In the drug-treated diabetic group, trientine was prepared in drinking water for each cage at a concentration of 50 mg / l. Each animal consumed approximately 260 ml of water per day once diabetes was established, giving a total drug dose per animal per day of ∼13 mg. Drinking water containing trientine is
40 administró continuamente desde el inicio de la semana 7 hasta que el animal se sacrificó al final de la semana 13. En el caso del grupo no diabético Referencia/D7 que bebió menos agua por día que los animales diabéticos, la concentración de fármaco en su agua potable se ajustó cada semana de manera que consumiera aproximadamente la misma dosis que el grupo STZ/D7 correspondiente. Los estudios preliminares nuestros e informes independientes (Rodrigues B y col., Diabetes (1988) 37(10):1358-64) han mostrado que estos animales diabéticos tienen 40 continuously administered from the beginning of week 7 until the animal was sacrificed at the end of week 13. In the case of the non-diabetic Reference / D7 group who drank less water per day than diabetic animals, the drug concentration in their Drinking water was adjusted every week to consume approximately the same dose as the corresponding STZ / D7 group. Our preliminary studies and independent reports (Rodrigues B et al., Diabetes (1988) 37 (10): 1358-64) have shown that these diabetic animals have
45 cardiomiopatía establecida en el momento en el que comienza la administración del fármaco a este grupo. 45 cardiomyopathy established at the time when the administration of the drug to this group begins.
El último día del experimento, los animales se anestesiaron (5% de halotano y 2 l·min-1 de O2) y se administró heparina (500 UI·kg-1) (Weddel Pharmaceutical Ltd., Londres) intravenosamente por la vena de la cola. Entonces se tomó una muestra de sangre de 2 ml de la vena cava inferior y el corazón se extirpó rápidamente y se sumergió en On the last day of the experiment, the animals were anesthetized (5% halothane and 2 l · min-1 of O2) and heparin (500 IU · kg-1) (Weddel Pharmaceutical Ltd., London) was administered intravenously through the vein of The tail. Then a 2 ml blood sample was taken from the inferior vena cava and the heart was quickly removed and submerged in
50 tampón bicarbonato de Krebs-Henseleit frío en hielo para detener la actividad contráctil. Entonces, los corazones se colocaron sobre el aparato de corazones en funcionamiento perfundidos aislados. 50 Krebs-Henseleit bicarbonate buffer cold on ice to stop contractile activity. Then, the hearts were placed on the apparatus of isolated perfused operating hearts.
55 La raíz aórtica del corazón se ligó inmediatamente a la cánula aórtica del aparato de perfusión. Se estableció la perfusión retrógrada (Langendorff) a una presión hidrostática de 100 cm de H2O y a 37ºC y continuó durante 5 min mientras que se completó la canulación de la aurícula izquierda por la vena. Entonces, la preparación de no 55 The aortic root of the heart was immediately linked to the aortic cannula of the perfusion apparatus. Retrograde perfusion (Langendorff) was established at a hydrostatic pressure of 100 cm H2O and at 37 ° C and continued for 5 min while cannulation of the left atrium through the vein was completed. So, the preparation of no
funcionamiento (Langendorff) se convirtió en el modelo de corazón en funcionamiento por cambio del suministro de tampón de perfundido de la aorta a la aurícula izquierda a una presión de llenado de 10 cm de H2O. El ventrículo izquierdo se expulsó espontáneamente en la cánula aórtica contra una presión hidrostática (poscarga) de 76 cm de H2O (55,9 mm de Hg). El tampón de perfusión fue tampón bicarbonato de Krebs-Henseleit (mM: KCl 4,7, CaCl2 2,3, Operation (Langendorff) became the heart model in operation by changing the supply of perfused buffer from the aorta to the left atrium at a filling pressure of 10 cm H2O. The left ventricle was spontaneously expelled in the aortic cannula against a hydrostatic pressure (afterload) of 76 cm H2O (55.9 mm Hg). The perfusion buffer was Krebs-Henseleit bicarbonate buffer (mM: KCl 4.7, CaCl2 2.3,
5 KH2PO4 1,2, MgSO4 1,2, NaCl 118, y NaHCO3 25), pH 7,4 que contiene glucosa 11 mM y se gaseó continuamente con 95% de O2:5% de CO2. El tampón también se filtró continuamente en línea (inicial 8 µm, siguiendo filtros de acetato de celulosa de 0,4 µm; Sartorius, Alemania). La temperatura de todo el aparato de perfusión se mantuvo por camisas de agua y la temperatura del tampón se monitorizó continuamente y se ajustó para mantener los corazones a 37ºC durante toda la perfusión. 5 KH2PO4 1.2, MgSO4 1.2, NaCl 118, and NaHCO3 25), pH 7.4 containing 11 mM glucose and was continuously gassed with 95% O2: 5% CO2. The buffer was also continuously filtered in line (initial 8 µm, following 0.4 µm cellulose acetate filters; Sartorius, Germany). The temperature of the entire perfusion apparatus was maintained by water shirts and the buffer temperature was continuously monitored and adjusted to keep the hearts at 37 ° C throughout the infusion.
