ES2644166B1

ES2644166B1 - Procedimiento para la obtención de un extracto tánico aislado de uva, extracto tánico obtenido y sus usos

Info

Publication number: ES2644166B1
Application number: ES201630673A
Authority: ES
Inventors: Anna BACARDIT DALMASES; Luis OLLÉ OTERO; Sílvia SOROLLA CASELLAS; Concepció CASAS SOLÉ
Original assignee: Universitat Politecnica de Catalunya UPC
Current assignee: Universitat de Lleida
Priority date: 2016-05-24
Filing date: 2016-05-24
Publication date: 2018-09-24
Anticipated expiration: 2036-05-24
Also published as: EP3463410B1; EP3463410A1; ES2644166A1; WO2017203429A1; CN109952110A; US11963993B2; CN109952110B; US20200121752A1

Abstract

Procedimiento para la obtención de un extracto tánico aislado de uva, extracto tánico obtenido y sus usos.#Se proporciona un procedimiento para la obtención de un extracto tánico aislado de uva a partir semillas de uva. El procedimiento comprende: preparación de semillas de uva como fuente de taninos; preparación de una disolución acuosa de un agente solubilizante de polifenoles seleccionado entre urea, un compuesto conteniendo el grupo SO{sub,3} e hidróxido sódico a una concentración de 1% a 15% en peso; en un reactor autoclave, llevar a cabo una única extracción; separación y concentración directa para dar el extracto aislado.#La invención también se refiere al extracto tánico obtenido. El nuevo extracto tánico aislado de semillas de uva comprende una mezcla de taninos y no-taninos, cuya composición proporciona al extracto propiedades antioxidantes y de solidez a la luz mejoradas. El extracto tánico aislado de semillas de uva comprende además un colorante.

Description

5

10

15

20

25

30

DESCRIPCION

PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCION DE UN EXTRACTO TANICO AISLADO DE UVA, EXTRACTO TANICO OBTENIDO Y SUS USOS

La presente invention se refiere a un procedimiento para la obtencion de un extracto tanico aislado de uva. En particular, la invencion se refiere a un procedimiento de extraction acuosa para la obtencion de un extracto tanico que se centra en la fuente de taninos seleccionada y en el tipo de agente disolvente de polifenoles empleado en la etapa de extraccion.

La invencion tambien se refiere al extracto tanico obtenido por las etapas definidas en el procedimiento. En particular, se obtiene un nuevo extracto tanico aislado de semillas de uva que comprende una mezcla de taninos y no-taninos, cuya composition proporciona al extracto propiedades antioxidantes y de solidez a la luz mejoradas. El extracto tanico aislado de semillas de uva comprende ademas un colorante.

La invencion tambien se refiere al uso del extracto tanico aislado de semillas de uva como agente curtiente, agente antioxidante y/o agente colorante en las industrias del curtido, alimenticia, cosmetica y/o farmaceutica.

Antecedentes de la invencion

La situation actual en la tecnologla de extraccion de taninos vegetales destinados a la industria del curtido se basa en procesos de extraccion en fase acuosa. Los extractos tanicos obtenidos se utilizan en la industria del curtido haciendolos reaccionar con el tejido de la piel animal, preservando su flexibilidad y haciendola resistente a la putrefaction.

Los extractos tanicos vegetales utilizados actualmente en la industria del curtido son principalmente el extracto de Quebracho, el extracto de Mimosa, el extracto del Castano, o el extracto de la Tara, todos ellos de origen vegetal procedentes de arboles de bosques de Sur-America, o de Sur-Africa que han sido cultivados y talados con este objetivo.

Como fuente de taninos se ha venido utilizando hasta la fecha como materia prima las maderas, cortezas, hojas u otras partes de un arbol trituradas. Despues de triturar, el triturado resultante se mezcla en una solution alcoholica o acuosa y se lleva a cabo una extraccion a determinada presion y temperatura para extraer los taninos de la materia prima. La fraction llquida resultante de la extraccion contiene los taninos de interes. La separation de la fraccion solida de la fraccion llquida se lleva a cabo mediante sedimentation, opcionalmente seguida de un tratamiento qulmico y, finalmente, se concentran los taninos

5

10

15

20

25

30

para obtener el extracto tanico vegetal en estado llquido. Cuando se desea la obtencion del extracto en estado solido, se lleva a cabo ademas una atomizacion.

Se han propuesto distintas variantes de esta metodologla, por ejemplo, empleando agua frla o agua caliente, con presion atmosferica o superior.

Los taninos son polifenoles, en general, solubles en agua, de peso molecular comprendido entre 500 y 3.000, con una composition diferente segun su origen, aunque con una aproximacion a la formula: C14H14O11. Los taninos tienen un olor caracterlstico, un color que varla del amarillento al marron oscuro, todos tienen un gusto amargo, son astringentes, la exposition a la luz los oscurece y reaccionan con las sales ferricas formando compuestos negro azulados que se utilizan como materia prima para obtener colorantes. La principal caracterlstica qulmica es su capacidad de hacer precipitar las protelnas y hacerlas resistentes a la descomposicion, motivo por el que son utiles como agentes curtientes.

La solicitud de patente espanola ES2197821 describe un procedimiento para la obtencion de un extracto tanico vegetal en fase acuosa. La fuente de taninos empleada es el orujo de la uva, comprendiendo el orujo de la uva una mezcla triturada de raspa, piel y semilla.

