ES2648143T3 - Derivados de 5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina útiles como inhibidores de la beta-secretasa (BACE) - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de Fórmula (I)**Fórmula** o un tautómero o una forma estereoisómera del mismo, en el que: R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6; en el que halo es flúor, cloro o bromo, R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo C1-3, homoarilo y heteroarilo; X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, siempre que no más de dos de los mismos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihaloalquilo C1- 3, ciano, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquiloxi C1-3; L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno o alquilo C1-3; Ar es homoarilo o heteroarilo; en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquilo C1-3; el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquilo C1-3 o una sal de adición o un solvato del mismo.
Description
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DESCRIPCION
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de la 5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina como inhibidores de la beta-secretasa, también conocida como enzima de escisión amiloide de sitio beta, BACE, BACE1, Asp2 o memapsin2. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, a los procedimientos para preparar dichos compuestos y composiciones y al uso de dichos compuestos y composiciones para la prevención y el tratamiento de trastornos en los que esté implicada la beta-secretasa, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA), deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatía amiloide cerebral, demencia multiinfarto, síndrome de Down, demencia asociada a apoplejía, demencia asociada a enfermedad de Parkinson o demencia asociada a beta-amiloide.
Antecedentes de la invención
La enfermedad de Alzheimer (EA) es una enfermedad neurodegenerativa asociada al envejecimiento. Los pacientes de EA padecen deficiencias cognitivas y pérdida de memoria así como problemas de comportamiento tales como la ansiedad. Más del 90 % de los afectados por EA presentan una forma esporádica del trastorno mientras que menos del 10 % de los casos son familiares o hereditarios. En los Estados Unidos, aproximadamente 1 de cada 10 personas con 65 años presenta EA mientras que, a los 85 años, 1 de cada dos individuos padecen EA. La esperanza de vida media del diagnóstico inicial es 7-10 años y los pacientes de EA requieren cuidados intensivos en un centro de vida asistida que es muy costoso o de familiares. Con el número creciente de personas mayores en la población, la EA es una creciente preocupación médica. Los tratamientos disponibles en la actualidad para la EA simplemente tratan los síntomas de la enfermedad e incluyen inhibidores de la acetilcolinesterasa para mejorar las propiedades cognitivas, así como ansiolíticos y antipsicóticos para controlar los problemas de comportamiento asociados a esta dolencia.
El tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer se ha indicado en la patente internacional WO 2003/089434 y la patente internacional WO 2009/102468, que describen compuestos que pertenecen a la familia de los derivados de la imidazo(1, 2-a)pirazin-8-ilamina.
Las características patológicas distintivas en el cerebro de los pacientes de EA son ovillos neurofibrilares que se generan por hiperfosforilación de proteína tau y placas amiloides que se forman por agregación de péptido beta- amiloide 1-42 (Abeta 1-42). El Abeta 1-42 forma oligómeros y después fibrillas y por último placas amiloides. Se cree que los oligómeros y las fibrillas son especialmente neurotóxicos y pueden producir la mayor parte del daño neurológico asociado a la EA. Los agentes que evitan la formación de Abeta 1-42 tienen el potencial de ser agentes modificadores de la enfermedad durante el tratamiento de la EA. El Abeta 1-42 se genera de la proteína precursora amiloide (APP, por sus siglas en inglés), constituida por 770 aminoácidos. El N-terminal de Abeta 1-42 se escinde por la beta-secretasa (BACE) y después la gamma-secretasa escinde el extremo C-terminal. Además del Abeta 142, la gamma-secretasa también libera Abeta 1-40 que es el producto de escisión predominante, así como Abeta 138 y Abeta 1-43. Estas formas de Abeta también pueden agregarse para formar oligómeros y fibrillas. Así, se esperaría que los inhibidores de BACE evitaran la formación de Abeta 1-42 así como Abeta 1-40, Abeta 1-38 y Abeta 1-43 y serían potenciales agentes terapéuticos en el tratamiento de la EA.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a un compuesto de Fórmula (I):
R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6;
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo C1-3, homoarilo y heteroarilo;
o un tautómero o una forma estereoisómera del mismo, en el que:
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X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, siempre que no más de dos de los mismos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3, ciano, alquiloxi C1-3, mono-y polihalo-alquiloxi C1-3;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno o alquilo C1-3;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 o
una sal de adición o un solvato del mismo.
Es ilustrativo de la invención una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y cualquiera de los compuestos descritos en la presente memoria. Una ilustración de la invención es una composición farmacéutica preparada por mezclamiento de cualquiera de los compuestos descritos en la presente memoria y un portador farmacéuticamente aceptable. La ilustración de la invención es un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar cualquiera de los compuestos descritos en la presente memoria y un portador farmacéuticamente aceptable.
Administrar a un individuo con necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o composiciones farmacéuticas descritos en la presente memoria es útil para tratar un trastorno mediado por la enzima beta-secretasa. Dicho trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatía amiloide cerebral, demencia multiinfarto, síndrome de Down, demencia asociada a apoplejía, demencia asociada a enfermedad de Parkinson y demencia asociada a beta-amiloide, preferiblemente enfermedad de Alzheimer.
Una ejemplificación adicional de la invención son los métodos para inhibir la enzima beta-secretasa, que comprende administrar a un individuo con necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos, o las composiciones farmacéuticas, descritos en la presente memoria.
Otro ejemplo de la invención es cualquiera de los compuestos descritos en la presente memoria para uso en el tratamiento: (a) enfermedad de Alzheimer, (b) deterioro cognitivo leve, (c) senilidad, (d) demencia, (e) demencia con cuerpos de Lewy, (f) síndrome de Down, (g) demencia asociada a apoplejía, (h) demencia asociada a enfermedad de Parkinson y (i) demencia asociada a beta-amiloide, en un individuo con necesidad de los mismos.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a compuestos de formula (I) como se define más adelante y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos de fórmula (I) son inhibidores de la enzima beta- secretasa (también conocida como enzima de escisión de sitio beta, BACE, BACE1, Asp2 o memapsin 2) y son útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia asociada a apoplejía, demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Down, demencia asociada a enfermedad de Parkinson y demencia asociada a beta-amiloide, preferiblemente enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo leve o demencia, más preferiblemente enfermedad de Alzheimer.
En una realización de la presente invención, R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6;
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo C1-3, homoarilo y heteroarilo;
X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, siempre que no más de dos de los mismos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3, ciano, alquiloxi C1-3, mono-y polihalo-alquiloxi C1-3;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno o alquilo C1-3;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo:
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pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 o
una sal de adición o un solvato del mismo.
En una realización de la presente invención, R1 y R2 se seleccionan independientemente de hidrógeno y alquilo C1-3; R3 es alquilo C1-3;
X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) en la que cada R4 se selecciona de hidrógeno y halo;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3 y alquiloxi C1-3;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piridazilo y pirazilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3 y alquiloxi
C1-3 o
una sal de adición o un solvato del mismo.
En otra realización de la presente invención, R1 y R2 son hidrógeno; R3 es metilo;
X1, X2, X3, X4 son CHo CF;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en el que homoarilo es fenilo sustituido con cloro;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirazilo, piridazilo y pirimidilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en cloro, flúor, ciano, metilo y metoxi o una sal de adición o un solvato del mismo.
En otra realización, R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, mono-, di- y trifluorometilo, cloro, bromo y ciano;
R3 es alquilo C1-3 o mono-, di- y trifluorometilo;
X1 y X3 son independientemente CH o CF; X2 y X4 son CH;
L es -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en el que homoarilo es fenilo sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3 y alquiloxi C1-3;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piridazilo, pirazolilo, oxazolilo e isotiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono-, di-y trifluorometilo o
una sal de adición o un solvato del mismo.
En otra realización, R1 es hidrógeno, mono-, di- o trifluorometilo, cloro, bromo o ciano;
R2 es hidrógeno, cloro, ciano, mono-, di- o trifluorometilo;
R3 es metilo, mono- di- o trifluorometilo;
X1 es CF; X2, X3, X4 son CH;
L es -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;
Ar es heteroarilo;
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en el que el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirazilo y pirazolilo, cada uno sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en cloro, flúor, ciano, metilo, metoxi, etoxi, mono-, di- y trifluorometilo o
una sal de adición o un solvato del mismo.
En otra realización, R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, mono-, di- y trifluorometilo, cloro, bromo y ciano;
R3 es alquilo C1-3 o mono-, di- y trifluorometilo;
X1 y X3 son independientemente CH o CF; X2 y X4 son CH;
L es -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;
Ar es heteroarilo;
en el que el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en 5-cloro-2-piridilo, 5-fluoro-2-piridilo, 5-ciano-2- piridilo, 3,5-dicloro-2-piridilo, 3-fluoro-5-cloro-2-piridilo, 3-fluoro-5-ciano-2-piridilo, 3-cloro-5-ciano-2-piridilo, 5-metoxi- 2-pirazilo, 5-etoxi-2-pirazilo, 1 -difluorometil-3-pirazolilo, 2-metil-4-oxazolilo, 2,5-dimetil-4-oxazolilo, 2-metil-5- trifluorometil-4-oxazolilo, 3-isotiazolilo o una sal de adición o un solvato del mismo.
En otra realización, el átomo de carbono sustituido con R3 tiene la configuración R.
Definiciones
"Halo" indica flúor, cloro y bromo; "alquilo C1-3" indica un grupo alquilo saturado, lineal o ramificado, con 1, 2 o 3 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, 1 -propilo y 2-propilo; "alquiloxi C1-3" indica un radical éter en el que alquilo C1-3 es como se definió anteriormente; "mono- y polihaloalquilo C1-3" indica alquilo C1-3 como se definió anteriormente, sustituido con 1, 2, 3 o cuando sea posible con más átomos de halógeno como se negó anteriormente; "mono- y polihaloalquiloxi C1-3" indica un radical éter en el que mono- y polihaloalquilo C1-3 es como se definió anteriormente;
"cicloalquilo C3-6" indica ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo;
"cicloalcanodiílo C3-6" indica un radical bivalente tal como ciclopropanodiílo, ciclobutanodiílo, ciclopentanodiílo y ciclohexanodiílo.
El término "individuo" como se usa en la presente memoria, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, lo más preferiblemente un ser humano, que es o ha sido el objeto de tratamiento, observación o experimento.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" como se usa en la presente memoria, significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema de tejido, animal o ser humano que está siendo buscado por un investigador, veterinario, médico u otro terapeuta, que incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o el trastorno que se está tratando.
Como se usa en la presente memoria, se desea que el término "composición" incluya un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificada, así como cualquier producto que resulte, directamente o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
Se apreciará que algunos de los compuestos según la fórmula (I) y sus sales, hidratos y solvatos de adición pueden contener uno o más centros quirales y existir como formas estereoisómeras.
Anteriormente y de ahora en adelante, el término "compuesto de fórmula (I)" se destina a incluir las sales de adición, los solvatos y los estereoisómeras de los mismos.
Los términos "estereoisómeros" o "formas estereoquímicamente isómeras", anteriormente o de ahora en adelante, se usan indistintamente.
La invención incluye todos los estereoisómeros del compuesto de Fórmula (I) como un estereoisómero puro o como una mezcla de dos o más estereoisómeros.
Los enantiómeros son estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es un racemato o una mezcla racémica. Los diastereómeros (o diastereoisómeros) son estereoisómeros que no son enantiómeros, es decir, no se relacionan como imágenes especulares. Si un compuesto contiene un doble enlace, los sustituyentes pueden estar en la configuración E o la Z. Si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuración cis o trans. Por lo tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereómeros, racematos, isómeros E, isómeros Z, isómeros cis, isómeros trans y mezclas de los mismos.
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La configuración absoluta se especifica de acuerdo con el sistema Cahn-Ingold-Prelog. La configuración en un átomo asimétrico se especifica por R o S.
Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta no es conocida pueden designarse por (+) o (-) dependiendo de la dirección en la que roten el plano de la luz polarizada.
Cuando se identifica un estereoisómero específico, esto significa que dicho estereoisómero es sustancialmente libre, es decir, está asociado a menos del 50%, preferiblemente menos del 20%, más preferiblemente menos del 10 %, incluso más preferiblemente menos del 5 %, en particular menos del 2 % y lo más preferiblemente menos del 1 %, de los otros isómeros. Así, cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica por ejemplo como (R), esto significa que el compuesto está sustancialmente exento del isómero (S); cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica por ejemplo como E, esto significa que el compuesto está sustancialmente exento del isómero Z; cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica por ejemplo como cis, esto significa que el compuesto está sustancialmente exento del isómero trans.
Los compuestos de Fórmula (I) coexisten en un equilibrio dinámico con los tautómeros de Fórmula (I-a).
Además, algunas de las formas cristalinas para los compuestos de la presente invención pueden existir como formas polimorfas y como tales se pretende que estén incluidas en la presente invención. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden formar solvatos (es decir, hidratos) o disolventes orgánicos comunes y se desea también que estén incluidos dichos solvatos dentro del alcance de esta invención.
Para uso en medicina, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a “sales farmacéuticamente aceptables” no tóxicas. Otras sales pueden ser útiles, sin embargo, en la preparación de compuestos según esta invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos incluyen sales de adición de ácido que pueden formarse, por ejemplo, mezclando una disolución del compuesto con una disolución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, en el caso de que los compuestos de la invención soporten un resto ácido, las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los mismos pueden incluir sales de metal alcalino, por ejemplo, sales de sodio o de potasio; sales de metal alcalino-térreo, por ejemplo, sales de calcio o magnesio y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados, por ejemplo, sales de amonio cuaternario.
Los ácidos representativos que pueden usarse en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, lo siguiente: ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)-canfórico, ácido canforsulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxi-etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido D-glucónico, ácido D- glucorónico, ácido L-glutámico, ácido beta-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hippúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido (+)-L- láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malónico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido naftaleno-1,5- disulfónico, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L- piroglutámico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tánico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico, ácido trifluorometilsulfónico y ácido undecilénico. Las bases representativas que pueden usarse en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: amoníaco, L- arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de calcio, colina, dimetiletanolamina, dietanolamina, dietilamina, 2- (dietilamino)-etanol, etanolamina, etilendiamina, W-metil-glucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, L-lisina, hidróxido de magnesio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potasio, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaria, hidróxido de sodio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de cinc.
Los nombres de los compuestos de la presente invención se generaron de acuerdo con las reglas de nomenclatura según Chemical Abstracts Service (CAS) usando programas informáticos de Advanced Chemical Development, Inc.,
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(ACD/Nombre de producto versión 10.01; Build 15494, 1 de diciembre de 2006) o según las reglas de nomenclatura conforme a la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC, por sus siglas en inglés) usando programas informáticos de Advanced Chemical Development, Inc., (ACD/Nombre de producto versión 10.01.0.14105, octubre de 2006). En el caso de formas tautómeras, se generó el nombre de la forma tautómera representada de la estructura. La otra forma tautómera no representada también está incluida dentro del alcance de la presente invención.
A. Preparación de los compuestos finales Procedimiento experimental 1
Los compuestos finales según la Fórmula (I), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (II) con una fuente apropiada de amoníaco tal como, por ejemplo, cloruro de amonio o amoníaco acuoso, según el esquema de reacción (1), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, agua o metanol, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 60 a 90 °C, por ejemplo durante 6 a 100 horas. En el esquema de reacción (1), todas las variables se definen como en la Fórmula (I).
Los compuestos finales según la Fórmula (I-a) en la que L es -N(R5)CO-, pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de la Fórmula (III-a) con un compuesto intermedio de Fórmula (IV) según el esquema de reacción (2), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, N,N- dimetilformamida, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K3PO4, un catalizador de cobre tal como, por ejemplo, CuI y una diamina tal como por ejemplo (1R, 2R)-(-)-1,2-diaminociclohexano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 180 °C, por ejemplo, durante 135 minutos con radiación de microondas. En el esquema de reacción (2), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y W es halógeno.
Procedimiento experimental 3
Adicionalmente, los compuestos finales según la Fórmula (I-a), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (III-b) con un compuesto intermedio de Fórmula (V) según el esquema de reacción (3), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano o metanol, opcionalmente en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, N, N- diisopropiletilamina y en presencia de un agente de condensación tal como, por ejemplo, hexafluorofosfato de 2-(1H- 7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio [HATU, CAS 148893-10-1] o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- triazin-2-il)-4-metilmorfolino [DMTMM, CAS 3945-69-5], en condiciones térmicas tal como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo durante 2 a 18 horas. En el esquema de reacción (3), todas las variables se
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definen como en la Fórmula (I).
Procedimiento experimental 4
Adicionalmente, los compuestos finales según la Fórmula (I-a), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (III-b) con un compuesto intermedio de Fórmula (VI) según el esquema de reacción (4), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, piridina, en condiciones térmicas tal como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo durante 2 horas. En el esquema de reacción (4), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) e Y es halógeno.
Los compuestos finales según la Fórmula (I-b) en la que L es un enlace, pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (III-a) con un compuesto intermedio de Fórmula (VII) según el esquema de reacción (5), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, mezclas de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,4-dioxano/etanol, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K2CO3, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) [CAS 14221-01-3] en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 80 °C, por ejemplo durante 20 horas o por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 150 °C, durante 10 minutos a 30 minutos con radiación de microondas. En el esquema de reacción (5), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y W es halógeno. R6 y R7 pueden ser hidrógeno o alquilo o se pueden tomar juntos para formar por ejemplo un radical bivalente de fórmula -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- o -C(CH3)2C(Ch3)2-.
Una serie de compuestos intermedios y materiales de partida en las preparaciones anteriores son compuestos conocidos que pueden preparase según metodologías conocidas en la técnica para preparar dichos compuestos o similares y algunos compuestos intermedios son nuevos. Se describirá una serie de métodos de preparación de
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ahora en adelante con más detalle.
Procedimiento experimental 6
Adicionalmente, los compuestos finales según la Fórmula (I-a) en la que R1 es CN, denominado por la presente un compuesto de Fórmula (I-d), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula (I-c), en el que Y es Br o I con cianuro de cinc y cianuro de sodio según el esquema de reacción (6), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, una mezcla de dimetilformamida y tolueno, en presencia de un reactivo de acoplamiento adecuado, tal como, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0), en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 110 °C, por ejemplo durante 16 a 21 horas. En el esquema de reacción (6), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, grupo ferc-butoxicarbonilo.
Procedimiento experimental 7
Adicionalmente, los compuestos finales según la Fórmula (I-a), pueden prepararse por desprotección de un compuesto intermedio de Fórmula (I-e) con un ácido apropiado tal como, por ejemplo, ácido trifluoroacético, según el esquema de reacción (7), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo durante 30 minutos. En el esquema de reacción (7), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, grupo ferc-butoxicarbonilo.
B. Preparación de los compuestos intermedios
Procedimiento experimental 8
Los compuestos intermedios según la Fórmula (II) pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (VIII) con un reactivo donador de azufre adecuado para la síntesis de tioamidas tales como, por ejemplo, pentasulfuro de fósforo o 2,4-disulfuro de 2,4-bis-(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano [reactivo de Lawesson, CAS 19172-47-5] según el esquema de reacción (8), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción, tal como por ejemplo, tetrahidrofurano o tolueno, opcionalmente en presencia de una base adecuada tal como, por ejemplo, piridina, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 90 °C, por ejemplo durante 18 horas. En el esquema de reacción (6), todas las variables se definen como en la Fórmula (I).
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Esquema de reacción 8
(II)
Procedimiento experimental 9
Los compuestos intermedios según la Fórmula (VIII) en la que L es un enlace, denominado por la presente un compuesto intermedio de fórmula (VIII-a) pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de 5 Fórmula (IX-a) con un compuesto intermedio de Fórmula (VII) según el esquema de reacción (9), una reacción que se realiza en una mezcla adecuada de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,4-dioxano/agua, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, Na2CO3 acuoso, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) [CAS 14221-01-3] en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 80 °C, por ejemplo durante 20 horas o por ejemplo, calentando la mezcla de 10 reacción a 150 °C, por ejemplo durante 15 a 30 minutos con radiación de microondas. En el esquema de reacción (7), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y W es halógeno. R6 y R7 pueden ser hidrógeno o alquilo o se pueden tomar juntos para formar por ejemplo un radical bivalente de fórmula -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- o - C(CH3)2C(CH3)2-.
15 Procedimiento experimental 10
Los compuestos intermedios según la Fórmula (III-b) pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (III-a) siguiendo procedimientos de acoplamiento de tipo Buchwald-Hartwig conocidos en la técnica según el esquema de reacción (10). Dicho acoplamiento puede llevarse a cabo por tratamiento de compuestos intermedios de Fórmula (III-a) con un compuesto intermedio de Fórmula (X-a) en un 20 disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, etanol o mezclas de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,2-dimetoxietano/agua/etanol, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K3PO4 o Cs2CO3 acuoso , un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]- dicloropaladio (II) [CAS 72287-26-4] o diacetato de frans-bis(diciclohexilamina)paladio [DAPCy, CAS 628339-96-8] en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 80 °C, por ejemplo durante 20 25 horas o por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 130 °C, por ejemplo durante 10 minutos con radiación de microondas. En el esquema de reacción (8), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y W es halógeno. R5 es hidrógeno o alquilo C1-3.
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Procedimiento experimental 11
Adicionalmente, los compuestos intermedios según la Fórmula (III-b) en la que R5 es hidrógeno, pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (III-c) siguiendo los procedimientos de reducción nitro a amino conocidos en la técnica según el esquema de reacción (11). Dicha reducción puede llevarse a cabo convenientemente siguiendo los procedimientos de hidrogenación catalítica conocidos en la técnica. Por ejemplo, dicha reducción puede llevarse a cabo por agitación de los agentes reaccionantes en una atmósfera de hidrógeno y en presencia de un catalizador apropiado tal como, por ejemplo, catalizadores de paladio sobre carbón, platino sobre carbón y níquel Raney. Son disolventes adecuados, por ejemplo, agua, alcanoles, por ejemplo, metanol y etanol, ésteres, por ejemplo, acetato de etilo. Para mejorar la velocidad de dicha reacción de reducción puede ser ventajoso mejorar la temperatura y/o la presión de la mezcla de reacción. Puede evitarse la hidrogenación adicional no deseada de ciertos grupos funcionales en los agentes reaccionantes y los productos de reacción por adición de un veneno de catalizador tal como, por ejemplo, tiofeno, a la mezcla de reacción. En el esquema de reacción (11), todas las variables se definen como en la Fórmula (I).