Una cánula intravenosa de plástico 24g modificada (Becton Dickson, Utah, EE.UU.) se insertó en el ventrículo izquierdo por el vértice del corazón usando la aguja introductora normal. Esta cánula se unió posteriormente a un A modified 24g plastic intravenous cannula (Becton Dickson, Utah, USA) was inserted into the left ventricle by the apex of the heart using the normal introducer needle. This cannula subsequently joined a
15 transductor de presión piezoeléctrico SP844 (AD Instruments, Australia) para monitorizar continuamente la presión ventricular izquierda. La presión aórtica se monitorizó continuamente mediante un brazo lateral de la cánula aórtica con un transductor de presión (modelo P23XL de Statham, Gould Inc., CA, EE.UU.). El corazón fue electroestimulado (Digitimer Ltd, Heredfordshire, Inglaterra) a una tasa de 300 lpm por medio de electrodos unidos a la cánula de la vena aórtica y pulmonar usando voltajes supraumbrales con pulsos de 5 ms de duración del 15 piezoelectric pressure transducer SP844 (AD Instruments, Australia) to continuously monitor the left ventricular pressure. Aortic pressure was continuously monitored by a lateral arm of the aortic cannula with a pressure transducer (model P23XL from Statham, Gould Inc., CA, USA). The heart was electrostimulated (Digitimer Ltd, Heredfordshire, England) at a rate of 300 bpm by means of electrodes attached to the cannula of the aortic and pulmonary vein using supraumbral voltages with pulses of 5 ms duration
20 generador de onda cuadrada. 20 square wave generator.
Se registró el flujo aórtico por un caudalímetro en línea (Transonic T206, Ithaca, NY, EE.UU.) y el flujo coronario se Aortic flow was recorded by an in-line flowmeter (Transonic T206, Ithaca, NY, USA) and coronary flow was
25 midió por recogida de 30 s controlada del efluente de la vena coronaria en cada etapa de momento de tiempo del protocolo. 25 measured by 30 s controlled collection of coronary vein effluent at each stage of time of the protocol.
30 Este aparato de corazón en funcionamiento fue una variante del originariamente descrito por Neely JR y col., (1967) Am J Physiol, 212: 804 -14. Nuestro aparato modificado permitió mediciones de la función cardíaca a diferentes presiones de precarga (Figura 14 y Figura 15). Esto se logró construyendo el aparato de manera que la altura del flujo de entrada del tampón que viene al corazón pudiera alterarse mediante una serie de etapas graduadas de un modo reproducible. 30 This functioning heart apparatus was a variant of the one originally described by Neely JR et al. (1967) Am J Physiol, 212: 804-14. Our modified device allowed cardiac function measurements at different preload pressures (Figure 14 and Figure 15). This was achieved by constructing the apparatus so that the height of the inlet flow of the buffer that comes to the heart could be altered by a series of graduated stages in a reproducible manner.
35 Como en el caso de la precarga, el tubo del flujo de salida de la aorta también podría aumentarse en altura para proporcionar una serie de presiones de poscarga definidas. Las alturas de poscarga se han convertido en mm de Hg para la presentación en los resultados de acuerdo con la convención publicada. 35 As in the case of preloading, the aorta outlet flow tube could also be increased in height to provide a series of defined afterload pressures. Afterload heights have become mm Hg for presentation in the results according to the published convention.
