ES2651537T3 - Tratamiento y prevención de la enfermedad de Alzheimer (AD) - Google Patents

Abstract

Oxihidróxido de aluminio para su utilización en el tratamiento y la prevención de la enfermedad de Alzheimer (AD), en el que el oxihidróxido de aluminio está contenido en una preparación farmacéutica, y en el que dicha preparación contiene oxihidróxido de aluminio como el único ingrediente eficaz.

Description

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DESCRIPCION

Tratamiento y prevencion de la enfermedad de Alzheimer (AD).

La presente invencion se refiere a medios y metodos para el tratamiento y la prevencion de la enfermedad de Alzheimer (AD).

La AD se caracteriza por la acumulacion aberrante de polipeptidos de amiloide p (Ap) que resulta en la deposicion de p-amiloide. La AD es el trastorno neurodegenerativo mas prevalente, afectando actualmente a 28 millones de personas en todo el mundo. Tfpicamente se presenta con una disfuncion amnesica caractenstica asociada a otros cambios cognitivos, comportamentales y neuropsiquiatricos. La AD se caracteriza por la acumulacion anormal de depositos amiloides intracelulares y extracelulares, estrechamente asociada a astrocitosis y microgliosis extensiva, asf como a neuronas distroficas y perdida neuronal. Estos depositos amiloides consisten principalmente en los peptidos Ap llamados Ap40 y Ap42 derivados de la protema precursora del amiloide (PPA, gi:112927), que se expresa sobre diversos tipos celulares del sistema nervioso. Se considera que los peptidos Ap participan directamente en la patogenesis y progresion de la AD.

Ademas de los depositos de amiloide, los ovillos neurofibrilares (ONF) representan la segunda caractenstica neuropatologica distintiva de la AD, descrita por primera vez por Alois Alzheimer. Estas lesiones se producen en el hipocampo, cortezas de asociacion a la airngdala y determinados nucleos subcorticales. Los ONF se localizan en el citoplasma de las neuronas y estan compuestas de protema Tau hiperfosforilada. La protema Tau es una protema axonal de union a los microtubulos que estimula el ensamblaje y estabilidad de los microtubulos bajo condiciones normales. La hiperfosforilacion de Tau resulta en la perdida de la asociacion a microtubulos y el consiguiente des-ensamblaje de los mismos, que a su vez conduce a un deterioro del transporte axonal y consecuente degeneracion axonal y neuronal. Todavfa no esta claro si la hiperfosforilacion de Tau y la formacion de ovillos constituyen una causa o una consecuencia de la AD.

Ademas de la patologfa de amiloide y Tau/Tau hiperfosforilado, la neuroinflamacion puede considerarse el tercer pilar integral de los cambios fisiopatologicos que provocan la neurodegeneracion en la AD. El fenotipo neuroinflamatorio en la AD se caracteriza por una activacion robusta y generalizada de la microglia y los astrocitos en las regiones cerebrales afectadas, resultando en la expresion endogena de citoquinas proinflamatorias, moleculas de adhesion celular y quimiocinas. Se cree que estos cambios resultan de la reaccion glial a sucesos relacionados con la toxicidad persistente inducida por el amiloide y Tau/Tau hiperfosforilado y los mediadores de los mismos.

Actualmente se cree que una estrategia potencial de tratamiento para la AD y trastornos relacionados podna basarse en la inmunoterapia para prevenir o reducir la acumulacion de agentes neurotoxicos como Ap o Tau/Tau hiperfosforilado.

Diversas estrategias de tratamiento activo y pasivo con diana en Tau/Tau hiperfosforilado han conducido a una reduccion de la deposicion de Tau/Tau hiperfosforilado y cambios neuropatologicos asociados en modelos animales; sin embargo, hasta el momento no se dispone de datos positivos de pacientes humanos de AD. En contraste, se ha producido un numero significativo de fracasos en ensayo clmico en los ultimos anos: "los resultados de los ensayos clmicos de fase III de dos anticuerpos monoclonales, bapineuzumab y solanozumab, con diana en el amiloide p han demostrado poco beneficio clmico a traves del ataque inmunologico sobre el amiloide p en el estadio de demencia de la enfermedad esporadica" (Aisen et al., Nat. Rev. Drug Disc. 12:324325, 20l3; Mullard, Nat. Rev. Drug Disc. 11:657-660, 2012). Tambien otros estudios de modificadores candidatos de la enfermedad planteados mediante hipotesis "tales como farmacos antiinflamatorios, inhibidores y moduladores de secretasa, terapias hormonales, estatinas y otros farmacos han resultado decepcionantes", incluyendo el "fracaso clmico de los dos inhibidores lfderes de secretasa y: semagacestat [...] y avagacestat" (Aisen et al., 2013; Mullard, 2012). Se ha comentado que este pobre resultado clmico de los ensayos clmicos de la AD es "la culminacion de una 'decada perdida' en las pruebas terapeuticas de la enfermedad de Alzheimer, sin exito sustancial desde la autorizacion de la memantina" (Aisen et al., 2013). Durante el curso de estos desarrollos, la FDA estadounidense tambien ha modificado las reglas para la autorizacion de nuevos tratamientos para la AD y ha recomendado la utilizacion de biomarcadores espedficos de la AD, tales como biomarcadores radiologicos que utilizan escaneos PET (por sus siglas en ingles, tomograffa por emision de positrones) (Kozauer et al., N. Engl. J. Med. 368:1170-1171, 2013).

El documento n° WO 94/16327 A1 da a conocer agentes terapeuticos que implican un "canal ionico de protema amiloide". Sin embargo, este concepto de canal ionico de la protema amiloide del documento n° WO 94/16327 A1 no ha sido perseguido posteriormente y finalmente ha sido cuestionado cientificamente (Sokolov et al., J. Gen. Physiol. 128:637-647, 2006; comentario por Eliezer, J. Gen. Physiol. 128:631-633, 2006).

Ademas, las ensenanzas del documento n° WO 94/16327 A1 implican una interaccion activa de los iones de Al con potenciales canales ionicos de Ap in vivo, que inhiben de esta manera dichos canales. De esta manera, con el fin de que el aluminio cumpla con esta funcion, el compuesto debe alcanzar el cerebro como sitio de actividad

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a las concentraciones propuestas. En el cerebro humano los niveles normales de aluminio se encuentran comprendidos entre 0,25 y 0,75 mg/kg de peso humedo, conteniendo la materia gris (responsable principal de regular las funciones cognitivas afectadas por la AD) aproximadamente el doble de la concentracion observada en la materia blanca (The EFSA Journal 754:24-88, 2O08; Apendice al EFSA Journal 754:1-34, 2008, opinion, "Seguridad del aluminio procedente de la ingesta en la dieta"). Hay evidencia de que a mayor edad, las concentraciones de aluminio podnan incluso incrementarse en el tejido cerebral humano. De manera similar, algunos estudios indican ademas que los cerebros procedentes de pacientes de AD muestran niveles de Al mas elevados que los cerebros de control sanos (revision en Yokel, NeuroToxicology 21:813-828, 2000). De esta manera, la concentracion de Al terapeuticamente activa que se sugiere ya se encuentra presente en el cerebro sano y en el cerebro enfermo (en el intervalo de la formulacion de uso pretendida tal como se indica en el documento n° WO 94/16327 A1, reivindicacion 12: 0,01 a 10 mg/kg). Ademas, la biodisponibilidad del Al en el cerebro despues de la incorporacion parenteral y oral se mantiene baja basandose en mecanismos de influjo/eflujo altamente eficientes y activamente regulados y requiere dosis perifericas elevadas para alcanzar las concentraciones cerebrales terapeuticas sugeridas. Por lo tanto, no presenta una base cientffica plausible que un incremento adicional del Al periferico conduzca a los niveles cerebrales adicionales de Al requeridos para ejercer efectos terapeuticamente beneficiosos directos sin inducir potenciales efectos toxicos.

Ademas, las figuras 7 y 8 de dicha solicitud dan a conocer que el oxihidroxido de aluminio de aplicacion topica es capaz de retrasar el declive cognitivo significativamente en un modelo transgenico de APP de enfermedad de Alzheimer (Tg2576) sin modificar significativamente los niveles cerebrales de Ap. Ello implica un mecanismo independiente de APP/Ap que subyace a los efectos funcionales beneficiosos ejercidos por el oxihidroxido de aluminio en este modelo de AD.

El documento n° WO 99/27944 A1 da a conocer vacunas para la AD basadas esencialmente en la presencia de un agente eficaz para inducir una respuesta inmunogena contra Ap. El documento n° WO 2011/120924 A1 se refiere a una vacuna de Ap, que esencialmente se basa en el peptido Ap1-6 unido a una partfcula de tipo vftico. Los documentos n° WO 2006/005707 A2, n° WO 2009/149486 A2 y n° WO 2009/149485 A2 dan a conocer peptidos mimotopos de Ap para la utilizacion en vacunas para la prevencion y el tratamiento de la AD.

Heneka et al. (Nature 493 (7434):674-678, 2012) proponen el tratamiento de la AD mediante la inhibicion de NLRP3 con el fin de reducir la agregacion del amiloide p. Aimanianda et al. (TIPS 30(6):287-295, 2009) dan a conocer que el alumbre activo NLRP3.

Magga et al. (J. Cell. Mol. Med. 16:1060-1073, 2012) informan de la produccion de celulas monocfticas procedentes de celulas madre de la medula osea y de su utilizacion terapeutica en la AD. Lebson et al. (Cell Transp. Cogn. Com. 17:470/471, 2008) dan a conocer la terapia genica de monocitos en ratones transgenicos APP+PS1 con AD. El documento n° wO 2012/055981 A1 propone la utilizacion de un "agonista de TLR4 libre de endotoxina" para la prevencion o la reduccion del deposito de amiloide. Malm et al. (GLIA 58:889-900, 2010) presentan una revision del papel y potencial terapeutico de las celulas monocfticas en la AD.

El documento n° WO 2009/105641 A1 da a conocer la utilizacion de M-CSF para el tratamiento de la amiloidosis. Boissionneault et al. (Brain 132(4):1078-1092, 2008) informan de los efectos de M-CSF sobre el deposito de amiloide y el deterioro cognitivo en la AD. Luo et al. (Neuroscience Letters 367(2):210-172, 2013) dan a conocer que la senalizacion del receptor del factor 1 estimulante de colonias (CSF1R) en neuronas danadas facilita la proteccion y la supervivencia.

De acuerdo con lo anteriormente expuesto, hasta el momento no se dispone de ningun tratamiento eficaz modificador de la enfermedad para detener la neurodegeneracion progresiva y declive cognitivo asociado en pacientes humanos. Entre las modalidades de tratamiento disponibles para la aD se incluyen tres inhibidores de acetilcolinesterasa (AChEI) y un antagonista de N-metil-D-aspartato (NMDA). Sus efectos son pequenos y solo sintomaticos en la naturaleza (ver, por ejemplo, Corbett et al., Nat. Rev. Drug Discov. 11:833-846, 2012). De esta manera, existe una elevada necesidad medica de un farmaco modificador de la enfermedad.