El procedimiento incluye las siguientes etapas:

i) utilization, como fuente de taninos, del orujo de la uva;

ii) preparation de una disolucion de un agente sulfonante en una cantidad de agua;

iii) simultaneamente, mezcla de la disolucion preparada en la etapa ii) con el orujo de la uva de la etapa i) en un reactor a una determinada presion y temperatura para extraer los taninos;

iv) separation solido-llquido; y

v) purification y concentration del extracto obtenido.

De acuerdo con la description de la patente ES2197821A1, la naturaleza de los taninos obtenidos a partir del orujo de la uva es de tipo condensado (catequlmico) y la concentracion de estos esta unida al numero extracciones realizadas. Se describe una filtration y prensado despues de la etapa de separacion solido-llquido por descarga del llquido extraldo y, a continuacion, una etapa de sedimentacion y decantacion despues de la filtracion y antes de llevar a cabo la purificacion y concentracion. As! pues, para obtener rendimientos aceptables de extraction es necesario llevar a cabo etapas adicionales y emplear distintos equipos lo que lo hace diflcilmente escalable a escala industrial.

5

10

15

20

25

30

Por lo tanto, el metodo descrito en ES2197821 no es viable a escala industrial, en parte por requerir de un filtrado seguido de una purification para aislar el producto de interes, y en parte porque el rendimiento de extraction de taninos depende del numero de extracciones realizadas, a mayor numero mayor cantidad de taninos se extraen, ademas de requerir distintos equipos.

Serla, por lo tanto, deseable proporcionar un procedimiento para la obtencion de un extracto vegetal, que fuera respetable con el medio ambiente, escalable a escala industrial, simple y facil, con buenos rendimientos para dar un extracto tanico soluble o dispersable en agua frla de propiedades antioxidantes y de solidez a la luz mejoradas. Ademas, es deseable un extracto de origen vegetal con propiedades colorantes.

Description de la invention

Con el objetivo de resolver los problemas planteados por el estado de la tecnica, la presente invencion se centra en la fuente de taninos seleccionada y en el tipo de agente solubilizante de polifenoles empleado en la etapa de extraccion. El adecuado procesamiento de ambos, con unas etapas y condiciones determinadas proporciona un nuevo extracto aislado de la uva.

Asl pues, en un primer aspecto, la invencion tiene por objeto proporcionar un procedimiento para la obtencion de un extracto tanico aislado de la uva que comprende la utilization de una fuente de taninos, la preparacion de una disolucion acuosa de un agente solubilizante de polifenoles y una etapa de extraccion de taninos en un reactor que comprende la fuente de taninos y la disolucion acuosa preparada a una presion y temperatura, que se caracteriza por el hecho de que:

- la fuente de taninos son semillas de uva,

- el agente solubilizante de polifenoles se selecciona entre urea, hidroxido sodico y un compuesto conteniendo el grupo SO3 y su concentration en la disolucion acuosa esta comprendida entre 1 y 15% en peso con respecto al peso de semillas de uva, y

- la etapa de extraccion se lleva a cabo en una autoclave a una presion comprendida entre 1 y 6 atmosferas y a una temperatura comprendida entre 80 y 160°C, y

- opcionalmente, concentracion del extracto por evaporacion para obtener el extracto tanico aislado concentrado y/o secado por atomization para obtener

5

10

15

20

25

30

el extracto tanico aislado en estado solido.

En la presente invention por el termino "semilla de uva” se entiende la pepita o pipa separada de la baya de la uva y secada. Por lo tanto, los pesos calculados de semilla de uva son pesos en seco. Las formas de las pepitas o pipas pueden ser ovoides, esfericas, aplastadas o circulares y con diversos tamanos. Su dureza va desde blanda hasta crocante. La pepita o pipa se encuentra en el interior de la baya de la uva, y es la encargada de ser la via de reproduction de la vid.

Preferiblemente, las semillas de uva se utilizan enteras, es decir, se prefiere semillas o pipas de uva sin triturar ni molturar. Los autores de la presente invencion han encontrado mejores propiedades en el extracto obtenido y mejores rendimientos de proceso utilizando semillas de uva enteras.

En la presente invencion por el termino "agente solubilizante de polifenoles” se entiende un agente capaz de reaccionar con los grupos carboxllicos presentes en los polifenoles. En la presente invencion, dicho agente solubilizante de polifenoles se selecciona entre urea, un compuesto conteniendo el grupo SO3 o hidroxido sodico. El compuesto conteniendo el grupo SO3 es un acido o sal inorganica que contiene el grupo SO3 tal como el acido sulfurico, oleum, acido sulfamico, sulfito sodico, bisulfito sodico o metabisulfito sodico.

En una realization preferida, el agente solubilizante de polifenoles es urea.

Preferiblemente, la concentration de agente solubilizante de polifenoles en la disolucion acuosa esta comprendida entre 2% y 8% en peso con respecto al peso de semillas de uva.

Preferiblemente, la relation en peso entre semillas de uva y agua para preparar la disolucion es de 1:1. Sin embargo, esta relacion puede variar de 0,5:1 a 1:4.

Tambien preferiblemente, la etapa de extraction se lleva a cabo en un reactor autoclave a una temperatura comprendida entre 100°C y 130°C y a una presion comprendida entre 2,5 y 3,5 atmosferas. Todavla mas preferiblemente, la etapa de extraccion se lleva a cabo a temperatura de 120±2 °C, y presion de 3 atmosferas. Estas condiciones de extraccion se mantienen durante un periodo de tiempo comprendido entre 1 y 2 horas. El extracto llquido obtenido puede utilizarse directamente para el curtido de la piel.