Se recogieron todos los datos de los transductores de presión y sonda de flujo (máquina de adquisición de datos Powerlab 16s; AD Instruments, Australia). Las funciones de procesamiento de datos de este dispositivo se usaron para calcular la primera derivada de las dos ondas de presión (ventricular y aórtica). Los datos de la función cardíaca All data were collected from pressure transducers and flow probe (Powerlab 16s data acquisition machine; AD Instruments, Australia). The data processing functions of this device were used to calculate the first derivative of the two pressure waves (ventricular and aortic). Cardiac function data
45 final disponibles comprendieron: 45 final available included:
Entrada cardíaca*; flujo aórtico; flujo coronario; presión ventricular/aórtica izquierda pico desarrollada; tasa máxima de desarrollo de la presión ventricular (+dP/dt)**; tasa máxima de relajación de la presión ventricular (dP/dt)**; tasa máxima del desarrollo de la presión aórtica (+dP/dt aórtica); tasa máxima de relajación aórtica (Cardiac input *; aortic flow; coronary flow; developed peak left ventricular / aortic pressure; maximum rate of development of ventricular pressure (+ dP / dt) **; maximum relaxation rate of ventricular pressure (dP / dt) **; maximum rate of development of aortic pressure (+ dP / dt aortic); maximum aortic relaxation rate (
50 dP/dt aórtica). 50 dP / dt aortic).
[*La entrada cardíaca (CO) es la cantidad de tampón bombeado por unidad de tiempo por el corazón y comprende tampón que es bombeado fuera de la aorta, además del tampón bombeado a los vasos coronarios. Esto es un indicador global de la función cardíaca. [* The cardiac input (CO) is the amount of buffer pumped per unit of time by the heart and comprises buffer that is pumped out of the aorta, in addition to the buffer pumped to the coronary vessels. This is a global indicator of cardiac function.
55 ** +dP/dt es la tasa de cambio de la presión ventricular (o aórtica) y establece una buena correlación con la fuerza de la contracción del ventrículo (contractilidad). Puede usarse para comparar capacidades de contractilidad de diferentes corazones a la misma precarga (Textbook of Medical Physiology, Ed. A. Guyton. Saunders company 1986). -dP/dt es una medición aceptada de la tasa de relajación del ventrículo]. 55 ** + dP / dt is the rate of change of ventricular (or aortic) pressure and establishes a good correlation with the force of ventricular contraction (contractility). It can be used to compare contractility capabilities of different hearts at the same preload (Textbook of Medical Physiology, Ed. A. Guyton. Saunders company 1986). -dP / dt is an accepted measurement of the ventricle relaxation rate].
El experimento se dividió en dos partes, la primera con 'poscarga fija' y 'precarga variable' la segunda, que inmediatamente siguió a la primera, con 'precarga fija' y 'poscarga variable'. The experiment was divided into two parts, the first with 'fixed afterload' and 'variable preload' the second, which immediately followed the first, with 'fixed preload' and 'variable afterload'.
Después de completarse la canulación inicial, el corazón se dejó inicialmente que se equilibrara durante 6 min a 10 cm de H2O de presión de llenado auricular y 76 cm de H2O de poscarga. Durante este periodo, la cánula del 5 transductor de la presión ventricular izquierda se insertó y se puso en marcha la unidad de electroestimulación. Una vez fue estable el corazón, la presión de llenado auricular se redujo entonces a 5 cm de H2O de agua y luego aumentó progresivamente en la etapa de 2,5 cm de H2O durante una serie de 7 etapas a un máximo de 20 cm de H2O. La precarga se mantuvo a cada presión de llenado durante 2 min, tiempo durante el cual pudo observarse que la traza de presión se estabilizaba y se midió el flujo coronario. Al completarse el experimento de precarga variable, After the initial cannulation was completed, the heart was initially allowed to equilibrate for 6 min at 10 cm H2O of atrial filling pressure and 76 cm H2O afterload. During this period, the cannula of the left ventricular pressure transducer was inserted and the electrostimulation unit was started. Once the heart was stable, the atrial filling pressure was then reduced to 5 cm H2O of water and then progressively increased in the 2.5 cm H2O stage during a series of 7 stages to a maximum of 20 cm H2O . The preload was maintained at each filling pressure for 2 min, during which time it was observed that the pressure trace was stabilized and coronary flow was measured. Upon completion of the variable preload experiment,
10 la porción de poscarga variable del experimento comenzó inmediatamente. 10 the variable afterload portion of the experiment began immediately.