Es un objetivo de la presente invencion proporcionar medios y metodos para el tratamiento y la prevencion de la AD que permitan la curacion de la misma, en el sentido de que el estado de la enfermedad del paciente enfermo no se desarrolle adicionalmente o incluso mejore. Otro objetivo es proporcionar medios y metodos para prevenir el desarrollo de la AD en personas que presentan o estan en riesgo de presentar AD en desarrollo. Mas espedficamente, es un objetivo de la presente invencion proporcionar un tratamiento eficiente de la AD, demostrado con respecto a por lo menos un biomarcador significativo, segun se mida utilizando modalidades de obtencion de imagenes cerebrales tales como IRM (imagenes por resonancia magnetica) o tecnicas basadas en la tomograffa de emision.

Por lo tanto, la presente invencion proporciona oxihidroxido de aluminio para la utilizacion en el tratamiento y la prevencion de la AD, en el que el oxihidroxido de aluminio se encuentra contenido en una preparacion farmaceutica, y en el que dicha preparacion contiene oxihidroxido de aluminio como unico ingrediente eficaz.

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Durante el curso de la presente invencion ha resultado inesperadamente que el oxihidroxido de aluminio como ingrediente activo en una preparacion farmaceutica ha demostrado en ensayos clmicos que resulta eficaz en sus efectos modificadores de la enfermedad reales en pacientes de AD, conduciendo a una eficacia clmica no hallada hasta el momento en ninguno de los ensayos clmicos de medicacion para la AD hasta el momento. Por lo tanto, la presente invencion proporciona una tecnologfa revolucionaria para esta enfermedad. Por primera vez, ha podido detectarse en pacientes de AD un efecto significativo de modificacion de la enfermedad. Ademas, la presente invencion ha resultado ser eficaz ademas sin los efectos secundarios significativos informados en otros ensayos clmicos de la medicacion para la AD, especialmente en el campo de la inmunoterapia de la AD.

Mas espedficamente, la presente invencion ha conseguido un efecto de modificacion de la enfermedad estadfsticamente significativo en pacientes de AD con respecto a los escaneos de IRM del volumen del hipocampo (derecho). Ademas, por primera vez, se ha demostrado la correlacion entre un biomarcador clmico y un biomarcador radiologico durante el curso de los ensayos clmicos realizados para la presente invencion. En la literatura cientffica mas reciente se ha destacado el valor de la IRM estructural como un biomarcador significativo (Risacher et al., Annu. Rev. Clin. Psychol. 9:621-648, 2013; Vermuri et al., Neurology 73:287-293 y 294-301, 2009; Weiner et al., Alzh. Dememt. 9:e111-94, 2013; Frisoni et al., Nat. Rev. Neurol. 6:67-77, 2010; Fox et al., Arch. Neurol. 57:339-344, 2000).

La IRM proporciona un gran poder de discriminacion transversal por grupos y una mejor correlacion transversal con la cognicion general y el estado funcional. La IRM refleja un estadio de enfermedad definido clmicamente incluso mejor que los diversos biomarcadores del lfquido cefalorraqrndeo (LCR) sometidos a ensayo (Vermuri et al., Neurology 73:287-293 y 294-301, 2009). Numerosos estudios han demostrado un volumen significativamente reducido del cortex hipocampal y del cortex entorrinal (CE), asf como un grosor cortical reducido en el cortex temporal medio y lateral, lobulo parietal y lobulos frontales, en pacientes destinados a evolucionar de deterioro cognitivo leve (DCL) a AD probable ("convertidos de DCL"), hasta dos anos antes de la conversion clmica (Risacher et al., 2013).

De acuerdo con lo anteriormente expuesto, dicho biomarcador fue investigado durante el curso de los ensayos clmicos realizados para la presente invencion en paralelo con los parametros clmicos estandares (seguimiento de la funcion funcional y cognitiva de los pacientes de AD).

Con la presente invencion, puede alcanzarse una mejora significativa en el desarrollo de los pacientes de AD en comparacion con el desarrollo habitual de los pacientes de AD (declives cognitivo, funcional y comportamental graduales), satisfaciendo la antigua necesidad de proporcionar un tratamiento modificador de la enfermedad para la AD.

La presente invencion comprende la administracion eficaz de oxihidroxido de aluminio (en particular en forma de hidrogel de Al) en pacientes de AD.

Las sales de aluminio han tenido una larga tradicion de uso como adyuvantes en vacunas; sin embargo, con el tiempo, el uso farmaceutico de dichas sales se ha reducido a principalmente dos preparaciones en suspension: Alhydrogel (oxihidroxido de aluminio) y AdjuPhos (hidroxifosfato de aluminio), sobre las que adsorben antfgenos para las preparaciones de vacuna (revision en E.B. Lindblad, Vaccine 22:3658-3668, 2004; E.B. Lindblad, Immunology and Cell Biology 82:497-505, 2004; R.K. Gupta, Adv. Drug Delivery Rev. 32:155-172, 1998).

A pesar de su larga tradicion de uso, no se entiende bien el modo de accion del Alhydrogel como adyuvante. La hipotesis inicial de que Alhydrogel forma un deposito en el sitio de inyeccion ha resultado ser solo una parte de una historia con multiples caras (revision en C. Exley, P. Siesjo, H. Eriksson, Trends Immunol. 31:103-109, 2010; S.L. Hem, H. HogenEsch, Expert Rev. Vaccines 6:685-698, 2007; P. Marrack, A.S. McKee, M.W. Munks, Nature Rev. Immunol. 9:287-293, 2009; S.G. Reed, M.T. Orr, C.B. Fox, Nat. Med. 19:1597-1608, 2013).

Las presentaciones principales de los adyuvantes de aluminio utilizados en el ser humano son el hidroxido de aluminio (u oxihidroxido de aluminio) y el fosfato de aluminio. Ambas presentaciones habitualmente se preparan mediante la exposicion de una sal soluble de aluminio (historicamente se ha utilizado con frecuencia el alumbre de potasio, es decir KAl(SO4)2'12H2O) a condiciones basicas, formandose con la exposicion una suspension. La caracterizacion mediante cristalograffa de rayos X y espectroscopfa de IR ha revelado una estructura de tipo boehmita (oxihidroxido de aluminio) del hidroxido de aluminio y una estructura amorfa correspondiente al hidroxifosfato de aluminio del fosfato de aluminio.

Las preparaciones de oxihidroxido de aluminio presentan un punto de carga cero a un pH de ~11, mientras que el hidroxifosfato de aluminio podna presentar un punto de carga cero tan bajo como pH 4 (segun el contenido de fosfato). Por lo tanto, el oxihidroxido de aluminio y el hidroxifosfato de aluminio presentan una carga superficial contraria a pH neutro, siendo la ultima de carga negativa. Sin embargo, debe indicarse que la carga superficial puede cambiar segun la composicion exacta del tampon; especialmente los iones de fosfato presentan la capacidad de rebajar la carga superficial del oxihidroxido de aluminio.

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Para el oxihidroxido de aluminio la preparacion no presenta aniones, tales como sulfatos, nitratos o cloruros y presentan un contenido especificado de metales pesados inferior a 20 ppm. La suspension de oxihidroxido de aluminio presenta una distribucion de tamanos de partfcula de entre 2 pm y aproximadamente 10 pm, los cuales son agregados, compuestos de fibras mas pequenas de preferentemente ~ 2 nm x 4,5 nm x 10 nm.

Segun dicha forma de realizacion mas preferente, la presente invencion se refiere a la utilizacion de oxihidroxido de aluminio del grado de la Farmacopea Europea (monograffa n° 1664), mas espedficamente al producto preparado por Brenntag Biosector (Alhydrogel al 2%) sometido a ensayo para asegurar la conformidad con EP. Alhydrogel se encuentra disponible en tres variedades: Alhydrogel al 1,3%, Alhydrogel al 2% y Alhydrogel "85". Se selecciono Alhydrogel al 2% como preparacion estandar internacional para los geles de hidroxido de aluminio. La preparacion farmaceutica segun la presente invencion se formulo asepticamente en un tampon adecuado, preferentemente un tampon isotonico de fosfato (1 mM a 100 mM), preferentemente a una concentracion >

1.0 mg/ml de Alhydrogel (expresada como equivalentes de A^Oa; esta metrica (Al como "equivalentes de Al2O3") se utiliza de manera general en la presente invencion; de acuerdo con ello, todas las dosis y cantidades de oxihidroxido de aluminio a las que se hace referencia en la presente solicitud se refieren a equivalentes de A^Oa (de oxihidroxido de aluminio (Alhydrogel)), todavfa mas preferentemente a una concentracion > 1,5 mg/ml de Alhydrogel (expresada como equivalentes de A^Oa), todavfa mas preferentemente a una concentracion >

2.0 mg/ml de Alhydrogel (expresada como equivalentes de Al2O3). La cantidad de sal de aluminio para el Alhydrogel se expresa en equivalentes de Al2O3 en concordancia con la concentracion declarada por el fabricante (es decir, Alhydrogel al 2% equivale a Al2O3 al 2%, es decir, 20 mg/ml). Esta concentracion es directamente convertible en la concentracion respectiva de aluminio mediante la utilizacion de las masas moleculares respectivas (20 mg/ml de AhO3 (PM: 101,96) corresponde a 10,6 mg/ml de aluminio (masa molecular de 26,98)). Segun la sal utilizada, dicho valor puede convertirse facilmente en la cantidad/concentracion necesaria de una sal de aluminio diferente (resulta evidente que estos valores se basan unicamente en la cantidad de aluminio (Al) y no se consideran otros aspectos, tales como la contribucion de la naturaleza particulada del Alhydrogel).

El Alhydrogel al 2%, con frecuencia tambien denominado alumbre, es una suspension de gel humedo de oxihidroxido de aluminio.