Procedimiento experimental 12
Los compuestos intermedios según la Fórmula (III-b) pueden prepararse a partir del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (III-a) siguiendo procedimientos de acoplamiento de tipo Buchwald-Hartwig conocidos en la técnica entre un compuesto intermedio de fórmula (III-a) y (X-b) para proporcionar un compuesto intermedio de Fórmula (III-d), seguido por hidrolisis de (III-d) para proporcionar (III-a) según el esquema de reacción (12). Dicho acoplamiento de Buchwald-Hartwig puede llevarse a cabo por tratamiento de compuestos intermedios de Fórmula (III-a) con un compuesto intermedio de Fórmula (X-b) en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, tolueno, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, terc-butóxido de sodio, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) [Pd2(dba)3, CAS 51364-51-3], un ligando fosfino tal como, por ejemplo, racémico-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo [rac-BINAP, CAS 98327-87-8] en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 90 °C, por ejemplo durante 18 horas. La hidrólisis de (III-d) a (III-a) puede llevarse a cabo en condiciones ácidas, por ejemplo, por tratamiento con HCl en 2-propanol a temperatura ambiente durante 1-4 horas. En el esquema de reacción (12), todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y W es halógeno. R5 es difenilmetilideno.
Procedimiento experimental 13
Los compuestos intermedios según la Fórmula (IlI-b) pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (III-a) según el esquema de reacción (13), una reacción que se realiza en un 5 disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, dimetilsulfóxido, en presencia de azida de sodio [CAS 26628-22-8], una sal de cobre adecuada tal como, por ejemplo, yoduro de cobre (I) [CAS 7681-65-4], una base adecuada tal como, por ejemplo, Na2CO3 y un ligando diamina adecuado tal como, por ejemplo, N,N'- dimetiletilendiamina [CAS 110-70-3] en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 110 °C, por ejemplo durante 3 a 6 horas. En el esquema de reacción (13), todas las variables se definen 10 como en la Fórmula (I) y W es halógeno.
Los compuestos intermedios de Fórmula (III-a) y (III-c) pueden prepararse en general siguiendo las etapas de reacción mostradas en los esquemas de reacción (14) y (15) a continuación.
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Esquema de reacción 14
A: Conversión de tioamida en amidina B: Conversión de amida en tioamida (tionación)
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C y H: Ciclación
D: Eliminación de grupos N-protectores Z1.
E: Alquilación
Los derivados de amidina en el esquema de reacción (14) anterior pueden prepararse de manera conveniente a partir de los correspondientes derivados de tioamida siguiendo procedimientos de conversión de tioamida en amidina conocidos en la técnica (etapa A de reacción). Dicha conversión puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de las tioamidas mencionadas con una fuente de amoníaco tal como, por ejemplo, cloruro de amonio o amoníaco acuoso, en un disolvente inerte de reacción adecuado tal como, por ejemplo, agua o metanol, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 60 a 90 °C, por ejemplo, durante 6 a 100 horas.
Alternativamente, los derivados de amidina en el esquema de reacción (14) anterior pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XIII-d) siguiendo procedimientos de ciclación conocidos en la técnica (etapa H de reacción). Dicha ciclación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de compuestos intermedios de Fórmula (XIII-d) con un ácido adecuado, tales como ácido clorhídrico 4 M en dioxano o TFA en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción entre 25°C y 70 °C, por ejemplo, durante 2 a 5 horas.
Los derivados de tioamida en el esquema de reacción (14) anterior pueden prepararse a partir de derivados de amida siguiendo procedimientos de tionación conocidos en la técnica (etapa B de reacción). Dicha conversión puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de esas amidas con un agente de tionación tal como, por ejemplo, pentasulfuro de fósforo o 2,4-disulfuro de 2,4-bis-(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano [reactivo de Lawesson, CAS 19172-47-5], en un disolvente inerte de reacción tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano, en presencia de una base adecuada como piridina en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 50 a 100 °C, por ejemplo durante 24 horas.
Los derivados de amida de Fórmula (IX-a) y (IX-c) en el esquema de reacción (14) anterior pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XII-a) y (XII-c) siguiendo procedimientos de ciclación conocidos en la técnica (etapa C de reacción). Dicha ciclación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de compuestos intermedios de Fórmula (XII-a) y (XII-c) con una base adecuada, tal como metóxido de sodio o carbonato de potasio, en un disolvente de reacción adecuado, tal como por ejemplo metanol, a -80 °C a 100 °C, preferiblemente -15 °C a 60 °C durante 30 minutos a 100 horas, preferiblemente 1 hora a 24 horas. Alternativamente, pueden usarse condiciones estándar para la formación de amida a partir de ésteres, por tratamiento de compuestos intermedios de Fórmula (XII-a) y (XII-c) con un ácido de Lewis, tal como por ejemplo, trimetilaluminio en un disolvente inerte adecuado, tal como por ejemplo tetrahidrofurano en condiciones térmicas, tales como por ejemplo, calentando la reacción a 120 °C durante 30 minutos, con radiación de microondas.
Los compuestos intermedios de Fórmula (XII-a) y (XII-c) en el esquema de reacción (14) anterior pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XIII-a) y (XIII-c) por eliminación del grupo protector Z1 que se lleva a cabo según procedimientos conocidos en la técnica.
E: Alquilación
F: Oxidación de oxatiazolidina G: Formación de oxatiazolidina
5 Los compuestos intermedios según la Fórmula (XlII-a), (XMI-c) y (XlII-d) en los esquemas de reacción (14) y (15) anteriores pueden prepararse a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XV-a) y (XV-c), en las que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el grupo ferc-butoxicarbonilo, siguiendo procedimientos de alquilación conocidos en la técnica (etapa E de reacción). Dicha alquilación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de XIV o XVIII con los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XV- 10 a) y (XV-c) con una base adecuada tal como, por ejemplo, hidruro de sodio, carbonato de cesio, carbonato de potasio o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-undec-7-eno, en un disolvente inerte adecuado tal como, por ejemplo, N,N- dimetilformamida, acetonitrilo o tetrahidrofurano, a baja temperatura tal como, por ejemplo, 0 °C durante 30 minutos y después a una temperatura tal como, por ejemplo, 60 °C a 100 °C durante 24 horas a 100 horas o por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 130 °C, por ejemplo durante 30 minutos a 45 minutos con radiación de 15 microondas.
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Los compuestos intermedios según la Fórmula (XV-a) y (XV-c) en el esquema de reacción (15) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos intermedios de Fórmula (XVI-a) y (XVI-c) siguiendo procedimientos de oxidación conocidos en la técnica (etapa F de reacción). Dicha oxidación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XVI-a) y (XVI-c) con un agente oxidante tal como, por ejemplo, peryodato de sodio en un disolvente inerte adecuado tal como, por ejemplo, acetonitrilo/agua, en presencia de cloruro de rutenio (III) [CAS: 10049-08-8] a una temperatura tal como, por ejemplo, 25 °C, por ejemplo, durante 2 horas.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XVI-a) y (XVI-c) en el esquema de reacción (15) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos intermedios de Fórmula (XVII-a) y (XVII-c) siguiendo procedimientos de formación de sulfamidato conocidos en la técnica (etapa G de reacción). Dicha transformación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento de los correspondientes compuestos intermedios de Fórmula (XVII-a) y (XVII-c) con cloruro de tionilo, en presencia de una base tal como, por ejemplo, piridina, en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, acetonitrilo, a baja temperatura tal como, por ejemplo, -40 °C, por ejemplo durante 30 minutos y después a una temperatura tal como, por ejemplo, 25 °C, por ejemplo durante 24 a 72 horas.
Los compuestos intermedios de Fórmula (XVII-a) y (XVII-c), en la que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el grupo ferc-butoxicarbonilo, pueden prepararse en general siguiendo procedimientos de tipo Strecker conocidos en la técnica descritos en la bibliografía.
Procedimiento experimental 16
Los compuestos intermedios de Fórmula (XVIII) pueden prepararse en general siguiendo las etapas de reacción mostradas en el esquema de reacción (16) a continuación.
desproteccion
acido
\ v
(XV1I1)
NHiOH
protección
XX
XXII
Esquema de reacción 16
Los cianoderivados de fórmula (XVIII) en el esquema de reacción (16) anterior pueden prepararse de manera conveniente por desprotección de los compuestos intermedios de Fórmula (XIX) (en la que Z2 es un grupo protector de imidazoles tal como, por ejemplo, 2-(trimetilsilil)etoximetilo) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha desprotección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con fluoruro de tetrabutilamonio, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 65 °C, por ejemplo, durante 4 horas.
Los compuestos intermedios según la fórmula (XIX) en el esquema de reacción (16) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos intermedios de fórmula (XX) con un ácido adecuado tal como, por ejemplo, anhídrido acético, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 140 °C por ejemplo durante 6 horas.
Los compuestos intermedios según la fórmula (XX) en el esquema de reacción (16) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos intermedios de fórmula (XXI) con hidrocloruro de hidroxilamina, en presencia de un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, agua destilada, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 70 °C por ejemplo durante 1 hora.
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Los compuestos intermedios según la fórmula (XXI) en el esquema de reacción (16) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos intermedios de fórmula (XXII) siguiendo procedimientos de carbonilación conocidos en la técnica. Dicha carbonilación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (XXII) con dimetilformamida, en presencia de una base tal como, por ejemplo, butillitio o litiodiisopropilamida, en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, enfriando la mezcla de reacción a -78 °C por ejemplo durante 1 a 2 horas.
Los compuestos intermedios según la fórmula (XXII) en el esquema de reacción (16) anterior pueden prepararse por protección de los compuestos intermedios de fórmula (XXIII). Dicha protección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (XXIII) con cloruro de 2- (trimetilsilil)etoximetilo en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C por ejemplo durante 30 minutos.
Los compuestos intermedios según la fórmula (XIII) en el esquema de reacción anterior (16) pueden obtenerse comercialmente.
Procedimiento experimental 17
Los compuestos intermedios de Fórmula (III-b), en la que R1A es H o Cl y R2 es CN, denominado por la presente como compuesto intermedio de fórmula (III-e), que pueden prepararse en general siguiendo las etapas de reacción mostradas en el esquema de reacción (17) a continuación.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (III-e) en el esquema de reacción (17) anterior pueden prepararse de manera conveniente por desprotección de los compuestos intermedios de Fórmula (XXIV) (en la que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el ferc-butoxicarbonilo) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha desprotección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con ácido trifluoroacético, en presencia de un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo, durante 30 minutos.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XXIV), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (XXV) con cianuro de cinc y cinc según el esquema de reacción (17), una reacción que se realiza en presencia de un reactivo de acoplamiento adecuado, tal como, por ejemplo, tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0), en presencia de un ligando adecuado tal como, por ejemplo, 1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno, en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, dimetilacetamida, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 150 °C, por ejemplo durante 30 minutos con radiación de microondas.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XXV) en el esquema de reacción (17) anterior pueden prepararse de
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manera conveniente por yodación de los compuestos intermedios de Fórmula (III-f) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha halogenación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con yodo, en presencia de una base adecuada tal como, por ejemplo, /V-butillitio en un disolvente inerte de reacción, tal como, por ejemplo tetrahidrofurano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, enfriando la mezcla de reacción a -78 °C, por ejemplo durante 10 minutos.
Los compuestos intermedios según la fórmula (III-f) en el esquema de reacción (17) anterior pueden prepararse por protección de los compuestos intermedios de fórmula (XXVI). Dicha protección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (XXVI) con dicarbonato de di-ferc-butilo en presencia de una base tal como, por ejemplo W,A/-diisopropiletilamina en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C por ejemplo durante 24 horas.
En el esquema de reacción (17), R1A es H, Cl y todas las demás variables se definen como en la Fórmula (I). Procedimiento experimental 18
Los compuestos intermedios de Fórmula (III-b), en la que R1 es H, R2 es CF2, denominado por la presente como compuesto intermedio de fórmula (III-g) pueden prepararse en general siguiendo las etapas de reacción mostradas en el esquema de reacción (18) a continuación.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (III-g) en el esquema de reacción (18) anterior pueden prepararse de manera conveniente por desprotección de los compuestos intermedios de Fórmula (XXVII) (en la que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el ferc-butoxicarbonilo) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha desprotección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con ácido trifluoroacético, en presencia de un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo durante 30 minutos.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XXVII), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (XXVIII) con trifluoruro de dietilaminoazufre según el esquema de reacción (18), en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C por ejemplo durante 16 horas.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XXVIII) en el esquema de reacción (18) anterior pueden prepararse de manera conveniente por oxidación de los compuestos intermedios de Fórmula (XXIX) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha oxidación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con dióxido de manganeso, en un disolvente inerte de reacción, tal como, por ejemplo diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 25 °C por ejemplo durante 2 horas.
Los compuestos intermedios según la Fórmula (XXIX) en el esquema de reacción (18) anterior pueden prepararse de manera conveniente por hidroximetilación de los compuestos intermedios de Fórmula (XXX) siguiendo procedimientos conocidos en la técnica. Dicha hidroximetilación puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento con paraformaldehído, en presencia de una base adecuada tal como, por ejemplo V-butillitio en un
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disolvente inerte de reacción, tal como, por ejemplo tetrahidrofurano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, enfriando la mezcla de reacción a -78 °C, por ejemplo durante 10 minutos.
Los compuestos intermedios según la fórmula (XXX) en el esquema de reacción (18) anterior pueden prepararse por protección de los compuestos intermedios de fórmula (III-h). Dicha protección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (III-h) con dicarbonato de di-ferc-butilo en presencia de una base tal como, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C por ejemplo durante 24 horas.
En el esquema de reacción (18), Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el ferc-butoxicarbonilo y todas las demás variables se definen como en la Fórmula (I).
Procedimiento experimental 19
Los compuestos intermedios de Fórmula (I-e) pueden prepararse en general siguiendo las etapas de reacción mostradas en el esquema de reacción (19) a continuación.
Esquema de reacción 19
Los compuestos intermedios según la fórmula (XXXI) en el esquema de reacción (19) anterior pueden prepararse por protección de los compuestos intermedios de fórmula (III-b). Dicha protección puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (III-b) con dicarbonato de di-ferc-butilo en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo, durante 24 horas.
Los compuestos intermedios según la fórmula (I-e) en el esquema de reacción (19) anterior pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (XXXI) con un compuesto intermedio de Fórmula (V) según el esquema de reacción (19), una reacción que se realiza en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano o metanol, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, N,N- diisopropiletilamina, en presencia de un agente de condensación tal como por ejemplo hexafluorofosfato de 2-(1H-7- azabenzotriazol-1-il)-N,N,N,,N,-tetrametiluronio [HATU, CAS 148893-10-1] o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin- 2-il)-4-metilmorfolino [DMTMM, CAS 3945-69-5], en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, agitando la mezcla de reacción a 25 °C, por ejemplo durante 2 a 18 horas. En el esquema de reacción (19), Z1 es un grupo N- protector adecuado y todas las demás variables se definen como en la Fórmula (I).
Procedimiento experimental 20
El compuesto intermedio de Fórmula (III-b), en la que R1 es Cl, R2 es Cl, denominado por la presente un compuesto intermedio de fórmula (III-j), pueden prepararse en general siguiendo la etapa de reacción mostrada en el esquema de reacción (20) a continuación.
m-j mi
Esquema de reacción 20
Los compuestos intermedios según la fórmula (III-j) en el esquema de reacción (20) anterior pueden prepararse por
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cloración de los compuestos intermedios de fórmula (IlI-i). Dicha cloración puede llevarse a cabo convenientemente por tratamiento del correspondiente compuesto intermedio de Fórmula (III-i) con N-clorosuccinimida en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, ácido acético, en condiciones térmicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reacción a 80 °C por ejemplo durante 16 horas. En el esquema de reacción (20), todas las variables se definen como en la Fórmula (I).
Farmacología
Los compuestos de la presente invención y las composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos inhiben BACE y por lo tanto pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer (EA), deterioro cognitivo leve (DCL), senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatía amiloide cerebral, demencia multiinfarto, síndrome de Down, demencia asociada a enfermedad de Parkinson y demencia asociada a beta-amiloide.
La invención se refiere a un compuesto según la Fórmula (I) general, una forma estereoisómera del mismo o una sal de adición de ácido o base farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo, para uso como medicamento.
La invención también se refiere a un compuesto según la Fórmula (I) general, una forma estereoisómera del mismo o a la sal de adición de ácido o base farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo, para uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades o trastornos seleccionados del grupo que consiste en EA, DCL, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatía amiloide cerebral, demencia multiinfarto, síndrome de Down, demencia asociada a enfermedad de Parkinson y demencia asociada a beta-amiloide.
La invención también se refiere al uso de un compuesto según la Fórmula (I) general, una forma estereoisómera del mismo o una sal de adición de ácido o base farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente.
El compuesto de Fórmula (I) es útil para tratar a animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos, que padecen de, o para prevenir, en animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos, que padezcan una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente. Esto puede conseguirse por la administración, es decir, la administración sistémica o tópica, preferiblemente administración oral, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), una forma estereoisómera del mismo, una sal de adición o solvato de la misma, farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente, incluyendo un ser humano.
También puede considerarse administrar el principio activo en un régimen de entre una y cuatro tomas al día. En este caso, los compuestos según la invención se formulan preferiblemente previamente a la administración. Como se describe en la presente memoria a continuación, se preparan formulaciones farmacéuticas adecuadas por procedimientos conocidos usando ingredientes conocidos y fácilmente disponibles.
Los compuestos de la presente invención, que pueden ser adecuados para tratar o prevenir la enfermedad de Alzheimer o los síntomas de la misma, pueden administrarse solos o en asociación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. El tratamiento asociado incluye la administración de una formulación de dosis farmacéutica única que contiene un compuesto de Fórmula (I) y uno o más agentes terapéuticos adicionales, así como la administración del compuesto de Fórmula (I) y cada agente terapéutico adicional en su propia formulación de dosis farmacéutica separada. Por ejemplo, puede administrarse al paciente un compuesto de Fórmula (I) y un agente terapéutico juntos en una composición de dosis oral única tal como un comprimido o cápsula o puede administrarse cada agente en formulaciones de dosis oral separada.
Composiciones farmacéuticas
La presente invención también proporciona composiciones para prevenir o tratar enfermedades en las que es beneficiosa la inhibición de la beta-secretasa, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA), deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Down, demencia asociada a apoplejía, demencia asociada a enfermedad de Parkinson y demencia asociada a beta-amiloide. Comprendiendo dichas composiciones una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según la fórmula (I) y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Aunque es posible administrar solo el principio activo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica. De acuerdo con esto, la presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la presente invención, junto con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. El portador o diluyente debe ser “aceptable” en el sentido de que sea compatible con los otros ingredientes de la composición y no sea perjudicial para los receptores de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden prepararse por cualquier método conocido en la técnica de farmacia. Una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto particular, en forma de base o forma de sal de adición, como principio activo se combina en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, que puede tomar una variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para su administración. Es
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deseable que estas composiciones farmacéuticas estén en forma de dosis unitaria adecuada, preferiblemente, para administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral o administración tópica tal como por inhalación, un aerosol nasal, colirios o mediante una crema, gel o champú. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma farmacéutica oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites y alcoholes en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y disoluciones o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes y agentes disgregantes en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma de dosis unitaria oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el portador comprenderá normalmente agua estéril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Pueden prepararse disoluciones inyectables, por ejemplo, en las que el portador comprende disolución salina, disolución de glucosa o una mezcla de disolución salina y de glucosa. También pueden preparar suspensiones inyectables en cuyo caso pueden emplearse portadores líquidos o agentes de suspensión apropiados. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el portador comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones minoritarias, aditivos que no producen efectos perjudiciales significativos en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser útiles en la preparación de las composiciones deseadas. Estas composiciones pueden administrarse de diversas maneras, por ejemplo, como un parche transdérmico, como una spot-on o como una pomada.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas en forma de dosis unitaria para facilidad de administración y uniformidad de la dosis. La forma de dosis unitaria como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones en la presente memoria se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de principio activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Los ejemplos de formas de dosis unitarias son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, sobrecitos de polvos, obleas, disoluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y múltiplos segregados de los mismos.
La dosis exacta y la frecuencia de administración depende del compuesto particular de fórmula (I) usado, la afección particular que se esté tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, el peso, el sexo, la extensión del trastorno y la afección física general del paciente particular, así como otra medicación que pueda estar tomando el individuo, como conocen los expertos en la materia. Además, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede disminuirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del individuo tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la invención inmediata.
Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá de 0,05 a 99 % en peso, preferiblemente de 0,1 a 70 % en peso, más preferiblemente de 0,1 a 50 % en peso del principio activo, y de 1 a 99,95 % en peso, preferiblemente de 30 a 99,9 % en peso, más preferiblemente de 50 a 99,9 % en peso de un portador farmacéuticamente aceptable, estando basados todos los porcentajes en el peso total de la composición.
Los presentes compuestos pueden usarse para administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral o administración tópica tal como por inhalación, un aerosol nasal, colirios o por una crema, gel o champú. Los compuestos se administran preferiblemente por vía oral. La dosis exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular según la fórmula (I) usada, la afección particular que se esté tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, el peso, el sexo, la extensión del trastorno y la afección física general del paciente particular, así como otra medicación que esté tomando el individuo, como conocen los expertos en la materia. Además, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede disminuirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del individuo tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la invención inmediata.