Durante esta parte del experimento, la presión de llenado (precarga) se fijó a 10 cm de H2O y la poscarga aumentó During this part of the experiment, the filling pressure (preload) was set at 10 cm H2O and afterload increased
15 entonces de 76 cm de H2O (55,9 mm de Hg) en la etapa de 8 cm de H2O (5,88 mm de Hg); de nuevo cada etapa fue de 2 min de duración. La altura máxima (poscarga) a la que cada corazón individual se expuso por último lugar se determinó tanto por realización de la altura de poscarga disponible máxima de 145 cm de H2O (106,66 mm de Hg) como la altura a la que el flujo aórtico medido fue de 0 ml/min. En la última situación se consideró que el corazón “había fallado funcionalmente”. Para garantizar que este fallo fue de hecho funcional y no debido a otra causa (por 15 then of 76 cm H2O (55.9 mm Hg) in the 8 cm H2O stage (5.88 mm Hg); again each stage was 2 min long. The maximum height (afterload) at which each individual heart was last exposed was determined both by performing the maximum available afterload height of 145 cm H2O (106.66 mm Hg) and the height at which the flow Aortic measured was 0 ml / min. In the latter situation, the heart was considered to have "functionally failed." To ensure that this fault was in fact functional and not due to another cause (for
20 ejemplo, lesión isquémica o valvular permanente), entonces todos los corazones se devolvieron a las condiciones de perfusión iniciales (precarga 10 cm de H2O; poscarga 75 cm de H2O) durante 4 minutos para confirmar que la función de bombeo podría restaurarse. 20 example, permanent ischemic or valve injury), then all hearts were returned to the initial perfusion conditions (preload 10 cm H2O; afterload 75 cm H2O) for 4 minutes to confirm that the pumping function could be restored.
Al final de este periodo, los corazones se pararon con una infusión retrógrada de 4 ml de KCl frío (24 mM). Entonces, At the end of this period, the hearts were stopped with a retrograde infusion of 4 ml of cold KCl (24 mM). So,
25 los restos auriculares y vasculares se escindieron, el corazón se secó con material absorbente y se pesó. Se hizo una incisión en los ventrículos a mitad de camino entre el vértice y el surco atrioventricular. Entonces, las mediciones del espesor de la pared ventricular se hicieron usando un micro-compás calibrador (Absolute Digimatic, Mitutoyo Corp, Japón). 25 the atrial and vascular remains were excised, the heart was dried with absorbent material and weighed. An incision was made in the ventricles midway between the vertex and the atrioventricular groove. Then, ventricular wall thickness measurements were made using a micro-compass calibrator (Absolute Digimatic, Mitutoyo Corp, Japan).
Los datos de Powerlab se extrajeron promediando intervalos de 1 min de la parte estable de la traza electrónica generada a partir de cada etapa en el protocolo. Entonces, los resultados de cada grupo se combinaron y se analizaron para diferencias entre los grupos para los diversos parámetros de la función cardíaca (entrada cardíaca, Powerlab data was extracted by averaging 1 min intervals of the stable part of the electronic trace generated from each stage in the protocol. Then, the results of each group were combined and analyzed for differences between the groups for the various cardiac function parameters (cardiac input,
35 +/-dP/dt ventricular izquierda). 35 +/- dP / left ventricular dt).