En la forma de realizacion mas preferente de la presente invencion, el oxihidroxido de aluminio destinado a administrarse en el paciente de AD es una suspension de oxihidroxido de aluminio, preferentemente oxihidroxido de aluminio del grado de la Farmacopea Europea (monograffa n° 1664), especialmente Alhydrogel. El oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad eficaz para conseguir un efecto de mejora de la AD, tal como se define en las directrices EMEA sobre productos medicos destinados al tratamiento de la AD y otras demencias (documento n° de ref. CPMP/EWP/553/95 rev. n° 1, de 24 de julio de 2008). De acuerdo con lo anteriormente expuesto, cualquier procedimiento de administracion o regimen de administracion para la formulacion de oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion que resulte adecuada para conseguir el efecto modificador de la AD tal como se proporciona en la presente invencion es objeto de la presente invencion. Aunque resulta posible administrar la preparacion segun la presente invencion mediante infusion lenta, la estrategia preferente de administracion es la administracion de dosis, por ejemplo mediante inyeccion subcutanea. Por lo tanto, preferentemente la dosis de administracion de oxihidroxido de aluminio es de por lo menos 0,5 mg, preferentemente de por lo menos 1,0 mg, especialmente de por lo menos 1,2 mg, en un paciente de AD. Un intervalo preferente de cantidades que debe administrarse en el paciente es una cantidad de oxihidroxido de aluminio comprendida entre 1,2 mg y 5,0 mg. El efecto de mejora de la AD de la administracion de oxihidroxido de aluminio es todavfa mas pronunciado a una cantidad de por lo menos 1,5 mg. Segun otra forma de realizacion preferente, el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad comprendida entre 1,5 mg y 5,0 mg, preferentemente comprendida entre 1,5 y 3,0 mg, especialmente entre 1,5 mg y 2,5 mg, en el paciente de AD. Otra forma de realizacion preferente comprende la administracion de oxihidroxido de aluminio en una cantidad comprendida entre 1,6 mg y 2,5 mg, preferentemente comprendida entre 1,8 y 2,2 mg, especialmente entre 1,9 y 2,0 mg, en el paciente de AD.

Segun otra forma de realizacion preferente, el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de 2,2 mg o superior. Esta cantidad es todavfa superior a la prescrita en los estandares generales US de productos biologicos (U.S.C. 21 CFR 610.15 (de 1 de abril de 2013)). Dichos intervalos mas elevados de oxihidroxido de aluminio son, entre otros, 2,2 a 10 mg, 2,2 a 8 mg, 2,2 a 5 mg y 2,2 a 4 mg para una dosis de administracion.

El oxihidroxido de aluminio es la unica sustancia eficaz para la aplicacion en la dosis de administracion. Sin embargo, la preparacion de oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion puede contener diversas sustancias auxiliares que no presentan ningun efecto clmico espedfico pero que resultan utiles en la forma de administracion que debe administrarse, sea para fines de administracion, fines de almacenamiento u otros fines. Segun una forma de realizacion preferente, la preparacion de oxihidroxido de aluminio destinada a la aplicacion segun la presente invencion contiene un portador, diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable, por ejemplo agua para inyeccion. Preferentemente, la preparacion de oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion contiene ademas uno o mas estabilizadores, especialmente timerosal, detergentes, antioxidantes, agentes complejantes para iones metalicos mono- o di-valentes, especialmente acido etilen-diamina-tetraacetico

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(EDTA), azucares, alcoholes de azucares, glicerol y/o sustancias tamponadoras, especialmente sustancias tamponadoras TRIS o fosfato. Evidentemente lo anterior tambien incluye mezclas de dichas sustancias auxiliares.

La forma de administracion que debe administrarse en los pacientes puede proporcionarse en cualquier volumen conveniente, preferentemente en forma de suspension inyectable, por ejemplo con un volumen de entre 0,1 y 10 ml, mas preferentemente de entre 0,2 y 5 ml, especialmente de entre 0,4 y 3 ml. Los volumenes espedficamente preferentes son 0,5, 1, 1,5 y 2 ml. Las preparaciones farmaceuticas segun la presente invencion se producen de acuerdo con las Buenas practicas de fabricacion (BPF) farmaceutica, segun requiere y define la Farmacopea Europea y/o estadounidense.

Segun una forma de realizacion preferente, el oxihidroxido de aluminio se administra en el paciente en una suspension de pH comprendido entre 4 y 10, preferentemente entre 5 y 9, mas preferentemente entre 6 y 8, especialmente entre 7,0 y 7,5. Preferentemente, la suspension es una suspension isotonica.

Preferentemente, el oxihidroxido de aluminio se administra mediante una via tan conveniente como resulte posible para el paciente de AD pero que todavfa resulta eficaz para conseguir un efecto de modificacion de la AD. Las vfas de tratamiento mas eficaces para el oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion son la administracion subcutanea, intranodal, intradermica o intramuscular, especialmente la administracion subcutanea. La administracion subcutanea se lleva a cabo en forma de un bolo en la hipodermis, la capa de la piel situada directamente bajo la dermis y la epidermis, especialmente en el tejido adiposo de la hipodermis.

Los regfmenes de administracion pueden optimizarse individualmente para cada paciente de AD, dependiendo del exito del tratamiento, segun se mida mediante diversos parametros, especialmente por los rendimientos cognitivo y funcional y mediante biomarcadores, especialmente escaneos de PET referidos al volumen del hipocampo (ver posteriormente). Durante el curso de los ensayos clmicos llevados a cabo para la presente invencion, la administracion como mmimo mensual de oxihidroxido de aluminio en el paciente de AD ha demostrado tener exito en la mejora de la enfermedad. Con el fin de conseguir un efecto terapeutico duradero, dichas administraciones como mmimo mensuales debenan prolongarse durante por lo menos tres meses, especialmente durante por lo menos seis meses.

La administracion del oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion tambien puede llevarse a cabo por lo menos dos veces al mes (por ejemplo quincenal o semanalmente); tambien en dicho regimen de administracion, debena administrarse el oxihidroxido de aluminio en el paciente de AD durante un periodo mmimo de tres meses, preferentemente de por lo menos seis meses, mas preferentemente de por lo menos doce meses, especialmente de por lo menos 24 meses.

Segun una forma de realizacion preferente, el oxihidroxido de aluminio se administra en el paciente de AD por via subcutanea en la (zona externa del) parte superior del brazo, preferentemente alternando el izquierdo y el derecho (es decir, administrando la primera dosis en la parte superior del brazo derecho (o izquierdo) y la segunda dosis en el brazo izquierdo (derecho) y de esta manera sucesivamente). Otras zonas convenientes (o alternativas) para la administracion subcutanea son inmediatamente sobre y bajo la lmea de la cintura (excepto la zona inmediatamente circundante al ombligo (un drculo de 2 pulgadas de radio)), la zona superior del gluteo, preferentemente inmediatamente detras del hueso pelviano, la parte delante del muslo, lado entre medio y exterior del mismo, 4 pulgadas mas abajo del lfmite superior del muslo a 4 pulgadas mas arriba de la rodilla, etc.

Alternativamente, la dosis que debe administrarse tambien puede dividirse en dos (o mas) dosis divididas que se administran simultaneamente (en la misma visita del medico; como mmimo el mismo dfa) en el paciente de AD. Por ejemplo, una dosis de 2 mg puede dividirse en dosis divididas de 1,8 y 0,2 mg, 1,7 y 0,3 mg, 1,5 y 0,5 mg, 1,34 y 0,76 mg, 1,0 y 1,0 mg, 1,05 y 0,95 mg, 1,0, 0,5 y 0,5 mg, 0,6, 0,6 y 0,7 mg, 0,2, 0,5 y 1,3 mg, 0,5, 0,5, 0,5 y 0,5 mg, 0,2, 0,3, 0,5 y 1,0 mg, etc. Las dosis divididas pueden administrarse en diferentes sitios de administracion o, preferentemente, en el mismo sitio de administracion. El "mismo sitio de administracion" se encuentran dentro de una superficie de 10 cm2 de piel, preferentemente dentro de una superficie de 5 cm2 de piel, especialmente dentro de 1 cm2 de piel. Las dosis divididas preferentes contienen oxihidroxido de aluminio en una cantidad comprendida entre 0,8 y 5,0 mg, preferentemente entre 1,0 y 3,0, especialmente entre 1,0 y 1,5 mg.

Con el fin de conseguir un efecto muy duradero de la mejora de la AD, el tratamiento segun la presente invencion se lleva a cabo durante mas de un ano. Segun una forma de realizacion preferente de la presente invencion, el oxihidroxido de aluminio se administra como mmimo mensualmente durante por lo menos dos anos, preferentemente por lo menos cuatro anos, especialmente por lo menos 8 anos, en el paciente de AD.

La administracion del oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion puede llevarse a cabo con cualquier dispositivo de administracion adecuado. Por motivos de conveniencia, la dosis de oxihidroxido de aluminio se administra con un dispositivo de inyeccion, especialmente una jeringa, en el paciente de AD. Las preparaciones farmaceuticas para la utilizacion en la presente invencion pueden proporcionarse en cualquier forma adecuada.

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Preferentemente se proporcionan en una forma de almacenamiento estable. La estabilidad de almacenamiento puede garantizarse por diversos medios, tales como la esterilizacion, la adicion de estabilizadores, la congelacion, la liofilizacion, etc. Preferentemente, se utilizan combinaciones de dichos medios para incrementar las estabilidades de almacenamiento de dichas preparaciones. En el caso de que las composiciones que contienen oxihidroxido de aluminio se congelen o se liofilicen, puede observarse una agregacion de las partfculas de adyuvante durante el procesamiento. Mediante el enfriamiento de dichas formulaciones de oxihidroxido de aluminio (Alhydrogel) a tasas mas rapidas o mediante la adicion de cantidades suficientes de un excipiente formador de cristales, tales como trehalosa, puede evitarse o minimizarse la agregacion del Alhydrogel. Se ha propuesto que la concentracion mediante congelacion de las sales tamponadoras induce modificaciones en la qmmica superficial y la cristalinidad de dichos agentes de aluminio, favoreciendo a su vez la agregacion. Estas modificaciones y la agregacion resultante de dichas partfculas de Alhydrogel pueden excluirse o minimizarse mediante la eleccion de los iones del tampon, o inhibirse cineticamente mediante la formacion rapida de un estado cristalino durante la congelacion (ver, por ejemplo, Clausi et al., J. Pharm. Sci. 97(6):2049-61, junio de 2008).

Las composiciones farmaceuticas para la aplicacion en los pacientes de AD segun la presente invencion se preparan (y se acaban) en envases adecuados y se comercializan en, por ejemplo, viales sellados, ampollas, cartuchos, bolsas flexibles (con frecuencia construidas con plastico multicapa), botellas de vidrio o polipropileno o, preferentemente, en jeringas, especialmente en jeringas precargadas (listas para utilizar o listas para reconstituir).

Segun una forma de realizacion preferente de la presente invencion, el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad minima de 1,8 mg en el paciente de AD.