La cantidad de un compuesto de Fórmula (I) que puede combinarse con un material portador para producir una forma farmacéutica única variará dependiendo de la enfermedad tratada, la especie de mamífero y el modo de administración particular. Sin embargo, como una guía general, las dosis unitarias adecuadas para los compuestos de la presente invención pueden contener preferiblemente, por ejemplo, entre 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg del compuesto activo. Una dosis unitaria preferida es entre 1 mg y aproximadamente 500 mg. Una dosis unitaria más preferida es entre 1 mg y aproximadamente 300 mg. Una dosis unitaria incluso más preferida es entre 1 mg y aproximadamente 100 mg. Dichas dosis unitarias pueden administrarse más de una vez al día, por ejemplo, 2, 3, 4, 5 o 6 veces al día, pero preferiblemente 1 o 2 veces al día, de manera que la dosis total para un adulto de 70 kg está en el intervalo de 0,001 a aproximadamente 15 mg por kg de peso del individuo por administración. Una dosis preferida es 0,01 a aproximadamente 1,5 mg por kg de peso del individuo por administración y dicho tratamiento puede extenderse durante varias semanas o meses y, en algunos casos, años. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosificación específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del individuo que se esté tratando; el tiempo y la vía de administración; la velocidad de excreción; otros fármacos que se
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hayan administrado previamente y la gravedad de la enfermedad particular que esté siguiendo tratamiento, como es conocido para los expertos en el área.
Puede ser necesario usar dosis fuera de estos intervalos en algunos casos como será evidente para los expertos en la materia. Además, cabe señalar que el terapeuta o médico que le esté tratando conocerá cómo y cuándo empezar, interrumpir, ajustar o terminar el tratamiento junto con la respuesta del paciente individual.
Los siguientes ejemplos se destinan a ilustrar el alcance de la presente invención.
Parte experimental
De ahora en adelante, el término “p. f.” significa punto de fusión, “THF'” significa tetrahidrofurano, DIPE es diisopropil éter, “DMF” significa A/,W-dimetilformamida, “DCM” significa diclorometano, “EtOAc” significa acetato de etilo, "AcOH" significa ácido acético, "MeOH" significa metanol, "EtOH" significa etanol, "rac" significa racémico. SFC es cromatografía de fluidos supercríticos, "PFA" significa perfluoroalcoxi. "DIPEA" significa W,A/-diisopropiletilamina, "DIPE" significa diisopropil éter, "DMA" significa dimetilacetamida, "DAST" significa trifluoruro de dietilaminoazufre.
Se llevó a cabo cromatografía de capa fina (TLC, por sus siglas en inglés) en placas 60 F254 de gel de sílice (Merck) usando disolventes de calidad reactivo. Se realizó cromatografía de columna por desorción súbita automatizada usando cartuchos listos para conectar de Merck, sobre gel de sílice irregular, tamaño de partícula 15-40 pm (columnas de desorción súbita desechables de fase normal) en un sistema SPOT o FLASH de Armen Instrument.
Se realizaron reacciones asistidas por microondas en un reactor de modo único: reactor de microondas Emrys™ Optimizer (Personal Chemistry A. B., en la actualidad Biotage).
Se realizaron reacciones de hidrogenación en un hidrogenador de flujo continuo H-CUBE® de ThalesNano Nanotechnology Inc.
Se llevaron a cabo reacciones de flujo en un dispositivo modular Vapourtec R2+R4 comercialmente disponible con el módulo del reactor frío. Sitio web:
http://www.vapourtec.co.uk.
http://www.vapourtec.co.uk.
Para compuestos intermedios clave, así como algunos compuestos finales, la configuración absoluta de los centros quirales (indicado como R y/o S) se establecieron por comparación con muestras de configuración conocida o el uso de técnicas analíticas adecuadas para la determinación de la configuración absoluta, tales como VCD (dicroísmo circular vibracional, por sus siglas en inglés) o cristalografía de rayos X. Cuando la configuración absoluta en un centro quiral es desconocida, se designa arbitrariamente *R o *S.
A. Preparación de los compuestos intermedios
Ejemplo A1
Preparación de rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propionitrilo
Se añadió cianuro de trimetilsililo (20 g, 200 mmol) a una disolución agitada de 3-bromoacetofenona (20 g, 100 mmol) y NH4Cl (11 g, 200 mmol) en NH3/MeOH (400 ml). Se agitó la mezcla una temperatura ambiente durante 4 días. Se evaporó el disolvente a vacío y se absorbió el residuo en EtOAc (100 ml). Se separó por filtración el sólido y se evaporó el líquido filtrado a vacío para proporcionar rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propionitrilo (20 g, 86 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación.
Ejemplo A2
Preparación de éster metílico del ácido rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propiónico
Se disolvió rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propionitrilo (20 g, 88,9 mmol) en HCl/MeOH (500 ml) y se calentó para hacer hervir la mezcla durante 4 días. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadieron EtOAc (100 ml) y agua (100 ml) y se extrajo la mezcla con EtOAc (2 x 100 ml). Se alcalinizaron las capas acuosas combinadas con 5 disolución acuosa de amoníaco hasta pH 8 y se extrajo con EtOAc (5 x 100 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar éster metílico del ácido rac-2- amino-2-(3-bromo-fenil)-propiónico (10,6 g, 46 % de rendimiento) como un aceite.
Ejemplo A3
Preparación de rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol
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Se añadió hidruro de litio y aluminio (1 M en THF; 22 ml, 22 mmol) gota a gota a una disolución agitada de éster metílico del ácido rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propiónico (7,5 g, 29,1 mmol) en THF (200 ml) a -15 °C. Se dejó 15 calentar la mezcla hasta 0 °C durante 1 hora. Se añadió más THF (150 ml) y se añadió Na2SO4 sat., gota a gota hasta que no se formó más hidrógeno. Se añadió Na2SO4 anhidro y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla por tierra de diatomeas, se enjuagó con THF y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 20 rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol (5,70 g, 85 % de rendimiento) como un aceite.
Ejemplo A4
Preparación de (R)-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol
HoN OH
25 Se separó una muestra de rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol (15,4 g) en los correspondientes enantiómeros por SFC preparativa en Chiralpak® Daicel AD x 250 mm, fase móvil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2 %) para proporcionar (R)-2-amino-2-(3-bromofenil)-propan-1-ol (7,21 g, 40 % de rendimiento).
ao: -14,9° (589 nm, c = 0,2946 % p/v, MeOH, 20 °C).
Ejemplo A5
30 Preparación de éster terc-butílico del ácido rac-[1-(3-bromo-fenil)-2-hidroxi-1-metil-etil]-carbámico
Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (4,84 g, 22,16 mmol) en pequeñas porciones a una disolución agitada de rac- 2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol (1,7 g, 7,39 mmol) en una mezcla de NaHCO3 sat. (15 ml) y THF (15 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 10 minutos y a temperatura ambiente durante 15 horas. Se enfrió la mezcla en 35 un baño de hielo/agua y se acidificó a pH 1-2 con KHSO4. Se separó la capa orgánica y se extrajo además la capa acuosa con EtOAc. Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 20/80). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar éster terc- butílico del ácido rac-[1-(3-bromo-fenil)-2-hidroxi-1-metil-etil]-carbámico (2,36 g, 93 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
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Se preparó el siguiente compuesto intermedio según procedimientos sintéticos similares a los descritos en los ejemplos A1-A5:
Ejemplo A6
Preparación de (R) [1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-hidroxi-1-metiletil]carbamato de ferc-butilo
A partir de 1-(5-bromo-2-fluorofenil)etanona.
Ejemplo A7
Preparación de 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol
F'cY>''Vx>í
1S1=^ N
Se añadió hidruro de sodio (60 % en aceite mineral; 0,4 g, 10 mmol) en pequeñas porciones a una disolución agitada de 4-(trifluorometil)-1H-imidazol (1,15 g, 8,45 mmol) en THF (19 ml) a 0 °C. Después de agitar a 0 °C durante 30 minutos, se añadió cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (1,69 g, 10 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió agua y se extrajo el producto con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar 4-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol (2,2 g, 98 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según procedimientos sintéticos similares a los descritos en los ejemplos A7:
Ejemplo A8
Preparación de una mezcla de 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol y 5-iodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}- 1H-imidazol
A partir de 4-yodoimidazol.
Ejemplo A9
Preparación de 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído
^YY'V'-os!
N=í X
Se añadió n-butillitio (1,6 M en hexano; 7,74 ml, 12,4 mmol) gota a gota a una disolución agitada de 4-(trifluorometil)- 1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol (2,75 g, 10,33 mmol) en THF (76,5 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -78 °C durante 10 minutos y después se añadió DMF (5,74 ml, 74,1 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a -78 °C durante 30 minutos y a 0 °C durante 1 hora. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; dCm en heptano 0/100 a 60/40). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(trifluorometil)-1-{[2- (trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído (1,6 g, 53 % de rendimiento).
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Preparación de oxima del 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído
mmol) a una disolución agitada de 4-(trifluorometil)-1-([2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H- 5,1 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (0,71 g, 10,2 mmol) en agua destilada (10,2 ml). Se agitó la mezcla a 70 °C durante 1 hora y después de enfriar se formó un precipitado, se filtró y se lavó con agua adicional para proporcionar oxima del 4-(trifluorometil)-1-([2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2- carbaldehído (1,5 g, 95 % de rendimiento).
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A10: Ejemplo A11
Preparación de oxima del 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído
Se añadió Na2CO3 (0,54 g, 5,1 imidazol-2-carbaldehído (1,5 g,
A partir de 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído.
Ejemplo A12
Preparación de 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbonitrilo
Se agitó una disolución de oxima del 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído (1,4 g, 4,53 mmol) en anhídrido acético (16,7 ml, 176,23 mmol) a 140 °C durante 6 horas. Se concentró el disolvente a vacío y se absorbió el residuo en EtOAc y se lavó con Na2CO3 (sat.). Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H- imidazol-2-carbonitrilo (1,15 g, 87 % de rendimiento). Se usó el producto en la siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A13
Preparación de 4-(trifluorometil)-1H-imidazol-2-carbonitrilo
Se agitó una disolución de 4-(trifluorometil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbonitrilo (1,15 g, 3,95 mmol) en fluoruro de tetrabutilamonio (1 M en THF; 25,6 ml, 25,6 mmol) en un tubo sellado a 65 °C durante 4 horas. Se diluyó la mezcla con EtOAc y se trató con una disolución tamponado de K2HPO4/KH2PO4. Se separó la capa orgánica y se lavó la fase acuosa con EtOAc adicional. Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción
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súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 2/98 y después MeOH en DCM 0/100 a 1/99). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(trifluorometil)-1H-imidazol-2- carbonitrilo (0,26 g, 41 % de rendimiento).
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según procedimientos sintéticos similares a los descritos en los ejemplos A7-A13:
Ejemplo A14
Preparación de 4-cloro-1H-imidazol-2-carbonitrilo
A partir de 4-(cloro)-1H-imidazol.
Ejemplo A15
Preparación de 4-bromo-1H-imidazol-2-carbonitrilo
A partir de 4-(bromo)-1H-imidazol.
Ejemplo A16
Preparación de una mezcla de 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído y 5-yodo-1-{[2- (trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído
Se añadió diisopropilamida de litio (1,8 M; 57,6 ml, 103,6 mmol) gota a gota a una disolución agitada de una mezcla de 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol y 5-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol (28 g, 86,4 mmol) en THF (640 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -78 °C durante 20 minutos y se añadió después DMF (48 ml, 620 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a -78 °C durante 30 minutos y a 0 °C durante 2 horas. Se diluyó la mezcla EtOAc y se lavó con agua y salmuera. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar una mezcla de 4-yodo-1-{[2- (trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído y 5-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2-carbaldehído (45 g, rendimiento cuantitativo).
Ejemplo A17
Preparación de 4-yodo-1H-imidazol-2-carbonitrilo
Se agitó para hacer hervir a reflujo una disolución de oxima del 4-yodo-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-imidazol-2- carbaldehído (20 g, 54,5 mmol) en fluoruro de tetrabutilamonio (1 M en THF; 200,5 ml, 2,12 mol) durante 6 horas. Se evaporó la mezcla a vacío y se absorbió el residuo en EtOAc y se lavó con Na2CO3 sat. Se secaron las capas orgánicas (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se disolvió el residuo en anhídrido acético y se agitó a 65 °C durante 4 horas. Se diluyó la mezcla con EtOAc y se trató con una disolución tamponada de K2HPO4/KH2PO4. Se separó la capa orgánica y se lavó la fase acuosa con EtOAc adicional. Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; MeOH en DCM 0/100 a 5/95). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-yodo-1H-imidazol-2-carbonitrilo (3 g, 25 % de rendimiento).
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Preparación de 1H-imidazol-2-carbonitrilo
Se añadió hidrocloruro de hidroxilamina (7,96 g, 110 mmol) en pequeñas porciones a una suspensión agitada de 2- imidazolcarboxaldehído (10 g, 100 mmol) en piridina (27,85 ml) a -5 °C. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se calentó la mezcla a 80 °C y se añadió anhídrido acético (18,7 ml, 200 mmol) gota a gota durante 40 minutos para mantener la temperatura por debajo de 110 °C. Después de la adición, se agitó la mezcla de reacción a 80 °C durante 45 minutos y después se enfrió a 5 °C y se alcalinizó a pH 8 con NaOH (25 %). Se diluyó la mezcla con EtOAc, se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se diluyó el producto bruto con DCM y se agitó durante 18 horas. Se filtró el sólido y se secó a vacío para proporcionar 1H-imidazol-2-carbonitrilo (7,5 g, 77 % de rendimiento) que se usó en la siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A19
Preparación de 4-formil-W,A/-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida
Se añadió 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (21 g, 187,33 mmol) y cloruro de dimetilsulfamoílo (18,4 ml, 171,72 mmol) a una suspensión agitada de 1H-imidazol-4-carbaldehído (15 g, 156,11 mmol) en acetonitrilo (300 ml) a 0 °C. Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se concentró la mezcla a vacío y se diluyó el residuo con agua y se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 60/40). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-formil- W,W-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida (27,2 g, 86 % de rendimiento) como un sólido crema.
Ejemplo A20
Preparación de 4-(d¡fluorometil)-A/, W-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida
Se secó el sistema colector (bombas, válvulas, tubo de PFA y serpentín del reactor) de una unidad Vapourtec R2+R4 con alcohol isopropílico (2 ml/minuto, 15 min) y THF anhidro (0,5 ml/minuto, 20 min). Se cargó una disolución de 4-formil-W,A/-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida (0,5 g, 2,46 mmol) en DCM en un bucle de muestra (10 ml) en una Vapourtec R2+R4. Se cargó una disolución de trifluoruro de dietilaminoazufre (0,65 ml, 4,92 mmol) en DCM en un segundo bucle de muestra (10 ml). Se conectaron los dos bucles de muestra en línea en corrientes de DCM, cada uno fluyendo a 0,110 ml/minuto y se mezclaron en el reactor a 80 °C. Después se maduró la mezcla en el reactor usando el serpentín de 10 ml. Se recogió después la salida del serpentín directamente sobre CaCO3. Se filtró la disolución por tierra de diatomeas y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; DCM). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(difluorometil)-W,W-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida (0,41 g, 73 % de rendimiento) como un sólido pardo pálido.
Ejemplo A21
Preparación de 4-(difluorometil)-1-(dimetilsulfamoil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo
Se añadió bis(trimetilsilil)amida de potasio (1 M en THF; 7,66 ml, 7,66 mmol) gota a gota a una disolución agitada de 4-(difluorometil)-A/, W-dimetil-1H-imidazol-1-sulfonamida (1,5 g, 6,66 mmol) en THF (30 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -78 °C durante 1 hora y se añadió cianoformiato de etilo (0,76 g, 7,66 mmol) en THF (7 ml). Se agitó la mezcla a -78° C durante 1 hora y después a temperatura ambiente durante 2
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horas. Se diluyó la mezcla con NH4CI sat. y se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en heptano 0/100 a 60/40). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(difluorometil)-1-(dimetilsulfamoil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (1,3 g, 66 % de rendimiento) como un aceite amarillo pálido.
Ejemplo A22
Preparación de 4-(difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo
Se añadió ácido clorhídrico (4 M en dioxano; 35 ml, 140 mmol) a 4-(difluorometil)-1-(dimetilsulfamoil)-1H-imidazol-2- carboxilato de etilo (5,55 g, 18,67 mmol). Se agitó la mezcla a 50 °C durante 2 horas. Se evaporó el disolvente a vacío. Se diluyó el residuo con NaHCO3 (sat.) y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (2,98 g, 84 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo A23
Preparación de 1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoroetanona
Br
Se añadió n-butillitio (2,5 M en hexano; 20,03 ml, 50,07 mmol) a una disolución agitada de diisopropilamina (7,02 ml, 50,07 mmol) en THF (125,4 ml) a -70 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -70 °C durante 30 minutos y se añadió después 4-bromofluorobenceno (5 ml, 45,51 mmol) gota a gota. Se agitó la mezcla de reacción durante 30 minutos a -70 °C antes de que se añadiera difluoroacetato de etilo (5,74 ml, 54,62 mmol). Se agitó la mezcla a -70 °C durante 1 hora y se diluyó después con NH4Cl (sat.) y se extrajo con dietil éter. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; DCM en heptano 0/100 a 100/0). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoroetanona (9,3 g, 81 % de rendimiento) como un aceite amarillo pálido que solidificó en reposo.
Ejemplo A24
Preparación de [(1Z)-1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoroetilideno]carbamato de ferc-butilo
Se añadió W-boc-imino-(trifenil)fosforano (15,26 g, 40,43 mmol) a una disolución agitada de 1-(5-bromo-2- fluorofenil)-2,2-difluoroetanona (9,3 g, 36,76 mmol) en tolueno (93 ml). Se agitó la mezcla a 90 °C durante 18 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se absorbió el residuo en heptano. Se separó por filtración el sólido y se evaporó el líquido filtrado a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en heptano 0/100 a 5/95). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar [(1Z)-1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoroetilideno]carbamato de ferc-butilo (8,7 g, 67 % de rendimiento) como un aceite amarillo pálido.
Ejemplo A25
Se añadió bromuro de vinilmagnesio (1 M en THF; 4 ml, 4 mmol) a una disolución agitada de [(1Z)-1-(5-bromo-2- fluorofenil)-2,2-difluoroetilideno]carbamato de ferc-butilo (0,94 g, 2,67 mmol) en THF (8,9 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -78 °C durante 30 minutos y a temperatura ambiente durante 18 horas.
5 Se diluyó la mezcla con NH4Cl sat. y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 100/0). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-1-(difluorometil)prop-2-en-1-il]carbamato de ferc-butilo (1 g, 99 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
10 Ejemplo A26
Preparación de rac-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-1-(hidroximetil)etil]carbamato de ferc-butilo
A una disolución de rac-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-1-(difluorometil)prop-2-en-1-il]carbamato de ferc-butilo (3,0 g, 7,9 mmol) en una mezcla de DCM (50 ml) y MeOH (112 ml) a -78 °C, se introdujo ozono mientras persistía el color azul 15 (30 minutos). Se retiró el exceso de ozono por burbujeo por gas oxígeno durante 10 minutos. Después, se añadió
borohidruro de sodio (0,89 g, 23,7 mmol) y se dejó que la mezcla alcanzara 0 °C. Después de agitar 30 minutos, se vertió la mezcla sobre HCl (1 N) y se extrajo con dietil éter. Se separó la capa orgánica, se lavó con agua y salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar rac-[1-(5-bromo-2- fluorofenil)-2,2-difluoro-1-(hidroximetil)etil]carbamato de ferc-butilo (2,99 g, 98 % de rendimiento) como un sólido 20 blanco.
Ejemplo A27
Preparación de (R)-[1-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-2-hidrox¡-1-met¡let¡l]carbamato de ferc-butilo
Se añadió dimetilsulfóxido (279,5 ml) a una mezcla de (R) [1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-hidroxi-1-metiletil]carbamato 25 de ferc-butilo (6,8 g, 19,5 mmol), azida de sodio (3,17 g, 48,8 mmol), yoduro de cobre (I) (4,65 g, 24,4 mmol) y Na2CO3 (4,14 g, 39,1 mmol). Se desgaseó la mezcla con nitrógeno durante unos minutos y después se añadió N, N'- dimetiletilendiamina (3,68 ml, 34,2 mmol) y se agitó la mezcla a 90 °C durante 16 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se filtró la mezcla por tierra de diatomeas y se lavó con agua. Se diluyó el líquido filtrado con EtOAc y agua y se acidificó cuidadosamente con HCl 1 M. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa 30 con EtOAc adicional. Se alcalinizó la fase acuosa con NH3 en agua y después se lavó con EtOAc. Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 5/95). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-[1-(5-amino-2-fluorofenil)-2- hidroxi-1-metiletil]carbamato de ferc-butilo (2,7 g, 49 % de rendimiento).