Las diferencias entre observaciones repetidas a diferentes condiciones de precarga se exploraron y se contrastaron entre el grupo de estudio usando un enfoque de modelos mixtos para medidas repetidas (SAS v8.1, SAS Institute Inc, Cary NC). Los datos al azar ausentes se entraron usando un enfoque de probabilidad máxima. Se examinaron Differences between repeated observations at different preload conditions were explored and contrasted between the study group using a mixed model approach for repeated measures (SAS v8.1, SAS Institute Inc, Cary NC). Random absent data were entered using a maximum probability approach. They were examined
40 adicionalmente la media significativa y los efectos de interacción usando el procedimiento de Tukey para mantener una tasa de error del 5% por emparejamiento para las pruebas a posteriori. Todas las pruebas fueron bilaterales. El análisis de supervivencia se hizo usando Proc Liftest (SAS V82). Se usó un análisis unilateral de la varianza para probar la diferencia entre grupos en diversos parámetros de peso. Se usaron pruebas de Tukey para comparar cada grupo entre sí. In addition, the significant mean and interaction effects using the Tukey procedure to maintain an error rate of 5% per pairing for subsequent tests. All tests were bilateral. Survival analysis was done using Proc Liftest (SAS V82). A unilateral analysis of variance was used to test the difference between groups in various weight parameters. Tukey tests were used to compare each group with each other.
Resultados Results
50 Al final del experimento, los animales diabéticos fueron aproximadamente el 50% más pequeños que sus normales de la misma edad correspondientes. Los pesos de los animales al final del periodo experimental se encuentran en la Tabla 4. At the end of the experiment, the diabetic animals were approximately 50% smaller than their corresponding normal of the same age. The weights of the animals at the end of the experimental period are found in Table 4.
Número (n) Tratamiento Peso inicial Peso final Number (n) Treatment Initial weight Final weight
(g) (g) (g) (g)
Grupo A 8 STZ 361 12 Group A 8 STZ 361 12
221 27 221 27
* *
* *
Grupo B 8 STZ/D7 401 33 Group B 8 STZ / D7 401 33
290 56 290 56
* *
Grupo C 9 Referencia 361 16 Group C 9 Reference 361 16
574 50 574 50
Grupo D 11 Referencia/D7 Group D 11 Reference / D7
357 7 563 17 357 56 7 563 17
55 *P < 0,05 55 * P <0.05
Una gráfica del porcentaje de cambio en peso para cada grupo experimental se encuentra en la Figura 5, en la que la flecha indica el inicio del tratamiento con trientina. A graph of the percentage change in weight for each experimental group is found in Figure 5, in which the arrow indicates the start of treatment with trientine.
Los valores de glucosa en sangre para los cuatro grupos de ratas se presentan en la Figura 6. Generalmente, la presencia de diabetes se estableció y se confirmó en el plazo de 3-5 días desde la inyección de STZ. El grupo de control de Referencia y Referencia/D7 permaneció normoglucémico durante todo el experimento. El tratamiento con Blood glucose values for the four groups of rats are presented in Figure 6. Generally, the presence of diabetes was established and confirmed within 3-5 days from the injection of STZ. The Reference and Reference / D7 control group remained normoglycemic throughout the experiment. Treatment with
10 el fármaco no se diferenció en el perfil de glucosa en sangre (p=ns) en ningún grupo tratado en comparación con su grupo de comparación sin tratar apropiado respectivo. 10 The drug did not differ in blood glucose profile (p = ns) in any treated group compared to its respective appropriate untreated comparison group.
15 Las mediciones finales del peso del corazón y el espesor de la pared ventricular se presentan en la Tabla 5. Hubo una pequeña mejora, pero significativa, en la relación de “corazón:peso corporal” con el tratamiento en los animales diabéticos. Hubo una tendencia hacia una relación de “espesor de la pared ventricular:peso corporal” mejorada en diabéticos tratados en comparación con no tratados, pero esto no alcanzó la significancia. 15 The final measurements of heart weight and ventricular wall thickness are presented in Table 5. There was a small but significant improvement in the relationship of "heart: body weight" with treatment in diabetic animals. There was a trend towards an improved "ventricular wall thickness: body weight" ratio in treated diabetics compared to untreated ones, but this did not reach significance.