Los pacientes preferentes en que se administran preparaciones de oxihidroxido de aluminio segun la presente invencion son los pacientes de AD que son pacientes de estadio temprano, incluyendo aquellos pacientes que con frecuencia tambien se denominan "pacientes con deterioro cognitivo leve" (DCL). El concepto de DCL se desarrollo en los anos noventa del siglo pasado para referirse a pacientes con indicios clmicos tempranos de enfermedad de Alzheimer (AD) que todavfa no satisfadan los criterios de demencia. La variante amnesica de DCL presenta las caractensticas siguientes: problemas de memoria, preferentemente advertidos por un informante; deterioro de la memoria para la edad, segun un indicador de bajo rendimiento cognitivo en uno o mas ensayos neuropsicologicos que analizan las capacidades de aprendizaje (por ejemplo la memoria de prosa, lista de palabras, etc.), una funcion cognitiva general conservada (por ejemplo una puntuacion del miniexamen de estado mental de 24 de 30 o superior); actividades intactas de la vida cotidiana y ausencia de demencia. Aproximadamente dos tercios del total de pacientes con DCL amnesica incluye las caractensticas patologicas de la AD y desarrolla el smdrome clmico de la demencia de Alzheimer en un plazo de 5 anos, mientras que el tercio restante muestra causas no progresivas o muy lentamente progresivas de deterioro cognitivo (por ejemplo, depresion o deterioro cognitivo asociado a la edad). Los nuevos criterios diagnosticos propuestos para la AD desarrollados en 2007 (Dubois et al., Lancet Neurol. 6:734-746, 2007) proponen que la enfermedad puede identificarse en el estadio de DCL en el caso de que el paciente sea positivo para como mmimo uno de los cuatro marcadores siguientes: atrofia temporal medial en el MRI, hipometabolismo del cortex temporoparietal en PET con 18F-fluorodesoxiglucosa, anormalidad de marcadores del lfquido cefalorraqrndeo (Tau, amiloide-p42 o fosfo- Tau) y positividad de amiloide en las imagenes de PET. Esta poblacion de pacientes no solo se incluye entre los pacientes de AD que deben tratarse segun la presente invencion, es un grupo espedficamente preferente de pacientes para los que resulta espedficamente eficaz el metodo de tratamiento segun la presente invencion. Lo anterior concuerda con los criterios revisados para los ensayos clfnicos de AD adoptados por la FDA estadounidense (Aisen et al., 2013; Kozauer et al., 2013). De acuerdo con lo anteriormente expuesto, resulta preferente tratar los pacientes en un estadio temprano de AD, tal como se define por una puntuacion de MMSE (acronimo en ingles de miniexamen de estado mental, o prueba de Folstein). Preferentemente, el paciente de AD que debe tratarse segun la presente invencion es un paciente con una puntuacion de MMSE de entre 23 y 30 (siendo 30 el maximo), preferentemente de entre 24 y 30, mas preferentemente de entre 25 y 29, especialmente de entre 26 y 29. Otros grupos de pacientes preferentes son los pacientes con 27 puntos o mas (que indican una cognicion normal), 25 a 27 (cognicion ligeramente inferior a la normal) o 19 a 24 (puntos de deterioro cognitivo leve).

Los pacientes de AD de estadio temprano tambien pueden seleccionarse mediante otras puntuaciones, preferentemente puntuaciones que combinan parametros cognitivos y funcionales (y lfmites numericos) para limitar la poblacion de AD a los tratados eficazmente, tales como ADAS-cog, etc.

La presente invencion proporciona por primera vez un tratamiento de la AD que es modificador de la enfermedad. La eficacia del tratamiento segun la presente invencion se demuestra mediante los parametros requeridos por las autoridades de autorizacion de medicamentos, especialmente la EMEA y la FDA estadounidense. Por ejemplo, las directrices de la EMEA para el tratamiento de la AD requieren criterios de valoracion primaria que reflejen el dominio cognitivo y el dominio funcional. De acuerdo con ello, se utiliza una puntuacion combinada (compuesta) para la evaluacion clfnica de la presente invencion. Esta puntuacion compuesta combina dos puntuaciones establecidas, una para la funcion cognitiva (ADAS-cog (subescala

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cognitiva de la escala de evaluacion de la enfermedad de Alzheimer)) y una para la capacidad funcional (ADCS- ADL (estudio colaborativo de la enfermedad de Alzheimer - inventario de actividades de la vida cotidiana)). El ADAS-cog adaptado combina items que evaluan la funcion cognitiva. El ADCS-ADL adaptado incluye items que son sensibles a la capacidad funcional. La prediccion es que las habilidades cognitivas declinan hacia el inicio de la enfermedad, mientras que se considera que la capacidad de realizar funciones basicas declina mas tarde en la enfermedad. El resultado primario combinado (puntuacion compuesta segun la presente invencion) combina tanto ADAS-cog adaptado como ADCS-ADL adaptado para crear una variable compuesta que es sensible al declive de las funciones cognitivas y basicas. Se utiliza la ecuacion proporcionada a continuacion para obtener el resultado primario combinado, es decir, la variable compuesta combinada:

Variable compuesta combinada segun la presente invencion:

= 1,67*Memoria de palabras + 1,35*Orientacion + 1,42*Reconocimiento de palabras + 0,55*Instrucciones de recuerdo + 0,81*Lenguaje hablado + 1,01*Dificultades para encontrar palabras + 5,42*ONB + 0,15*VPAL + 0,19*Fluidez de categonas + 0,28*Pertenencias + 0,35*Compras + 0,23*Aficiones + 0,38*Bebidas + 0,37*Comidas + 0,23*Sucesos actuales + 0,26*TV + 0,33*Cumplimiento de citas + 0,37*Viajes + 0,33*Soledad + 0,35*Dispositivos + 0,49*Ropa + 0,36*Lectura + 0,62*Telefono + 0,33*Escritura

Ademas, se observaron biomarcadores de AD con la presente invencion que son caractensticos del desarrollo de AD. Los criterios de la EMEA y la FDA recomienda tecnicas mas nuevas, tales como MRI, especialmente la atrofia del cortex entorrinal o (para-) hipocampal. En la presente invencion se aplico el MRI estructural. Mas espedficamente, se utilizo el volumen del hipocampo derecho (importante para el aprendizaje y la memoria de material que resulta diffcil verbalizar) segun la presente invencion como biomarcador significativo de la AD para el exito del tratamiento.

Segun la presente invencion, puede observarse un efecto clmico en el tratamiento de la AD que puede medirse como una reduccion del declive cognitivo y/o funcional (durante un periodo de tratamiento de aproximadamente un ano) de por lo menos 30% (calculado como cafda de la puntuacion), preferentemente de por lo menos 50%, especialmente de por lo menos 70%, respecto al desarrollo normal del declive de los pacientes de AD. Preferentemente, los parametros cognitivos y funcionales se mantienen esencialmente sin cambios durante el tratamiento. Ello puede ser conseguido por la presente invencion especialmente en pacientes en el estadio mas temprano (tal como sugieren y recomiendan las directrices de la EMEA y la FDA), por ejemplo pacientes de AD con MMSE de 23 o superior, preferentemente de 24 o superior, mas preferentemente de 25 o superior, especialmente de 26 o superior. Para dichos pacientes, el cambio de la puntuacion compuesta durante el tratamiento segun la presente invencion todavfa se encontraba en torno a la puntuacion inicial tras 18 meses. Lo anterior resulta significativamente superior a los requisitos mmimos de "efectos modificadores de la enfermedad" segun requiere la EMEA ("desde un punto de vista normativo, un producto medicinal puede considerarse modificador de enfermedad en el caso de que la progresion de la enfermedad medida mediante herramientas de evaluacion cognitiva y funcional resulte reducida o enlentecida y en el caso de que estos resultados se asocien a un efecto sobre el proceso patologico subyacente"; "se considerara efecto modificador de enfermedad en el caso de que el tratamiento farmacologico retrase los procesos de enfermedad patologicos o fisiopatologicos subyacentes y en el caso de que ello se vea acompanado de una mejora de los signos y smtomas clmicos de la condicion de demencia").

La invencion se explica adicionalmente a tftulo de los ejemplos y figuras siguientes, aunque sin limitarse a los mismos.

La figura 1 muestra los resultados del ensayo clmico segun la presente invencion con respecto al cambio de la puntuacion compuesta de cambio de ADL adaptado (parcialmente) y cambio de ADAS-cog adaptado para todos los pacientes que habfan recibido los tratamientos de 2 mg y 1 mg de oxihidroxido de aluminio.

La figura 2 muestra una comparacion entre la poblacion de pacientes leves (la poblacion leve se define por una puntuacion MMSE de lmea base de 24 o superior) de ambos grupos, que demuestra que dicho efecto es mas pronunciado en la cohorte de pacientes con enfermedad en estadios mas tempranos.

La figura 3 muestra un enlentecimiento de la progresion de la enfermedad en los grupos de 2 mg y 1 mg de aluminio que se puso de manifiesto por ADAS-cog adaptado (solo items de ADAS-cog, medias de mmimos cuadrados) para el grupo de 1 mg y 2 mg de oxihidroxido de aluminio en comparacion con el control historico (valores de p: 1 mg vs. HC-ADNI, NS, HC: <0,0001; 2 mg vs. HC-ADNI, NS, HC: <0,0001).

La figura 4 muestra el desarrollo del volumen (en mm3) del hipocampo derecho para el grupo de tratamiento de 2 mg y 1 mg de oxihidroxido de aluminio de la poblacion de pacientes leves (la poblacion leve se define por una puntuacion MMSE de lmea base de 24 o superior), que demuestra que dicho efecto es mas pronunciado en la cohorte de pacientes en estadios mas tempranos de la enfermedad.

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La figura 5 muestra la calidad de vida-enfermedad de Alzheimer (QOL-AD) segun los cuidadores. Los cuidadores completaron un cuestionario sobre la calidad de vida de sus pacientes. La medida consistfa en 13 ttems, evaluados en una escala de 4 puntos, en la que 1 era mala y 4 era excelente. Se muestran los resultados como cambio en el tiempo utilizando las medias de mmimos cuadrados de un modelo mixto.

La figura 6 muestra la respuesta inmunologica de los ratones sometidos a ensayo en el modelo animal Tg2576: en ratones Tg2576 se inyectaron 6x, por via s.c., a intervalos de 4 semanas, conjugado de vacuna que contema 30 pg de peptido solo, KLH formulado con alumbre o solo alumbre. Las dosis de alumbre utilizadas eran equivalentes a 2 mg/ml. Se midieron los anticuerpos inducidos por la vacunacion en muestras de plasma extrafdas en el momento del sacrificio (SeclD 1 (n=10), SecID 2 (n=8), KLH-Alum (n=10) y solo alumbre (n=8)). Las muestras se analizaron para su concentracion de anticuerpos IgG contra peptidos espedficos. Los valores ilustrados son el tftulo calculado como DOmax/2 (a 405 nm) mas SEM. La respuesta de IgG hacia el peptido inmunizante correspondiente (SecID 1: anti-SecID 1; SecID 2: anti-SecID 2, KLH- alumbre: anti-KLH, alumbre: anti-AD02); B) reactividad con Ap1-40/42 humana tras la inmunizacion. Los animales tratados con SecID 1 (n=10) y SecID 2 (n=8) mostraban reactividad anti-Ap40/42; los animales tratados con KLH-alumbre y solo alumbre no mostraron reactividad sobre el fondo. Se fijo el fondo para este ensayo en 1/100, indicado por lmeas negras y un asterisco en A+B.