En la presente invencion, por el termino "autoclave” se entiende una camara de reaction. Esta camara de reaccion, normalmente esta construida en acero inoxidable, y esta disenada para trabajar a elevadas presiones con el objetivo de llevar a cabo una reaccion, una coccion o una esterilizacion con vapor de agua. Una presion elevada, de hasta 6 atmosferas

5

10

15

20

25

30

aproximadamente, permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C.

Asl pues, en un primer aspecto de la presente invention se proporciona un procedimiento simple y facil, que solo requiere de un reactor autoclave y una unica etapa de extraction para obtener buenos rendimientos comparado con el estado de la tecnica que requiere de filtrado y purification, ademas de varias extracciones para obtener un rendimiento aceptable.

Ventajosamente, el procedimiento para la obtencion del extracto tanico aislado de semilla de uva del primer aspecto proporciona rendimientos elevados, 63% y 80,3% comparados con el 42,1% del estado de la tecnica.

Se proporciona un procedimiento respetuoso con el medio ambiente, que reutiliza las semillas de uva, subproductos o residuos de la uva, que se encuentran de forma disponible y son faciles de obtener debido a su concentration geografica sin necesidad de talar arboles o importar partes de los mimos.

Se proporciona un procedimiento escalable a escala industrial, utiliza menores tiempos de proceso y no requiere de filtration, sedimentation, decantation, ni de una purificacion, etapas no deseables en un proceso a escala industrial.

El procedimiento de acuerdo con el primer aspecto de la invencion ademas esta disenado para, si se desea, reutilizar el agua de limpieza del reactor autoclave de manera puede reducirse el consumo de agua hasta el 80% del consumo de agua total. Ventajosamente, el agua de limpieza del equipo es susceptible de ser reutilizada como componente en la preparation de la disolucion acuosa del agente solubilizante de polifenoles en una nueva extraccion.

Ventajosamente, el procedimiento para la obtencion de un extracto aislado de uva de acuerdo con el primer aspecto de la invencion reduce el consumo energetico necesario para la obtencion del extracto porque los costes de etapas para la extraccion y concentracion de taninos de la semilla de uva son inferiores al no requerir de etapas de separation adicionales ni etapas de purificacion del extracto obtenido.

Sorprendentemente, con el procedimiento de acuerdo con el primer aspecto de la presente invencion se proporciona un nuevo extracto tanico aislado de la uva.

Asl, en un segundo aspecto, la presente invencion se refiere a un extracto tanico aislado de la uva obtenido de acuerdo con el primer aspecto de la invencion que comprende una mezcla de taninos hidrolizables puros, taninos condensados puros y no-taninos que incluyen acido galico.

5

10

15

20

25

30

Los extractos vegetales estan compuestos principalmente de cuatro fracciones, que son:

a) No-Taninos: Es la fraccion de peso molecular baja, inferior a 500, que no tienen poder curtiente, pero que contribuye a mejorar la solubilidad del tanino, a aumentar la velocidad de penetracion y a separar las fibras de las pieles.

b) Taninos: son polifenoles solubles en agua de un peso molecular comprendido entre 500 y 3.000, con una composition diferente segun su origen, pero una aproximacion a su formula es: C14H14O11. Los taninos tienen un olor caracterlstico, un color que varia del amarillento al marron oscuro, todos tienen un gusto amargo, son astringentes, la exposition a la luz los oscurece de color y reaccionan con las sales ferricas dando compuestos negros azulados que se utilizan para hacer tintes. La principal caracterlstica qulmica es su capacidad de hacer precipitar les protelnas y hacerlas resistentes a la descomposicion, que es lo que determina su utilization como agente curtiente. Los taninos se clasifican en funcion de sus caracterlsticas estructurales en:

- Taninos hidrolizables o pirogalicos: Son los que en presencia de acidos fuertes en caliente, se hidrolizan en glucosa y en acido galico o acido elagico, teniendo galotaninos o elagitaninos. Los primeros se extraen de las agallas, Quercus infectoria y Rhus semisalata, de sus hojas del sumac, Rhus coriaria y de la tara Caesalpinia spinosa, mientras que los elagitannicos estan presentes en la madera del roble, Quercus robur, Quercus petraea y Quercus alba, del castano, Castanea vesca y Castanea Dentae y del mirabola, Terminalia chebula.

- Taninos condensados o catequlnicos: Los taninos condensados no se descomponen con los acidos y se caracterizan por la capacidad gradual de formar polimerizados insolubles denominados flovacenos. Se diferencian entre proantocianicos que por hidrolisis acida liberan antocianinas y otros compuestos, y profistenldicos que estan presentes en las extracciones de las maderas del quebracho, Schinopsis balasae y Schinopsis lorentzii, de la mimosa, Acacia mearnsi y Acacia Mollissima, y en las extracciones de las hojas de gambir, Uncaria gambi.

- Se dan taninos cuya estructura es una mezcla de taninos hidrolizables y condensados.

c) Insolubles: Es la fraccion de peso molecular superior a 3.000, corresponde a

5

10

15

20

25

30

polifenoles acomplejados con carbohidratos muy astringentes que por su elevado peso molecular les cuesta penetrar en la piel y se fijan superficialmente. No es deseable su presencia y de hecho se encuentran en los extractos fabricados en condiciones muy agresivas.

d) Humedad: Porcentaje de agua de cada extracto.