35 Ejemplo A28
Se añadió cloroformiato de etilo (1 ml, 10,5 mmol) a una mezcla de (RH1-(5-amino-2-fluorofenil)-2-hidroxi-1- metiletil]carbamato de ferc-butilo (2,7 g, 9,5 mmol) en NaHCO3 sat. (60 ml) y THF (50 ml). Se agitó la mezcla a 5 temperatura ambiente durante 4 horas. Después, se diluyó la mezcla con EtOAc, se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar (R)-(3-{1-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-2- hidroxi-1-metiletil}-4-fluorofenil)carbamato de etilo (3,1 g, 92 % de rendimiento). Se usó el producto en la siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A29
10 Preparación de rac-[3-(ferc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo-fenil)-4-metil-[1.1.3]oxatiazolidin-2-óxido
0
1
>k
Se añadió una disolución de éster terc- butílico del ácido rac-[1-(3-bromo-fenil)-2-hidroxi-1-metil-etil]-carbámico (7,2 g, 21,8 mmol) en acetonitrilo seco (40 ml) gota a gota a una disolución agitada de cloruro de tionilo (3,98 ml, 54,51 mmol) en acetonitrilo seco ((114 ml), se enfrió a -40 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla de 15 reacción durante 30 minutos a -40 °C antes de que se añadiera piridina (8,78 ml, 109,02 mmol). Se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 64 horas. Se evaporó el disolvente a vacío. Se añadió EtOAc al residuo. Se separó por filtración el sólido y se concentró el líquido filtrado a vacío. Se trató el residuo con dietil éter. Se filtraron los sólidos y se concentró el líquido filtrado a vacío para proporcionar rac-[3-(ferc-butiloxicarbonil)-4-(3- bromo-fenil)-4-metil-[1,1,3]oxatiazolidin-2-óxido (7,09 g, 86 % de rendimiento) como un aceite que se usó en la 20 siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A30
Preparación de rac-[3-(ferc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo-fenil)-4-metil-[1.1.3]oxatiazolidin-2,2-dióxido
Se añadió cloruro de rutenio (III) (39 mg, 0,19 mmol) a una disolución de rac-[3-(ferc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo- 25 fenil)-4-metil-[1.1.3]oxatiazolidin-2-óxido (7 g, 18,6 mmol) en acetonitrilo /agua (1:1) (200 ml) a 0 °C, seguido por la adición de peryodato de sodio (5,97 g, 27,91 mmol). Se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se filtró la mezcla por tierra de diatomeas y se lavó con EtOAc (50 ml). Se añadió agua (50 ml) y EtOAc (100 ml) al líquido filtrado. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; DCM). Se recogieron 30 las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-[3-(ferc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo-fenil)- 4-metil-[1.1.3]oxatiazolidin-2,2-dióxido (6,66 g, 91 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según procedimientos sintéticos similares descritos en los ejemplos A29-A30:
Ejemplo A31
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A partir de (R)-[1-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2-h¡drox¡-1-metilet¡l]carbamato de tere-butilo.
Ejemplo A32
Preparación de 2,2-dióxido de rae-4-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)-1,2,3-oxat¡azol¡d¡n-3-carbox¡lato de tere- butilo
p
A partir de rae-[1-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2,2-d¡fluoro-1-(h¡drox¡met¡l)-et¡l]carbamato de tere-butilo.
Ejemplo A33
Preparación de 2,2-dióxido de (^^-^-[(etoxicarbom^amino^-fluorofeml^-metiM^^-oxatiazolidin^-carboxilato de tere-butilo
A partir de (R)-(3-(1-[(tere-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-l^¡drox¡-1-met¡let¡l}-4-fluorofen¡l)carbamato de etilo.
Ejemplo A34
Preparación de éster etílico del ácido rae-1-[1-(3-bromo-fen¡l)1-tere-butox¡carbon¡lam¡no-et¡l]-1H-¡m¡dazol-2- carboxílico
Se añadió hidruro de sodio (60 % en aceite mineral) (199 mg, 4,97 mmol) a una disolución de imidazol-2-carboxilato de etilo (697 mg, 4,97 mmol) en DMF (33 ml) a temperatura ambiente y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió rae-[3-(tere-but¡lox¡carbon¡l)-4-(3-bromo-fen¡l)-4-met¡l-[1.1.3]oxat¡azol¡d¡n-2,2- dióxido (1,95 g, 4,97 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 64 horas. Se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó, se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice : MeOH en DCM 0/100 a 5/95). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar éster etílico del ácido rac-1-[1- (3-bromo-fen¡l)1-tere-butox¡carbon¡lam¡no-et¡l]-1H-¡m¡dazol-2-carboxíl¡co (1,19 g, 53 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A34: Ejemplo A35
Preparación de (R)-{1-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2-[2-c¡ano-4-(tr¡fluoromet¡l)-1H-¡m¡dazol-1-¡l]-1-met¡let¡l}carbamato de tere-butilo
5
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A partir de 2,2-dióxido de (R)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de tere-butilo y 4- (trifluorometil)-1H-imidazol-2-carbonitrilo.
Ejemplo A36
Preparación de (RH1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(2-ciano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]carbamato de tere-butilo
Se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (7,28 ml, 48,75 mmol) a una disolución agitada de 2,2-dióxido de (R)- 4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de tere-butilo (10 g, 24,4 mmol) y 1H-imidazol-2- carbonitrilo (2,61 g, 28,03 mmol) en acetonitrilo (80 ml). Se agitó la mezcla a 90 °C durante 18 horas y se diluyó después con HCl (1 M) y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)- [1- (5-bromo-2-fluorofenil)-2-(2-ciano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]carbamato de tere-butilo (10 g, 97 % de rendimiento) como un sólido pegajoso.
Ejemplo A37
Preparación de (R)-1-{2-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-[(tere-butoxicarbonil)amino]propil}-4-(difluorometil)-1H-imidazol-2- carboxilato de etilo
Se añadió 4-(difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (0,5 g, 2,63 mmol) a una disolución agitada de 2,2- dióxido de (R)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de tere-butilo (1,03 g, 2,5 mmol) y K2CO3 (0,36 g, 2,63 mmol) en DMF (10,5 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla a 100 °C durante 2 horas y después se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con ácido cítrico (sat.) y EtOAc. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; DCM). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar 1-{(R)-2-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-[(tere- butoxicarbonil)amino]propil}-4-(difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (0,66 g, 51 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A37:
Ejemplo A38
Preparación de (R)-{3-[1-[(tere-butoxicarbonil)amino]-2-(4-cloro-2-ciano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]-4-
fluorofenil}carbamato de etilo
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A partir de 2,2-dióxido de (R)-4-{5-[(etox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofeml}-4-met¡l-1,2,3-oxat¡azol¡d¡n-3-carbox¡lato de tere-butilo y 4-doro-1H-¡m¡dazol-2-carbon¡tr¡lo.
Ejemplo A39
Preparac¡ón de (R)-{3-[1-[(fere-butox¡carboml)am¡no]-2-(4-bromo-2-c¡ano-1H-¡m¡dazol-1-¡l)-1-met¡let¡l]-4-fluorofen¡l} carbamato de et¡lo
A part¡r de 2,2-d¡óx¡do de (R)- 4-{5-[(etox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-4-met¡l-1,2,3-oxat¡azol¡d¡n-3-carbox¡lato de tere-but¡lo y 4-bromo-1H-¡m¡dazol-2-carbon¡tr¡lo.
Ejemplo A40
Preparac¡ón de (R)-{3-[1-[(fere-butox¡carboml)am¡no]-2-(2-c¡ano-4-yodo-1H-¡m¡dazol-1-¡l)-1-met¡let¡l]-4-
fluorofen¡l}carbamato de et¡lo
A part¡r de 2,2-d¡óx¡do de (R)-4-{5-[(etox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-4-met¡l-1,2,3-oxat¡azol¡d¡n-3-carbox¡lato de tere-but¡lo y 4-yodo-1H-¡m¡dazol-2-carbon¡tr¡lo.
Ejemplo A41
Preparac¡ón de éster etíl¡co del ác¡do rae-1-[2-am¡no-2-(3-bromo-fen¡l)-prop¡l]-1H-¡m¡dazol-2-carboxíl¡co
Se añad¡ó ác¡do tr¡fluoroacét¡co (5,9 ml) a una d¡soluc¡ón de éster etíl¡co del ác¡do rac-1-[1-(3-bromo-fen¡l)1-terc- butox¡carbon¡lam¡no-et¡l]-1H-¡m¡dazol-2-carboxíl¡co (1,18 g, 2,61 mmol) en DCM (59 ml) y se ag¡tó la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante la noche. Se concentró la reacc¡ón a vacío para proporc¡onar éster etíl¡co del ác¡do rac-1-[2-am¡no-2-(3-bromofen¡l)-prop¡l]-1H-¡m¡dazol-2-carboxíl¡co (1,49 g, 92 % de rend¡m¡ento) como un ace¡te. Se usó el producto en la s¡gu¡ente etapa s¡n más pur¡f¡cac¡ón.
Ejemplo A42
Preparac¡ón de 1-[(R)-2-am¡no-2-(5-bromo-2-fluorofen¡l)prop¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)-1H-¡m¡dazol-2-carbox¡lato de et¡lo
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30
Se añadió ácido clorhídrico (4 M en dioxano; 3,4 ml, 13,5 mmol) a 1-{(R)-2-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-[(terc- butoxicarbonil)amino]propil}-4-(difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (0,62 g, 1,19 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 90 minutos. Se evaporó el disolvente a vacío. Se diluyó el residuo con NaHCO3 sat. y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar 1-[(R)-2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)propil]-4-(difluorometil)-1H-imidazol-2- carboxilato de etilo (0,5 g, 100 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación.
Ejemplo A43
Preparación de rac-1-[2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)-3,3-difluoropropil]-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo
Se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (3,35 ml, 22,4 mmol) a una disolución agitada de 2,2-dióxido de rac-4- (5-bromo-2-fluorofenil)-4-(difluorometil)-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de terc-butilo (5 g, 11,2 mmol) e imidazol-2- carboxilato de etilo (2,36 g, 16,8 mmol) en tolueno (50 ml). Se agitó la mezcla a 60 °C durante 18 horas y después se concentró el disolvente a vacío. Se disolvió el residuo en THF (50 ml), se trató con HCl (1 N) y se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar un residuo que se disolvió en HCl 4 M en dioxano (28 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se evaporó la mezcla a vacío y se suspendió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar rac-1-[2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)-3,3-difluoropropil]-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (3,95 g, 87 % de rendimiento) como un sólido blanco. Se usó el producto en la siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A44
Preparación de (R)-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(4-cloro-2-ciano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]carbamato de terc-butilo
Se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (10,3 ml, 68,8 mmol) a una disolución agitada de 2,2-dióxido de (R)-4- (5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de terc-butilo (28,24 g, 34,41 mmol) y 4-cloro-1H- imidazol-2-carbonitrilo (7,9 g, 61,94 mmol) en acetonitrilo (203 ml). Se agitó la mezcla a 100 °C durante 2 horas y se diluyó después con DCM y se lavó con HCl (1 N). Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R)-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(4-cloro-2-ciano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]carbamato de terc-butilo (15,5 g, 98 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo A45
Preparación de éster etílico del ácido (R)-1-[2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propil]-1H-imidazol-2-carboxílico
5
10
15
20
25
30
Se añadió carbonato de cesio (4,98 g, 15,3 mmol) a una mezcla de imidazol-2-carboxilato de etilo (1,39 g, 9,94 mmol) y (R)-[3-(terc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromofenil)-4-metil-[1.1.3]oxatiazolidin-2,2-dióxido (3 g, 7,65 mmol) en acetonitrilo seco (36 ml). Se agitó la mezcla a 130 °C durante 45 minutos con radiación de microondas. Después se añadió NH4Cl (sat.) y se extrajo el producto con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Después se añadió HCl (4 M en dioxano) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se concentró el disolvente a vacío y se suspendió el residuo en DCM y se lavó con una disolución saturada de NaHCO3. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporaron los disolventes a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice : EtOAc). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar éster etílico del ácido (R)-1-[2- amino-2-(3-bromo-fenil)-propil]-1H-imidazol-2-carboxílico (1,46 g, 54 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A45: Ejemplo A46
Preparación de (R)-1-[2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)propil]-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo
A partir de 2,2-dióxido de (R)- 4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidin-3-carboxilato de tere-butilo. Ejemplo A47
Preparación de rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6-7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ona
Se calentó una disolución de éster etílico del ácido rac-1-[2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propil]-1H-imidazol-2-carboxílico (1,4 g, 3 mmol) en etanol (10 ml) a 90 °C durante 24 horas. Se concentró la mezcla de reacción a vacío, se trató con NaHCO3 sat. y se extrajo el producto con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar rae-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ona (0,6 g, 65 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A47: Ejemplo A48
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8(5H)-ona
A partir de (R)-1-[2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)propil]-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo.
Ejemplo A49
Preparación de rae-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona
5
10
15
20
25
30
35
Se añadió trimetilaluminio 2 M en tolueno (10,6 ml, 21,1 mmol) a una disolución agitada de rac-1-[2-amino-2-(5- bromo-2-fluorofenil)-3,3-difluoropropil]-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (3,9 g, 9,6 mmol) en THF (39 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 120 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se diluyó la mezcla con Na2CO3 (sat.) a 0 °C y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; EtOAc). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-6,7- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona (3 g, 87 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo A50
Preparación de (R)-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]-pirazin-8-ona
Se añadió metóxido de sodio (25 % en MeOH) (1,9 ml, 8,29 mmol) a una disolución de éster etílico del ácido (R)-1- [2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propil]-1H-imidazol-2-carboxílico (1,46 g, 4,15 mmol) en MeOH (5 ml) y se calentó la mezcla de reacción a 55 °C durante 18 h. Se concentró la reacción a vacío, se trató con NH4Cl sat. y se extrajo el producto con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar (R)-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ona (1,2 g, 95 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo A51
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona
Se añadió K2CO3 (1,32 g, 13,42 mmol) a una disolución agitada de 1-[(R)-2-amino-2-(5-bromo-2-fluorofenil)propil]-4- (difluorometil)-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (3,6 g, 7,45 mmol) en EtOH (51,1 ml) y se calentó la mezcla de reacción a 80 °C durante 4 horas. Se concentró la mezcla a vacío, se trató con NH4Cl (sat.) y se extrajo el producto con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona (2,89 g, 100 % de rendimiento) como una espuma blanca. Se usó el producto en la siguiente reacción sin más purificación.
Ejemplo A52
Preparación de rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]-pirazin-8-tiona
Se añadió pentasulfuro de fósforo (0,65 g, 2,94 mmol) a una disolución de rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro- 5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ona (0,6 g, 1,96 mmol) en piridina (7 ml) y se calentó la mezcla a 95 °C durante 18 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se purificó el residuo por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; EtOAc en DCM 0/100 a 100/0). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-tiona (0,49 g, 78 % de rendimiento) como un sólido amarillo.
5
10
15
20
25
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A52:
Ejemplo A53
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8(5H)-tiona
f=\
N^. .N,
F ^
A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona.
Ejemplo A54
Preparación de rac-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-tiona
A partir de rac-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8(5H)-ona.
Ejemplo A55
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-tiona
A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-ona. Ejemplo A56
Preparación de rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina
Se añadió una disolución acuosa de amoníaco al 32 % (3,2 ml, 54,7 mmol) a una mezcla agitada de (rac-6-(3- bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-imidazo[1,2-a]pirazin-8-tiona (0,49 g, 1,52 mmol) en una disolución 7 N de amoníaco en MeOH (3,3 ml, 22,8 mmol) en un tubo sellado. Se agitó la mezcla a 60 °C durante 96 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente se diluyó la mezcla con agua y Na2CO3 (acuosa sat.) y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 2/98 a 3/97 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,44g, 95 % de rendimiento) como un sólido amarillo.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A56: Ejemplo A57
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8-amina
A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6-met¡l-6,7-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8(5H)-t¡ona.
Ejemplo A58
Preparac¡ón de rac-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6-(d¡fluoromet¡l)-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na
5
Se añad¡ó cloruro de amon¡o (0,91 g, 17 mmol) a una d¡soluc¡ón ag¡tada de rac-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6- (d¡fluoromet¡l)-6,7-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8(5H)-t¡ona (1,6 g, 4,25 mmol) en una d¡soluc¡ón 7 N de amoníaco en MeOH (32 ml, 63,8 mmol) en un tubo sellado. Se ag¡tó la mezcla a 80 °C durante 18 horas. Se concentró la mezcla a vacío y se suspend¡ó el res¡duo en DCM y se lavó con agua. Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y 10 se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (síl¡ce; d¡soluc¡ón 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 2/98). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se concentraron a vacío para proporc¡onar rac-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6-(d¡fluoromet¡l)-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-am¡na (1,5 g, 98 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanco.
Se preparó el s¡gu¡ente compuesto ¡ntermed¡o según un proced¡m¡ento s¡ntét¡co s¡m¡lar descr¡to en el ejemplo A58:
15 Ejemplo A59
Preparac¡ón de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na
A part¡r de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-6,7-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8(5H)-t¡ona. Ejemplo A60
20 Preparac¡ón de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6-met¡l-2-(tr¡fluoromet¡l)-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na
Se ag¡tó una d¡soluc¡ón de ('R/)-{1-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2-[2-c¡ano-4-(tr¡fluoromet¡l)-1H-¡m¡dazol-1-¡l]-1-
met¡let¡l}carbamato de ferc-but¡lo (2,95 g, 6 mmol) en HCl 4 M en d¡oxano (50 ml) a 70 °C durante 2 horas. Se concentró la mezcla a vacío y se suspend¡ó el res¡duo en DCM y se lavó con Na2CO3 (sat.). Se separó la capa 25 orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (síl¡ce; d¡soluc¡ón 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 1/99). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se evaporaron a vacío para proporc¡onar (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-6- met¡l-2-(tr¡fluoromet¡l)-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na (1,5 g, 64 % de rend¡m¡ento).
Ejemplo A61
A partir de (RH1-(5-bromo-2-fluorofeml)-2-(2-dano-1H-imidazoM-il)-1-metiletil]carbamato de tere-butilo. Ejemplo A62
5 Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofeml)-2-doro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
A partir de (RH1-(5-bromo-2-fluorofeml)-2-(4-doro-2-dano-1H-imidazol-1-il)-1-metiletil]carbamato de tere-butilo. Ejemplo A63
Preparación de (R)-{3-[8-amino-2-doro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-6-il]-4-fluorofeml}carbamato de etilo
10
fluorofenil}carbamato de etilo.
Ejemplo A64
Preparación de (R)-{3-[8-amino-2-bromo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-6-il]-4-fluorofeml}carbamato de etilo
15
fluorofenil)carbamato de etilo.
Ejemplo A65
Preparación de (R)-{3-[8-amino-2-yodo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-6-il]-4-fluorofeml}carbamato de etilo
fluorofenil}carbamato de etilo.
Ejemplo A66
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofeml)-3-doro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
39
5
10
15
20
25
30
Se añadió W-clorosuccinimida (0,123 g, 0,92 mmol) a una disolución agitada de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil- 5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,27 g, 0,84 mmol) en acético ácido (6,23 ml). Se agitó la mezcla a 80 °C durante 16 horas y se diluyó después con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-3-cloro-6-metil-5,6- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,18 g, 61 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A66:
Ejemplo A67
Preparación de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8-amina
A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8-amina. Ejemplo A68
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
Se agitó una mezcla de (R)-{3-[8-amino-2-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de etilo (0,2 g, 0,55 mmol), ácido sulfúrico (2 ml, 37,5 mmol), agua (2 ml) y acético ácido (0,8 ml, 13,9 mmol) a 110 °C durante 2 horas. Se absorbió la mezcla en EtOAc y se alcalinizó con Na2CO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-6- metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,17 g, 79 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Ejemplo A69
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-bromo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
Se añadió hidróxido de potasio (0,98 g, 17,6 mmol) a una disolución agitada de (R)-{3-[8-amino-2-bromo-6-metil-5,6- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de etilo (0,72 g, 1,76 mmol) en EtOH (10,25 ml). Se agitó la mezcla a 85 °C durante 24 horas. Se diluyó la mezcla con DCM y EtOAc y se lavó con agua. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar (R)-6-(5-amino-2- fluorofenil)-2-bromo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,6 g, 100 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
5
10
15
20
25
30
35
A part¡r de (R)-{3-[8-am¡no-2-yodo-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l]-4-fluorofen¡l}carbamato de et¡lo. Ejemplo A71
Preparac¡ón de rac- 6-(3-am¡no-fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na
Se h¡drógeno una d¡soluc¡ón de rac- 6-(3-n¡tro-fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (310 mg, 1,14 mmol) en etanol (28 ml) en un reactor H-Cube (1 ml/m¡n., 30 mm, cartucho de Pd/C al 5 %, modo h¡drógeno total, temperatura amb¡ente, 2 c¡clos). Se concentró la reacc¡ón a vacío para proporc¡onar rac-6-(3-am¡no-fen¡l)-6-met¡l- 5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (250 mg, 91 %) como un sól¡do blanco.
Ejemplo A72
Preparac¡ón de (R)-6-[5-(benzh¡dril¡deno-am¡no)-2-fluoro-fen¡l]-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na
Se añad¡ó tolueno (10 ml) a una mezcla de (R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8- ¡lam¡na (0,60 g, 1,86 mmol), tr¡s(d¡benc¡l¡denoacetona)d¡palad¡o (0) (0,17 g, 0,19 mmol), rac-2,2'-b¡s(d¡fen¡l-fosf¡no)- 1,1'-b¡naft¡lo (0,35 g, 0,56 mmol) y terc-butóx¡do de sod¡o (0,32 g, 3,3 mmol) en un tubo sellado y en n¡trógeno a temperatura amb¡ente. Se descargó la mezcla con n¡trógeno durante unos m¡nutos y después se añad¡ó benzofenona¡m¡na (0,62 ml, 3,71 mmol) y se ag¡tó la mezcla a 100 °C durante 2 horas. Después de enfr¡ar a temperatura amb¡ente, se d¡luyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (síl¡ce; d¡soluc¡ón 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 2,5/96,5). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se concentraron a vacío para proporc¡onar (R)-6-[5-(benzh¡dril¡deno-am¡no)-2-fluoro-fen¡l]-6- met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (0,55 g, 70 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo.