La figura 7 muestra la memoria y el aprendizaje de los ratones sometidos a ensayo: grupos de ratones Tg2576 (n<10/grupo) recibieron 6 inyecciones al mes de KLH/ALUMBRE (n=9) o vacunas conjugadas con SecID 1-KLH-Alumbre (n=10) o SecID 2-KLH-Alumbre (n=7) o solo alumbre (n=8). Se utilizaron animales de tipo salvaje previamente no expuestos (n=20) como controles positivos para el acondicionamiento de miedo contextual (CFC - Contextual Fear Conditioning). Se evaluo el aprendizaje y memoria contextuales mediante analisis de CFC utilizando el % de tiempo de bloqueo al final del ensayo de CFC. Los parametros ilustrados son el % de tiempo en que los animales se encontraban 99% inmoviles durante un periodo representativo de 2 minutos el dfa 2 del paradigma de ensayo CFC. *p<0,05; **p<0,01.

La figura 8 muestra la carga de amiloide en los animales sometidos a ensayo: grupos de ratones Tg2576 (n<10/grupo) recibieron 6 inyecciones al mes de KLH/ALUMBRE (n=9) o vacunas conjugadas con SecID 1 (n=10) o con SecID 2 (n=7) o solo alumbre (n=8). La dosis de alumbre en todas las formulaciones era equivalente a 2 mg/ml. Se aislaron los cerebros, 8 semanas despues de la sexta inmunizacion. La cuantificacion de la superficie cerebral total relativa cubierta por depositos de amiloide (en % de tejido total analizado) se basa en la tincion de inmunofluorescencia utilizando el anticuerpo monoclonal 3A5 espedfico de Ap. Se muestran subregiones representativas del cortex (A, B) y giro dentado (C, D) de ratones inmunizados con los controles (A, C) y SecID 1 (B, D). E) SecID 1-KlH alumbre + SecID 2-KLH alumbre redujo la superficie relativa cubierta por depositos de amiloide respecto a los controles de KLH-Alumbre significativamente (amiloide difuso y nucleo amiloide denso, *p<0,05; **p<0,01). Era detectable una reduccion ligera aunque no significativa del deposito de Ap en los animales tratados con solo alumbre vs. animales tratados con KLH-Alumbre. (ns) La cabeza de flecha en C senala la fluorescencia no espedfica de un vaso cerebral. Barra de escala: 200 pm; las fotograffas se obtuvieron a una magnificacion de 10x.

Ejemplos

1. Extracto de un ensayo clmico de AD (AFF006; Eudract: 2009-016504-22)

Materiales y metodos:

Los datos que apoyan la invencion se derivan de un ensayo clmico aleatorizado de pacientes de AD temprana. El estudio (AFF006; Eudract: 2009-016504-22) asigno aleatoriamente a pacientes de AD temprana a 5 brazos de tratamiento. Los pacientes de 2 brazos de estudio recibieron 1 mg de aluminio o 2 mg de aluminio. En total, se incluyeron 99 pacientes de AD temprana en los 2 brazos del estudio. La participacion de cualquier paciente dado se prolongo durante 18 meses.

Diseno del estudio:

Se llevo a cabo el estudio AFF006 como un estudio de fase II multicentro de doble ciego aleatorizado, en grupos paralelos y controlado por placebo y se evaluo la actividad clmica e inmunologica, asf como la seguridad y tolerabilidad de las administraciones s.c. repetidas de, entre otros, aluminio (diferentes dosis) en pacientes con AD temprana, tal como se define en el protocolo. Se llevo a cabo en un total de 6 pafses: Austria, Francia, Alemania, Eslovaquia, Republica Checa y Croacia.

El ensayo clmico comprendfa 10 visitas regulares de pacientes ambulatorios y 6 entrevistas telefonicas. Hasta cuatro semanas antes del inicio del tratamiento se llevo a cabo una visita de cribado (visita 1) para garantizar la idoneidad de los pacientes para el ensayo clmico y para establecer las caractensticas de lmea base de los pacientes. Tras el cribado, los pacientes elegibles fueron asignados aleatoriamente a los grupos de tratamiento. Tras la aleatorizacion en la semana 0, los pacientes recibieron 6 inyecciones de 1 o 2 mg de aluminio. Las

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inyecciones fueron realizadas s.c. por el investigador las semanas 0, 4, 8, 12, 40 y 65 (visitas 2, 3, 4, 5, 7 y 9).

En las visitas 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 9, se evaluaron posibles reacciones locales y sistemicas a la vacuna y las constantes vitales (presion arterial, frecuencia cardfaca, frecuencia respiratoria y temperatura corporal). Ademas, se llevo a cabo un examen ffsico y neurologico. Se evaluaron parametros de eficacia en las visitas 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9 y 10. La visita final (visita 10) se llevo a cabo doce semanas despues e la ultima administracion del farmaco del estudio (visita 9). En el caso de que un paciente suspendiera el ensayo clmico se llevaba a cabo una visita de suspension temprana (VST).

Poblacion de estudio:

El estudio se llevo a cabo con pacientes que presentaban AD temprana. Se definio el diagnostico a partir de los criterios siguientes:

- enfermedad de Alzheimer probable segun los criterios NINCDS/ADRDA (1)

- puntuacion MMSE >20 (2)

- resultado de la prueba de recuerdo selectivo libre y guiado (FCSRT, Free and Cued Selective Reminding Test), resultado de recuerdo total <40 o recuerdo libre <17, que indicaban danos en el hipocampo que redudan la memoria episodica del paciente (3)

- el resultado de un MRI lefdo centralmente de un cerebro de un paciente debe ser compatible con el diagnostico de AD, en particular, la presencia de una atrofia del lobulo temporal medial (puntuacion de Scheltens >2) (4)

Otros criterios de inclusion/exclusion aplicados (por ejemplo, consentimiento informado por escrito, edad entre 50 y 80 anos, tratamiento con farmacos inmunosupresores (exclusion)).

Administracion del farmaco de estudio

Durante las visitas de estudio 2, 3, 4, 5, 7 y 9, los pacientes recibieron farmaco de estudio del investigador; en total: seis inyecciones durante un periodo de tratamiento de 65 semanas. Las inyecciones se realizaron en la superficie externa de la parte superior del brazo, aproximadamente 8 a 10 cm en la parte superior del codo. Era un requisito previo respecto al sitio final la presencia de una estacion ganglionar linfatica regional intacta. En el caso de que las estaciones ganglionares linfaticas drenantes de la parte superior de ambos brazos no se encontraban intactas, la inyeccion se lleva a cabo en el muslo en un sitio proximo a los ganglios linfaticos inguinales. Se utilizaron dos sitios de inyeccion alternantes (por ejemplo la parte superior de los brazos izquierdo y derecho, parte superior del brazo izquierdo y muslo izquierdo) durante las 6 inyecciones.

Las inyecciones se llevaron a cabo en el tejido subcutaneo (s.c.). Se tuvo especial cuidado en evitar la aplicacion intravasal mediante la aspiracion cuidadosa antes de cada inyeccion. Todas las administraciones se llevaron a cabo en el sitio de la prueba.

Morfometria basada en el volumen

El hipocampo (izquierdo y derecho) y las regiones de interes (RDI) del ventnculo lateral completo se delinearon en un molde de MRI anatomico con el fin de generar el atlas para las medidas volumetricas. Los volumenes del hipocampo y de los ventnculos laterales de cada sujeto se determinaron utilizando un metodo totalmente automatizado que combina transformaciones derivadas del registro no lineal de las etiquetas en el atlas y escaneos individuales del sujeto e informacion de imagenes espedfica del sujeto (Collins et al., J. Comput. Assist. Tomogr. 18:192-205, 1994). Las segmentaciones del ventnculo lateral y del hipocampo que no pasaban la revision de control de calidad (CC) posterior al procesamiento se corrigieron manualmente. Se estimo el volumen intracraneal total (VIT) a partir de la mascara cerebral generada durante el preprocesamiento y se determino el VIT medio (VITm) para cada sujeto promediando el VIT estimado en todas las visitas. Se utilizo el factor de normalizacion (VITmolde/VITm_sujeto) para normalizar los volumenes hipocampal y ventricular de cada sujeto a fin de controlar las diferencias de tamano de cabeza.

Evaluaciones de seguridad:

Entre las evaluaciones de seguridad se incluyeron las siguientes:

- sucesos adversos (SA) y sucesos adversos graves (SAG) (numero de pacientes que abandonaron debido a SA; motivo para el abandono).

- Evaluaciones de laboratorio: hematologfa, bioqdmica, coagulacion, serologfa, urinanalisis y reactividad

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cruzada de APP.

- Constantes vitales (presion arterial, frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria y temperatura corporal).

- Examen ffsico y neurologico.

Evaluaciones de eficacia:

Las variables primarias de eficacia eran el cambio respecto a la lmea base (CLB) de la cognicion segun medicion realizada mediante un ADAS-cog; CLB de funcion segun medicion realizada mediante un ADCS-ADL adaptado, y una combinacion de CLB de cognicion y de funcion segun mediciones realizadas mediante una variable compuesta combinada:

1. Coprimaria: ADAS-cog adaptado,

2. Coprimaria: ADCS-ADL adaptado,

3. Resultado primario combinado: compuesto.

Se midio ADAS-cog y otros items incluidos en el ADAS-cog adaptado en las visitas 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 o visitas a urgencias (VAU). Se midio ADCS-ADL en las visitas 2, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 o VAU. Se midieron los items que contribman al resultado primario combinado en las visitas 2, 5, 6, 7, 8, 9 y 10 o VAU.

Todos los resultados de eficacia primaria se encontraban comprendidos entre 0 y 100. Para cada escala adaptada y variable compuesta, una puntuacion mas baja indica un mejor rendimiento. Sin embargo, algunos items incluidos en la escala pueden presentar la direccion contraria, es decir, una puntuacion mas alta indicar un mejor rendimiento. Antes de calcular el valor de una variable compuesta, se invirtieron los items contribuyentes que puntuaban en la direccion contraria. Se invertfa la puntuacion de un item restando el valor observado del maximo valor posible para el item. De esta manera se invertfa la escala de los items de manera que una puntuacion mas baja ahora indicaba un mejor rendimiento. Los items siguientes incluidos en ADAS-cog adaptado y la variable compuesta combinada requenan una puntuacion invertida: PAL verbal, fluidez de categonas NTB y CogState ONB.