Sorprendentemente, la combination de distintos tipos de polifenoles presentes en el extracto obtenido de acuerdo con el primer aspecto de la invention le confieren al mismo propiedades de solidez a la luz y propiedades antioxidantes mejoradas con respecto a los extractos vegetales del estado de la tecnica.

Inesperadamente, cuando se utiliza urea como agente solubilizante de polifenoles en el procedimiento de obtencion del extracto, el extracto tanico obtenido comprende un colorante.

Por lo tanto, el extracto tanico aislado de semillas de uva obtenido utilizando urea como agente solubilizante de polifenoles comprende una mezcla de taninos hidrolizables puros, taninos condensados puros, no-taninos que incluyen acido galico y un colorante.

Los autores de la presente invencion han realizado ensayos de espectrofotometrla UV-Vis (350-800nm) de una muestra del extracto obtenido utilizando urea como agente solubilizante de polifenoles para preparar la disolucion acuosa que se ha comparado con el barrido de un colorante marron convencional, en particular Dark Brown CA que aparece a 472,85nm, y los resultados del barrido muestran un maximo en una muestra del extracto a 352,8nm, Absorbancia 2,70A, dentro de la region UV (vease Fig. 4).

Los autores de la presente invencion han corroborado la presencia del colorante con un analisis por HPLC de una muestra del extracto (vease Fig. 5).

Asl pues, la invencion tambien proporciona un extracto que comprende un colorante azoico, donde dicho colorante azoico esta exento o con un llmite de detection inferior a 30mg/kg de aminas aromaticas prohibidas, que lo hace adecuado para su utilization como agente curtiente, agente antioxidante y agente colorante en las industrias del curtido, alimenticia, cosmetica y/o farmaceutica, segun se desee.

En la presente invencion "colorante exento o libre de aminas aromaticas prohibidas” se entiende que dichas aminas aromaticas no se detectan con un llmite de deteccion de 30mg/kg.

En un tercer aspecto, la invencion se refiere a la utilizacion del extracto tanico segun el

8

5

10

15

20

25

30

primer o segundo aspecto de la invencion como agente curtiente, agente antioxidante, o colorante en la industria del curtido, alimenticia, cosmetica o farmaceutica.

Una ventaja anadida del nuevo extracto es su multifuncionalidad ya que es de aplicacion como agente antioxidante, colorante y agente curtiente.

El extracto de la invencion ademas tambien puede utilizarse en el curtido combinado cromo- vegetal o bien como recurtiente en pieles y cueros ya curtidos al cromo que necesitan un tratamiento posterior al curtido con el fin de modificar caracterlsticas tales como la resistencia, grosor o flexibilidad.

USO ALIMENTICIO

En la industria del vino, los taninos son los responsables de caracterlsticas sensoriales tan importantes como el color, cuerpo, astringencia y amargor. Dichos compuestos tienen su origen en la materia prima con la que se elabora el vino, pero ademas en la madera de roble utilizada en la guarda en barricas o de aplicacion directa al vino. En el caso de las barricas de roble existen taninos conocidos como taninos hidrolizables (sus dos clases los elagitaninos y los galotaninos), para diferenciarlos de los de la uva donde existe una mayor concentration los taninos condensados, estos son responsables en forma importante de aspectos positivos para el vino, como el cuerpo y la estabilidad colorante en vinos tintos. Las propiedades de precipitation de los taninos son utilizadas para limpiar o clarear vinos o cerveza.

Ventajosamente, con el extracto tanico obtenido a partir de semilla de uva segun la invencion se obtiene un extracto con una composition que lo hace util para su uso alimenticio, por ejemplo, en la industria del vino.

USO INDUSTRIAL

En la industria, los taninos se utilizan en especial para el curtido de pieles, gracias a la capacidad de estos para trasformar las protelnas en productos resistentes a la descomposicion. En este proceso de curtido se emplean determinados taninos, los mas utilizados son los procedentes de la acacia, el castano, la encina, el pino o la bastarda. Tambien se emplean en la industria textil por su capacidad de reaccionar con las sales ferricas, los cuales dan lugar a productos negro-azulados adecuados para tintes. Igualmente son utilizados como mordientes para la aplicacion de tintes en tejidos, coagulantes de gomas, o aprestos para papeles o sedas.

Ventajosamente, con el extracto tanico obtenido a partir de semilla de uva segun la

5

10

15

20

25

30

invention se obtiene un extracto con una composition que lo hace util para su uso industrial, por ejemplo, en la industria del curtido.

USO MEDICINAL

En medicina se prescriben por su action astringente, hemostatica, antiseptica y tonificante. La propiedad ya comentada de coagular las albuminas de las mucosas y de los tejidos, crean una capa seca, aislante y protectora que reduce la irritacion y el dolor sobre la piel. Externamente, los preparados a base de drogas ricas en taninos, como las decocciones, se emplean para detener pequenas hemorragias locales; en inflamaciones de la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, hemorroides, etc. Internamente, son utiles contra la diarrea, enfriamiento intestinal y afecciones vesiculares. Los taninos tambien son utiles como contraveneno en caso de intoxication por alcaloides vegetales.

Breve description de las figuras

Para mejor comprension de cuanto se ha expuesto, se acompanan unos dibujos en los que, esquematicamente y tan solo a tltulo de ejemplo no limitativo, se representa un caso practico de realization.