Ejemplo A73
Preparac¡ón de (R)-6-(5-am¡no-2-fluoro-fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]-p¡raz¡n-8-¡lam¡na
Se añad¡ó ác¡do clorhídr¡co al 37 % en H2O (0,11 ml) a una d¡soluc¡ón de (R)-6-[5-(benzh¡dnl¡deno-am¡no)-2-fluoro- fen¡l]-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (0,31 g, 0,73 mmol) en ¡sopropanol (8 ml). Se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 2 horas. Se evaporó el d¡solvente a vacío. Se añad¡ó d¡et¡l éter al res¡duo y se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 15 m¡nutos. Se separó por f¡ltrac¡ón el prec¡p¡tado, se lavó con d¡et¡l éter y se secó a vacío. Se suspend¡ó el res¡duo en DCM y se lavó con NaHCO3 (sat). Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío para proporc¡onar (R)-6-(5-am¡no-2-fluoro-fen¡l)-6-met¡l-5,6- d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (0,11 g, 58 % de rend¡m¡ento) que se usó en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal.
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según procedimientos sintéticos similares descritos en los ejemplos A72-A73:
Ejemplo A74
Preparación de rac-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
5
A partir de rac-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-8-amina.
Ejemplo A75
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
10 A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina.
Ejemplo A76
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-metil-2-(trifluorometil)-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
Se añadió dimetilsulfóxido (69,5 ml) a una mezcla de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-2-(trifluorometil)-5,6- 15 dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (1,9 g, 4,86 mmol), azida de sodio (0,79 g, 12,1 mmol), yoduro de cobre (I) (1,16 g, 6,1 mmol) y Na2CO3 (1,03 g, 9,7 mmol). Se desgaseó la mezcla con nitrógeno durante unos minutos y se añadió después N, N'-dimetiletilendiamina (0,91 ml, 8,5 mmol) y se agitó la mezcla a 110 °C durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla con DCM y se lavó con NH4OH (32 %). Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por 20 cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6- metil-2-(trifluorometil)-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,72 g, 45 % de rendimiento).
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A76:
25 Ejemplo A77
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
A partir de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina.
5
10
15
20
25
30
A part¡r de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-3-cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]-p¡raz¡n-8-am¡na. Ejemplo A79
Preparac¡ón de (R)-6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-2,3-d¡cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na
A part¡r de (R)-6-(5-bromo-2-fluorofen¡l)-2,3-d¡cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo-[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na.
Ejemplo A80
Preparac¡ón de (RH2-bromo-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluorop¡nd¡n-2-¡l)carbon¡l]am¡no}fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo
Se añad¡ó d¡carbonato de d¡-terc-but¡lo (0,060 g, 0,27 mmol) a una d¡soluc¡ón ag¡tada de (R)-W-{3-[8-am¡no-2-bromo- 6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l]-4-fluorofen¡l}-5-fluorop¡r¡d¡n-2-carboxam¡da (0,07 g, 0,15 mmol) en NaHCO3 sat. (1 ml) y THF (2 ml) a 0 °C. Se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 18 horas. Se separó la capa orgán¡ca y se extrajo además con EtOAc, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío para propordonar (RH2-bromo-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluorop¡rid¡n-2-¡l)carbon¡l]am¡no}fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-
a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo (0,085 g, 100 % de rend¡m¡ento) que se usó en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal.
Ejemplo A81
Preparac¡ón de (R)-(3-{8-[(ferc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4-
fluorofen¡l)carbamato de ferc-but¡lo
Se añad¡ó d¡carbonato de d¡-terc-but¡lo (2,89 g, 13,28 mmol) a una d¡soluc¡ón ag¡tada de (R)-6-(5-am¡no-2- fluorofen¡l)-2-cloro-6-met¡l-5, 6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na (1,3 g, 4,43 mmol) y DIPEA (1,91 ml, 11,06 ml) en DCM (77,5 ml). Se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 24 horas. Se d¡luyó la capa orgán¡ca con DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (síl¡ce; EtOAc en DCM 0/100 a 30/70). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se evaporaron a vacío para proporc¡onar (R)-(3-{8-[(ferc- butox¡carbon¡l)am¡no]-2-cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4-fluorofen¡l)carbamato de ferc-but¡lo (1,5 g, 69 % de rend¡m¡ento).
5
10
15
20
25
30
Preparación de (R)-[6-{5-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-
il]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-am¡na.
Ejemplo A83
Preparac¡ón de (R)-(3-{8-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-cloro-3-yodo-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4- fluorofen¡l)carbamato de terc-but¡lo
Se añad¡ó W-but¡ll¡t¡o (2,7 M en heptano; 11,92 ml, 32,2 mmol) gota a gota a una d¡soluc¡ón ag¡tada de (R)-(3-{8- [(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-doro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4-fluorofen¡l)carbamato de terc-but¡lo (1,2 g, 2,43 mmol) en THF (12 ml) a -78 °C en una atmósfera de n¡trógeno. Se ag¡tó la mezcla a -78 °C durante 15 m¡nutos. Después, se añad¡ó una d¡soluc¡ón de yodo (11,1 g, 43,73 mmol) en THF (20 ml) a -78 °C. Se ag¡tó la mezcla a -78 °C durante 10 m¡nutos. Después, se dejó que la mezcla alcanzara temperatura amb¡ente, se d¡luyó con EtOAc y se lavó secuenc¡almente con agua y Na2S2O3. Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (síl¡ce; d¡soluc¡ón 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 5/95). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se evaporaron a vacío para proporc¡onar (R)-(3-{8-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-cloro-3-yodo-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4-fluorofen¡l)carbamato de terc-but¡lo (1,46 g, 97 % de rend¡m¡ento).
Se preparó el s¡gu¡ente compuesto ¡ntermed¡o según un proced¡m¡ento s¡ntét¡co s¡m¡lar descr¡to en el ejemplo A83:
Ejemplo A84
Preparac¡ón de (R)-[6-{5-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-3-yodo-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8- ¡l]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-{5-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo.
Ejemplo A85
Preparac¡ón de (R)-[6-{5-[(terc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-fluorofen¡l}-3-(h¡drox¡met¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo
5
10
15
20
25
30
35
Se añadió A/-but¡llit¡o (2,7 M en heptano; 25 ml, 67,5 mmol) gota a gota a una disolución agitada de (R)-[6-{5-[(tere- butoxicarbonil)amino]-2-fluorofenil}-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de tere-butilo (3,1 g, 6,75 mmol) en THF (110 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a -78 °C durante 10 minutos. Después, se añadió paraformaldehído (6 g) a -78 °C. Después, se dejó que la mezcla alcanzara temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 5/95). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R^-^-^tere-butoxicarbom^-amino^-fluorofeml^^hidroximetN^-metil^^- dihidroimidazo^^-a^pirazin^-ilfcarbamato de tere-butilo (1,83 g, 55 % de rendimiento).
Ejemplo A86
Preparación de (R^-^-^tere-butoxicarbomOamino^-fluorofeml^-formil^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^- il]carbamato de tere-butilo
Se añadió dióxido de manganeso (3,75 g, 43,1 mmol) a una disolución agitada de (R)-[6-{5-[(tere- butoxicarbom^amino^-fluorofeml^^hidroximetN^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^-ilfcarbamato de tere- butilo (1,63 g, 3,33 mmol) en DCM (12 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se filtró la mezcla por tierra de diatomeas y se evaporó el líquido filtrado a vacío para proporcionar (R)-[6-{5-[(tere- butoxicarbomOamino^-fluorofenil^-formil^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^-i^carbamato de tere-butilo (1,42 g, 87 % de rendimiento), que se usó en la siguiente etapa sin más purificación.
Ejemplo A87
Preparación de (R^-^-^tere-butoxicarbomOamino^^difluorometil^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^-il]^- fluorofenil}carbamato de tere-butilo
Se añadió DAST (0,78 ml, 6,41 mmol) gota a gota a una disolución agitada de (R)-[6-{5-[(tere-butoxicarbonil)amino]- 2-fluorofen¡l}-3-form¡l-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-butilo (1,42 g, 2,91 mmol) en DCM (15 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se evaporó la mezcla a vacío. Se absorbió el residuo en DCM y se alcalinizó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 1/99). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R^-^-^tere-butoxicarboniOamino^^difluorometN^-metil^^-
dihidroimidazo^^-aprazin^-il^-fluorofeni^carbamato de tere-butilo (0,44 g, 29 % de rendimiento).
Ejemplo A88
Preparación de (R^-^-^tere-butoxicarbomOamino^-fluorofenil^-yodo^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^- il]carbamato de tere-butilo
Se añadió dicarbonato de di-tere-butilo (2,27 g, 10,38 mmol) a una disolución agitada de (R)-6-(5-amino-2- fluorofenil^-yodo^-metil^^-dihidroimidazo^^-aprazin^-amina (2 g, 5,19 mmol) en DCM (50 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por
45
5
10
15
20
25
30
35
cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 2/98). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R)-[6-{5-[(terc- butoxicarbonil)amino]-2-fluorofenil}-2-yodo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de terc-butilo (1 g, 33 % de rendimiento).
Ejemplo A89
Preparación de (R)-{3-[8-amino-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de terc-butilo
Se añadió tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (38,4 mg, 0,042 mmol) a una suspensión agitada de (R)-(3-{8- [(terc-butoxicarbonil)amino]-2-cloro-3-yodo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il}-4-fluorofenil)carbamato de terc-butilo (1,3 g, 2,1 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (46,5 mg, 0,084 mmol), cinc (16,5 mg, 0,25 mmol) y cianuro de cinc (0,492 g, 4,19 mmol) en DMA (12 ml). Se agitó la mezcla a 150 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se filtró la mezcla por tierra de diatomeas y se diluyó el residuo con DCM y se lavó con NH4OH. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-{3-[8-amino-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de terc-butilo (0,56 g, 64 % de rendimiento).
Se preparó el siguiente compuesto intermedio según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A89:
Ejemplo A90
Preparación de (R)- {3-[8-amino-2-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo-[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de terc- butilo
A partir de (R)-[6-{5-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-fluorofenil}-2-yodo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8- il]carbamato de terc-butilo.
Ejemplo A91
Preparación de (R)-{3-[8-amino-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo-[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de terc- butilo
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,24 g, 0,2 mmol) a una disolución agitada de (R)-(3-{8-[(terc- butoxicarbonil)amino]-3-yodo-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il}-4-fluorofenil)carbamato de terc-butilo (1,2 g, 2,05 mmol) y cianuro de cinc (1,93 g, 16,4 mmol) en DMF (6 ml). Se agitó la mezcla a 160 °C durante 10 minutos con radiación de microondas. Se filtró la mezcla por tierra de diatomeas y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-{3-[8-amino-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de terc-butilo (0,4 g, 51 % de rendimiento).
Ejemplo A92
Preparación de (R)-8-amino-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-3-carbonitrilo
46
5
10
15
20
25
Se añadió ácido trifluoroacético (5 ml, 65,34 mmol) a una disolución agitada de (R)-{3-[8-amino-2-cloro-3-ciano-6- metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de ferc-butilo (0,56 g, 1,34 mmol) en DCM (20 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó el disolvente a vacío y se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-8- amino-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-3-carbonitrilo (0,21 g, 49 % de rendimiento).
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A92:
Ejemplo A93
Preparación de (R)-8-amino-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-3-carbonitrilo
A partir de (R)-{3-[8-amino-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de ferc-butilo. Ejemplo A94
Preparación de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
A partir de (R)-{3-[8-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-3-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-
fluorofenil}carbamato de ferc-butilo.
Ejemplo A95
Preparación de (R)-8-amino-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-2-carbonitrilo
A partir de (R)-{3-[8-amino-2-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}carbamato de ferc-butilo. Ejemplo A96
Preparación de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
5
10
15
20
25
Se añadió dicarbonato de di-ferc-butilo (0,14 g, 0,65 mmol) a una disolución agitada de (R)-8-amino-6-(5-amino-2- fluorofenil)-2-doro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-3-carbonitrilo (0,21 g, 0,66 mmol) en DCM (11,5 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó la mezcla con NaHCO3 sat. y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron a vacío para proporcionar (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro- 3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (0,25 g, 91 % de rendimiento).
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A96:
Ejemplo A97
Preparación de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de terc- butilo
A partir de (R)-8-amino-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-3-carbonitrilo.
Ejemplo A98
Preparación de (R)-(3-{8-[(ferc-butox¡carbon¡l)am¡no]-2-cloro-6-metil-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-6-¡l}-4-
fluorofenil)carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-2,3-dicloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina.
Ejemplo A99
Preparación de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-(difluorometil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina.
Ejemplo A100
Preparación de (R)-[2-cloro-3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
5
10
15
20
25
30
Se añadió ácido 5-fluoro-2-piridincarboxílico (15 mg, 0,11 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- triazin-2-il)-4-metilmorfolino (31,7 mg, 0,11 mmol) en MeOH (0,95 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-3- ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (40 mg, 0,095 mmol) en MeOH (0,95 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. Se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron los disolventes a vacío para proporcionar (R)- [2-cloro-3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8- il]carbamato de ferc-butilo (40 mg, 77 % de rendimiento).
Se prepararon los siguientes compuestos intermedios según un procedimiento sintético similar descrito en el ejemplo A100:
Ejemplo A101
Preparación de (R)-[2-cloro-3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[5-metoxipirazin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 5-metoxipirazin-2-carboxílico.
Ejemplo A102
Preparación de (R)-[2-cloro-6-(5-{[(5-cloropiridin-2-il)carbonil]amino}-2-fluorofenil)-3-ciano-6-metil-5,6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 5-cloropiridin-2-carboxílico.
Ejemplo A103
Preparación de (R)-[2-cloro-3-ciano-6-(5-{[(5-cianopiridin-2-il)carbonil]amino}-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)- [6-(5-amino-2-fluorofenil)-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 5-cianopiridin-2-carboxílico.
5
10
15
20
25
Preparación de (R)-{2-cloro-3-ciano-6-[5-({[1-(difluorometil)-1H-pirazol-3-il]carboml}amino)-2-fluorofeml]-6-metil-5,6- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il}carbamato de ferc-butilo
A partir de (RH6-(5-amino-2-fluorofeml)-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 1-difluorometil-1H-pirazol-3-carboxílico.
Ejemplo A105
Preparación de (RH3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-metoxipirazin-2-il)carboml]ammo}feml)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2- a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (RH6-(5-amino-2-fluorofeml)-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 5-metoxipirazin-2-carboxílico.
Ejemplo A106
Preparación de (R)-{3-ciano-6-[5-({[1-(difluorometil)-1H-pirazol-3-il]carboml}amino)-2-fluorofeml]-6-metil-5, 6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il}carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 1-difluorometil-1H-pirazol-3-carboxílico.
Ejemplo A107
Preparación de (R)-[3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2- a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
A partir de (R)-[6-(5-amino-2-fluorofenil)-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo y ácido 5-fluoro-2-piridincarboxílico.
Ejemplo A108
Preparación de (R)-[3-ciano-6-(5-{[(5-cianopiridin-2-il)carbonil]amino}-2-fluorofenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2- a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo
5
10
15
20
25
A partir de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-c¡ano-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡midazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-butilo
y ácido 5-cianop¡r¡din-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A109
Preparac¡ón de (R)-[6-(5-{[(5-dorop¡r¡d¡n-2-¡l)carboml]am¡no}-2-fluorofeml)-3-dano-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-
a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-c¡ano-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-but¡lo y ác¡do 5-clorop¡r¡d¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A110
Preparac¡ón de (R)-[2,3-d¡doro-6-(5-{[(5-c¡anop¡r¡d¡n-2-¡l)carboml]am¡no}-2-fluorofeml)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofeml)-2,3-d¡doro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere- but¡lo y ác¡do 5-c¡anop¡r¡d¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A111
Preparac¡ón de (R)-{2,3-d¡doro-6-[5-({[1-(d¡fluoromet¡l)-1H-p¡razol-3-¡l]carboml}am¡no)-2-fluorofeml]-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l}carbamato de tere-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofeml)-2,3-d¡doro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere- but¡lo y ác¡do 1-d¡fluoromet¡l-1H-p¡razol-3-carboxíl¡co.
Ejemplo A112
Preparac¡ón de (R)-[2,3-d¡doro-6-(5-{[(5-dorop¡r¡d¡n-2-¡l)carbon¡l]am¡no}-2-fluorofen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de tere-but¡lo
5
10
15
20
25
A partir de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-2,3-d¡cloro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-
butilo y ác¡do 5-dorop¡r¡d¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A113
Preparac¡ón de (R)-[2,3-d¡doro-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluorop¡r¡d¡n-2-¡l)carboml]ammo}feml)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2- a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-2,3-d¡doro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc- but¡lo y ác¡do 5-fluoro-2-p¡r¡d¡ncarboxíl¡co.
Ejemplo A114
Preparac¡ón de (R)-[2,3-d¡doro-6-(2-fluoro-5-{[(5-metox¡p¡raz¡n-2-¡l)carboml]ammo}feml)-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-2,3-d¡doro-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc- but¡lo y ác¡do 5-metox¡p¡raz¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A115
Preparac¡ón de (R)-[6-(5-{[(5-dorop¡r¡d¡n-2-¡l)carboml]am¡no}-2-fluorofeml)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo y ác¡do 5-dorop¡r¡d¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A116
Preparac¡ón de (R)-[6-(5-{[(5-danop¡r¡d¡n-2-¡l)carboml]am¡no}-2-fluorofeml)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo
A part¡r de (R)-[6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de terc-but¡lo y ác¡do 5-c¡anop¡r¡d¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A117
5
10
15
20
25
Preparación de (R)-[3-(d¡fluoromet¡l)-6-(2-fluoro-5-{[(5-metox¡p¡raz¡n-2-¡l)carbon¡l]am¡no}fen¡l)-6-met¡l-5,6-
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-but¡lo
A part¡r de (RH6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo y ác¡do 5-metox¡p¡raz¡n-2-carboxíl¡co.
Ejemplo A118
Preparac¡ón de (RH3-(d¡fluoromet¡l)-6-(2-fluoro-5-{[(5-fluorop¡r¡d¡n-2-¡l)carbon¡l]am¡no}fen¡l)-6-met¡l-5,6-
d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo
A part¡r de (RH6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo y ác¡do 5-fluoro-2-p¡r¡d¡ncarboxíl¡co.
Ejemplo A119
Preparac¡ón de (R)-{3-(d¡fluoromet¡l)-6-[5-({[1-(d¡fluoromet¡l)-1H-p¡razol-3-¡l]carbon¡l}am¡no)-2-fluorofen¡l]-6-met¡l-5,6- d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l}carbamato de ferc-but¡lo
A part¡r de (RH6-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-3-(d¡fluoromet¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡l]carbamato de ferc-but¡lo y ác¡do 1-d¡fluoromet¡l-1H-p¡razol-3-carboxíl¡co.
B. Preparac¡ón de los compuestos f¡nales
Ejemplo B1
Preparac¡ón de rac-6-met¡l-6-(3-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l-fen¡l)-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]-p¡raz¡n-8-¡lam¡na
Se añad¡ó tetraqu¡s(tr¡fen¡lfosf¡no)palad¡o (0) (0,027 g, 0,023 mmol) a una suspens¡ón ag¡tada de rac-6-(3-bromo- fen¡l)-6-met¡l-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (0,14 g, 0,46 mmol), ác¡do p¡r¡m¡d¡n-5-borón¡co (0,17 g, 1,38 mmol) y carbonato de potas¡o (0,19 g, 1,38 mmol) en 1,4-d¡oxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura amb¡ente en n¡trógeno. Se ag¡tó la mezcla a 150 °C durante 30 m¡nutos con rad¡ac¡ón de m¡croondas. Se d¡luyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgán¡ca, se secó (MgSO4), se f¡ltró y se evaporó el d¡solvente a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por cromatografía de columna por desorc¡ón súb¡ta (gel de síl¡ce; d¡soluc¡ón 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recog¡eron las fracc¡ones deseadas y se concentraron a vacío para proporc¡onar rac-6-met¡l-6-(3-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l-fen¡l)-5,6-d¡h¡dro-¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-8-¡lam¡na (0,078 g, 56 % de
5
10
15
20
25
30
rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B2
Preparación de rac-6-[3-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil]-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,027 g, 0,023 mmol) a una suspensión agitada de rac-6-(3-bromo- fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,14 g, 0,46 mmol), ácido 5-metoxi-3-piridinilborónico (0,21 g, 1,38 mmol) y carbonato de potasio (0,19 g, 1,38 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 150 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporaron los disolventes a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac 6-[3-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil]-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin- 8-ilamina (0,080 g, 52 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B3
Preparación de rac-6-(3',5'-dicloro-bifenil-3-il)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo-[1,2-a]pirazin-8-ilamina
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,029 g, 0,025 mmol) a una suspensión agitada de rac-6-(3-bromo- fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,15 g, 0,5 mmol), ácido 3,5-diclorofenilborónico (0,11 g, 0,6 mmol) y carbonato de potasio (0,21 g, 1,5 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 60 °C durante 18 h. Después se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97 y después EtOAc/MeOH 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar rac-6-(3',5'-dicloro-bifenil-3-il)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,114 g, 61 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B4
Preparación de (R)-6-metil-6-(3-pirimidin-5-il-fenil)-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]-pirazin-8-ilamina /=\
T
H,N N
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,038 g, 0,033 mmol) a una suspensión agitada de (R)-6-(3-bromo- fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,20 g, 0,66 mmol), ácido pirimidin-5-borónico (0,24 g, 1,97 mmol) y carbonato de potasio (0,27 g, 1,97 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 150 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-6-metil-6-(3-pirimidin-5-il-fenil)-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,112 g, 56 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B5
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,028 g, 0,025 mmol) a una suspensión agitada de (R)-6-(3-bromo- fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,15 g, 0,5 mmol), ácido 3,5-diclorofenilborónico (0,11 g, 0,6 mmol) y carbonato de potasio (0,20 g, 1,5 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura ambiente en 5 nitrógeno. Se agitó la mezcla a 60 °C durante 18 h. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97 y después EtOAc/MeOH 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)- 6-(3',5'-dicloro-bifenil-3-il)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,92 g, 50 % de 10 rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B6
Preparación de [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-fenil]-amida del ácido rac-5-cloro-piridin-2- carboxílico
r=\
T '
HnN N
15 Se añadió ácido 5-cloro-2-piridincarboxílico (108 mg, 0,68 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino (206 mg, 0,75 mmol) en MeOH (3 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de rac-6-(3-amino-fenil)-6-metil-5,6-dihidro- imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (150 mg, 0,62 mmol) en MeOH (3 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. Se trató la mezcla con Na2CO3 sat. y agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa 20 orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 2/98). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporó el disolvente a vacío para proporcionar [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin- 6-il)-fenil]-amida del ácido rac-5-cloro-piridin-2-carboxílico (0,145 g, 61 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B7
25 Preparación de (R)-6-(2-fluoro-5-pirimidin-5-il-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,009 g, 0,0077 mmol) a una suspensión agitada de (R)-6-(5-bromo-2- fluoro-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,05 g, 0,15 mmol), ácido pirimidin-5-borónico (0,06 g, 0,46 mmol) y carbonato de potasio (0,06 g, 0,46 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml) y etanol (0,2 ml) a temperatura 30 ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 150 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío. Se trituró el residuo con dietil éter, se filtró y se secó a vacío para proporcionar (R)-6-(2-fluoro- 35 5-pirimidin-5-il-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]-pirazin-8-ilamina (0,015 g, 30 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B8
Preparación de [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil-amida del ácido (R)-5-cloro- piridin-2-carboxílico
5
10
15
20
25
30
35
40
Se añadió ácido 5-cloro-2-piridincarboxílico (0,07 mg, 0,45 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino (134 mg, 0,49 mmol) en MeOH (3 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de (R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-metil-
5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (105 mg, 0,4 mmol) en MeOH (3 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. Se trató la mezcla con Na2CO3 sat. y agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentraron a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 2/98). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporó el disolvente a vacío. Se trituró el residuo con dietil éter, se filtró y se secó a vacío para proporcionar [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido (R)-5-cloro- piridin-2-carboxílico (0,068 g, 42 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B9
Preparación de [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido (R)-5-metoxi- pirazin-2-carboxílico
Se añadió ácido 5-metoxi-pirazin-2-carboxílico (0,105 mg, 0,68 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino (205 mg, 0,74 mmol) en MeOH (3 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de (R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-metil-
5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (105 mg, 0,4 mmol) en MeOH (3 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se trató la mezcla con Na2CO3 sat. y agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron los disolventes a vacío. Se trituró el residuo con DIPE, se filtró y se secó a vacío para proporcionar [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido (R)-5-metoxi- pirazin-2-carboxílico (0,100 g, 41 % de rendimiento) como un sólido amarillo.