Resultados de eficacia secundarios:

Calidad de vida (QOL) - cuidador

El cuestionario de QOL - cuidador es un cuestionario breve, de 13 items, disenado para obtener espedficamente una valoracion de la QOL del paciente desde la perspectiva del cuidador. Las preguntas cubren las relaciones con amigos y familia, las preocupaciones economicas, el estado ffsico, el humor y una evaluacion global de la calidad de vida. Todos los items se evaluaron en una escala de cuatro puntos, siendo 1 mala y siendo 4 excelente. La puntuacion total era la suma de todos los items, que puede encontrarse comprendida entre 13 y 52. Los valores de QOL - cuidador se presentan en la presente memoria como cambio respecto a la lmea base. Los resultados se midieron en las visitas 1, 6, 8 y 10.

Analisis estadisticos

Datos de lmea base

Los sujetos se describieron utilizando informacion demografica y caractensticas de lmea base registradas durante la etapa de cribado (visita 1).

Los datos demograficos evaluados fueron la edad, el genero, el grupo etnico, los habitos de tabaquismo, el nivel educativo, la altura y el peso. Se resumieron los datos demograficos de los sujetos segun tratamiento para las poblaciones de Seguridad, ITT y Segun protocolo.

Analisis de eficacia primaria

Se analizaron los resultados de eficacia primaria, secundaria y exploratoria mediante la comparacion del cambio en el tiempo entre los grupos. Los analisis de eficacia utilizaron el modelo mixto que describe posteriormente. El analisis de modelo mixto comparaba el cambio estimado respecto a la lmea base entre los 3 grupos de vacuna y los 2 grupos de aluminio en todas las puntuaciones de resultado de eficacia en cada visita. El modelo utilizaba modelos longitudinales separados de medidas repetidas para cada variable principal de eficacia. Este analisis evaluaba si existfa una diferencia o no entre los valores de CLB estimados entre los grupos de tratamiento.

Se utilizo el programa SAS, PROC MIXED, para ajustar un modelo mixto con medidas repetidas (MMRM), con el

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CLB de cada uno de los resultados de eficacia (por ejemplo, ADAS-cog adaptado) como variable de respuesta y las covariables y efectos fijos siguientes:

• Edad (covariable),

• Nivel educativo (efecto fijo dividido entre las categonas <12 anos y >12 anos),

• Genero (efecto fijo),

• Puntuacion de ensayo de lmea base de parametro de eficacia (covariable),

• Centro (efecto fijo),

• Tratamiento (efecto fijo),

• Estado de APOEe4 (efecto fijo, positivo o negativo),

• Utilizacion de inhibidores de AChE (efecto fijo, determinado a partir de las medicaciones),

• Tiempo (covariable; el tiempo se define en terminos de visitas),

• Tiempo segun interaccion de tratamientos (Tiempo*Tratamiento).

La estructura de covarianza del modelo era autorregresiva heterogenea de primer orden (ARH[1]). Se estimaron las medias de cuadrados mmimos (LCM) en cada visita durante el estudio. Las LCM estimadas en una visita particular se interpretaron como el CLB esperado en el resultado de eficacia en ese punto del tiempo (Visita) al administrar el tratamiento especificado. Se estimaron las medias de los cuadrados mmimos y los errores estandares a partir del modelo mixto en cada visita y se muestran para los diversos grupos.

El ADAS-cog adaptado combina items que evaluan la funcion cognitiva. El ADCS-ADL adaptado incluye items que son sensibles a la capacidad funcional. Se espera que las habilidades cognitivas declinen hacia el inicio de la enfermedad y se espera que la capacidad de realizar funciones basicas decline mas tarde en la enfermedad. El resultado primario combinado (denominado en la presente memoria "puntuacion compuesta") combina tanto el ADAS-cog adaptado como el ADCS-ADL adaptado para generar una puntuacion compuesta que es sensible al declive de las funciones cognitivas y basicas. Se utiliza la ecuacion siguiente para obtener el resultado primario combinado, es decir, la puntuacion compuesta combinada:

Puntuacion compuesta combinada:

=1,67*Memoria de palabras + 1,35*Orientacion + 1,42*Reconocimiento de palabras + 0,55*Instrucciones de recuerdo + 0,81*Lenguaje hablado + 1,01*Dificultades para encontrar palabras + 5,42*ONB + 0,15*VPAL + 0,19*Fluidez de categonas + 0,28*Pertenencias + 0,35*Compras + 0,23*Aficiones + 0,38*Bebidas + 0,37*Comidas + 0,23*Sucesos actuales + 0,26*TV + 0,33*Cumplimiento de citas + 0,37*Viajes + 0,33*Soledad + 0,35*Dispositivos + 0,49*Ropa + 0,36*Lectura + 0,62*Telefono + 0,33*Escritura

La contribucion en porcentaje de cada item a la puntuacion compuesta combinada puede encontrarse en la tabla 1, a continuacion:

item

Contribucion en porcentaje

ADAS-cog Memoria de palabras

16,6

ADAS-cog Orientacion

10,8

ADAS-cog Reconocimiento de palabras

17,0

ADAS-cog Instrucciones de recuerdo

2,8

ADAS-cog Lenguaje hablado

4,1

ADAS-cog Dificultades para encontrar palabras

5,1

CogState Memoria "One-Back"

8,5

NTB VPAL

8,5

NTB Fluidez de categonas

8,5

ADCS-ADL Pertenencias

0,8

ADCS-ADL Compras

1,4

ADCS-ADL Aficiones

0,7

ADCS-ADL Bebidas

1,1

ADCS-ADL Comidas

1,5

ADCS-ADL Sucesos actuales

0,7

ADCS-ADL TV

0,8

ADCS-ADL Cumplimiento de citas

1,0

ADCS-ADL Viajes

1,5

ADCS-ADL Soledad

1,0

ADCS-ADL Dispositivos

1,4

ADCS-ADL Ropa

1,5

ADCS-ADL Lectura

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ADCS-ADL Telefono

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Resultados

El estudio AFF006 agrupo una poblacion de estudio que recordaba a los pacientes de AD temprana segun los datos demograficos (tabla 2) y los datos que mostraban las caractensticas de lmea base de los grupos de estudio (tabla 3).

Tanto la frecuencia como la intensidad de las reacciones locales dependfa de la dosis de aluminio administrada (tabla 4). Dichas reacciones locales (RL) sirven como medida de la activacion de la respuesta inmunologica innata.

El grupo de 2 mg de aluminio mostraba resultados mas positivos incluso que el grupo de 1 mg de aluminio (otros grupos) con respecto a parametros que informaban de la progresion de la enfermedad (figs. 1 y 5). La comparacion de la poblacion leve de pacientes de ambos grupos demostro que dicho efecto era mas pronunciado en la cohorte de pacientes en los estadios mas tempranos de la enfermedad (fig. 2). El enlentecimiento de la progresion de la enfermedad durante 18 meses resultaba espedficamente evidente en el grupo de 2 mg de aluminio, ejemplificado por ADAS-cog adaptado (fig. 3).

Se compararon los resultados obtenidos con bases de datos publicas. Los datos historicos identificados eran ADNI 1 cohorte de AD leve (estudio observacional), los pacientes leves con placebo del estudio ADCS Homo- cistema (HC, MMSE>20) y el grupo de placebo del estudio ADCS NSAlD de rofecoxib y naproxeno (NS, MMSE<20). Se agruparon dichas tres cohortes, rindiendo el control de historia (HC-ADNI,NS,HC). Se dispoma de datos para 344 pacientes el mes 6, 317 pacientes el mes 12 y 226 pacientes el mes 18. El estudio ADNI solo realizo evaluaciones los meses 6, 12 y 24, de manera que el valor del mes 18 se dedujo mediante una lmea recta. El estudio NS presentaba una duracion de solo 12 meses, de manera que no se dispoma de datos de los 18 meses de este estudio.

Aunque el ADAS-cog adaptado utilizaba algunos items del ADAS-cog complementado con items del NTB y la batena CogState, estos items no se encontraban disponibles para todos los estudios historicos. Por lo tanto, se creo un ADAS-cog 2 adaptado que aplico las mismas ponderaciones que ADAS-cog adaptado para los items de ADAS-cog, pero no inclrna los items de NTB y CogState (1,67*Memoria de palabras + 1,35*Orientacion + 1,42*Reconocimiento de palabras + 0,55*Instrucciones de recuerdo + 0,81*Lenguaje hablado + 1,01*Dificultades para encontrar palabras).

El ADAS-cog 2 adaptado mostraba un declive sustancialmente mayor en el grupo de control de historia que los grupos tratados con 1 o 2 mg de oxihidroxido de aluminio del estudio AFF006 (figura 3). Los valores de p eran: 1 mg vs. HC-ADNI, NS, HC: <0,0001; 2 mg vs. HC-ADNI, NS, HC: <0,0001.

Los datos de MRI tambien mostraban un efecto modificador de la enfermedad estadfsticamente significativo para el grupo de 2 mg de pacientes y una correlacion entre el volumen del hipocampo y los criterios de evaluacion clmica, por ejemplo el hipocampo derecho con adapADAS: p=0,0006 o Puntuacion compuesta: p=0,0095) (fig. 4). Debe indicarse espedficamente que la presente investigacion ha proporcionado por primera vez un desarrollo paralelo de datos clfnicos con un biomarcador radiologico (MRI en el presente caso). La figura 4 muestra que los pacientes tratados segun la presente invencion mostraban practicamente ninguna reduccion relacionada con la AD del volumen del hipocampo durante un periodo de 18 meses, mientras que la tasa de atrofia cerebral en un ano en pacientes de Ad se encontraba comprendida en el intervalo de entre 3% y 6% anual (Risacher et al., 2013; tabla 2; la tasa en personas sanas de edad avanzada habitualmente es de entre 0,5% y 2,2% (ver tambien este dato en la tabla 2 en Risacher et al.).

La figura 5 muestra que los cuidadores de pacientes tratados segun la presente invencion evaluaron la QOL del paciente como significativamente mejorada durante un periodo de 18 meses tras el tratamiento de 2 mg en comparacion con 1 mg de alumbre y los demas grupos (no representado).