La Figura 1 muestra el cromatograma obtenido por cromatografla llquida de alta resolution (HPLC) en fase reversa del extracto obtenido de acuerdo con el primer y segundo aspecto de la invencion, en el que la fuente de taninos son semillas de uva enteras y el agente solubilizante de polifenoles empleado en la etapa de extraction es metabisulfito sodico de acuerdo con el Ejemplo 1 de la invencion.

La Figura 2 muestra el cromatograma obtenido por cromatografla llquida de alta resolution (HPLC) en fase reversa de un extracto obtenido de acuerdo con el primer y segundo aspecto de la invencion, en el que la fuente de taninos son semillas de uva enteras y el agente solubilizante de polifenoles empleado en la etapa de extraction es urea de acuerdo con el Ejemplo 2 de la invencion.

La Figura 3 muestra el cromatograma obtenido por cromatografla llquida de alta resolution (HPLC) en fase reversa del extracto obtenido de acuerdo con el Ejemplo 3 de referencia, en el que la fuente de taninos es orujo de la uva triturado y el agente solubilizante de polifenoles empleado en la etapa de extraction es metabisulfito sodico.

La Figura 4 muestra el grafico de barrido del extracto obtenido de una muestra del extracto de acuerdo con el Ejemplo 2 de la invencion (■ ■ ■) en comparacion con el barrido de un colorante marron convencional (------) obtenido entre 350-800 nm mediante

5

10

15

20

25

espectrofotometrla UV-Vis.

La Figura 5 muestra el cromatograma obtenido mediante HPLC-DAD a 500 nm de una muestra del extracto obtenido de acuerdo con el Ejemplo 2 de la invention en el rango entre 200-800 nm.

La Figura 6 muestra un ensayo comparativo de la solidez de la luz artificial segun la norma IUF 402 donde se aprecia la estabilidad del extracto obtenido de acuerdo con el Ejemplo 1 y Ejemplo 2 de la invencion.

Para mayor comprension de cuanto se ha expuesto, se acompanan unos ejemplos en los que, esquematicamente y solo a tltulo de ejemplo no limitativo, se representan realizaciones concretas de la invencion.

Ejemplos

EJEMPLO 1: Extracto tanico aislado de semillas de uva

Extraction quimica

Para 100 kg de semilla entera de uva seca se utilizaron 5 kg de metabisulfito sodico y 100 litros de agua destilada. La disolucion acuosa contenla 5% de metabisulfito sodico.

Se introdujeron todos los componentes en un reactor autoclave y se llevo a cabo la extraccion acuosa en el reactor autoclave manteniendo la temperatura a 120°C y presion 3 atmosferas durante 1 hora.

Despues del tiempo indicado, se obtuvo un extracto tanico aislado de semillas de uva en estado llquido apto para el curtido de la piel.

EJEMPLO 2: Extracto tanico aislado de semillas de uva

Extraccion quimica

Para 100 kg de semilla entera de uva seca se utilizaron 5 kg de urea y 100 litros de agua destilada. La disolucion acuosa contenla 5% de urea.

EJEMPLO 3 de referenda: Extracto tanico aislado del orujo de la uva

Extraction quimica

Para 200 kg de orujo se utilizaron 2 kg de metabisulfito sodico y 400 litros de agua destilada.

5 Se introdujeron todos los componentes en un reactor autoclave y se llevo a cabo la extraction acuosa en el reactor autoclave manteniendo la temperatura a 136°C y 5 atmosferas de presion durante 3 horas.

Despues del tiempo indicado, se obtuvo el extracto tanico aislado del orujo.

ENSAYOS

Cromatografia de los extractos obtenidos de acuerdo con los Ejemplos 1 a 3

Los extractos obtenidos en los ejemplos 1 a 3 se analizaron por cromatografia de columna de alta resolucion con separacion en fase reversa. Se utilizo una columna de tipo Xbridge 5 Fenilo. Para el analisis cromatografico, se llevo a cabo una disolucion acuosa 1:25 de los extractos obtenidos en los ejemplos. Posteriormente, los extractos se filtraron hasta 0,45p,m para su analisis. Se inyectaron 25 p,l del extracto. La longitud de onda de captura del cromatograma fue de 271,1 nm. Veanse Figuras 1 a 3 que corresponden respectivamente a los Ejemplos 1 a 3.

10 Para el analisis, se genero una nueva librerla de espectros en la que se incorporaron los espectros de los distintos compuestos presentes en muestras de taninos comerciales de Mimosa, Quebracho, Tara y Castano. Tambien se incorporaron los espectros de 10 patrones comerciales de polifenoles de distintas naturalezas qulmicas que incluyen los tipos condensados o catequlnicos y los de tipo hidrolizable o galotaninos. Se procedio a realizar 15 una comparacion de los compuestos identificados en los extractos obtenidos de acuerdo con el Ejemplo 1, el Ejemplo 2 y el Ejemplo 3 de referencia.