Referencia 1,58 0,0028 0,0002§ 3,89 0,38§ 0,0068 0,13§ 0,0009§ STZ/D7 1,18 0,24 Reference 1.58 0.0028 0.0002§ 3.89 0.38§ 0.0068 0.13§ 0.0009§ STZ / D7 1.18 0.24
0,0041 0,0005 0.0041 0.0005
3,79 0,52 3.79 0.52
0,0127 0,0027 0.0127 0.0027
n n
* *
n n
STZ 1,03 0,17 0,0047 0,0004 3,31 0,39 n 0,0152 0,0026STZ 1.03 0.17 0.0047 0.0004 3.31 0.39 n 0.0152 0.0026
Referencia/D7 1,58 0,0028 0,0001§ 4,03 0,1§ 0,0072 0,05§ 0,0003§ Reference / D7 1.58 0.0028 0.0001§ 4.03 0.1§ 0.0072 0.05§ 0.0003§
*P < 0,05 § = significativo con los grupos de STZ y STZ/D7 p< 0,05 * P <0.05 § = significant with the groups of STZ and STZ / D7 p <0.05
25 Las siguientes gráficas de las Figuras 7 a 12 representan los parámetros de rendimiento cardíaco de los animales mientras que se someten a presión de llenado auricular creciente (5-20 cm de H2O, precarga) con una poscarga constante de 75 cm de H2O (55,9 mm de Hg). Todos los resultados son media ± eem. En cada gráfica, por claridad, a menos que se establezca de otro modo, sólo se muestran las diferencias significativas relacionadas con STZ/D7 25 The following graphs in Figures 7 to 12 represent the cardiac performance parameters of the animals while undergoing increasing atrial filling pressure (5-20 cm H2O, preload) with a constant afterload of 75 cm H2O (55 , 9 mm Hg). All results are mean ± eem. For each graph, for clarity, unless stated otherwise, only significant differences related to STZ / D7 are shown
30 los otros grupos: * indica p<0,05 para STZ frente a STZ/D7, # p<0,05 para STZ/D7 frente a Referencia 7. A menos que se establezca, STZ/D7 frente a Referencia o Referencia/D7 no fue significativo. La entrada cardíaca (Figura 7) es la suma al flujo aórtico (Figura 10) y el flujo coronario como se muestra en la Figura 8. Como los corazones de control y grupos experimentales tienen pesos finales significativamente diferentes, el flujo coronario también se presenta (Figura 9) como el flujo normalizado al peso del corazón [Obsérvese que el flujo coronario es generalmente 30 the other groups: * indicates p <0.05 for STZ vs. STZ / D7, # p <0.05 for STZ / D7 versus Reference 7. Unless established, STZ / D7 versus Reference or Reference / D7 was not significant. Cardiac input (Figure 7) is the sum to the aortic flow (Figure 10) and coronary flow as shown in Figure 8. Since control hearts and experimental groups have significantly different end weights, coronary flow also occurs ( Figure 9) as the flow normalized to the weight of the heart [Note that coronary flow is generally
35 proporcional a la masa de músculo cardíaco y, por tanto, al peso cardíaco]. 35 proportional to the heart muscle mass and, therefore, to the heart weight].
La primera derivada de la curva de presión da la tasa de cambio en el desarrollo de la presión en el ventrículo con cada ciclo cardíaco y el valor de la tasa positiva máxima de cambio (+dP/dt) se representa en la Figura 11. La tasa máxima de relajación correspondiente (-dP/dt) está en la Figura 12. Resultados similares que muestran la mejora en The first derivative of the pressure curve gives the rate of change in the development of pressure in the ventricle with each cardiac cycle and the value of the maximum positive rate of change (+ dP / dt) is represented in Figure 11. The corresponding maximum relaxation rate (-dP / dt) is in Figure 12. Similar results showing improvement in
40 la función cardíaca se encontraron a partir de los datos derivados de la cánula de presión aórtica (resultados no mostrados). 40 cardiac function were found from the data derived from the aortic pressure cannula (results not shown).
45 La capacidad de los corazones para sobrellevar el trabajo de poscarga adicional se evaluó en condiciones para precarga constante y poscarga creciente. La representación de la supervivencia funcional, es decir, el número restante de corazones en cada poscarga que todavía tuvo una entrada aórtica superior a 0 ml/min, se encuentra en la Figura 13 y la Tabla 6. 45 The ability of hearts to cope with additional afterload work was evaluated under conditions for constant preload and increased afterload. The representation of functional survival, that is, the remaining number of hearts in each afterload that still had an aortic input greater than 0 ml / min, is found in Figure 13 and Table 6.