Ejemplo B10
Preparación de [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido (R)-5-fluoro- piridin-2-carboxílico
Se añadió ácido 5-fluoro-2-piridincarboxílico (0,10 mg, 0,68 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino (205 mg, 0,74 mmol) en MeOH (3 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de (R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-metil-
5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (160 mg, 0,62 mmol) en MeOH (3 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se trató la mezcla con Na2CO3 sat. y agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron los disolventes a vacío. Se trituró el residuo con dietil éter, se filtró y se secó a vacío para proporcionar [3-(8-amino-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido (R)-5-fluoro- piridin-2-carboxílico (0,088 g, 37 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B11
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Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,051 g, 0,044 mmol) a una suspensión agitada de (R)-6-(5-bromo-2,4- difluoro-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,30 g, 0,88 mmol), ácido pirimidin-5-borónico (0,33 g, 2,64 mmol) y carbonato de potasio (0,365 g, 2,64 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y etanol (0,4 ml) a temperatura ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 150 °C durante 30 minutos con radiación de microondas. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97 y después MeOH en EtOAc 20/80). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío. Se trituró el producto con dietil éter, se filtró y se secó a vacío para proporcionar (R)-6-(2,4-difluoro-5-pirimidin-5-il-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,110 g, 37 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B12
Preparación de (R)- 6-[5-(5-cloro-piridin-3-il)-2,4-difluoro-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,034 g, 0,029 mmol) a una suspensión agitada de (R)-6-(5-bromo-2,4- difluoro-fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,20 g, 0,59 mmol), ácido 5-cloropiridin-3-borónico (0,138 g, 0,88 mmol) y carbonato de potasio (0,243 g, 1,76 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml) y etanol (0,6 ml) a temperatura ambiente en nitrógeno. Se agitó la mezcla a 80 °C durante 24 h. Después se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporaron los disolventes a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío. Se trituró el producto con DIPE, se filtró y se secó a vacío para proporcionar (R)- 6-[5-(5-cloro-piridin-3-il)-2,4-difluoro- fenil)-6-metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (0,125 g, 57 % de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo B13
Preparación de (R)-N-{3-[8-amino-2-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]-pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5-fluoropiridin-2- carboxamida
Se añadió tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (17 mg, 0,015 mmol) a una suspensión agitada de (R)-[2-bromo-6-(2- fluoro-5-{[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de terc-
butilo (0,085 g, 0,15 mmol) y cianuro de cinc (0,020 g, 0,17 mmol) en DMF (1,52 ml). Se agitó la mezcla a 110 °C durante 16 horas. Se absorbió la mezcla en EtOAc y se lavó con agua. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se trató el residuo con cianuro de sodio (0,015 g, 0,3 mmol), yoduro de potasio (0,025 g, 0,15 mmol), yoduro de cobre (0,036 g, 0,19 mmol) y N, N'-dimetiletilendiamina (0,029 ml, 0,26 mmol) en tolueno (2 ml). Se agitó la mezcla de reacción a 110 °C durante 5 horas. Se evaporó el disolvente a vacío, se diluyó el residuo con agua y se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; disolución 7 M de amoníaco en MeOH en DCM 0/100 a 10/90). Se recogieron las fracciones deseadas y se concentraron a vacío para proporcionar (R)-N-{3-[8-amino-2-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4- fluorofenil}-5-fluoropiridin-2-carboxamida (7 mg, 11 % de rendimiento) como un aceite.
Ejemplo B14
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fluoropiridin-2-carboxamida (compuesto 59)
Se añadió ácido trifluoroacético (2,5 ml, 32,67 mmol) a una disolución agitada de ('R)-[2-cloro-3-ciano-6-(2-fluoro-5- {[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (0,040 g, 0,074 mmol) en DCM (5 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó el disolvente a vacío y se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se trituró el residuo con una mezcla 1/1 de heptano/DIPE para proporcionar (R)-W-{3-[8-amino-2-cloro-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5-
fluoropiridin-2-carboxamida (26 mg, 80 % de rendimiento).
Ejemplo B15. Preparación de (R)-W-{3-[8-amino-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5- fluoropiridin-2-carboxamida (compuesto 66).
Se añadió ácido trifluoroacético (1 ml, 13,06 mmol) a una disolución agitada de ('R)-[3-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5- fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (0,056 g, 0,11 mmol) en DCM (2 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se trituró el residuo con una mezcla 1/1 de heptano/DIPE para proporcionar (R)-A/-{3-[8-amino-3-ciano-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5-fluoropiridin-2-carboxamida (35 mg, 78 % de rendimiento).
Ejemplo B16. Preparación de (R)-A/-{3-[8-amino-2-cloro-3-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4- fluorofenil}-5-fluoropiridin-2-carboxamida (compuesto 72).
Se añadió ácido trifluoroacético (0,34 ml, 5,01 mmol) a una disolución agitada de ('R)-[2-cloro-3-cloro-6-(2-fluoro-5- {[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (0,044 g, 0,080 mmol) en DCM (0,77 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó el disolvente a vacío y se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se trituró el residuo con una mezcla 1/1 de heptano/DIPE para proporcionar (R)-A/-{3-[8-amino-2-cloro-3-cloro-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5-
fluoropiridin-2-carboxamida (14 mg, 39 % de rendimiento).
Ejemplo B17. Preparación de (R)-A/-{3-[8-amino-3-difluorometil-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4- fluorofenil}-5-fluoropiridin-2-carboxamida (compuesto 77).
Se añadió ácido trifluoroacético (0,48 ml, 6,25 mmol) a una disolución agitada de ('R)-[3-difluorometil-6-(2-fluoro-5- {[(5-fluoropiridin-2-il)carbonil]amino}fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato de ferc-butilo (0,053
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g, 0,09 mmol) en DCM (0,96 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó el disolvente a vacío y se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 sat. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. Se trituró el residuo con una mezcla 1/1 de heptano/DIPE para proporcionar (R)-W-{3-[8-amino-3-difluorometil-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-6-il]-4-fluorofenil}-5-
5 fluoropiridin-2-carboxamida (36 mg, 84 % de rendimiento).
Ejemplo B18. Preparación de (R)-[2-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-metoxi-pirazin)-carbonil]amino}-fenil)-6-metil-5,6- dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8-il]carbamato compuesto 79.
Se añadió ácido 5-metoxi-pirazin-2-carboxílico (0,044 mg, 0,28 mmol) a una disolución de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi- 10 1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino (86 mg, 0,31 mmol) en MeOH (3 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla a 0 °C y se añadió una disolución de (R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2ciano-6- metil-5,6-dihidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-ilamina (80 mg, 0,28 mmol) en MeOH (3 ml). Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se trató la mezcla con Na2CO3 sat. y agua y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por 15 cromatografía de columna por desorción súbita (sílice; NH3 7 N en MeOH en DCM 0/100 a 3/97). Se recogieron las fracciones deseadas y se evaporaron los disolventes a vacío. Se trituró el residuo con DIPE, se filtró y se secó a vacío a (R)-[2-ciano-6-(2-fluoro-5-{[(5-metoxi-pirazin)-carbonil]amino}-fenil)-6-metil-5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8- il]carbamato (0,013 g, 11 % de rendimiento) como un sólido amarillo.
Compuestos 1 a 80 en las Tablas 1-2 enumera los compuestos que se prepararon por analogía con los Ejemplos 20 anteriores. Cuando no se indica forma de sal, se obtuvo el compuesto como una base libre. “Ej. N.°” se refiere al número del Ejemplo según el que se sintetizó el compuesto. “Comp. N.°” significa número del compuesto.
Tabla 1
- /=\ y- Ln. HrhT N 6Y ] Ar x'^x3
- Comp. N. °
- Ej. N. ° X1 X3 ---L-Ar estereoquímica C6
- 1
- B1 CH CH "i: r.N N RS
- 2
- B2 CH CH ... .0 : t ' ■'N' RS
- 3
- B3 CH CH ^ CI ir CI RS
- 4
- B4 CH CH "í r.N N R
- 5
- B5 CH CH V. CI CI R
- 6
- B6 CH CH RS
- O "rArN*. H |l
- 7
- B7 CF CH "i: ;n N *R
- 8
- B8 CF CH 0 ''NA-,rN*- H || , V'CI *R
- 9
- B9 CF CH 0 '~N U ir N, H 1 ^ 'N OMe *R
- 10
- B10 CF CH O ''NA-rN^- H | *R
- 11
- B11 CF CF "i: ;n N *R
- 12
- B12 CF CF •. Cl : t N *R
- 13
- B8 CH CH O A. H ( J. "CN R
- 14
- B9 CH CH 0 ''NA-,rN*- H || , """"Cl R
- 15
- B8 CH CH o "NAirN^ H II cK ^•::Í" ’'V"CI R
- 16
- B8 CH CH o •'N JirN< H 1 'N ’ OMe R
Tabla 2
- Comp. N. °
- Ej. N. ° R1 R2 R3 ---L-Ar Estereoquímica C6
- 17
- B9 H H Me O - N h i : : OMe R
- 18
- B9 H H Me O ...N , h i :i "CN R
- 19
- B9 H H Me 0 ''NA-,rN^ H || , cr " a R
- 20
- B9 H H Me 0 ''NA-,rN^ H || , F V'CI R
- 21
- B9 H H Me O N, N r x'i H J. ,1 Cl "CN R
- 22
- B8 H H Me O N, N r x'i H I ,1 F" "CN R
- 23
- B9 H H Me O H J " N' OEt R
- 24
- B8 CF3 H Me O "NAtN- ' ' " 'A> ' " F R
- 25
- B8 CF3 H Me O "NAirN^ cK R
- 26
- B8 CF3 H Me o H 1 "N' OMe R
- 27
- B6 H H CHF2 O ''NA-rN^- H | RS
- 28
- B6 H H CHF2 O ''NA-rN^- H | *R
- 29
- B6 H H CHF2 O ''NA-rN^- H | *S
- 30
- B6 H H CHF2 RS
- O "rArN*. H |l cr
- 31
- B6 H H CHF2 o "NAirN^ H II CK ^•::Í"’V'CI *R
- 32
- B6 H H CHF2 0 ■'NA-,rN*- H II , cr " a *S
- 33
- B6 H H CHF2 0 ''NA-,rN^ H || , F V'CI RS
- 34
- B6 H H CHF2 0 '~N U ir N, H | ^ "N ” OMe RS
- 35
- B6 H H CHF2 0 '~N U ir N, H | ^ "N ” OMe *R
- 36
- B6 H H CHF2 O H 1 'N ’ OMe *S
- 37
- B8 CF3 H Me O -NA -N F H N r R
- 38
- B8 CF3 H Me O ..N N V H l’-d R
- 39
- B8 CF3 H Me 0 "'N '11' - 'N H T¿ V' f3c "° R
- 40
- B8 CF3 H Me 0 -- A. N h c=. ;s R
- 41
- B8 CF3 H Me 0 •-nA...n N y, H M R
- 42
- B9 H H Me O -NA -N F H N r R
- 43
- B9 H H Me O ..N N V H l’-d R
- 44
- B9 H H Me 0 "'N '11' - -N H T¿ V' F-..C ° R
- 45
- B9 H H Me 0 -- A. N H C;. -S R
- 46
- B9 H H Me 0 -*n A ..n N y, H M R
- 47
- B9 CHF2 H Me O •-NJírx H 1 , "N' OMe R
- 48
- B9 CHF2 H Me O ''NA-rN^- H | ''T R
- 49
- B9 CHF2 H Me O „ N-. N r x H i ,1 "CN R
- 50
- B9 CHF2 H Me 0 X. . N.. h i : ~CI R
- 51
- B9 CHF2 H Me 0 --N'11 -N F ¡ N F R
- 52
- B9 Cl H Me o •-NJírx H 1 , "N ’ OMe R
- 53
- B9 Cl H Me O "n\n- H .1 R
- 54
- B9 Br H Me O "n\n- H .1 R
- 55
- B9 Br H Me O ''NJ iiN;- H 1 , 'N ’ OMe R
- 56
- B13 CN H Me O ''NA-rN^. H | 'T R
- 57
- B8 H Cl Me R
- O H 1 , "N' OMe
- 58
- B8 H Cl Me O "n\n- H .1 R
- 59
- B14 Cl CN Me O ■'NA-rN>- H 1 'T R
- 60
- B14 Cl CN Me 0 '~N U ir N, H | ^ "N ” OMe R
- 61
- B14 Cl CN Me 0 ■'NA-,rN^ H || , """"Cl R
- 62
- B14 Cl CN Me o „ N-. N r """i H [ ,1 "CN R
- 63
- B14 Cl CN Me 0 ■-N'11 -N F ¡ N F R
- 64
- B15 H CN Me o •'N JirN< H 1 "N ’ OMe R
- 65
- B15 H CN Me O -,na. .n r H N r R
- 66
- B15 H CN Me O ''NA-rN^- H | R
- 67
- B15 H CN Me O „ N-. N r “’i H [ ,1 "CN R
- 68
- B15 H CN Me 0 ''NA-,rN^ H || , ""'Cl R
- 69
- B16 Cl Cl Me o VM.X, ... N , h i :i "CN R
- 70
- B16 Cl Cl Me R
- O -,na. .n r H N r
- 71
- B16 Cl Cl Me 0 ''NA-,rN*- H || , """"'Cl R
- 72
- B16 Cl Cl Me o ''NA-rN^- H | R
- 73
- B16 Cl Cl Me 0 H 1 ^ "N ” OMe R
- 74
- B17 H CHF2 Me 0 ■'NA-,rN^ H || , """Cl R
- 75
- B17 H CHF2 Me o ...N , h i :i "CN R
- 76
- B17 H CHF2 Me O ''N\N* H 1 , "N ’ OMe R
- 77
- B17 H CHF2 Me O "NAtN- " F R
- 78
- B17 H CHF2 Me O -.JL. -N F H N r R
- 79
- B18 CN H Me 0 '~N U ir N, H | ^ "N OMe R
- 80
- B18 CN H Me O N, N r '"'i H i ,1 "CN R
C. Parte analítica LCMS
Para caracterización por (LC)MS de los compuestos de la presente invención, se usaron los siguientes métodos.
5 Procedimiento general A
Se realizó la medición UPLC (Cromatografía Líquida de Ultra alta Resolución, por sus siglas en inglés) usando un sistema UPLC Acquity (Waters) que comprendía un organizador de muestras, una bomba binaria con desgasificador, un horno de cuatro columnas, un detector de haz de diodos (DAD, por sus siglas en inglés) y una columna como se especifica en los respectivos métodos. Se llevó el flujo de la columna al espectrómetro MS. El
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detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electrospray. Se adquirieron espectros de masas en un detector SQD de cuadrupolo único barriendo de 100 a 1000 en 0,1 segundo usando un retardo intercanal de 0,08 segundo. El voltaje de la aguja capilar fue 3,0 kV. El voltaje del cono fue 25 V para modo de ionización positivo y 30 V para modo de ionización negativo. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La temperatura de la fuente se mantuvo a 140 °C. Se realizó la adquisición de los datos con software MassLynx-Openlynx.
Método 1
Además del procedimiento general: Se llevó a cabo UPLC de fase inversa en una columna BEH-C18 (1,7 |jm, 2,1 x 50 mm) de Waters, con un caudal de 1,0 ml/min., a 50°C sin división al detector de MS. Las condiciones del gradiente usadas fueron: 95 % de A (acetato de amonio 6,5 mM en H2O/acetonitrilo 95/5), 5 % de B (acetonitrilo), a 40 % de A, 60 % de B en 3,8 minutos, a 5 % de A, 95 % de B en 4,6 minutos, mantenido hasta 5,0 minutos. Volumen de inyección 2 jl.
Método 2
Además del procedimiento general: Se llevó a cabo UPLC de fase inversa en una RRHD Eclipse Plus-C18 (1,8 jm, 2,1 x 50 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 50°C sin división al detector de MS. Las condiciones del gradiente usadas fueron: 95 % de A (acetato de amonio 6,5 mM en H2O/acetonitrilo 95/5), 5 % de B (acetonitrilo), a 40 % de A, 60 % de B en 7,0 minutos, a 5 % de A, 95 % de B en 8,6 minutos, mantenido hasta 9,0 minutos. Volumen de inyección 2,0 jl.
Método 3
Mismo gradiente RP usado que en el método 1 usando una columna RRHD Eclipse Plus-C18 (1,8 jm, 2,1 x 50 mm), de Agilent, en vez de columna BEH.
Procedimiento general B
Se realizó la medición de HPLC usando un sistema HP 1100 (Agilent Technologies) que comprendía una bomba binaria con desgasificador, un automuestreador, un horno de columnas, un detector de haz de diodos (DAD) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. Se dividió el flujo de la columna al espectrómetro MS. El detector de MS (SQD o TOF) se configuró con una fuente de ionización por electrospray. La temperatura de la fuente se mantuvo a 140 °C. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. Se realizó la adquisición de los datos con software MassLynx-Openlynx.
B1: Se adquirieron los espectros de masas en un detector de SQD de cuadrupolo único por barrido de 100 a 1000 en 0,1 segundo usando un retardo intercanal de 0,08 segundo. El voltaje de la aguja capilar fue 3,0 kV.
B2: Se adquirieron los espectros de masas en un detector de tiempo de vuelo (TOF, por sus siglas en inglés) por barrido de 100 a 750 en 0,5 segundos usando un tiempo de permanencia de 0,3 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 2,5 kV para modo de ionización positivo y 2,9 kV para modo de ionización negativo. El voltaje del cono fue 20 V para los modos de ionización tanto positivo como negativo. Leucine-Enkephaline fue la sustancia patrón usada para la calibración interna del detector de masas
Método 4
Además del procedimiento general B1: Se llevó a cabo HPLC de fase inversa en una columna Eclipse Plus-C18 (3,5 jm, 2,1 x 30 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 60°C sin división al detector de MS. Las condiciones del
gradiente usadas fueron: 95 % de A (acetato de amonio 6,5 mM en H2O/acetonitrilo 95/5), 5 % de B (mezcla de
acetonitrilo / metanol, 1/1), a 100 % de B en 5,0 minutos, mantenido hasta 5,15 minutos y equilibrado a las condiciones iniciales a 5,30 minutos hasta 7,0 minutos. Volumen de inyección 2 jl. El voltaje del cono fue 20 V para modo de ionización positivo y 30 V para modo de ionización negativo.
Método 5
Además del procedimiento general B1: Se llevó a cabo HPLC de fase inversa en una columna Eclipse Plus-C18 (3,5 jm, 2,1 x 30 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 60°C sin división al detector de MS. Las condiciones del
gradiente usadas fueron: 95 % de A (acetato de amonio 6,5 mM en H2O/acetonitrilo 95/5), 5 % de B (acetonitrilo /
metanol, 1/1), mantenido 0,2 minutos, a 100 % de B en 3,0 minutos, mantenido hasta 3,15 minutos y equilibrado a las condiciones iniciales a 3,30 minutos hasta 5,0 minutos. Volumen de inyección 2 jl. El voltaje del cono fue 20 V y 50 V para modo de ionización positivo y 30 V para modo de ionización negativo.