En la Tabla 1 que sigue se listan los compuestos identificados en el extracto tanico aislado de semilla de uva de acuerdo con el Ejemplo 1:

Pico: Tr (min.) Identificacion Area % Area / Area total

1: 2,97 Patron Acido Galico 590.723 16,1

2: 3,46 Tanino catequfnico del Quebracho 1 43.598 1,2

3: 3,87 Tanino catequfnico de la Mimosa 1 51.787 1,4

4: 4,17 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que Procianidina B2) 753.881 20,5

5: 5,93 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que (+)- Catequina) 62.630 1,7

6: 6,54 Tanino catequfnico de la Mimosa 2 55.427 1,5

7: 8,07 Tanino catequfnico de la Mimosa 3 193.423 5,3

8: 8,91 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que Procianidina B2) 124.261 3,4

9: 11,71 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que (-) -Epicatequina) 92.394 2,5

10: 11,96 Tanino catequfnico - hidrolizable. (Mismo cromoforo que (-) -Epigalocatequin galato) 32.164 0,9

11: 12,88 Tanino catequfnico-hidrolizable. (Mismo cromoforo que (-) -Epicatequin galato) 138.372 3,8

12: 13,63 Tanino catequfnico de la Mimosa 4 26.330 0,7

13: 13,83 Tanino galico de la Tara 1 38.722 1,1

14: 14,67 Tanino catequfnico-hidrolizable. (Mismo cromoforo que (-) -Epigalocatequin galato) 60.524 1,6

15: 15,99 Patron (-)- Epicatequina 38.685 1,1

16: 16,25 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que (-)- Epicatequina) 6.683 0,2

17: 17,01 Tanino derivado del acido galico 46.040 1,3

18: 18,57 Tanino catequfnico-hidrolizable. (Mismo cromoforo que (-)- Epicatequin galato) 22.905 0,6

19: 19,07 Tanino catequfnico-hidrolizable. (Mismo cromoforo que (-)- Epigalocatequin galato) 63.283 1,7

20: 21,78 Patron (-)- Epicatequin galato 23.363 0,6

21: 33,17 Tanino catequfnico del Quebracho 2 502.689 13,7

En la Tabla 2 que sigue se muestran los compuestos identificados en el extracto tanico aislado de semilla de uva de acuerdo con el Ejemplo 2:

Pico: Tr (min.) Identificacion Area % Area/ Area total

1: 2,97 Patron Acido Galico 842.937 12,2

2: 4,39 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que (-)- Epicatequina) 11.218 0,2

3: 13,79 Tanino galico de la Tara 1 42.495 0,6

4: 16,25 Patron (-) -Epicatequina 14.799 0,2

5: 17,00 Tanino galico de la Tara 2 35.618 0,5

6: 20,87 Acido Elagico 26.598 0,4

7: 33,20 Tanino catequfnico del Quebracho 2 5.452.782 79,0

5 Es de destacar que los compuestos identificados en el extracto tanico aislado de semilla de uva tanto del Ejemplo 1 como del Ejemplo 2 incluyen una mezcla de distintos tipos de taninos que comprenden taninos hidrolizables puros, taninos condensados puros y no- taninos que incluyen acido galico.

Ademas en una realization, el extracto tanico aislado de semillas de uva comprende una 10 mezcla de taninos hidrolizables puros, taninos condensados puros, taninos de tipo catequfnico-hidrolizable y no-taninos que incluyen acido galico.

La combination de los distintos tipos de taninos y la presencia de acido galico le confieren al extracto su propiedades mejoradas comparadas con las propiedades de los extractos del estado de la tecnica. Ademas, el extracto tambien puede contener un colorante que le 15 confiere una multifuncionalidad que no se ha descrito previamente en el estado de la tecnica.

En la Tabla 3 que sigue se listan los compuestos identificados en el extracto tanico aislado

14

de orujo de uva de acuerdo con el Ejemplo 3 de referenda:

Pico: Tr (min.) Identificacion Area % Area/ Area total

1: 2,39 Tanino catequfnico del Quebracho A 619.151 13,1

2: 2,56 Tanino catequfnico del Quebracho B 921.371 19,5

3: 3,05 Tanino catequfnico del Quebracho C 58.790 1,2

4: 4,42 Tanino catequfnico. (Mismo cromoforo que Procyanidine B2) 97.276 2,1

5: 5,3 Tanino catequfnico de Mimosa 1. 91.454 1,9

6: 6,44 Tanino catequfnico -hidrolizable. 186.980 4,0

(Mismo cromoforo que (-)- Epicatechin gallate )

7: 13,09 Tanino catequfnico de Mimosa 2 14.589 0,3

8: 15,1 Tanino galico de la Tara 1 81.810 1,7

9: 16,77 Tanino catequfnico de Mimosa 3 29.581 0,6

10: 19,94 Acido elagico 45.466 1,0

11: 33,03 Tanino catequfnico del Quebracho 2 244.369 5.2

La Tabla 4 que sigue es una tabla resumen del contenido y tipos de taninos y no-taninos de los extractos obtenidos de acuerdo con los Ejemplos 1 a 3:

: Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 de referencia

Taninos: % Area/ Area total % Area/ Area total % Area/ Area total

Catequfnicos: 52,1 79,2 36,4

Hidrolizables: 2,3 1,1 1,7

Catequfnicos - Hidrolizables: 8,6 0 4,0

Total: 63,0 80,3 42,1

No Taninos: % Area/ Area total % Area/ Area total % Area sobre global

Acido galico: 16,1 12,2 0

Acido elagico: 0 0,4 1,0

Catequfnicos: 1,7 0,2 7,7

Total: 17,8 12,8 8,7

No identificados: % Area/ Area total % Area/ Area total % Area sobre global

Total: 19,2 6,9 49,2

5

El porcentaje de taninos catequfnicos obtenidos a partir de semilla de uva es en una realization casi el doble (Ejemplo 1) que en el estado de la tecnica (Ejemplo 3 de referencia) y de mas del doble (Ejemplo 2) que en el estado de la tecnica (Ejemplo 3 de referencia). El porcentaje de no-taninos que incluye acido galico es similar en los dos ejemplos 1 y 2 de 10 acuerdo con la invention mientras que este no aparece en el ejemplo 3 de referencia. Los