Tabla 2: poblacion y estado de los pacientes

Estado del paciente

1 mg 2 mg

(N=48) (N=51)

Numero de sujetos n (%)

Completado

41 (85,4%) 45 (88,2%)

Interrumpido

7 (14,6%) 6 (11,8%)

Valor de p1

Motivo para la suspension del estudio

Muerte

2 (4,2%) 0 (0,0%)

Suceso adverso

0 (0,0%) 0 (0,0%)

Abandono por el sujeto

4 (8,3%) 5 (9,8%)

Estado del paciente

1 mg 2 mg

Perdida durante el seguimiento

0 (0,0%) 0 (0,0%)

Otro

1 (2,1%) 1 (2,0%)

Tabla 3: datos demograficos: etnia, genera, educacion y edad

Datos demograficos

1 mg 2 mg

(N=48)

(N=51)

Grupo etnico

Asiatico/de las islas del Padfico

0 (0,0%) 1 (2,0%)

Caucasico

48 (100,0%) 50 (98,0%)

Genero

Masculino

28 (58,3%) 19 (37,3%)

Femenino

20 (41,7%) 32 (62,7%)

Valor de p1

Anos de educacion

Media (SD)

12,3 (4,03) 11,8 (3,18)

Mediana

12 11

(Q1, Q3)

(9,0, 15,0) (10,0, 13,0)

Mm, max

8, 26 6, 22

Valor de p1

Edad (anos)

n

48 51

Media (SD)

70,3 (6,56) 68,9 (8,36)

Mediana

71 69

(Q1, Q3)

(65,0, 75,5) (64,0, 77,0)

Mm, max

57, 80 50, 80

Valor de p1

Peso (kg)

n

48 51

Media (SD)

70,45 (10,375) 67,62 (13,700)

Mediana

70,5 65

(Q1, Q3)

(64,00, 77,70) (57,00, 78,00)

Mm, max

47,5, 101,0 45,0, 100,0

Valor de p1

IMC (kg/m2)

n

48 51

Media (SD)

24,66 (2,903) 24,81 (3,627)

Mediana

24,8 24,2

(Q1, Q3)

(22,95, 26,15) (22,30, 27,30)

Mm, max

17,8, 31,2 18,2, 35,4

Valor de p1

5

Tabla 4: resumen de sucesos adversos de reacciones locales

Clase de organos segun el sistema medDRA

1 mg 2 mg

Termino preferente

(N=48) (N=51)

Numero de sujetos con suceso adverso informado

31 (64,6%) 42 (82,4%)

Numero de sucesos unicos

96 162

Trastornos generales y condiciones del sitio de administracion

31 (64,6%), 209 42 (82,4%), 487

Sitio de inyeccion Eritema

26 (54,2%), 64 37 (72,5%), 143

Sitio de inyeccion Hinchazon

13 (27,1%), 27 26 (51,0%), 86

Sitio de inyeccion Calor

18 (37,5%), 31 25 (49,0%), 67

Sitio de inyeccion Induracion

13 (27,1%), 32 14 (27,5%), 34

Sitio de inyeccion Dolor

14 (29,2%), 41 31 (60,8%), 99

Sitio de inyeccion Prurito

4 (8,3%), 5 10 (19,6%), 17

Sitio de inyeccion Nodulo

4 (8,3%), 5 11 (21,6%), 31

Sitio de inyeccion Hipersensibilidad

2 (4,2%), 2 4 (7,8%), 9

Sitio de inyeccion Hematoma

2 (4,2%), 2 1 (2,0%), 1

Sitio de inyeccion Decoloracion

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Sitio de inyeccion Inflamacion

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

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Clase de organos segun el sistema medDRA

1 mg 2 mg

Termino preferente

Sitio de inyeccion Reaccion

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Fatiga

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Sensacion de calor

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Hipotermia

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Sitio de inyeccion Urticaria

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Pirexia

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Investigaciones: ganglio linfatico palpable

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Investigaciones: temperatura corporal incrementada

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos de los sistemas sangumeo y linfatico: linfoadenopatfa

0 (0,0%), 0 1 (2,0%), 1

Trastornos gastrointestinales: glositis

0 (0,0%), 0 1 (2,0%), 1

Trastornos gastrointestinales: nausea

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos gastrointestinales: vomitos

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos del sistema nervioso: parestesia

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos del sistema nervioso: mareo

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos cardiacos: cianosis

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Infecciones e infestaciones: erupcion pustulosa

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos del tejido musculoesqueletico y conectivo: dolor en extremidades

0 (0,0%), 0 1 (2,0%), 1

Trastornos psiquiatricos: tension

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

Trastornos vasculares: hematoma

0 (0,0%), 0 0 (0,0%), 0

2. Immunogenicidad de dos vacunas con diana en Ap: SecID 1-KLH-Alumbre y SecID 2-KLH-Alumbre en comparacion con KLH-Alumbre y solo alumbre.

SecID:

SecID 1: SWEFRTC SecID 2: SEFKHGC Experimentos animales:

Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con la norma Austrian Animal Experiments Act (TVG2012) utilizando ratones Tg2576 (Taconic Farms, USA; 129S6/SvEvTac). Se comprobo el estado general de salud mediante el cribado observacional primario de evaluacion fenotfpica (SHIRPA) de Smith Kline Beecham, Harwell, Imperial College, Royal London Hospital (Rogers D.C. et al., Behav. Brain Res. 105:207-217, 1999). Los ratones recibieron 6 inyecciones s.c. a intervalos mensuales. Se extrajo sangre a intervalos regulares, se preparo plasma y se almaceno hasta la utilizacion posterior. Al final del estudio los ratones fueron sacrificados, se recolectaron los cerebros y se separaron los hemisferios. Se fijo un hemisferio en paraformaldefndo al 4% (PFA, Sigma Aldrich, USA), se deshidrato y se incluyo en parafina. Se prepararon secciones del tejido cerebral de 7 pm utilizando un microtomo deslizante (Leitz, Alemania) y las secciones se montaron sobre portaobjetos Superfrost Plus (Menzel, Alemania).

Determinacion de titulos mediante ELISA:

Se utilizo la tecnologfa estandar de ensayo de inmunosorcion ligada a enzima (ELISA) para medir los niveles de anticuerpos inducidos por la vacuna en el plasma y en el LCF (Mandler M. et al., J. Alzheimers Dis. 28:783-794, 2012). Entre los sustratos utilizados se incluyeron Ap1-40/42 humana (BACHEM, CH) (a una concentracion de 5 pg/ml), KLH (1 pg/ml) y conjugados de peptido-albumina de suero (BSA) (SecID 1 y SecID 2, 1 pM). Se midio la densidad optica (DO) a 405 nm utilizando un lector de microplacas (Tecan, CH). Se calculo DOmax/2.

Ensayos de comportamiento:

Con el fin de analizar la disfuncion cognitiva, los animales Tg2576 inmunizados se sometieron a condicionamiento de miedo contextual (CFC, Comery T.A. et al., J. Neurosci. 25:8898-8902, 2005), se analizaron utilizando software AnyMaze (Stoelting Co., USA). Para el CFC, el dfa 1 los ratones se introdujeron en una camara de condicionamiento (AFFiRiS AG, Austria), se dejo que se habituasen durante 2 min y recibieron tres descargas electricas de 0,8 mA en la pata a intervalos de 2 min mas 30 s de reposo. Para evaluar el aprendizaje contextual el dfa 2, los animales fueron reintroducidos en la camara y seguidos durante 5 min, seleccionando la ventana temporal de s120-240 para el analisis (inmovil temporal=falta de movimiento excepto de respiracion). Los primeros dos minutos del dfa 1 se consideraron inmovilidad de lmea base, que se resto de los valores del dfa 2.

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Analisis de Ap cerebral:

Se llevo a cabo un analisis de inmunofluorescencia (IF) tal como se ha descrito con anterioridad (Mandler M. et al., J. Alzheimers Dis. 28:783-794, 2012). para el analisis de IF espedfico de Ap, se procesaron secciones cerebrales de los Tg2576 inmunizados para el analisis de la carga de amiloide utilizando el anticuerpo monoclonal 3A5 (AFFiRiS AG, Austria). Todos los reactivos secundarios utilizados se obtuvieron de Vector Labs (USA). Para la IF, las secciones se montaron y contratineron utilizando medio de montaje VECTASHIELD- HardSet que contema DAPI. Las secciones se examinaron utilizando MIRAX-SCAN (Carl Zeiss AG, Alemania). La patologfa de tipo AD en los animales se evaluo mediante la determinacion de la superficie cerebral relativa ocupada por depositos de amiloide utilizando un programa de reconocimiento de superficies semiautomatizado (eDe-finiens Architect XD,
www.definiens.com, Mandler M. et al., PLoS ONE 10(1):e0115237, 2015). Para el analisis, se evaluaron tres portaobjetos/animal y < cinco secciones individuales/portaobjetos. Las secciones que portaban artefactos de tejido o tincion aberrante fueron excluidos. Con el fin de evaluar el numero de vasos positivos para Ap, se analizaron las secciones tenidas con 3A5 (3 portaobjetos/animal que cubnan el cortex y el hipocampo y hasta cinco secciones individuales por cada portaobjetos). Los vasos positivos para Ap se contaron manualmente en subregiones del cortex asf como en el hipocampo. Se determino el numero de vasos positivos por cada mm2.

Referencias:

Rogers et al., Behav Brain Res 105:207-217, 1999.

Mandler et al., PLoS ONE 10(1) (2015): e0115237. doi:10.1371/journal.pone.0115237. Mandler et al., J Alzheimers Dis. 28:783-794.

Comery et al., J Neurosci 25:8898-8902, 2005.

Resultados:

Con el fin de someter a ensayo la inmunogenicidad de dos vacunas con diana en Ap, SecID 1-KLH-Alumbre y SecID 2-KLH-Alumbre en comparacion con KLH-Alumbre y solo alumbre (oxihidroxido de aluminio), los ratones Tg2576 recibieron 6x inyecciones s.c. a intervalos de 4 semanas de vacuna conjugada que contema 30 |jg de peptido solo, dosis equivalentes de KLH formulado con alumbre, o solo alumbre. Las dosis de alumbre utilizadas eran equivalentes a 2 mg/ml. Los anticuerpos inducidos por la vacunacion se midieron en muestras de plasma extrafdas en el momento del sacrificio (SecID 1 (n=10), SecID 2 (n=8), KLH-Alumbre (n=10) y solo alumbre (n=8)). La totalidad de las 3 vacunas indujo trtulos fuertes y comparables de IgG contra el peptido utilizado para la inmunizacion (fig. 6A). El alumbre solo no indujo senales superiores al fondo (fig. 6A). Ambas vacunas con diana en Ap, SecID 1-KLH-Alumbre y SecID 2-KLH-Alumbre, indujeron anticuerpos contra Ap humano, mientras que la vacuna de KLH-Alumbre y el alumbre solo no indujeron senales superiores al fondo en los animales tratados (fig. 6B).

Con el fin de evaluar el efecto de oxihidroxido de aluminio solo (alumbre) en comparacion con las vacunas con diana en Ap (SecID 1- + SecID 2-KLH-Alumbre) y las vacunas no espedficas de Ap (KLH-Alumbre) sobre las funciones cognitivas, se aplico el condicionamiento de miedo contextual (CFC) que analizaba la memoria y aprendizaje contextuales en ratones Tg2576. Tal como se esperaba, el CFC demostro que los ratones tratados con SecID 1 y los tratados con SecID2 eran superiores a los animales de control, que recibieron KLH-Alumbre (no induciendo de esta manera una respuesta inmunologica espedfica de Ap) en dicho modelo de AD de deposito de Ap (fig. 7). Resulta interesante que los animales que recibieron solo alumbre (sin un conjugado que indujese una respuesta inmunologica activa contra KLH o Ap, respectivamente) mostraron efectos similares, tal como se detectan con vacunas con diana en Ap en dicho modelo de AD en ausencia de anticuerpos espedficos de Ap.