Procedimiento general C
Se realizó la medición de LC usando un sistema Acquity UPLC (Waters) que comprendía una bomba binaria, un organizador de muestras, un calentador de columna (fijado a 55 °C), un detector de haz de diodos (DAD) y una
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columna como se especifica en los respectivos métodos a continuación. Se dividió el flujo de la columna a un espectrómetro de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electrospray. Se adquirieron los espectros de masas por barrido de 100 a 1000 en 0,18 segundos usando un tiempo de permanencia de 0,02 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3,5 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 140 °C. El voltaje del cono fue 10 V para modo de ionización positivo y 20 V para modo de ionización negativo. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. Se realizó la adquisición de los datos con un sistema de datos Waters-Micromass MassLynx- Openlynx.
Método 6
Además del procedimiento general C, se llevó a cabo UPLC de fase inversa (Cromatografía Líquida de Ultra alta Resolución) en una columna C18 híbrida de etilsiloxano/sílice con puente (BEH) (1,7 pm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases móviles (acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase móvil B: acetonitrilo) para llevar a cabo una condición de gradiente de 95 % de A y 5 % de B a 5 % de A y 95 % de B en 1,3 minutos y mantenido durante 0,7 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,75 ml.
Procedimiento general D
Se realizó la medición de LC usando un sistema UPLC (Cromatografía Líquida de Ultra alta Resolución) Acquity (Waters) que comprendía que comprendía una bomba binaria con desgasificador, un automuestreador, un detector de haz de diodos (DAD) y una columna como se especifica en los respectivos métodos a continuación, se mantiene la columna a una temperatura de 40°C. Se llevó el flujo de la columna a un detector de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electrospray. Se adquirieron los espectros de masas en un detector Quattro (espectrómetro de masas de triple cuadrupolo de Waters) por barrido de 100 a 1000 en 0,2 segundos usando un retardo intercanal de 0,1 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 130 °C. El voltaje del cono fue 20 V para el modo de ionización positivo y negativo. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. Se realizó la adquisición de los datos con software MassLynx-Openlynx (Waters).
Método 7
Además del procedimiento general D: Se llevó a cabo UPLC de fase inversa en una columna Fenilo-Hexilo de Waters Acquity BEH (híbrido de etilsiloxano/sílice con puente) (1,7 pm, 2,1 x 100 mm) con un caudal de 0,343 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil A: 95 % de acetato de amonio 7 mM / 5 % de acetonitrilo; fase móvil B: 100 % de acetonitrilo) para llevar a cabo una condición de gradiente de 84,2 % de A y 15,8 % de B (mantenido durante 0,49 minutos) a 10,5 % de A y 89,5 % de B en 2,18 minutos, mantenido durante 1,94 min y de nuevo a las condiciones iniciales en 0,73 min., mantenido durante 0,73 minutos. Se usó un volumen de inyección de 2 ml.
Puntos de fusión
Los valores son valores máximos o intervalos de fusión y se obtienen con las incertidumbres experimentales que habitualmente se asocian a este método analítico.
Aparato Mettler FP 81HT / FP90 (indicado por FP90 en la Tabla 3)
Para una serie de compuestos, se determinaron los puntos de fusión en tubos capilares abiertos en un aparato Mettler FP62 o un Mettler FP81HT / FP90. Se midieron los puntos de fusión con un gradiente de temperatura de 1, 3, 5 o 10 °C/minuto. La temperatura máxima fue 300 °C. Se leyó el punto de fusión de una pantalla digital.
DSC823e (indicado por DSC en la Tabla 3)
Para una serie de compuestos, se determinaron los puntos de fusión con un DSC823e (Mettler-Toledo). Se midieron los puntos de fusión con un gradiente de temperatura de 30 °C/minuto. La temperatura máxima fue 400 °C.
Tabla 3: Datos analíticos - Rt significa tiempo de retención (en minutos), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, método se refiere al método usado para (LC) MS.
- Comp. N. °
- Rt [M+H]+ Método Punto de fusión
- 1
- 0,56 305 1 208.7 °C (FP90)
- 2
- 1,05 334 1 203.1 °C (FP90)
- 3
- 2,60 371 1 221.9 °C (FP90)
- 4
- 0,60 305 3 191.9 °C (FP 90)
- 5
- 4,07 371 2 n. d.
- 6
- 1,54 381 3 222.7 °C (FP 90)
- Comp. N. °
- Rt [M+H]+ Método Punto de fusión
- 7
- 0,87 323 3 n. d.
- 8
- 1,72 399 3 105.7°C (FP 62)
- 9
- 1,43 396 3 117.8 °C (FP 62)
- 10
- 1,43 383 3 211.2 °C (FP 62)
- 11
- 1,07 341 3 126.2 °C (FP 90)
- 12
- 1,89 374 3 112.2 °C (FP 90)
- 13
- 2,48 372 4 140.0 °C (FP 90)
- 14
- 1,49 381 3 114.5 °C (FP 90)
- 15
- 1,57 415 3 n. d.
- 16
- 1,23 378 3 n. d.
- 17
- 2,61 395 4 102.2 °C (FP 90)
- 18
- 1,33 390 3 229.5 °C (FP 90)
- 19
- 1,68 433 3 139.4 °C (FP 90)
- 20
- 2,39 417 5 92.2 °C (FP 90)
- 21
- 1,38 424 3 n. d.
- 22
- 2,08 408 4 n. d.
- 23
- 1,72 410 3 99.0 °C (FP 90)
- 24
- 0,95 451 6 120.05 °C (DSC)
- 25
- 1,00 501 6 X °C (DSC)
- 26
- 0,92 464 6 X °C (DSC)
- 27
- 1,91 419 3 n. d.
- 28
- 2,42 419 7 n. d.
- 29
- 2,42 419 7 n. d.
- 30
- 2,21 469 3 n. d.
- 31
- 2,58 469 7 n. d.
- 32
- 2,58 469 7 n. d.
- 33
- 2,04 453 3 >300 °C (FP 90)
- 34
- 1,87 432 3 >300 °C (FP 90)
- 35
- 2,39 432 7 n. d.
- 36
- 2,39 432 7 n. d.
- 37
- 0,89 472 6 n. d.
- 38
- 0,84 437 6 n. d.
- 39
- 1,03 505 6 n. d.
- 40
- 0,87 439 6 n. d.
- 41
- 0,92 451 6 145.06 °C (DSC)
- 42
- 1,24 404 3 94.0 °C (FP 90)
- 43
- 1,92 369 4 103.7 °C (FP 90)
- 44
- 2,48 437 5 157.1 °C (FP 90)
- 45
- 2,05 371 4 138.2 °C (FP 90)
- 46
- 2,53 383 4 102.3 °C (FP 90)
- Comp. N. °
- Rt [M+H]+ Método Punto de fusión
- 47
- 1,99 446 3 141.2 °C (FP 90)
- 48
- 2,03 433 3 179.9 °C (FP 90)
- 49
- 1,95 440 3 181.5 °C (FP 90)
- 50
- 2,33 449 3 100.2 °C (FP 90)
- 51
- 1,87 454 3 93.8 °C (FP 90)
- 52
- 0,83 430 6 n. d.
- 53
- 0,85 417 6 207.96 °C (DSC)
- 54
- 0,88 461 6 n. d.
- 55
- 0,9 474 6 n. d.
- 56
- 0,85 408 6 n. d.
- 57
- 0,91 430 6 n. d.
- 58
- 0,92 417 6 n. d.
- 59
- 1 442 6 n. d.
- 60
- 0,99 455 6 n. d.
- 61
- 1,07 458 6 n. d.
- 62
- 0,97 449 6 n. d.
- 63
- 0,95 463 6 n. d.
- 64
- 0,86 421 6 n. d.
- 65
- 0,83 429 6 n. d.
- 66
- 0,87 408 6 n. d.
- 67
- 0,85 415 6 n. d.
- 68
- 0,94 424 6 n. d.
- 69
- 1,03 458 6 n. d.
- 70
- 1,00 472 6 n. d.
- 71
- 1,08 467 6 n. d.
- 72
- 1,05 451 6 n. d.
- 73
- 1,04 464 6 n. d.
- 74
- 0,94 449 6 n. d.
- 75
- 0,85 440 6 247.82 °C (DSC)
- 76
- 0,86 446 6 n. d.
- 77
- 0,87 433 6 n. d.
- 78
- 0,83 454 6 n. d.
- 79
- 0,79 421 6 n. d.
- 80
- 0,77 415 6 n. d.
- n. d., significa no determinado
Métodos SFC/MS:
Procedimiento general A para SFC-MS:
Se realizó la medición SFC usando el sistema analítico de Berger instrument comprende un módulo de control de 5 fluido de doble bomba FCM-1200 para suministrar dióxido de carbono (CO2) y modificador, un muestreador de líquido automático CTC Analytics, un módulo de control térmico TCM-20000 para calentamiento de columna de
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temperatura ambiente a 80°C. Se usó un detector de haz de fotodiodos Agilent 1100 UV provisto de una celda de flujo de alta presión vertical hasta 40 MPa (400 bar). Se dividió el flujo de la columna a un espectrómetro de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización a presión atmosférica. Los siguientes parámetros de ionización para el espectrómetro de masas Waters ZQ fueron: corona: 9 ja, temp., de la fuente: 140°C, cono: 30 V, temp., de la sonda 450 °C, extractor 3 V, gas de desolvatación 400 l/h, gas de cono 70 l/h. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. Se realizó la adquisición de los datos con un sistema de datos Waters-Micromass MassLynx- Openlynx.
Método 1
Además del procedimiento general A: La separación quiral en SFC se llevó a cabo en una columna CHIRALCEL OJ DAICEL (5 jm, 4,6 x 250 mm) a 35°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase móvil es CO2, 30 % de iPrOH (que contiene 0,3 % de iPrNH2) en modo isocrático.
Método 2
Además del procedimiento general A: La separación quiral en SFC se llevó a cabo en una columna CHIRALPAK IC DAICEL (5 jm, 4,6 x 250 mm) con un caudal de 3,0 ml/min. La fase móvil es CO2, 50 % de iPrOH (que contiene 0,3 % de iPrNH2) en modo isocrático.
Procedimiento general B para SFC-MS:
Sistema Analytical SFC de Berger Instruments (Newark, DE, EE. UU.) que comprende un módulo de control de doble bomba (FCM-1200) para suministro de dióxido de carbono (CO2) y modificador, un módulo de control térmico para calentamiento de columna (TCM2100) con control de temperatura en el intervalo 1-150 °C y válvulas de selección de columna (Valco, VICI, Houston, TX, EE. UU.) para seis columnas diferentes. El detector de haz de fotodiodos (Agilent 1100, Waldbronn, Alemania) está provisto de una celda de flujo de alta presión (hasta 40 MPa (400 bar)) y está configurado con un automuestreador CTC LC Mini PAL (Leap Technologies, Carrboro, NC, EE. UU.). Un espectrómetro de masas ZQ (Waters, Milford, MA, EE. UU.) con una interfase de electrospray Z ortogonal está acoplado con el sistema SFC. Se realizó control del instrumento, recogida de datos y tratamiento con una plataforma integrada que consistía en el software SFC ProNTo y software Masslynx.
Método 3
Además del procedimiento general B: La separación quiral en SFC se llevó a cabo en una columna CHIRALCEL OD-H (4,6 x 250 mm) a 30°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase móvil fue 10-40 % MeOH (que contenía 0,2 % de iPrNH2) /CO2 a velocidad 1,6 %/min., después de 40-50 % de MeOH/CO2 a velocidad 5 % y se mantuvo 3,60 min., a 50 %.
Método 4
El mismo gradiente que en el método 3 pero usando columna CHIRALPAK AS-H (4,6 x 250 mm) en su lugar.
Método 5
Además del procedimiento general B: La separación quiral en SFC se llevó a cabo en una columna CHIRALCEL OJ- H (4,6 x 250 mm) a 30°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase móvil fue 15 % de EtOH (que contenía 0,2 % de iPrNH2) /CO2 y se mantuvo 15 min.
Método 6
Además del procedimiento general B: La separación quiral en SFC se llevó a cabo en una columna CHIRALPAK AS- H (4,6 x 250 mm) a 30°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase móvil fue 5 % de MeOH (que contenía 0,2 % de iPrNH2) /CO2 mantenido 16,16 min, después de 5-40 % de MeOH/CO2 a velocidad del 10 % y mantenido 3,34 min., a 50 %.
Tabla 4: Datos SFC analíticos - Rt significa tiempo de retención (en minutos), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, método se refiere al método usado para análisis SFC/MS de compuestos enantioméricamente puros.
- Comp. N. °
- Rt [M+H]+ Área UV % Método Orden de elución de isómero
- 28
- 1,84 419 100 1 A
- 29
- 4,02 419 100 1 B
- 31
- 2,45 469 100 1 A
- 32
- 3,79 469 100 1 B
- 35
- 3,08 432 100 2 A
- Comp. N. °
- Rt [M+H]+ Área UV % Método Orden de elución de isómero
- 36
- 3,70 432 100 2 B
- 37
- 6,62 472 97,6 6 --
- 38
- 2,51 437 100 5 A
- 42
- 6,60 404 98,5 3 --
- 43
- 7,14 369 100 3 --
- 46
- 4,06 383 97,4 4 --
- Orden de elución de isómero: A significa primer isómero que eluye; B significa segundo isómero que eluye.
Rotaciones ópticas:
Las rotaciones ópticas se midieron en un polarímetro Perkin-Elmer 341 con una lámpara de sodio y se indicaron como sigue: [a]° (A, c g/100 ml, disolvente, T °C).
5 [a]AT = (100a) / (l x c) : donde l es el camino óptico en dm y c es la concentración en g/100 ml para una muestra a
una temperatura T (°C) y una longitud de onda A (en nm). Si la longitud de onda de la luz usada es 589 nm (la línea D del sodio), entonces el símbolo D puede usarse en su lugar. El signo de la rotación (+ o -) debería darse siempre. Cuando se usa esta ecuación la concentración y el disolvente se proporcionan siempre entre paréntesis después de la rotación. La rotación se indica usando grados y no se proporcionan unidades de concentración (se asume que es 10 g/100 ml).
Tabla 5: Datos analíticos - Valores de rotación óptica para compuestos enantioméricamente puros.
- Comp. N. °
- ao (°) Longitud de onda (nm) Concentración % p/v Disolvente Temp. (°C)
- 4
- -81,5 589 0,5 DMF 20
- 8
- +86,8 589 0,5 DMF 20
- 10
- +66,4 589 0,62 DMF 20
- 11
- +21,6 589 0,62 DMF 20
- 12
- +95,8 589 0,62 MeOH 20
- 13
- -2,8 589 0,58 DMF 20
- 14
- -47,0 589 0,65 DMF 20
- 17
- + 104,8 589 0,55 DMF 20
- 18
- + 120,0 589 0,55 DMF 20
- 19
- +88,5 589 0,59 DMF 20
- 21
- -28,6 589 0,50 DMF 20
- 23
- +90,8 589 0,52 DMF 20
- 24
- +84,1 589 0,44 DMF 20
- 25
- +81,0 589 0,36 DMF 20
- 26
- +97,9 589 0,26 DMF 20
- 28
- + 150,8 589 0,52 DMF 20
- 29
- -156,8 589 0,50 DMF 20
- 31
- + 131,6 589 0,50 DMF 20
- 32
- -125,3 589 0,52 DMF 20
- 35
- + 171,0 589 0,50 DMF 20
- 36
- -158,8 589 0,53 DMF 20
- 37
- +80,4 589 0,21 DMF 20
- 38
- +76,4 589 0,39 DMF 20
- Comp. N. °
- ao (°) Longitud de onda (nm) Concentración % p/v Disolvente Temp. (°C)
- 39
- +48,3 589 0,26 DMF 20
- 40
- +93,6 589 0,38 DMF 20
- 44
- +60,8 589 0,51 DMF 20
- 45
- +81,9 589 0,53 DMF 20
- 47
- + 105,2 589 0,50 DMF 20
- 48
- +88,9 589 0,58 DMF 20
- 49
- + 121,7 589 0,46 DMF 20
- 50
- + 103,8 589 0,54 DMF 20
RMN
Para una serie de compuestos, se registraron espectros de RMN de 1H en un espectrómetro Bruker DPX-360, en un Bruker DPX-400 o en un Bruker AV-500 con secuencias de pulso estándar, operando a 360 MHz, 400 MHz y 600 5 MHz, respectivamente, usando CLOROFORM-d (cloroformo deuterado, CDCl3) o DMSOd (DMSO deuterado, dimetil-d6 sulfóxido) como disolventes. Los desplazamientos químicos (6) se indican en partes por millón (ppm) relativos a tetrametilsilano (TMS), que se usó como patrón interno.
Tabla 6:
- Comp. N. °
- resultado RMN
- 42
- 1H RMN (400 MHz, CDCls) 6 ppm 1,98 (s, 3 H), 4,41 (d, J=13,6 Hz, 1 H), 5,04 (dd, J=13,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,03 (d, J=2,8 Hz, 1 H), 7,10 (dd, J=12,0, 9,0 Hz, 1 H), 7,25 (t, J=59,9 Hz, 1 H), 7,18 (s, 1 H), 7,24 - 7,27 (m, 1 H), 7,29 (s, 1 H), 7,36 (dd, J=7,4, 2,5 Hz, 1 H), 7,88 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 7,96 (ddd, J=8,9, 4,0, 2,5 Hz, 1 H), 8,72 (s, 1 H), 12,31 (s a, 1 H), 13,25 (s a, 1 H).
- 49
- 1H RMN (500 MHz, CDCla) 6 ppm 1,63 (s, 3 H), 4,38 (d, J=13,0 Hz, 1 H), 4,48 (d, J=12,7 Hz, 1 H), 5,33 (s a, 2 H), 6,65 (t, J=55,8 Hz, 1 H), 7,11 (dd, J=11,7, 8,8 Hz, 1 H), 7,24 (s, 1 H), 7,85 (dd, J=7,1, 2,6 Hz, 1 H), 7,98 - 8,03 (m, 1 H), 8,20 (dd, J=8,1, 1,7 Hz, 1 H), 8,41 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 8,88 (s, 1 H), 9,86 (s a, 1 H).
- 51
- 1H RMN (500 MHz, CDCls) 6 ppm 1,62 (s, 3 H), 4,37 (d, J=13,0 Hz, 1 H), 4,46 (d, J=13,0 Hz, 1 H), 5,29 (s a, 2 H), 6,65 (t, J=55,8 Hz, 1 H), 7,03 (d, J=2,6 Hz, 1 H), 7,07 (dd, J=11,6, 9,0 Hz, 1 H), 7,20 (t, J=60,4 Hz, 1 H), 7,23 (s a, 1 H), 7,76 (dd, J=6,9, 2,9 Hz, 1 H), 7,87 (d, J=2,6 Hz, 1 H), 7,92 (ddd, J=8,8, 4,2, 2,9 Hz, 1 H), 8,66 (s, 1 H).
- 52
- 1H RMN (360 MHz, CDCls) 6 ppm 1,62 (s, 3 H) 4,07 (s, 3 H) 4,25 -4,43 (m, 2 H) 5,23 (s a, 2 H) 6,90 (s, 1 H) 7,08 (dd, J=11,9, 9,0 Hz, 1 H) 7,76 (dd, J=7,0, 2,6 Hz, 1 H) 8,00 (ddd, J=8,7, 4,3, 2,7 Hz, 1 H) 8,15 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 9,00 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 9,51 (s, 1 H).
- 53
- 1H RMN (360 MHz, CDCls) 6 ppm 1,63 (s, 3 H) 4,26 -4,43 (m, 2 H) 6,90 (s, 1 H) 7,08 (dd, J=11,9, 9,0 Hz, 1 H) 7,59 (td, J=8,3, 2,7 Hz, 1 H) 7,79 (dd, J=7,0, 2,6 Hz, 1 H) 8,00 (dt, J=8,8, 3,5 Hz, 1 H) 8,32 (dd, J=8,6, 4,6 Hz, 1 H) 8,45 (d, J=2,9 Hz, 1 H) 9,81 (s, 1 H).
- 56
- 1H RMN (360 MHz, CDCls) 6 ppm 1,63 (s, 3 H) 3,33 (s a, 2 H) 4,46 (c, J=13,1 Hz, 2 H) 7,09 (dd, J=11,9, 8,6 Hz, 1 H) 7,52 (s, 1 H) 7,59 (td, J=8,3, 2,7 Hz, 1 H) 7,82 - 7,96 (m, 2 H) 8,30 (dd, J=8,6, 4,6 Hz, 1 H) 8,42 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 9,82 (s, 1 H).
- 57
- 1H RMN (360 MHz, CDCls) 6 ppm 1,65 (s, 3 H) 4,07 (s, 3 H) 4,21 -4,44 (m, 2 H) 7,01 (s, 1 H) 7,10 (dd, J=11,7, 9,1 Hz, 1 H) 7,75 (dd, J=7,0, 2,6 Hz, 1 H) 7,91 - 8,06 (m, 1 H) 8,16 (d, J=0,7 Hz, 1 H) 9,01 (s, 1 H) 9,51 (s, 1 H).
- 58
- 1H RMN (360 MHz, CDCls) 6 ppm 1,65 (s, 3 H) 4,32 (c, J=13,2 Hz, 2 H) 7,01 (s, 1 H) 7,10 (dd, J=11,7, 8,8 Hz, 1 H) 7,59 (td, J=8,4, 2,9 Hz, 1 H) 7,78 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H) 8,01 (ddd, J=8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1 H) 8,32 (dd, J=8,6, 4,6 Hz, 1 H) 8,45 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 9,81 (s, 1 H).