5

10

15

20

25

30

no-taninos a pesar de no poseer poder curtiente su presencia contribuye a mejorar la solubilidad del tanino, a aumentar la velocidad de penetracion y a separar las fibras de las pieles. Por tanto, un adecuado equilibrio entre taninos y no-taninos en el extracto aislado de semillas de uva es el responsable de las propiedades mejoradas del extracto obtenido de acuerdo con la invention. Dicho equilibrio se mantiene en el extracto obtenido en el Ejemplo 2 que ademas comprende el colorante azoico.

Barrido UV-Vis del extracto obtenido en el Ejemplo 2

El colorante utilizado de referencia fue Dark Brown CA.

El extracto obtenido de acuerdo con el Ejemplo 2 se comparo con el colorante de referencia mediante el metodo de comparacion de colorantes por barrido UV-Vis obtenido entre 350- BOO nm mediante espectroscopia UV-Vis. El grafico obtenido se representa en la Figura 4.

En dicha Figura 4 puede apreciarse un unico maximo correspondiente al colorante de

referencia Dark Brown CA en 472,85nm (------) y un maximo en el extracto obtenido de

acuerdo con el Ejemplo 2 en 352,8nm (■ ■ ■) que esta en la region UV.

Cromatograma global del extracto obtenido en el Ejemplo 2

Se procedio a realizar un nuevo analisis por HPLC del extracto obtenido en el Ejemplo 2 adquiriendo dicho cromatograma en el rango entre 200-800nm.

En el cromatograma global del extracto solo se identifico un pico de gran magnitud (1), con un espectro similar al obtenido por UV-Vis (el cual representa la absorcion global de todos los polifenoles presentes en la muestra). Vease Figura 5.

Se comprobo mediante el espectro del compuesto de Tr= 33,2 (1) que uno de los compuestos polifenolicos presentes en el extracto tanico aislado de semilla de uva presenta una absorcion en el rango visible destacada. Este hecho propicia el grado de fijacion que dicho compuesto experimenta con respecto a la piel curtida con el extracto tanico aislado de semilla de uva obtenido de acuerdo con el Ejemplo 2.

Solidez a la luz

Para determinar la solidez a la luz de los extractos obtenidos de acuerdo con la presente invencion, se realizo un ensayo comparativo de la solidez de la luz artificial segun la norma IUF 402. Vease Figura 6, donde 1 es cuero curtido con extracto de Mimosa, 2 es cuero curtido con extracto de Castano, 3 es cuero curtido con extracto de Quebracho, 4 es cuero curtido con extracto de Tara, 5 es cuero curtido con extracto de semilla de uva con

metabisulfito sodico (Ejemplo 1), 6 es cuero curtido con extracto de semilla de uva con urea (Ejemplo 2).

Los resultados del ensayo confirman que las caracterlsticas de la piel curtida con el extracto aislado de semilla de uva de acuerdo con la invencion, Ejemplos 1 y 2, con y sin colorante, 5 respectivamente, presentan estabilidad mejorada a la luz. Es sorprendente que la presencia de colorante en el extracto, vease columna 6, no interfiera en la estabilidad a la luz de la piel curtida incluso despues de transcurridas 36 horas (ultima fila). Por lo tanto, la solidez a la luz del extracto tanico aislado de semillas de uva de acuerdo con la invencion presenta solidez a la luz mejorada con los extractos del estado de la tecnica.

10 Determination de ciertas aminas aromaticas derivadas de colorantes azoicos (ISO 17234:2015) en la piel curtida utilizando el extracto tanico aislado de semilla de uva de acuerdo con el Eiemplo 2

Es de conocimiento general para un experto en la materia el cumplimiento de la norma ISO 17234-1:2015 (Second edition 2015-04-01) para determinar la presencia de ciertas aminas 15 aromaticas prohibidas en colorantes azoicos que los hace aptos o no para su uso en general.

Este ensayo analiza la presencia de determinados analitos, es decir determinadas aminas aromaticas, con un llmite de deteccion de 30mg/kg de una muestra curtida de acuerdo con dicha norma ISO 17234-1:2015. Como resultado de dicho analisis los autores de la presente 20 invencion confirman que el colorante esta exento de las aminas aromaticas prohibidas, aminas aromaticas que se recogen en la Tabla 5. A continuation, se listan las aminas aromaticas prohibidas de acuerdo con dicha norma ISO 17234-1:2015 en la Tabla 5 que sigue:

Aminas aromaticas prohibidas:: RESULTADOS

4-aminobifenil (N°-CAS: 92-67-1): No se detecta(1)

Benzidina (N°-CAS: 92-87-5): No se detecta(1)

4-clor-o-toluidina (N°-CAS: 95-69-2): No se detecta(1)

2-naftilamina (N°-CAS: 91-59-8): No se detecta(1)

o-amino azotolue (N°-CAS: 97-56-3): No se detecta(1)

5-nitro-o-toluidina (N°-CAS: 99-55-8): No se detecta(1)

4-cloranilina (N°-CAS: 106-47-8): No se detecta(1)

4-metoxi-m-fenilendiamina (N°-CAS: 615-05-4): No se detecta(1)