Con el fin de someter a ensayo si el alumbre tambien influina significativamente sobre la carga de amiloide cerebral, se sacrificaron los animales sometidos a CFC posteriormente, a los 14 meses de edad. Se evaluaron sus cerebros para placas difusas y nucleos densos mediante tincion de IF utilizando el anticuerpo monoclonal 3A5. Las secciones corticales, ademas de las hipocampales, de los controles inyectados con KLH/Alumbre se encontraban cubiertas por numerosas placas de amiloide (fig. 8A+C). En contraste, las areas cerebrales respectivas de ratones Tg2576 inmunizados con SecID 1 y SecID 2 conteman significativamente menos depositos (fig. 8B+D y E, p<0,05 y datos no mostrados). Resulta importante que el tratamiento de los animales Tg2576 con solo alumbre no altero significativamente el deposito de amiloide en comparacion con los animales tratados con KLH-Alumbre (fig. 8E) en el presente modelo de AD.

De esta manera, las figs. 7 y 8 dan a conocer ademas que el oxihidroxido de aluminio aplicado topicamente es capaz de reducir el declive cognitivo significativamente en un modelo de APP transgenico de la enfermedad de Alzheimer (Tg2576) sin modificar significativamente los niveles cerebrales de Ap. Lo anterior implica un

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mecanismo independiente de APP/Ap subyacente a los efectos funcionales beneficiosos ejercidos por el oxihidroxido de aluminio en dicho modelo de AD y pone de manifiesto adicionalmente la falta de fiabilidad cientifica de la "hipotesis de los canales de amiloide".

Se infiere que la presente invencion da a conocer las formas de realizacion individualmente preferentes siguientes:

1. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion en el tratamiento y prevencion de la enfermedad de Alzheimer (AD).

2. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun la forma de realizacion 1, en el que el oxihidroxido de aluminio se encuentra contenido en una preparacion farmaceutica.

3. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun la forma de realizacion 1 o 2, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD en forma de una suspension.

4. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 3, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD en forma de oxihidroxido de aluminio de grado de la Farmacopea europea (monograffa 1664), especialmente en el que el oxihidroxido de aluminio es Alhydrogel.

5. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 4 en una forma lista para la utilizacion destinada a ser aplicada directamente en el paciente, especialmente en una jeringa precargada.

6. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 5 contenida en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion contiene oxihidroxido de aluminio en forma de unico ingrediente eficaz.

7. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 6 contenidas en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion comprende ademas sustancias auxiliares, especialmente estabilizadores, detergentes, antioxidantes, agentes complejantes para iones metalicos mono- o di-valentes, carbohidratos y/o sustancias tamponadoras.

8. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 7 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion ha sido esterilizada y, opcionalmente, es lfquida, congelada o liofilizada, preferentemente lfquida.

9. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 8 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion es lfquida y presenta un pH de entre 5 y 9, preferentemente de entre 5,5 y 8,0, especialmente de entre 6 y 7,5.

10. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 9, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad minima de 0,5 mg (administrado en forma de equivalente de A^Oa) en un paciente de AD.

11. Sal de aluminio segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 10, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de por lo menos 1,0 mg (administrado en forma de equivalente de Al2Oa) en un paciente de AD.

12. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 11, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad minima de 1,2 mg (administrada en forma de equivalente de A^Oa) en un paciente de AD.

13. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 12, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de entre 1,2 mg y 5,0 mg (administrado en forma de equivalente de Al2Oa) en un paciente de AD.

14. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 13, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad minima de 1,5 mg (administrado en forma de equivalente de A^Os) en un paciente de AD.

15. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 14, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de entre 1,5 mg y 5,0 mg, preferentemente de entre 1,5 y 3,0 mg, especialmente de entre 1,5 y 2,5 mg (administrado en forma de equivalente de A^O3) en un paciente de AD.

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16. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 15, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de entre 1,6 mg y 2,5 mg, preferentemente de entre 1,8 y 2,2 mg, especialmente de entre 1,9 y 2,0 mg (administrado en forma de equivalente de A^Oa) en un paciente de AD.

17. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 16 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion contiene adicionalmente uno o mas estabilizadores, especialmente timerosal, detergentes, antioxidantes, agentes complejantes para iones metalicos mono- o di-valentes, especialmente acido etilen-diamina-tetraacetico (EDTA), azucares, alcoholes de azucar, glicerol y/o sustancias tamponadoras, especialmente sustancias tamponadoras de TRIS o fosfato.

18. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 17 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion es una suspension con un pH de entre 4 y 10, preferentemente de entre 5 y 9, mas preferentemente de entre 6 y 8, especialmente de entre 7,0 y 7,5.

19. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 18 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion es una suspension isotonica.

20. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 19, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD por via subcutanea, intranodal, intradermica, o intramuscular, especialmente por via subcutanea.

21. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 20, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD por lo menos una vez al mes durante como mmimo dos meses.

22. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 21, en el que la sal de aluminio es oxihidroxido de aluminio y se administra por lo menos una vez al mes durante como mmimo seis meses en un paciente de AD.

23. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 22, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra por lo menos dos veces al mes durante como mmimo seis meses, preferentemente durante como mmimo doce meses, especialmente como mmimo 24 meses en un paciente de AD.

24. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 23, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD por via subcutanea en la parte superior del brazo, preferentemente alternando en la parte superior del brazo izquierdo y el brazo derecho.

25. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 24, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en dosis divididas en un paciente de AD, especialmente en el mismo sitio de administracion.

26. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 25, en el que oxihidroxido de aluminio se administra en dosis divididas de entre 0,8 y 5,0 mg, preferentemente de entre 1,0 y 3,0, especialmente de entre 1,0 y 1,5 mg (administrada en forma de equivalente de A^Oa) en un paciente de AD.

27. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 26, en el que oxihidroxido de aluminio se administra por lo menos mensualmente durante como mmimo dos anos, preferentemente durante como mmimo cuatro anos, especialmente durante como mmimo 8 anos, en un paciente de AD.

28. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 27, en el que oxihidroxido de aluminio se administra mediante un dispositivo de inyeccion, especialmente una jeringa, en un paciente de AD.

29. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 28, en el que oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de por lo menos 1,8 mg (administrada en forma de equivalente de Al2Oa) en un paciente de AD.

30. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 29, en el que oxihidroxido de aluminio se administra en el paciente de AD en forma lfquida en un volumen de aplicacion de entre 0,1 y 10 ml, preferentemente de entre 0,2 y 5 ml, especialmente de entre 0,4 y 3 ml.

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31. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 30 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion esta libre de aniones sulfato, nitrato o cloruro.

32. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 31 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion presenta un contenido de metales pesados inferior a 20 ppm.

33. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 32 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion es una suspension de oxihidroxido de aluminio y presenta una distribucion de tamanos de partfcula entre 2 pm y aproximadamente 10 pm, siendo agregados dichas partfculas, compuestos de fibras mas pequenas preferentemente de un tamano aproximado de 2 nm x 4,5 nm x 10 nm.

34. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 33, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad minima de 2,2 mg, preferentemente de entre 2,2 y 10 mg, mas preferentemente de entre 2,2 y 8 mg, todavfa mas preferentemente de entre 2,2 y 5 mg, especialmente de entre 2,2 y 4 mg (administrado en forma de equivalente de A^Os) en un paciente de AD.

35. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 34, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD con una puntuacion MMSE de entre 23 y 30, preferentemente de entre 24 y 30, mas preferentemente de entre 25 y 29, especialmente de entre 26 y 29.

36. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 35, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD con una puntuacion MMSE superior o igual a 27.

37. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 35, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD con una puntuacion MMSE de entre 25 y 27.

38. Oxihidroxido de aluminio para la utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 35, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en un paciente de AD con una puntuacion MMSE de entre 19 y 24.

Claims (15)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   REIVINDICACIONES

   1. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion en el tratamiento y la prevencion de la enfermedad de Alzheimer (AD), en el que el oxihidroxido de aluminio esta contenido en una preparacion farmaceutica, y en el que dicha preparacion contiene oxihidroxido de aluminio como el unico ingrediente eficaz.
2. 2. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun la reivindicacion 1, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de Ad como oxihidroxido de aluminio de calidad European Pharmacopoeia (monograffa 1664), especialmente en el que el oxihidroxido de aluminio es Alhydrogel.
3. 3. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun la reivindicacion 1 o 2, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de por lo menos 1,2 mg a un paciente de AD.
4. 4. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de 1,2 mg a 5,0 mg (proporcionada como equivalente de Al2O3) a un paciente de AD.
5. 5. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en una forma lista para utilizar para ser aplicada directamente a un paciente, especialmente en una jeringa precargada.
6. 6. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de 1,5 mg a 5,0 mg, preferentemente 1,5 a 3,0 mg, especialmente 1,5 a 2,5 mg (proporcionada como equivalente de A^Os) a un paciente de AD.
7. 7. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 contenido en una preparacion farmaceutica, en el que dicha preparacion contiene adicionalmente uno o mas estabilizadores, especialmente tiomersal, detergentes, antioxidantes, agentes complejantes para iones metalicos mono- o divalentes, especialmente acido etilendiaminatetraacetico (EDTA), azucares, alcoholes de azucares, glicerol y/o sustancias amortiguadoras, especialmente sustancias amortiguadoras TRIS o fosfato.
8. 8. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de AD por via subcutanea, intranodal, intradermica o intramuscular, especialmente por via subcutanea.
9. 9. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la sal de aluminio es oxihidroxido de aluminio y se administra por lo menos una vez al mes durante por lo menos seis meses a un paciente de AD.
10. 10. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de AD por via subcutanea en la parte superior del brazo, preferentemente alternando en la parte superior del brazo izquierdo y derecho.
11. 11. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de AD con una puntuacion de MMSE de entre 23 y 30, preferentemente entre 24 y 30, mas preferentemente entre 25 y 29, especialmente entre 26 y 29.
12. 12. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de AD con una puntuacion de MMSE superior o igual a 27.
13. 13. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra a un paciente de AD con una puntuacion de MMSE de 25 a 27.
14. 14. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 13, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra en una cantidad de por lo menos 2,2 mg, preferentemente 2,2 a 10 mg, mas preferentemente de 2,2 a 8 mg, todavfa mas preferentemente de 2,2 a 5 mg, especialmente 2,2 a 4 mg (proporcionada como equivalente de A^Oa) a un paciente de AD.
15. 15. Oxihidroxido de aluminio para su utilizacion segun cualquiera de las formas de realizacion 1 a 14, en el que el oxihidroxido de aluminio se administra al paciente de AD en forma lfquida en un volumen de aplicacion de 0,1 a 10 ml, preferentemente de 0,2 a 5 ml, especialmente de 0,4 a 3 ml.