50 Tabla 6. Supervivencia cardíaca en cada presión de poscarga Número supervivientes (flujo aórtico >0 ml/min) Porcentaje de en funcionamiento en cada poscargaPoscarga STZ STZ/D7 Referencia Referencia/D7 STZ STZ/D7 Referencia Referencia/D7 (mm deHg) 50 Table 6. Cardiac survival at each afterload pressure Number of survivors (aortic flow> 0 ml / min) Percentage of operation at each afterload STZ STZ / D7 reference Reference Reference / D7 STZ STZ / D7 Reference Reference / D7 (mmHg)
5,9 8 8 9 11 100% 100% 100% 100% 5.9 8 8 9 11 100% 100% 100% 100%
Número supervivientes (flujo aórtico >0 ml/min) Porcentaje de en funcionamiento en cada poscargaPoscarga STZ STZ/D7 Referencia Referencia/D7 STZ STZ/D7 Referencia Referencia/D7 (mm deHg) Number of survivors (aortic flow> 0 ml / min) Percentage of operation at each afterload STZ STZ / D7 reference Reference Reference / D7 STZ STZ / D7 Reference Reference / D7 (mmHg)
1,8 8 8 9 11 100% 100% 100% 100% 67,7 8 8 9 11 100% 100% 100% 100% 71,4 6 8 9 11 75% 100% 100% 100% 77,2 5 8 9 11 63% 100% 100% 100% 83,1 4 7 9 11 50% 88% 100% 100% 88,3 3 7 9 11 38% 88% 100% 100% 94,9 1 5 9 11 13% 62,5% 100% 100% 100,8 0 3 9 11 0% 37% 100% 100% 106,7 0 1 9 9 0%13% 100% 82% 1.8 8 8 9 11 100% 100% 100% 100% 67.7 8 8 9 11 100% 100% 100% 100% 71.4 6 8 9 11 75% 100% 100% 100% 77.2 5 8 9 11 63% 100% 100% 100% 83.1 4 7 9 11 50% 88% 100% 100% 88.3 3 7 9 11 38% 88% 100% 100% 94.9 1 5 9 11 13% 62 , 5% 100% 100% 100.8 0 3 9 11 0% 37% 100% 100% 106.7 0 1 9 9 0% 13% 100% 82%
□ El Tratamiento con trientina no tuvo efecto obvio sobre las concentraciones de glucosa en sangre en los dos 5 grupos diabéticos (como era de esperar). □ Treatment with trientine had no obvious effect on blood glucose concentrations in the two 5 diabetic groups (as expected).
- □□
- Hubo una mejora pequeña, pero significativa, en la relación de (peso del corazón) / (peso corporal) en el grupo diabético tratado con trientina en comparación con la del grupo diabético sin tratamiento. There was a small but significant improvement in the ratio of (heart weight) / (body weight) in the diabetic group treated with trientine compared to that in the untreated diabetic group.
- □ □
- Cuando la precarga aumentó con la poscarga mantenida constante, la entrada cardíaca fue restaurada a los When the preload increased with the afterload kept constant, the cardiac input was restored at
valores de Referencia. Tanto los flujos coronarios aórticos como absolutos mejoraron en el grupo tratado con 10 fármaco. reference values. Both aortic and absolute coronary flows improved in the group treated with 10 drugs.
□ Los indicadores para contracción y relajación ventricular mejoraron ambos significativamente en el grupo tratado con fármaco en comparación con valores equivalentes en el grupo diabético sin tratar. La mejora restauró la función a tal grado que no hubo diferencia significativa entre los grupos tratados con fármaco y de control Referencia. □ The indicators for ventricular contraction and relaxation both improved significantly in the drug-treated group compared to equivalent values in the untreated diabetic group. The improvement restored the function to such a degree that there was no significant difference between the drug-treated and control groups. Reference.
15 □ Las medidas del transductor aórtico del cambio de presión también mostraron función mejorada en el grupo diabético tratado con fármaco en comparación con el diabético sin tratar (datos no mostrados). 15 □ Pressure aortic transducer measurements also showed improved function in the diabetic group treated with drug compared to the untreated diabetic (data not shown).