4,4'-diaminodifenilmeta (N°-CAS: 101-77-9): No se detecta(1)

3,3'-diclorobenzidina (N°-CAS: 91-94-1): No se detecta(1)

3,3'-dimetoxibenzidina (N°-CAS: 119-90-4): No se detecta(1)

3,3'-dimetibenzidina (N°-CAS: 119-93-7): No se detecta(1)

4,4'-metilen di-o-toluidina (N°-CAS: 838-88-0): No se detecta(1)

p-cresidina (N°-CAS: 120-71-8): No se detecta(1)

4,4'-metilen-bis-(2-cloranilina) (N°-CAS: 101-14-4): No se detecta(1)

4,4'-oxidianilina (N°-CAS: 101-80-4): No se detecta(1)

4,4'-tiodianilina (N°-CAS: 139-65-1): No se detecta(1)

o-toluidina (N°-CAS: 95-53-4): No se detecta(1)

4-metil-m-fenilendiamina (N°-CAS: 95-80-7): No se detecta(1)

2,4,5-trimetilanilina (N°-CAS: 137-17-7): No se detecta(1)

o-anisidina (N°-CAS: 90-04-0): No se detecta(1)

4-aminoazobenze (N°-CAS: 60-09-3): No se detecta(1)

2,4-xylidin (N°-CAS: 95-68-1): No se detecta(1)

2,6-xylidin (N°-CAS: 87-62-7): No se detecta(1)

(1) No se han detectado aminas aromaticas prohibidas en el colorante azoico. Lfmite de deteccion < 30mg/kg.

Caracteristicas del extracto de semillas de uva obtenido

La naturaleza de los taninos es una mezcla de tipo condensado puro (catequlnico) y de tipo hidrolizable puro (pirogalico);

5 El extracto comprende no-taninos que incluyen acido galico; se cree que su presencia es la responsable de una mejor accion antioxidante y una mejor solidez a la luz.

El extracto es soluble en medio acuoso en frlo;

Tiene aplicacion como agente curtiente para pieles;

Tiene aplicacion como agente antioxidante en alimentacion, cosmetica y farmacia;

10 Tiene aplicacion como agente colorante en curtido, alimentacion, cosmetica y farmacia;

Presenta solidez a la luz mejorada, entre el extracto de Castano 2 y el extracto de Tara 4;

El color del producto curtido es similar al obtenido con el extracto del Castano.

A pesar de que se ha hecho referencia a una realization concreta de la invention, es evidente para un experto en la materia que el procedimiento descrito es susceptible de 15 numerosas variaciones y modificaciones, y que todos los detalles mencionados pueden ser substituidos por otros tecnicamente equivalentes, sin apartarse del ambito de protection definido por las reivindicaciones adjuntas.

Claims

5

10

15

20

25

30

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para la obtencion de un extracto tanico aislado de la uva que comprende la utilization de una fuente de taninos, la preparation de una disolucion acuosa de un agente solubilizante de polifenoles y una etapa de extraction de taninos en un reactor que comprende la fuente de taninos y la disolucion acuosa a una presion y temperatura, caracterizado por el hecho de que:

- la fuente de taninos son semillas de uva,

- el agente solubilizante de polifenoles se selecciona entre urea, hidroxido sodico y un compuesto conteniendo el grupo SO3 y su concentration en la disolucion acuosa esta comprendida entre 1 y 15% en peso con respecto al peso de semillas de uva, y

- la etapa de extraccion se lleva a cabo en una autoclave a una presion comprendida entre 1 y 6 atmosferas y a una temperatura comprendida entre 80 y 160°C, y

- opcionalmente, concentracion del extracto por evaporacion para obtener el extracto tanico aislado concentrado y/o secado por atomization para obtener el extracto tanico aislado en estado solido.
2. Procedimiento segun la reivindicacion 1, donde las semillas de uva se utilizan enteras, sin triturar ni molturar.
3. Procedimiento segun la reivindicacion 1, donde el agente solubilizante de polifenoles es urea.
4. Procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la concentracion de agente solubilizante de polifenoles en la disolucion acuosa esta comprendida entre 2% y 8% en peso con respecto al peso de semillas de uva.
5. Procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la relation en peso entre semillas de uva y agua para preparar la disolucion esta comprendida entre 0,5:1 y 1:4.
6. Procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la etapa de extraccion se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 100°C y 130°C, y a una presion comprendida entre 2,5 y 3,5 atmosferas.
7. Procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde una vez

20

10

15

finalizado el procedimiento se lleva a cabo una etapa de limpieza del equipo con agua que es susceptible de ser reutilizada para la preparation de una nueva disolucion acuosa del agente solubilizante de polifenoles.
8. Extracto tanico aislado de la uva obtenido por el procedimiento definido segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde el extracto tanico aislado de semillas de uva comprende una mezcla de taninos hidrolizables puros, taninos condensados puros y no-taninos que incluyen acido galico.
9. Extracto tanico segun la reivindicacion 8, donde utilizando urea como agente solubilizante de polifenoles en el procedimiento de obtencion del extracto, el extracto tanico obtenido comprende ademas un colorante.
10. Extracto tanico segun la reivindicacion 9, donde el colorante es un colorante azoico exento de aminas aromaticas prohibidas.
11. Utilization del extracto tanico segun cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10 como agente curtiente, agente antioxidante o colorante en la industria del curtido, alimenticia, cosmetica o farmaceutica.