- 64
- 1H RMN (360 MHz, DMSO-de) 6 ppm 1,52 (s, 3 H) 4,02 (s, 3 H) 4,46 (c, J=13,2 Hz, 2 H) 6,70 (s a, 2 H) 7,20 (dd, J=12,1, 8,8 Hz, 1 H) 7,73 (ddd, J=8,3, 3,8, 3,6 Hz, 1 H) 7,94 (s, 1 H) 8,10 (dd, J=7,7, 2,6 Hz, 1 H) 8,41 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 8,87 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 10,50 (s, 1 H).
- 65
- 1H RMN (360 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 1,51 (s, 3 H) 4,45 (c, J=13,2 Hz, 2 H) 6,69 (s a, 2 H) 7,00 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 7,19 (dd, J=12,3, 9,0 Hz, 1 H) 7,61 - 7,72 (m, 1 H) 7,91 (t, J=58,7 Hz, 1 H) 7,94 (s, 1 H) 8,01 (dd,
5
10
15
20
25
30
35
40
- Comp. N. °
- resultado RMN
- J=7,5, 2,7 Hz, 1 H) 8,40 (d, J=2,9 Hz, 1 H) 10,40 (s, 1 H).
- 66
- 1H RMN (360 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 1,52 (s, 3 H) 4,36 -4,55 (m, 2 H) 6,72 (s a, 2 H) 7,21 (dd, J=12,1, 8,8 Hz, 1 H) 7,72 - 7,80 (m, 1 H) 7,93 - 8,02 (m, 1 H) 7,95 (s, 1 H) 8,10 (dd, J=7,3, 2,6 Hz, 1 H) 8,22 (dd, J=8,8, 4,8 Hz, 1 H) 8,73 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 10,61 (s, 1 H).
- 67
- 1H RMN (360 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 1,52 (s, 3 H) 4,46 (c, J=13,2 Hz, 2 H) 6,71 (s a, 2 H) 7,23 (dd, J=12,1, 8,8 Hz, 1 H) 7,71 - 7,83 (m, 1 H) 7,95 (s, 1 H) 8,12 (dd, J=7,7, 2,6 Hz, 1 H) 8,27 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 8,58 (dd, J=8,1, 1,8 Hz, 1 H) 9,20 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 10,84 (s, 1 H).
Ejemplos farmacológicos
Los compuestos proporcionados en la presente invención son inhibidores de la enzima 1 de escisión de APP de sitio p (BACE1). Se cree que la inhibición de BACE1, una proteasa aspártica, es relevante para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (EA). Se cree que la producción y acumulación de péptidos p-amiloides (Ap) de la proteína precursora de p-amiloide (APP) desempeña una función principal en el comienzo y el progreso de la EA. Se produce Ap de la proteína precursora amiloide (APP) por escisión secuencial del N- y C-terminal del dominio Ap por la p-secretasa y Y-secretasa, respectivamente.
Se espera que los compuestos de Fórmula (I) tengan su efecto sustancialmente en BACE1 debido a su capacidad para inhibir la actividad enzimática. El comportamiento de tales inhibidores ensayados usando un ensayo basado en Transferencia de Energía de Resonancia de Fluorescencia bioquímica (FRET, por sus siglas en inglés) y un ensayo alisa celular en células SKNBE2 descrito a continuación y que son adecuados para la identificación de dichos compuestos y más en particular los compuestos según la Fórmula (I), se muestran en la Tabla 7.
Ensayo basado en FRET bioquímica
Este ensayo es un ensayo basado en la Prueba de Transferencia de Energía de Resonancia de Fluorescencia (FRET). El sustrato para este ensayo es un péptido de 13 aminoácidos derivado de APP que contiene la mutación “sueca” Lys-Met/Asn-Leu del sitio de escisión de la p-secretasa de la proteína precursora de amiloide (APP). Este sustrato también contiene dos fluoróforos: ácido (7-metoxicumarin-4-il)acético (Mca) es un donador fluorescente con longitud de onda de excitación a 320 nm y emisión a 405 nm y 2,4-Dinitrofenilo (Dnp) es un aceptor de inhibidor de la fluorescencia propio. La distancia entre esos dos grupos ha sido seleccionada de manera que, en la excitación de la luz, la energía de fluorescencia del donador sea inhibida de manera significativa por el aceptor, por transferencia de energía de resonancia. En la escisión mediante BACE1, el fluoróforo Mca se separa del grupo inhibidor Dnp, restaurándose el rendimiento completo de la fluorescencia del donador. El incremento en la fluorescencia está relacionado linealmente con la tasa de proteolisis (Koike H et al. J. Biochem. 1999, 126, 235-242).
Brevemente, en un formato de 384 pozos se incuba proteína BACE1 recombinante en una concentración final de 1 |jg/ml durante 120 minutos a temperatura ambiente con 10 jm de sustrato en tampón de incubación (tampón de citrato 40 mM pH 5,0, PEG al 0,04 %, DMSO al 4 %) en ausencia o presencia de compuesto. A continuación, la cantidad de proteolisis se mide directamente por medición de la fluorescencia a T=0 y T=120 (excitación a 320 nm y emisión a 405 nm). Los resultados se expresan en RFU, como diferencia entre T120 y T0. Se fija la mejor curva de ajuste por un método de suma mínima de cuadrados a la representación gráfica de % de control mínimo frente a la concentración de compuesto. De esto se puede obtener un valor de IC50 (concentración inhibidora que produce una inhibición del 50% de la actividad).
LC = Mediana de los valores de control bajo
= Control bajo: Reacción sin enzima
HC = Mediana de los valores de control alto
= Control alto: Reacción con enzima
% Efecto = 100 -[(muestra - LC)/(HC-LC)*100]
% Control = (muestra/HC)*100
% Control mín. = (muestra - LC)/(HC-LC)*100
Los siguientes compuestos ejemplificados se ensayaron esencialmente como se describió anteriormente y mostraron la siguiente actividad:
Tabla 7:
- Comp. N. °
- Ensayo basado en FRET bioquímica
- PIC50
- 1
- 5,01
- 2
- >4,52
- 3
- 4,57
- 4
- >4,52
- 5
- 4,85
- 6
- 6,48
- 7
- 4,70
- 8
- 7,19
- 9
- 6,83
- 10
- 6,67
- 11
- 4,78
- 12
- 4,73
- 13
- 6,78
- 14
- 6,76
- 15
- 6,95
- 16
- 6,14
- 17
- 6,97
- 18
- 7,27
- 19
- 7,31
- 20
- 7,12
- 21
- 7,31
- 22
- 7,02
- 23
- 6,34
- 24
- 6,88
- 25
- 7,33
- 26
- 6,63
- 27
- 6,23
- 28
- 6,53
- 29
- <4,52
- 30
- 6,72
- 31
- 7,26
- 32
- 4,68
- 33
- 6,65
- 34
- 6,43
- 35
- 6,82
- 36
- 4,62
- 37
- 7,33
- 38
- 7,00
- 39
- 6,57
- Comp. N. °
- Ensayo basado en FRET bioquímica
- PIC50
- 40
- 6,64
- 41
- 6,75
- 42
- 6,94
- 43
- 6,73
- 44
- 6,42
- 45
- 6,37
- 46
- 6,42
- 47
- 6,63
- 48
- 6,88
- 49
- 7,01
- 50
- 7,23
- 51
- 6,79
- 52
- 7,01
- 53
- 7,21
- 54
- 7,12
- 55
- 6,95
- 56
- 7,08
- 57
- 7,18
- 58
- 7,12
- 59
- n. d.
- 60
- n. d.
- 61
- n. d.
- 62
- n. d.
- 63
- n. d.
- 64
- 7,33
- 65
- 7,35
- 66
- 7,20
- 67
- 7,41
- 68
- 7,29
- 69
- n. d.
- 70
- n. d.
- 71
- n. d.
- 72
- n. d.
- 73
- n. d.
- 74
- n. d.
- 75
- n. d.
- 76
- n. d.
- 77
- n. d.
- 78
- n. d.
5
10
15
20
25
- Comp. N. °
- Ensayo basado en FRET bioquímica
- PIC50
- 79
- n. d.
- 80
- n. d.
- n. d., significa no determinado
Ensayo alisa celular en células SKNBE2
En dos ensayos alisa se cuantificaron los niveles de Aptotal y Ap42 producidos y secretados en el medio de células SKNBE2 de neuroblastoma humano. El ensayo se basó en las SKNBE2 de neuroblastoma humano que expresan la Proteína Precursora Amiloide de tipo natural (hAPP695). Se diluyeron los compuestos y se añadieron estas células, se incubaron durante 18 horas y después se tomaron mediciones AU42 y AUtotal. Se midieron AUtotal y AU42 por alisa de sándwich. alisa es un ensayo de sándwich que usa AbN/25 de anticuerpo biotinilado unido a perlas recubiertas de estreptavidina y perlas aceptoras conjugadas de Ab4G8 o cAb42/26 de anticuerpo para la detección de AUtotal y AU42, respectivamente. En presencia de AUtotal o AU42, las perlas se acercaron lo suficientemente. La excitación de las perlas donadoras provocó la liberación de moléculas de oxígeno singlete que provoca una cascada de transferencia de energía en las perlas aceptoras, dando como resultado emisión de luz. La emisión de luz se mide después de una incubación de 1 hora (excitación a 650 nm y emisión a 615 nm).
Se fija la mejor curva de ajuste por un método de suma mínima de cuadrados para la representación gráfica de % de control mínimo frente a la concentración de compuesto. De esto se puede obtener un valor de IC50 (concentración inhibidora que produce una inhibición del 50% de la actividad).
LC = Mediana de los valores de control bajo
= Control bajo: células preincubadas sin compuesto, sin Ab biotinilado en el alisa HC = Mediana de los valores de control alto = Control alto: células preincubadas sin compuesto % Efecto = 100 -[(muestra - LC)/(HC-LC)*100]
% Control = (muestra/HC)*100 % Control mín. = (muestra - LC)/(HC-LC)*100
Los siguientes compuestos ejemplificados se ensayaron esencialmente como se describió anteriormente y mostraron la siguiente actividad:
Tabla 8:
- Ensayo alisa celular en células SKNBE2 Ensayo alisa celular en células SKNBE2
- Comp. N. °
- AB42 Afttotal
- PIC50 PIC50
- 1
- 6,72 6,76
- 2
- 5,67 5,63
- 3
- 5,10 5,15
- 4
- 5,11 5,11
- 5
- 5,23 5,30
- 6
- 7,15 7,16
- 7
- 5,56 5,62
- 8
- 7,91 7,96
- 9
- 7,45 7,50
- 10
- 7,23 7,30
- 11
- 5,63 5,71
- Ensayo alisa celular en células SKNBE2 Ensayo alisa celular en células SKNBE2
- Comp. N. °
- AB42 Afttotal
- pIC50 PIC50
- 12
- 5,63 5,66
- 13
- 7,68 7,67
- 14
- 7,60 7,60
- 15
- 7,65 7,67
- 16
- 7,09 7,08
- 17
- 7,76 7,78
- 18
- 8,20 8,25
- 19
- 7,96 8,01
- 20
- 7,76 7,75
- 21
- 8,03 8,02
- 22
- 8,02 8,07
- 23
- 7,60 7,43
- 24
- 7,41 7,47
- 25
- 7,66 7,77
- 26
- 7,07 7,14
- 27
- 6,05 6,11
- 28
- 6,17 6,19
- 29
- <5 <5
- 30
- 6,99 7,03
- 31
- 6,54 6,57
- 32
- <5 <5
- 33
- 6,45 6,56
- 34
- 6,12 6,22
- 35
- 6,35 6,39
- 36
- <5 <5
- 37
- 7,80 7,78
- 38
- 7,37 7,38
- 39
- 6,80 6,80
- 40
- 7,06 7,04
- 41
- 6,92 6,93
- 42
- 7,72 7,70
- 43
- 7,42 7,37
- 44
- 7,02 7,03
- 45
- 7,18 7,17
- 46
- 7,05 7,08
- 47
- 7,39 7,36
- 48
- 7,43 7,44
- 49
- 8,07 8,03
- Ensayo alisa celular en células SKNBE2 Ensayo alisa celular en células SKNBE2
- Comp. N. °
- A642 ABtotal
- pIC50 PIC50
- 50
- 8,13 8,09
- 51
- n. d. n. d.
- 52
- 7,39 7,42
- 53
- 7,44 7,45
- 54
- 7,49 7,45
- 55
- 7,50 7,49
- 56
- 7,68 7,66
- 57
- 7,87 7,83
- 58
- 7,70 7,70
- 59
- n. d. n. d.
- 60
- n. d. n. d.
- 61
- n. d. n. d.
- 62
- n. d. n. d.
- 63
- n. d. n. d.
- 64
- n. d. n. d.
- 65
- n. d. n. d.
- 66
- n. d. n. d.
- 67
- n. d. n. d.
- 68
- n. d. n. d.
- 69
- n. d. n. d.
- 70
- n. d. n. d.
- 71
- n. d. n. d.
- 72
- n. d. n. d.
- 73
- n. d. n. d.
- 74
- n. d. n. d.
- 75
- n. d. n. d.
- 76
- n. d. n. d.
- 77
- n. d. n. d.
- 78
- n. d. n. d.
- 79
- n. d. n. d.
- 80
- n. d. n. d.
Demostración de la eficacia in vivo
Los agentes que disminuyen el péptido Ap de la invención pueden usarse para tratar la EA en mamíferos tales como seres humanos o que muestran alternativamente eficacia en modelos de animales tales como, pero no limitado a, el 5 ratón, la rata o el conejillo de indias. Puede que no se haya diagnosticado en el mamífero la EA, o puede no tener una predisposición genética a la EA, pero puede ser transgénico de manera que la sobreproduzca e incluso eventualmente deposite Ap de una manera similar a la observada en los seres humanos aquejados de EA.
Pueden administrarse agentes que disminuyan el péptido Ap en cualquier forma habitual usando cualquier método habitual. Por ejemplo, pero no limitado a, los agentes que disminuyen el péptido Ap pueden estar en la forma de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
líquido, comprimidos o cápsulas que pueden tomarse por vía oral o por inyección. Pueden administrarse agentes que disminuyen el péptido Ap en cualquier dosis que sea suficiente para reducir significativamente los niveles de péptidos Ap en la sangre, el plasma sanguíneo, el suero, el fluido cerebroespinal (CSF, por sus siglas en inglés) o el cerebro.
Para determinar si la administración aguda de un agente que disminuye el péptido Ap42 reduciría los niveles de péptido Ap in vivo, se usaron roedores no transgénicos, por ejemplo, ratones o ratas. Los animales tratados con el agente que disminuye el péptido Ap se examinaron y se compararon con los no tratados o los tratados con vehículo y se cuantificaron los niveles en el cerebro de Ap42 soluble y Ap total por técnicas habituales, por ejemplo, usando ELISA. Los periodos de tratamiento variaron de horas (h) a días y se ajustaron basándose en los resultados de la disminución de Ap42 una vez que pudo establecerse una cronología del comienzo del efecto.
Se muestra un protocolo típico para disminuir la disminución de Ap42 in vivo, pero es sólo una de muchas variaciones que podían usarse para optimizar los niveles de Ap detectable. Por ejemplo, se formularon los compuestos que disminuyen el péptido Ap en hidroxipropil-p-ciclodextrina al 20 %. Se administraron los agentes que disminuyen el péptido Ap como una dosis oral única (p. o.) o una dosis subcutánea única (s. c.) para animales de ayunaron durante la noche. Después de un cierto tiempo, normalmente 2 o 4 h (como se indica en la Tabla 19), se sacrificaron los animales y se analizaron los niveles de Ap42.
Se recogió sangre por decapitación y desangrado en tubos de recogida tratados con AEDT. Se centrífugo la sangre a 1900 g durante 10 minutos (min.) a 4 °C y se recuperó el plasma y se congeló de manera súbita para posterior análisis. Se retiró el cerebro del cráneo y rombencéfalo. Se retiró el cerebelo y se separaron el hemisferio izquierdo y el derecho. Se almacenó el hemisferio izquierdo a -18 °C para análisis cuantitativo de los niveles de compuesto de ensayo. Se enjuagó el hemisferio derecho con tampón de disolución salina tamponada con fosfato (PBS) y se congeló inmediatamente en nieve carbónica y se almacenó a -80 °C hasta homogenización para ensayos bioquímicos.
Se volvieron a suspender los cerebros de ratón de los animales no transgénicos en 8 volúmenes de DEA (dietilamina) al 0,4 % / NaCl 50 mM que contenía inhibidores de proteasa (Roche-11873580001 o 04693159001) por gramo de tejido, por ejemplo, para 0,158 g de cerebro, se añadieron 1,264 ml de DEA al 0,4 %. Se homogeneizaron todas las muestras en el sistema FastPrep-24 (MP Biomedicals) usando matriz D de lisado (MPBio #6913-100) a 6 m/s durante 20 segundos. Se centrifugaron los homogenados a 221,300 x g durante 50 min. Se transfirieron después los sobrenadantes de alta velocidad resultantes a tubos Eppendorf frescos. Se neutralizaron nueve partes del sobrenadante con 1 parte de Tris-HCl 0,5 M pH 6,8 y se usó para cuantificar AUtotal y AU42.
Para cuantificar la cantidad de AUtotal y AU42 en la fracción soluble de los homogenados de cerebro, se usaron ensayos de inmunoabsorción ligada a enzimas. Brevemente, se prepararon patrones (una dilución de Ap1-40 y Ap1- 42, sintéticos, Bachem) en tubo Eppendorf de 1,5 ml en Ultraculture, con concentraciones finales que oscilaban de 10000 a 0,3 pg/ml. Se incubaron conjuntamente las muestras y los patrones con anticuerpo N-terminal etiquetado con HRPO para detección de AU42 con el anticuerpo 4G8 de medio dominio biotinilado para detección de Autotal. Se añadieron después 50 pl de mezclas de conjugado/muestra o conjugado/patrones a la placa recubierta de anticuerpo (los anticuerpos de captura reconocían de manera sencilla el extremo del C-terminal de AU42, anticuerpo JRF/cAU42/26, para detección de AU42 y el N-terminal de AU, anticuerpo JRF/rAU/2, para detección de AUtotal). Se dejó incubar la placa durante la noche a 4 °C para permitir la formación del complejo anticuerpo-amiloide. Después de esta incubación y posteriores etapas de lavado se terminó la Elisa para cuantificación de AU42 por adición de sustrato de peroxidasa fluorogénica Quanta Blu según las instrucciones del fabricante (Pierce Corp., Rockford, II). Se realizó una lectura después de 10 a 15 min. (excitación 320 nm /emisión 420 nm).
Para detección de AUtotal, se añadió conjugado de peroxidasa de estreptavidina, seguido 60 min., más tarde por una etapa de lavado adicional y adición de sustrato de peroxidasa fluorogénica Quanta Blu según las instrucciones del fabricante (Pierce Corp., Rockford, II). Se realizó una lectura después de 10 a 15 min. (excitación 320 nm /emisión 420 nm).
En este modelo, sería ventajoso al menos el 20 % de reducción de AU42 comparado con animales no tratados.
Los siguientes compuestos ejemplificados se ensayaron esencialmente como se describió anteriormente y presentaron la siguiente actividad:
Tabla 9:
- Comp. N. O
- AP42 (%Ctrl)_Media Aptotal (%Ctrl)_ Media Dosis Vía de administración Tiempo después de administración
- 10
- 45 53 30 mpk s. c. 2 h
- 9
- 57 49 30 mpk s. c. 2 h
- Comp. N. 0
- AP42 (%Ctrl)_Media Aptotal (%Ctrl)_ Media Dosis Vía de administración Tiempo después de administración
- 9
- 40 63 30 mpk p. o. 2 h
- 18
- 38 52 30 mpk p. o. 2 h
- 21
- 33 7 30 mpk s. c. 2 h
- 24
- 50 67 30 mpk s. c. 4 h
Claims (5)
- 51015202530351. Un compuesto de Fórmula (I)
imagen1 o un tautómero o una forma estereoisómera del mismo, en el que:R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6; en el que halo es flúor, cloro o bromo,R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo C1-3, homoarilo y heteroarilo;X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, siempre que no más de dos de los mismos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihaloalquilo C1- 3, ciano, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquiloxi C1.3;L es un enlace o -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno o alquilo C1-3;Ar es homoarilo o heteroarilo;en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquilo C1-3;el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihaloalquilo C1-3 ouna sal de adición o un solvato del mismo. - 2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que:R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, mono-, di- y trifluorometilo, cloro, bromo y ciano;R3 es alquilo C1-3 o mono-, di- y trifluorometilo;X1 y X3 son independientemente CH o CF; X2 y X4 son CH;L es -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;Ar es homoarilo o heteroarilo;en el que homoarilo es fenilo sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3 y alquiloxi C1-3;el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piridazilo, pirazolilo, oxazolilo e isotiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono-, di-y trifluorometilo ouna sal de adición o un solvato del mismo.
- 3. El compuesto según la reivindicación 1, en el que:R1 es hidrógeno, mono-, di- o trifluorometilo, cloro, bromo o ciano;R2 es hidrógeno, cloro, ciano, mono-, di- o trifluorometilo;R3 es metilo, mono- di- o trifluorometilo;X1 es CF; X2, X3, X4 son CH;L es -N(R5)CO-, en el que R5 es hidrógeno;Ar es heteroarilo;5 en el que el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirazilo y pirazolilo, cada uno sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en cloro, flúor, ciano, metilo, metoxi, etoxi, mono-, di-, y trifluorometilo ouna sal de adición o un solvato del mismo.
- 4. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el átomo de carbono sustituido con R3 tiene la configuración R.10 5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como sedefine en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un portador farmacéuticamente aceptable.
- 6. Un procedimiento para preparar una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 5, caracterizado por que un portador farmacéuticamente aceptable se mezcla íntimamente con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.15 7. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso en el tratamiento o laprevención de la enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatía amiloide cerebral, demencia multiinfarto, síndrome de Down, demencia asociada a apoplejía, demencia asociada a enfermedad de Parkinson o demencia asociada a beta-amiloide.
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