□ Cuando la poscarga aumentó en presencia de precarga constante, se observó que la capacidad del corazón para funcionar a mayores poscargas fue enormemente mejorada en el grupo diabético tratado con fármaco en comparación con el grupo diabético sin tratar. Cuando ∼50% de los corazones diabéticos sin tratar había fallado, □ When the afterload increased in the presence of constant preload, it was observed that the heart's ability to function at higher afterloads was greatly improved in the diabetic group treated with drug compared to the untreated diabetic group. When ∼50% of untreated diabetic hearts had failed,
20 ∼90% de los corazones diabéticos tratados con trientina estaban todavía en funcionamiento. 20 ∼90% of the diabetic hearts treated with trientine were still functioning.
□ En comparación con los corazones diabéticos sin tratar, la respuesta de los corazones diabéticos tratados con fármaco mostró mejoras significativas en varias variables: entrada cardíaca, flujo aórtico, flujo coronario, además de contracción ventricular e índices de relajación mejorados. El tratamiento con fármaco de animales normales no tuvo efectos adversos sobre el rendimiento cardíaco. □ Compared to untreated diabetic hearts, the response of diabetic hearts treated with drug showed significant improvements in several variables: cardiac input, aortic flow, coronary flow, in addition to ventricular contraction and improved relaxation rates. Drug treatment of normal animals had no adverse effects on cardiac output.
Estos datos preliminares sugieren que el tratamiento de ratas diabéticas por STZ con trientina mejora espectacularmente varias medidas de la función cardíaca. These preliminary data suggest that the treatment of diabetic rats by STZ with trientine dramatically improves several measures of cardiac function.
La administración de trientina oral durante 7 semanas a ratas Wistar con diabetes previamente establecida de 6 semanas de duración produjo una mejora global en la función cardíaca. Esta mejora se demostró por la mejora de la The administration of oral trientine for 7 weeks to Wistar rats with previously established diabetes lasting 6 weeks produced a global improvement in cardiac function. This improvement was demonstrated by the improvement of
35 función contráctil (+dP/dT) y una reducción en la rigidez ventricular (-dP/dT). También mejoró sustancialmente la capacidad global del corazón diabético tratado con trientina para tolerar la poscarga creciente. 35 contractile function (+ dP / dT) and a reduction in ventricular stiffness (-dP / dT). It also substantially improved the overall ability of the diabetic heart treated with trientine to tolerate increased afterload.
Claims (13)
- 2. 2.
- El agente para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde los órganos dependientes comprenden el riñón. 20 The agent for use according to claim 1, wherein the dependent organs comprise the kidney. twenty
- 4. Four.
- El agente para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el agente comprende 25 trietilentetramina. The agent for use according to any one of claims 1 to 3, wherein the agent comprises triethylenetetramine.
- • •
- BERENSHTEIN et al. MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY, 2002, vol. 234 (235), 283-292 BERENSHTEIN et al. MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY, 2002, vol. 234 (235), 283-292
- • •
- SHIMIZU N et al. PEDIATRICS INTERNATIONAL, 1999, vol. 41, 419-422 SHIMIZU N et al. PEDIATRICS INTERNATIONAL, 1999, vol. 41, 419-422
- • •
- JEREMY J Y et al. JOURNAL OF DRUG DEVELOPMENT AND CLINICAL PRACTICE, 1995, vol. 7 (2), 119126 JEREMY J Y et al. JOURNAL OF DRUG DEVELOPMENT AND CLINICAL PRACTICE, 1995, vol. 7 (2), 119126
- • •
- GRUPP I et al. Am J Physiol, 1993, vol. 34, H1401-1410 GRUPP I et al. Am J Physiol, 1993, vol. 34, H1401-1410
- • •
- RODRIGUES B et al. Diabetes, 1988, vol. 37 (10), 1358-64 RODRIGUES B et al. Diabetes, 1988, vol. 37 (10), 1358-64
- • •
- NEELY JR et al. Am J Physiol, 1967, vol. 212, 804-14 NEELY JR et al. Am J Physiol, 1967, vol. 212, 804-14
- • •
- Textbook of Medical Physiology. Saunders company, 1986 Textbook of Medical Physiology. Saunders company, 1986
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